KR100325798B1

KR100325798B1 - 암전이 억제작용 및 항혈전 작용이 있는 벤조퀴논류 화합물

Info

Publication number: KR100325798B1
Application number: KR1019990000900A
Authority: KR
Inventors: 한병훈; 김우호; 강영화
Original assignee: 한병훈
Priority date: 1998-01-14
Filing date: 1999-01-14
Publication date: 2002-02-25
Also published as: KR19990067902A

Abstract

본 발명은 세포외 기질(Extracellular matrix ; ECM)성분 및 피브리노겐의 인테그린(Integrin)에 대한 결합을 억제함으로써 강력한 암전이 억제작용을 가지며, 항혈전 작용을 갖고 있는 다음 화학식 (I)의 벤조퀴논류 화합물, 그 제조방법 및 이를 활성성분으로서 함유하는 약학적 제제를 제공한다.

상기식에서, R₁, R₂및 R₃는 각각 수소원자, 탄소수 1-4의 저급알킬, 탄소수 1-4의 저급알콕시기 또는 하이드록시알킬기이고, R₄는 탄소수 1-18의 알킬기, 탄소수 1-18의 알킬렌기, 탄소수 1-18의 하이드록시알킬기, 탄소수 1-18의 하이드록시 알킬렌기, 페닐기, 벤질기 또는 페닐알킬기이다.

Description

암전이 억제작용 및 항혈전 작용이 있는 벤조퀴논류 화합물{BENZOQUINONE DERIVATIVES HAVING ANTITHROMBOTIC AND ANTIMETASTATIC PROPERTIES}

본 발명은 다음 화학식 (I)의 벤조퀴논류 화합물, 그 제조방법 및 이를 활성성분으로 함유하는 약학적 제제에 관한 것이다.

상기식에서, R₁, R₂및 R₃는 각각 수소원자, 탄소수 1-4의 저급알킬, 탄소수 1-4의 저급알콕시기 또는 하이드록시알킬기이고, R₄는 탄소수 1-18의 알킬기, 탄소수 1-18의 알킬렌기, 탄소수 1-18의 하이드록시알킬기, 탄소수 1-18의 하이드록시알킬렌기, 페닐기, 벤질기 또는 페닐알킬기이다.

보다 구체적으로는, 본 발명은 상기 화학식 (I)의 벤조퀴논류, 그 제조방법 및 이를 함유하는 암전이 억제작용 및 항암작용, PAF 수용체 길항작용 및 항혈전작용을 갖는 약학적 제제에 관한 것이다.

혈소판 활성화인자(Platelet Activating Factor: 이하 'PAF'라 한다) 수용체 결합 분석방법(PAF receptor binding assay)을 이용하여 열대 식물인 아디시아크리스파(Ardisia crispa)에서 PAF 길항제로 화합물 AC7-1을 분리하여 (IC₅₀= 5×10^-7M) 각종 분광학적 분석방법을 이용하여 그 구조를 규명한 결과 2-메톡시-6-트리데실-1,4-벤조퀴논(2-methoxy-6-tridecyl-1,4-benzoquinone)으로 규명하였다. 이 화합물은 천연물에서는 처음 분리, 보고되는 물질이고 지금까지 보고된 PAF 길항제와는 다른 새로운 골격의 강력한 PAF 길항제이다.

시험관내(In vitro)사람, 토끼 및 흰쥐 혈소판을 이용한 혈소판 응집 억제능 실험에서 이 화합물은 여러 아고니스트(agonists), PAF(IC₅₀= 5 x 10^-6M), 콜라겐(collagen) (IC₅₀= 2 x 10^-6M), ADP(IC₅₀= 3 x 10^-5M) 및 트롬빈(thrombin)(IC₅₀= 7 x 10^-7M)에 의해서 유도된 혈소판 응집을 모두 강하게 억제하였다(도 1-4 참조). 흰쥐를 이용한 생체 밖의(ex vivo) 실험에서도 최대 효과를 나타내는 작용시간에는 차이가 있지만 콜라겐, ADP, 트롬빈에 의해 유도된 혈소판 응집을 모두 억제하였으며(도 5), 또한 ADP에 의해서 유도된 혈소판 응집을 해소시켜주는 분산효과(dispersing effect)도 관찰되었다. 이상의 실험결과로 본 발명의 화합물은 비특이성 혈소판응집억제제(non-specific anti-platelet agent)임이 밝혀졌다.

