KR100537176B1 - 천연과일을 배지로서 이용하여 사포닌 함유식물의부정근을 대량 증식하는 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 천연과일 등을 배양 영양분으로 이용하여 사포닌을 함유하고 있는 주요식물인 인삼, 산삼, 가시오가피, 두릅의 부정근 대량 증식 방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 인삼, 산삼, 장뢰삼, 가시오가피, 두릅 등의 뿌리, 줄기, 잎 등의 조직을 배양하여 캘루스를 유도하는 단계와 상기의 방법으로 유도된 캘루스에서 부정근을 유도 증식시키는 단계와, 상기의 방법으로 유도된 부정근을 감귤, 사과, 토마토, 당근, 백년초, 포도의 착즙 배지에서 배양하여 양호하게 적응 생육한 부정근을 선발하여 생물반응기 내에서 대량으로 배양하는 것을 특징으로 하며, 식물생장조절제(호르몬)과 화학시약을 전혀 첨가하지 않은 천연배지에서 조직배양에 의한 인삼, 산삼, 장뢰삼, 가시오가피, 두릅 부정근의 대량 증식 및 사포닌 등의 2차 대사산물을 함유한 무공해 기능성 식의약품 원료의 대량생산 방법에 관한 것이다.

Description

천연과일을 배지로서 이용하여 사포닌 함유식물의 부정근을 대량 증식하는 방법{Method for cultivating an adventitious root of saponin contained plant by using natural fruit as a culture medium}

사포닌을 함유하는 식물은 주로 두릅나무과(Araliaceae)에 속하는 식물들로 뿌리부분을 약용으로 이용하는 인삼, 산삼, 장뢰삼과 뿌리 및 줄기부분을 약용으로 이용하는 가시오가피, 두릅 등이 있다.

인삼은 전통 한방생약에 있어서 가장 중요한 강장약으로 이용되고 있으며 각종 질병의 치료 및 병후 회복에 탁월한 효험을 나타낼 뿐만 아니라 생체기관 기능의 항상성유지, 항당뇨작용, 혈압조절작용, 항암작용, 동맥경화 및 고혈압예방, 위장기능강화, 면역기능강화, 항피로 및 항스트레스작용과 항바이러스 작용 등이 보고되어 있다. 이러한 약리적 효능에 관여하는 주요 약효성분으로는 사포닌, 사포게닌, 폴리아세틸렌, 피라진유도체 등이 알려져 있다.

제주도에는 섬가시오가피(탐라가시오가피)가 자생하고 있는데 희귀한 한약재료 중 하나로 면역기능의 증강, 호르몬계 기능의 조절과 촉진, 물질대사의 기능 항진, 심혈관, 중추신경계 질환 개선, 신진대사 기능의 조절, 질병에 대한 저항력 증강, 정신안정, 깊은 수면, 식욕증진, 강장작용, 백혈구 감소증의 개선, 고혈압, 관상동맥경화증의 개선 등의 효능이 있는 것으로 알려져 있으며, 최근에는 신장을 촉진하는 작용도 있는 것으로 보고되었다. 지금까지 밝혀진 가시오갈피의 주성분은 트리테르페노이드계 배당체인 엘루세르사이드 및 사포닌, 스테롤, 쿠마린, 시리진, 세사민, 하이페린 등이다. 특히 가시오가피의 뿌리껍질에는 항지방간변성작용을 하는 아칸토사이드와 시린고사이드, 항염증작용을 하는 아칸토산이 함유되어 있다.

두릅(Aralia elata)은 뿌리를 한약제로, 잎, 줄기는 식용으로 사용되며 해열, 진통, 부종, 두통, 치통, 관절염, 수족불수, 혈관확장, 혈압하강, 최면 등의 효능이 있는 것으로 알려져 있고, 주요성분은 알레인, 아올로사이드 A 및 B, 올레노익산, 사포닌, 쿠르마린 6 엔젤리카, 펩토스트롤 등으로 밝혀져 있다.

그러나, 인삼의 재배에는 장기간이 소요되며 특히 환경적인 영향에 크게 지배받아 배수가 양호하고 서늘한 고지대와 같은 특정지역에서만 재배되는 단점이 있고, 가시오가피는 최근에 다양한 형태의 기능성 식음료가 개발·시판되고 있으나 상당량이 중국, 북한 등지로부터의 수입에 의존하고 있는데, 식물의 기원이나 약리 및 성분이 불분명하므로 국내에서 유통되고 있는 오가피속 식물이 형태학적 특징이 유사해 종간 구별이 어려워 혼돈하는 사례가 적지않다.

