KR100747649B1

KR100747649B1 - 새틀라이트 ｒｎａ, 이 ｒｎａ를 이용한 오이 모자이크바이러스의 약독 바이러스, 이 약독 바이러스를 접종한오이 모자이크 바이러스 저항성 식물 및 식물에 있어서의오이 모자이크 바이러스의 방제법

Info

Publication number: KR100747649B1
Application number: KR1020050112919A
Authority: KR
Inventors: 하루키 사야마; 마사유키 코미나토; 메구미 야마다
Original assignee: 니폰 델몬트 코퍼레이션
Priority date: 2005-04-21
Filing date: 2005-11-24
Publication date: 2007-08-08
Also published as: JP2006320309A; KR20060111251A

Abstract

본 발명은 배열 번호 1 또는 2 기재의 염기 배열을 포함하는 새틀라이트 RNA에 관한 것이다. 본 발명은 또 이러한 새틀라이트 RNA를 가지는 오이 모자이크 바이러스의 약독 바이러스에 관한 것이다. 이 약독 바이러스는 고추 등의 식물에 감염함으로써, 숙주 식물에 오이 모자이크 바이러스에 의한 병해에 대한 저항성을 부여할 수가 있다.

새틀라이트 RNA, 오이 모자이크 바이러스, 약독 바이러스, 고추, 저항성

Description

새틀라이트 ＲＮＡ, 이 ＲＮＡ를 이용한 오이 모자이크 바이러스의 약독 바이러스, 이 약독 바이러스를 접종한 오이 모자이크 바이러스 저항성 식물 및 식물에 있어서의 오이 모자이크 바이러스의 방제법{Satellite RNAs, Attenuated Cucumber Mosaic Viruses Containing the Same Satellite RNAs, Tolerant Plants Inoculated with the Same Attenuated Cucumber Mosaic Viruses and Protective Methods of Cucumber Mosaic Viruses for Plants}

본 발명은 고추의 오이 모자이크 바이러스에 대한 방제 효과가 특별히 뛰어난 오이 모자이크 바이러스의 약독(弱毒)바이러스, 상기 약독 바이러스를 얻기 위한 새틀라이트(satellite) RNA, 상기 약독 바이러스를 미리 고추의 모종에 접종하는 것을 특징으로 하는 오이 모자이크 바이러스 저항성 고추, 상기 약독 바이러스를 미리 고추의 모종에 접종하는 것을 특징으로 하는 오이 모자이크 바이러스의 방제법에 관한 것이다.

오이 모자이크 바이러스(이하 CMV라 하는 경우도 있다)는 브로모비리다에(Bromoｖiridae)종 쿠쿠모비루스(Cucumoｖirus)속의 대표적인 종으로 지구의 온대, 아열대 및 열대의 지역에서 많은 중요한 농산물에 감염하여 경제적으로 대단한 피 해를 미치고 있다. 이 바이러스는 아마 바이러스 중에 가장 많은 숙주를 가지고, 85속 800종이 넘는 식물에 감염한다. 이것은 중국 동부, 크로아티아, 프랑스, 이집트, 그리스, 이스라엘, 이탈리아, 일본, 폴란드, 포르투갈, 스웨덴, 그리고 미합중국 북부 등의 많은 나라들에서, 바나나, 호박, 셀러리, 콩류, 양상추, 고추, 토마토 및 담배 등의 작물에 감염하여, 모자이크, 실엽, 황화, 왜화, 회저 등의 병해를 생기게 함과 동시에 과실이나 잎의 품질을 저하시키고 또 수확량도 저하시키고 있는 것이 알려졌다. 예를 들면 토마토 소비량이 많은 지중해 연안에 있어서 통조림용 토마토의 CMV의 발생은 지금까지 경제적으로 몹시 심각한 문제였다. 1972년 프랑스의 아르자스 지방에서 발생한 토마토 과실의 괴사병에 이어, 다시 1987년 이탈리아와 스페인의 토마토 주요 산지에서 CMV가 돌연 대발생하여 모든 토마토 작물에 피해를 미치고 괴멸 상태가 되었다(The American Phytopathological Society편, Plant Virus Disease Control, p.507을 참조한 것).

이와 같이 많은 지역에서 다종 다양한 작물에 감염하여 대단한 경제적 피해를 미치는 CMV의 감염에서 작물을 방제하는 일반적인 방법으로서 매개 곤충(진딧물)의 비래(飛來)를 한랭사(寒冷紗)에 의해 방지하는 방법, 실버 폴리 필름의 멀칭(mulching)이나 실버 테이프에 의해 기피 효과를 이용하는 방법, 및 농약 살포에 의한 방제 방법 등을 들 수 있다.

그런데, 일반적으로 식물에는 이미 감염하고 있는 바이러스병과 같은 바이러스 또는 지극히 근친인 바이러스에는 감염하기 어렵다고 하는 현상(이것을 간섭 작용이라고 한다)이 있으므로, 식물에 용이하게 감염하여 그 조직 내에서 번성 증식 하여도 식물 그 자체의 생육에 거의 영향을 미치지 않을 정도의 약한 병원성의 바이러스(이것을 약독(弱毒)바이러스라고 한다)를 무병의 식물에 미리 감염시키면, 강독(强毒)의 감염이나 피해를 막는 것(이것을 바이러스 방제라고 한다)이 가능하게 된다.

종래, 이 현상을 이용한 오이 모자이크 바이러스의 방제법으로서 아래와 같은 것이 알려져 있다.

(1) 새틀라이트 RNA를 포함하지 않는 오이 모자이크 바이러스와, 토마토에 회저 증상을 발휘하지 않는 CMV로부터 얻어진 분자량 0.5∼2.5×10⁵달튼의 새틀라이트 RNA를, 야채, 화훼, 담배, 콩류에 접종하게 하고, 그런 후 상기 야채, 화훼, 담배, 콩류의 즙액으로부터 약독 CMV를 만들어내는 방법, 및 그에 의해 얻어진 신규 약독 바이러스, 및 그것을 이용한 CMV의 방제 방법(일본 특소공 62-37956호 공보를 참조한 것)이 알려져 있다.

(2) 새틀라이트 RNA의 cDNA를 T7 프로모터를 사용하여 생체 밖에서(in ｖitro) 전사시켜 감염성이 있는 새틀라이트 RNA를 얻는 것, 5＇말단에 24염기의 여분의 배열이 부가되어 있는 것은 감염성이 낮았지만 이것을 6－9 염기로 하면 감염성은 10배로 증대하는 것, 천연 새틀라이트 RNA의 감염성은 100배인 것, 5＇말단의 24염기의 여분의 배열은 식물 내에서 복제함으로써 제거할 수 있는 것(J.Biochem., 1988, Vol. 104, No. 5, p. 841-846을 참조한 것)이 알려져 있다.

