KR100517397B1

KR100517397B1 - 피라졸로피리딜피리다지논 유도체 및 이를 포함하는 기관지 확장제

Info

Publication number: KR100517397B1
Application number: KR10-1999-7002884A
Authority: KR
Inventors: 고노야스시; 오가타다케노부; 아와노가쓰야; 마쓰자와가요코; 도루다로
Original assignee: 교린 세이야꾸 가부시키 가이샤
Priority date: 1996-10-04
Filing date: 1997-09-26
Publication date: 2005-09-29
Anticipated expiration: 2017-09-26
Also published as: CN1232463A; US6265577B1; CN1083841C; DE69717867D1; EP0989129A1; AU4321397A; WO1998014448A1; DE69717867T2; EP0989129A4; ES2187814T3; KR20000048874A; ATE229527T1; CA2267103C; AU733316B2; HUP9903018A2; EP0989129B1; CA2267103A1

Abstract

본 발명은 포스포디에스테라제 억제 활성이 있으며 기도에 선택적으로 강력한 기관지 확장 효과를 갖는 화학식 1의 신규한 피라졸로피리딜피리다지논 유도체 및 약리학적으로 허용되는 이의 염, 이들의 제조방법 및 활성성분으로서 당해 화합물을 함유하는 기관지 확장제에 관한 것이다.

화학식 1

상기식에서,

R¹은 C₁-C₄저급 알킬 또는 C₃-C₆사이클로알킬이고,

R², R³, R⁴및 R⁵는 각각 독립적으로 수소, C₁-C₄저급 알킬 또는 페닐이거나, R³과 R⁵는 결합하여 이중 결합을 형성할 수 있다.

Description

피라졸로피리딜피리다지논 유도체 및 이를 포함하는 기관지 확장제 {Pyrazolopyridylpyridazinone derivatives and a bronchodilator comprising the same}

본 발명은 포스포디에스테라제 억제 활성이 있으며 기도에 선택적이고 강력한 기관지 확장 효과를 갖는 신규한 피라졸로피리딜피리다지논 유도체 및 이들의 제조방법에 관한 것이다.

디하이드로피리다지논 및 피리다지논 그룹이 피라졸로피리딘 환의 3 위치에서 치환된 화합물이 일본 공개특허공보 제(평)2-243689호 및 제(평)4-253978호에 개시되어 있다. 그러나, 이들 공개특허공보에서 청구된 화합물은 피라졸로피리딘 환의 2번 위치의 치환체가 벤젠 유도체 등의 아릴 그룹으로 한정되어 있으며 알킬 그룹인 본 발명의 화합물은 포함되어 있지 않다. 또한, 기관지 확장 효과를 갖는 피라졸로피리딘 유도체가 일본 공개특허공보 제(평)8-12673호에 개시되어 있지만 여기에 개시된 화합물은 본 발명의 화합물과 완전히 상이한 구조를 갖는다.

세포내의 사이클릭 AMP나 GMP의 증강으로 인해서 기관지 확장 효과가 야기된다고 밝혀진 이래, 사이클릭 AMP나 GMP를 분해하는 효소인 포스포디에스테라제의 억제제가 기관지 확장제로서 주목받고 있다. 포스포디에스테라제 억제제로서 일반적인 약제로 테오필린을 들 수 있지만, 테오필린은 표적 기관에 대한 선택성이 낮다. 따라서, 테오필린을 기관지 확장 효과를 목적으로 천식 환자 등에 사용하는 경우, 심장 박동수 증가, 구토, 중추작용 등의 바람직하지 않은 작용도 빈번하게 발생한다. 표적 기관인 기도에 선택적으로 작용하며 강력한 포스포디에스테라제 억제 활성을 통하여 기관지 확장 효과를 발현하는 약제의 개발은 부작용이 적은 이상적인 약제로서 강력하게 요망된다.

본 발명자들이 포스포디에스테라제 억제 활성을 가지며 기도에 선택적이고 강력한 기관지 확장 효과를 갖는 화합물에 관해서 깊이 연구를 거듭한 결과, 지금까지 공지된 기관지 확장제와는 상이한 구조를 갖는 신규한 피라졸로피리딜피리다지논 유도체가 안전성도 높고 기도에 선택적이며 강력한 기관지 확장 효과를 갖는다는 것을 밝혀내어 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

즉, 본 발명은 화학식 1의 피라졸로피리딜피리다지논 유도체, 약리학적으로 허용되는 이의 염 및 활성 성분으로서 이들을 적어도 1종 이상 함유하는 기관지 확장제를 제공한다.

