KR100669362B1

KR100669362B1 - 포제를 이용한 권백추출물 제조 방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR100669362B1
Application number: KR1020050067566A
Authority: KR
Inventors: 김진희; 조영호; 이범천; 표형배
Original assignee: 한불화장품주식회사
Priority date: 2005-07-25
Filing date: 2005-07-25
Publication date: 2007-01-16

Abstract

본 발명은 권백추출물을 제조하는 방법으로서 권백을 해사와 동량으로 혼합하여 100∼160℃ 에서 권백의 겉이 갈색이 될 때까지 교반 가열한 후 식히는 단계;및 해사를 제거하고 포제한 권백을 추출용매를 투입하여 70℃에서 3∼6시간 동안 환류추출하여 감압여과한 후 그 여액을 40℃의 수조에서 감압농축하여 농축된 사초권백 추출물이 얻어진다. 또한 권백에 초산(acetic acid)을 4~6% 함유하는 초산수용액을 충분히 흡수시킨 후 100~160℃에서 권백의 겉이 갈색이 될 때까지 교반 가열한 후 식히는 단계; 및 포제한 권백을 추출용매를 투입하여 70℃에서 3∼6시간 동안 환류추출하여 감압여과한 후 그 여액을 40℃의 수조에서 감압농축하여 농축된 초자권백 추출물이 얻어진다.

기존의 단순한 권백 추출물과 기존의 포제방법으로 가공한 권백탄 추출물보다 식물성 항산화물질인 페놀성 화합물의 추출율이 현저히 높아 보다 우수한 항산화 효과, MMP 저해 효과, 자외선 조사에 의한 MMP 발현 조절효과, 그리고 잔주름 개선 효과 등의 항노화 효과가 더 높아지고, tyrosinase 저해효과, 멜라닌 생합성 저해효과, 미백 효과가 더 높아진다. 또한 기존의 단순한 권백추출물보다 색상이 황색으로 옅어져 화장품에 투입하였을 때 색상의 영향이 현저히 줄어드는 효과가 있다.

포제, 사초법, 초자법, 권백, 항노화, 미백, 화장료.

Description

포제를 이용한 권백추출물 제조 방법 및 이를 유효 성분으로 함유하는 화장료 조성물{MANUFACTURING METHOD FOR EXTRACT OF SELAGINELLA TAMARISCINA USING TRADITIONAL PROCESS AND COSMETIC COMPOSITION CONTAINING THE SAME}

본 발명은 권백(Selaginella tamariscina)을 한방 포제로 가공하여 개량하는 방법과 개량된 권백 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 좀더 상세하게는 사초법 또는 초자법으로 포제한 권백 추출물 0.001∼ 10.0 중량% 함유하며 종래의 단순 권백 추출물 또는 기존 포제품인 권백탄 추출물보다 항산화효과, 기질 금속단백질 분해효소의 활성억제와 발현 저해 효과가 더 증가된 피부외용제 조성물에 관한 것이다. 또한, 티로시나제의 활성을 억제하여 칙칙한 피부색을 개선하거나 피부의 색소침착을 방지하는 효과가 더욱 증가된 피부외용제에 관한 것이다.

자외선에 노출된 피부는 프리라디칼과 활성산소종(ROS)을 생성시켜 피부암, 광독성, 자기면역장애, 광과민증과 피부노화 등을 유발하게 된다(Norins, J. Invest. Dermatol., 39:445, 1962; Cadenas, Ann. Rev. Biochem., 58:79, 1989). 생체 내에서 콜라겐과 같은 세포외기질의 합성과 분해는 적절하게 조절되나 노화가 진행되면서 그 합성이 감소하며 콜라겐을 분해하는 효소인 기질 금속단백질 분해효소(MMP)의 발현이 촉진되어 피부의 탄력이 저하되고 주름이 형성된다. 또한 이러한 분해효소는 자외선 조사에 의해 활성화되기도 한다. 그러므로 세포내에서 활성화가 유도되는 MMP 발현을 조절하거나 그 활성을 억제할 수 있는 물질의 개발이 요구되고 있다.

다음으로, 피부색을 결정하는 인자에는 기본적으로 인종과 지역, 성별, 나이에 따른 차이를 배제하면 기미, 주근깨와 자외선 노출로 인한 태닝과 같은 부분, 또는 전체적인 색소침착, 그 외에 여드름 및 흉터, 각질의 분포 상태와 혈액 순환, 스트레스, 건강상태 등이 있다. 이상의 인자들 가운데에서도 가장 중요한 인자는 색소침착이다. 피부색에 영향을 주는 색소는 멜라닌으로서 이는 자외선과 체내 호르몬 분비 정도에 따라 달라진다. 멜라닌의 생합성은 아미노산의 일종인 티로신이 멜라노사이트의 멜라노좀에서 티로시나제(tyrosinase)에 의해 산화되어 디하이드록시 페닐알라닌(dihydroxy phenylalanine)으로 전환되는 것을 시작으로 계속되는 일련의 산화과정을 거쳐 갈색(pheomelanin), 흑색(eumelanin)의 중합체로 형성된다. 이러한 생합성 과정은 멜라노좀이라는 특수한 세포내 소기관에서 진행되며 멜라닌 과립을 포함한 멜라노좀은 핵 주변 부위에서 수지상 돌기 끝부분으로 이동, 케라티노사이트의 식세포작용에 의해 세포질 내로 이동하여 핵 주변에 축적된다. 멜라닌의 합성과 멜라노좀의 수, 주위의 케라티노사이트로의 이동은 부분적으로 호르몬과 자외선 등에 영향을 받고 일차적으로는 유전적인 영향을 크게 받는다. 그 밖에 티로시나제의 발현 및 멜라닌의 합성, 전송에 관여하는 세포내 조절인자인 싸이토카 인(cytokine), 구리, 아연, 철 등의 금속 이온 및 인터페론, 프로스타글란딘, 히스타민 등이 관여하는 것으로 알려져 있다(박수남:대한화장품학회지, 25: 77-127, 1999). 따라서 피부색을 결정짓는 멜라닌의 합성을 억제하고 이에 관여하는 효소인 티로시나제의 활성을 억제하여 피부의 미백효과를 기대할 수 있다.

