KR20030086749A - 가시오가피의 성분이 함유된 버섯 및 이의 제조 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 가시오가피의 유효성분을 함유한 버섯에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 가시오가피 캘러스 세포 배양액 또는 가시오가피나무(Acanthopanax spp)의 자실체 (잎, 줄기, 열매, 뿌리)를 분쇄한 후 버섯재배 배지에 혼합하고, 혼합물에 버섯균을 접종 배양함을 특징으로 하는, 가시오가피의 유효성분을 함유한 버섯의 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따라 제조된 버섯은 가시오가피의 유효성분인 리그닌 배당체인 아칸소사이드 (Acanthoside B, D), 면역성을 높혀주는 수용성 다당체, 치사노 사이드(Chiisanoside), 지링긴(Sylingin), 쿠마린 배당체 성분 등을 함유함에 따라 건강 식품으로서의 버섯의 가치를 배가시킬수 있다.

Description

가시오가피의 성분이 함유된 버섯 및 이의 제조 방법{Mushroom Containing The Ingredient Of Siberian Ginseng And Process For The Preparation Thereof}

본 발명은 가시오가피 성분을 함유한 버섯 및 이의 제조 방법에 관한 것이다.

가시오갈피는 두릅나무과 오갈피속에 속하며 일명 "시베리아 인삼" 으로 더 잘 알려져 있고, 자생지는 극동아시아 북위 40∼50˚지역, 러시아 우수리강, 중국 흑룡 강성 유역, 일본 북해도, 우리 나라의 고산지대(1,100m이상)에 분포하고 있다. 타 오갈피속과 구별되는 가장 큰 형태적 차이는 줄기에 0.5∼0.8㎝되는 가늘고 긴 바늘모양의 가시가 지면을 향하여 밀생하고 있는데, 2년지 이상에서는 가시가 탈락되기도 한다. 꽃은 6월에 피며 수술은 장화사형과 단화사형이 있고 과실은 9월경에 흑색으로 익는다. 근피와 수피에서 유효성분으로 엘 루데로사이드 B, E등이 추출되었으며, 근육강화, 지구력 향상, 피로회복, 강장, 강정, 신경통, 중풍, 당뇨병, 고혈압, 저혈압, 건만증, 불면증, 및 류마티스 치료에 탁월한 효과가 인정되어 건강음료 및 약제원료로 개발되어 시판되고 있다.

하지만, 가시오가피는 번식 및 재배의 어려움으로 인하여 자연산을 채취하여 원료로 사용되고 있고, 가시오가피는 주로 중국 및 러시아에서 밀수품으로 거래되기도 하며 효능면에서는 국산이 타국가에 비해 우수함이 독일 와그너 박사의 논문 (Phytomedicine Vol. 1. 1994)에서 입증되었다. 이와 같은 문제점을 극복하기 위해서 최근에 세포배양에 의한 유용물질의 생산 기술을 이용하는 연구가 활발히 진행되고 있다. 이와 같은 미분화 세포단계의 가시오가피 세포배양 연구와 더불어 분화단계의 모상근(hairy root) 배양 연구가 아칸소사이드 생산 연구를 위해 진행되었다.

개략하면, 기내배양(in vitro culture) 기술을 이용하여 가시오가피종자로부터 아칸소사이드(Acanthoside)를 다량 함유한 캘러스를 유도하고 이를 유기용매로 추출하여 과립, 정제, 드링크제 등 식·의료품에 이용하였다.

이와 같이 가시오가피 유효성분의 생산성을 증가시키기 위한 가시오가피세포 배양법에 대해서는 많은 연구가 이루어져 있으나, 전세계적으로 급증하고 있는 가시오가피류의 수요를 위해서는 현재의 배양법으로는 그 수요를 충족할 수 없다. 이에, 가시오가피의 유효성분을 공급할 수 있는 방안이 계속적으로 요구되고 있다.