(3) 담배에서 4세대 계대(繼代)한 Y－CMV로부터는 Yn 새틀라이트 RNA가 발 생하며, 이 새틀라이트 RNA는 토마토에 회저 증상을 발생하는 것, Y 새틀라이트 RNA는 회저 증상을 발생하지 않는 것(J. Gen. Virol., 1986, Vol. 67, No. 10, p. 2241-2246을 참조한 것)이 알려져 있다.

(4) Y 새틀라이트 RNA가 담배에서 황색 증상을 보이고 토마토에 회저 증상을 보이는 것, 그 원인 영역을 특정하기 위해서 Y 새틀라이트 RNA의 cDNA에 삽입이나 흠실(欠失, deletion)을 도입한 것, Y 새틀라이트 RNA와 비회저성의 T73 새틀라이트 RNA와의 키메라(chimera)를 실험한 결과 Y 새틀라이트 RNA의 325번의 염기를 1 염기 치환하는 것만으로도 토마토의 회저 증상은 없어지고 모자이크 증상으로 바뀐 것, S19 새틀라이트 RNA와의 동일한 실험을 한 결과 담배에 황색 증상을 내는 것은 100번에서 200번 사이의 2차 구조가 관여하고 있는 것(Plant Cell., 1989, Vol. 12, p. 1165-1173을 참조한 것)이 알려져 있다.

그렇지만, 종래 알려져 있는 약독 바이러스는 매우 적은 식물에 대해서만 그 방제 효과를 가져오는 것이고, 대상으로 하지 않는 식물에 대해서는 반대로 오이모자이크 바이러스증에 의한 병해를 가져온다고 하는 결점을 가진다. 따라서, 포장(圃場) 등에 있어서 적용하는 경우 대상으로 하지 않는 식물에 감염하여 모자이크, 실엽, 황화, 왜화, 회저 등의 병해가 발생하는 영향을 고려하여 격리된 상태에서 재배할 수 밖에 없는 결점을 가진다. 또, 일반적으로 약독 바이러스는 항상 변이를 일으킬 가능성이 있어 계대 접종이나 포장에서의 이용의 과정에서 돌연변이 등에 의해 약독 바이러스로 변화하고 대상 작물 등에 병해가 생기는 위험성을 가진다. 그 때문에 만들어낸 약독 바이러스는 계대 접종하여 바이러스 증상의 변화를 조사 하는 것이 매우 중요하지만, 그 조작에 노력과 시간을 필요하는 결점을 가진다.

그러한 상황에서 본 출원인은 토마토의 CMV 방제에 효과적인 새틀라이트 RNA를 가지는 5종류의 약독 CMV(일본 특허 제2975739호 공보를 참조한 것), 많은 작물 특히 피망의 CMV 방제에 효과적인 새틀라이트 RNA를 가지는 약독 바이러스(일본 특허 제3728381호 공보를 참조한 것), 및 피망과 고추의 CMV 방제에 효과적인 새틀라이트 RNA를 가지는 2종류의 약독 CMV(국제 공개 번호 WO2004/022740 A1을 참조한 것)를 개발하여 왔다.

본 발명자 등은 상기에 나타내는 많은 약독 CMV를 개발하여 왔다. 그러나 Chung Yang(이하 청양이라고 한다)나 Buchon(이하 부촌이라고 한다) 등의, 바이러스의 감수성이 매우 높기 때문에, 바이러스 증상이 곧바로 발병하기 쉬운 한국 품종 고추를 간섭 작용에 의해 강독의 CMV로부터 방제하는 것이 가능한 약독 CMV는 아직도 개발되어 있지 않다. 따라서 본 발명자 등은, 본 발명자 등이 개발한 상기의 약독 CMV보다도 더 한국 품종 고추의 CMV 방제에 효과를 가져오며, 계대 접종하여도 약독 바이러스로 변이하지 않고, 바이러스 증상이 지극히 약한, 새틀라이트 RNA를 보유하는 약독 CMV, 상기 약독 바이러스를 이용하는 오이 모자이크 바이러스의 방제법, 및 오이 모자이크 바이러스 저항성 고추 식물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한, 청양 및 부촌은 한국에 있어서의 고추의 품종명으로, 한국 내의 종묘 회사(예를 들면, 100-710 대한민국 서울 중구 광희동 1가 216번지 광희빌딩 13층 세미니스 코리아 주식회사)로부터 용이하게 입수 가능하다.

본 발명자 등은 이러한 과제를 해결하기 위하여 여러 가지 검토를 거듭한 결과, 한국 내의 고추 포장과 토마토 포장에서 바이러스에 감염되어 있다고 생각되는 고추잎과 토마토잎을 약 600매 채취하여, CMV를 분리하고, 새틀라이트 RNA를 가지는 주(株)를 선발하고, 고추에 접종하여 온실이나 포장에 심어 자연 조건하에서 방제 효과가 있고, 바이러스 증상이 경미한 CMV 중에서 선발을 거듭한 결과, 상기 고추 품종에 감염하여도 바이러스 증상이 지극히 경미하고, 바이러스를 상기 고추 품종에 접종, 감염하여 둠으로써, 고추 포장에 있어서의 다종다양의 강독 CMV의 병해에 대해서 방제 효과가 있는 2종류의 CMV를 선발하는 것에 성공하였다.

그리고, 이들 두 개의 약독 바이러스는 계대 접종하여도 강독 바이러스로서 변이하지 않는 것도 발견했다. 그리고 또한 이러한 약독 바이러스는 각종 식물, 특히 많은 야채류, 가지과(토마토, 담배, 가지, 일본 고추, 피망 등), 콩과(동부, 작두콩, 누에콩 등), 비름과, 명아주과(시금치, 흰 명아주, 명아주 등), 참외과(오이, 멜론, 호박 등), 국화과(양상추, 백일초 등), 유채과(유채과 일년초, 무우 등), 원예 식물류(화훼류) 및 과수 등에 적용할 경우에 CMV의 방제 효과를 가져오는 것도 발견했다.

또, 이러한 새틀라이트 RNA를 포함하는 2종류의 CMV의 약독 바이러스를 각각 본 출원인이 먼저 개발하여, 일본 특허 제2975739호에 개시한 5종류의 동 약독 바이러스 KO1, KO2, KO3, KO4, KO5(각각 배열 번호 3, 4, 5, 6, 7에 나타내는 염기 배열을 가지는 새틀라이트 RNA를 포함), 일본 특허 제3728381호에 개시한 약독 바이러스 NDM－3(배열 번호 8에 나타내는 염기 배열을 가지는 새틀라이트 RNA를 포함), 국제 공개 번호 WO2004/022740 A1에 개시한 NDM－4 및 NDM－5(각각 배열 번호 9, 10에 나타내는 염기 배열을 가지는 새틀라이트 RNA를 포함)와 대비하면, 계대 접종하여도 강독 바이러스로 변이하지 않는 성질은 상기 종래 공지의 약독 바이러스와 거의 같지만, 고추에 접종할 경우 본 발명의 2종류의 약독 CMV는 종래 공지의 약독 CMV KO1, KO2, KO3, KO4, KO5, NDM－3, NDM－4 및 NDM－5보다도 품질이 매우 좋은 고추를 대량으로 고수율로 얻는 것을 발견했다.