권백은 부처손과(Selaginellaceae)에 속하는 여러해살이 사철 푸른 초본식물이다. 이 식물은 5∼20cm 내외로 자라며 밑에서 파생된 근경은 매우 단단하고 짧은데 많은 수염뿌리가 나고 다소 직립하며 거칠게 자란다. 줄기는 여러 갈래로 갈라지고 줄기 끝에 넓적하고 가늘고 작은 바늘 모양의 잎이 밀생하며 그 겉면은 녹색이고 뒷면은 백녹색이다. 대체로 옆으로 퍼져 있으나 건조하게 되면 주먹모양으로 오그라지기 때문에 생약명을 권백(卷柏 Selaginellae Herba)이라 한다. 대체로 습한 바위 위에서 자라며 습기가 있을 때에는 역우산 모양으로 퍼져 있으나 건조하면 오그라지게 된다. 건조한 생약은 짙은 황녹색이고 아주 많은 수의 수염뿌리를 착생한 채 시판 거래되고 있다. 이 생약에 대한 성분학적 연구는 1971년경부터 비롯되었다. 즉 비플라보노이드(Biflavonoid) 화합물로서 아멘토플라본(amentoflavone), 히노키플라본(hinokiflavone), 이소크립토메린(isocryptomerine) 및 소테추플라본 (sotetsuflavone) 등이 분리 보고되어 있으며 이들 화합물은 구조 내에 페놀성 -OH 그룹을 함유하는 페놀성 화합물이다(신동인 외, 생약학회지, 22, 207-210, 1991; 신동인 외, 약학회지, 38, 683-686, 1994).

권백의 화장품에 관한 종래 기술로서 일본의 공개특허 제 2000-143488호는 권백 외 여러 식물 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 대하여 청구하고 있는데, 주로 지속적인 보습 성능에 대하여 기재하고 있다. 즉, 본 발명에서 이루고자 하는 권백을 단독으로 화장품에 적용하여 피부의 노화와 색소 침착을 지연시키는 기능에 대한 것은 아니다.

본 발명자들은 보다 우수한 화장품 원료를 찾고자 하는 연구의 일환으로 여러 천연물을 검색한 결과 권백 추출물이 항산화 및 항노화 효과가 있다는 것을 발견하였다. 그러나 권백의 단순 추출물은 생체 외에서는 효과가 있지만, 실제로 이를 함유한 화장료를 피부에 도포하였을 때는 그 효과가 만족스럽지 못하거나 만족스러운 효과를 보기 위해서는 추출물을 고농도로 투입해야 하는 단점이 있다. 또한 권백 추출물은 외관이 짙은 녹색을 띠고 있어 피부에 만족할 만한 개선효과를 보기위해 고농도로 투입하면 화장품의 색상이 짙은 녹색으로 변하여 아름다운 외관이 중요한 이미지 상품인 화장품에 맞지 않는 단점이 있다.

권백의 단순 추출물이 갖는 이러한 단점을 보완하기 위해 본 발명자들은 국화과 식물인 설련화(Saussurea spp .) 추출물과 함께 사용하였을 때 그 효과가 상승되는 것을 발견하였다(대한민국 특허출원: 제2004-30660호). 그러나 이 발명은 설련 추출물과 같은 또 다른 천연 추출물을 함께 사용하는 방법으로 본 발명에서 제안하는 권백을 가공 처리하여 개량함으로써 효과를 상승시키는 것과는 차이가 있다. 또한 설련추출물을 제조해야하는 번거로움이 있으며 유사종이 약 400여종에 이르러 원료를 표준화하기 어려운 단점이 있다.

포제는 한의학에서 사용되는 전통 생약 가공법제로서 수치(修治) 또는 포자라고도 한다. 약물의 의료적인 목적, 조제(調製) 또는 제제(製劑) 등의 수요에 의 거하여 가공 처리하는 방법의 총칭으로 약물의 형태가 바른 것을 선별하고 잡질을 제거하며 정제, 가열처리, 보조물을 이용한 가공 등이 포함된 용어이다. 포제의 기원은 중국의 가장 오래된 의서인 내경(內經), 신농본초경(神農本草經)에도 기재되어 있는 만큼 2000년이 넘는 역사를 가지며 초기에는 약재를 세정, 세절 등의 간단한 손질을 시작으로 술의 발명으로 그 기술이 급속도로 발전되어, 오랜 처방과 치료의 경험으로 수정, 보완되어 왔다. 포제는 경우에 따라서 보료(輔料)를 가하여 함께 포제하는데, 이러한 것은 의료(醫療)의 요구에 부합되는 것이며, 변증(辨證)에 따른 용약(用藥)의 목적을 달성하기 위함이다. 약물의 포제에 사용하는 보료의 종류가 다양하기 때문에 각기 다른 성질과 작용이 있으며, 이로 인해 포제한 약물이 일으키는 작용도 각기 다르다. 현재 상용되는 보료의 종류는 비교적 많은 편인데, 크게 액체 보료와 고체 보료로 구분할 수 있다. 액체 보료는 술, 식초, 꿀, 생강즙, 감초즙, 흑두즙(黑豆汁), 식염수, 미감수(米감水), 마유(麻油), 젖(乳), 동변(童便), 석회수 등이 사용된다. 고체 보료로는 쌀, 밀기울, 백반(白礬), 두부, 흙, 합분(蛤粉), 모래(河砂, 海砂) 등이 있다. 한의학에서 포제를 사용하는 목적은 약물의 독성과 부작용을 줄이고 치료효과를 높이거나 조제와 제제 및 환자의 복용을 편하게 하고 원료의 저장성 개선과 표준화를 이루기 위한 것이다 (한약포제학, 김기영 외, 신일상사; 한약포제와 임상응용, 최호영 외, 영림사).

권백은 한의학에서도 생품을 그대로 썰어서 사용하거나 만들어 사용하고 있다. 권백탄은 포제법 가운데 보료를 사용하지 않고 220∼300℃의 센불에서 겉이 짙은 흑색이 되고 속은 흑갈색이 될 때까지 볶는 초탄법(炒炭法)을 적용한 것이다. 권백은 생품으로 쓸 때는 파혈(破血)의 효과가 있어 경폐(經閉), 타박상, 복통, 천식 치료에 이용되고 권백탄으로 사용하면 지혈(止血) 효과가 있어 혈변(血便), 혈뇨(血尿), 탈항(脫肛)치료의 효과가 있다고 한다. 그러나 이러한 방법은 한의학에서는 효과를 볼 수 있을지 모르나 220~300℃의 센불에서 약재의 내부까지 태우는 가공은 본 발명이 이루고자 하는 항노화 화장료로서의 목적에 부합하는 목적 성분의 유실과 약재의 탄화로 인한 유해성분의 생성이 우려되는 단점이 있다.

