KR100883773B1 - Cosmetic compositions comprising fermenting extracts of citrus junos fruit or poncirus trifoliata fruit with salt - Google Patents

Cosmetic compositions comprising fermenting extracts of citrus junos fruit or poncirus trifoliata fruit with salt Download PDF

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김은주
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김부민
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김한곤
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Abstract

A cosmetic composition and a method of Citrus junos or Ponciri Fructus fermentation extract are provided to cause no skin irritation and to suppress melanogenesis of skin induced by UV or inflammation by comprising Citrus junos or Ponciri Fructus fermentation extract as active ingredient. A cosmetic composition comprises Citrus junos or Ponciri Fructus fermentation extract of 0.1~10 weight% as active ingredient based on total weight of the cosmetic composition. A method of Citrus junos or Ponciri Fructus fermentation extract comprises steps of: 1) adding salt in the Citrus junos or the Ponciri Fructus and fermenting it; 2) and extracting the fermented product using water or organic solvent. In the step 1), a used amount of the salt is 10~30 weight% based on total weight of the fermented product.

Description

유자 또는 지실의 염장 발효 추출물을 유효 성분으로 하는 화장료 조성물{Cosmetic compositions comprising fermenting extracts of Citrus junos fruit or Poncirus trifoliata fruit with salt}Cosmetic composition comprising salted fermented extract of citron or citrus fruit as active ingredient

본 발명은 유자와 지실 염장 발효 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 유자와 지실에 일정량의 소금을 첨가하여 비살균 자연 발효시킨 염장 발효 추출물을 함유함으로써 UV 나 염증에 의해 유도된 피부의 멜라닌 생성을 억제하는 효과가 우수한 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition containing yuzawa fruit fermented salt fermented extract, and more particularly, by containing a salt fermented extract of natural fermentation that is non-sterile by adding a certain amount of salt to citron fruit and fruit. The present invention relates to a cosmetic composition having an excellent effect of inhibiting melanin production in the skin.

사람의 피부색을 결정하는 데는 여러 요인들이 관여하는데, 그 중에서도 멜라닌 색소를 만드는 멜라노사이트(melanocyte)의 활동성, 혈관의 분포, 피부의 두께 및 카로티노이드 또는 빌리루빈 등의 인체 내외의 색소 함유 유무 등의 요인들이 중요하다. 특히, 가장 중요한 요인은 인체 내의 멜라노사이트에서 타이로시나제 등의 여러 효소가 작용하여 생성되는 멜라닌이라는 흑색 색소이다. 이 멜라닌 색소의 형성에는 유전적 요인, 호르몬 분비 및 스트레스 등과 관련된 생리적 요인 및 자외선 조사 등과 같은 환경적 요인 등이 영향을 미친다. Many factors are involved in determining the color of a person's skin, including the activity of melanocytes that make melanin, the distribution of blood vessels, the thickness of the skin and the presence or absence of pigments in the body, such as carotenoids or bilirubin. It is important. In particular, the most important factor is a black pigment called melanin produced by the action of various enzymes such as tyrosinase in melanocytes in the human body. The formation of this melanin pigment is influenced by genetic factors, physiological factors related to hormone secretion and stress, and environmental factors such as ultraviolet irradiation.

신체 피부의 멜라닌 세포에서 생성되는 멜라닌 색소는 검은 색소와 단백질의 복합체 형태를 갖는 페놀계 고분자 물질로서, 태양으로부터 조사되는 자외선을 차단하여 진피 이하의 피부기관을 보호해주는 동시에 피부 생체 내에 생겨난 자유 라디칼 등을 잡아주는 등 피부내 단백질과 유전자들을 보호해주는 유용한 역할을 담당한다. 이렇게 피부 내, 외부의 스트레스적 자극에 의해 생겨난 멜라닌은, 스트레스가 사라져도 피부 각질화를 통해서 외부로 배출되기 전까지는 없어지지 않는 안정한 물질이다. 하지만 멜라닌이 필요 이상으로 많이 생기게 되면 기미나 주근깨, 점 등과 같은 과색소 침착증을 유발하여 미용상으로 좋지 않은 결과를 가져오게 되고, 또한 레져 인구의 증가로 외부에서 활동하는 것을 즐기는 사람들이 많아지면서 자외선에 의한 멜라닌 색소 침착을 막고자 하는 요구가 늘어나게 되었다. 이런 요구에 부응하여 이전부터 아스코르빈산, 코지산, 알부틴, 하이드로퀴논, 글루타치온 또는 이들의 유도체, 또는 타이로시나제 저해활성을 가진 물질들을 화장료나 의약품에 배합하여 사용하여 왔으나, 이들의 불충분한 미백효과, 피부에 대한 안전성 문제, 화장료에 배합 시 나타나는 제형 및 안정성의 문제 등으로 인해 그 사용이 제한되고 있다.Melanin pigment, which is produced from melanocytes of the skin of the body, is a phenolic polymer material having a complex form of black pigment and protein. It protects skin organs below the dermis by blocking ultraviolet rays from the sun and free radicals generated in the skin body. It plays a useful role in protecting proteins and genes in the skin. The melanin produced by the internal and external stress stimulus is a stable substance that does not disappear until it is released to the outside through skin keratinization even when the stress disappears. However, if more melanin is produced than necessary, it causes hyperpigmentation such as blemishes, freckles, and spots, which are not good for beauty. Also, as the leisure population increases, more people enjoy working outside, There is an increasing demand to prevent melanin pigmentation. In response to these demands, ascorbic acid, kojic acid, arbutin, hydroquinone, glutathione or derivatives thereof, or substances having tyrosinase inhibitory activity have been used in combination with cosmetics or pharmaceuticals, but they are insufficient. Its use has been limited due to whitening effects, safety issues with the skin, formulations and stability problems when formulated in cosmetics, and the like.