본 발명은 이하의 발명을 포함한다.

(1) 배열 번호 1 기재의 염기 배열을 포함하는 새틀라이트 RNA.

(2) 배열 번호 2 기재의 염기 배열을 포함하는 새틀라이트 RNA.

(3) (1) 기재의 새틀라이트 RNA를 가지는 오이 모자이크 바이러스 약독 바이러스.

(4) (2) 기재의 새틀라이트 RNA를 가지는 오이 모자이크 바이러스 약독 바이러스.

(5) 새틀라이트 RNA를 포함하지 않는 오이 모자이크 바이러스 또는 해당 바이러스의 RNA와, (1) 또는 (2) 기재의 새틀라이트 RNA를 식물에 접종하여, 접종 후의 식물로부터 약독 바이러스를 얻는 것을 특징으로 하는 (1) 또는 (2) 기재의 새틀라이트 RNA를 가지는 오이 모자이크 바이러스 약독 바이러스의 작출(作出) 방법.

(6) (3) 또는 (4) 기재의 오이 모자이크 바이러스 약독 바이러스가 감염하고 있는 것을 특징으로 하는 오이 모자이크 바이러스 저항성 식물.

(7) 식물이 고추인, (6) 기재의 오이 모자이크 바이러스 저항성 식물.

(8) 고추가 고추 품종 부촌 또는 청양인, (7) 기재의 오이 모자이크 바이러스 저항성 식물.

(9) (3) 또는 (4) 기재의 오이 모자이크 바이러스 약독 바이러스를 식물에 접종하는 것을 특징으로 하는 식물에 있어서의 오이 모자이크 바이러스의 방제법.

(10) 식물이 고추인, (9) 기재의 방법.

(11) 고추가 고추 품종 부촌 또는 청양인, (10) 기재의 방법.

본 명세서는 본원의 우선권의 기초인 일본 특허 출원 2005－123123호 및 일본 특허 출원 2005－271379호의 명세서 및/또는 도면에 기재되는 내용을 포함한다.

우선, 본 발명의 개략을 설명하고 그 다음에 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다.

CMV의 핵산 성분은 약 3300염기에 의해 구성되어 있는 RNA1, 약 3100염기의 RNA2, 약 2200염기의 RNA3, 및 약 1000염기의 RNA4로 이루어진다. 그리고 CMV의 계통에 따라서는 상기 RNA의 4 성분 외에 더 작은 염기수의 새틀라이트 RNA라 불리는 성분을 포함하는 계통이 있다.

이 새틀라이트 RNA의 염기수는 약 200∼500이다.

본 발명에 이용되는 배열 번호 1 기재의 염기 배열을 포함하는 새틀라이트 RNA 및 배열 번호 2 기재의 염기 배열을 포함하는 새틀라이트 RNA는 토마토 또는 고추로부터 분리된 토마토에 회저 증상을 나타내지 않는 CMV의 약독 바이러스에서 유래하는 것이다.

본 발명의 새틀라이트 RNA를 얻기 위해서는 먼저 식물 예를 들면 토마토, 가지, 피망, 시금치 등에서 분리된 CMV로, 토마토에 회저 증상을 나타내지 않는 새틀라이트 RNA를 포함하는 약독 바이러스를 토마토의 자엽(子葉)에 접종하여, 1∼4주간 정도 바이러스를 증식시킨 후, 감염잎을 동결 분쇄하고, 또한 워링브렌더(믹서, 또는 마쇄기) 등으로 적당한 클로로포름을 함유하는 완충액 중에서 마쇄한다. 얻어진 마쇄액으로부터 적당한 원심분리를 반복함으로써 새틀라이트 RNA를 포함하는 약독 바이러스의 입자를 정제한다. 즉, 페놀 추출과 에탄올 침전에 의해 RNA 화분(畵分)(문헌 T.Maniatis)을 얻는다. 또한 이 RNA 화분을 10∼40%의 자당 밀도 구배 원심분리법이나 폴리아크릴 아미도겔 전기 영동에 의해 단리정제하여, 배열 번호 1 또는 2 기재의 염기 배열을 포함하는 약독 바이러스의 새틀라이트 RNA를 얻는다.

상기에서 얻어진 본 발명의 새틀라이트 RNA는 상법에 따라 대량으로 조제 가능하다. 조제 방법의 일례를 이하에 설명한다.

상기에서 얻어진 새틀라이트 RNA를 주형으로 하여 AMV(생명과학사 제) 등의 역전사 효소를 사용하여 상법에 따라 cDNA를 합성한다. 즉, 대응하는 DNA를 합성한다. 얻어진 cDNA에 T7, T3, SP6(문헌 J.d.Watson 등, In Molecular Biology of the Gene(1987))) 등의 적절한 프로모터(promoter)를 연결한 후, pUC119(pUC118) 등의(다까라주조사 제) 플라스미드(plasmid)에 도입하고, 얻어진 재조합 플라스미드로 대장균 JM101, JM109 등의 숙주 미생물을 형질 전환하여 클로닝한다. 이 새틀라이트 RNA의 cDNA를 포함하는 재조합 플라스미드에 RNA 폴리머라제를 작용시켜, 새틀 라이트 RNA를 생산하게 한다. 이렇게 하여 클로닝 새틀라이트 RNA를 조제할 수가 있다. 이렇게 해서 얻어진 클로닝 새틀라이트 RNA를, 새틀라이트 RNA를 포함하지 않거나, 혹은 그것을 제거한 CMV의 RNA(단, 적어도 RNA1∼RNA3을 포함)와 함께 식물의 유묘(幼苗)의 잎, 뿌리, 줄기에 접종한다. 이와 같이 하여 본 발명의 약독 바이러스를 제조할 수가 있다.

본 발명은 또 상기 새틀라이트 RNA가 CMV 내에 넣어진 CMV의 약독 바이러스에 관한 것이다. 본 발명의 약독 바이러스는 예를 들면 다음의 방법으로 만들어낼 수가 있다.

본 발명의 새틀라이트 RNA를, 새틀라이트 RNA를 포함하지 않는 CMV(새틀라이트 RNA를 포함하는 CMV로부터 새틀라이트 RNA를 제거한 것이라도 좋다) 또는 해당 CMV의 RNA(단, 적어도 RNA1∼RNA3를 포함)와 함께 식물의 유묘의 잎, 뿌리, 줄기에 접종하여, 식물 체내에서 본 발명의 새틀라이트 RNA가 넣어진 약독 바이러스를 증식시키고, 증식 후에 상기 식물체로부터의 액즙 등으로부터 본 발명의 새틀라이트 RNA가 넣어진 약독 바이러스를 얻는다. 약독 바이러스를 만들어내기 위해서 이용되는 식물은 CMV가 감염하여 증식할 수 있는 식물(예를 들면 토마토, 고추)이면 특별히 한정되지 않는다. 이와 같이 하여 본 발명의 약독 바이러스를 만들어낼 수가 있다.

