KR100730900B1

KR100730900B1 - 체액샘플에서 분석물의 준정량적 측정의 정확도를 개선시키는 방법

Info

Publication number: KR100730900B1
Application number: KR1019980042664A
Authority: KR
Inventors: 콜린 케이. 메신저; 마이클 제이. 푸기아; 제인 에프. 월리스
Original assignee: 바이엘 코포레이션
Priority date: 1997-10-14
Filing date: 1998-10-13
Publication date: 2007-12-12
Also published as: JPH11190735A; CA2250622A1; AU8844698A; DE69836713T2; DE69836713D1; TW591230B; EP0909953A2; AU737300B2; JP4226118B2; CN1177223C; EP0909953B1; CN1218909A; KR19990037039A; ES2279556T3; EP0909953A3

Abstract

유체 시험 샘플 속에서의 제1 분석물의 농도를 샘플 속에 존재하는 제2 분석물(유체 샘플 속에서의 이의 농도는 제1 분석물의 농도와 임상적으로 관련있다)의 함수로서 측정하는 개선된 방법이 기재되어 있다. 당해 방법은, 제1 분석물의 농도를 측정하고, 제1 분석물의 농도가 유용한 분석 범위를 벗어나는 경우, 이 농도를 제2 분석물의 표준 농도로 나누는 것을 포함한다. 제1 분석물의 농도와 제2 분석물의 농도를 비율화하는 당해 방법은, 부정확한 양(+)의 결과와 부정확한 음(-)의 결과가 거의 보고되지 않으면서 정확도가 증가하기 때문에 유리하다.

Description

체액 샘플에서 분석물의 준정량적 측정의 정확도를 개선시키는 방법

생물학적 체액[예: 뇨(尿), 전혈(whole blood), 혈장, 혈청, 땀 또는 침]에 존재할 수 있는 임상적으로 중요한 물질의 존재 및/또는 농도를 측정하기 위한 분석 방법에서 통상적으로 다양한 분석 과정 및 장치가 사용된다. 이러한 임상적으로 중요한 물질은 통상적으로 분석물이라 칭해지며 특이적 결합 파트너(예: 항체 또는 항원, 약물 및 호르몬)를 포함할 수 있다. 시험 장치의 한 부류는 소위 딥스틱(dipstick)인데, 이는 분석물과 상호작용성인 효소로서, 체액 샘플 속의 분석물의 존재 또는 준정량적 방법의 경우에는 분석물의 농도와 상호관련이 있는 산화 환원 염료(redox dye)의 산화(이에 의해 색상 변화가 야기됨)를 발생시키는 방식으로 분석물과 상호작용할 수 있는 효소를 함유한다. 보다 최근에는, 분석물에 특이적인 표지된 항체를 흡수재인 스트립에 적용하여 시험 체액과 표지된 항체가 모세관현상에 의해 유동될 수 있는 면역 크로마토그래피의 원리에 입각하여 작용하는 시험 스트립이 개발되었다. 당해 스트립의 특정 부분, 즉 포획 영역에서 분석물(또는 이의 유사체)을 고정시키고 특이적 결합에 의해 포획된 표지된 항체의 양을 측정함으로써, 시험 샘플에서의 분석물의 농도를 준정량적으로 측정한다. 표지물이 효소이고 포획 영역에서 색상 반응을 제공하기 위해 효소용 기질을 배치시키는 이러한 종류의 분석 방법은 미국 특허 제4,446,232호에 보다 충분히 기재되어 있다. 미국 특허 제4,703,017호에는 유사한 검정 방법이 기재되어 있는데, 여기서는 표지물이 과립상 물질이어서, 고정된 분석물과 입자로 표지된 항체 사이의 특이적 결합에 기인한 포획 영역에서의 집합시에 육안으로 탐지 가능한 반응이 제공된다.