본 발명은 또한 화합물 AC7-1의 이러한 비특이적인 혈소판 응집 억제 작용에 관심을 갖고 그 작용기전을 밝히고자 하였다. 혈소판 응집은 혈소판 막에 있는 인테그린(integrin)(GPIIb/IIIa)과 피브리노겐(fibrinogen)의 결합에 의해 일어나는 것으로 알려져 있다. 본 발명의 화합물의 비특이적인 혈소판 응집 억제 작용은 세포-세포 상호작용(cell-cell interaction) 및 세포-세포외기질(cell-extracellular matrix : ECM) 상호작용과 관련된 인테그린수용체 결합에 의한 작용일 가능성이 있다는 추정하에 새로운 시험관내 인테그린(in vitro integrin) 결합능 실험계를 개발하였다. 본 발명의 화합물은 인테그린 결합능 실험계에서 용량 의존적으로 피브리노겐의 결합을 억제하였고, 강력한 인테그린 결합 억제능을 보여주었다(IC₅₀= 4 x 10^-6M). 따라서 본 발명의 화합물의 비특이적인 혈소판 응집의 억제는 인테그린 수용체 길항 작용에 의한 것으로 밝혀졌다.

본 발명의 화합물은 천연물에서 처음으로 분리된 PAF 길항제 및 비펩타이드(non-peptide)성 인테그린(GPIIb/IIIa) 결합 억제제로서 새로운 항혈소판제 및 항혈전제로서의 개발이 기대된다.

벤조퀴논 화합물 AC7-1 및 벤조퀴논 유도체들은 생체내 세포부착도 실험, 생체내 세포침윤도 실험에서 강력한 암세포 부착 억제작용 및 침윤억제 작용을 보여주었다. 또한 실험동물을 이용한 암전이 실험에서도 벤조퀴논 화합물 AC7-1은 강력하게 폐전이를 억제하였다. 벤조퀴논 화합물 AC7-1이 세포외 기질성분들의 공통된 인테그린 결합부위에 해당하는 RGDS(Arg-Gly-Asp-Ser)의 암세포 부착도를 강력하게 억제함을 밝혔다.

벤조퀴논 화합물 AC7-1은 세포 증식 테스트(Proliferation Test)에서 암세포(B16F10)의 증식을 강력하게 억제하였다.

벤조퀴논 화합물 AC7-1은 천연물에서 처음 분리된 비펩타이드성 및 저분자 인테그린 결합 억제제로서 암전이 억제작용, 및 항암작용이 있음을 밝혔다.

천연물에서 새로운 골격의 강력한 PAF 길항제로 분리한 벤조퀴논 화합물 AC7-1 및 그 유도체들을 암전이 억제제 및 항암제, 새로운 개념의 항혈소판제, 항혈전제로 개발하고자 한다.

세계 각국의 많은 연구자들이 PAF 길항제 연구를 수행하여 져널오브메디칼케미스트리(J. Med. Chem.)를 비롯한 유명 학술지에 연구결과가 발표되고 있다.

대표적인 천연물 유래 길항제인, 징콜라이드(ginkgolide)는 은행잎에서 분리되었는데, 은행잎 엑스가 현재 말초순환 개선제로 시판중이며, 가장 효과가 강력한 징콜라이드 B는 임상 III상이 진행중인 것으로 알려져 있다. 그외 천연물로부터 분리된 카드수레논(kadsurenone), 글리오톡신(gliotoxin) 등 다양한 골격의 길항제들이 보고 되고 있다.