최근 전통 발효 식품에 대한 관심이 높아지면서 이런 발효 기법들을 활용한 다양한 추출물의 제조 방법들이 개발되고 있다. 이에 따라 천연물 등을 발효시켜 기존 천연물의 성능 보다 우수한 성능을 가진 천연물 추출물을 활용한 기능성 식품 및 화장품 등의 개발이 이어지고 있다. Recently, with increasing interest in traditional fermented foods, methods for preparing various extracts using these fermentation techniques have been developed. Accordingly, the development of functional foods and cosmetics using natural product extracts having fermentation of natural products and the like, which have superior performance to existing natural products, has been continued.

종래에는 통상적으로 천연물에 공지된 미생물 등을 투입하여 발효시키는 방법이 채택되었다. 그 예로서, 한국등록특허 제10-0319377호에는 채소 및 한약재 착즙액과 락토바실러스 플랜타럼(Lactobacillus plantarum ATCC 11542)을 이용한 발효 방법이 개시되어 있고, 한국등록특허 제10-0465261호에는 황기 및 구기자 등이 혼합된 한약재에서 한약재 추출액을 제조하고 이 추출액에 락토바실러스 불가리쿠스 배양액을 혼합하여 배양, 숙성시키는 방법 등이 개시되어 있다. Conventionally, a method of fermenting a microorganism or the like known in a natural product is generally adopted. As an example, Korean Patent No. 10-0319377 discloses a fermentation method using vegetable and herbal extracts and Lactobacillus plantarum ATCC 11542, and Korean Patent No. 10-0465261 to Astragalus and Gugija There is disclosed a method of preparing a medicinal herb extract in a mixed herbal medicine and mixing and culturing the Lactobacillus vulgaris broth with the extract.

최근에는 웰빙 등의 추세에 따른 인공적인 요소가 가미되지 않은 천연 발효 방법을 이용한 천연물의 발효 방법에 대한 요구가 증가하고 있으며 이를 활용한 제품에 대한 요구가 계속 되고 있다. 하지만, 이런 천연 발효 방법은 인체에 유해한 대장균, 혐기성 세균 등에 의한 부패 및 오염에 대한 위험성으로 실제 제품으로 활용하는 데는 어려움이 있다. 이를 해결하기 위해 끓이는 방법 등의 발효 전 살균 방법이 고안되었지만 열에 의해 효능 성분 등이 파괴될 수 있기 때문에 비살균 방법에 의한 발효법의 개발이 필요한 현실이다.Recently, there is an increasing demand for fermentation methods of natural products using natural fermentation methods without adding artificial elements according to the trend of well-being, and the demand for products using the same continues. However, this natural fermentation method is difficult to use as a real product due to the risk of decay and contamination by E. coli, anaerobic bacteria harmful to the human body. In order to solve this problem, a sterilization method before fermentation, such as a boiling method, has been devised, but the development of a fermentation method by a non-sterilization method is necessary because the potent component can be destroyed by heat.

염장법(소금 절임)은 전통적인 식품 저장법의 하나로서 동물성 식품 및 식물성 식품류 모두에 의해 응용이 되어 왔다. 염장법은 식품에 소금을 가함으로써 부패 및 오염을 방지하고 정상적인 발효를 돕는 방법으로 김치, 된장 및 젓갈류 등의 제조에 활용되고 있다.Salting (salt pickling) has been applied by both animal and vegetable foods as one of the traditional food storage methods. The salting method is used to make kimchi, soybean paste and salted fish as a way to prevent corruption and contamination by adding salt to foods and to help normal fermentation.

이에 본 발명자들은 천연유래의 유효물질 중 피부에 안전하면서도 미백효과가 우수하고, 제품으로서의 안정성도 우수한 화장료를 제조하기 위하여 연구하던 중, 종래 비살균 발효법의 문제점을 보완한 천연물을 소금에 절인 후 발효시키는 천연 발효 방법을 통해 기존 천연 발효가 가지는 부패 및 오염에 대한 위험성을 해결할 수 있고 이 방법을 통해 제조된 유자 또는 지실 염장 발효 추출물이 멜라닌 생합성양 감소 효과가 매우 우수한 것을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.Therefore, the present inventors are researching to manufacture cosmetics which are safe for skin and excellent in whitening effect and stability as a product among natural-derived active substances, and fermented after salting natural products that supplement the problems of conventional non-sterile fermentation methods. Through the natural fermentation method to solve the risk of decay and pollution of the existing natural fermentation and found that the yuja or fermented salt fermented extract produced through this method is very excellent in reducing the melanin biosynthesis and completed the present invention It became.

