CN114958620B - 一种桑黄菌丝体液体发酵培养基及发酵培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种利用三叶青藤蔓制做的桑黄菌丝体液体发酵培养基和桑黄菌丝体液体发酵培养方法。所述桑黄菌丝体液体发酵培养基包括三叶青藤蔓滤液和基础培养基，所述三叶青藤蔓滤液由三叶青藤蔓烘干磨粉后，加水煮沸并过滤所得。本发明合理开发利用三叶青藤蔓，提高利用率对于三叶青产业的发展也具有促进作用。本发明通过对三叶青藤蔓进行处理，使其作为桑黄菌丝体液体发酵配方原料，既可实现变废为宝，又可提高桑黄菌丝体活性成分含量，对桑黄和三叶青两个产业的发展具有重要意义。
Description
技术领域
本发明涉及桑黄培育技术领域，特别是涉及一种桑黄菌丝体液体发酵培养基及发酵培养方法。
背景技术
桑黄在传统中医药中主要用于治疗盗汗、痢疾、血淋、脱肛泻血、脐腹涩痛、闭经、带下、脾虚泄泻等，其隶属担子菌门、伞菌纲、锈革孔菌目、锈革孔菌科、桑黄孔菌属。桑黄含有多糖、三萜、黄酮类、酚类化合物等活性物质具有增强免疫、抗肿瘤、抗炎、抗流感、抗氧化等药理作用。由于对包括腹水瘤、乳腺癌、胃癌在内的多种恶性肿瘤具有良好的抑制作用，桑黄被公认是世界上具有良好抗肿瘤作用的大型真菌之一。桑黄相关产品的功能研发也是科研工作的热点。
申请号为CN202110378959.9发明专利公开了“一种提高桑黄子实体中萜类物质含量的栽培方法及提取方法”，申请号为CN202110378957.X的发明专利公开了“一种提高桑黄子实体中多酚类含量的栽培方法及提取方法”，上述专利均以桑黄子实体为研究对象，通过调整栽培基质配方从而实现有效成分的增加，但由于桑黄子实体人工栽培难度大、周期长、产量低，效率不高。
目前大多数桑黄产品的开发主要以桑黄菌丝体为原料，申请号为CN202110692858.9的发明专利公开了“一种桑黄菌丝体的利用方法”，其利用液体发酵技术制备的桑黄菌丝体，从桑黄菌丝体中提取得到高含量的多糖和黄酮类生物活性成分，从而实现桑黄菌丝体的高效利用。该发明主要是通过优化提取工艺获得多糖和黄酮类生物活性成分，而不是优化液体发酵配方。申请号为CN202011305933.3的发明专利公开了“一种提高桑黄菌丝体产量的液体发酵方法”，其利用麦芽糖、酵母粉、山药、大豆粉、土豆粉、柠檬酸三铵、维生素B等组分进行配方优化从而提高菌丝体产量，但没有说明对有效成分含量的影响。
目前桑黄菌丝体发酵技术较为成熟，提高桑黄菌丝体中活性成分含量对于后续产品的开发具有十分重要的意义，因此研发提高桑黄菌丝体中活性成分含量的配方就显得尤为重要，大部分研究中会在配方中添加一些化学物质，从而促使提高菌丝体产量或者有效成分含量的增加，但成本较高。
桑黄作为一种药用木腐真菌，主要以分解利用森林木材资源，对森林资源消耗巨大，随着栽培规模的增大，木材资源消耗也越加增大，从而对森林及生态环境造成损害。因此利用农业废弃物资源培养桑黄，实现变废为宝，对于保护生态环境和促进桑黄产业可持续发展具有重要意义。三叶青作为一种草质藤本植物,也是我国独一无二且较为稀少的一种中草药,属于葡萄科崖爬藤属。其主要药用部分为块根和果实，在消炎、镇痛等方面具有良好作用。然而三叶青地上部分(藤蔓)的利用率不高，有些用于动物饲料，有些用于开发袋泡茶；绝大部分藤蔓还田腐烂或修剪干枯后焚烧，造成环境污染。因此合理开发利用三叶青藤蔓，提高利用率对于三叶青产业的发展也具有促进作用。利用经适当处理的三叶青藤蔓作为桑黄培养基质进一步提高桑黄品质，对于桑黄和三叶青产业均具有重要意义。
发明内容
本发明针对现有技术中存在的上述不足，提供了一种利用三叶青藤蔓制做的桑黄菌丝体液体发酵培养基及发酵培养方法。
本发明首先提供了一种利用三叶青藤蔓制做的桑黄菌丝体液体发酵培养基，包括三叶青藤蔓滤液和基础培养基，
所述三叶青藤蔓滤液由三叶青藤蔓烘干磨粉后，加水煮沸并过滤所得。