본 발명자들은 미분화된 가시오가피 세포(캘러스) 배양액 또는 가시오가피 자실체 (잎, 줄기, 열매, 뿌리)를 분쇄 한 후 버섯 재배 배지에 첨가하여 버섯균을 접종 배양함으로써 아칸소사이드를 포함한 다수의 가시오가피 유효성분이 함유되는 버섯을 수득하였다.

따라서, 한 가지 관점으로서 본 발명은 가시오가피의 유효성분을 함유함을 특징으로 하는 버섯을 제공한다.

다른 관점으로서, 본 발명은 가시오가피 캘러스 세포 배양액을 버섯재배 배지에 혼합하고, 혼합물에 버섯균을 접종 배양함을 특징으로 하는, 가시오가피의 유효성분을 함유한 버섯의 제조 방법을 제공한다.

도 1은 본 발명의 방법에 따라 재배 생산된 가시오가피의 유효성분을 함유한 새송이 버섯 사진이다.

도 2는 본 발명의 방법에 따라 재배 생산된 가시오가피의 유효성분을 함유한 팽이 버섯 사진이다.

도 3은 본 발명의 방법에 따라 재배 생산된 가시오가피의 유효성분을 함유한 느타리 버섯 사진이다.

도 4는 본 발명에 사용된 가시오가피의 유효성분 아칸소사이드 D의 구조식이다.

도 5는 본 발명에 사용된 가시오가피의 유효성분 치사노사이드의 구조식이다.

가시오가피 캘러스 세포 배양액

가시오가피 자실체로부터 미분화된 세포(캘러스)를 유도하는 방법은 문헌에공지된 방법에 따라 실시할 수 있다(Yoo, B.S. et al., Korean J. Biotechnol.Bioeng. vol.16, No.6, 620-625, 2001). 간략히 설명하면, 표면살균을 거친 가시오가피 자실체의 절편을 식물생장조절제를 첨가한 MS 기본배지 (Murashige,T. and F.Skoog, 1962, Physiol. Plant, 15, 473-497)에서 유지 배양하는 방법을 사용할 수 있다. MS 기본 배지는 탄소원으로서 수크로스 3(pH 5.8)를 함유하고 있다. 여기에 캘러스 유도를 위한 식물생장조절제로서 2,4-D(2,4-디클로로페녹시아세트산)과 키네틴을 각각 1 내지 5ppm 및 0.1 내지 1ppm의 농도 범위로 사용할 수 있다. 특히, 2,4-D(2,4-디클로로페녹시아세트산)와 키네틴을 각각 1ppm과 0.1ppm의 농도로 사용하거나 2,4-D(2,4-디클로로페녹시아세트산)를 단독으로 3ppm의 농도로 사용하는 것이 캘러스 유도율면에서 바람직하다. 배양 조건으로 25℃ 온도의 암소에서 10∼15일정도 유지하면 캘러스를 얻을 수 있다.

이와 같이 유도된 가시오가피 캘러스는 그 다음 탄소원으로서 슈크로스를 3의 농도로 함유한 MS 액체배지(pH 5.8)에 접종하여 현탁배양한다. 현탁배양은 일반적으로 캘러스 유도시와 마찬가지로 25℃의 암소에서 실시하며, 10일간격으로 계대배양하여 유지하였다.

회분 배양에는 대수성장기 상태의 계대배양물을 사용한다. 즉, 계대배양물을 감압여과하여 현탁배양 배지는 제거하고 여과된 캘러스 세포는 고르게 섞어준 후 회분배양에 사용한다. 회분배양에도 전술한 MS 기본배지를 사용할 수 있다. 회분배양시 접종량은 15(w/v) 정도가 적당하고, 배양조건으로는 25℃의 온도하에120rpm으로 진탕하면서 13일 내지 14일간 암소에서 배양한다.