따라서, 본 발명의 목적은 부패 및 오염에 대한 위험성을 줄이고 멜라닌 생합성 억제 효과가 우수한 화장료 조성물을 제공하는 것이다.Accordingly, it is an object of the present invention to provide a cosmetic composition excellent in reducing the risk of rot and contamination and excellent in inhibiting melanin biosynthesis.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에서는 유자 또는 지실의 염장 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다. In order to achieve the above object, the present invention provides a cosmetic composition containing a salted fermented extract of citron or fruit as an active ingredient.

본 발명에 의한 화장료 조성물은 유자 또는 지실의 염장 발효 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 피부 자극이 없고, UV 나 염증에 의해 유도된 피부의 멜라닌 생성을 억제하였다.The cosmetic composition according to the present invention contains no salt or fermented fermented extract of citron or citrus as an active ingredient, and has no skin irritation and inhibited melanin production of skin induced by UV or inflammation.

이하, 본 발명을 상세히 설명하면 하기와 같다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명에서는 1) 유자 또는 지실에 일정량의 소금을 첨가하여 장기 숙성 발효시키는 단계; 및 2) 상기 염장 발효 유자 또는 지실을 물 또는 유기용매로 추출하는 단계;를 통하여 유자 또는 지실 염장 발효 추출물을 제조한 다음, 3) 이 추출물의 멜라닌 생합성 억제 효과를 측정하는 단계; 및 4) UV에 의해 유도되는 색소 침착을 억제하는 것을 확인하는 단계;를 거쳐 미백 효과를 확인하였다.In the present invention, 1) adding a certain amount of salt to the yuzu or fruit chamber for long-term aging fermentation; And 2) extracting the salted fermented citron or fruit juice with water or an organic solvent; and preparing the yuzu or fruit salted fermented extract through 3) measuring the melanin biosynthesis inhibitory effect of the extract; And 4) confirming the inhibition of pigmentation induced by UV; through the whitening effect was confirmed.

본 발명에서 사용하는 유자는 유자나무의 열매로서 노란색의 공 모양이며, 껍질이 울퉁불퉁하고 신 맛이 나는 것이 특징이다. 주요 성분으로 비타민 C가 레몬보다 3배나 많이 들어 있어 감기와 피부미용에 좋고, 노화와 피로를 방지하는 유기산이 많이 들어 있다. 그밖에 비타민 B와 당질·단백질 등이 다른 감귤류 과일보다 많고 모세혈관을 보호하는 헤스페리딘이 들어 있어 뇌혈관 장애와 풍을 막아 준다. 또 배농(排膿) 및 배설작용을 해서 몸 안에 쌓여 있는 노폐물을 밖으로 내보낸다.The citron used in the present invention is a fruit of a citron, yellow balls, and has a rugged shell and a sour taste. Vitamin C contains three times more vitamin C than lemon, which is good for colds and skin care, and contains many organic acids that prevent aging and fatigue. In addition, vitamin B, sugars, and proteins are more than other citrus fruits, and hesperidin protects capillaries and prevents cerebrovascular disorders and wind. In addition, drainage (排膿) and excretion effect is to send out the waste accumulated in the body.

본 발명에서 사용하는 지실은 운향과 낙엽관목인 탱자나무의 미숙 과실을 2∼4편으로 잘라서 말린 것으로, 대부분 반구형, 외면은 녹색-갈색이며 거칠고 오목한 작은 점이 많다. 내면은 더러운 회색이고 중심으로부터 방사형으로 8-16개의 작은 방으로 되어 있고 이 작은 방들이 건조되면 오목하게 쭈그러지고, 간혹 덜 익은 황백색의 씨가 들어 있을 때가 있으며, 특이한 냄새가 있고 맛은 쓰다.The fruit room used in the present invention is cut and dried in two to four pieces of immature fruit of a tanja tree, which is a deciduous and deciduous shrub, mostly hemispherical, the outer surface is green-brown and has many rough and concave small points. The inside is dirty grey, with 8-16 small rooms radially from the center, and when these small rooms are dried, they are crushed concave and sometimes contain less ripe yellow-white seeds, with a peculiar smell and taste.

상기 1) 단계에서, 염장에 사용되는 소금으로는 정제한 고순도 염화나트륨, 천일염, 암염 및 죽염 등이 바람직하며, 소금의 농도는 전체 발효물에 대하여 10∼ 30 중량%가 바람직하다. 소금의 함량이 10 중량% 미만에서는 기대하는 효과를 발휘하기가 어렵고, 30 중량%를 초과하면 효과의 변화가 미미하다. In the step 1), the salt used for salting is preferably purified high purity sodium chloride, sun salt, rock salt and bamboo salt, and the concentration of salt is preferably 10 to 30% by weight based on the total fermented product. When the content of salt is less than 10% by weight, it is difficult to achieve the expected effect, and when it exceeds 30% by weight, the effect is not changed.