优选的，三叶青藤蔓烘干磨粉后获得的三叶青藤蔓粉末加入水中煮沸，每1000ml水中加入三叶青藤蔓粉末100～150g，加水煮沸并过滤所得的三叶青藤蔓滤液用于配置成1000ml的桑黄菌丝体液体发酵培养基。三叶青藤蔓粉末在水煮时，添加的比例对三叶青藤蔓滤液浓度影响较大，每1000ml水中加入三叶青藤蔓粉末过少，最后得到的滤液浓度较稀，对桑黄菌丝体发酵培养的促进作用就较小；而另一方面，如果每1000ml水中加入三叶青藤蔓粉末过多，最后得到的滤液浓度会较浓稠，但是，滤液的量会较少，很多水分被三叶青藤蔓粉末吸收后，却只能过滤得到少量滤液，不利于三叶青藤蔓的有效利用。同时，添加过多的三叶青藤蔓粉末也会增加配方成本。
优选的，煮沸后维持煮沸30min。
优选的，所述基础培养基为每1000ml桑黄菌丝体液体发酵培养基中含有20g葡萄糖和0.5g磷酸二氢钾。
优选的，用于桑黄菌丝体液体发酵前，先将所述桑黄菌丝体液体发酵培养基分装、灭菌，然后调整pH为7.0～8.0。pH为7.0～8.0的条件下，有利于桑黄菌丝体的生长。
本发明又提供了一种桑黄菌丝体液体发酵培养方法，使用所述桑黄菌丝体液体发酵培养基，然后接种桑黄菌株进行发酵培养。
优选的，发酵培养时在摇床中进行振荡培养，培养温度28℃，转速120r/min，培养周期15d。
优选的，培养时，将所述桑黄菌丝体液体发酵培养基按每瓶200ml分装到300ml三角瓶中；取桑黄菌株的母种，用打孔器取直径为0.5cm菌种块接种于三角瓶中，每瓶接6块菌种块。
本发明合理开发利用三叶青藤蔓，提高利用率对于三叶青产业的发展也具有促进作用。本发明通过对三叶青藤蔓进行处理，使其作为桑黄菌丝体液体发酵配方原料，既可实现变废为宝，又可提高桑黄菌丝体活性成分含量，对桑黄和三叶青两个产业的发展具有重要意义。
具体实施方式
实施例1
一种利用三叶青藤蔓制做的桑黄菌丝体液体发酵配方，实现了菌丝体中活性成分(黄酮、多酚、三萜和多糖)含量的全面提升。
本发明主要从配方组分上进行发明创造，具体步骤如下：
(1)三叶青藤蔓的处理：将修剪下来的三叶青藤蔓50℃烘干粉碎备用。
(2)取1000ml水，加入三叶青藤蔓粉末100g，煮沸(维持30min)，6-8层纱布过滤，取滤液。
(3)在滤液中加入20g葡萄糖，0.5g磷酸二氢钾，定容至1000ml，分装入300ml三角瓶(5个，每个200ml)。
(4)对装有溶液的三角瓶进行高压灭菌，121℃灭菌30min。灭菌完毕后冷却至30℃，调整溶液pH为8.0。
(5)取桑黄菌株的母种，用打孔器取直径为0.5cm菌种块接种于上述液体培养基的三角瓶中，每瓶接6块菌种块。将接种完成的三角瓶置于摇床中进行振荡培养(培养温度28℃，转速120r/min，培养周期15d(天))。
(6)培养15d后，用6层纱布过滤，取菌丝体，用无菌水冲洗3次。将冲洗后的菌丝体移入烘箱，50℃烘干至恒重，再用研钵将其研磨成粉末，备用。
实施例2
一种利用三叶青藤蔓制做的桑黄菌丝体液体发酵配方，实现了菌丝体中活性成分(黄酮、多酚、三萜和多糖)含量的全面提升。
本发明主要从配方组分上进行发明创造，具体步骤如下：
(1)三叶青藤蔓的处理：将修剪下来的三叶青藤蔓60℃烘干粉碎备用。
(2)取1000ml水，加入三叶青藤蔓粉末150g，煮沸(维持30min)，6-8层纱布过滤，取滤液。
(3)在滤液中加入20g葡萄糖，0.5g磷酸二氢钾，定容至1000ml，分装入300ml三角瓶(5个，每个200ml)。
(4)对装有溶液的三角瓶进行高压灭菌，121℃灭菌30min。灭菌完毕后冷却至30℃，调整溶液pH为7.0。
(5)取桑黄菌株的母种，用打孔器取直径为0.5cm菌种块接种于上述液体培养基的三角瓶中，每瓶接6块菌种块。将接种完成的三角瓶置于摇床中进行振荡培养(培养温度28℃，转速120r/min，培养周期15d(天))。
