KR100525994B1 - 복방 생약 추출물을 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 석류피, 천화분, 천궁, 회향 및 백지의 혼합생약으로 구성된 복방 생약 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로 더욱 상세히는 한방에서 주로 이용되고 있는 생약인 석류피, 천화분, 천궁, 회향 및 백지 등을 적정비율로 혼합하여 추출함으로써 단방 추출한 것에 비하여 피부 잔주름 개선효과, 유해활성산소 라디칼(Superoxide radical) 소거작용, 콜라겐 분해효소(Matrix metalloprotease-1) 합성 억제작용 등의 항노화 효과와 미백효과가 우수한 화장료 조성물에 관한 것이다.

Description

복방 생약 추출물을 함유하는 화장료 조성물{A cosmetic composition containing an extract of herbal medicines}

본 발명은 복방 생약 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 한방에서 주로 이용되고 있는 생약인 석류피, 천화분, 천궁, 회향 및 백지 등을 적정비로 혼합하여 추출함으로써 단방 추출한 것에 비하여 피부 잔주름 개선효과, 유해활성산소 라디칼(Superoxide radical) 소거작용, 콜라겐 분해효소(Matrix metalloprotease-1) 합성 억제작용 등 항노화 효과와 미백효과가 우수하여 상기 복방 생약추출물 0.001 - 30.0 중량%를 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

사람의 피부는 나이를 먹으면서 끊임없이 변화하게 된다. 피부 노화는 크게 자연노화(혹은 내인성 노화)와 외적노화로 구분되며(E.B. Doris, Cosmetics & Toiletories, 111, 31-37, 1996), 자연 노화(내인성 노화)는 유전적인 요소에 영향을 받기 때문에 인위적인 조절이 어려운 반면 외적 노화는 환경적인 요소에 영향을 받기 때문에 인위적인 조절이 비교적 용이하다. 대표적인 외적 노화인자로는 자외선을 들 수 있으며, 가장 두드러진 외적 노화현상이 바로 주름형성이다(H.W. Daniell, Ann Intern Med, 75, 873-880, 1971, G.L. Grove, J Am Acad Dermatol, 21, 631-637, 1989, C.E. Griffiths et al, Arch Dermatol, 128, 347-351, 1992).

자외선에 의해 야기되는 광노화 메카니즘 중의 하나는 자유 라디칼 경로를 경유하는 것이다(D. Harman, J. Gerontol, 11, 298-301, 1956). 자유 라디칼들은 콜라겐 분해효소 합성 증가를 통한 피부 콜라겐 등의 결합조직형성 파괴, 세포막 기능 저해, DNA 변이 촉진, 단백질 작용 변형, 세포간 에너지 전이, 신진대사와 관련된 분자들의 변형 등을 유발하는 것으로 알려져 있다(A.F. Kligman and R.M. Lavker, J. Cutan. Aging Cosmet. Dermatol. 1, 5-12, 1988). 노화에 자유 라디칼이 관여한다는 사실은 자유 라디칼을 불활성화시키는 항산화제 또는 여러 가지 화학적 소거제들을 사용하여 노화과정을 지연시킬 수 있다는 것을 의미한다.

자외선에 의한 노화를 방지하기 위하여 자외선 차단제가 함유된 제품을 피부에 직접 도포하는 방법이 가장 일반화되어 있으나, 1988년 레티노인산이 노화된 피부의 피부 거칠음 및 잔주름의 완화에 효과가 있다고 보고되었고(K.S. Weiss et al, JAMA, 259, 527-532, 1988), 전세계적으로 피부 노화를 억제 혹은 개선시키는 물질을 개발하기 위한 연구가 활발히 진행되고 있다. 이 중 비타민 A, C ,E 등 비타민 유도체 및 AHA(alpha -hydroxy acid)는 현재까지 알려진 노화피부개선의 대표적인 물질이다(Hermitte, Cosmetics & Toiletries, 107, 63-67, 1992, D.R. Rosenthal et al, J. Invest. Dermatol., 95, 510-515, 1990, T.D.Ditre et al, J. Invest. Dermatol, 34, 187-195, 1996).

하지만, 이들은 자연환경에서 매우 불안정하여 사용상 문제점이 있거나, 혹은 가시적 효과를 나타내기엔 다소 미흡하다는데 문제가 있다.

피부색을 결정하는 인자에는 기본적으로 인종과 지역, 성별, 나이에 따른 차이를 배제하면 기미, 주근깨와 자외선 노출로 인한 태닝과 같은 부분, 또는 전체적인 색소침착, 그 외에 여드름 및 흉터, 각질의 분포 상태와 혈액 순환, 스트레스, 건강상태 등이 있다. 이상의 인자들 가운데에서도 가장 중요한 인자는 색소침착이다.