그리고 현재 일부 대학, 연구소, 일반기업 등에서 인삼, 산삼, 장뢰삼 등의 조직배양 방법에 의한 부정근배양으로 연중 대량 생산체계를 확립하여 산업화도 되어 있다. 이러한 방법은 각종 영양배지에서의 대량 증식방법으로 천연인삼 및 산삼과 동일한 유효성분을 다량 함유한 조직배양물을 획득하는 것으로 이에 관련된 기술은 이미 일반화되어 있으며 많은 전문학술지에 관련 논문들이 발표 수록되어 있다.

현재까지의 배양방법은 캘루스와 부정근유도 및 생산을 위하여 MS배지, SH배지, 화이트 배지(White 배지) 등을 이용한 화학약품과 2,4-D, NAA, IBA 등의 식물생장조절제와, 부정근 유도에 탁월한 효과가 있는 것으로 알려진 아그로박테리움(Agrobacterium)과 같은 미생물접종방법이 등이 사용됨으로 인해, 생산된 부정근에는 식물생장조절제, 미생물 등이 다소 함유되어 있으므로, 보다 안전한 식품 및 의약품용 목적으로 이용할 수 있는 화학약품과 식물생장조절제 및 미생물이 첨가되지 않은 천연재료를 배지로 이용한 사포닌 함유 식물의 배양방법이 요구되고 있다.

한편, 2000년대에 들어 제주도의 감귤 년간 평균 생산량은 60만톤 이상으로 과잉생산되고 있어 지역산업경제의 몰락을 야기하는 가장 큰 문제가 되고 있으나, 여전히 감귤의 소비형태는 과일 그 자체로 생식하는 생과거래에 크게 의존하고 있는 실정이다. 근래 감귤가공공장이 설립되어 비상품의 부분적인 감귤 농축액으로의 가공이 이루어지고는 있으나, 값싼 수입 오랜지 농축액에 비하여 경쟁력이 떨어져 해마다 적자경영을 하고 있어 실질적인 해결책이 되고 있지 않다.

따라서 과잉생산되는 감귤의 효율적인 가공방법의 개발 및 가공비율을 높여 수급조절은 물론 부가가치 제고에 의한 감귤재배농가의 소득증대를 이끌 수 있는 방안이 절실히 요구되고 있다.

감귤(온주밀감)은 알카리성 식품으로 신진대사를 촉진하며 과당, 포도당, 자당, 맥아당 등과 같은 유리당 형태로 탄수화물이 약 8.5∼8.79%존재하며, 프롤린, 아스파라긴, 글루타민, 페닐알라닌 등의 17가지 아미노산과 말린산, 옥살린산, 푸마린산 등의 유도산이 함유되어 있고 다른 과일과는 달리 과피 부분에는 생체내에서 항산화를 유도하며 항암물질(1998. 5. 14. 일본농수산성 과수시험장·교토부립의과대학 공동연구팀 발표)로 알려진 나린진, 헤스페리딘과 같은 플라보노이드 배당체와 리모노이드 성분이 함유되어 있다. 그리고 K, Ca, Mg, Fe, Mn, Zn, Cu 등의 무기물과 카로티노이드, 비타민 C를 함유하고 있어 식물 세포 및 조직배양에 필요한 탄소원과 질소원은 물론 거의 모든 성분이 존재하며, 특히 플라보노이드와 카로티노이드 성분은 식물세포의 분열과 생장을 촉진하는 생장조절기능이 있는 것으로 알려져 있어 배양 중에 생장조절제를 첨가하지 않는 무공해 청정 무화학약품, 무호르몬배지로 이용이 가능하다.

따라서, 본 발명의 목적은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위한 것으로서, 천연과일을 파쇄 착즙한 후 희석하고 멸균처리한 후, 인삼, 산삼 등의 캘루스 및 부정근을 접종, 배양하는 방법을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 또다른 목적은 상기 천연과일을 파쇄 착즙할 시 생성되는 천연과일 고형잔여물을 배지로 이용하여 인삼, 산삼 등의 부정근을 대량 증식하는 방법을 제공하는 것이다.