본 발명의 발효공정은 4 내지 40℃ 사이에서, 충분한 발효가 일어날 수 있도록 30일에서 1년 정도, 바람직하게는 6개월 내지 1년 정도 발효시키는 것이 좋다. 4℃ 미만에서는 유용 미생물의 성장이 잘 되지 않고 40℃를 초과할 경우 미생물의 성장이 너무 과하게 일어나 생약제의 성능에 영향을 미칠 수 있다.In the fermentation process of the present invention, it is preferable to ferment between 30 days and 1 year, preferably 6 months to 1 year, so that sufficient fermentation can occur between 4 and 40 ° C. If it is less than 4 ℃, growth of useful microorganisms is not well, and if it exceeds 40 ℃, the growth of the microorganisms may be excessive, which may affect the performance of the herbal medicine.

상기 2) 단계에서 사용하는 추출 용매로는 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌 글리콜, 디클로로메탄 및 헥산으로 이루어진 그룹에서 선택된 1종을 단독으로 또는 2종 이상 혼합하여 사용할 수 있다. 이때, 추출온도는 10 내지 80℃가 바람직하며, 6시간 내지 24시간 동안 추출할 수 있다. 상기 추출온도 및 추출시간을 벗어나면 추출 효율이 떨어지거나 성분의 변화가 생길 수 있다.The extraction solvent used in step 2) may be used alone or in combination of two or more selected from the group consisting of purified water, methanol, ethanol, glycerin, ethyl acetate, butylene glycol, propylene glycol, dichloromethane and hexane. Can be. At this time, the extraction temperature is preferably 10 to 80 ℃, it can be extracted for 6 hours to 24 hours. If the extraction temperature and extraction time is out of the extraction efficiency may decrease or change of components may occur.

본 발명에서는 상기 2) 단계 이후 당업계에 알려진 통상적인 방법으로 상온에서 냉침, 가열 및 여과하여 얻어진 액상물 또는 추가로 용매를 증발, 분무건조 또는 동결건조하여 얻은 유자 또는 지실의 염장 발효 추출물을 제조할 수 있다.In the present invention, after the step 2) to prepare a salted fermented extract of citron or fruit juice obtained by cooling, heating and filtration at room temperature in a conventional method known in the art or additionally obtained by evaporation, spray drying or lyophilization of a solvent. can do.

본 발명에 의한 염장 발효 추출물은 그 사용에 특별히 제한되지 않으며, 예를 들면, 건강 식품의 첨가물, 화장료 조성물 및 약제 조성물 등에 사용될 수 있다. 특히 미백용 화장료 조성물로 사용될 수 있으며, 상기 염장 발효 추출물의 함량은 조성물 총 중량에 대하여 0.1∼10 중량%가 바람직하며, 0.1 중량% 미만인 경 우에는 기대하는 효능을 발휘하기 어렵고, 10 중량%를 초과한 경우에는 추가적인 효능의 증가를 기대하기 어렵다. The salted fermented extract according to the present invention is not particularly limited in use, and may be used, for example, as an additive of health food, a cosmetic composition and a pharmaceutical composition. In particular, it can be used as a cosmetic composition for whitening, the content of the salted fermented extract is preferably 0.1 to 10% by weight relative to the total weight of the composition, when less than 0.1% by weight it is difficult to achieve the expected efficacy, 10% by weight If exceeded, it is difficult to expect additional increase in efficacy.

이하, 실시예 및 시험예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하지만, 본 발명이 이들 예로만 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples and Test Examples, but the present invention is not limited only to these examples.

[실시예 1] 유자 염장 발효 추출물의 제조Example 1 Preparation of Citron Salt Fermented Extract

세척한 유자 1kg을 10 중량% 농도의 소금 용액에 혼합한 다음 옹기에 담아 준비하고 4℃에서 약 30일간 발효시킨 후 여기에 80% 에탄올 수용액 5ℓ를 넣고, 3회 환류 추출한 다음, 15℃에서 1일간 침적시켰다. 그 후, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압농축하여 얻은 추출물을 물에 현탁한 다음, 에테르 1ℓ로 5회 추출하여 색소를 제거하고, 수층을 1-부탄올 500㎖로 3회 추출하였다. 이로부터 얻은 총 1-부탄올층을 감압농축하여 1-부탄올 추출물을 얻고, 이를 소량의 메탄올에 녹인 후 대량의 에틸아세테이트를 첨가하여 생성된 침전물을 건조함으로써 유자 염장 발효 추출물 200g을 수득하였다.1 kg of the washed citron is mixed in a salt solution of 10% by weight concentration, prepared in Onggi, fermented at 4 ℃ for about 30 days, 5L of 80% ethanol aqueous solution is added to this, and refluxed three times, then at 15 ℃ 1 Deposited for days. Thereafter, the residue and the filtrate were separated by filter cloth filtration and centrifugation, and the extract obtained by concentrating the separated filtrate under reduced pressure was suspended in water, extracted five times with 1 L of ether to remove the pigment, and the aqueous layer was 1-butanol. Extracted three times with 500 ml. The total 1-butanol layer obtained therefrom was concentrated under reduced pressure to obtain a 1-butanol extract, which was dissolved in a small amount of methanol and dried with a large amount of ethyl acetate, thereby obtaining 200 g of citron salted fermented extract.