따라서, 본 발명자들은 권백의 용매 추출물이 갖는 상기의 단점을 극복하고자 포제방법으로 연구한 결과, 사초법과 초자법으로 가공한 권백이 생품과 기존 포제품인 권백탄보다 식물성 항산화제인 페놀성 화합물의 추출 수율이 높아지며 이에 따라 자유라디칼, 활성 산소종의 소거활성 및 콜라게나제의 발현과 활성의 억제효과를 높일 수 있음을 발견하고 이를 소량 함유한 화장품을 피부에 도포하였을 때 우수한 주름개선 효과를 줄 수 있음을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다. 또한 티로시나제의 활성을 억제하여 자외선에 의한 색소 침착과 피부의 칙칙해짐을 개선하는 효과가 증가되어 이를 소량 함유한 화장품을 피부에 도포하였을 때 우수한 미백 효과를 줄 수 있음을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다. 또한, 사초법과 초자법으로 가공한 권백은 색상이 황녹색에서 갈색으로 변하여 추출물로 제조하였을 때 색상이 연해져 제품에 고농도로 투입하기 용이함을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서 본 발명에서는 기존의 권백탄의 제조는 센불에서 약초를 완전히 탄화 시키는 것으로 유효성분의 손실과 탄화로 인한 유해성분의 생성이 우려되어 100 ~ 160℃의 보다 약한불에서 보료를 사용하여 가공하는 방법을 적용하였다. 본 발명자들은 권백의 생품이나 권백탄보다 다른 방법으로 포제할 경우 식물성 항산화제인 페놀성 화합물(Polyphenols)의 함량이 증가되고 항산화 활성, 항노화 활성 및 미백 효과가 증가하는 것을 확인하였다. 또한, 저온에서 가열 가공하여 갈색으로 변한 약재를 추출물로 제조하면 짙은 녹색이 황색 추출물로 변하여 제품에 투입하기 용이한 성상으로 개선된다는 것을 발견하여 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 해사와 권백을 혼합하여 100∼160℃에서 가열하여 약재의 겉이 갈색으로 변할 때까지 가공한 사초권백을 제조하여 이를 이용한 사초권백 추출물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또다른 목적은 초산을 4~6% 함유하는 수용액을 권백에 충분히 흡수시킨 다음 100∼160℃에서 가열하여 약재의 겉이 갈색으로 변할 때까지 가공한 초자권백을 제조하여 이를 이용한 초자권백 추출물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 사초법 또는 초자법으로 권백을 포제하여 생품 및 기존 포제품인 권백탄 추출물에 비해 페놀성 화합물의 함량이 높고 항산화 효과, 주름방지효과, 미백효과가 현저히 높으며, 추출물의 색상이 옅어져 제품에 미치는 원료 색상의 영향을 최소화한 추출물을 제조하며 이를 이용한 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

이와 같은 목적을 달성하기 위해 본 발명은 권백의 포제법에 관한 것으로서, 권백을 사초법이나 초자법으로 포제하여 식물성 항산화 물질인 페놀성 화합물이 증가되고 항산화 활성과 항노화 활성, 미백 효과가 증가된 권백 추출물을 제조한다.

또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 기존에 개발된 설련 추출물 및 권백 추출물을 유효성분으로 하는 피부외용제 조성물(대한민국 특허출원: 제2004-0030660호)에서 단순한 권백추출물이 갖는 단점 보완을 위해 설련 추출물을 함께 제조하는 것과는 달리 설련 추출물을 제조하지 않고 권백을 단독으로 이용하여 사초품 또는 초자품으로 가공, 이것을 추출물로 하여 주요 활성성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다.

이하 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다.

먼저, 건조되어 시판되는 권백의 잡질을 제거하고 깨끗한 해사를 동일한 부피비율로 혼합하여 100~160℃에서 교반시키면서 가열하여 원래 황녹색인 약재의 겉이 갈색이 되면 가열을 중지하고 상온에서 식힌다. 이렇게 제조된 사초권백은 해사를 제거하고 추출용매로써 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄 및 헥산 중에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용하여 추출하여 사초권백 추출물을 제조한다.

또는, 건조되어 시판되는 권백의 잡질을 제거하고 초산을 4~6% 함유한 수용액을 충분히 흡수시킨 다음, 100~160℃에서 교반시키면서 가열하여 원래 황녹색인 약재의 겉이 갈색이 되면 가열을 중지하고 상온에서 식힌다. 이렇게 제조된 초자권백은 추출용매로써 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄 및 헥산 중에서 선택된 1종 이상의 용매를 사 용하여 추출하여 초자권백 추출물을 제조한다.

또한, 상기의 방법으로 제조한 사초권백 추출물과 초자권백 추출물을 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에서는 또한 사초권백 추출물과 초자권백 추출물이 권백 생품의 추출 물이나 권백탄 추출물보다 식물성 페놀함량이 현저히 높다는 것을 발견하고 이를 화장료에 적용하였다. 즉, 항산화 활성 또는 콜라게나제 발현 및 활성 조절과 같은 항노화 활성에 영향을 미치는 식물성 페놀함량이 높아지는 것은 실제로 프리라디칼과 활성산소종의 소거활성이 높고 직접 피부에 도포하였을 때 주름 개선효과가 높은 것을 발견 및 확인하고 이를 화장료에 적용한 것이다.

본 발명에서는 또한 사초권백 추출물과 초자권백 추출물이 권백 생품의 추출물이나 권백탄 추출물보다 티로시나제의 활성을 저해하여 멜라닌 생합성을 억제하는 효과가 높아짐을 확인하고 직접 피부에 도포하였을 때 피부를 희게 하고 칙칙한 피부색을 개선하는 것을 발견 및 확인하고 이를 화장료에 적용한 것이다.

본 발명에서는 또한 사초권백 추출물과 초자권백 추출물이 권백 생품의 추출물보다 색상이 옅어져 화장품의 제형에 투입하였을 때 제품의 색상에 대한 영향을 현저히 줄일 수 있음을 확인하고 이를 화장료에 적용한 것이다.

또한 본 발명의 주제는 항산화제, 주름방지제, 피부 미백제로 사용되는 화장료 조성물의 용도이다.

또한, 본 발명에서 목적하는 효과를 얻기 위하여 사초권백 추출물 또는 초자권백 추출물을 조성물 총 중량에 대하여 0.001∼10.0중량%의 양으로 함유함을 특징 으로 한다.

본 발명의 화장료 조성물은 그 제형에 특별히 한정되는 바가 없는데, 예를 들면, 주름개선 기능성 화장품, 유연화장수, 영양화장수, 아이크림, 영양크림, 맛사지크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 에센스, 파우다, 팩 등의 제형을 가질 수 있다.

또한, 각 제형의 화장료 조성물에 있어서, 사초권백 추출물 또는 초자권백 추출물을 포함하여 항산화 및 항노화 원료로서 본 발명이 목적으로 하는 주효과를 손상시키지 않는 범위내에서 다른 성분들을 화장료의 제형 또는 사용목적 등에 따라 당업자가 선정하여 배합할 수 있다.

이하, 실시예를 통해 본 발명을 좀더 구체적으로 설명한다. 단, 이들 실시예는 본 발명의 예시적인 기재일 뿐이며 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되는 것은 아니다.

실시예 1: 권백 생품의 추출물 제조

음건하고 잡질을 제거한 권백 600g에 용매로서 주정 에탄올 10L를 투입하고 70℃에서 3~6시간 동안 환류추출하여 감압여과한 후 그 여액을 40℃의 수조에서 감압농축하여 농축된 에탄올 권백 추출물을 얻었다.

