CZ301423B6 - Farmaceutická kompozice vykazující terapeutickou synergii - Google Patents

Abstract

Vynález se týká farmaceutické kompozice vykazující terapeutickou synergii pri lécení neoplastických onemocnení, jejíž podstata spocívá v tom, že obsahuje taxoter a flavopiridol. Složky kompozice se výhodne podávají oddelene v casovém odstupu. Flavopiridol se výhodne podává orálne.

Description

Oblast techniky

Vynález se týká farmaceutické kompozice vykazující terapeutickou synergii při léčení neoplastíckých onemocnění.

io Dosavadní stav techniky

Taxany a taxoly tvoří skupinu přirozeně se vyskytujících diterpenových sloučenin zahrnujících potentní protinádorově účinnou látku paclitaxel. Paclitaxel (Taxol), který byl původně izolován z kůry tisu pacifického (Taxus brevifolia) se ukázal být vysoce účinný při adjuvantní a neo-adju15 vantní terapii pacientů trpících rakovinou prsu a vaječníků. Později bylo zjištěno, že i jeho polosyntetický analog docetaxel (taxoter) je terapeuticky účinný v rámci chemoterapie pacientů s rakovinou prsu, přičemž rovněž vzrostl počet onemocnění, které se ukázaly být citlivé na tuto skupinu protinádorově účinných látek, a mezi které spadá také rakovina plic a rakovina tračníku. Jak Taxol (paclitaxel), tak taxoter (docetaxel) se váží k tubulinu, inhibují rozdružení mikrotubulí a narušují mitózu, čímž blokují průběh fáze M buněčného cyklu a usnadňují apoptózu.

Vzdor nepochybné celkové klinické úspěšnosti taxoidů jsou některé nádory rezistentní vůči této skupině protinádorově účinných látek. Tato rezistence může být u nádoru vrozená nebo se může v nádoru vyvinout v průběhu času. Byly popsány tři druhy rezistence vůči protinádorově účin25 ným látkám: i) lokální mutace tubulinového genu, i i) selekce tubulinových isoforem s nízkou schopností vazby ktaxanům a iii) exprese fenotypu vícečetné rezistence (MDR, MultiDruhResistance) mediovaného P-glykoproteinovou (P-gp) refluxní pumpou kódovanou genem mdrl. Mechanizmus iii) může vysvětlovat vrozenou rezistenci k Taxol a taxoteru v nádorech, které často inherentně exprimují P-gp a kterými jsou například rakovinové nádory tračníku a ledvin.

Kombinace nebo soustavy podle vynálezu umožňují inhibovat nebo oddálit fenomén pleiotropní rezistence neboli vícečetné rezistence.

Příprava Taxolu, taxoteru a jejich derivátů tvoří například předmět evropských patentových dokumentů EP 0 253 738 a EP 0 253 739 a mezinárodní přihlášky PCT WO 92/09 589.

Podstata vynálezu w Předmětem vynálezu je farmaceutická kompozice vykazující terapeutickou synergii při léčení neoplastických onemocnění, jejíž podstata spočívá v tom, že obsahuje taxoter a flavopiridol.

Výhodně se uvedené složky farmaceutické kompozice podávají odděleně v časovém odstupu. Výhodně se léčivý účinek uvedené farmaceutické kompozice uplatňuje při léčení neoplastického onemocnění, kterým je rakovina prsu nebo rakovina plic. Výhodně se flavopiridol podává orálně.

Flavopiridol (cis-5,7-dihydroxy-2-{2-chlorfenyl)-8-[4-(3-hydroxy-I-methyl)piperidinyl]-lbenzopyran-4-on) je syntetickým flavonem, u kterého bylo prokázáno, že má protinádorovou účinnost proti různým nádorovým buněčným řadám, jakými jsou buněčné řady lidského karci50 nomu plic a karcinomu prsu, a že rovněž inhibuje růst nádorů v rámci modelů xenoroubú. Bylo zjištěno, že indukuje zástavu jak fáze Gl, tak i G2 buněčného cyklu. Flavopiridol je potentním a selektivním inhibitorem CDKs a jeho protinádorová účinnost je podmíněna jeho schopností inhibovat CDK. Studie prokázaly, že jeho schopnost inhibovat růst nádorových buněk se uplatňuje v buněčném cyklu specifickým způsobem. O tom viz Bioorg. & Med. Chem. Letters 10:103755 1041 (2000).