다양한 분석물을 분석하기 위한 임상적 유용성은, 생물학적 체액에서의 농도가 제1 분석물의 농도와 임상적으로 연관된 제2 분석물의 농도를 측정하여 향상시킬 수 있다. 제2 분석물의 가장 주목할 만한 예는, 크레아틴이 근육 수축을 위한 에너지원으로서 사용되는 크레아틴 포스페이트로 되는 경우, 최종 대사 산물인 크레아티닌이다. 생성된 크레아티닌은 신장 사구체로 여과되고, 이어서 재흡수 없이 뇨 속으로 분비된다. 뇨 분석의 감도를 증가시키고 뇨의 유속이 높아 뇨가 희석되는 문제를 최소화하기 위해, 뇨 농도를 표준화하기 위해서 뇨 단백질 분석에서는 분석물/크레아틴 비율을 사용한다. 통상적인 크레아티닌 분석은 높은 pH, 전형적으로 11.5 내지 12.5의 범위에서 작동하는 알칼리 자페법(alkaline Jaffe method)과 베네딕트-베레법(Benedict-Behre method)을 포함한다. 보다 최근에는, 뇨 샘플을 구연산염, 수산화물 및 산화 가능한 염료(이는 산소 유리 라디칼과 유사 과산화물의 존재하에 착색 반응을 제공한다)의 존재하에 구리 이온과 접촉시키는 크레아티닌 분석 방법이 개발되었다. 크레아티닌 정량은 또한 WO 제96/34271호에 기재되어 있는 바와 같이 면역학적으로 성취될 수 있다. 당해 문헌의 발명에 있어서, 체액 샘플에서의 농도가 제1 분석물의 농도와 임상적으로 연관되는 제2 분석물은 뇨 속의 크레아티닌에 한정되지 않고 본 발명의 방법으로 분석할 수 있는 체액인 뇨에만 한정되지도 않는다. 따라서, 예를 들면, 시험하고자 하는 체액은 전혈(whole blood)일 수 있고 제1 분석물은 HbA_1c일 수 있고, 제2 분석물은 총 헤모글로빈일 수 있는 데 그 이유는 HbA_1c 분석에서의 편향값을 계산에서 배제시키기 위하여 HbA_1c의겉보기 농도를 전혈의 총 헤모글로빈 농도로 조절할 수 있기 때문이다. 정맥내 투여된 이눌린은 크레아티닌처럼 신장 유량의 지시제이다. 제2 분석물로서의 크레아티닌과 관련지어 분석할 수 있는 다른 전형적인 제1 분석물은 잠혈(潛血), 백혈구, 단백질 및 글루코스이다. 뇨 속의 IgG 농도는 제2 분석물로서의 알부민을 기준으로 하여 보정될 수 있다.

WO 제96/34271호에는, 체액 시험 샘플 중의 목적 분석물(제1 분석물) 및 크레아티닌을 측정하기 위한 장치가 기재되어 있으며, 당해 장치는 크레아티닌 검출용 분석 스트립과 목적 분석물 검출용의 다른 분석 스트립을 포함한다. 크레아티닌 농도는 비색적으로 측정될 수 있거나 표지된 크레아티닌 결합 파트너의 특이적 포획으로 측정할 수 있다. 목적 분석물의 농도는 샘플의 농도를 기준으로 하여 보정되며, 이러한 보정은 수동으로 수행되거나 미리 프로그래밍된 반사율 분석기를 사용하여 보정될 수 있다.

제2 분석물의 농도를 기준으로 하여 제1 분석물의 농도 측정을 보정하기 위한 선행 기술 시스템은, 제1 분석물로부터의 색상 반응을 제2 분석물의 색상 반응에 대하여 직접적으로 비율을 결정하는 방식 또는 이러한 색상 반응들을 먼저 농도 값으로 전환시키고 이들 값의 비를 산술적으로 측정하는 방식을 포함한다. 색상 반응들을 직접 비율을 결정하는 것은 색상을 흡광도 또는 반사율과 같은 수치로 전환시켜 성취한다. 준정량적으로 분석물을 측정한 결과를 보정하기 위해 이와 같이 직접 비율을 결정하는 방법은 이러한 방법이 이의 분석 범위 끝까지 이르는 경우 발생하는 평가치들에 있어서의 큰 오차를 고려할 수 없는 한계가 있다. 본 발명은, 직접 비율을 결정하는 방법이 분석 범위 끝까지 이르는 경우에 발생하는 평가치에서의 오차를 고려할 수 있기 때문에, 두 가지 분석물의 비율 결정을 포함하는 준정량적 방법의 정확도를 증가시킨다.