실시예 2: 권백탄 추출물 제조

음건하고 잡질을 제거한 권백 600g을 220~300℃에서 교반시키면서 가열하여 원래 황녹색인 약재의 겉이 초흑색이 되면 가열을 중지하고 소량의 물을 뿌려 불꽃을 끄고 상온에서 식혀 권백탄을 제조한다. 제조된 권백탄에 용매로서 주정 에탄올 10L를 투입하여 70℃에서 3~6시간 동안 환류추출하여 감압여과한 후 그 여액을 40℃의 수조에서 감압농축하여 농축된 에탄올 권백탄 추출물을 얻었다.

실시예 3: 사초권백 추출물 제조

음건하고 잡질을 제거한 권백 600g과 권백이 충분히 묻힐 만큼의 유사한 부피비율의 깨끗한 해사를 혼합하여 100~160℃에서 교반시키면서 가열하여 원래 황녹색인 약재의 겉이 갈색이 되면 가열을 중지하고 상온에서 식혀 사초권백을 제조한다. 해사는 털어서 제거하고 포제한 권백만 골라 용매로서 주정 에탄올 10L를 투입하여 70℃에서 3~6시간 동안 환류추출하여 감압여과한 후 그 여액을 40℃의 수조에서 감압농축하여 농축된 에탄올 사초권백 추출물을 얻었다.

실시예 4: 초자권백 추출물 제조

음건하고 잡질을 제거한 권백 600g에 식초와 유사한 산의 비율로서 초산(acetic acid)를 4~6% 함유하는 초산수용액을 약재에 충분히 흡수시킨 다음 100~160℃에서 교반시키면서 가열하여 원래 황녹색인 약재의 겉이 갈색이 되면 가열을 중지하고 상온에서 식혀 초자권백을 제조한다. 제조된 포제품을 용매로서 주정 에탄올 10L를 투입하여 70℃에서 3~6시간 동안 환류추출하여 감압여과한 후 그 여액을 40℃의 수조에서 감압농축하여 농축된 에탄올 초자권백 추출물을 얻었다.

실험예 1: 사초권백과 초자권백 추출물의 성분 확인 및 함량 실험

본 실시예는 실시예 1과 2, 3, 4에서 수득한 권백의 생품 및 포제품의 추출물의 주요성분 중, 페놀성 물질의 정성분석 및 총 페놀 함량 변화를 확인하기 위해 다음과 같이 수행하였다.

(1) 페놀성 물질의 정성분석

: 추출물을 에탄올에 용해한 용액에 2.5% FeCl₃ 에탄올 용액을 1-2 방울 떨어뜨려 방치할 때, 암녹색으로 정색하거나 침전의 생성 여부를 관찰하였다.

(2) 총 페놀 함량분석

: 추출물 100 mg을 에탄올 10 ml에 용해한 용액 1 ml에 증류수 10ml을 첨가하고, 2ml의 Folin-Ciocalteu phenol reagent(Sigma)첨가하여 혼합한 다음, 실온에서 5분간 반응시킨다. 이 반응물에 20% 소듐 카보네이트를 2ml 첨가하여 혼합한 다음, 상온에서 1시간 식힌 후 680nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때 지표물질은 갈릭산(gallic acid)을 사용하였다.

총 페놀 함량의 결과는 표 1과 같이 사초권백과 초자권백의 추출물이 권백 생품과 권백탄 추출물의 총 페놀 함량보다 높았다.

시료명	총 페놀함량 (gallic acid equivalents) (㎍/㎎ of extract)
실시예 1	259.4
실시예 2	272.9
실시예 3	342.2
실시예 4	328.6

실험예 2: NBT 법을 이용한 항산화 효과 측정 실험

본 실시예는 실시예 1과 2, 3, 4에서 수득한 권백의 생품 및 포제품의 추출물의 항산화 효과를 확인하기 위해 실험실 조건에서 다른 항산화제 즉, 레티놀과 BHT를 비교샘플로 하였으며, NBT법을 이용하여 항산화 활성을 측정하였다.

항산화 효과를 측정하기 위해서 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 생성되는 활성산소를 NBT법에 의해 측정하고 피검물질이 활성산소를 제거하는 효과, 즉 활성산소 소거효과를 평가한다. 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 활성산소를 생성시킨다. 이 활성산소가 니트로블루테트라졸리움(Nitro Blue Tetrazolium;NBT)과 반응하여 이것에 의해 생성되는 청색을 파장 560nm에서 측정하는 것으로 활성산소 소거율을 측정한다.

측정방법으로서

1. 0.05M Na₂CO₃ ------------------------------------ 2.4ml

2. 3mM 크산틴 용액--------------------------------- 0.1ml

3. 3mM EDTA 용액----------------------------------- 0.1ml

4. BSA 용액---------------------------------------- 0.1ml

5. 0.72mM NBT 용액--------------------------------- 0.1ml

6. 크산틴 옥시다제 용액---------------------------- 0.1ml

7. 6mM CuCl₂ 용액----------------------------------- 0.1ml

① 바이엘병에 1,2,3,4,5를 가하고 여기에 시료용액 0.1ml을 첨가하고 25℃에서 10분간 방치한다.

② 6을 가하여 빨리 교반하고 25℃에서 20분간의 배양을 개시한다.

③ 그 후 7을 가하여 반응을 정지시키고 560nm에서의 흡광도 St를 측정한다.

④ 공시험은 시료용액 대신에 증류수를 사용한 것을 상기와 똑같이 조작해 흡광도 Bt를 측정한다.

⑤ 역시, 시료용액의 블랭크(Blank)는 6 대신에 증류수를 사용해 똑같이 조작하여 흡광도 Bo를 측정한다.

효과의 결과는 수학식 1에 의하여 산출하였으며, 결과는 표 2와 같다.

억제율(%) = [1-(St-So)/(Bt-Bo)]×100

St : 시료용액의 효소 반응 후의 560nm에서의 흡광도

Bt : 공시험용액의 효소 반응 후의 560nm에서의 흡광도

So : 시료용액의 효소 무첨가시 반응전의 560nm에서의 흡광도

Bo : 공시험용액의 효소 무첨가시 반응전의 560nm에서의 흡광도

결과는 표 2와 같이 사초권백 추출물과 초자권백이 권백의 생품과 권백탄 추출물보다 낮은 농도에서 retinol과 BHT과 유사하거나 우수한 항산화 효과를 가지고 있었다.