이러한 약독 바이러스는 식물, 특히 식물의 유묘에 접종함으로써, 해당 식물의 CMV에 의한 바이러스병을 유효하게 방제할 수가 있다.

방제법으로서는 여러 가지 있지만, 예를 들면 약독 바이러스를 40mM 인산 완 충액(pH 약 7.0)으로 10∼50μg/ml로 희석하여, 이것에 카보런덤(carborundum), 세라이트, 벤토나이트 등을 소량 더해 식물에 접종하여도 좋다.

또한 식물에의 접종 부위는 각별히 제한되지 않지만, 자엽기(子葉期) 등 어린 식물일수록 감염율이 높기 때문에 바람직하다.

이상 개략을 설명했지만 이하부터 구체적으로 설명한다.

(1) 약독 CMV의 단리(單離)

한국 내의 고추 포장이나 토마토 포장에서 바이러스 증상을 가지는 약 600매의 고추잎과 토마토잎을 채집하여, 이러한 잎에 10배량의 인산 완충액(중성 부근의 0.1M 인산 완충액)을 가하고 마쇄하여, 그 액을 토마토 모종(일본 델몬태사 제품 TMK143)에 접종하였다. 1주일 후, 각각의 에라이저 검정을 한 결과, 412계통에 대해서 CMV의 감염을 확인했다. 이 중에서 약독 바이러스를 선발하여, 412계통의 토마토의 감염잎을 각각 토마토 모종(TMK143) 10주씩에 접종하고, 1주일 후 리보핵산(RNA) 분석을 하였다. 그 결과 새틀라이트 RNA를 가지는 CMV가 81계통으로부터 검출되었다. 그리고, 이들 81계통에 대해서 상기 토마토 모종에 있어서의 바이러스 증상 조사를 행하여, 네크로시스, 모자이크가 발병한 계통이나 감염력을 가지지 않는 계통을 제외하고, 바이러스 증상이 경미하고 바이러스 증식량이 많은 약독 바이러스를 선발하였다. 이 선발한 약독 바이러스는 유전적으로 균일하지는 않고 바이러스 증상이 차이가 났기 때문에, 상기 토마토 모종 100주에 이들 약독 바이러스를 접종하여 약한 바이러스 증상이 갖추어져 있는 주만을 선발했다. 또한 새틀라이트 RNA의 존재가 계속되고 있는 주만을 채집하여 바이러스 접종액 조제를 행하고, 재 차 토마토 모종에 접종하여, 같은 선발 조작을 하고 바이러스 접종액의 조제하는 작업을 5회 반복하여, 토마토로 계대 접종을 행했다. 그 결과, 새틀라이트 RNA를 안정되게 포함하는 2종류의 약독 바이러스(NDM05－1과 NDM05－2)를 단리했다.

(2) 새틀라이트 RNA의 단리

새틀라이트 RNA를 포함하는 2종류의 약독 바이러스(NDM05－1, NDM05－2)를 다른 토마토모종(TMK143)의 자엽에 각각 접종, 감염시켜, 1∼4주간 정도 바이러스를 증식시킨 후, 토마토 자잎을 채취하여 초저온에서 동결했다. 이들 2종류의 감염잎을 각각 분쇄하고, 2배량의 0.1% 티오글리콜산을 포함하는 0.5M 구연산 완충액(pH 6.5)과 동량의 클로로포름을 가하여 워링브렌더로 파쇄했다. 이들 파쇄액을 9500Xg, 10분간 원심하고, 상층(수층)의 10%에 해당하는 중량의 폴리에틸렌 글리콜을 가하고 용해시킨 후, 40분간 정치(靜置)했다. 이들 용액을 9500Xg, 20분간 원심하여 얻어진 침전에 2% 트라이톤 X-100을 포함하는 0.05M 구연산 완충액(pH 7.0)을 각각 가하고 현탁균일화했다. 이들 조정(粗精) 제품을 12000Xg로 원심분리한 상청을 240000Xg, 45분간 원심하고, 침전을 회수한 후, 10Mm 인산 완충액(pH 7.0)에 각각 현탁(懸濁)했다. 이들 용액에 최종 농도로 1%가 되도록 10% SDS를 가하고 또한 용액과 등량의 페놀을 각각 가한 후 12000Xg, 15분간 원심했다. 이것들 상층(수층)을 회수하고, 상법에 따라 에탄올 침전을 반복하여 2종류의 RNA를 각각 단리, 정제하였다. 이 방법으로 감염잎 100g에서 각각 약 100μg의 RNA를 얻었다. 상기의 방법으로 얻어진 RNA를 물에 각각 용해하고, 10∼40% 자당 밀도 구배에 의해 초원심분리(175000Xg, 16시간)하여 얻어진 새틀라이트 RNA의 밴드를 채취하고, 상법에 따 라 에탄올 침전을 반복하여, 2종류의 새틀라이트 RNA를 단리정제했다. 또 정제가 불충분한 경우는 6M 요소를 포함하는 9% 폴리아크릴 아미도겔 전기 영동을 행한 후, 브롬화에티디움(etidium bromide) 용액으로 염색하고, 새틀라이트 RNA의 밴드 부분을 면도기 등으로 잘라냈다. 새틀라이트 RNA의 밴드를 포함하는 겔 단편을 투석 튜브에 넣고 EDTA를 포함하는 트리스 초산 완충액 속에서 전기 영동에 의한 용출을 행하여 새틀라이트 RNA를 회수한 후, 상법에 따라 에탄올 침전을 반복하여 새틀라이트 RNA를 단리정제했다. 이 전기 영동에 의한 새틀라이트 RNA의 용출의 자세한 것은 T. Maniatis 등의 방법［Molecular Cloning(1982)］에 따라 행하였다.

(3) 새틀라이트 RNA의 클로닝과 시퀀스

단리정제한 2종류의 새틀라이트 RNA로부터 마이너스 사슬(이하 '- 사슬'로 표기한다) cDNA를 합성하기 위해서, 새틀라이트 RNA(약 3μg)와 3＇말단 염기 배열에 상보적인 DNA 프라이머(8염기, 1μM)를 95℃로 열처리한 후, 서랭하여 어닐링(annealing)했다. 이 - 사슬 cDNA 합성 반응은 옴니스크립트 리버스 트랜스크립타제(Omniscript Reverse Transcriptase)(QIAGEN)를 이용하여 37℃, 60분의 조건으로 행하였다. 다음으로 얻어진 cDNA를 PCR법에 따라 증폭시켰다. 즉, 플러스 사슬 새틀라이트 RNA의 5＇말단에 상동적인 DNA 프라이머와 3＇말단 염기 배열에 상보적인 DNA 프라이머를 이용하여 94℃ 1분간, 37℃ 1분간, 72℃ 2분간의 반응을 45회 반복함으로서 PCR 반응을 행한다［PCR 반응액；10mM Tris－HCl, 1.5mM MgCl₂, 50mM KCl, 200μM dNTP, 2.5units DNA polymerase(Takara)］.