본 발명은 체액 샘플 속의 측정하고자 하는 농도가 제1 분석물의 농도이고, 제2 분석물의 농도가 제1 분석물의 농도와 임상적으로 연관되며, 체액 샘플 속의 제1 분석물의 농도 측정을 보정하기 위해, 제2 분석물에 대한 제1 분석물의 비율을 사용하는, 체액 샘플을 비색 분석하는 개선된 방법을 포함한다. 당해 개선된 방법은,

제1 분석물의 미보정 농도를 측정하는 단계(a),

제1 분석물의 미보정 농도가 제1 분석물에 대하여 유용한 분석 범위 이내인지 또는 이를 벗어나는지의 여부를 측정하는 단계(b), 및

제1 분석물의 미보정 농도가 제1 분석물에 대하여 유용한 범위 이내인 경우, 제2 분석물의 농도를 측정하고, 제1 분석물로부터의 색상 반응 결과를 제2 분석물로부터의 색상 반응 결과로 나누어 제2 분석물에 대한 제1 분석물의 비율을 정하고, 제1 분석물의 미보정 농도를 제2 분석물의 농도로 나누어 보정한 제1 분석물의 농도에 상응하는 산출 수준을 제2 분석물에 대한 제1 분석물의 비율로 정하는 단계(c) 또는

제1 분석물의 미보정 농도가 제1 분석물에 대하여 유용한 분석 범위를 벗어나는 경우, 단계(a)에서 측정한 바와 같은 제1 분석물의 미보정 농도와 제2 분석물의 표준 농도를 기준으로 하여 제2 분석물에 대한 제1 분석물의 비율을 정하는 단계(d)를 포함한다.

본 발명을 수행하는 제1 단계는 제1 분석물의 미보정 농도를 측정하는 것이다. 이것은 효소 반응의 경우에서와 같이 시약을 함유하는 스트립의 일부에 직접적으로 적용하거나, 면역 크로마토그래피 스트립의 경우, 샘플이 모세관 작용에 의해 포획 영역으로 유동할 수 있도록 스트립의 포획 영역으로 유체가 전달되는 샘플 적용 패드에 적용하는 방식에 의해, 시험 스트립에 대해 체액 시험 샘플을 적용하여 성취할 수 있다. 두 가지 경우 중의 어느 경우에나 스트립의 시약과 상호작용하는 시험 체액 속의 분석물에 의해 야기되는 색상 변화는 표준 색상표를 사용하여 수동으로 판독할 수 있으며, 보다 정확한 판독을 위해서는 반사율 측정기를 사용하여 색상을 비교하여 수동으로 판독할 수 있다.

일단 제1 분석물의 미보정 농도를 측정하고, 이러한 농도가 당해 분석물에 대해 유용한 분석 범위내인 경우, 그 다음 단계를 수행한다. 유용한 분석 범위란 용어는 당해 방법으로 정확하게 측정할 수 있는 분석물의 농도를 나타낸다. 예를 들면, 뇨 속의 알부민의 경우, 유용한 분석 범위는, 측정된 분석물의 농도보다 훨씬 더 작을 수 있는, 즉 3배 이상 더 작을 수 있는 측정치 오차를 기준으로 하여, 30 내지 300mg/L이다. 제1 분석물로서의 알부민 측정치가 이러한 범위내인 경우이면 제2 분석물, 전형적으로는 크레아티닌을 측정하고 제2 분석물에 대한 제1 분석물의 비율, 즉 [알부민]/[크레아티닌]을 계산하여 산출 수준을 제공하는데, 당해 수치는 뇨 시험 샘플 속의 알부민의 보정된 농도를 나타낸다.

제1 분석물의 미보정 농도가 유용한 분석 범위를 벗어나는 경우, 예를 들면, 알부민이 30mg/L 미만이거나 300mg/L을 초과하면 제2 분석물의 농도는 측정하지 않지만 그 대신 제2 분석물의 표준 농도를 사용하여 제2 분석물에 대한 제1 분석물의 비율을 측정한다. 표준 농도라는 용어는 전형적으로 건강한 사람에서 수득한 예상되는 생리학적인 값을 나타낸다. 인체는 통상적으로 1일당 1,000mg의 크레아티닌과 1L의 뇨를 배출하기 때문에, 크레아티닌의 경우에서 표준 농도 값은 1,000mg/L이다. 이것은, 측정된 제1 분석물의 농도가 유용한 분석 범위를 벗어난 경우에도 정상적이지 않은, 측정된 제2 분석물의 농도를 사용하는 선행 기술의 비율 결정 방법과 대조적이다. 본 발명의 방법은, 부정확하게 측정된 값이 추가의 오차로서 결과에 부가되도록 하지 않기 때문에, 제1 분석물의 농도 측정의 정확도를 훨씬 더 높힌다.