상기의 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 사포닌을 함유하고 있는 식물을 멸균 소독한 후, 멸균수로 3회 이상 세척하여 3~5mm씩 절단하는 단계와; 상기 절단된 절편을 MS배지에 치상하여 3000~5000룩스의 광조건하에서 캘루스를 유도한 후, 2~4주 간격으로 계대배양하면서 캘루스를 증식하는 단계와; 상기 유도된 캘루스를 MS배지에 접종하여 부정근을 유도하는 단계와; 상기의 방법으로 유도된 부정근을 천연과일의 착즙 배지에서 배양하는 단계와; 상기 배지에서 양호하게 생육한 부정근을 생물반응기 내에서 대량으로 배양하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 천연과일을 배지로서 이용하여 사포닌 함유식물의 부정근을 대량 증식하는 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 사포닌을 함유하고 있는 식물의 세근 조직을 멸균 소독한 후, 멸균수로 3회 이상 세척하여 5-10mm씩 절단하는 단계와; 상기 절단된 절편을 희석된 천연과일 착즙액이 담겨진 용기들에 소정량씩 넣는 단계와; 상기 용기들을 멸균하고 회전식 진탕배양기에서 배양하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 천연과일을 배지로서 이용하여 사포닌 함유식물의 부정근을 대량 증식하는 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 사포닌을 함유하고 있는 식물의 부정근을 5~7㎜의 크기로 절단하는 단계와; 상기 절단된 절편을 7~10일 동안 암처리하는 단계와; 상기 암처리된 절편을 14~16시간 동안 24~28℃, 1500룩스의 일장처리를 하는 단계와; 천연 과일을 착즙할 시 발생하는 고형잔여물을 이용하여 고형배지를 만드는 단계와; 상기 일장처리된 절편을 상기 고형배지에서 증식하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 천연과일을 배지로서 이용하여 사포닌 함유식물의 부정근을 대량 증식하는 방법을 제공한다.

여기에서, 상기 사포닌을 함유하고 있는 식물은 인삼, 산삼, 가시오가피, 두릅 중에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 천연과일은 감귤, 사과, 포도, 당근, 토마토, 백년초 중에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 한다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해서 상세히 설명하면 다음과 같다.

본 발명에서는 시중 한약방에서 판매하고 있는 6년생 인삼과 80년근의 산삼, 그리고 제주도에 자생하고 있는 가시오가피와 두릅을 구하여 사용하였다.

인삼, 산삼, 가시오가피, 두릅의 각 잎, 줄기, 뿌리조직에서 캘루스를 유도하기 위하여, 상기의 식물 중 어느 하나를 70%에탄올과 1-2% 차아염소산 나트륨용액을 이용하여 멸균 소독한 후 멸균수로 3회 이상 세척한 후 약 3㎜ 정도로 절단한 절편을, 2,4-D(2,4-dichlorophenoxy acetic acid) 1.0㎎/ℓ와 수크로스(sucrose) 30g/ℓ, 한천 0.9%를 첨가한 MS배지에 치상하여 3,000-5,000룩스의 광조건하에서 캘루스를 유도하였고, 2-4주 간격으로 계대배양하면서 캘루스를 증식 시켰다. 유도된 캘루스를 NAA(Naphtahlene acetic acid) 1.0㎎/ℓ을 첨가한 MS배지에 접종하여 부정근을 유도하였다.

실시예 1 : 부정근 증식 최적조건 구명을 위한 감귤 파쇄 착즙액의 희석농도 실험

부정근 증식에 적합한 무농약 재배를 한 감귤 착즙액의 희석 농도를 구명하기 위하여, 감귤 파쇄 착즙액을 증류수를 이용하여 0, 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50%로 희석하여 고압멸균기에서 멸균처리한 후, 생물반응기(20ℓ용)에서 배양 절편체를 포함한 부정근을 약 1cm 길이로 절단한 후 50g씩 접종하여 배양하였다. 이때, 배양조건은 온도 24℃, 공기 주입량은 0.05-0.3vvm로 하였다. 배양 4주후의 부정근의 증식 정도를 비교한 결과를 표 1에 나타내었다.