피부색에 영향을 주는 색소로는 멜라닌, 멜라조이드, 카로틴, 헤모글로빈 등이 있는데 이중 가장 중요한 것은 멜라닌으로 생합성에 영향을 미치는 가장 큰 요인은 자외선과 체내 호르몬 분비 정도이다. 멜라닌은 자외선을 흡수 또는 산란시켜 자외선으로부터 피부가 손상되는 것을 방지하는데 큰 역할을 하는데, 특별한 최대흡수파장이 없으며 전 영역의 빛을 흡수한다. 또한 활성산소종을 제거하는 기능이 탁월하나, 때로는 멜라닌 자체가 활성산소를 발생시키기도 하며, 멜라닌 구조내의 카테콜이나 퀴논에 의하여 다른 물질을 환원시키거나 산화시키고, 멜라닌 자체가 자유라디칼의 성질을 나타내기도 한다.

멜라닌의 생합성은 아미노산의 일종인 티로신이 멜라노사이트의 멜라노좀에서 티로시나제에 의해 산화되어 디하이드록시 페닐알라닌 (dihydroxy phenylalanine)으로 전환되는 것을 시작으로 계속되는 일련의 산화과정을 거쳐 갈색(pheomelanin), 흑색 (eumelanin)의 중합체로 형성된다. 이러한 생합성 과정은 멜라노좀이라는 특수한 형태의 갈색 세포내 소기관에서 진행되며 멜라닌 과립을 포함한 멜라노좀은 핵 주변 부위에서 수지상 돌기 끝부분으로 이동, 케라티노사이트의 식세포작용에 의해 세포질 내로 이동하고 이들은 케라티노사이트의 핵 주변에 축적된다.

멜라닌의 합성과 멜라노좀의 수, 주위의 케라티노사이트로의 이동은 부분적으로 호르몬과 자외선 등에 영향을 받고 일차적으로는 유전적인 영향을 크게 받는다. 그밖에 티로시나제의 발현 및 멜라닌의 합성, 전송에 관여하는 세포 내 조절인자인 싸이토카인(cytokine), 구리, 아연, 철 등의 금속 이온 및 인터페론, 프로스타글란딘, 히스타민 등이 관여하는 것으로 알려져 있다 (박수남 : 대한화장품학회지, 25: 77-127, 1999).

종래에는 피부 흑화, 기미 및 주근깨 등의 피부 질환을 예방하기 위해 코직산(kojic acid), 하이드로퀴논, 비타민 C 등과 같은 원료들이 화장품에 첨가되어 사용되었는데 이들 원료들은 피부 흑화의 주 요소인 멜라닌 색소 합성의 주요 단계에 관여하는 효소인 티로시나제의 활성을 저해하거나 생성된 멜라닌 색소를 환원시키는 기능성 원료 물질들이다.

최근 여러 화학 물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 한방 생약을 사용한 화장품이 많이 개발되고 있다. 각종 한방 생약을 소정의 방법으로 추출하고, 그 추출물의 기능을 확인하여 각종 기능성 화장품을 개발하는 사례도 늘고 있다. 예를 들면 녹두는 피부를 청결하게 하는 기능이 알려져 있고, 그 외 인삼추출물, 상황버섯 추출물 등에 대해서도 그 특유의 노화방지 또는 미백 등의 효과가 밝혀져 각종 화장품에 응용되고 있는 실정이다.

이러한 한방 생약은 피부에 부작용이 적을 뿐 아니라, 최근 한방 생약을 이용한 화장품에 대한 소비자들의 호응이 높아짐에 따라 화장품 원료로서 개발가치가 한층 늘어나고 있다. 이에, 본 발명자들은 한방 재료로 널리 알려진 여러 가지 약재들을 중심으로 화장품으로의 응용 가능성을 연구하였다.

석류피는 석류나무(Punica granatum Linne)의 열매, 줄기 및 뿌리의 껍질로서 잎은 대생하고 도란형 또는 긴 타원형이며 예두 또는 예저이고 길이 2~8cm이며 양면에 털이 없다. 5~6월에 꽃이 피고 꽃은 붉은색이며 양성으로 가지끝의 짧은 화경위에 1~5개씩 달린다. 9~10월에 열매가 성숙되며 장과는 둥글고 끝에 꽃받침열편이 있으며 지름 6~8cm이고, 황색 또는 황홍색으로 익으며 육질이고 흔히 외피가 불규칙하게 터져서 종자가 보인다. 식용, 관상용, 공업용, 약용에 쓰이고 열매를 식용하며 관상수 및 줄기를 기재로 쓰고 한방과 민간에서 과실, 수피, 근피, 과피를 수검, 지사, 장출혈, 구내염, 편도선염, 조충구재, 유산, 피임에 약재로 쓰인다(김태정, 한국의 자원식물 III, 서울대학교 출판부, 1996).