본 발명을 실행하는 방법은 다음 실시예에 의해 추가로 설명된다.

일반적인 실시예

알부민이 제1 분석물이고, 예를 들면, 신장 유량을 보정하기 위해 농도가 측정되는 크레아티닌이 제2 분석물인 뇨의 분석에 있어서, 뇨 알부민 분석에 대해 유용한 분석 범위인 30 내지 300mg/L 알부민의 소정 범위를 정한다. 알부민 시약이 30 내지 300mg/L에 상당하는 비색 결과를 나타내는 경우, 수득한 색상 비(알부민 색상/크레아티닌 색상)를 사용하여 크레아틴에 대한 알부민의 비율을 정한다. 알부민 시약이 30mg/L 미만이거나 300mg/L를 초과하는 결과를 나타내는 경우, 크레아티닌에 대한 알부민의 비율은, 크레아티닌 시약을 사용하지 않고 표준 크레아틴 농도를 사용하여 정한다. 이렇게 함으로써, 알부민 검정의 유용한 분석 범위를 벗어난 결과들이 사용되는 결과를 방지하며, 분석 범위를 벗어난 결과들은 정확도가 30mg/L 미만이거나 300mg/L를 초과하게 하는 것으로 밝혀졌고, 이는 의학적으로 중요한 정보이다.

알부민 시약이 30 내지 300mg/L의 결과를 나타내는 경우, 색상 비율은 시험 샘플 속의 알부민에 의해 형성된 색상에 상응하는 결과를 크레아티닌 시약에 의해 형성된 색상에 상응하는 결과로 나누어 정한다. 이어서, 색상의 비율의 특정 등급을 적합하게 프로그래밍된 반사율 분광계로 성취할 수 있는 산출 수준에 대입하여, 위에서 정해진 색상 비율을 크레아티닌에 대한 알부민의 농도 비율로 전환시킨다.

알부민 농도가 30mg/L 미만인 경우, 크레아틴 1g당 알부민 30mg을 나타내는 30mg/g 미만의 한계치를 정한다. 건강한 사람에 대한 표준 비율은 30mg/g으로 여겨진다. 20mg/g 또는 10mg/g과 같은 낮은 결과는, 위에서 언급한 한계치가 30mg/g 미만인 모든 값을 나타내기 때문에, 위에서 언급한 내용을 변경시키지 않는다. 반대로, 알부민 농도가 300mg/L를 초과하는 경우, 300mg/g을 초과하는 모든 값을 나타내는 300mg/g을 초과하는 한계치를 정한다. 본원 명세서에서, 30mg/g 미만 300mg/g초과의 결과는 경계값을 벗어난 결과라고 언급한다.

색상은 단지 일정한 흡수 범위, 통상적으로 0.1 초과, 1.0 미만의 흡수 단위 또는 10% 초과, 99% 미만의 흡수율내에서 측정될 수 있다고 일반적으로 공지되어 있다. 이러한 이유 때문에, 분광 광도계와 반사율 측정기는 통상, 이러한 범위를 벗어나는 색상을, 이들 기기가 측정할 수 있는 가장 근접한 색상 범위(the nearest color)로 정하도록 프로그래밍한다. 예를 들면, 7% 반사율을 10% 반사율로 판독하여, 측정에 사용되는 값으로 한다.

샘플 측정을 표 1에 나타내었는데, 이는 본 발명의 방법이 두 가지의 선행 기술 방법에서 수득한 비율보다 알부민 및 크레아티닌 시약에 크게 일치함을 설명한다.

[표 1]

표 1로부터, 경계값을 벗어난 결과를 포함시킨 색상 비율 방법 또는 단순한 분할방법을 사용하는 경우보다는 본 발명의 방법으로 더 큰 분석 정확도를 수득할 수 있음을 판단할 수 있다.