감귤착즙액 희석 농도가 부정근의 생체 증가율에 미치는 영향

감귤착즙액 희석농도(%)	6년근 인삼(g)	산삼(g)	가시오가피(g)
0	*	*	*
5	55(1.1)**	65(1.3)	70(1.4)
10	65(1.3)	80(1.6)	115(2.3)
15	95(1.9)	110(2.2)	150(3.0)
20	180(3.6)	215(4.3)	225(4.5)
30	245(4.9)	260(5.2)	257(5.1)
40	280(5.6)	245(4.9)	275(5.5)
50	225(4.5)	220(4.4)	243(4.9)

*:배양 2주후부터 대부분 경화되고 4주후에는 유리화현상과 부정배 형태로 변화됨.

**:( )안의 숫자는 배양 4주후의 생체중 증가율을 나타냄.

표 1에서 보는 바와 같이 감귤착즙액 희석농도가 높을 수록 부정근의 생체중은 대체적으로 높게 나타났다. 그러나 감귤 착즙액에는 과피 유래의 미세한 결정체가 있어 40% 이상의 농도에서는 배양과정 중에 이 미세한 결정체들이 부정근과 결합하여 큰 침전물 덩어리를 형성하는 현상이 일어나 작업상의 큰 애로점이 되었다. 따라서 본 실험 결과 인삼, 산삼 등의 감귤착즙액에서의 부정근 증식 배양은 30%로 희석한 조건에서 행하는 것이 바람직하다고 판단되었다.

실시예 2 : 감귤 파쇄 착즙액에서의 인삼, 산삼, 가시오가피, 두릅뿌리의 직접배양

캘루스유도와 부정근유도 과정을 거치지 않고 인삼, 산삼, 가시오가피, 두릅의 세근을 감귤 착즙액 희석 배지에 직접 접종하여 배양하여 보다 간편한 방법으로 부정근 유도 및 사포닌 성분의 함유된 배양액을 효율적으로 생산할 수 있는 과정을 확립하고자 실시하였다.

먼저, 인삼, 산삼, 가시오가피, 두릅의 각 가는뿌리(세근)조직을 70%에탄올과 1-2% 차아염소산 나트륨용액을 이용하여 멸균 소독한 후, 멸균수로 3회 이상 세척하고 약 5-10㎜ 정도로 절단한 절편 10g씩 상기 실시예 1 중 30%의 희석 농도를 이용하여 500ml 삼각플라스크에 배양액 200ml씩 넣어 멸균 후 접종 배양하였다. 이때, 배양조건은 회전식 진탕배양기에서 24℃, 150rpm에서 행하였다.

감귤 착즙액 30% 희석배양액에서의 인삼, 산삼, 가시오가피, 두릅의 세근의 발육정도

식물명칭	세포분열개시일	세근발육개시일	4주후 생체중(g)
인삼	3일후	7일후	46(4.6)*
산삼	4일후	7일후	41(4.1)
가시오가피	7일후	13일후	33(3.3)
두릅	6일후	10일후	35(3.5)

*: ( )의 숫자는 배양 4주후의 생체중 증가율을 나타냄.

배양개시 3-4일 째부터 세근조직의 절단부위에서 세포분열이 일어나는 것이 관찰되었는데(표2 참조), 특히 인삼과 산삼의 세근조직의 경우 배양 7일째를 전후로 세근조직의 측면에서도 왕성한 세포분열이 일어나 소형 캘루스가 형성되고 배양 2주 후부터 세근발육이 왕성해졌다. 그러나, 가시오가피의 경우 세근조직의 절단부위에서 배양초기에 분비되는 사포닌 성분으로 추정되는 특이한 향이 나는 오일성 분비물이 있어 발육이 정지되고 배양액 상층에 부유물이 생기는 현상이 있었는데, 배양 개시 전에 가시오가피의 세근조직을 멸균처리 한 후 멸균수에 침지시켜 하룻밤 4℃에서 보관하여 이 분비물을 충분히 제거시킨 후 배양하면 정상적으로 발육되었다.

실시예 3 : 감귤 파쇄물의 착즙후 잔여물을 이용한 고형배지에서의 부정근의 배양

본 발명의 상기 실시예 1 및 실시예 2에서 사용되는 감귤 착즙과정 중에는 다량의 감귤 고형잔여물이 나오는데, 이 잔여물을 고형배지로 이용하여 인삼, 산삼, 가시오가피의 부정근 배양방법을 확립하고자 본 실험을 수행하였다.

현재 감귤 가공공정 중에 발생하는 고형잔여물은 일부 퇴비용이나 사료용으로 이용하고 있으나 현실성이 떨어져 심각한 산업폐기물 문제를 유발하고 있다.