천화분은 하늘타리(Trichosanthes kirilowii Maximowicz) 또는 노랑하늘타리(Trichosanthes kirilowii Maximowicz var. japonica Kitamura(박과 Cucurbitaceae))의 피층을 벗긴 뿌리이다. 성상은 고르지 않은 담황백색의 원주형으로 지름 3~5cm, 길이 5~10cm, 흔히 세로로 쪼개져 있으며 불규칙한 황갈색의 유관속이 뻗어 있다. 냄새는 없고 맛은 약간 고미이다. 절단면은 담황색이고 약간 섬유성이다. 횡단면을 확대경으로 보면 폭이 넓은 방사 조직과 황색의 반점 또는 작은 구멍(道管)이 있다. 해열, 거담, 배농 소독제, 황달, 당뇨병, 중풍 또는 살포약으로서 유아의 피부병에 쓰인다(한대석, 생약학, 동명사, 1998).

천궁(Cnidium officinale Makino)은 불규칙한 덩어리 모양, 때로는 세로로 갈라지며 길이 5~10cm, 지름 3~5cm이다. 증기로 찐 뿌리줄기는 어두운 갈색의 각질로 단단하다. 그대로 말린 뿌리줄기는 엷은 황갈색~회백색으로 거칠고 조금 연하다. 겹친 결절이 있고, 겉에는 혹같은 융기가 있다. 특이한 강한 냄새가 있고, 맛은 맵고 조금 쓰고 달다. 한방에서 보혈, 강장, 진정, 진통 등을 목표로 하여 냉증, 빈혈, 월경장애 등 각종 부인과질환에 쓰인다(한대석, 생약학, 동명사, 1998).

회향은 회향(Foeniculum vulgare Miller)의 열매이다. 긴 원주형의 쌍현과, 길이 3~8mm, 너비 1~3mm, 너비 1~3mmm, 때로는 길이 2~10mm의 과병이 붙어 있다. 바깥면은 회황록색~회황색, 각 현과는 5개의 늑선이 두드러져 있고 현과는 서로 밀접되어 있다. 횡단면을 현미경으로 보면 번연의 좌우 늑선은 다른 것보다 매우 융기되고 각 늑선사이에 1개의 큰 유실이 있고 현과가 과병에 붙은 면에는 2개의 유실이 있다. 특이한 향기와 맛이 있다. 방향성 건위, 구풍, 거담약 등에 쓰인다(한대석, 생약학, 동명사, 1998).

백지는 구릿대(Angelica dahurica Benth. et Hook.) 및 그 변종의 뿌리이다. 짧은 주근에서 많은 긴 뿌리가 갈라져서 대개 방추형을 이루고, 길이 10~25cm, 바깥면은 회갈색~암갈색, 근두부에는 약간의 엽초가 남아 있고 빽빽하게 융기한 돌림마디가 있다. 뿌리에는 세로 주름 및 가로로 융기한 많고 가는 뿌리의 흔적이 있다. 특이한 냄새가 있고 약간 고미이다. 횡단면의 주변은 회백색으로 빈틈이 많고 중앙부는 암갈색이다. 해열, 진정, 진통, 해독약, 청상방풍탕, 오적산, 소경활혈탕 등에 쓰인다(한대석, 생약학, 동명사, 1998).

이러한 석류피, 천화분, 회향, 천궁, 백지 등을 화장품으로 응용한 예가 대한민국 특허출원 1995-21415호, 01-07367호, 03-43561호, 95-21415호,00-57071호에 각각 개시되어 있다. 그러나 이 출원에 개시된 석류피, 천화분, 회향, 천궁, 백지 추출물은 이들 생약 각각에 대한 단방 생약 추출물로서의 효과를 본 것 일뿐 이들을 적정 비율로 혼합하여 복방으로 추출 정제할 경우 나타나는 상승효과에 대해서는 개시되어 있지 않다.

본 발명의 목적은 유해활성산소 라디칼 소거작용, 콜라겐 분해효소 합성 억제작용, 피부 잔주름 방지효과 등 우수한 항노화 효과 및 미백효과를 나타내는 복방 생약 추출물과 그 추출방법을 제공하는 것이다.