[실시예 2] 지실 염장 발효 추출물의 제조Example 2 Preparation of Fermented Salt Fermented Extract

건조된 지실 1kg을 준비하고 실시예 1과 동일한 방법으로 추출하여 지실 염장 발효 추출물 150g을 수득하였다.1 kg of dried fruit cell was prepared and extracted in the same manner as in Example 1 to obtain 150 g of fruit cell fermented extract.

[비교예 1] 유자 발효 추출물의 제조Comparative Example 1 Preparation of Citron Fermented Extract

세척한 유자 1kg을 이온수 용액에 혼합한 다음 옹기에 담아 준비하고 4℃에서 약 30일간 발효시킨 후 여기에 80% 에탄올 수용액 5ℓ를 넣고, 3회 환류 추출한 다음, 15℃에서 1일간 침적시켰다. 그 후, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압농축하여 얻은 추출물을 물에 현탁한 다음, 에테르 1ℓ로 5회 추출하여 색소를 제거하고, 수층을 1-부탄올 500㎖로 3회 추출하였다. 이로부터 얻은 총 1-부탄올층을 감압농축하여 1-부탄올 추출물을 얻고, 이를 소량의 메탄올에 녹인 후 대량의 에틸아세테이트를 첨가하여 생성된 침전물을 건조함으로써, 유자 발효 추출물 170g을 수득하였다.1 kg of the washed citron was mixed in an ionized water solution, prepared in Onggi, fermented at 4 ° C. for about 30 days, and 5 L of 80% ethanol aqueous solution was added thereto, extracted under reflux three times, and then deposited at 15 ° C. for 1 day. Thereafter, the residue and the filtrate were separated by filter cloth filtration and centrifugation, and the extract obtained by concentrating the separated filtrate under reduced pressure was suspended in water, extracted five times with 1 L of ether to remove the pigment, and the aqueous layer was 1-butanol. Extracted three times with 500 ml. The total 1-butanol layer obtained therefrom was concentrated under reduced pressure to obtain a 1-butanol extract, which was dissolved in a small amount of methanol and dried with a large amount of ethyl acetate, thereby obtaining 170 g of citron fermented extract.

[비교예 2] 지실 발효 추출물의 제조Comparative Example 2 Preparation of Fermented Extract

건조한 지실 1kg을 비교예 1과 동일한 방법으로 추출하여 지실 발효 추출물 195g을 제조하였다.1kg of dried fruit cell was extracted in the same manner as in Comparative Example 1 to prepare 195 g of fruit fermented extract.

[비교예 3] 유자 추출물의 제조Comparative Example 3 Preparation of Citron Extract

세척한 유자 1kg를 80% 에탄올 수용액 5ℓ에 넣고, 3회 환류 추출한 다음, 15℃에서 1일간 침적시켰다. 그 후, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압농축하여 얻은 추출물을 물에 현탁한 후, 에테르 1ℓ로 5회 추출하여 색소를 제거하고, 수층을 1-부탄올 500㎖로 3회 추출하였다. 이로부터 얻은 총 1-부탄올층을 감압농축하여 1-부탄올 추출물을 얻고, 이를 소량의 메 탄올에 녹인 다음, 대량의 에틸아세테이트에 추가하여, 생성된 침전물을 건조함으로써 유자 추출물 175g을 수득하였다.1 kg of the washed citron was placed in 5 L of an 80% ethanol aqueous solution, refluxed three times, and then deposited at 15 ° C. for 1 day. Thereafter, the residue and the filtrate were separated through filter cloth filtration and centrifugation, and the extract obtained by concentrating the separated filtrate under reduced pressure was suspended in water, extracted five times with 1 L of ether to remove the pigment, and the aqueous layer was 1-butanol. Extracted three times with 500 ml. The total 1-butanol layer thus obtained was concentrated under reduced pressure to obtain a 1-butanol extract, which was dissolved in a small amount of methanol, and then added to a large amount of ethyl acetate, and the resulting precipitate was dried to obtain 175 g of citron extract.

[비교예 4] 지실 추출물의 제조Comparative Example 4 Preparation of Fruit Extract

건조한 지실 1kg을 비교예 3과 동일한 방법으로 추출하여 지실 추출물 182g을 제조하였다.1 kg of dried fruit cell was extracted in the same manner as in Comparative Example 3 to prepare 182 g of fruit cell extract.

[시험예 1] 유해 세균 생성 저해 실험[Test Example 1] Inhibition of harmful bacteria production

배지(Letheen Agar)를 샤알레에 1차 부어 굳인 후 대장균(Escherichia coli ATCC 8739), 녹농균(Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027) 및 황색포도상 구균(Staphylococcus aureus ATCC 6538)을 전배양시키고 이 시험균을 40℃ 정도가 되도록 조절한 배지(Letheen Agar)에 최종적으로 균의 양이 105마리/g이 되도록 희석하여 1차 배지 위에 부어 굳혔다. 멸균된 종이 디스크(paper disk)에 10%, 20% 및 30%의 천일염 용액을 0.02ml 정도 주입하여 균이 도말된 배지에 얹고 상온에서 24시간 동안 용액이 충분히 확산되게 한 다음 각 32℃에서 최적시간 동안 배양한 후 샤알레에 나타나는 저해환 생성 여부를 확인하였으며, 그 결과를 도 1에 나타내었다.First, the medium (Letheen Agar) was poured into the sale and hardened, and then pre-incubated with Escherichia coli ATCC 8739, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, and Staphylococcus aureus ATCC 6538, and the test bacteria were about 40 ° C. In the medium (Letheen Agar) was adjusted to the final amount of the bacteria was diluted to 10 5 / g and poured onto the primary medium and hardened. Inject 10%, 20% and 30% of natural salt solution into 0.02ml of sterilized paper disk, put it on the medium where the germs are smeared, and allow the solution to diffuse sufficiently for 24 hours at room temperature, and then optimal at each 32 ℃. After culturing for a period of time, it was confirmed whether the inhibitory ring formed in the chaale was shown, and the results are shown in FIG. 1.