따라서, 본 발명에서는 감귤 파쇄 착즙시에 발생하는 다량의 감귤 고형 잔여물을 인삼, 산삼, 가시오가피의 부정근 배양용 고형배지로 이용할 수 있는 방법을 확립하고 배양 후 건조과정을 거쳐 감귤이 함유된 인삼, 산삼, 가시오가피를 정과 제조용으로 이용하고자 본 실험을 수행하였다.

감귤착즙과정 중에 발생하는 고형분을 배양병에 넣어 고압멸균기에서 멸균한 후 무균상 내에서 인삼, 산삼, 가시오가피의 부정근을 5mm 정도의 크기로 절단한 후 치상 접종한 후 다양한 조건에서 최적 배양조건을 구명하였다.

배양초기의 광의존성을 알아보기 위하여 암처리를 한 것과 1,500, 3,000룩스(14-16시간)의 광처리를 한 결과, 배양초기에 약 7-10일간 암처리를 한 것이 부정근 분화가 양호하였다.

온도는 각각 18, 24, 28,℃로 달리한 결과 24℃와 28℃의 조건에서 부정근 발생이 양호하였고 비교적 저온인 18℃의 조건에서는 부정근의 약간 비대해지는 효과는 있었으나 부정근 발생 수는 24℃와 28℃의 조건보다 약 1/3 감소하였다.

본 실험의 결과 배양초기에 암처리를 한후 24-28℃조건에서 14-16시간의 1,500룩스의 일장처리를 하여 주면 배양 30-50일 전후하여 감귤 고형분 배지에 부정근이 골고루 자라나 정과 제조용으로 이용하기에 적합한 상태가 되었다.

실시예 4 : 사과, 포도, 토마토, 당근, 백년초의 파쇄 착즙액에서의 부정근의 유도

감귤 이외에 주스용으로 많이 사용되고 있는 사과, 포도, 토마토, 당근, 백년초의 파쇄 착즙액을 배양 배지로 이용한 인삼, 산삼, 가시오가피, 두릅의 부정근 배양방법을 확립하고자 본 실험을 수행하였다.

사과, 포도, 토마토, 당근, 백년초 등을 주방세제를 첨가한 수돗물에 30분간 침지하여 깨끗이 세척한 후, 녹즙기를 이용하여 착즙한 후, 증류수를 이용하여 30%로 희석하고, 500ml 배양병에 각각 200ml씩 첨가한 다음 고압멸균기에서 멸균처리하였다. 각각 10g의 부정근을 접종한 후 24℃, 150rpm의 조건에서 회전식 진탕배양기를 이용하여 행하였다.

다양한 배지원이 부정근 생체중 증가율에 미치는 영향(배양 4주 후 측정)

배지원	인삼(g)	산삼(g)	가시오가피(g)	두릅(g)
사과	23.5	22	19	20.5
포도	31.8	37.5	21	19.7
토마토	27	25	20.5	19.7
당근	18.9	17	13	14.5
백년초	22	19.5	15.5	16

상기 표 3에 나타난 바와 같이, 포도를 배지원으로 한 경우, 인삼과 산삼의 부정근 발육이 대체로 3배 이상 증가였으므로 몇 가지 요인을 개선한다면 산업화가 가능할 것으로 여겨진다.

대체로 감귤 희석액을 이용한 상기 실시예 1에 비해 낮은 증가율을 보였지만, 사과, 포도, 토마토에서는 2배 이상의 부정근 생체중의 증가율을 보였고, 당근과 백년초의 경우는 부정근 발육 정도가 떨어졌다.

그러나, 배양 과정 중의 포도, 당근의 배양액에서는 다른 배지원보다 강한 사포닌향이 나는 것으로 보아, 배양과정 중에 부정근에서 분비되는 사포닌 등의 2차 대사산물이 함유된 기능성 식의약품원료 공급용으로 충분한 가능성이 있는 것으로 추정된다.

본 발명의 천연과일 배지를 이용한 실시예와 비교하기 위해 다음과 같은 대표적인 종래의 배지조성 방법을 실시하였다.

비교예 1 : NAA를 첨가한 MS배지를 이용한 부정근의 증식

3%의 당을 첨가한 MS배지에 각각 1, 3, 5mg/ℓ의 NAA를 첨가한후 pH를 6.0으로 고정하여 멸균처리 후, 인삼, 산삼, 가시오가피, 두릅의 부정근을 접종하여 4주간 배양한 후 부정근의 증가율을 조사하였다.