현재까지 피브리노겐 수용체 길항제는 주로 뱀독에서 분리된 RGD를 포함하는 천연 펩티드들과 RGD에서 개발된 환상 펩티드를 포함한 펩티도미메틱(peptidomimetic)이고 천연물에서 독특한 구조를 갖는 저분자성 비펩타이드(nonpeptide) 길항제는 아직까지 알려지지 않고 있다. 뱀독에서 분리한 GPIIb/IIIa 안타고니스트(antagonist)로 키스트린(Kistrin), 트리그라민(Trigramin), 바보린(Barbourin) 등이 새로운 항혈전 약물로 기대되고 있다. 그 밖에도 머크사(Merck), 제네틱스사(Genetics) 등 세계 유수 제약회사들에 의해 새로운 항혈소판제, 항혈전제로서, 인티그린(Integrin)(GPIIb/IIIa) 길항제 개발 연구가 활발히 진행되고 있다.

암의 전이(metastasis)는 악성 종양의 가장 대표적인 생물학적 특성이며 암환자의 가장 흔한 사망원인이다. 종양세포가 세포외 기질에 부착하는 단계는 종양의 전이에 가장 중요하므로, 이 단계를 억제하면 종양전이를 방지할 수 있다. 지금까지 암전이 억제제 개발은 세포 부착의 매개체인 인테그린 분자의 공통 결합부위 펩타이드인 Arg-Gly-Asp(RGD) 유사체를 개발하는 데 초점을 맞추어 왔다. 이러한 결과로 RGD 펩티도미메틱스(peptidomimetics), RGD 폴리머와 뱀독에서 분리된 디스인티그린(Disintegrin) 등이 개발되었으나 이들 펩타이드 및 단백질은 1)쉽게 가수분해 되므로 경구투여가 어렵고 2)작용 반감기가 매우 짧으며 3)복강 투여시 면역활성으로 인한 쑈크 등의 부작용이 있는 등의 단점으로 아직까지 신약으로 개발되지 못하고 있다.

벤조퀴논류 화합물들의 PAF 길항작용 및 비특이적인 혈소판 응집억제 작용을 밝힌다. 새로 개발한 혈소판 인티그린(Integrin)(GPIIb/IIIa) 매개 혈소판 응집능 측정법으로 벤조퀴논류 화합물들의 인테그린 길항작용을 밝힘으로써 비특이적인 혈소판 응집억제 작용 기전을 규명하고 새로운 개념의 항혈소판제 및 항혈전 약물로서의 가능성을 제시한다.

생체내 세포부착도 실험, 생체내 세포침윤도 실험, 실험동물을 이용한 암전이 모델실험으로 벤조퀴논류 화합물들의 암전이 억제 작용을 밝히고 세포독성 실험 및 암세포 증식능 실험으로 항암작용을 밝힌다.

따라서, 본 발명의 목적은 암전이 억제 및 항혈전 작용을 갖는 상기 화학식 (I)의 벤조퀴논류 화합물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 화학식 1의 벤조퀴논류의 제조방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 화학식 1의 벤조퀴논류 화합물을 활성성분 으로 함유하는 암전이 억제 및 항혈전 작용을 갖는 약학적 제제를 제공하는 것이다.

도 1은 화합물 AC7-1의 실험관내 PAF에 의해서 유도된 혈소판응집억제효과를 나타내며,

도 2는 화합물 AC7-1의 실험관내 ADP에 의해서 유도된 혈소판응집억제효과를 나타내며,

도 3은 화합물 AC7-1의 실험관내 콜라겐에 의해서 유도된 혈소판응집억제효과를 나타내며,

도 4는 화합물 AC7-1(16uM)의 PAF(5X10^-7M), ADP(10uM), 콜라겐(5ug/ml), 트롬빈(1단위)에 의해서 유도된 혈소판응집 억제효과를 나타내며,

도 5는 생체 밖 혈소판 응집 분석(AC7-1의 시간에 대한 분석)의 결과를 나타내며,

도 6은 증식 테스트(Proliferation Test)의 결과이며,

도 7은 폐전이 실험의 결과를 보여준다.

