KR100879712B1

KR100879712B1 - 탁산과 사이클린-의존성 키나제 억제제와의 병용제제

Info

Publication number: KR100879712B1
Application number: KR1020037012338A
Authority: KR
Inventors: 비쎄리마리-크리스틴
Original assignee: 아방티 파르마 소시에테 아노님
Priority date: 2001-03-23
Filing date: 2002-03-22
Publication date: 2009-01-22
Also published as: CA2441441C; EA200301053A1; YU69503A; EA007815B1; US20020182204A1; HU229258B1; PL206118B1; AU2002312815B2; ATE395917T1; PE20020907A1; NZ527655A; RS50681B; PT1372652E; HUP0303589A2; TWI355935B; CY1110449T1; SK11692003A3; EP1372652A2; JP2004521140A; WO2002076484A2

Abstract

본 발명은 탁솔(Taxol^R), 탁소테레(Taxotere^R) 또는 이의 유도체 및 사이클린-의존성 키나제 억제제로 이루어진 약제학적 조성물 및 탁산이 주기적으로 투여되고 사이클린 의존성 키나제 억제제가 동일 주기내에서 반복적으로 투여되는 투여 방식에 관한 것이다.

탁산, 탁소테레, 사이클린 의존성 키나제 억제제

Description

탁산과 사이클린-의존성 키나제 억제제와의 병용제제{Combination of a taxane and a cyclin-dependent kinase inhibitor}

본 발명은 탁솔(Taxol^R), 탁소테레(Taxotere^R) 및 이의 유사체 및 신생물 질환의 치료에 치료학적으로 유용한 기타 화합물들의 병용제제에 관한 것이다. 보다 특히, 본 발명은 탁솔, 탁소테레 및 이의 유사체와 사이클린 의존성 키나제 억제제와의 병용제제에 관한 것이다.

탁산 및 탁소이드는 강력한 항종양 약물인 파클리탁셀을 포함하는 천연적으로 존재하는 디테르펜 화합물 계열을 구성한다. 본래에 태평양 주목[Pacific Yew tree(탁서스 브레비폴리아(Taxus brevifolia)]으로부터 분리된 파클리탁셀(탁솔)은 유방암 및 난소암을 앓는 환자에 대한 보조 및 신규 보조 치료요법에 매우 효과적인 것으로 나타났다. 보다 최근에, 이의 반합성 유사체인 도세탁셀(탁소테레)은 또한 유방암 화학치료법에서 효과적인 것으로 밝혀졌고 이것은 폐암 및 결장암을 포함하는, 상기 부류의 항종양 약물에 민감한 질환의 수를 확대시켰다. 탁솔(파클리탁셀) 및 탁소테레(도세탁셀) 둘다는 튜불린에 결합하여 미소관 분리를 억제하고 유사분열을 손상시킴으로써 세포 주기의 M 단계로의 진행을 차단하여 아폽토시스를 촉진한다.

확실한 탁소이드의 전반적인 임상적 성공에도 불구하고, 몇몇 종양은 이들 약물에 내성을 나타내었다. 이러한 약물 내성은 종양의 고유 특징이거나 시간 경과에 따라 종양에서 발생된 것일 수 있다. 약물 내성에 대한 3개의 주요 기작이 보고되었다: (i) 튜불린 유전자의 점 돌연변이, (ii) 탁산과의 결합이 낮은 튜불린 이소형태의 선택 및 (iii) mdr1 유전자가 암호화하는 P-당단백질(P-gp) 유출 펌프에 의해 매개되는 다중 약물 내성(MDR) 표현형의 발현. (iii)의 기작이, 결장암 및 신장암과 같은, 흔히 본래에 P-gp를 발현하는 종양에서 탁솔 및 탁소테레에 대한 고유 내성을 설명할 수 있다.

본 발명에 따른 병용제제 또는 연합물은 다면 발현성(Pleiotropic) 내성 또는 "다중 약물 내성"의 현상이 기피되거나 지연되도록 할 수 있다.

탁솔, 탁소테레 및 이의 유도체의 제조는, 예를 들어, 유럽 특허 제0,253,738호 및 유럽 특허 제0,253,739호 및 국제 공개 번호 제WO 92/09,589호의 주요 요지이다.

본 발명에 이르러, 탁솔, 탁소테레 및 이의 유사체가 항암 치료에 치료학적으로 유용하거나 이들 탁산과 동일하거나 상이한 기작을 갖는 하나 이상의 물질과 병용 투여되는 경우 이들의 효과가 상당히 개선될 수 있는 것으로 밝혀졌고, 이것이 본 발명의 주요 요지이다.