도 1의 결과로부터, 소금이 유해 미생물의 성장을 저해하는 것을 확인하였다.From the results of FIG. 1, it was confirmed that salt inhibited the growth of harmful microorganisms.

또한 실시예 1과 비교예 1의 추출하기 전 발효물의 결과를 도 2에서 확인할 수 있다. 도 2에서와 같이 실시예 1의 발효 산물은 유자의 선명한 노란색이 유지되고 있으나 비교예 1의 발효산물은 곰팡이가 자라 초록색 계열로 변성됨을 확인할 수 있었다. 또한, 실시예 1의 유자 염장 발효 산물의 경우 유자 고유의 향이 남아 있지만, 비교예 1의 유자 일반 발효 산물의 경우 부패되어 심한 악취가 발생하였다.In addition, the results of the fermentation before extraction of Example 1 and Comparative Example 1 can be confirmed in FIG. As shown in FIG. 2, the fermentation product of Example 1 was maintained in a clear yellow color of the citron, but the fermentation product of Comparative Example 1 was found to be denatured to green based on mold growth. In addition, in the citron salt fermentation product of Example 1, while the inherent flavor of citron remains, the citron general fermentation product of Comparative Example 1 decayed, a severe odor occurred.

[시험예 2] 염장 발효 추출물의 피부 자극 정도 평가[Test Example 2] Evaluation of skin irritation degree of salted fermented extract

뉴질랜드산 흰토끼의 피부에 비히클(Vehicle)과 실시예 1∼2 및 비교예 1∼2에서 제조한 추출물을 1일 2회 간격으로 4일간 총 8회 도포하였다. 도포 후 홍반 및 가피 형성 평점과 부종 평점 값을 누적시켜 피부누적자극 지수를 구하였다. 피부 누적 자극 지수는 표 1에 나타낸 판정 기준에 따라 평가하였고, 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다. 결과에 나타낸 자극 지수는 일반적으로 많이 이용되는 Draize 의 피부 일차 자극 지수(primary irritation index, P.I.I) 의 산출 방법에 따랐다(Draize, J. H., Appraisal of the safety of chemical in foods, drugs and cosmeitcs).Vehicles and extracts prepared in Examples 1 and 2 and Comparative Examples 1 and 2 were applied to the skin of New Zealand white rabbits a total of 8 times for 4 days at intervals of 2 times per day. The cumulative skin irritation index was calculated by accumulating erythema, skin formation score, and edema score after application. The cumulative skin irritation index was evaluated according to the criteria shown in Table 1, and the results are shown in Table 2 below. The irritation index shown in the results was based on the commonly used method of calculating Draize's primary irritation index (P.I.I) (Draize, J. H., Appraisal of the safety of chemical in foods, drugs and cosmeitcs).

피부 자극의 정도Degree of skin irritation 평점grade 홍반과 가피 형성Erythema and crust formation 홍반이 없음No erythema 00 아주 경도의 홍반(육안으로 겨우 식별할 정도)Very mild erythema (only visible to the naked eye) 1One 명료한 홍반Clear erythema 22 중증도에서 강한 홍반Strong erythema in severity 33 심홍색의 강한 홍반과 가피 형성Deep red erythema and crust formation 44 부종 형성Edema formation 부종 없음No edema 00 매우 가벼운 부종 (육안으로 겨우 식별할 정도)Very mild edema (barely visible to the naked eye) 1One 명료한 부종 (주위와 명료한 구분이 됨)Clear edema (distinct from clear) 22 중증도의 부종 (1 mm 정도 부어 올랐을 경우)Severe edema (if swollen about 1 mm) 33 강한 부종 (1mm 이상 부어 오르고 노출 부위 밖가지 확장된 상태Strong edema (swelling more than 1 mm and extended beyond the exposed area) 44 [주] 피부 일차 자극 지수 = (홍반 평점과 부종 평점의 합의 평균치/4)Skin primary irritation index = (average of sum of erythema rating and edema rating / 4)

시험물질Test substance 피부 일차 자극 지수 (0-4)Skin Primary Irritation Index (0-4) 비히클Vehicle 0.50.5 염장 발효 유자 추출물(실시예 1)Salted Fermented Citron Extract (Example 1) 0.60.6 염장 발효 지실 추출물(실시예 2)Salted Fermented Fruit Extract (Example 2) 0.70.7 일반 발효 유자 추출물(비교예 1)General Fermented Citron Extract (Comparative Example 1) 1.41.4 일반 발효 지실 추출물(비교예 2)General Fermented Fruit Extract (Comparative Example 2) 1.81.8

상기 표 1의 결과로부터 본 발명에 의한 실시예 1∼2의 비살균 염장 발효 추출물이 대조군 및 비교예 1∼2의 비살균 일반 발효 추출물과 비교하였을 때 피부 자극 정도가 상당량 개선됨을 확인할 수 있다. From the results of Table 1, it can be seen that the non-sterile salted fermentation extracts of Examples 1 to 2 according to the present invention have a significant improvement in the degree of skin irritation compared to the control and non-sterile general fermented extracts of Comparative Examples 1 to 2.