Taxoter a flavopiridol mají různé mechanizmy účinku, které mohou zlepšovat účinnost každého z nich. Zlepšená účinnost soustavy podle vynálezu může být demonstrována stanovením terapeutické synergie. Soustava (kombinace) vykazuje terapeutickou synergii v případě, že je terapeu5 ticky lepší než jedna nebo druhá ze složek použitá v jejich optimální dávce (T. H. Corbett a kol.,

Cancer Treatment Reports, 66: 1187 (1982).

Pro prokázání účinnosti soustavy (kombinace) může být nezbytné srovnat maximálně tolerovanou dávku soustavy (kombinace) s maximální tolerovanou dávkou každé ze separátních složek io v rámci uvažované studie. Tato účinnost může být kvantitativně vyjádřena například hodnotou logiobuněčná smrt (log₎₀ cell ki 11), která se stanoví podle následujícího vzorce: logiobuněčná smrt = T-C(dny)/3,32 x Tj, ve kterém

T-C znamená dobu buněčného růstu (jde o střední dobu, vyjádřenou v počtu dní, pro nádory ošetřované skupiny (T) a nádory ošetřované skupiny (C)) potřebnou k tomu, aby nádor dosáhl nějaké předem stanovené hmotnosti (například hmotnost 1 g), a

T_d znamená dobu, vyjádřenou v počtu dní, potřebnou k tomu, aby nádor zdvojnásobil svůj objem u kontrolních zvířat (T. H. Corbett a kok, Cancer, 40, 2660-2680 (1977); F. M. Schabel a kol., Cancer Drug Development, Part B, Methods in Cancer Research, 17, 3-51, New York, Academie Press lne. (1979)). Produkt je považován za účinný v případě, že jeho hodnota logiobuněčná smrt je větší nebo rovna 0,7. Produkt je považován za velmi účinný v případě, že má hodnotu logiobuněčná smrt větší než 2,8.

Soustava (kombinace), použitá ve své maximálně tolerovatelné dávce, ve které každá zjejich složek bude přítomna v dávce obecně nepřesahující její maximálně tolerovanou dávku, bude vykazovat terapeutickou synergii v případě, že její hodnota logiobuněčná smrt je větší než hodnota logiobuněčná smrt nej lepší složky v případě, že je podána samotná.

Účinnost soustavy na pevné nádory může být určena experimentálně následujícím způsobem:

Zvířatům podstupujícím tento experiment, obecně myším, se subkutánně bilaterálně naroubuje 30 až 60 mg nádorový fragment v den nula. Zvířata nesoucí nádor se před tím, než se podrobí různým ošetřením nebo kontrolním zákrokům, promísí. V případě ošetření pokročilých nádorů se nádory ponechají dorůst do požadované velikosti, přičemž se vyloučí zvířata, která mají nádor nedostatečně vyvinut. Vybraná zvířata se nahodile rozdělí do kontrolních skupin a skupin, které budou ošetřeny. Zvířata nenesoucí žádný nádor mohou být rovněž podrobena stejným ošetření, jaká podstoupí zvířata nesoucí nádor, aby bylo možné rozlišit toxický účinek testovaných soustav od jejich specifického účinku na nádor. Chemoterapie obecně začíná 3 až 22 dnů po naroubování nádorů a to v závislosti na typu nádoru, přičemž se zvířata pozorují každý den. Jednotlivé skupiny zvířat se váží 3 nebo 4 krát týdně až do okamžiku, kdy je dosaženo maximální ztráty hmot45 nosti a potom se skupiny váží alespoň jednou týdně až do ukončení experimentu.