버섯 및 배지

식품으로서의 버섯은 독특한 향기와 맛, 영양가치 때문에 누구에게나 친근하게 널리 상용되고 있다. 식용버섯의 조성분은 수분이 70∼95%이며 5∼30%가 유기 및 무기성분으로 되어 있다. 건물(乾物) 중에는 15∼30%의 단백질, 2∼10%의 지방과 50% 내외의 가용성 무질소물이 들어 있고, 5∼10%의 조섬유와 칼륨·인산·석회 등의 무기질이 함유되어 있다. 일반적으로 맛이 좋은 식용버섯에는 아미노산·마니트·트레하로오스 등이 많이 들어 있으며 비타민 B₂와 D와 같은 여러 비타민류와 효소가 존재하고 있어 보건식품으로, 그리고 일반 채소에 못지 않은 알칼리식품으로 인정받고 있다.

식용버섯의 종류로는 목이·흰목이·싸리버섯·꾀꼬리버섯·능이·갓버섯·송이·표고·느타리·팽나무버섯·맛버섯·비늘버섯·배젖버섯·기와버섯 등이며 현재 배양종균에 의한 인공재배가 되고 있는 식용버섯으로는 느타리·팽이·표고·새송이(큰느타리,맛송이)·버들송이·양송이·만가닥버섯 등이다. 재배방식은 버섯종류마다 조금씩 차이가 있으나 방법론적으로는 주로 원목재배, 균상재배, 상자재배, 봉지재배(포트재배), 병재배 등에 의해 이루어지고 있다.

상기 버섯 종류 및 공지된 재배방식 모두는 본 발명에 적용된다. 그러나, 재배사 안에서 톱밥을 주원료로 한 상자재배, 봉지(포트)재배 그리고 병재배(甁栽培) 방식이 바람직하다.

본 발명에 있어서 버섯 종균 배양용 배지는 버섯의 종류에 따라 달라질 수 있으나, 기본적으로 톱밥 배지와 영양제로서 미강을 포함하며 배지 수분을 62% 내지 65%로 조절한다.

예를 들어, 새송이 버섯인 경우에는 포플러나 버드나무 등의 활엽수의 톱밥과 첨가제(미강과 밀기울)를 8:2의 비율로 사용하고, 팽이 버섯인 경우에는 미송톱밥과 미강을 3:1 비율로 사용하는 것이 최상이며, 필요한 경우에는 증량제로서 밀기울이나 왕겨 등을 사용할 수 있고, 활엽수 나무의 톱밥은 그다지 적당치 않다. 각각의 경우에 있어서, 미강과 밀기울은 생육에 필요한 양분이 전부 함유되어 있어 단기 생육의 재배용 첨가제로서 결함이 없는 재료이다. 미강은 양에 맞추어 구입해 신선한 것을 사용하는 것이 좋다. 느타리 버섯의 경우에는 미루나무 톱밥, 비트펄프, 면실박을 5:3:2의 부피비로 배합기에서 혼합한 것을 사용할 수 있다.

본 발명에서는 배지의 수분을 62 내지 67% 정도, 바람직하게는 65 내지 67% 물과 가시오가피 자실체 (잎, 줄기, 열매, 뿌리) 분쇄물을 5(w/v)를 첨가하거나, 물을 첨가하지 않고 동량의 가시오가피 캘러스 세포 배양액과 배양세포를 사용한다. 입병이 완료된 배지는 상압 살균기로 105℃에서 4시간 정도 살균하며, 살균과정을 통해서 가시오가피 캘러스 또는 가시오가피 자실체 (잎, 줄기, 열매, 뿌리) 분쇄물은 파괴되며 이때 유효성분들은 버섯배지로 나오게 되어 버섯균이 이용가능하게 된다. 살균이 완료된 즉시 배지를 18℃ 이하가 되도록 급속하게 냉각시킨다. 살균은 버섯재배에 있어서 오염 방지를 위한 기본적인 작업이다. 살균솥은 양쪽문을 사용하며 냉각시 배기구에 필터를 설치하여 배기 공기의 역류로 인한 오염을 방지해야 한다. 살균된 배지는 최단시간내에 온도를 급강하시켜야 한다. 이는 온도가 서서히 내려감으로 인해 배지가 부숙되는 것을 막기 위해서이다. 식은 배지에다가 무균실에서 무균적으로 균을 접종한다. 접종량은 10g/병, 청정도 약 1000 크라스 정도로 매우 청결하게 하여 오염을 방지해야 좋은 버섯을 생산할 수 있다.