탁솔, 탁소테레 및 이의 유사체와 연합되거나 병용 사용될 수 있는 물질 중에는 효소, 예를 들어, L-아스파라기나제 및 사이클린-의존성 키나제 억제제인 플라보피리돌, 쿠에르시틴 및 게니스테인이 언급될 수 있다. 생물학적 반응 변형제 또는 성장 인자 억제제, 예를 들어, 인터페론 또는 인터류킨과 같은 다양한 제제가 또한 사용될 수 있다.

제품의 활성은 사용되는 투여량에 의존하기 때문에, 조혈계의 성장 인자, 예를 들어, G-CSF 또는 GM-CSF, 또는 특정 인터류킨을 탁솔, 탁소테레, 이의 유사체 또는 또 다른 치료학적 활성 물질과의 이의 병용제제를 배합하여 독성 현상을 감소시키거나 이의 발생을 지연시키면서 고용량을 사용하여 활성을 증가시킬 수 있다.

보다 특히, 본 발명은 탁솔, 탁소테레 및 이의 유사체와 사이클린 의존성 키나제 억제제인 플라보피리돌과의 병용제제에 관한 것이다.

사이클린 의존성 키나제(CDK) 억제제는 세포 주기의 타이밍 및 공조를 조절하는 중요한 조절 인자이다. CDK는 이의 절대 사이클린 파트너와 가역적 복합체를 형성하여 세포 주기의 주요 연결지점에서의 전이를 조절한다. 예를 들어, 활성화된 CDK4-사이클린 D1 복합체는 G1 단계를 통한 진행을 조절하는 반면 CDK1-사이클린 B1 복합체는 세포 주기의 유사분열 단계로의 진입을 조절한다. 내인성 사이클린 의존성 키나제 억제 단백질(CDKI)은 공지되어 있고 이것은 CDK 또는 사이클린 성분에 결합하여 키나제 활성을 억제한다. 흑색종, 췌장암 및 식도암과 같은 많은 종양에서, 이들 천연 CDKI가 부재이거나 돌연변이되어 있다. 따라서, 선택적 CDK 억제제가 효과적인 화학치료제인 것으로 입증될 수 있다.

(시스-5,7-디하이드록시-2-(2-클로로페닐)-8-[4-(3-하이드록시-1-메틸)-피페리디닐]-1-벤조피란-4-온)인 플라보피리돌은 반합성 플라본으로서 사람 폐 암종, 유방 암종과 같은 다양한 종양 세포주에 대해 항종양 활성을 나타내고 또한 이종이식 모델에서 종양 성장을 억제한다. 이것은 세포 주기의 G1 및 G2 단계에서의 차단을 유도하는 것으로 밝혀졌다. 플라보피리돌은 CDK에 대해 강력하고 선택적인 억제제이고 이의 항종양 활성은 CDK 억제 활성과 관련되어 있다. 당해 연구는 이의 종양 세포 성장 억제 활성이 세포 주기 특이적 방식으로 나타남을 밝혔다[문헌참조: Bioorg. & Med. Chem. Letters 10:1037-1041(2000)].

탁소테레 및 플라보피리돌은 각각의 효능을 개선시킬 수 있는 상이한 기작을 갖고 있다. 본 발명에 따른 병용제제의 개선된 효능은 치료학적 상승 작용을 측정하여 입증될 수 있다. 당해 병용제제가 최적 용량으로 사용되는 각각의 성분 보다 우수한 경우 이것이 치료학적 상승 작용을 나타낸다고 할 수 있다[문헌참조: T.H.Corbett et al., Cancer Treatment Reports, 66:1187(1982)].

병용제제의 효능을 입증하기 위해, 쟁점 현안의 연구에서 별도의 성분 각각의 최대 허용 용량과 병용제제의 최대 허용 용량을 비교할 필요가 있다. 당해 효능은, 예를 들어, 하기의 식에 따라 측정되는 log₁₀ 세포 사멸에 의해 정량될 수 있다:

log₁₀ 세포 사멸 = T-C(일수)/3.32 x T_d

여기서, T-C는 세포가 성장하는데 걸리는 시간(처리된 그룹(T)의 종양과 비처리된 그룹(C)의 종양이 미리 결정된 수치(예를 들어, 1g)에 도달하는데 걸리는 평균 시간(일수)이다)이고, T_d는 대조군 동물에서 종양 용적이 2배가 되는데 요구되는 시간(일수)이다[문헌참조: T.H.Corbett et al., Cancer, 40, 2660-2680(1977); F.M. Schabel et al., Cancer Drug Development, Part B, Methods in Cancer Research, 17, 3-51, New York, Academic Press Inc.(1979)]. 결과치(product)는 log₁₀ 세포 사멸이 0.7 이상인 경우 활성인 것으로 간주된다. 결과치는 log₁₀ 세포 사멸이 2.8을 초과하는 경우 매우 활성인 것으로 간주된다.