[시험예 3] 쥐의 색소세포를 이용한 멜라닌 생성 억제 효과 측정Test Example 3 Measurement of Melanin Inhibition Effect Using Pigment Cells

C57BL/6 마우스 유래 쥐의 색소세포(Mel-Ab cell)를 DMEM(Dulbeccos modified Eagles media)에 10% 우태반 혈청, 100nM 2-O-테트라데카노일포르빌 (tetradecanoyphorbol)-13-아세테이트, 1nM 콜레라 독소(cholera toxin)를 첨가한 배지에서 37℃, 5% CO2의 조건에서 배양하였다. 배양된 Mel-Ab 세포를 0.25% 트립신-EDTA로 떼어내고, 24-웰 플레이트에 105 세포/웰(cells/well)의 농도로 세포를 배양하고 이틀째부터 3일 연속으로 10ppm의 시험물질을 각각 가하여 배양하였다. 여기서, 본 발명의 유자 또는 지실 염장 발효 추출물에 대한 멜라닌 생성 억제 효과를 비교하기 위하여 양성대조군으로 코지산을 사용하였다.Mel-Ab cells from C57BL / 6 mouse-derived mice were placed in Dulbeccos modified Eagles media (DMEM) with 10% fetal placental serum, 100 nM 2-O-tetradecanoyphorbol-13-acetate, and 1 nM cholera. Incubated at 37 ° C. and 5% CO 2 in a medium containing toxin (cholera toxin). The cultured Mel-Ab cells were separated with 0.25% trypsin-EDTA, the cells were incubated at a concentration of 10 5 cells / well in 24-well plates, and 10 ppm of test substance were added for 2 consecutive days from 2 days. And incubated. Here, kojic acid was used as a positive control group in order to compare the melanin production inhibitory effect on the yuzu or fermented salt fermented extract of the present invention.

배양액을 제거하고, PBS로 세척한 후, 1N 수산화나트륨으로 세포를 녹여 400nm에서 흡광도를 측정한 다음, 하기 수학식 1에 따라 멜라닌 생성 억제율을 계산하였으며, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다(Dooley의 방법).After removing the culture solution, washed with PBS, and dissolved the cells with 1N sodium hydroxide to measure the absorbance at 400nm, to calculate the melanin production inhibition in accordance with the following equation 1, the results are shown in Table 3 (Dooley Method).

Figure 112008020268088-pat00001
Figure 112008020268088-pat00001

멜라닌 생성 억제 효과Melanin production inhibitory effect 시험물질Test substance 멜라닌 생성 억제율(%)Melanin production inhibition rate (%) 실시예 1Example 1 38.938.9 실시예 2Example 2 39.739.7 비교예 1Comparative Example 1 16.816.8 비교예 2Comparative Example 2 17.417.4 비교예 3Comparative Example 3 5.45.4 비교예 4Comparative Example 4 13.413.4 코지산Kojisan 35.435.4

상기 표 3의 결과로부터 본 발명에 의한 실시예 1∼2의 유자 또는 지실 염장 발효 추출물이 일반 발효 추출물 보다 우수한 멜라닌 생성 억제 효능을 보였고, 또한 양성대조군인 코지산 보다 우수한 멜라닌 생성 억제율을 보이는 것으로 확인하였다.From the results of Table 3, it was confirmed that the citron or fermented salt fermented extract of Examples 1 to 2 according to the present invention showed superior melanin production inhibitory effect than the general fermented extract, and also showed better melanin production inhibition rate than koji acid as a positive control. It was.