시료명	처리 농도(%)	항산화효과(%)
실시예 1	0.1	92
실시예 2	0.1	89
실시예 3	0.05	98
실시예 4	0.05	97
retinol	0.1	93
BHT	0.1	90

실험예 3: DPPH 법을 이용한 항산화 효과 측정 실험

본 실시예는 실시예 1과 2, 3, 4에서 수득한 권백의 생품 및 포제품의 추출물의 항산화 효과를 측정하기 위해 실험실 조건에서 녹차추출물과 비타민 E와 같은 항산화제를 비교 샘플로 하여 DPPH법을 이용, 항산화 활성을 측정하였다.

DPPH법은 2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl free radical (DPPH)라는 유리기를 사용하여 환원력에 의한 항산화 활성을 측정한다. 피검물질에 의해 DPPH가 환원되어 흡광도가 감소하는 정도를 공시험액의 흡광도와 비교하여 파장 560nm에서 자유라디칼 소거율을 측정한다.

사용한 시약으로서는 2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl free radical(Aldrich Chem. Co., MW=618.76) 0.1mM 용액으로서 61.88mg을 메탄올에 용해하여 100ml로 한다.

측정방법으로서,

① 96-웰 플레이트에 0.1mM DPPH 용액 0.15ml에 시료용액 0.15ml를 가하여 빨리 교반하고 25℃에서 10분간의 배양을 개시한다.

② 그 후 560nm에서의 흡광도 St를 측정한다.

③ 공시험은 시료용액 대신에 증류수를 사용한 것을 상기와 똑같이 조작해 흡광도 Bt를 측정한다.

④ 역시, 시료용액의 블랭크(Blank)는 0.1mM DPPH 용액 대신에 메탄올을 사용해 똑같이 조작하여 흡광도 Bo를 측정한다.

효과의 결과는 수학식 2에 의하여 산출하였으며, 결과는 표 3과 같다.

억제율(%) = [1-(St-So)/(Bt-Bo)]×100

St : 시료용액의 자유라디칼 소거 후의 560nm에서의 흡광도

Bt : 공시험용액의 자유라디칼 소거 후의 560nm에서의 흡광도

So : 시료용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도

Bo : 공시험용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도

결과는 표 3에 나타내었고 사초권백 추출물과 초자권백 추출물은 0.03% 농도에서 녹차추출물과 비타민E 보다 우수한 항산화 효과를 가지고 있었다.

시료명	처리 농도(%)	항산화효과(%)
실시예 1	0.1	79
실시예 2	0.1	81
실시예 3	0.03	96
실시예 4	0.03	98
녹차 추출물	0.1	66
비타민 E	0.1	72

실험예 4: in vitro MMP -1 inhibition assay

기질 금속단백질분해효소(MMP-1) 저해 활성은 생화학적 모델에서 측정하였는데, 이는 정제된 콜라게나제 및 이의 기질인 플루오레세인에 접한된 콜라겐과 젤라틴의 이용을 기초로 한다(EnzChek(상표명) 젤라티나제/콜라게나제 키트, 몰큘라프루브). 클로스트리디움 히스토리티컴으로부터 정제된 콜라게나제를 상기 EnzChek(상표명)젤라티나제/콜라게나제 키트내에 공급하였다. 돼지 피부로부터 정제하고 플로오레세인에 접합된 DQ-콜라겐과 0.05M 트리스-HCl, 0.15M NaCl, 5mM CaCl₂ 및 0.2mM 나트륨 아지드(pH 7.6)로 이루어지는 반응 완충액은 EnzChek(상표명)젤라티나제/콜라게나제 키트(몰큘라 프로브스)를 이용하였다. 실시예 1과 2, 3, 4의 추출물은 상기 반응 완충액 내에 용해시켰다. 이는 4; 2; 0.4; 0.2; 0.1%(w/v)에서 테스트하였다. 테스트 추출물의 희석액은 25㎍/ml의 DQ-콜라겐 및 0.1U/ml의 콜라게나제와 함께 실온에서 15분, 45분, 120분 동안 항온처리하였다.

각각의 실험조건에서 콜라게나제와 DQ-콜라겐 혼합물에 상응하는 대조용 혼합물(control)도 동일하게 항온처리하였다. 또한 각각의 실험 조건에서 Blank, 이하 '효소 비함유 blank'이라 칭하는 샘플은 DQ-콜라겐의 존재 및 콜라게나제의 부재하에서 항온처리하였다. 각각의 실험은 3회 수행하였다.

15분, 45분, 120분 경과 후 DQ-콜라겐의 분해에 상응하는 신호는 형광측정기(여기:485nm, 방출 505nm)로 측정하였다. '효소 비함유 blank' 형광값을 기준으로 하여 각각의 샘플의 형광값을 측정하였다. 결과는 샘플당 형광 단위 및 대조군에 대한 변이율(%)로 나타냈다.

결론적으로 선택된 실험 조건하에서 0.04 내지 4%(v/v)에서 테스트된 실시예 1과 2, 3, 4에서 수득한 권백의 생품 및 포제품의 추출물은 투여랑 의존성으로 항콜라게나제/젤라티나제 활성을 보유하였다.

결과는 표 4에 나타내었고, 사초권백과 초자권백 추출물은 0.04% 처리시 클로스트리디움 콜라게나제의 콜라겐 분해활성의 95%를 억제하였으며 이는 녹차추출물의 저해 효과보다 우수하게 나타났다.

실험샘플	저해율(%)
실험샘플	처리농도 0.04%	처리농도 0.1%
실시예 1	29	82
실시예 2	32	69
실시예 3	74	96
실시예 4	76	97
retinol	28	64
녹차추출물	57	83

실험예 5: 자외선 조사에 의한 MMP -1 발현억제 평가

본 실시예는 실시예 1과 2, 3, 4에서 수득한 권백의 생품 및 포제품의 추출물의 UV 조사 및 시료 첨가 후 MMP-1 농도를 측정하기 위해서 ELISA를 실시하였다.

UV 챔버를 이용하여 인간 진피 섬유아세포에 UVA를 5J/㎠의 에너지로 조사한다. 자외선 조사량과 배양시간은 예비 실험을 통하여 섬유아세포에서 MMP 발현량이 최대가 되는 조건을 확립하였다. 음성 대조군은 은박지로 싸서 UVA의 환경에 같은 시간 유지하였다. UVA 방출량은 UV 라디오미터를 이용하여 측정하였다. UVA가 조사되는 동안의 세포는 이전에 분주된 배지 그대로이고 UVA를 조사한 후 샘플이 들어간 배지로 교환하여 24시간 배양 후 배지를 회수하여 96-웰에 코팅한다. 일차항체(MMP-1(Ab-5) 단일클론항체와 MMP-2(Ab-3) 단일클론항체)를 처리하고 37℃에서 60분 반응시킨다. 이차항체인 안티마우스 IgG(whole mouse, alkaline phosphatase conjugated)를 다시 60분정도 반응시킨 후, 알카린 포스파타제 기질 용액(1mg/mlρ-nitrophenyl phosphate in diethanolamine 완충용액)을 상온에서 30분간 반응시키고 마이크로플레이트 리더로 405nm에서 흡광도를 측정한다. 대조군으로는 시료를 첨가하지 않은 것을 사용한다.