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자신의 최대 허용 용량으로 사용되는 병용제제(여기서, 각각의 성분은 일반적으로 이의 최대 허용 용량을 초과하지 않는 용량으로 존재한다)는 log₁₀ 세포 사멸이, 성분의 단독 투여시 최고치를 나타내는 성분의 log₁₀ 세포 사멸 값을 초과하는 경우 치료학적 상승 작용을 나타낸다고 할 수 있다.

고형 종양에 대한 병용제제의 효능은 하기의 방식으로 실험적으로 측정될 수 있다:

일반적으로 실험 대상 동물인 마우스는 양 측면에 0일째에 종양 단편 30 내지 60mg을 피하 이식 받는다. 종양을 내포한 동물을 섞은 후 다양한 처리 및 통제를 한다. 진행된 종양을 처리하는 경우에, 종양이 목적하는 크기로 발달할때까지 방치시키고 불충분하게 종양이 발달된 동물은 제외시킨다. 선별된 동물을 무작위로 분배하여 처리 및 통제를 받게한다. 종양을 내포하지 않는 동물은 또한 종양을 내포하는 동물과 동일한 처리를 받게하여 독성 효과가 종양에 대한 특이적 효과에 서 분리되도록 할 수 있다. 화학치료법은 일반적으로 종양 유형에 따라 이식한지 3 내지 22일 후에 개시하고 동물을 매일 관찰한다. 상이한 동물 그룹은 최대 체중 손실이 달성될때까지 1주일에 3회 또는 4회 체중을 재고 이어서 당해 그룹은 시험 종료때까지 1주일에 1회 이상 체중을 잰다.

종양이 약 2g에 도달할때까지 또는 종양이 2g에 도달하기 전에 동물이 죽을때까지 1주일에 2회 또는 3회 종양을 측정한다. 희생된 동물은 해부한다.

항종양 활성은 표 I 및 II에 기록된 상이한 계수에 따라 측정한다.

백혈병에 대한 병용제제의 연구를 위해, 동물에게 특정 수의 세포를 이식하고 항종양 활성을 대조군에 대한 처리된 마우스의 생존 시간의 증가로 측정한다. 생존 시간이 P388 백혈병의 경우 27%를 초과하여 증가하는 경우 활성인 것으로 간주하고 75%를 초과하는 경우는 매우 활성인 것으로 간주한다.

하기의 실시예에서, 마우스에게 포유동물 선암종 MA 13/C를 이식하고 투여 스케줄 및 투여 방식을 달리하여 탁소테레와 플라보피리돌의 병용제제로 처리한다. 플라보피리돌 뿐만 아니라 탁솔 및 탁소테레 둘 다를 정맥내 및 경구적으로 투여할 수 있다. 이들 스케줄의 몇몇은 명백한 치료학적 상승 작용을 나타낸다.

본 발명의 추가의 목적 및 이점은 부분적으로 하기의 기술된 내용에 제시될 것이고 부분적으로 상기 내용으로부터 명백해질 수 있거나 본 발명의 실시에 의해 터득될 수 있다. 본 발명의 목적 및 이점은 특히, 첨부된 청구항에 지적된 요소 및 병용제제를 통해 실현되고 달성될 수 있다.

이전의 일반적인 기술 내용 및 하기의 상세한 설명 둘다는 단지 예시하기 위한 것이지 청구된 바와 같은 본 발명의 범위를 제한하지 않는 것으로 이해되어야 한다.

실시예 1

병용제제 중의 각각의 성분 활성을 측정하기 위해, MA 13/C 함유 마우스에 단독으로 탁소테레 및 플라보피리돌을 투여했다. 탁소테레는 15일째 및 21일째에 정맥내로 투여했고 각 해당일의 투여량은 30mg/kg이었고 따라서 총 투여량은 60mg/kg이었다. 단독으로 사용되는 경우, 상기 용량에 대한 log₁₀ 세포 사멸은 4.7이고 처리된 마우스 5마리 모두 완전히 반응했다. 각 날에 6mg/kg의 용량 또는 총 투여량 12mg/kg으로 15일째 및 21일째에 단독으로 플라보피리돌을 투여하는 경우, 시험된 5마리의 마우스에서의 반응은 완전하지 못했다.