위의 화학식 1에서,

R¹은 탄소수 1 내지 4의 저급알킬 그룹 또는 탄소수 3 내지 6의 사이클로알킬 그룹이고,

R², R³, R⁴ 및 R⁵는 동일하거나 상이하게 수소 원자, 탄소수 1 내지 4의 저급 알킬 그룹 또는 페닐 그룹이거나, R³과 R⁵가 결합하여 이중 결합을 형성할 수 있다.

본 발명에서 화학식 1의 화합물의 약리학적으로 허용되는 염에는 염산염, 브롬화수소산염, 시트르산염, 메탄설폰산염, 타르타르산염과 같은 산 부가염을 들 수 있다.

또한, 본 발명의 화학식 1에서 「저급알킬 그룹」은 메틸, 에틸 및 프로필과 같은 탄소수 1 내지 4의 직쇄 또는 측쇄의 탄화수소이며, 「사이클로알킬 그룹」은 탄소수 3 내지 6의 환상 탄화수소를 나타낸다. 또한, 「할로겐 원자」는 염소, 브롬, 요오드 원자를 나타낸다.

본 발명에 따르면 상기 화학식 1의 화합물 중에서 R³과 R⁵가 이중 결합을 형성하지 않는 화합물, 즉 화학식 1a의 화합물은 하기 화학식 6의 화합물을 하이드라진과 반응시킴으로써 제조할 수 있다.

위의 화학식 1a 및 화학식 6에서,

R¹은 상기 정의한 바와 같고,

R², R⁴, R⁶및 R⁸는 동일하거나 상이하게 수소 원자, 탄소수 1 내지 4의 저급 알킬 그룹 또는 페닐 그룹이다.

반응은 유기용매, 예를 들면, 벤젠, 톨루엔, 아세트산, 에탄올 등에서 반응 온도로서는 실온 내지 용매 환류 온도에서 수행할 수 있다. 이때, 반응 용매로서는 에탄올이 바람직하고 반응 온도는 가열 환류 온도가 바람직하다.

또한 화학식 1에서 R³와 R⁵가 결합하여 이중 결합을 형성하는 화합물, 즉 화학식 1c의 화합물은 화학식 1b의 화합물을 산화시킴으로써 제조할 수 있다.

위의 화학식 1b 및 화학식 1c에서,

R¹, R²및 R⁴는 상기 정의한 바와 같다.

반응은 아세트산 용매속에서 브롬과 반응시킴으로써 수행하는 것이 바람직하고 반응 온도는 50 내지 60℃가 바람직하다.

상기 화학식 6의 화합물은 하기 3가지 경로에 의해 제조할 수 있다.

합성경로 1

합성경로 2

합성경로 3

합성경로 1에서, 화학식 5의 화합물은 화학식 2의 화합물을 화학식 4의 화합물과 반응시킴으로써 제조할 수 있다.

위의 화학식 2, 화학식 4 및 화학식 5에서,

R¹, R², R⁴, R⁶및R⁸는 상기 정의한 바와 같고,R⁷은 탄소수 1 내지 3의 저급알킬 그룹이며,

X는 할로겐 원자이다.

반응은 칼륨 3급-부톡사이드 또는 수소화칼륨과 같은 무기 염기, 바람직하게는 수소화나트륨의 존재하에 반응 용매로서는 테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산 또는 1,2-디메톡시에탄, 바람직하게는 디메틸포름아미드를 사용하며 반응 온도는 특별히 한정되지 않지만 0℃ 내지 용매 환류 온도에서 수행하는 것이 바람직하다.

합성경로 1에서, 화학식 6의 화합물은 상기 화학식 5의 화합물을 가수분해시킴으로써 제조할 수 있다.

화학식 6

위의 화학식 6에서,

R¹은 상기 정의한 바와 같고,

산 촉매의 경우, 염산 또는 브롬화수소산을 사용하여 80 내지 120℃로 가열하여 가수분해를 수행하는 것이 바람직하다. 또한, 알칼리 촉매의 경우, 수산화나트륨 수용액 또는 수산화칼륨 수용액을 사용하고 메탄올 또는 에탄올과 같은 알콜계 용매나 테트라하이드로푸란 또는 디메틸포름아미드와 같은 용매중, 실온하에서 수행하는 것이 바람직하다.

합성경로 2에서, 화학식 16의 화합물은 화학식 2a의 화합물을 화학식 3의 화합물과 반응시킴으로써 제조할 수 있다.