- 화합물 AC7-1의 PAF 길항작용 : 활성-유도 분리법으로 열대 식물인 아디시아 크리스파(Ardisia crispa)로부터 화합물 AC7-1을 유효성분으로 분리하여(IC₅₀= 5 × 10^-7M), 각종 분광학적 분석방법을 이용하여 그 구조를 규명한 결과 2-메톡시-6-트리데실-1,4-벤조퀴논(2-methoxy-6-tridecyl-1,4-benzoquinone)으로 규명하였다. 이 화합물은 천연물에서는 처음 분리, 보고되는 물질이고 지금까지 보고된 PAF 길항제와는 다른 새로운 골격의 강력한 PAF 길항제이다.

- 화합물 AC7-1의 비특이성 혈소판응집 억제작용 : 시험관내(In vitro) 사람, 토끼 및 흰쥐 혈소판을 이용한 혈소판 응집 억제능 실험에서 화합물 AC7-1은 여러 아고니스트(agonists), PAF(IC50 = 5 x 10-6M), 콜라겐(collagen)(IC₅₀= 2 x 10^-6M), ADP(IC₅₀= 3 x 10^-5M) 및 트롬빈(thrombin)(IC₅₀= 7 x 10^-7M)에 의해서 유도된 혈소판 응집을 모두 강하게 억제하여 비특이적인 혈소판응집 억제작용을 보여주었다.

- 인테그린 길항작용 : 본 발명은 화합물 AC7-1의 이러한 비특이적인 혈소판 응집 억제작용에 관심을 갖고 그 작용기전을 밝히고자 새로운 시험관내 인테그린(in vitro integrin) 결합능 실험계를 개발하였다. 본 발명의 화합물은 인테그린 결합능 실험계에서 용량 의존적으로 피브리노겐의 결합을 억제하였고, 강력한 인테그린 결합 억제능을 보여주었다(IC₅₀= 4 x 10^-6M). Com 28(2,3-dimethoxy-5-methyl-1,4-benzoquinone)도 강력한 인테그린 결합 억제능을 보여주었다(IC₅₀= 1 x 10^-6M)

- 화합물 AC7-1의 전합성

본 발명의 화합물의 경제적이고 효율적인 4단계의 전합성법이 수립되었다.

- 벤조퀴논류 화합물들의 PAF 길항작용

본 발명의 화합물의 관능기를 변화시켜 합성한 유도체들과 퀴논과 관련된 유사화합물들에 대한 PAF 수용체 길항작용에 대한 구조활성 상관관계 연구가 수행되었다. 1,4-벤조퀴논(1,4-benzoquinon)의 알킬체인(alkyl chain) 길이가 메틸렌(methylene)기가 8개인 경우, 12개인 본 발명의 화합물과 거의 비슷한 정도의 PAF 길항작용효과를 나타냈다. 6번 위치에 벤질기와 같은 벌키니스(bulkyness)가 도입되면 활성이 약간 감소하였다. 메틸렌기가 3개인 경우에는 활성이 10배 정도 감소하였다. 2, 6번 위치에 메틸기가 있는 경우 작용이 거의 없었다. 또한 단순한 1,4-벤조퀴논(1,4-benzoquinone)은 작용이 없었다. 이상의 결과로 볼 때 6번 위치에 적당한 길이의 알킬체인(alkyl chain)이 활성에 필수적인 인자임을 알수 있었다.

1,4-벤조퀴논(1,4-benzoquinone) 핵을 중심으로 4개의 관능기(functional groups)를 가지고 있는 2,3-디메톡시-5-메칠-6-(10'-하이드록시데실)-1,4-벤조퀴논(2,3-dimethoxy-5-methyl-6-(10'-hydroxydecyl)-1,4-benzoquinone)의 경우 본 발명의 화합물보다 약간 활성이 감소하였으나 유의성 있는 억제 활성을 보여 주었다.

1,4-구핵부가반응(1,4-nucleophilic addition)를 할 수 없는 2,3-디메톡시-5-메칠-6(10'-하이드록시데실)-1,4-벤조퀴논(2,3-dimethoxy-5-methyl-6(10'-hydroxydecyl)-1,4-benzoquinone)의 경우에도 강력한 저해 활성이 나타나는 것으로 보아 본 발명의 화합물의 PAF 수용체 결합 저해활성은 수용체에 대한 공유결합(covalent bonding)때문은 아닌 것으로 추정된다.