[시험예 4] 인체 피부에 대한 미백 효과 시험Test Example 4 Whitening Effect Test on Human Skin

건강한 12명의 남자를 대상으로 피검자의 상박 부위에 직경 1.5㎝의 구멍이 뚫린 불투명 테이프를 부착한 뒤, 각 피검자의 최소 홍반량(Minimal Erythema Dose))의 1.5∼2배 정도의 자외선(UVB)을 조사하여 피부의 흑화를 유도하였다. 조사 후 시험물질 각 1%(용매는 1,3-부틸렌그리콜:에탄올=7:3), 대조군으로 코지산 3%, 용매(vehicle)만을 바르고, 한곳은 아무 것도 바르지 않고 10 주 동안 상태 변화를 관찰하였다. 1주 단위로 피부의 색깔을 색차계 CR2002(일본, 미놀타 사)로 측정하였다. 도포 개시시점과 완료시점에서의 피부색의 차이(△L*)를 하기 수학식 2에 따라 계산하였고, 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다. 미백효과는 시료 도포 부위와 대조군 부위의 △L*의 비교로 판정하는데, △L* 값이 2 정도일 경우는 침착된 색소의 미백화가 뚜렷한 경우이고, 1.5 정도 이상이면 미백효과가 있다고 판정할 수 있다. After attaching an opaque tape with a hole of 1.5 cm in diameter to the upper arm of 12 healthy subjects, ultraviolet light (UVB) of 1.5 to 2 times the minimum erythema (Minimal Erythema Dose) of each subject was applied. Irradiation induced skin blackening. After irradiation, 1% of each test substance (solvent is 1,3-butylene glycol: ethanol = 7: 3), 3% kojic acid as a control, only a solvent (vehicle), one place without any change of state for 10 weeks Was observed. Skin color was measured on a weekly basis with a colorimeter CR2002 (Minolta, Japan). The difference between the skin color (ΔL *) at the start and completion of the application was calculated according to Equation 2 below, and the results are shown in Table 4 below. The whitening effect is determined by comparing ΔL * between the sample application site and the control site. When the value of ΔL * is about 2, the whitening of the deposited pigment is apparent, and when it is about 1.5 or more, the whitening effect may be determined. .

△L* = 도포완료시점에서의 L* 값 - 도포개시 할 때 L* 값△ L * = L * value at the time of application completion-L * value at the start of application

인체피부에 대한 미백효과Whitening effect on human skin 시험물질Test substance 멜라닌 생성 억제율(%)Melanin production inhibition rate (%) 용매(Vehicle)Solvent 0.50± 0.150.50 ± 0.15 실시예 1Example 1 1.80± 0.131.80 ± 0.13 실시예 2Example 2 1.87± 0.171.87 ± 0.17 비교예 1Comparative Example 1 1.16± 0.251.16 ± 0.25 비교예 2Comparative Example 2 1.31± 0.251.31 ± 0.25 비교예 3Comparative Example 3 0.61± 0.250.61 ± 0.25 비교예 4Comparative Example 4 0.54± 0.250.54 ± 0.25 코지산Kojisan 1.58± 0.111.58 ± 0.11

상기 표 4의 결과로부터, 본 발명에 의한 실시예 1∼2의 유자 또는 지실 염장 발효 추출물이 비교예 1∼4뿐만 아니라 양성대조군인 코지산 보다 우수한 미백 효과를 보이는 것을 확인하였다.From the results in Table 4, it was confirmed that the citron or fruit-salted fermented extracts of Examples 1 and 2 according to the present invention showed a superior whitening effect than Koji acid as a positive control group as well as Comparative Examples 1 to 4.

도 1은 소금이 유해 미생물의 성장에 미치는 영향을 알아보기 위하여, 대장균(Escherichia coli ATCC 8739), 녹농균(Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027) 및 황색포도상 구균(Staphylococcus aureus ATCC 6538) 배양 시 천일염 용액을 도말한 후 저해환 생성 여부를 확인한 결과를 보여준다.1 shows the effect of salt on the growth of harmful microorganisms, after spreading the salt solution in culture in Escherichia coli ( Esherichia coli ATCC 8739), Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 and Staphylococcus aureus ATCC 6538 culture Shows the results of confirming the inhibition ring generation.

도 2는 실시예 1과 비교예 1의 추출하기 전 발효물의 결과를 보여주는 사진이다.Figure 2 is a photograph showing the results of the fermentation before extraction of Example 1 and Comparative Example 1.

Claims (6)

유자 또는 지실의 염장 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물.Cosmetic composition containing salted fermented extract of Yuzu or Ji-sil as an active ingredient. 제 1항에 있어서, 상기 유자 또는 지실 염장 발효 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.1∼10 중량%로 함유됨을 특징으로 하는 화장료 조성물.The cosmetic composition according to claim 1, wherein the citron or fermented salt fermented extract is contained in an amount of 0.1 to 10% by weight based on the total weight of the composition. 제 1항에 있어서, 상기 유자 또는 지실 염장 발효 추출물은According to claim 1, wherein the citron or fruiting salt fermented extract 1) 유자 또는 지실에 소금을 첨가하여 발효시키는 단계; 및 1) fermentation by adding salt to citron or fruit room; And 2) 상기 1)의 발효물을 물 또는 유기용매로 추출하는 단계;를 거쳐 얻어진 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.2) extracting the fermented product of 1) with water or an organic solvent; cosmetic composition characterized in that obtained through. 제 3항에 있어서, 상기 1) 단계에서 소금의 사용량은 발효물 총 중량에 대하여 10∼30 중량% 임을 특징으로 하는 화장료 조성물.The cosmetic composition according to claim 3, wherein the amount of salt used in step 1) is 10 to 30% by weight based on the total weight of the fermented product. 제 3항에 있어서, 상기 1) 단계의 발효 공정은 4∼40℃에서 30일 내지 1년간 발효시키는 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.According to claim 3, wherein the fermentation process of step 1) is a cosmetic composition, characterized in that to ferment for 30 days to 1 year at 4 ~ 40 ℃. 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 미백용 임을 특징으로 하는 화장료 조성물.The cosmetic composition according to any one of claims 1 to 5, wherein the cosmetic composition is for whitening.
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