자외선 조사시에 발현이 유도되는 MMP-1에 대하여, 시료를 처리하지 않은 대조군에 비해 사초권백 추출물과 초자권백 추출물은 약 80% 이상의 억제율을 보였으며 이는 대조군으로 사용한 레티놀의 억제율 보다 우수한 결과이다(표 5).

시험군	처리농도(%)	MMP-1 발현억제율(%)
대조군	-	-
실시예 1	0.1	75
실시예 2	0.1	69
실시예 3	0.05	84
실시예 4	0.05	87
retinol	0.1	31

실험예 6: mushroom tyrosinase 를 이용한 tyrosinase 억제효과 측정 실험

본 실시예는 실시예 1과 2, 3, 4에서 수득한 권백의 생품 및 포제품의 추출물의 미백효과를 확인하기 위해 티로시나제(tyrosinase)라는 효소의 기능이 억제되는 정도를 보고 미백효과를 판단한 것이다.

티로시나제는 생체내에서 티로신(tyrosine)이라는 물질의 산화과정을 촉진하여 멜라닌이 생성되게 도와주는 효소이다. 본 실시예에서는 이 효소의 기능을 억제하여 티로신이 산화되어 멜라닌이라는 흑색의 고분자를 형성하는 것을 억제하는 정도를 측정하는 방법(Pomerantz S. H.: J. Biochem ., 24: 161 - 168, 1996)을 응용하여 미백효과를 판정하였다.

각 시료들의 티로시나제에 대한 저해활성은 시료 15㎕를 96 웰 플레이트에 넣고, 50 mM 인산 완충액(pH 6.5) 150 μl, 1.5 mM L-티로신 용액 25㎕를 넣은 후, 머쉬룸 티로시나제(1,500 units/ml, Sigma사) 10㎕를 첨가하여 37℃에서 20분간 반응시킨 후, 마이크로플레이트 판독기(microplate reader, ELx800, 미국)를 사용하여 490nm에서 흡광도를 측정하여 티로시나제에 대한 저해율을 측정하였다. 티로시나제에 대한 저해율(%)은 수학식3에 의하여 계산하였으며, IC₅₀값은 티로시나제 효소 활성을 50% 저해하는 물질의 농도이다.

저해율 (%) = [(D-C)-(B-A)]/(D-C)× 100

A : 시료를 넣은 웰의 반응전 흡광도

B : 시료를 넣은 웰의 반응후 흡광도

C : 시료를 넣지 않은 웰의 반응전 흡광도

D : 시료를 넣지 않은 웰의 반응후 흡광도

티로시나제 활성 억제효과를 시험한 결과, 사초권백 추출물과 초자권백 추출물의 IC₅₀값은 0.01%, 0.02%로 나타나 권백 추출물과 권백탄 추출물보다 티로시나제 저해효과가 높아졌으며 기존에 알려진 미백제인 코지산, 알부틴, 상백피 추출물 등 에 비해 우수한 효과를 나타내었다(표 6).

머쉬룸 티로시나제 활성 저해효과

시료	mushroom tyronase 저해 효과 (IC₅₀)
실시예 1	0.05%
실시예 2	0.07%
실시예 3	0.01%
실시예 4	0.02%
kojic acid	0.037%
arbutin	0.4%
상백피 추출물	10%
유용성 감초 추출물	0.08%

실험예 7: B16F1 melanocyte 를 이용한 세포내 tyrosinase 의 활성 억제효과 측정 실험

본 실시예는 실시예 1과 2, 3, 4에서 수득한 권백의 생품 및 포제품의 추출물의 미백효과를 확인하기 위해 B16F1 멜라노싸이트 내 티로시나제의 활성 억제 정도를 측정하여 판단한 것이다.

본 실시예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 마우스에서 유래한 세포균주이며 티로시나제라는 효소를 합성하는 세포이다. 이 세포의 인공배양 중에 시료를 처리하고 세포에서 티로시나제를 분리하여 효소의 활성을 측정함으로써 티로시나제의 활성 억제 정도를 비교 평가하였다.

본 실시예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 ATCC(American Type Culture Collection, 기탁번호 : 6323)로부터 분양받아 사용하였다. B16F1 멜라노싸이트의 티로시나제의 활성 억제효과 측정은 다음과 같이 행하였다.

B16F1 멜라노싸이트를 6 웰 플레이트에 각 웰당 2×10⁶ 농도로 분주하고 세포를 부착시킨 후 독성을 유발하지 않는 농도로 시료를 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 72시간 배양 후 세포를 Trypsin-EDTA로 떼어낸 후 세포수를 측정한 다음 원심 분리하여 세포를 회수하였다. 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후 균질화 버퍼(50mM 소듐 포스페이트, pH 6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF) 1 ml를 첨가하여 5분간 와류하여 세포를 파쇄하고, 원심분리(3,000 rpm, 10분)하여 상등액을 회수하였다. 50 mM 소듐 포스페이트 버퍼(pH 6.5)에 1.5 mM L-티로신, 0.06 mM L-DOPA, 세포 상등액을 각각 넣고, 37℃에서 30분간 배양한 후 마이크로플레이트 판독기로 490nm에서 흡광도를 측정하여 티로시나제 효소 활성 억제효과를 측정하였다. B16F1 멜라노싸이트의 티로시나제의 활성 억제율(%)은 수학식 4에 의하여 계산하였으며, IC₅₀값은 티로시나제 효소의 활성을 50% 저해하는 물질의 농도이다.

저해율(%) = [(A-B)/A]×100

A: 시료를 첨가하지 않은 웰의 티로시나제 효소 활성

B: 시료를 첨가한 웰의 티로시나제 효소 활성

B16F1 멜라노싸이트의 티로시나제 효소의 활성 억제효과를 측정한 결과, 사초권백 추출물과 초자권백 추출물의 IC₅₀값은 0.08%와 0.06%로 나타나 기존의 미백제인 코지산, 알부틴, 유용성 감초 추출물, 상백피 추출물 등에 비해 낮은 농도에서도 티로시나제의 활성을 효과적으로 저해하는 것으로 나타났으며 기존 권백 추출 물과 권백탄 추출물보다 효과가 개선된 것으로 나타났다(표 7).

B16F1 멜라노싸이트의 티로시나제의 활성 억제 효과

시료	멜라노싸이트의 티로시나제 활성저해 효과 (IC₅₀)
실시예 1	0.18%
실시예 2	0.13%
실시예 3	0.08%
실시예 4	0.06%
kojic acid	0.1%
arbutin	0.8%
상백피 추출물	0.5%
유용성 감초 추출물	0.1%

실험예 8: B16F1 melanocyte 를 이용한 melanin 생성 억제효과 측정 실험

본 실시예는 실시예 1과 2, 3, 4에서 수득한 권백의 생품 및 포제품의 추출물의 미백효과를 확인하기 위해 B16F1 멜라노싸이트에 대한 멜라닌 생성 억제 정도를 보고 미백 효과를 판단한 것이다.