위의 화학식 2a, 화학식 3 및 화학식 16에서,

R¹및 R²는 상기 정의한 바와 같고,

R은 탄소수 1 내지 3의 저급알킬 그룹이다.

반응은 칼륨 3급-부톡사이드 또는 수소화칼륨과 같은 무기 염기, 바람직하게는 수소화나트륨의 존재하에 화학식 3의 화합물을 용매량으로 사용하고 반응 온도로서 가열 환류하에 수행하는 것이 바람직하다.

합성경로 2에서, 화학식 17의 화합물은 화학식 16의 화합물을 화학식 4의 화합물과 반응시킴으로써 제조할 수 있다.

화학식 4

화학식 16

위의 화학식 17, 화학식 4 및 화학식 16에서,

R, R¹, R², R⁴, R⁷,R⁸및 X는 상기 정의한 바와 같다.

반응은 탄산칼륨, 칼륨 3급-부톡사이드 또는 수소화칼륨과 같은 무기 염기, 바람직하게는 수소화나트륨의 존재하에 반응 용매로서는 테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산 또는 1,2-디메톡시에탄, 바람직하게는 디메틸포름아미드를 사용하고 반응온도는 특별히 한정되지 않지만 0℃ 내지 용매 환류 온도에서 수행하는 것이 바람직하다.

합성경로 2에서, 화학식 6a의 화합물은 상기 화학식 17의 화합물을 가수분해 및 탈카복실화함으로써 제조할 수 있다.

위의 화학식 6a에서,

R¹, R², R⁴및R⁸은 상기 정의한 바와 같다.

산 촉매의 경우, 염산 또는 브롬화수소산을 사용하여 80 내지 120℃에서 가열하여 가수분해 및 탈카복실화를 수행하는 것이 바람직하다. 또한, 알칼리 촉매의 경우, 수산화나트륨 수용액 또는 수산화칼륨 수용액을 사용하고 메탄올 또는 에탄올과 같은 알콜계 용매나 테트라하이드로푸란 또는 디메틸포름아미드와 같은 용매중, 실온하에서 수행하는 것이 바람직하다.

합성경로 3에서, 화학식 9의 화합물은 화학식 7의 화합물을 화학식 8의 화합물과 반응시킴으로써 제조할 수 있다.

위의 화학식 7, 화학식 8 및 화학식 9에서,

R¹, R², R⁶및 X는 상기 정의한 바와 같고,

R¹¹은 탄소수 1 내지 3의 저급 알킬 그룹이며,

(n, m)은 (1,3) 또는 (2,2)의 정수의 조합이다.

반응은 탄산칼륨, 칼륨 3급-부톡사이드, 수소화칼륨, 바람직하게는, 수소화나트륨 등의 무기 염기의 존재하에 반응 용매로서는 테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산 또는 1,2-디메톡시에탄, 바람직하게는 디메틸포름아미드를 사용하고 반응온도는 특별히 한정되지 않지만 0℃ 내지 용매 환류 온도에서 수행하는 것이 바람직하다.

합성경로 3에서, 화학식 6b의 화합물은 상기 화학식 9의 화합물을 가수분해 및 탈카복실화시킴으로써 제조할 수 있다.

위의 화학식 6b에서,

R¹, R², R⁶은 상기 정의한 바와 같다.

산 촉매의 경우, 염산 또는 브롬화수소산을 사용하여 80 내지 120℃에서 가열하여 가수분해 및 탈카복실화를 수행하는 것이 바람직하다. 또한, 알칼리 촉매의 경우, 수산화나트륨 수용액 또는 수산화칼륨 수용액을 사용하고 메탄올 또는 에탄올과 같은 알콜계 용매, 또는 테트라하이드로푸란 또는 디메틸포름아미드과 같은 용매중, 실온하에서 수행하는 것이 바람직하다.

다음에 본 발명을 구체적인 예를 사용하여 설명하지만 이들의 예로써 본 발명이 한정되지 않는다. 또한, 본 발명 화합물은 디하이드로피리다지논 환의 4 위치 및 5 위치에 비대칭 탄소를 가지는 경우에 광학이성체가 존재하며 이들도 전부 포함한다.