각 버섯의 재배 방법은 당업자에게 잘 알려진 방법에 따라 실시할 수 있다. 예를 들어, 냉각이 완료된 버섯 배지에 버섯 톱밥 종균을 구멍과 표면에 덮일 수 있을 정도로 병당 10g 정도 잘게 갈아서 접종한다. 접종 후 배지를 18℃, 상대습도 65 내지 70%, 암조건에서 25 내지 30일 정도 배양한다. 배양용기 전체가 버섯균사로 만연하게 되면 뚜껑을 열고 배지를 재배사로 옮겨서 15℃, 습도 85 내지 90%, CO2 농도 1500ppm 이하, 조도 200Lux 조건에서 5 내지 7일정도 지나면 배지 표면에 어린 버섯(갓 지름 1 내지 2㎜)이 발생하게 된다. 어린 버섯이 발생되면 재배사 환경을 15℃, 습도 80 내지 85%, CO2 농도 1000ppm 이하, 조도 200Lux에서 4 내지 5일간 생육시킨 후 수확한다.

가시오가피 성분이 함유된 버섯 생산

본 발명에 따른 가시오가피 성분을 함유한 버섯은 전형적으로 다음의 공정에 따라 생산할 수 있다.

1. 가시오가피 캘러스(callus)유도

캘러스 유도를 위한 기본 배양 조건은 MS 기본 배지를 사용하며 이에 탄소원으로 수크로오스 3%, pH 5.8, 아가 0.7%의 고체배지에 살균된 가시오가피 절편을 무균상태로 유지하여 치상한다. 이때 식물생장조절제로서 2,4-D를 1ppm, 키네틴을 0.1ppm 사용한다. 그리고, 25℃, 암 조건으로 유지하여 배양한다.

2. 현탁배양(Suspension Culture)

유도된 가시오가피 캘러스를 MS 기본배지에 탄소원으로 수크로오스 3%, pH 5.8인 액체배지에 접종하여 500㎖ 플라스크에 200㎖ 배양부피를 유지하며 10일 간격으로 25℃, 암 조건하에서 계대배양한다.

3. 회분배양(Batch Culture)

회분배양에서 대수성장기(exponential phase)에 있는 캘러스 세포의 배지를 진공펌프로 제거를 하고 남은 세포를 잘 섞어서 신선한 배지 40㎖이 들어있는 125㎖ 삼각플라스크에 15%(w/v)의 접종량으로 접종하여 25℃, 진탕기 회전속도 120rpm에서 13~14일간 암 조건으로 배양시킨다.

4. 가시오가피 자실체

수확된 자실체를 잎, 줄기, 열매, 뿌리로 나누고 분쇄기를 이용하여 구운 가루로 분쇄한다.

5. 버섯재배 배지 제조

실험에 사용된 버섯재배 배지는 톱밥배지로 미루나무 톱밥과 영양제로서 미강(쌀겨)을 부피비율 8:2로 잘 혼합한 후 배지수분을 62~65%정도로 조절하였다. 수분조절을 위해 물과 가시오가피 자실체 분쇄물을 첨가하거나, 회분배양 한 가시오가피 캘러스 세포 배양액을 사용한다. 재배 용기는 1000㏄, 지름 65㎜ PP병을 사용하고 스펀지가 필터로 달려있는 경우 뚜껑을 사용한다. 수분조절이 된 버섯재배 배지를 1100㏄ PP병에 650g 정도 입병을 한 후 배지중심부위에 직경 13㎜ 봉으로 배지바닥까지 구멍을 뚫어준 후 다지고 구멍을 닫는다. 입병이 완료된 배지는 상압 살균기로 105℃에서 4시간 정도 살균하며, 살균이 완료된 즉시 배지를 18℃이하가 되도록 급속하게 냉각시킨다.