Nádory se měří 2 nebo 3 krát týdně až do doby, kdy nádor dosáhne hmotnosti přibližně 2 g nebo až do okamžiku, kdy zvíře uhyne v případě, že k tomu dojde ještě dříve než jeho nádor dosáhne hmotnosti 2 g. Po utracení se zvířata podrobí pitvě.

Proti nádorová účinnost se stanoví podle různých parametrů uvedených v tabulkách I a II.

Při studiu vlivu soustavy na leukémie se zvířatům naroubuje specifický počet buněk a protinádorová účinnost se stanoví prodloužením doby přežití ošetřených myší oproti kontrolním myším.

Produkt je považován za účinný v případě, že prodloužení doby přežití je větší než 27 %, přičemž

CZ JU142J B6 produkt je považován za velmi účinný v případě, že prodloužení doby přežití je větší než 75 % v případě leukémií P388,

V následujících příkladech byl myším naroubován prsní adenokarcinom MA 13/C a myši byly ošetřeny soustavami taxoteru a flavopiridolu při různých schématech podání a různých způsobech podání. Jak Taxol, tak i taxoter a stejně tak flavopiridol mohou být podány orálně a také intravenózně. Některá z těchto schémat vykazují jasnou terapeutickou synergii.

Další předměty a výhody vynálezu budou jednak uvedeny v následujícím popisu a jednak budou io zřejmé z tohoto popisu anebo mohou být odvozeny z praktického provedení vynálezu. Tyto předměty a výhody vynálezu budou realizovány a dosaženy prostřednictvím prvků a jejích kombinací obzvláště definovaných v připojených nárocích a příkladech. Je samozřejmé, že uvedené příklady mají pouze ilustrační charakter a nikterak neomezují vlastní rozsah vynálezu, který je jednoznačně definován formulací patentových nároků a obsahem popisné části.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Za účelem stanovení účinnosti každé složky soustavy, byly jak taxoter, tak i flavopiridol podávány samostatně myším nesoucím prsní adenokarcinom MA 13/C. Taxoter byl podáván intravenózně ve dnech 15 a 21; dávka podaná každý z uvedených dnů činila 30 mg/kg, což předsta25 vuje celkovou dávku 60 mg/kg. Při separátním použití bylo dosaženo hodnoty logu buněčná smrt 4,7 a kompletní odezvy u všech pěti takto ošetřených myší. Samostatný flavopiridol byl podán ve dnech 15 a 21; dávka podaná každý z uvedených dnů činila 6 mg/kg, což představuje celkovou dávku 12 mg/kg. Nebylo dosaženo kompletní odezvy u všech pěti testovaných myší.

Uvedené sloučeniny byly potom zkombinovány dvěma způsoby a testovány v přerušovaném režimu. V rámci první soustavy byl flavopiridol podán jako první ve dnech 15 a 20 (celková dávka 9 mg/kg) a potom byl podán taxoter vždy v následujících dnech 16 a 21 (celková dávka 45 mg/kg). Při podání tímto způsobem bylo dosaženo hodnoty logu buněčná smrt 5,5 a kompletní odezvy u 5 z 5 ošetřených myší. Při tomto přerušovaném režimu je hodnota logu buněčná smrt lepší než u taxoteru podaného samostatně a ještě rezultuje v kompletní odezvě u 5 z 5 ošetřených myší vzdor skutečnosti, že bylo v rámci uvedené soustavy podáno o 25 % méně taxoteru a o 25 % méně flavopiridolu ve srovnání s kontrolním stanovením.

Když bylo pořadí podání uvedených složek obráceno a taxoter byl podán jako první ve dnech 15 a 20 a teprve potom byl v následujících dnech 16 a 21 podán flavopiridol, přičemž obě složky byly podány ve výše uvedených množstvích, bylo dosaženo hodnoty logu buněčná smrt mírně nižší než u taxoteru samotného, avšak i v tomto případě bylo dosaženo kompletní odezvy u 5 z 5 pěti ošetřených myší. Následující tabulka ilustruje tyto výsledky a ukazuje, že soustava flavopiridoíu a taxoteru podaná v množství o 25 % nižším má stejnou účinnost jako samotný taxoter.