다음 실시예는 육안으로 또는 장치를 사용하여 반사율 또는 흡광도로서 색상을 판독하는 비색계 분석을 전형적으로 포함하는 뇨 스트립 시약을 포함한다. 수득한 색상은 분석물 농도에 직접적으로 비례한다. 알부민의 경우, 알부민 시약의 색상이 더 형성될수록 알부민은 뇨 샘플에 더 많이 존재한다. 색상을 분석물 농도로 전환시키기 위하여, 색상의 특정 등급을 산출 수준으로 정한다. 분석물의 산출 수준은 평가의 전형적인 오차를 나타내는 농도 범위로 정해진다. 이것을 모든 뇨 시약 스트립에 대하여 공통적으로 실행하고 다음 표 2에서 알부민 및 크레아티닌 시약에 대해 나타낸다. 예를 들면, 표준 방법으로 알부민 값이 30mg/L인 임상 샘플은 알부민 스트립 색상에 의해 측정하면 20 내지 39mg/L이지만 여전히 알부민 농도 30mg/L로 정해질 수 있다. 측정치 오차가 작을수록 당해 방법은 더 정량적이 된다.

[표 2]

실시예 1 - 두 가지 분석물의 비율을 결정하는 것에 대한 선행 기술의 방법

두 가지 분석물의 비율을 결정하는 것에 대한 가장 일반적인 방법은 보기 표(look-up table)(하기 표 3)를 사용하는 것이다.

[표 3]

스트립 산출량의 각각의 조합은 예상 비율 산출량으로 정한다. 예상 산출량 비율은 표 4에 나타낸 각각의 스트립의 평균 결과의 분할을 기준으로 한다.

[표 4]

각각의 평균 산출 결과는 예상 범위를 나타내고 예상 범위의 극단값(extreme value)들이 항상 정한 산출량과 일치하지 않기 때문에 당해 방법은 오차를 도입한다. 예를 들면, 30mg/L 알부민의 최저 극단값은 19.9mg/L이고 100mg/dL 크레아티닌의 최고 극단값은 150mg/dL이다. 이들 극단값의 예상 비율 산출량은 30 내지 299mg/g의 정한 범위 내에 있지 않는 13mg/g이다. 이러한 잘못 정한 양은 시약이 표준 방법으로 100% 일치할지라도 부정확한 비율 결과가 될 것이다.

당해 방법에서의 오차는, 스트립 결과가 275개의 임상 샘플의 표준 값과 비교되어 있는 다음의 진실표(truth table)에 나타내었다. 크레아티닌 스트립 산출량에 대한 소정의 알부민을 정하는 임상 샘플의 범위는 예상 농도 범위보다 훨씬 크며, 이는 당해 방법을 부정확하게 하고 비효율적이게 한다. 두 가지 산출량 수준(즉, 30mg/g 미만과 30mg/g 초과)에 대한 정확한 결과의 총 수는 70% [(86+109)/275]이고, 30mg/g을 초과하는 샘플은 185개의 전체 결과 중 76개의 결과에 의해 측정될 수 있는 것과 같이 35%를 초과하는데, 이것은 부정확하게 정해진 것이며, 스트립에 의해서는 30mg/g을 초과하는 것이고 표준 방법에 의해서는 30mg/g 미만인 것이다.

실시예 1의 방법으로 비율을 결정하는 것에 대한 진실표

실시예 2

두 가지 분석물의 비율을 결정하는 것에 대한 선행 기술에서 공지된 기타 통상적인 방법은 각각의 시약에 대한 결과를 검출된 분석물의 농도로 전환시키는 것이다. 이러한 전환은, 농도를 알고 있는 표준 샘플을 미지의 샘플과 비교하고, 두 가지 샘플의 색상 차이에 비례하는 농도를 미지의 샘플에 대입하여 수행한다. 이어서, 분석물 농도들을 분할하여 농도의 비를 수득할 수 있다. 이러한 접근은 정확도가 높은 비색 분석법들에 있어서 매우 공통적이다. 그러나, 당해 방법은 정확도가 낮은 비색 분석법, 예를 들면, 뇨 딥스틱 방법에 사용하면 불리하며, 그 이유는 당해 방법은 희석액이 발생할 수 있어서, 간섭을 증가시키는 오차를 제한하기 위해 시약을 적시에 가해야 하는 용액 방법보다 분석 범위가 더 작기 때문이다. 이러한 정량적 방법은 당면할 것으로 예측되는 농도를 초과하여 확장된 분석 범위를 갖는다.

다음 표 5에 나타낸 바와 같이, 비율을 결정하는 당해 방법의 결과는 실시예 1에 기술한 방법보다 단지 약간만 더 우수하다. 산출량의 두 가지 수준에 대한 정확한 결과의 총 수는 79％()이다.