본 발명의 화합물의 환원형, 반응 중간 생성물인 디메톡시-트리데실-벤젠(dimethoxy-tridecyl-benzene)도 작용이 없었다. 따라서 1,4-벤조퀴논핵이 활성에 중요한 인자임을 알 수 있었다. 퀴논과 관련된 유사화합물들에 대한 구조 활성 상관 관계 연구 결과 Vit. K 계열 나프토퀴논(naphthoquinone) 물질, 코엔자임 Q(coenzyme Q) 계열물질들은 PAF 수용체 결합 저해 작용이 매우 약하였다.

- 암세포(B16F10)를 이용한 세포 부착도, 세포 침윤도 등의 실험이 본 발명의 화합물의 암전이 억제능을 알아보기 위하여 수행되었다.

멜라노마 셀라인(Melanoma cell line), B16F10을 이용한 시험관내(in vitro) 세포 부착도 실험 결과 본 발명의 화합물 AC7-1은 부착분자(adhesion molecule)로서 세포외 기질성분인 라미닌(laminin), 콜라겐과 FBS(fetal bovine serum)을 사용한 부착실험에서 IC₅₀값은 각각 33 μM, 31 μM, 19 μM로 암세포 부착을 강력하게 억제하였다. 특히 피브로넥틴(fibronectin)의 결합을 가장 강하게 억제하였고 (IC₅₀= 5 x 10^-7M), 암세포의 침윤도 실험에서도 IC₅₀값이 2.1 x 10^-6M으로 강한 침윤 억제 작용을 보여 주었다.

본 발명의 화합물, AC7-1의 시험관내(in vitro) 세포 부착 억제 활성이 세포독성에 의한 것인지를 규명하기 위하여 세포독성 실험(MTT assay)을 수행하였다.

세포 부착도 실험에서와 동일한 배양시간(1시간)에서는 80 μM의 고농도에서도 세포독성을 나타내지 않았다. 그러나 세포 증식능 실험에서는 10 μM의 농도에서 3일동안 배양한 결과 강력한 증식 억제능(100 % 억제)을 보여주었다.

본 발명의 화합물의 세포 부착 억제 기전을 밝히고자 HT1080 셀라인(HT1080 cell line)에서 베타1-인테그린 항체(β₁-integrin antibody)에 의해 세포부착(cell attachment)이 억제되는 펩타이드(peptide)를 비롯하여 약 10여종의 펩타이드들을 이용하여 세포 부착도 실험을 수행하였다. 그 결과 RGDS(Arg-Gly-Asp-Ser)에 의한 세포부착을 강력하게 억제하였다(4 x 10^-6M). 본 발명의 화합물, AC7-1은 세포막에 존재하는 인테그린과 세포외기질(extracellural matrix)(ECM :fibronectin, laminin, collagen) 및 피브리노겐중의 RGD-서열과 관련된 상호작용에 의한 세포부착(cell adhesiveness)을 강력하게 억제하는 물질임을 밝혔다.

악성 종양세포의 전이를 억제하는 효과를 확인하기 위해 멜라노마셀라인(melanoma cell line)B16F10을 이용한 생체(in vivo)생쥐 폐전이 실험을 수행하였다. 생쥐 꼬리 정맥으로 본 발명의 화합물, AC7-1을 5㎎/㎏투여시 폐전이가 100% 억제되었다. 1㎎/㎏에서는 35%정도 폐전이가 억제되었다. 이러한 강력한 폐전이 억제효과는 본 발명의 화합물의 세포외 기질에 암세포가 부착하는 것을 억제하는 시험관내(in vitro) 실험결과와 일치하는 것으로 앞으로 본 발명의 화합물, AC7-1의 암전이 억제제로서의 가능성을 제시하고 있다.

이하, 실시예 및 실험예로써 본 발명을 예증하지만 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.

실험예 1

PAF 안타고니스트(Antagonists)에 관한 연구

1). 실험재료

PAF는 베잉거 만하임사(Boehringer Mannheim Co.)(C₁₈-PAF)과 시그마사(Sigma Co.)(C₁₆-PAF)에서³H-PAF는 아머샴사(Amersham Co.)에서 구입하였으며, 송아지 혈청알부민(Bovine Serum Albumin)(Fraction V, 이하 BSA라 함)은 베링거 만하임사에서, 트롬빈, 콜라겐은 크로노로그사(Chrono-log Co.)에서 구입하였다.