-3CZ 301423 B6

Tabulka I

Soustava Flavopiridol/taxoter u myší nesoucích ΜΑ 13/C; 24 odstup

IV-léčivo	Režim	HNTD(DT)	%bwl	lek	Komentář
Doceta- xel	Flavo
Taxoter	15,21	30,0	-	8 (27)	4,7	5/5 CR
		(60,0)				HDE
Flavopiri-	15,21	-	6,0	6(16)	0,4	0/5 CR
dol			(12,0)
Soustava
24h odstup
1.Flavo	15,20	22,5	4,5	7 (22)	5,5	5/5 CR
Taxoter	16,21	(45,0)	(9,0)			HDE
1.Taxoter		22,5	4,5	7(25)	4,4	5/5 CR
		(45,0)	(9,0)

Td = 2,2 dne;

doba potřebná pro kontrolní skupinu k dosažení lg = 20,3 dne; střední hmotnost nádoru při započetí terapie = 130-160 mg;

CR = kompletní odezva;

io IV = intravenózní;

bwl = ztráta tělesné hmotnosti (v nejhlubším bodě);

(DT) = celková dávka;

HNTD = nejvyšší netoxická dávka; lek = logiobuněčná smrt.

Příklad 2

V rámci tohoto příkladu byl zvýšen počet dnů, při kterých se podává flavopiridol, přičemž bylo 20 zjištěno, že když se myši nesoucí ΜΑ 13/C exponují stejnými dávkami flavopiridolu podávanými v průběhu 8 dnů v desetidenním cyklu, zatímco taxoter je podán první a poslední den desetidenního cyklu, dojde k jednoznačné terapeutické synergii.

Dále zařazená tabulka 2 uvádí nejvyšší netoxickou dávku každé samotné složky; 96,8 mg/kg 25 v případě taxoteru a 23,2 mg/kg v případě flavopiridolu. V případě, že se uvedené složky podají v soustavě, přičemž taxoter je podán ve dnech 14 a 23 a flavopiridol je podáván ve dnech 14-17 a 20-23. byly tři soustavy jednoznačně synergické a čtvrtá měla účinnost rovnou účinnosti samotného taxoteru. U všech čtyř soustav bylo dosaženo kompletní odezvy u 6 ze 6 testovaných zvířat, což představuje 100% kompletní odezvu.

U myší nesoucích měřitelné nádory na počátku terapie (230 mg) byla provedena tříbloková studie dávka-odezva. Zvoleným modelem byl murinní prsní adenokarcinom MA 13/C selekovaný na bázi jeho chemosenzitivity na docetaxel. Myši byly ošetřeny produktem Flavo (a sice jednou denně ve dnech 14 až 17 a ve dnech 20 až 23 po implantaci nádoru) nebo docetaxelem (a sice ve dnech 14 a 23) nebo jejich kombinací. Výsledky: při nejvyšší netoxické dávce (NHTD

-4CZ JU142J Bb

2,9 mg/kg/dávka, celková dávka 23,2 mg/kg) byl Flavo podanýjako jediné činidlo neúčinný při 0,4 log cell kill net (log cell kill net = odklad růstu nádoru - doba léčení i 3,32 x doba pro zdvojnásobení nádoru) a nekompletní odezvě. Pří HNDR samotného docetaxelu (48,1 mg/kg/injekce, celková dávka 96,8 mg/kg) byl tento shledán velmi účinným (3 log cell kill net, CR 6/6). Vylo5 žená terapeutická synergie byla dosažena při nejvyšší netoxické dávce soustavy (Flavo při 1,93 mg/kg/dávka a docetaxel při 53,2 mg/kg/injekce) s 7,6 log cell kill net a CR 6/6. Tato soustava byla dobře snášena, když způsobila 13% úbytek tělesné hmotnosti v nejhlubším bodě, ke kterému došlo 6 dní po posledním podání. Synergie byla zachována i při 2 dodatečných nižších dávkových hladinách ve srovnání s HNTD docetaxelu. Tato synergie byla rovněž pozorována io v případě, kdy byl Flavo podáván orálně.