(6)培养15d后，用6层纱布过滤，取菌丝体，用无菌水冲洗3次。将冲洗后的菌丝体移入烘箱，60℃烘干至恒重，再用研钵将其研磨成粉末，备用。
实施例3
一种利用三叶青藤蔓制做的桑黄菌丝体液体发酵配方，实现了菌丝体中活性成分(黄酮、多酚、三萜和多糖)含量的全面提升。
本发明主要从配方组分上进行发明创造，具体步骤如下：
(1)三叶青藤蔓的处理：将修剪下来的三叶青藤蔓50-60℃烘干粉碎备用。
(2)取1000ml水，加入三叶青藤蔓粉末200g，煮沸(维持30min)，6-8层纱布过滤，取滤液，但在三叶青藤蔓粉末加入200g/1000ml水的条件下，水的比例太少，大部分水被粉末吸收，过滤后的滤液量太少。
对比例1
对照配方为PDA液体培养基，具体配置方法如下：取1000ml，加入200g新鲜去皮的土豆片，煮至土豆片熟而不烂，4-6层纱布过滤，取滤液；加入20g葡萄糖，0.5g磷酸二氢钾，定容至1000ml，分装入300ml三角瓶(5个，每个200ml)；再按上述4-6的步骤进行操作。
检测例1
将实施例和对比例配方培养的菌丝体样品开展活性成分检测试验，其中黄酮检测按SN_T 4592-2016方法进行，多酚检测按T/AHFIA 005-2018方法进行，三萜检测按NY_T3676-2020方法进行，多糖含量检测按NY_T 1676-2008方法进行。
表1不同配方桑黄菌丝体样品活性成分含量比较
检测结果如表1所示，实施例1中培养得到的桑黄菌丝体样品中，4种活性成分含量均比对照(对比例1)增加，尤其是三萜含量增加了108.96％，黄酮和多酚含量也分别增加了48.98％和35.56％，多糖含量增加3.38％，因此，利用三叶青藤蔓制成的桑黄菌丝体液体配方具有很好的作用，为桑黄菌丝体后续产品的开发提供了高品质的菌丝体原料，也提供了一条三叶青藤蔓的高值化利用方法。
实施例2中培养得到的桑黄菌丝体样品中，4种活性成分含量同样均比对比例1增加，尤其是三萜含量增加了123.88％，黄酮和多酚含量也分别增加了44.90％和37.78％，多糖含量增加5.46％，因此，进一步证实了利用三叶青藤蔓制成的桑黄菌丝体液体配方具有很好的作用，为桑黄菌丝体后续产品的开发提供了高品质的菌丝体原料，也提供了一种三叶青藤蔓的高值化利用方法。
Claims (5)
1.一种桑黄菌丝体液体发酵培养方法，其特征在于，使用桑黄菌丝体液体发酵培养基，然后接种桑黄菌株进行发酵培养，
所述桑黄菌丝体液体发酵培养基为利用三叶青藤蔓制做的桑黄菌丝体液体发酵培养基，包括三叶青藤蔓滤液和基础培养基，所述三叶青藤蔓滤液由三叶青藤蔓烘干磨粉后，加水煮沸并过滤所得，
三叶青藤蔓烘干磨粉后获得的三叶青藤蔓粉末加入水中煮沸，每1000ml水中加入三叶青藤蔓粉末100～150g，加水煮沸并过滤所得的三叶青藤蔓滤液用于配置成1000ml的桑黄菌丝体液体发酵培养基，
用于桑黄菌丝体液体发酵前，先将所述桑黄菌丝体液体发酵培养基分装、灭菌，然后调整pH为7.0～8.0。
2.根据权利要求1所述的桑黄菌丝体液体发酵培养方法，其特征在于，发酵培养时在摇床中进行振荡培养，培养温度28℃，转速120r/min，培养周期15d。
3.根据权利要求1所述的桑黄菌丝体液体发酵培养方法，其特征在于，培养时，将所述桑黄菌丝体液体发酵培养基按每瓶200ml分装到300ml三角瓶中；取桑黄菌株的母种，用打孔器取直径为0.5cm菌种块接种于三角瓶中，每瓶接6块菌种块。
4.根据权利要求1所述的桑黄菌丝体液体发酵培养方法，其特征在于，所述桑黄菌丝体液体发酵培养基制做时，煮沸后维持煮沸30min。
5.根据权利要求1所述的桑黄菌丝体液体发酵培养方法，其特征在于，所述基础培养基为每1000ml桑黄菌丝体液体发酵培养基中含有20g葡萄糖和0.5g磷酸二氢钾。
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