이 cDNA를 1.5% 아가로스 겔 전기 영동에 의해 분리시킨 후, 겔에 따라 잘라 DNA 회수 킷 GFX PCR DNA and Gel Band Purification Kit(Amersham)을 이용하여 정제했다. 얻어진 cDNA를 T－A 클로닝용 벡터 pGEM T Easy(Promega)에 클로닝했다. 이 플라스미드를 제한 효소 EcoRI로 절단하는 것에 의해 NDM05－1 및 NDM05－2의 새틀라이트 RNA 유래의 cDNA를 확인했다.

이들 2종류의 새틀라이트 RNA의 염기 배열을 써모 시퀘나제 사이클 시퀀싱 킷(Thermo Sequenase Cycle Sequencing Kit)(Amersham사 제)와 DNA 시퀀서 DSQ－1000 L(시마즈제작소 제)를 이용하여 결정했다. NDM05－1에 유래하는 새틀라이트 RNA는 384염기로부터 완성되는 염기 배열(배열 번호 1에 나타낸다)을 가지고 있었다. NDM05－2에 유래하는 새틀라이트 RNA는 340염기로부터 완성되는 염기 배열(배열 번호 2에 나타낸다)을 가지고 있었다.

본 발명의 오이 모자이크 약독 바이러스 NDM05－1의 새틀라이트 RNA의 염기 배열(배열 번호 1)을 배열표에 나타낸다.

본 발명의 오이 모자이크 약독 바이러스 NDM05－2의 새틀라이트 RNA의 염기 배열(배열 번호 2)을 배열표에 나타낸다.

비교를 위해서, 본 출원인이 먼저 개발한 오이 모자이크 약독 바이러스 KO1(일본 특허 2975739호)을 구성하는 새틀라이트 RNA의 염기 배열(배열 번호 3)을 배열표에 나타낸다.

비교를 위해서, 본 출원인이 먼저 개발한 오이 모자이크 약독 바이러스 KO2(일본 특허 2975739호)를 구성하는 새틀라이트 RNA의 염기 배열(배열 번호 4)을 배 열표에 나타낸다.

비교를 위해서, 본 출원인이 먼저 개발한 오이 모자이크 약독 바이러스 KO3(일본 특허 2975739호)을 구성하는 새틀라이트 RNA의 염기 배열(배열 번호 5)을 배열표에 나타낸다.

비교를 위해서, 본 출원인이 먼저 개발한 오이 모자이크 약독 바이러스 KO4(일본 특허 2975739호)를 구성하는 새틀라이트 RNA의 염기 배열(배열 번호 6)을 배열표에 나타낸다.

비교를 위해서, 본 출원인이 먼저 개발한 오이 모자이크 약독 바이러스 KO5(일본 특허 2975739호)를 구성하는 새틀라이트 RNA의 염기 배열(배열 번호 7)을 배열표에 나타낸다.

비교를 위해서, 본 출원인이 먼저 개발한 오이 모자이크 약독 바이러스 NDM－3(일본 특허 제 3728381호)을 구성하는 새틀라이트 RNA의 염기 배열(배열 번호 8)을 배열표에 나타낸다.

비교를 위해서, 본 출원인이 먼저 개발한 오이 모자이크 약독 바이러스 NDM－4(WO2004/022740 A1)를 구성하는 새틀라이트 RNA의 염기 배열(배열 번호 9)을 배열표에 나타낸다.

비교를 위해서, 본 출원인이 먼저 개발한 오이 모자이크 약독 바이러스 NDM－5(WO2004/022740 A1)를 구성하는 새틀라이트 RNA의 염기 배열(배열 번호 10)을 배열표에 나타낸다.

(4) 약독 바이러스의 접종원 작성

약독 바이러스가 감염한 토마토잎 1g에 완충액(중성 부근의 0.1 M 인산 완충액)을 가하고, 10ml로 조정한 마쇄액을 토마토 100주의 자엽 또는 본엽에 접종하여, 1∼2주간 정도 약독 바이러스를 증식시킨 후, 토마토 감염잎 150g을 채취하여 초저온 -80℃로 동결했다. 이 감염잎을 분쇄한 후, 0.1% 티오글리콜산을 포함하는 0.5M 구연산 완충액(pH 6.5) 300ml와 동량의 클로로포름을 가하여 워링브렌더로 마쇄하고, CMV 입자를 포함하는 마쇄액을 얻었다. 이 마쇄액을 2000Xg, 10분간 원심하여, 상층(수층) 120ml를 회수하고, 이것에 10중량%의 분말 폴리에틸렌 글리콜 12g을 가하여 용해시킨 후, 40분 정치하고 석출시켜 침전하기 쉽게 했다. 이 용액을 9500Xg, 20분간 원심하여 얻어진 침전(CMV 입자)을 회수하고, 이것에 2% 트라이톤 X-100을 포함하는 0.05M 구연산 완충액(pH 7.0)을 세정하기 위해 가하여 용해했다. 이것을 12000Xg로 원심분리하여 CMV 입자를 포함하는 웃물을 분취하고, 240000Xg, 45분간 원심하여 얻어진 침전을 10mM 인산 완충액에 현탁하고, 약독 바이러스의 CMV 입자를 약 10mg 추출하여 접종원을 얻었다.

본 발명의 약독 CMV를 고추에 접종하는 방법으로서는, 순화한 약독 바이러스의 NDM05－1 또는 NDM05－2의 입자를 50∼500μg/ml가 되도록 인산 완충액에 현탁하여, 공지의 방법에 의해 접종 하면 좋고, 예를 들면 분무 롤러법(일본 특허 제 2908594호 참조)이나 솔 당접법(일본 특개 2000－201535호 참조)으로 행하는 것이 바람직하다. 이러한 방법은 소량의 약독 바이러스액으로 신속, 간편, 또한 높은 감염율로 접종할 수가 있는 특징을 가진다.

이와 같이 하여 고추의 모종에 약독 바이러스를 접종하면 용이하게 약독 바 이러스가 전신에 감염한 고추의 모종을 얻을 수 있다. 따라서 이 고추 모종을 적당한 크기로 절단한 후, 삽목, 접목 등의 영양 번식 수단을 채용하여 통상의 육묘 관리를 하면 용이하게 약독 바이러스가 전신에 감염한 오이 모자이크 바이러스 저항성의 고추 모종을 얻을 수 있다.