[표 5]

실시예 2의 방법으로 비율을 결정하는 것에 대한 진실표

실시예 3

본 발명의 비율을 결정하는 것에 대한 방법은 두 가지 시약에 의해 형성된 배합된 색상값을 각각의 시약에 의해 형성된 색상값들로 분할한 결과를 사용한다.

먼저, 제1 분석물에 민감한 시약의 색상을 제1 분석물의 농도로 전환시킨다. 즉, 색상의 특정 등급을 산출 값으로 정한다. 산출 수준을 측정하고, 산출 수준이 유용한 분석 범위를 벗어나는 경우, 이는 제2 분석물의 표준 값을 사용하여 비율을 정한다. 예를 들면, 뇨 1ℓ 당 30mg 미만이거나 300mg를 초과하는 결과를 낳는 알부민 시약은, 크레아티닌 시약 결과를 참고하지 않는 대신에, 1,000mg/ℓ 의 표준 크레아틴 값을 사용하여 산출 비율을 정한다. 30mg/ℓ 미만의 농도의 알부민을 30mg/g 미만의 비율로 정하고, 300mg/ℓ 초과의 농도의 알부민은 300mg/g 초과의 비율로 정한다. 이러한 설정은 평균 크레아티닌 배출량을 1,000mg/L로 추정한 것이다. 제1 분석물의 산출량이 유용한 분석 범위 이내인 경우, 제1 분석물에 민감한 시약으로 형성된 색상값을 제2 분석물에 민감한 시약으로 형성된 색상값으로 나눈다. 이어서, 색상의 비율을 표 6에 나타낸 농도의 비율로 전환시킨다.

[표 6]

*알부민 ㎎ /크레아티닌 g

예를 들면, 80mg/ℓ 의 결과를 나타내는 알부민 시약은 알부민 시약과 크레아틴 시약의 색상 비율을 기준으로 하여 산출 비율을 정하는데, 색상 비율이 1.7인 경우, 산출 비율은 30 내지 300mg/g로 정할 수 있다.

다음 표 7은 당해 방법이 이전에 기술한 방법들보다 더 크게 일치함을 나타낸다. 크게 일치하는 것은, 시약의 산출 범위의 양 말단, 즉 최저 산출 수준 또는 최고 산출 수준을 지나는 양 말단에서 종종 관찰되는 큰 오차를 포함시키지 않았기 때문이다. 분석 범위를 벗어나는 결과들은 오차가 크고, 부정확하다. 비율이 결정되는 모든 시약에 대하여 최저 산출 수준과 최고 산출 수준 중의 어느 하나 또는 둘 다가 제외될 수 있다. 표 7에서, 산출량의 두 가지 수준, 즉 30mg/g 미만 또는 30mg/g 초과 수준에 대한 정확한 결과의 총 수는 95%이다. 이것은 측정한 샘플의 수(149+112)를 샘플의 총수인 275로 나누어서 정확히 측정할 수 있다.

[표 7]

본 발명은, 직접 비율을 결정하는 방법이 분석 범위 끝까지 이르는 경우에 발생하는 평가치에서의 오차를 고려할 수 있기 때문에, 두 가지 분석물의 비율을 결정하는 것을 포함하는 준정량적 방법의 정확도를 증가시킨다.

Claims

알부민 및 크레아티닌 각각에 대한 준정량적 분석법을 사용하여 알부민 및 크레아티닌의 관찰된 농도를 측정하는 단계(a);

알부민 및 크레아티닌의 관찰된 농도가, 한계치 30 mg/L 내지 300 mg/L 이내 인지 또는 이를 벗어나는지의 여부를 결정하는 단계(b);

알부민의 관찰된 농도가 한계치 30 mg/L 내지 300 mg/L를 벗어나는 경우, 관찰된 값에 가장 근접한 30mg 알부민/g 크레아틴 또는 300mg 알부민/g 크레아티닌의 한계치를 관찰된 농도로 정하는 단계(c);

크레아티닌의 관찰된 값이 한계치와 동일한 경우, 이를 제외시켜야할 부적절한 샘플로 간주하는 단계(d); 및

알부민의 관찰된 값이 한계치와 동일한 경우, 알부민의 한계치를 크레아티닌의 표준 임상 농도를 나타내는 값 1,000mg/L로 나누어 비율 값을 정하는 단계(e)를 포함하는, 크레아티닌의 농도를 이용하여 알부민의 농도를 보정하는 알부민 농도에 대한 뇨 샘플의 분석법.