6. 버섯 종균 접종/배양

냉각이 완료된 버섯재배 배지에 버섯톱밥종균을 구멍과 표면에 덮일 수 있을 정도로 병당 10g정도 잘게 갈아서 접종을 한다. 접종 후 배지를 18℃, 상대습도 65∼70%, 암조건에서 25∼30일 정도 배양을 시킨다. 새송이 버섯의 경우에는 후배양 기간을 포함하여 45∼50일 정도 배양시킨다.

7. 균긁기/수분보충

배양이 완료된 배지는 배지표면의 노화된 균사의 제거와 발이유도를 위한 기계적인 자극을 주기 위해 병 뚜껑을 제거하고 입구로부터 약 2cm 정도의 깊이로 칼날로 깍아서 균사의 재생을 유도하며 배양도중 손실된 수분의 보충을 위해 노즐을통해서 병당 20∼30cc 정도의 가시오갈피 배양액이나 가시오갈피 자실체 분말 및 추출액을 물대신 보충해준다.

8. 발이유기/생육

배양용기 전체가 버섯균사로 만연하게 되면 뚜껑을 열고 배지를 재배사로 옮겨서 15℃, 습도 85∼90%, CO2 농도 1500ppm 이하, 조도 200Lux 조건에서 5∼7일정도 지나면 배지 표면에 어린버섯(갓 지름 1∼2㎜)이 발생하게 된다. 어린버섯의 발생이 되면 재배사 환경을 15℃, 습도 80~85%, CO2 농도 1000ppm이하, 조도 200Lux에서 4~5일간 생육시킨 후 수확한다. 상기 방법은 느타리버섯의 재배방법이며 새송이 버섯의 경우에는 같은 환경조건에서 생육기간이 15∼18일정도 소요된다. 팽이버섯은 발이유기 후 고른생장을 위한 억제작업(온도 4∼5℃, 습도 90%, 이산화탄소 농도 1000ppm 이하)에서 7∼10일간 수행 후 생육과정(온도 5∼8℃, 습도 90%, 이산화탄소 농도 1000ppm 이하)을 거쳐 수확한다.

버섯에 함유된 가시오가피의 성분 및 분석

인삼과 비견되어, 서구권에서는 시베리아 인삼(Siberian Ginseng)이란 이름으로 널리 알려진 가시오가피는 생약 재제를 연구하는 많은 약학자들의 관심을 불러 일으키고 있으며 아칸소사이드(Acanthoside) 등의 약리 성분에 대한 연구가 지속되고 있다.

가시오갈피에는 많은 종류의 오갈피 배당체와 비타민, 미네랄이 풍부하여 범적응원이 있는 약재로 주목받고 있다. 한편 오갈피의 약리작용에 대하여 1960년대부터 과학적인 연구가 시작되어 1970년대에는 많은 유효성분이 규명되었고, 그후 생물학적 효능도 입증되었다. 그들의 유효성분은 리그닌 배당체인 아칸소사이드 (Acanthoside B, D)가 있고 면역성을 높혀주는 수용성 다당체가 분리되었다. 잎에는 지사노 사이드(Chiisanoside)가 있어 약리적 기능을 갖고 있으며 뿌리에서는 오가피 배당체 뿐만 아니라 지링긴(Sylingin), 쿠마린 배당체 등이 분리되어 있다. 이들 성분들은 생체의 기능에 대해서 다각적으로 활성을 부여하기 때문에 범적응적(凡適應的)인 활성(Adaptogenic activity)이 있어 양생효과, 질병예방, 자가면역적인 질환 등에 대해서 그 효과가 광범위하다.