이어서, 화합물을 2가지 방식으로 병용하여 간헐적 스케줄로 시험했다. 제1 병용시, 먼저 15일째 및 20일째(총 용량 9mg/kg)에 플라보피리돌을 투여하고 이어서 16일째 및 21일째(총 투여량 45mg/kg)에 탁소테레를 투여했다. 상기 양태로 투여되는 경우, log₁₀ 세포 사멸은 5.5였고 처리된 마우스중 5마리 모두가 완전한 반응을 나타냈다. 당해 간헐적 스케줄에서, log₁₀ 세포 사멸이 단독으로 투여된 탁소테레보다 우수하고 대조군보다 25% 미만의 탁소테레와 25% 미만의 플라보피리돌을 병용제제로 투여했음에도 불구하고 여전히 5마리 모두가 완전히 반응했다.

병용제제의 성분을 역으로 투여하는 경우, 즉, 탁소테레를 15일째 및 20일째에 먼저 투여하고 플라보피리돌을 16일째 및 21일째에 동일한 양으로 투여하는 경우, log₁₀ 세포 사멸은 단독의 탁소테레보다는 약간 적었지만 5마리 모두 완전한 반응을 나타냈다. 표 I은 이들 결과를 설명하고 25% 적은 양으로 투여되는 플라보피리돌과 탁소테레의 병용제제가 단독의 탁소테레와 유사한 효능을 갖는다는 것을 보여준다.

MA13/C 함유 마우스에서 플라보피리돌- 탁소테레 병용제제: 24시간 간격

IV 제제	스케줄	HNTD(DT) mg/kg		% bwl(절망 상태)	lck	주해
		도세탁셀	플라보
탁소테레 플라보피리돌	15, 21 15, 21	30.0 (60.0) -	- 6.0 (12.0)	8(27) 6(16)	4.7 0.4	5/5 CR HDE 0/5 CR
병용제제 24시간 간격 플라보 1st 탁소테레 탁소테레 1st	15, 20 16, 21	22.5 (45.0) 22.5 (45.0)	4.5 (9.0) 4.5 (9.0)	7(22) 7(25)	5.5 4.4	5/5 CR HDE 5/5 CR HDE
Td = 2.2일; 대조군이 1g에 도달하는 시간 = 20.3일; 치료 개시 시점의 평균 무게 = 130 - 160mg CR = 완전한 반응; IV = 정맥내; bwl = 절망 상태에서의 체중 손실; (DT) = 총 용량; HNTD = 최대 비독성 용량; lck = log₁₀ 세포 사멸 ; HDE = 최대 투여 효과

실시예 2

플라보피리돌이 투여되는 일수를 증가시켰고 MA 13/C 함유 마우스를 10일 주기로 8일 이상에 투여되는 유사한 용량의 플라보피리돌에 노출시키는 반면 탁소테레를 10일 주기에서 첫번째날과 마지막날에 투여하는 경우, 명백한 상승 작용이 있음을 밝혀냈다.

하기의 표 II는 각각의 성분 단독의 최대 비독성 총 용량을 나타낸다: 탁소테레 96.8mg/kg 및 플라보피리돌 23.2mg/kg. 당해 성분들이 14일째 및 23일째에 투여되는 탁소테레와 14 내지 17일째 및 20 내지 23일째에 투여되는 플라보피리돌로 병용 투여되는 경우, 3개의 병용제제는 명백하게 상승 작용하고 4번째는 탁소테레 단독의 효능과 동일했다. 4개의 병용제제 모두는 6마리 모두가 완전한 반응, 즉, 100%의 완전한 반응을 나타냈다.