조사 결과, 3mg/ℓ의 NAA를 첨가한 배지에서 부정근 증가율이 각각 인삼 6.5, 산삼 5.9, 가시오가피 5.7, 두릅 6.2로 가장 양호하였으며, 감귤 착즙액에서 배양한 것보다 부정근이 가늘고 많이 형성되는 것이 특징이였다.

본 발명의 실시예에서는 비교예의 경우보다 부정근의 증식율은 다소 낮았지만, 배양과정 중에 식물생장호르몬이나 화학시약을 전혀 사용하지 않고 무농약재배를 실시한 감귤을 이용하였으므로, 고부가가치성의 무공해, 무화학 청정 기능성식의약품을 대량적으로 생산하여 국민의 보건 향상과 1차 산업 종사자의 소득 향상을 이끌 수 있는 것이 특징이라 할 수 있다.

이상과 같은 본 발명에 의하면, 현재 과잉 생산되고 있는 제주도의 감귤을 효율적으로 이용함과 동시에, 환경, 농약 등에 의한 오염과는 무관한 무공해 천연소재 유래의 무공해 사포닌 함유 식물을 연중 생산할 수 있다.

또한, 본 발명은 천연과일 등의 성분을 이용한 배양방법이므로 배양 중에 분비되는 산삼 등에 의한 2차산물이 축적된 기능성 음료를 대량적으로 생산하여 소비자의 욕구를 충족시킬 수 있는 고부가가치성의 무공해 청정식의약품의 생산이 가능하며, 국민보건 향상과 감귤재배농가의 경제에 일조할 수 있는 것이 특징이다.

Claims (5)

1. 사포닌을 함유하고 있는 식물을 멸균 소독한 후, 멸균수로 3회 이상 세척하여 3~5mm씩 절단하는 단계와;

   상기 절단된 절편을 MS배지에 치상하여 3000~5000룩스의 광조건하에서 캘루스를 유도한 후, 2~4주 간격으로 계대배양하면서 캘루스를 증식하는 단계와;

   상기 유도된 캘루스를 MS배지에 접종하여 부정근을 유도하는 단계와;

   상기의 방법으로 유도된 부정근을 천연과일의 착즙 배지에서 배양하는 단계와;

   상기 배지에서 양호하게 생육한 부정근을 생물반응기 내에서 대량으로 배양하는 단계를 포함하며,

   상기 천연과일은 감귤, 사과, 포도, 당근, 토마토, 백년초 중에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 천연과일을 배지로서 이용하여 사포닌 함유식물의 부정근을 대량 증식하는 방법.
2. 사포닌을 함유하고 있는 식물의 세근 조직을 멸균 소독한 후, 멸균수로 3회 이상 세척하여 5-10mm씩 절단하는 단계와;

   상기 절단된 절편을 희석된 천연과일 착즙액이 담겨진 용기들에 소정량씩 넣는 단계와;

   상기 용기들을 멸균하고 회전식 진탕배양기에서 배양하는 단계를 포함하며,

   상기 천연과일은 감귤, 사과, 포도, 당근, 토마토, 백년초 중에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 천연과일을 배지로서 이용하여 사포닌 함유식물의 부정근을 대량 증식하는 방법.
3. 사포닌을 함유하고 있는 식물의 부정근을 5~7㎜의 크기로 절단하는 단계와;

   상기 절단된 절편을 7~10일 동안 암처리하는 단계와;

   상기 암처리된 절편을 14~16시간 동안 24~28℃, 1500룩스의 일장처리를 하는 단계와;

   천연 과일을 착즙할 시 발생하는 고형잔여물을 이용하여 고형배지를 만드는 단계와;

   상기 일장처리된 절편을 상기 고형배지에서 증식하는 단계를 포함하며,

   상기 천연과일은 감귤, 사과, 포도, 당근, 토마토, 백년초 중에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 천연과일을 배지로서 이용하여 사포닌 함유식물의 부정근을 대량 증식하는 방법.
4. 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서,

   상기 사포닌을 함유하고 있는 식물은 인삼, 산삼, 가시오가피, 두릅 중에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 천연과일을 배지로서 이용하여 사포닌 함유식물의 부정근을 대량 증식하는 방법.
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