또 이 약독 바이러스를 접종한 고추 모종을 적당한 크기로 절단한 후, 이것을 수목(穗木)으로 하여 약독 바이러스의, 접종하고 있지 않은 다른 대목(臺木)에 접목하거나, 또 반대로 약독 바이러스를 접종한 다른 식물을 대목으로 하여 약독 바이러스 접종하고 있지 않은 고추를 접목하여 통상의 육묘 관리를 하여도, 용이하게 약독 바이러스가 전신에 감염한 오이 모자이크 바이러스 저항성의 고추 모종을 얻을 수 있다.

또 약독 바이러스 접종 고추 모종으로부터 그 일부(예를 들면 곁눈)를 뽑아 소독한 후, 식물호르몬을 적당한 농도로 함유하는 한천 배지에 꽂아 싹이 나오게 하고, 외계와 격리된 실내에서 적당한 온도, 조도 조건 하에서 육성하여, 유묘(예를 들면 본엽이 충분히 전개한 유묘)를 얻고, 이 엽편을 적당한 크기로 절단한 뒤, 식물호르몬을 적당의 농도로 함유하는 한천 배지에 2∼4회 이식하여, 통상의 식물체의 조직배양법과 같게 조작하고, 엽편으로부터 직접 유도시킨 부정아(不定芽)로부터 개체의 재생을 행하여, 고추의 약독 바이러스 보독묘(保毒苗)를 대량으로 얻을 수 있다. 또한 이 약독 바이러스 접종 고추 모종으로부터 일부를 뽑아, 식물호르몬을 적당한 농도로 함유하는 한천 배지에 2∼4회 이식하고, 유합 조직으로부터 유도시킨 부정아로부터 개체의 재생을 행하여, 소망하는 약독 바이러스에 감염한 오이 모자이크 바이러스 저항성 고추모종을 대량으로 얻을 수 있다.

이하, 실시예를 나타내어 본 발명을 구체적으로 설명한다.

실시예 1

(약독 바이러스의 안정성)

(1) 약독 바이러스 NDM05－1의 안정성

외계로부터 격리된 유리 온실에 있어서, 약독 바이러스 NDM05－1의 바이러스 입자를 400μg/ml의 접종 농도로 하고, 한국의 고추 품종인 청양 모종의 자엽 또는 본엽에 접종하여, 5세대에 걸쳐 계대 접종하여 본엽 6∼8매기(枚期)까지 바이러스 증상이 나타날지 여부를 조사한 결과, 몹시 미약한 바이러스 증상이 발생할 뿐, 변이에 의해 회저나 모자이크 등의 중증의 바이러스 증상이 발생하지 않고 안정되어 있는 약독 바이러스인 것을 알았다.

(2) 약독 바이러스 NDM05－2의 안정성

실시예 1 (1)에 있어서, 약독 바이러스 NDM05－1 대신에 약독 바이러스 NDM05－2를 이용하는 이외에는 완전히 같이 하여 안정성을 조사한 결과, 몹시 미약한 바이러스 증상이 발생할 뿐, 변이에 의해 회저나 모자이크 등의 중증의 바이러스 증상이 발생하지 않고 안정되어 있는 약독 바이러스인 것을 알았다.

실시예 2

(각종 약독 CMV의 고추 작물에 대한 영향)

유리 온실에 있어, 한국 고추 품종인 청양과 부촌의 종자를 파종하고 발아하여 10∼20일 후 각각의 작물의 유묘에 본 발명의 약독 바이러스 NDM05－1, NDM05－ 2, 공지의 약독 바이러스 KO1, KO2, KO3, KO4, KO5, NDM－3, NDM－4, NDM－5, 및 한국의 고추 포장으로부터 얻은 강독 CMV인 CMV－P의 CMV 입자를 400μg/ml의 접종 농도로 10주씩 접종하고, 동시에 무접종주도 10주 설치하고 각각의 작물의 바이러스 증상을 접종 후 1개월에 걸쳐 조사했다. 무접종주에는 전혀 바이러스 증상이 나타나지 않았기 때문에 조사 결과를 나타내지 않지만, 여기에서는 본 발명의 약독 바이러스 NDM05－1, NDM05－2 접종주, 공지 약독 바이러스 KO1, KO2, KO3, KO4, KO5, NDM－3, NDM－4, NDM－5 접종주 및 강독 CMV－P 접종주의 바이러스 증상 조사 결과를 표 1에 나타낸다.

표 1의 결과로부터, 대조구의 강독 CMV－P는 2품종의 고추에 모자이크, 왜화 등의 중증 바이러스 증상을 나타냈다.

그러나, 비교례구의 약독 바이러스 KO1, KO2, KO3, KO4 및 KO5는 바이러스에 감수성이 매우 높은 한국 고추 품종의 청양에 대해서 약한 모자이크 증상을 나타내며, 마찬가지로 비교례구의 NDM－3, NDM－4 및 NDM－5는 청양 품종 고추에 대해서 꽤 약한 모자이크 증상을 나타내어, 청양 품종 고추에 부작용을 가지는 것을 알았다.

한편, 본 발명구의 NDM05－1과 NDM05－2는 부촌과 청양 품종에 대해서 바이러스 증상에 있어서는 모자이크 증상보다 경증의 크로로시스 증상을 미약한 정도로 나타냈다.

따라서 본 발명의 약독 바이러스 NDM05－1 및 NDM05－2는 종래 공지 발명의 약독 바이러스 KO1, KO2, KO3, KO4, KO5NDM－3, NDM－4 및 NDM－5보다 바이러스 증상이 약한 약독 바이러스인 것을 알았다.

실시예 3

(본 발명의 약독 CMV NDM05－1 및 NDM05－2의 온실 내에 있어서의 강독 바이러스에 대한 방제 효과 시험)

청양 및 부촌의 종자를 배양토에 각각 파종하여, 약 1개월간 온실 내에서 육성하였다. 그리고 본엽 1∼2매기의 해당 한국 고추 2품종의 유묘에 본 발명으로 조제한 약독 바이러스 NDM05－1, NDM05－2(본 발명구 1), 종래 공지의 약독 바이러스 KO1, KO2, KO3, KO4, KO5, NDM－3, NDM－4 및 NDM－5(비교례구 1)를 400μg/ml의 접종 농도로 각각 20주씩 접종했다(1차 접종). 그리고 20일 후 한국에서 분리한 강독 CMV의 CMV－P를 본엽 6∼7매기의 상기 2품종의 고추에 각각 20주씩 접종했다(2차 접종). 그리고 상기 강독 바이러스 접종 후 30일째의 상기 고추 모종의 병징을, 약독 바이러스 NDM05－1, NDM05－2(이상 본 발명구 2), 약독 바이러스 KO1, KO2, KO3, KO4, KO5, NDM－3, NDM－4, NDM－5(이상 비교례구 2)와 강독 바이러스 CMV－P를 접종하지 않는 상기 2품종 고추(대조구 1)와 강독 바이러스 CMV－P만을 접종한 상기 2품종 고추(대조구 2)의 바이러스 증상을 비교, 관찰하였다(표 2, 표 3).