버섯을 수확한 후 버섯내 아칸소사이드 함량을 조사하여 가시오가피성분의 함유 여부를 판단할 수 있다. 아칸소사이드 함량의 분석은 문헌(Yoo, B.S. et al., 2001, 상기 문헌 설명 참조)에 기재된 방법에 따라 실시할 수 있다. 개략하면, 동결건조한 버섯에 수포화 n-부탄올을 첨가하여 초음파 분쇄하고 원심분리 후 상징액만을 회수한다. 농축기로서 Turbo Vap(등록상표명) II(Zymark, USA)에 의해 회수된 상징액을 농축한 다음, 메탄올로 정용하여 HPLC 분석에 사용한다. 가시오가피에는 아칸소사이드 D와 치사노사이드가 가장 높은 함량으로 존재하므로 본 발명에 있어서 이들을 분석 대상으로 선정할 수 있다. 분석조건은 문헌(Samukawa K. et al., 1995, Simultaneous analysis of saponins in Ginseng radix by high performance liquid chromatography, Chem. Pharm. Bull., 43(1), 137-141)에 제시된 방법을 참고하여 최적화할 수 있다. 이외에도 가시오가피의 다른 유효성분을분석 대상으로 선정하여 병입 여부를 조사할 수도 있다.

전술한 바와 같이, 본 발명은 가시오가피의 캘러스 배양액과 자실체 분쇄물을 사용하여 가시오가피의 성분을 함유한 버섯을 재배하는 방법에 관한 것으로서, 실시예를 통해 보다 상세하게 설명하면 다음과 같다.

하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명은 다음 실시예에 의해 한정되지 않는다.

실시예 1

캘러스 유도

본 실험에 사용된 가시오가피는 지리산 일대에서 채취된 가시오가피를 세척후 락스희석액(20%)에 20분간 침전시킨 후 알콜수용액(70%)에 침전하여 표면살균을 하였으며 표면살균 후 멸균수에 시료를 담구어서 소독액을 세척한다. 멸균수로 세척한 시료를 얇게 썰어서 절편을 만들어 무균 상태하에서 2,4-D 1ppm과 키네틴 0.1ppm 및 한천 0.7%를 첨가한 MS 기본 배지에 치상하였다. 그 다음, 25℃의 암소에서 유지하여 캘러스를 유도하였다.

실시예 2

캘러스 배양

실시예 1에 기재된 바와 같이 유도된 가시오가피 캘러스를 탄소원으로서 슈크로스 3%를 사용한 MS 기본 배지에 접종하여 현탁배양하였다. 현탁배양은 500㎖삼각플라스크에서 200㎖ 배양 부피를 유지하면서 10일 간격으로 25℃ 암소에서 계대배양하여 유지하였다. 최종 계대배양시 대수성장기까지 증식시킨 현탁세포 배양액을 무균대에서 와트만 여지 1번이 들어있는 멸균 깔대기를 통해 감압여과하여 현탁세포의 배지는 제거하고 여과되고 남은 세포를 수거하였다. 이 세포는 고르게 섞어준 후 탄소원으로서 슈크로스 3%를 사용한 MS 기본 배지 40㎖가 들어있는 125㎖ 삼각플라스크에 15%(w/v)의 접종량으로 접종하였다. 그 다음, 25℃의 암소에서 13 내지 14일간 120rpm으로 진탕시켜 회분배양하였다.

실시예 3

새송이 버섯 재배 및 가시오가피의 유효성분 분석

포플러 또는 버드나무 톱밥과 첨가제(미강 및 밀기울)를 8:2로 잘 혼합하고, 약 3 내지 6개월간 야적하여 호기성 발효를 시켜 사용하였다. 물과 가시오가피 자실체 분쇄물을 함께 혼합하거나, 실시예 2에서 얻은 가시오가피 캘러스 세포배양액과 배양세포를 사용하여 물주기를 실시하여 배지수분 함량이 65%로 균일하게 유지되도록 하였다.