또 다른 본 발명의 목적은 복방 생약 추출물을 활성 성분으로 하는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 발명자들은 여러 가지 한방 생약들 중 석류피, 천화분, 회향, 천궁 및 백지 등의 한방 생약을 보다 과학적으로 이용하고 유효 활성 성분의 추출 효율을 극대화하고자 노력한 결과, 상기 5종 한방 생약의 혼합 비율을 적절히 조절한 한방 생약 복합제로부터 유효활성 성분을 높은 효율로 추출하고, 이 추출물을 함유한 좀 더 자극이 없으면서도 소정의 기능성 효과를 나타내는 화장료 조성물을 제공하고자 하였다.

본 발명은 석류피, 천화분, 회향, 천궁 및 백지의 혼합생약으로 구성된 복방 생약 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 석류피, 천화분, 회향, 천궁 및 백지 등의 생약을 5 ~ 7 : 6 ~ 8 : 2 : 4 : 1의 중량비로 혼합하여 제조한 복방 생약 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 각 생약의 혼합비율은 여러 가지 조건으로 추출물을 제조하여 실험한 결과, 상기 조건에서 항노화 및 미백 등의 효과가 가장 탁월하였다.

또한, 본 발명은 추출용매로서 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌 글리콜, 디클로로메탄 및 헥산으로 이루어진 그룹에서 선택된 1종을 단독으로 사용하거나, 2종 또는 3종의 용매를 혼합하여 사용하는 것을 특징으로 하는 복방 생약 추출물을 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 추출물이 상온에서 냉침, 가열, 여과하여 얻어진 액상물 또는 추가로 용매를 증발 또는 동결건조하여 얻은 추출물인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 복방 생약 추출물의 함량이 화장료 조성물 전체에 대하여 0.001 - 30.0 중량%인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다. 0.001중량% 미만인 경우에는 피부 개선효과가 거의 없으며, 30.0중량% 이상인 경우에는 함유량 증가에 대한 효과 증대 정도가 미미하다.

또한, 본 발명은 상기 화장료 조성물이 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W)형 및 유중수(W/O)형의 제형 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다. 상기 화장료 조성물은 우수한 피부 잔주름 개선효과, 유해활성산소 라디칼 소거작용, 콜라겐 분해효소 합성 억제작용 등과 같은 피부 노화방지용 및 미백용으로 사용될 수 있다.

이하, 실시예를 통해 본 발명을 좀더 구체적으로 설명한다. 단, 이들 실시예는 본 발명의 예시적인 기재일 뿐이며 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되는 것은 아니다.

실시예 1: 복방 생약 추출물 제조

세절하여 음건한 석류피, 천화분, 회향, 천궁 및 백지를 5 ~ 7 : 6 ~ 8 : 2 : 4 : 1의 중량비로 혼합하고, 이 혼합 생약 10 중량%에 뜨거운(hot) 95%(V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #5 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃이하에서 감압농축 및 동결건조하였다. 감압농축물 및 동결건조물이 0.001 ~ 30.0중량% 함유되게 정제수, 에탄올, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 중에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용하여 복방 생약 추출물을 제조하였다.

비교예 1: 석류피 추출물 제조

세절하여 음건한 석류피 10 중량 %에 뜨거운(hot) 95%(V/V) 에탄올 수용액을 첨가하여 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #5 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃이하에서 감압농축 및 동결건조하였다. 감압농축물 및 동결건조물이 0.001 ~ 30.0중량% 함유되게 정제수, 에탄올, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 중에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용하여 석류피 추출물을 제조하였다.

비교예 2: 천화분 추출물 제조

세절하여 음건한 천화분을 비교예 1과 동일한 방법으로 추출하여 천화분 추출물을 제조하였다.

비교예 3: 회향 추출물 제조

세절하여 음건한 회향을 비교예 1과 동일한 방법으로 추출하여 회향 추출물을 제조하였다.

비교예 4: 천궁 추출물 제조

세절하여 음건한 천궁을 비교예 1과 동일한 방법으로 추출하여 천궁 추출물을 제조하였다.

비교예 5: 백지 추출물 제조

세절하여 음건한 백지를 비교예 1과 동일한 방법으로 추출하여 백지 추출물을 제조하였다.

실시예 2: 유해활성산소 라디칼 소거효과 측정실험

본 실시예는 실시예 1에서 수득한 복방 생약 추출물의 유해활성산소 라디칼 소거효과를 NBT법으로 측정하였다.

인간에게 분자상태의 산소는 생명을 유지하는데 필수적이지만, 산소의 소비로 인해 생체 내에서는 소량의 활성산소가 생성되며, 이것의 강한 산화작용으로 세포막이나 세포구성물을 파괴하게 된다. 이러한 유해활성산소는 피부세포의 손상과 노화에 큰 영향을 미치므로, 유해활성산소 소거 작용을 가지는 항산화 활성 물질들이 생체에 중요한 작용을 하게 되는 것이다.