실시예 1

메틸 2-메틸-3-(2-메틸피라졸로[1,5-a]피리딘-3-일)-3-옥소프로피오네이트

2-메틸-3-프로피오닐피라졸로[1.5-a]피리딘(5.28g)을 디메틸 카보네이트(100ml)에 용해시키고 수소화나트륨(3.37g)을 가하여 8시간 동안 가열 환류한다. 수욕에서 냉각하에 아세트산을 가한 다음, 물로 희석하고 혼합물을 염화메틸렌으로 추출한다. 유기층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시킨 다음, 용매를 감압 증류 제거하여 잔사를 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(전개 용매; 에틸 아세테이트:n-헥산=1:3 내지 1:1)해서 정제하여 목적 생성물(5.13g)을 황색 유상물로서 수득한다.

실시예 2 내지 9

실시예 1과 동일하게 하여 하기 화합물을 수득한다(표 1).

실시예 9

에틸 4-(2-메틸피라졸로[1,5-a]피리딘-3-일)-3-메톡시카보닐-3-메틸-4-옥소부티레이트

실시예 1의 화합물(5.13g)을 DMF(70ml)에 용해시키고 수소화나트륨(1.00g)을 가한 후 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한다. 이를 빙욕에서 냉각하고 에틸 2-브로모아세테이트 (2.77ml)을 가한다. 18시간 동안 실온으로 승온될 때까지 교반한 다음, 포화 염화암모늄 수용액을 가하고 물로 희석한 후에 에테르로 추출한다. 유기층을 물 및 포화 염수로 세정한 다음, 무수 황산나트륨 상에서 건조시킨 다음, 용매를 감압 증류 제거한다. 잔사를 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(전개 용매; 에틸 아세테이트: n-헥산=1:2)해서 정제하여 목적 생성물(4.63g)을 황색 유상물로서 수득한다.

실시예 10 내지 16

실시예 2 내지 8의 화합물을 원료로서 사용하고 에틸 2-브로모아세테이트, 메틸 2-브로모-아세테이트 또는 메틸 2-브로모프로피오네이트를 사용하여 실시예 9와 동일하게 수행하여 하기 화합물을 수득한다(표 2).

실시예 17

4-(2-메틸피라졸로[1,5-a]피리딘-3-일)-3-메틸-4-옥소부티르산

실시예 9의 화합물(4.63g)을 47% 브롬화수소산(50ml)에 용해시켜 1시간 동안가열 환류한다. 이를 얼음물에 붓고 염화메틸렌으로 추출한다. 유기층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시킨 다음, 용매를 감압 증류 제거한다. 잔사를 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(전개 용매; 염화메틸렌:에탄올=10:1)해서 정제하여 목적 생성물(2.76g)을 보라색 분말로서 수득한다.

실시예 18 내지 24

실시예 17과 동일하게 하여 하기 화합물을 수득한다(표 3).

실시예 25

메틸 4-(2-이소프로필피라졸로[l,5-a]피리딘-3-일)-3-페닐-4-옥소부티레이트

2-이소프로필-3-펜아실피라졸로[1,5-a]피리딘(1.90g)을 DMF(30ml)에 용해시키고 수소화나트륨(0.35g)을 가한 후 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반한다. 메틸 2-브로모아세테이트(1.36g)를 가한 후 혼합물을 3시간 동안 실온에서 교반한 다음, 포화 염화암모늄 수용액을 가하여 물로 희석한 후에 에테르로 추출한다. 유기층을 물 및 포화 염수로 세정한 다음, 무수 황산나트륨으로 건조시키고 용매를 감압 증류 제거한다. 잔사를 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(전개 용매; 에틸 아세테이트:n-헥산=1:3)해서 정제하여 목적 생성물(1.58 g)을 황색 유상물로서 수득한다.

실시예 26

4-(2-이소프로필피라졸로〔1,5-a]피리딘-3-일)-3-페닐-4-옥소부티르산

실시예 25의 화합물(1.58g)을 에탄올(15ml)에 용해시키고 1N 수산화나트륨 수용액(5ml)을 가한 후 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한다. 반응액에 물을 가한 다음, 10% 염산을 가하여 pH 3으로 조정하고 염화메틸렌으로 추출한다. 유기층을 무수 황산나트륨으로 건조시킨 다음, 용매를 감압 증류 제거하고 목적 생성물(1.50g)을 무색 분말로서 수득한다.