본 실시예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 마우스에서 유래한 세포균주이며, 멜라닌이라는 흑색색소를 분비하는 세포이다. 이 세포의 인공배양중에 시료를 처리하여 멜라닌 흑색색소가 감소하는 정도를 비교 평가하였다. 본 실시예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 ATCC(American Type Culture Collection, 기탁번호: 6323)로부터 분양받아 사용하였다.

B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생합성 억제효과 측정은 다음과 같이 행하였다. B16F1 멜라노싸이트를 6 웰 플레이트에 각 웰당 2×10⁶ 농도로 분주하고 세포를 부착시킨 후 독성을 유발하지 않는 농도로 시료를 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 72시간 배양 후 세포를 trypsin-EDTA로 떼어낸 후 세포수를 측정한 다음 원심분리하여 세포를 회수하였다. 세포내 멜라닌의 정량은 로탄(Lotan : Cancer Res., 40: 3345-3350, 1980)의 방법을 약간 변형하여 실시하였다. 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후 균질화 버퍼액(50mM 소듐 포스페이트, pH 6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF) 1 ml를 첨가하여 5분간 와류하여 세포를 파쇄하였다. 원심분리(3,000 rpm, 10분)하여 얻은 세포 여액에 1 N NaOH(10% DMSO)를 첨가하여 추출된 멜라닌을 용해한 후 마이크로 플레이트 판독기로 405nm에서 멜라닌의 흡광도를 측정한 다음 멜라닌을 정량하여 시료의 멜라닌 생성 저해율(%)을 측정하였다. B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생성 저해율(%)은 수학식 5에 의하여 계산하였으며, IC₅₀값은 멜라닌 생성을 50% 저해하는 물질의 농도이다.

저해율 (%) = [(A-B)/A]×100

A : 시료를 첨가하지 않은 웰의 멜라닌 양

B : 시료를 첨가한 웰의 멜라닌 양

B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생성 억제 효과를 시험한 결과 사초권백 추출물과 초자권백 추출물의 IC₅₀값은 0.02%와 0.03%로 나타나 권백의 생품과 권백탄 추출물 보다 미백활성이 개선되었으며, 기존의 미백제인 하이드로퀴논, 알부틴, 유용성 감초 추출물, 상백피 추출물 등에 비해 유사하거나 우수한 효과를 나타내었다( 표 8).

B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생성 억제 효과

시료	멜라닌 합성 저해 효과 (IC₅₀)
실시예 1	0.1%
실시예 2	0.06%
실시예 3	0.02%
실시예 4	0.03%
hydroquinone	0.03%
arbutin	0.5%
상백피 추출물	5%
유용성 감초 추출물	0.04%

실시예 5 내지 8 및 비교예 1

본 실시예는 실시예 1과 2, 3, 4에서 수득한 권백의 생품 및 포제품의 추출물을 함유한 화장료를 제조하여 사람을 대상으로 피부 탄력 개선 효과와 피부색 개선효과를 비교예 1과 비교실험을 행하여 평가하였다.

비교실험에 사용된 화장료는 크림형태이고, 그 조성은 표 9에 나타낸 바와 같다. 우선 표 9에 기록되어 있는 나)상을 가열하여 70℃에 보존한다. 이것에 가)상을 가하여 예비유화 후 호모믹서로 균일하게 유화하고 다음에 서서히 냉각하여 크림(실시예 5 내지 8, 비교예 1)을 제조한다. 실험자(20세-35세의 여성) 35명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 실시예 5 내지 8에서 제조된 크림을, 얼굴 왼쪽 부위에는 비교예 1에서 제조된 크림을 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 도포하였다.

원료		실시예 5	실시예 6	실시예 7	실시예 8	비교예 1
가	스테아릴 알콜	8	8	8	8	8
	스테아린산	2	2	2	2	2
	스테아린산 콜레스테롤	2	2	2	2	2
	스쿠알란	4	4	4	4	4
	2-옥틸도데실알콜	6	6	6	6	6
	폴리옥시에틸렌(25몰부가)알콜에스테르	3	3	3	3	3
	글리세릴모노스테아린산 아스테르	2	2	2	2	2
나	실시예 1	1	-	-	-	-
	실시예 2	-	1	-	-	-
	실시예 3	-	-	1	-	-
	실시예 4	-	-	-	1	-
	프로필렌글리콜	5	5	5	5	5
정제수	적량	적량	적량	적량	적량	적량

주)단위: 중량%

실험완료 후 피부 잔주름 완화 효과는 제품 사용 전과 2개월간 사용 후에 안면 눈꼬리 주위의 주름을 실리콘 수지 복사물(레플리카)로 채취하고, 이것을 피부 미세 주름 장치와 피부 영상 분석기로 눈가 잔주름의 상태를 비교하였다. 표 10은 실시예 5 내지 8에서 제조된 크림을 사용한 실험자의 눈가 평균 잔주름 깊이 및 주름 감소율을 비교예 1의 크림을 사용한 실험자와 비교한 것이다. 표 10에서 나타난 바와 같이 사초권백 추출물과 초자권백 추출물을 함유한 크림을 도포한 실험자의 안면 눈주위 피부에서 피부 주름 개선 효과가 우수함을 알 수 있다.

시험군	기간	평균 잔주름 깊이	주름깊이 감소율(%)
실시예 5	사용 전	0.196
실시예 5	2개월 후	0.183	7.08
실시예 6	사용 전	0.194
실시예 6	2개월 후	0.179	8.59
실시예 7	사용 전	0.199
실시예 7	2개월 후	0.175	13.62
실시예 8	사용 전	0.196
실시예 8	2개월 후	0.174	12.49
비교예 1	사용 전	0.198
비교예 1	2개월 후	0.191	3.67

n=35, p＜0.05

실험자(20세-35세의 여성) 40명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 실시예 5 내지 8에서 제조된 크림을, 얼굴 왼쪽 부위에는 비교예 1에서 제조된 크림을 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 도포하였다. 시험 완료 후 얼굴 좌우 양편의 도포 부위 피부를 화상분석기 및 색차계로 얼굴색을 비교하여 가장 어두운색을 5, 중간색을 3, 가장 환한 색을 1로 정하고 그 중간정도를 어림잡아 평가하였다. 표 11은 실시예 5에서 8 사이에 제조된 크림을 사용한 실험자의 안면 피부색을 비교예 1로 만든 크림을 사용한 실험자의 안면 피부색과 비교한 것이다. 시험 완료 후 얼굴 좌우 양편의 도포 부위 피부를 화상분석기 및 색차계로 얼굴색을 비교하여 가장 어두운색을 5, 중간색을 3, 가장 환한 색을 1로 정하고 그 중간정도를 어림잡아 평가하였다.