유해활성산소 라디칼 소거효과를 측정하기 위해서 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 생성되는 활성산소를 NBT법으로 측정하여 복방 생약 추출물이 유해활성산소 라디칼을 소거하는 효과를 평가한다. 즉, 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 생성된 활성산소가 니트로블루테트라졸리움(Nitro Blue Tetrazolium;NBT)과 반응하여 이것에 의해 생성되는 청색을 파장 560nm에서 측정하는 것으로 유해활성산소 라디칼 소거율을 하기의 방법으로 측정한다.

1. 바이엘병에 50mM Na₂CO₃ 완충액 2.4ml, 3mM 크산틴 용액 0.1ml, 3mM EDTA용액 0.1ml, 0.15% BSA용액 0.1ml 및 0.75mM NBT용액 0.1ml을 각각 첨가하고 여기에 시료용액 0.1ml을 첨가한 후, 25℃에서 10분간 방치한다.

2. 크산틴 옥시다제 용액 0.1ml을 가하여 교반하고 25℃에서 20분간 반응한다.

3. 6mM CuCl₂ 용액 0.1ml을 가하여 반응을 정지시키고 560nm에서의 흡광도 St를 측정한다.

4. 공시험은 시료용액 대신에 증류수를 사용한 것을 상기와 똑같이 조작해 흡광도 Bt를 측정한다.

5. 시료용액과 공시험 용액의 블랭크(Blank)는 효소 대신에 증류수를 사용해 똑같이 조작하여 흡광도 So와 Bo를 측정한다.

유해활성산소 라디칼 소거효과의 결과는 수학식 1에 의하여 산출하였으며, 결과는 표1과 같다.

억제율(%) = 1-(St-So)/(Bt-Bo)〕X 100

St : 시료용액의 효소 반응 후의 560nm에서의 흡광도

Bt : 공시험용액의 효소 반응 후의 560nm에서의 흡광도

So : 시료용액의 효소 무첨가시 반응전의 560nm에서의 흡광도

Bo : 공시험용액의 효소 무첨가시 반응전의 560nm에서의 흡광도

시료명	유해활성산소라디칼 소거효과(%)
비교예 1	92
비교예 2	60
비교예 3	85
비교예 4	60
비교예 5	65
실시예 1	95.6
녹차추출물	93.6
비타민 E	87

결과는 표 1에 나타난 바와 같이 5종의 생약들을 적정 비율로 혼합하여 추출한 복방 생약 추출물의 경우 단방 추출물에 비해 유해활성산소 라디칼 소거효과가 매우 우수한 것으로 보아 복방화하여 추출할 경우 각 단방 생약들의 상승효과가 확인되었다. 또한 복방 생약 추출물의 경우 항산화 효과가 우수한 녹차 추출물과 비타민 E에 비해 항산화력이 비슷하거나 우수한 것으로 확인되었다.

실시예 3: 콜라겐 분해효소 합성 억제효과 측정 실험

본 실시예는 실시예 1에서 수득한 복방 생약 추출물의 콜라겐 분해효소 합성 억제효과를 관찰하기 위해 인간으로부터 직접 채취하거나 상업적으로 구입한 인간의 섬유아세포에 처리하여 실험을 실시하였다.

48공 평판배양기(48-well plate)에 10% 우태아 혈청이 함유된 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Media)배지와 인간의 섬유아세포(50000세포/well)를 넣고, 70-80% 정도 자랄 때까지 배양하였다. 그 다음 배양배지를 제거하고 포스페이트 완충액으로 세척하였다. 자외선 A(4.2J/㎠)를 조사한 후, 복방 생약 추출물과 단방 생약 추출물이 각각 0.1% 농도로 함유된 우태아 무혈청 배지로 교환하여 1일간 배양하였다. 섬유아세포가 합성하는 콜라겐 분해효소(MMP-1)의 양은 면역분석법 (Enzyme Linked Immunosorbent Assay)으로 측정하였다(Petersen M.J., et al., J. Invest. Dermatol., 99, 440~444, 1992).