이와 같이 준비된 가시오가피 배지를 각각 1100cc, 지름 65㎜의 PP병에 스펀지가 필터로 달려있는 뚜껑이 있는 재배 용기에 650g 정도 입병을 한 후 배지 중심부위에 직경 13㎜의 봉으로 배지 바닥까지 구멍을 뚫어준 후 다지고 뚜껑을 닫았다. 입병이 완료된 배지는 상압 살균기로 105℃에서 4시간 정도 살균하며, 살균이 완료된 즉시 배지를 18℃ 이하가 되도록 급속하게 냉각시켰다.

냉각이 완료된 버섯 배지에 새송이 버섯 톱밥 종균(품종:새송이 2호,포천 종균배양소 구입)을 구멍과 표면에 덮일 수 있을 정도로 병당 10g 정도 잘게 갈아서 접종하였다. 접종 후 배지를 18℃ 내지 20℃, 상대습도 65 내지 68%, CO2 농도 1000ppm 이하로 유지되는 배양실에 옮겨 배양하였다. 자실체 발생을 위한 생식생장으로 전환시키기 위하여 노화된 접종원을 제거하면서 약 1 내지 2㎜ 정도 표면 톱밥을 긁어내었다. 발이 유기를 원활히 유도하기 위하여 온도 14±1℃, 상대습도 약 90% 이상, CO2 농도 1500ppm 이하, 조도 100 내지 200Lux 조건에서 병을 거꾸로 세워두거나 병입구를 물에 적신 부직포나 신문지로 덮어두었다. 발이 유기후 온도 13 내지 14℃, 습도 약 85% 전후, CO2 농도 1500ppm 이하, 조도 100 내지 200Lux 조건에서 자실체를 생육시켰다. 개체간의 크기가 균일하지 못하므로 자실체의 길이가 5 내지 10㎝, 갓의 직경이 2 내지 4㎝일 때 수확하였다(도 1).

수확한 새송이 버섯을 무작위로 선정하여 동결건조한 후 수포화 n-부탄올을 첨가하여 초음파 분쇄하고 원심분리 후 상징액만을 회수하였다. 회수된 상징액을 농축기로서 Turbo Vap(등록상표명) II(Zymark, USA)에 의해 농축한 다음, 메탄올로 정용하여 HPLC 분석을 실시하였다. UV 검출기(UV3000, Spectra SYSTEM, USA)를 사용하고 파장 203nm에서 역상 컬럼인 C18(UG, 120Å, 5㎛, 4.6㎜x250㎜. Shiseido, Japan)을 이용하여 컬럼 온도 55℃를 유지하며 다음과 같은 이동상 용매와 하기 표 1에 기술된 유속 조건으로 분석하였다:

용매 A → MeCN:H2O 10:90(v/v)

용매 B → MeCN:H2O 20:80(v/v)

표 1.

시간(분)	A(%)	B(%)	유속(㎖/min)
0	75	25	0.8
10	69	31	1.0
30	50	50	1.0
35	75	25	0.8

분석 결과, 아칸소사이드를 포함하여 가시오가피의 유효성분이 함유되어 있는 것으로 확인되었다.

실시예 4

팽이버섯 재배 및 가시오가피 유효성분의 분석

미송 톱밥과 미강을 3:1의 비율로 혼합하고, 톱밥은 고속체에 넣어 나무파편, 작은 돌 등의 협잡물을 제거하여 혼합기에 투입하였다. 재료를 혼합한 후 물과 혼합한 가시오가피 자실체 분쇄물 5(w/v) 또는 실시예 2에서 얻은 가시오가피 캘러스 세포 배양액으로 수분 함량을 65 내지 67%로 조절하였다. 병마개로서 내열성 PP나 부직포 마개를 사용하는 것을 제외하고는 실시예 3에서와 동일한 방식으로 배지를 입병하고 살균한 후, 식은 배지에 팽이버섯 종균(품종:P.K, 포천 종균배양소 구입)을 접종하였다.