표 2, 표 3의 결과로부터 온실 내에 있어서 한국 외계 강독 CMV－P를 접종한 한국 고추 품종인 청양과 부촌은 시공(試供)한 전주(全株)에 중증의 모자이크 증상이 나타났다. 그러나, 본 발명의 약독 바이러스 NDM05－1 및 NDM05－2를 상기 2품종의 고추에 미리 접종함으로써, 해당 시험 중에 가장 미약한 바이러스 증상의 크로로시스가 나타날 뿐, 한국 외계 강독 CMV－P의 상기 한국 고추 2품종에의 병해에 대해서 높은 방제 효과를 나타냈다.

한편, 종래 공지의 약독 바이러스의 KO1, KO2, KO3, KO4 및 KO5를 청양 품종에 사용할 경우, 상기 약독 바이러스군은 한국 외계 강독 CMV－P에 높은 방제 효과를 나타내지만 약한 모자이크 증상을 나타내고, 부촌 품종에 사용할 경우에 있어서도 상기 약독 바이러스군은 상기 강독 CMV－P에 높은 방제 효과를 나타내지만 꽤 약한 모자이크 증상을 나타냈다. 또한, 종래 공지의 약독 바이러스 NDM－3, NDM－4 및 NDM－5를 청양 품종에 사용하는 경우는 상기 약독 바이러스군은 상기 강독 CMV에 높은 방제 효과를 나타내지만 꽤 약한 모자이크 증상을 나타내고, 부촌 품종에 사용할 경우에 있어서도 상기 약독 바이러스군은 상기 강독 CMV－P에 높은 방제 효과를 나타내지만 매우 약한 모자이크 증상을 나타냈다.

이상으로부터, 본 발명의 약독 바이러스 NDM05－1 및 NDM05－2는 한국의 고추 품종인 청양과 부촌에 접종하는 경우, 종래 공지의 약독 바이러스 KO1, KO2, KO3, KO4, KO5, NDM－3, NDM－4 및 NDM－5에 비해 매우 미약한 바이러스 증상밖에 나타내지 않고, 한국 외계 강독 CMV－P에 높은 방제 효과를 나타내는 뛰어난 약독 CMV인 것을 알았다.

실시예 4

(본 발명의 약독 CMV의 포장에 있어서의 외계 강독 CMV에 대한 방제 효과 시험)

2004년 5월 20일에, 지극히 감수성이 높고 바이러스 증상이 발현하기 쉬운 한국 고추 품종의 청양 모종 10주씩 11구분을 준비하여, 제1구분에는 본 발명의 약독 바이러스(NDM05－1)를, 제2구분에는 본 발명의 약독 바이러스(NDM05－2)를, 제3구분에는 공지의 약독 바이러스(KO1)를, 제4구분에는 공지의 약독 바이러스(KO2)를, 제5구분에는 공지의 약독 바이러스(KO3)를, 제6구분에는 공지의 약독 바이러스(KO4)를, 제7구분에는 공지의 약독 바이러스(KO5)를, 제8구분에는 공지의 약독 바이러스(NDM－3)를, 제9구분에는 공지의 약독 바이러스(NDM－4)를, 제10구분에는 공지의 약독 바이러스(NDM－5)를 접종하고, 제11구분에는 대조로서 약독 바이러스 무접종의 구분을 준비했다. 이들 약독 바이러스 접종 고추 모종과 무접종 고추 모종 10주씩을 시험 포장에 정식(定植)했다. 그리고 외계의 바이러스 발생을 촉진하기 위하여 정식 이후 살충제나 살균제 등의 약제 살포는 전혀 행하지 않았다. 그 결과, 6월 초순부터 진딧물이 다수 비래하여, 6월 하순부터 외계 바이러스에 의한 바이러스 증상이 무접종주에 발생하기 시작하고, 8월 하순에 이르러서는 약독 바이러스 무접종 고추에 바이러스 증상이 격렬하게 나타났다. 이때의 본 발명의 약독 바이러스 접종 고추, 공지의 약독 바이러스 접종 고추와 약독 바이러스 무접종 고추의 바이러스 증상 및 고추 과실의 수량(收量)을 조사했다.

(1) 8월 24일, 각각 상기 11구분의 고추 10주씩의 바이러스 증상을 조사했다. 그 결과를 표 4에 나타낸다.

표 4의 결과로부터, 대조구(약독 바이러스 무접종 고추)는 크로로시스, 모자이크, 왜화 등의 격렬한 바이러스 증상이 전주(全株)에 발생하고, 건전한 생육주는 전혀 볼 수 없었다. 그러나, 비교례구의 종래 공지의 약독 바이러스 KO1, KO2, KO3, KO4 및 KO5를 접종한 고추주는, 약한 모자이크 증상을 약 반수의 주는 나타냈지만, 그 외의 주는 모두 크로로시스 증상이나 모자이크 증상을 나타냈다. 또한 비교례구의 종래 공지의 약독 바이러스 NDM－3, NDM－4 및 NDM－5를 접종한 고추주는, 그 대부분은 꽤 약하거나 약한 모자이크 증상을 나타냈지만, 그 외의 주는 크로로시스 증상을 나타냈다. 한편, 본 발명구의 약독 바이러스 NDM05－1 및 NDM05－2 접종 고추주는 모두 바이러스 증상으로서는 가장 경미한 크로로시스를 나타냈다.

따라서 본 발명의 약독 바이러스 NDM05－1 및 NDM05－2는 지극히 감수성이 높고 바이러스 증상이 발현하기 쉬운 한국 고추에의 외계 강독 바이러스에 대해서, 높은 방제 효과를 나타내고 해당 고추의 바이러스 증상도 몹시 경미한 것을 알았다.

(2) 해당 11종류의 고추 10주씩으로부터 전 고추 과실을 수확하여 시기별 건전 과실의 수량(收量)과 고추 과실 전수의 종류별 수확량을 조사하였다. 시기별 건전 과실의 수량을 표 5에, 종류별 고추 과실의 수량을 표 6에 나타낸다.