측정 방법은 우선 96공 평판배양기에 배양 상등액을 24시간 동안 코팅한 후 제거하였다. 3% 혈청 알부민을 첨가하여 비특이적인 단백질의 결합을 차단하였다. 콜라겐 분해효소에 대한 특이적인 1차 항체를 처리하여 1시간 30분간 항원-항체반응을 시킨 다음, 발색단이 결합된 2차 항체를 처리하여 추가적으로 1시간 30분 동안 반응시켰다. 발색유발물질을 넣어 실온에서 발색시키고, 3N 수산화나트륨을 넣어 발색을 중지시켰다. 반응색의 색깔은 노란색을 띠며, 반응의 정도에 따라 진하기가 달라진다. 노란색을 띤 96공 평판배양기를 흡광광도계를 이용하여 405nm에서 측정하고, 아래 수학식 2에 의해 콜라겐 분해효소 합성 저해정도를 계산하였다. 이때 상기 추출물을 처리하지 않은 세포배양액의 반응 흡광도를 대조군으로 하였다.

결과는 표 2에 나타나 있으며, 단방 추출물의 경우 콜라겐 분해효소 합성 저해가 미약하였으나, 이들 단방을 적정 비율로 혼합한 복방 생약 추출물의 경우 콜라겐 분해효소 합성 저해효과가 우수함을 알 수 있다.

콜라겐 분해효소 합성 저해율(%) = 〔1-(복방 생약 추출물이 처리된 세포배양액의 반응 흡광도/대조군의 반응 흡광도)〕X 100

시료명	콜라겐 분해효소 합성 저해율(%)
비교예 1	6
비교예 2	10
비교예 3	30
비교예 4	11
비교예 5	10
실시예 1	50
대조군	0

실시예 4: B16F1 멜라노싸이트를 이용한 멜라닌 생성 억제효과 측정 실험

본 실시예는 실시예 1에서 수득한 복방 생약 추출물의 미백효과를 확인하기 위해 B16F1 멜라노싸이트에 대한 멜라닌 생성 억제 정도로써 미백효과를 판단한 것이다.

본 실시예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 마우스에서 유래한 세포균주이며, 멜라닌이라는 흑색색소를 분비하는 세포이다. 이 세포의 인공배양중에 시료를 처리하여 멜라닌 흑색색소가 감소하는 정도를 비교 평가하였다. 본 실시예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 ATCC (American Type Culture Collection, 기탁번호 : 6323)로부터 분양받아 사용하였다.

B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생합성 억제효과 측정은 다음과 같이 행하였다. B16F1 멜라노싸이트를 6웰 플레이트에 각 웰당 2 x 10⁶ 농도로 분주하고 세포를 부착시킨 후 독성을 유발하지 않는 농도로 시료를 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 72시간 배양 후 세포를 트립신(trypsin)-EDTA로 떼어 낸 후 세포수를 측정한 다음 원심분리하여 세포를 회수하였다. 세포내 멜라닌의 정량은 로탄 (Lotan : Cancer Res., 40: 3345-3350, 1980)의 방법을 약간 변형하여 실시하였다. 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후 균질화 버퍼액(50 mM 소듐 포스페이트, pH 6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF) 1 ml를 첨가하여 5분간 와류하여 세포를 파쇄하였다. 원심분리 (3,000 rpm, 10분)하여 얻은 세포 여액에 1N NaOH(10% DMSO)를 첨가하여 추출된 멜라닌을 용해한 후 마이크로 플레이트 판독기로 405nm에서 멜라닌의 흡광도를 측정한 다음 멜라닌을 정량하여 시료의 멜라닌 생성 저해율(%)을 측정하였다. B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생성 저해율(%)은 수학식3에 의하여 계산하였으며, IC₅₀값은 멜라닌 생성을 50% 저해하는 물질의 농도이다.

저해율 (%) = [(A-B)/A] X 100

A :　시료를 첨가하지 않은 웰의 멜라닌 양

B : 시료를 첨가한 웰의 멜라닌 양

결과는 표 3에 나타난 바와 같이 5종의 생약들을 적정 비율로 혼합하여 추출한 복방 생약 추출물의 경우 단방 추출물에 비해 멜라닌 생성 저해효과가 매우 우수한 것으로 보아 복방화하여 추출할 경우 각 단방 생약들의 상승효과가 확인되었다. 또한 복방 생약 추출물의 경우 기존의 미백제인 알부틴과 하이드로퀴논에 비해 미백효과가 비슷하거나 우수한 것으로 확인되었다.

시료명	멜라닌 합성 저해효과(IC50)
실시예1	0.03%
비교예1	0.2%
비교예2	0.3%
비교예3	0.2%
비교예4	0.06%
비교예5	0.3%
하이드로퀴논	0.03%
알부틴	0.5%
상백피추출물	5%
유용성 감초추출물	0.03%

시험예 1 : 피부 잔주름 개선 효과

본 시험예는 실시예 1에서 수득한 복방 생약 추출물을 함유한 화장료를 제조하여(실시예 5 , 6, 7) 사람을 대상으로 피부 잔주름 개선 효과를 비교예 6과 비교실험을 행하여 평가하였다.