표 11에서 나타낸 바와 같이 사초권백 추출물과 초자권백 추출물을 함유한 크림을 도포한 실험자의 안면 피부에서 미백효과가 우수함을 알 수 있다.

사용 제품	얼굴 부위	평균 피부색	개선 정도
실시예 5	왼쪽	3	0.25
실시예 5	오른쪽	2.75	0.25
실시예 6	왼쪽	2.75	0.0
실시예 6	오른쪽	2.75	0.0
실시예 7	왼쪽	3	0.5
실시예 7	오른쪽	2.5	0.5
실시예 8	왼쪽	2.75	0.5
실시예 8	오른쪽	2.25	0.5

n=40, p＜0.05

실시예 9: 실시예 3, 4에서 수득한 사초권백 및 초자권백 추출물을 함유한 화장수의 제조

95% 에탄올 8g에 폴리피로리돈 0.05g, 올레일알콜 0.1g, 폴리옥시에틸렌모노올레이트 0.2g, 향료 0.2g, 파라옥시안식향산메틸에스테르 0.1g, 소량의 산화방지제, 소량의 색소를 혼합용해 한다. 실시예 3에서 수득한 사초권백 추출물 0.05g(또는 실시예 4에서 수득한 초자권백 추출물 0.05g), 글리세린 5g을 정제수 85.33g에 용해한 것에 상기 혼합액을 첨가한 후 교반하여 피부개선 효과가 있는 화장수를 얻었다.

실시예 10: 실시예 3, 4에서 수득한 사초권백 및 초자권백 추출물을 함유한 유액의 제조

세틸알콜 1.2g, 스쿠알란 10g, 바세린 2g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.2g, 글리세린모노에스테아레이드 1g, 폴리옥시에틸렌(20몰부가)모노올레이트 1g 및 향료 0.1g을 70℃에서 가열혼합용해하고, 실시예 3에서 수득한 사초권백 추출물 0.5g (또는 실시예 4에서 수득한 초자권백 추출물 0.5g), 디프로필렌글리콜 5g, 폴리에틸렌글리콜-1500 2g, 트리에탄올아민 0.2g, 정제수 76.2g을 75℃로 가열해서 용해시킨다. 양자를 혼합하여 유화시킨 후 냉각하여 수중유(O/W)형의 피부개선효과가 있는 유액을 얻었다.

실시예 11: 실시예 3, 4에서 수득한 사초권백 및 초자권백 추출물을 함유한 미용액의 제조

95% 에틸알콜 5g에 폴리옥시에틸렌솔비탄모노올레이트 1.2g, 키툴로오즈 0.3g, 히야론산나트륨 0.2g, 비타민 E-아세테이트 0.2g, 감초산 나트륨 0.2g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.1g, 실시예 3에서 수득한 사초권백 추출물 1g (또는 실시예 4에서 수득한 초자권백 추출물 1g) 및 적량의 색소를 혼합하여 피부개선 효과가 있는 미용액을 얻었다.

이상에서 설명된 바와 같이, 본 발명에 따르면 권백을 사초법으로 포제한 사초권백과 초자법으로 포제한 초자권백으로 가공함으로써 기존의 단순한 권백 추출물과 기존의 포제방법으로 가공한 권백탄 추출물보다 식물성 항산화물질인 페놀성 화합물의 추출율이 현저히 높아 보다 우수한 항산화 효과를 제공할 수 있다.

또한 본 발명의 초자권백 추출물과 사초권백 추출물은 기존의 단순한 권백추출물과 권백탄 추출물에 비해 MMP 저해 효과, 자외선 조사에 의한 MMP 발현 조절효과, 그리고 잔주름 개선 효과 등의 항노화 효과가 더 우수하다.

또한 초자권백 추출물과 사초권백 추출물로 가공하였을 때 기존의 단순한 권백추출물과 권백탄 추출물에 비해 tyrosinase 저해효과, 멜라닌 생합성 저해효과, 그리고 피부색을 희게 하는 미백 효과가 더 높아진다.

또한 기존의 단순한 권백추출물은 외관 색상이 짙은 녹색이었으나 초자권백 추출물과 사초권백 추출물로 가공하였을 때는 색상이 황색으로 옅어져 화장품에 투입하였을 때 전체 화장품의 색상에 미치는 영향이 현저히 줄어드는 효과가 있다.

따라서, 이러한 초자권백 추출물과 사초권백 추출물을 함유하는 화장수, 크림, 유액, 팩, 파우더 등의 화장료 조성물은 항산화 효과와 피부 잔주름 개선과 같은 우수한 항노화 효과를 갖는 피부 외용제로 사용할 수 있다.

이상에서는 본 발명의 바람직한 실시예에 대해 설명하였으나 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본원 발명의 요지를 벗어남이 없이 다양한 변형실시가 가능할 것이며, 이러한 변형실시는 본원발명의 보호범위에 속하는 것으로서 본원발명의 보호범위는 특허청구범위에 기재된 바에 따라 해석되어야 할 것이다.

Claims

권백을 해사와 동량으로 혼합하여 100∼160℃에서 권백의 겉이 갈색이 될 때까지 교반 가열한 후 식히는 단계;및

해사를 제거하고 상기 포제한 권백을 추출용매를 투입하여 70℃에서 3∼6시간 동안 환류추출하여 감압여과한 후 그 여액을 40℃의 수조에서 감압농축하여 농축된 사초권백 추출물을 얻는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 권백추출물 제조방법.
권백에 초산(acetic acid)을 4~6% 함유하는 초산수용액을 충분히 흡수시킨 후 100~160℃에서 권백의 겉이 갈색이 될 때까지 교반 가열한 후 식히는 단계; 및

상기 포제한 권백을 추출용매를 투입하여 70℃에서 3∼6시간 동안 환류추출하여 감압여과한 후 그 여액을 40℃의 수조에서 감압농축하여 농축된 초자권백 추출물을 얻는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 권백추출물 제조방법.
제1항 또는 제2항에 있어서,

상기 추출용매는 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄 및 헥산으로 이루어진 군에서 선택된 1종을 단독으로 사용하거나 2종 또는 3종의 용매를 혼합하여 사용하는 것을 특징으로 하는 권백추출물 제조방법.
제1항 또는 제2항에 의해 제조된 권백추출물을 조성물 총중량에 대해 0.001 ∼10.0중량%의 양으로 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제4항에 있어서,

상기 화장료 조성물은 피부 노화 방지용으로 사용되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제4항에 있어서,

상기 화장료 조성물은 피부 미백용으로 사용되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제4항에 있어서,

상기 화장료 조성물은 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W) 또는 유중수(W/O)형의 에멀젼, 연고의 제형 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.