Tabulka II

Soustava Flavopiridol-taxoter

Prsní adenokarcinom MA 13/C „opakovaná expozice“

IV léčivo mg/kg/dávka (celková dávka) Taxoter Flavopiridol dl4,23 dl4-17,20-23	%bwl	lek Gross	CR	Komentář
78,1 (156,2)	20(29)	-	-	2/6 DD
48,1 (96,8)	8(28)	4,4	6/6	HNDT
4,8(38,4)	>20	-	-	4/5 DD
2,9(23,2)	3(18)	1,0	0/6	HNTD
1,75(14)	+10(24)	0,0	0/6
48,4 -2,9(23,2) (96,8)	15(27)	-	-	2/5 DD
53,2 1,93(15,44) (106,4)	13(29)	9,0	6/6	HNTD
43,6 1,6(12,8) (87,2)	9(29)	7,0	6/6)
26,3 1,31(10,48) 72,6)	3(29)	5,1	6/6
31,5 1,14 (9,12) 63,0)	6(28)	4,4	6/6)
24,2 0,88(7,04) (48,4)	5(19)	2,0	2/6

-5CZ 301423 B6

Td-2,2 dne;

doba potřebná pro kontrolní skupinu k dosažení Ig = 17,8 dne; střední hmotnost nádoru při započetí terapie = 210—260 mg;

CR = kompletní odezva;

IV = intravenózní;

bwl - ztráta tělesné hmotnosti (v nej hlubším bodě);

(DT) = celková dávka;

HNTD = nejvyšší netoxická dávka; lek = logio buněčná smrt.

Příklad 3

V rámci tohoto příkladu byl taxoter injikován intravenózně ve dnech 14 a 25 po implantaci nádo15 ru. Flavo byl podán orálně jednou denně ode dne 14 do dne 18 a potom ode dne 21 do dne 25.

Flavopiridol (p.o)-docetaxel (i.v.)

Prolongovaná expozice MA 13/C

Léčivo	Režim	HNTD(DT) (mg/kg)	%bwl	lek	Komentář
TXT	Flavo
TXT	14,25	30	-	3,6(33)	0,9	HNTD
Flavo	14-18, 21-25	(60)	2,7	11,6	0,1	HNTD
			(27)	(26)
Soustava
TXT	14,25	45	4,5	9,7 (19) 5	HNTD
Soustava
Flavo	14-18, 21-25	(90)	(45)

hmotnost nádoru ve dni 14: asi 320 mg; (BCM-1252)-experiment no.

Stejně jako v příkladu 2 bylo zjištěno, že soustava docetaxelu a opakovaně denně podávaného 25 produktu Flavo je při ekvitoxických dávkách účinnější než uvedené jednotlivé složky. Synergie je demonstrována log 4 zvýšením buněčné smrti.

Claims (5)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   L Farmaceutická kompozice vykazující terapeutickou synergii při léčení neoplastických onemocnění, vyznačená tím, že obsahuje taxoter a flavopiridok
2. 2. Farmaceutická kompozice podle nároku 1, vyznačená tím, že složky kompozice se 10 podávají odděleně a v časovém odstupu.
3. 3. Farmaceutická kompozice podle nároku 1, vyznačená tím, že neoplastickým onemocněním je rakovina prsu.

   15
4. 4. Farmaceutická kompozice podle nároku 1, vyznačená tím, že neoplastickým onemocněním je rakovina plic.
5. 5. Farmaceutická kompozice podle předchozích nároků, vyznačená tím, že flavopiridol se podává orálně.

   25 Konec dokumentu