표 5의 결과로부터, 건전 과실의 총수확량은 약독 바이러스 무접종주에서는 701개, 13.9kg이었지만, 비교례구의 종래 공지약독 바이러스 KO1, KO2, KO3, KO4 및 KO5에서는 평균하여 10주당 969개, 19.2kg이고, 비교례구의 종래 공지의 약독 바이러스 NDM－3, NDM－4및 NDM－5 접종주에서는 평균하여 10주당 1051개, 20.8kg이었다. 한편, 본 발명구의 약독 바이러스 NDM05－1 및 NDM05－2 접종주에서는 평균하여 10주당 1243개, 24.7kg이었다. 따라서 본 발명구의 약독 바이러스 NDM05－1 및 NDM05－2 접종주는 대조구의 약독 바이러스 무접종주과 비교하여 약 78%, 비교례구에 종래 공지의 약독 바이러스 KO1, KO2, KO3, KO4 및 KO5 접종주에 비하여 약 29%, 종래 공지약독 바이러스 NDM－3, NDM－4및 NDM－5 접종주에 비하여 약 16%나 건전 과실의 수확 총중량이 많았다.

표 6의 결과로부터, 대조구(약독 바이러스 무접종 고추주)는 외계 강독 CMV의 피해에 의해 건전 기형 과실, 소과숙(小果熟) 과실, 회저 과실, 부패과(이들을 바이러스과라고 한다)의 개수가 전체 개수의 약 37%에나 달하여, 건전 과실의 비율이 61%로 몹시 낮았다.

그러나, 비교례구의 종래 공지의 약독 바이러스 KO1, KO2, KO3, KO4 및 KO5를 접종한 고추주에서는 건전 과실 비율이 평균 약 86%이고, 또한 종래 공지약독 바이러스 NDM－3, NDM－4및 NDM－5를 접종한 고추주에서는 평균 87%이었다. 한편 본 발명구의 약독 바이러스 NDM05－1 및 NDM05－2 접종주에서는 건전 과실 비율이 평균 약 91%로 대단히 높고, 본 발명의 약독 바이러스 NDM05－1 및 NDM05－2는 외계 강독 CMV의 포장의 고추에의 병해에 보다 높은 방제성을 나타내어, 고품질인 고추를 보다 높은 수율로 가져오는 것을 알았다.

이상의 결과로부터 본 발명의 신규 염기 배열을 포함하는 새틀라이트 RNA, NDM05－1 및 NDM05－2를 포함하는 2 종류의 약독 CMV 접종 고추모종은, 강독 CMV가 격렬하게 발생하는 포장에 있어서는 종래 공지의 약독 바이러스 KO1, KO2, KO3, KO4, KO5, NDM－3, NDM－4 및 NDM－5 접종 고추 모종 이상으로 건전 과실의 수확 개수, 수확 총중량 및 수율을 향상했다. 따라서 본 발명의 약독 CMV는 포장에 있어서의 외계 강독 CMV에 대해서는, 약독 바이러스 KO1, KO2, KO3, KO4, KO5, NDM－3, NDM－4 및 NDM－5 이상으로 유효한 방제 효과를 가지고 있는 것을 알았다.

본 발명의 배열 번호 1 및 2의 염기 배열을 가지는 새틀라이트 RNA를 포함하는 CMV의 약독 바이러스는 농작물에 대해서 5세대 이상에 걸쳐서 계대 접종하여도 상기 작물의 바이러스 증상은 대부분 관찰되지 않거나, 또는 완전히 관찰되지 않고, 안정되어 있는 특징을 가진다. 또 본 발명의 약독 바이러스는 바이러스의 감수성이 매우 높기 때문에, 바이러스 증상이 곧바로 발병하기 쉬운 한국 고추 품종의 청양이나 부촌에 접종할 경우, 상기 고추 품종에 대해서 몹시 미약한 바이러스 증 상밖에 관찰되지 않는 특징을 가진다. 또 본 발명의 약독 바이러스는 고추에 접종 할 경우, 공지의 약독 바이러스 KO1, KO2, KO3, KO4, KO5, NDM－3, NDM－4 및 NDM－5보다도 품질이 매우 좋은 고추를 고수율로 다량 얻을 수 있다. 또 본 발명의 약독 바이러스는 각종 식물, 특히 많은 야채류, 가지과(토마토, 담배, 가지, 일본 고추, 피망 등), 콩과(동부, 작두콩, 누에콩 등), 비름과, 명아주과(시금치, 흰 명아주, 명아주 등), 참외과(오이, 멜론, 호박 등), 국화과(양상추, 백일초 등), 유채과(유채과 일년초, 무우 등), 원예식물류(화훼류) 및 과수 등에 적용했을 경우에도 뛰어난 CMV의 방제 효과를 가져온다.

또한 이들 본 발명의 약독 바이러스를 고추 작물에 이용함으로서 바이러스를 매개하는 진딧물을 방제하는 농약이나, 한랭사나 실버 폴리 필름 등의 진딧물 기피 자재 등을 필요로 하지 않고, 나아가 환경 오염의 문제도 없으며, 재배 경비를 삭감할 수 있는 가능성이 있다. 또, 본 발명의 약독 바이러스는 무농약 야채 재배 등에 유리하게 이용할 수 있을 것으로 기대된다.

본 명세서에서 인용한 모든 간행물, 특허 및 특허출원을 그대로 참고로서 본 명세서에 받아들이도록 한다.

[배열표 프리텍스트]

배열 번호 1： 기원주(起源株)는 CMV NDM05－1이다.

배열 번호 2： 기원주는 CMV NDM05－2이다.

배열 번호 3： 기원주는 CMV KO1이다.

배열 번호 4： 기원주는 CMV KO2이다.

배열 번호 5： 기원주는 CMV KO3이다.

배열 번호 6： 기원주는 CMV KO4이다.

배열 번호 7： 기원주는 CMV KO5이다.

배열 번호 8： 기원주는 CMV NDM－3이다.

배열 번호 9： 기원주는 CMV NDM－4이다.

배열 번호 10： 기원주는 CMV NDM－5이다.

서열목록 전자파일 첨부

Claims

삭제
배열 번호 2 기재의 염기 배열로 이루어지는 새틀라이트 RNA.
삭제
제2항 기재의 새틀라이트 RNA를 가지는 오이 모자이크 바이러스 약독 바이러스.
새틀라이트 RNA를 포함하지 않는 오이 모자이크 바이러스 또는 해당 바이러스의 RNA와, 제2항 기재의 새틀라이트 RNA를 식물에 접종하여 접종 후의 식물로부터 약독 바이러스를 얻는 것을 특징으로 하는 제2항 기재의 새틀라이트 RNA를 가지는 오이 모자이크 바이러스 약독 바이러스의 작출(作出) 방법.
삭제
삭제
삭제
제4항 기재의 오이 모자이크 바이러스 약독 바이러스를 식물에 접종하는 것을 특징으로 하는 식물에 있어서의 오이 모자이크 바이러스의 방제법.
제9항에 있어서,

상기 식물이 고추인 것을 특징으로 하는 식물에 있어서의 오이 모자이크 바이러스의 방제법.
제10항에 있어서,

상기 고추가 고추 품종 부촌 또는 청양인 것을 특징으로 하는 식물에 있어서의 오이 모자이크 바이러스의 방제법.