실시예 27

에틸 2,2-디에톡시카보닐-4-(2-이소프로필피라졸로[1,5-a]피리딘-3-일)-3-메틸-4-옥소부티레이트

트리에톡시카보닐메탄(1.53g)을 DMF(20ml)에 용해시키고 수소화나트륨(0.28g)을 가한 후 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반한다. 3-(2-브로모-프로피오닐)-2-이소프로필피라졸로〔1,5-a〕피리딘(1.77g)를 가하여 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반한 다음, 80 내지 100℃에서 다시 7시간 동안 가열 교반한다. 반응액에 포화 염화암모늄 수용액을 가하여 물로 희석한 다음, 에테르로 추출한다. 유기층을 물 및 포화 염수로 세정한 후에 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 용매를 감압 증류 제거하여 잔사를 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(전개 용매; 에틸 아세테이트:n-헥산=1:2)해서 정제하여 목적 생성물(0.67g)을 황색 유상물로서 수득한다.

실시예 28

에틸 2-에톡시카보닐-4-(2-이소프로필피라졸로[1,5-a]피리딘-3-일)-4-옥소부티레이트

에탄올(4ml)에 나트륨(0.10 g)을 용해시키고 실온에서 디에틸 말로네이트(0.7lg)를 가한다. 50℃에서 20분 동안 교반한 다음, 에탄올(6ml)중의 3-(2-브로모아세틸)-2-이소프로필피라졸로[1,5-a]피리딘(1.06g) 용액을 가하여 혼합물을 80℃에서 75분 동안 교반한다. 반응액을 농축시키고 잔사에 물 및 에틸 아세테이트를 가하여 유기층을 분리한다. 유기층을 물 및 포화 염수로 세정한 다음, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 용매를 감압 증류 제거하여 잔사를 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(전개 용매; 에틸 아세테이트:n-헥산=1:3)해서 정제하여 목적 생성물(0.44 g)을 담황색 분말로서 수득한다.

실시예 29

4-(2-이소프로필피라졸로[1,5-a]피리딘-3-일)-3-메틸-4-옥소부티르산

실시예 27의 화합물(0.67g)을 사용하여 실시예 l7과 동일하게 수행하여 실시예 2l과 동일한 화합물(0.3lg)을 담황색 무정형 물질로서 수득한다.

실시예 30

4-(2-이소프로필피라졸로[1,5-a]피리딘-3-일)-4-옥소부티르산

실시예 28의 화합물(0.72g)을 사용하여 실시예 17과 동일하게 수행하여 목적 화합물(0.52g)을 무색 분말로서 수득한다.

실시예 31

6-(2-메틸피라졸로[1,5-a]피리딘-3-일)-5-메틸-4,5-디하이드로-3(2H)-피리다지논

실시예 l7의 화합물(2.76g)과 하이드라진 1수화물(0.90g)을 에탄올(30ml)에 용해시켜 용액을 3시간 동안 가열 환류한다. 반응액을 감압 증류 제거하고 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(전개 용매; 염화메틸렌:에탄올=l0:1)해서 정제하여 목적 생성물(2.04g)을 무색 분말로서 수득한다. 이소프로필 에테르로부터 재결정하는 경우 무색 프리즘 결정이 수득된다. 융점 l46 내지 147℃

C₁₃H₁₄N₄O에 대한 원소분석치(%) :

C H N

계산치: 64.45 5.82 23.12

실측치: 64.28 5.87 22.84

실시예 32 내지 40

실시예 3l과 동일하게 하여 하기 화합물을 수득한다(표 4).

실시예 4l

6-(2-에틸피라졸로[1,5-a]피리딘-3-일)-5-메틸-3(2H)-피리다지논

실시예 36의 화합물(1.00g)을 아세트산(30ml)에 용해시키고 65℃로 교반하에 브롬(0.22ml)을 가한 후 혼합물을 0.5시간 동안 교반한다. 반응액을 물에 붓고 염화메틸렌으로 추출한다. 유기층을 물 및 포화 탄산수소나트륨 수용액으로 세정한 다음, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고 용매를 감압 증류 제거하여 잔사를 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(전개 용매; 염화메틸렌:에탄올=15:1)해서 정제하여 목적 생성물(0.69g)을 담자색 분말로서 수득한다. 에틸 아세테이트로부터 재결정화하는 경우 담자색 프리즘 결정이 수득된다. 융점 216 내지 217℃

C₁₄H₁₄N₄0에 대한 원소분석치(%):

C H N

계산치 : 66.l3 5.55 22.03

실측치 : 65.96 5.49 21.90

실시예 42 내지 43

실시예 41과 동일하게 수행하여 하기 화합물을 수득한다(표 5).