비교실험에 사용된 화장료는 크림형태이고, 그 조성은 표 4에 나타낸 바와 같다. 우선 표 4에 기록되어 있는 나)상을 가열하여 70℃에 보존한다. 이것에 가)상을 가하여 예비유화 후 호모믹서로 균일하게 유화하고 다음에 서서히 냉각하여 크림(실시예 5 내지 7, 비교예 6)을 제조한다. 실험자(20세-35세의 여성) 20명을 대상으로 얼굴 오른쪽부위에는 실시예 5 내지 7에서 제조된 크림을 얼굴 왼쪽부위에는 비교예 6에서 제조된 크림을 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 도포하였다.

실험완료 후 피부 잔주름 완화 효과는 제품 사용 전과 2개월간 사용 후에 안면 눈꼬리 주위의 주름을 실리콘 수지 복사물(레플리카)로 채취하고, 이것을 피부 미세 주름 측정 장치와 피부 영상 분석기로 눈가 잔주름의 상태를 비교하였다.

표 5는 실시예 5 내지 7에서 제조된 크림을 사용한 실험자의 눈가 평균 잔주름 깊이 및 주름 감소율을 비교예 6의 크림을 사용한 실험자와 비교한 것이다. 표 4에서 나타난 바와 같이 복방 생약 추출물을 함유한 크림을 도포한 실험자의 안면 눈주위 피부에서 피부 잔주름 개선 효과가 우수함을 알 수 있다.

원료		실시예 5	실시예 6	실시예 7	비교예 6
가	스테아릴 알콜	8	8	8	8
	스테아린산	2	2	2	2
	스테아린산 콜레스테롤	2	2	2	2
	스쿠알란	4	4	4	4
	2-옥틸도데실알콜	6	6	6	6
	폴리옥시에틸렌(25몰부가)알콜에스테르	3	3	3	3
	글리세릴모노스테아린산아스테르	2	2	2	2
나	복방생약 추출물	10	1	0.1	-
	프로필렌글리콜	5	5	5	5
정제수		적량	적량	적량	적량

주) 단위: 중량%

사용제품	사용전	사용 2개월 후	비고
실시예 7	0.203	0.168	평균 잔주름 깊이
	-	17.24%	사용전 대비 주름 감소율(%)
비교예 6	0.202	0.195	평균 잔주름 깊이
	-	3.47%	사용전 대비 주름 감소율(%)

n=20, p＜0.01

시험예 2: 피부 미백효과

본 시험예는 상기 실시예 5, 6, 7 및 비교예 6의 화장료를 사람을 대상으로 피부 미백효과를 행하여 평가하였다.

실험자(20세-35세의 여성) 20명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 실시예 5 내지 7에서 제조된 크림을, 얼굴 왼쪽 부위에는 비교예 6에서 제조된 크림을 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 도포하였다. 시험 완료 후 얼굴 좌우 양편의 도포 부위 피부를 화상분석기 및 색차계로 얼굴색을 비교하여 가장 어두운색을 5, 중간색을 3, 가장 환한 색을 1로 정하고 그 중간정도를 어림잡아 평가하였다. 표 6은 실시예 7에서 제조된 크림을 사용한 실험자의 안면 피부색을 비교예 6으로 만든 크림을 사용한 실험자의 안면 피부색과 비교한 것이다.

표 6에서 나타낸 바와 같이 복방 생약 추출물을 함유한 크림을 도포한 실험자의 안면 피부에서 미백효과가 우수함을 알 수 있다.

실험인원번호	실시예 7	비교예 6
	오른쪽피부색	왼쪽피부색
1	2	3
2	2.5	3
3	1.5	2.5
4	1.5	2
5	2	3
6	2	2.5
7	3	3.5
8	2.5	3
9	2	3
10	2	3.5
11	1.5	2.5
12	2.5	3
13	1.5	2
14	2.5	3.5
15	2	2
16	2.5	3
17	3	3
18	2.5	3.5
19	2.5	3
20	2	3

아래에 그 외의 실시예를 나타내었다. 즉, 실시예 1에서 수득한 복방 생약 추출물을 함유한 화장수, 유액 및 미용액을 실시예 8 내지 10에서 제조하였다. 이들 복방 생약 추출물을 함유한 화장수, 유액 및 미용액은 유해활성산소 라디칼 소거 효과, 콜라겐 분해효소합성 저해 효과, 피부 잔주름 개선 효과 등 피부 개선에 우수한 효과를 나타내었다.