3개의 암(arm) 용량 반응 연구를 치료 개시 시점에 측정가능한(230mg) 종양을 함유하는 C3H/HeN 마우스에서 수행했다. 선택된 모델은 쥐 포유동물 선암종 MA13/C으로, 도세탁셀에 대한 화학적 민감성을 기준으로 선택되었다. 마우스를 플라보(즉, 종양 이식 후 14일 내지 17일 동안 하루 1회 및 20일 내지 23일 동안 하루 1회) 또는 도세탁셀(즉, 14일째 및 23일째) 또는 이의 병용제제로 처리했다. 결과: 최대 비독성 용량(HNTD, 2.9mg/kg/투여, 총 투여량 23.2 mg/kg)에서, 단독 제제로서 정맥내 투여된 플라보는 -0.4 log 세포 사멸 네트(log 세포 사멸 네트 = 종양 성장 지연 - 처리 기간/3.32 x 종양 2배 성장 시간)로서 불활성이고 완전히 퇴화(CR)하지 못했다. 단독의 도세탁셀의 HNTD(48.1mg/kg/주사, 총 투여량 96.8mg/kg)이 매우 활성(3 log 세포 사멸 네트, 6/6 CR)인 것으로 밝혀졌다. 최대 비독성 배합량(플라보 1.93mg/kg/투여 및 도세탁셀 53.2mg/kg/주사)에서 7.6 log 세포 사멸 네트 및 6/6 CR로서 명백한 상승 작용이 나타났다. 당해 병용제제가 충분히 허용되어 마지막으로 처리한지 6일 후에 발생하는 절망 상태에서 13%의 체중 손실을 유도했다. 도세탁셀 HNTD와 비교하여 2개의 적은 투여량 수준에서 상승 작용이 유지되었다. 상기 상승 작용은 또한 플라보가 경구적으로 투여되는 경우에도 관찰되었다.

플라보피리돌-탁소테레 병용제제, 포유동물 선암종 MA13/C "반복 노출"

IV 제제 mg/kg 투여량(총 투여량)		% bwl(절망 상태)	lck 전체	CR	주해
탁소테레 d14,23	플라보피리돌 d14-17, 20-23	% bwl(절망 상태)	lck 전체	CR	주해
78.1(156.2) 48.1(96.8)	- -	20(29) 8(28)	- 4.4	- 6/6	2/6 DD HNTD
- - -	4.8(38.4) 2.9(23.2) 1.75(14)	>20 3(18) +10(24)	- 1.0 0.0	- 0/6 0/6	4/5 DD HNTD
48.4(96.8) 53.2(106.4) 43.6(87.2) 36.3(72.6) 31.5(63.0) 24.2(48.4)	2.9(23.2) 1.93(15.44) 1.6(12.8) 1.31(10.48) 1.14(9.12) 0.88(7.04)	15(27) 13(29) 9(29) 3(29) 6(28) 5(19)	- 9.0 7.0 5.1 4.4 2.0	- 6/6 6/6 6/6 6/6 2/6	2/5 DD HNTD
Td = 2.2일; 대조군이 1g에 도달하는 시간 = 17.8일; 치료 개시 시점의 종양의 평균 무게 = 210 - 260mg CR = 완전한 반응; IV = 정맥내; bwl = 절망 상태에서의 체중 손실; (DT) = 총 용량; HNTD = 최대 비독성 용량; lck = log₁₀ 세포 사멸; DD = 약물에 따른 치사

실시예 3

탁소테레를 종양 이식한 후 14일째 및 25일째에 정맥내 주사했다. 플라보를 14일 내지 18일동안 하루에 1회 및 21일 내지 25일동안 하루 1회 경구적으로 투여했다.

플라보피리돌(po) - 도세탁셀(iv)

연장된 노출 MA13/C

제제	스케줄	HNTD(DT) mg/kg TXT 플라보	% bwl (절망 상태)	lck	주해
TXT 플라보	14,25 14-18, 21-25	30 - (60) 2.7 (27)	3.6(33) 11.6 (26)	0.9 0.1	HNTD HNTD
병용제제 TXT 병용제제 플라보	14,25 14-18, 21-25	45 (90) 4.5 (45)	9.7(19)	5	HNTC
약 320mg - 14일째에 종양 무게 (BCM-1252)- 실험 횟수 HNTC : 최대 비독성 배합량

실시예 2에서와 같이, 도세탁셀과 매일 반복적인 플라보와의 병용제제는 등가 독성 투여량에서 단독 제제보다 활성인 것으로 밝혀졌다. 사멸된 세포가 log 4 만큼 증가된 것으로 상승 작용이 나타난다.

본 발명의 또 다른 양태는 본원에 기재된 본 발명의 명세서 및 실시예를 고려하여 당해 기술 분야의 기술자에게 명백할 것이다. 명세서 및 실시예는 단지 예시적인 것으로서 간주되어야만 하고 진정한 본 발명의 범위 및 취지는 하기의 청구항에 기재되어 있다.

Claims

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도세탁셀 및 플라보피리돌을 포함하는, 유방암의 치료시 치료학적 상승 작용을 갖는 약제학적 병용제제.
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