접종 후 18 내지 20℃에서 약 30 내지 40일간 배양실에서 배양하였다. 배양실내에 가스량은 3000ppm 이하가 되게 한다. 배양이 끝나면 노화된 균을 긁어내고, 온도는 14±1℃, 습도는 3일 정도는 95%, 그 후에는 약 90% 정도로 유지되는 발이실로 옮겨 5∼7일간 자실체의 발생을 촉진시켰다. 그 다음, 고르기실(8℃ 전후, 습도 85 내지 90%)에서 2 내지 3일간 방치한 후, 억제실(온도 3 내지 5℃, 습도 85 내지 90%, 이산화탄소 농도 1000ppm 이하)에서 7 내지 10일간 방치하였다. 자실체가 병입구에서 0.5 내지 1㎝ 정도 자라면 5 내지 8℃로 유지되는 생육실로 옮기고, 자실체가 병입구에서 3 내지 4㎝ 자라면 봉지 씌우기를 하였다. 대길이가 13 내지 14㎝가 되면 버섯을 수확하였다.

수확한 팽이 버섯을 실시예 3에서와 같이 처리하고 가시오가피의 유효성분 분석을 실시한다. 그 결과, 아칸소사이드를 포함하여 가시오가피의 유효성분이 함유되어 있음을 확인하였다.

실시예 5

느타리 버섯 재배 및 가시오가피의 유효성분 분석

미루나무 톱밥, 비트펄프, 면실박을 부피비율 5:3:2로 배합기에서 혼합하여 수분 함량이 65% 정도가 되게 물과 혼합한 가시오가피 자실체 분쇄물 5(w/v) 또는 실시예 2의 가시오가피 캘러스 세포 배양액으로 수분을 보충해주었다. 실시예 3에서와 같이 배지를 입병하고 살균한 뒤 식은 배지에 느타리버섯 종균(품종:춘추2호, 포천종균배양소 구입)을 무균실에서 무균적으로 10g 정도 접종하였다. 접종 후 배양실로 옮겨서 20℃, 이산화탄소 농도 3000ppm 이하의 조건에서 25일간 배양하였다. 그 다음, 균긁기를 실시한 후 재배사로 옮겨 온도 15 내지 18℃, 습도 85 내지 90%, 이산화탄소 농도 1000ppm 이하에서 5 내지 7일간 버섯의 발생을 유도하였다. 어린 버섯이 발생하면 온도 18 내지 19℃, 습도 80 내지 85%, 이산화탄소 농도 1000ppm 이하에서 버섯을 생장시켰다. 버섯의 갓 지름이 4 내지 5㎝, 대의 길이가 6 내지 7㎝가 되면 수확하였다.

수확한 느타리 버섯을 실시예 3에서와 같이 처리하고 가시오가피의 유효성분 분석을 실시하였다. 그 결과, 아칸소사이드를 포함하여 가시오가피의 유효성분이 함유되어 있음을 확인하였다.

이상 설명드린 본 발명의 방법에 따라 생성된 각종 버섯은 가시오가피의 유효성분을 함유하고 있음에 따라 식품 및 의약으로서 가치가 높고 유용하게 사용될 수 있다.

Claims (6)

1. 가시오가피의 성분을 함유한 버섯.
2. 제1항에 있어서, 식용버섯인 버섯.
3. 제2항에 있어서, 팽이 버섯, 새송이 버섯 또는 느타리 버섯인 버섯.
4. 물과 혼합한 가시오가피 자실체 분쇄물 5(w/v) 또는 가시오가피 캘러스 세포 배양액을 버섯재재 배지에 혼합하고, 혼합물에 버섯균을 접종 배양함을 특징으로 하는, 가시오가피의 성분을 함유한 버섯의 제조 방법.
5. 제4항에 있어서, 버섯이 식용버섯인 방법.
6. 제5항에 있어서, 버섯이 팽이 버섯, 새송이 버섯 또는 느타리 버섯인 방법.