실시예 8: 실시예 1에서 수득한 복방 생약 추출물을 함유한 화장수의 제조

95% 에탄올 8g에 폴리피로리돈 0.05g, 올레일알콜 0.1g, 폴리옥시에틸렌모노올레이트 0.2g, 향료 0.2g, 파라옥시안식향산메틸에스테르 0.1g, 소량의 산화방지제, 소량의 색소를 혼합용해한다. 실시예 1에서 수득한 복방 생약 추출물 0.05g, 글리세린 5g을 정제수 85.33g에 용해한 것에 상기 혼합액을 첨가한 후 교반하여 피부개선효과가 있는 화장수를 얻었다.

실시예 9: 실시예 1에서 수득한 복방 생약 추출물을 함유한 유액의 제조

세틸알콜 1.2g, 스쿠알란 10g, 바세린 2g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.2g, 글리세린모노에스테아레이드 1g, 폴리옥시에틸렌(20몰부가)모노올레이트 1g 및 향료 0.1g을 70℃에서 가열혼합용해하고, 실시예 1에서 수득한 복방 생약 추출물 0.5g, 디프로필렌글리콜 5g, 폴리에틸렌글리콜-1500 2g, 트리에탄올아민 0.2g, 정제수 76.2g을 75℃로 가열해서 용해시킨다. 양자를 혼합하여 유화시킨 후 냉각하여 수중유(O/W)형의 피부개선효과가 있는 유액을 얻었다.

실시예 10: 실시예 1에서 수득한 복방 생약 추출물을 함유한 미용액의 제조

95% 에탄올 5g에 폴리옥시에틸렌솔비탄모노올레이트 1.2g, 키툴로오즈 0.3g, 히야론산나트륨 0.2g, 비타민 E-아세테이트 0.2g, 감초산 나트륨 0.2g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.1g, 실시예 1에서 수득한 복방 생약 추출물 1g 및 적량의 색소를 혼합하여 피부개선효과가 있는 미용액을 얻었다.

이상에서 설명한 바와 같이, 본 발명의 석류피, 천화분, 회향, 천궁 및 백지의 혼합 생약으로 구성된 복방 생약 추출물은 각각의 단방 생약추출물에 비하여 월등한 유해활성산소 라디칼 소거효과와 콜라겐 분해효소 합성 억제 효과 및 피부 잔주름 개선 효과 등 우수한 노화방지 효과 및 미백효과를 가지며, 천연 한방 생약 추출물로 화장품 기재에 의해 야기되는 피부 자극을 완화시켜 주는 효과를 나타내었다.

또한, 본 발명은 복방 생약 추출물을 함유하는 화장수, 크림, 유액, 팩 등의 화장료 조성물을 제공할 수 있다.

Claims (9)

1. 석류피, 천화분, 회향, 천궁 및 백지의 혼합 생약으로 구성된 복방 생약 추출물을 함유하는 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 복방 생약은 석류피, 천화분, 회향, 천궁 및 백지가 5 ~ 7 : 6 ~ 8 : 2 : 4 : 1의 중량비로 혼합되는 것을 특징으로 하는 복방 생약 추출물을 함유하는 화장료 조성물.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 추출용매로서 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌 글리콜, 디클로로메탄 및 헥산으로 이루어진 그룹에서 선택된 1종을 단독으로 사용하거나, 2종 또는 3종의 용매를 혼합하여 사용하는 것을 특징으로 하는 복방 생약 추출물을 함유하는 화장료 조성물.
4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 추출물은 상온에서 냉침, 가열 여과하여 얻어진 액상물 또는 추가로 용매를 감압농축 또는 동결건조하여 얻은 것임을 특징으로 하는 복방 생약 추출물을 함유하는 화장료 조성물.
5. 제1항 또는 제2항에 있어서, 복방 생약 추출물의 함량은 화장료 조성물 전체에 대하여 동결건조중량 기준 0.001∼30.0중량%인 것을 특징으로 하는 복방 생약 추출물을 함유하는 화장료 조성물.
6. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W)형 및 유중수(W/O)형의 제형 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 복방 생약 추출물을 함유하는 화장료 조성물.
7. 제3항에 있어서, 추출물은 상온에서 냉침, 가열 여과하여 얻어진 액상물 또는 추가로 용매를 감압농축 또는 동결건조하여 얻은 것임을 특징으로 하는 복방 생약 추출물을 함유하는 화장료 조성물.
8. 제3항에 있어서, 복방 생약 추출물의 함량은 화장료 조성물 전체에 대하여 동결건조중량 기준 0.001∼30.0중량%인 것을 특징으로 하는 복방 생약 추출물을 함유하는 화장료 조성물.
9. 제3항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W)형 및 유중수(W/O)형의 제형 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 복방 생약 추출물을 함유하는 화장료 조성물.