실시예 44

(-)-6-(2-이소프로필피라졸로[1,5-a]피리딘-3-일)-5-메틸-4,5-디하이드로-3(2H)-피리다지논 및 (+)-6-(2-이소프로필피라졸로[1,5-a]피리딘-3-일)-5-메틸-4,5-디하이드로-3(2H)-피리다지논

실시예 36의 화합물(1.3lg)을 65ml의 에탄올과 헥산의 혼합액(1:4)에 용해시키고 이러한 용액을 HPLC로 자동 분리한다(광학 분해 칼럼: Chiralcell OD, 다이셀가가쿠고교가부시키가이샤제, 이동층; 헥산:이소프로판올=9:1, 주입량 1ml, 유속 24ml/분, 검출 파장 293nm). 수득한 각 분획의 화합물을 디이소프로필 에테르로 재결정화하여 전반부 유출 분획으로부터 (-)형 530mg, 후반부 유출 분획으로부터 (+)형 560mg을 무색 분말로서 수득한다.

(-)형 융점 164 내지 l65℃, 선광도 〔α]_D ³⁴-179 (C= 0.24, CHCl₃)

C₁₅H₁₈N₄0에 대한 원소 분석치(%) :

C H N

계산치: 66.66 6.71 20.73

실측치: 66.50 6.64 20.67

(+)형 융점 164 내지 l65℃, 선광도 [α〕_D ³⁴+179 (C= 0.24, CHCl₃)

C₁₅H₁₈N₄0에 대한 원소 분석치(%):

C H N

계산치: 66.66 6.71 20.73

실측치: 66.26 6.75 20.48

실험예

포스포디에스테라제-억제활성의 측정

Nicholson 등의 방법[참고 문헌: Br. J. Pharmacol., 97, 889897(1989)]에 따라서 기니아 피그의 기도 및 심장으로부터 포스포디에스테라제-함유 분획을 추출하여 효소액으로서 사용한다. 포스포디에스테라제-억제 활성의 측정은 효소 반응[참조: Thompson 등, Biochemistry, 10, 311316(1971)]의 결과로서 잔존하는 사이클릭 AMP(cAMP) 또는 사이클릭 GMP(cGMP)를 효소 면역검정(EIA)에 의해 정량적으로 측정[참고 문헌: Linden 등, J. Immunol. Methods., 15l, 209-216(l992)]함으로써 수행한다.

1) 효소 반응

Thompson 등의 방법에 따라서 수행한다. 효소액을 시험관에 넣고 기질로서 1μM의 cAMP 또는 cGMP를 첨가한다. 30℃에서 60분 동안 반응시킨 다음, 비등욕 속에 시험관을 2분 동안 투입하여 포스포디에스테라제를 불활성화시키고 이어서 반응을 정지시킨다. 시험 화합물을 기질과 동시에 시험관에 첨가한다.

2) EIA에 의한 정량 측정

효소액에 의해 분해되지 않고 잔존하는 cAMP 또는 cGMP를 cAMP 정량 측정용 또는 cGMP 정량 측정용의 EIA 키트(아마샴사제, England)를 사용하여 정량적으로 측정하고 효소 반응을 50% 억제하는데 필요한 시험 물질의 양을 IC₅₀으로 측정하여 결과를 표 6에 기재한다.

본 발명 화합물은 기도 유래의 포스포디에스테라제, 특히 포스포디에스테라제 V에 대하여 선택적으로 억제효과를 나타낸다.

Claims

화학식 1의 피라졸로피리딜피리다지논 유도체 및 약리학적으로 허용되는 이의 염.

화학식 1

위의 화학식 1에서,

R¹은 탄소수 1 내지 4의 저급 알킬 그룹 또는 탄소수 3 내지 6의 사이클로알킬 그룹이고,

R², R³, R⁴및 R⁵는 동일하거나 상이하게 수소 원자, 탄소수 1 내지 4의 저급 알킬 그룹 또는 페닐 그룹이거나, R³과 R⁵가 결합하여 이중 결합을 형성할 수 있다.
활성 성분으로서, 포스포디에스테라제 V 억제 활성이 있으며 기도에 선택적이고 기관지 확장 효과를 갖는 화학식 1의 피라졸로피리딜피리다지논 유도체 및 약리학적으로 허용되는 이의 염을 1종 이상 포함하는 기관지 확장제.

화학식 1

위의 화학식 1에서,

R¹은 탄소수 1 내지 4의 저급 알킬 그룹 또는 탄소수 3 내지 6의 사이클로알킬 그룹이고,

R², R³, R⁴및 R⁵는 동일하거나 상이하게 수소 원자, 탄소수 1 내지 4의 저급 알킬 그룹 또는 페닐 그룹이다.
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