2). PAF 수용체 결합 저해 활성 측정

발론(Valone)의 방법을 일부 변형하여 측정하였다.

3). 아디시아 크리스파(Ardisia crispa)의 PAF 수용체 결합 저해 성분 연구

아디시아 크리스파 뿌리 548g을 80% 에탄올 중에서 2일간 처리한 다음 얻어진 80% 에탄올추출물에서 에탄올을 유거하여 얻은 에탄올추출물(74%, 15g)을 물과 에테르로 분획하여 에테르분획(78%, 5g)과 물분획을 얻는다. 물분획을 부탄올로 분획하여 부탄올 분획물(45%, 3g)과 잔류물을 얻는다.

이렇게 얻어진 에테르 분획물을 실리카겔 칼럼크로마토그래피(헥산: EtOAc: 메탄올 = 10 : 1 : 1)하여 7개 분획을 얻었고, 분획 II 및 III을 다시 실리카겔 칼럼크로마토그래피(헥산 : EtOAc = 9 : 1) 및 HPLC(CH₃CN : H₂O = 4 : 1)을 하여 화합물 AC7-1(융점 78-80도)을 얻었다.

Compound AC 7-1

C₂₀H₃₂O₃

m.p. : 78-80℃(Fine needle)

λmax nm, MeOH : 266 (ε, 25,000)

νmax KBr : 2914, 2851, 1682, 1653, 1602

EI MS (m/z, 30 eV, relative intensity) : 320(M⁺, 9.8), 292(34.5),

179(12), 54(83)

¹H-NMR(400 MHz, CDCl₃, ppm) : 0.93(3H, t), 1.2-1.3 (20H, m),

2.43(2H, t), 3.81(3H, s), 5.87(1H, d), 6.48(1H, d)

¹³C-NMR (100MHz, CDC13, ppm) : 13.9(12C), 22.5(11C),

27.5-29.5(2'C-10'C), 31.8(1'C), 56.2(OCH₃), 107.1(3C), 132.9(5C),

147.7(6C), 158.9(2C), 182.3(1C), 187.9(4C)

2-메톡시-6-트리데실-1,4-벤조퀴논(2-methoxy-6-tridecyl-1,4-benzoquinone)

실험예 2

항혈전 작용에 관한연구

시험관내(In vitro) 혈소판 응집 억제작용은 본(Born)의 비탁법(turbidimetric method)에 준하여 응집도계(aggregometer)를 사용하여 측정하였다.

생체외 항혈소판응집 작용은 흰쥐(Male, Sprgue-Dawley rats, 200-250g)를 하룻밤 절식시킨후 4마리를 한군으로 하여 화합물 AC7-1, 80㎎/㎏을 (0.5% CMC용액)경구로 투여하였다. 대조군은 0.5% CMC용액만 투여하였다. 응집유도 물질로 트롬빔, ADP, 콜라겐이 사용되었다.

실험예 3

벤조퀴논 화합물 AC7-1의 전합성

3,5-디메톡시 벤즈알데히드(3,5-dimethoxy benzaldehyde)를 출발물질로 하여 4단계의 전합성 과정이 설계, 완성되었다.

합성실시예 1 : Com1

도데실-트리페닐-포스포니움-브로마이드

(Dodecyl-triphenylphosphonium bromide) 합성

트리페닐포스핀(Triphenylphospine) 5g(0.019 mol)과 1-브로모도데칸 4.75 g(0.019mol)을 각각 둥근 플라스크에 넣고 질소치환 한 후 여기에 무수톨루엔(dried toluene)을 가하였다. 브로모도데칸 용액(Bromododecane solution)을 주사기로 취하여 트리페닐포스핀 용액(triphenylphospine solution)에 교반하면서 서서히 가하였다. 질소 기류하에서 4시간 동안 환류(reflux)한 후 톨루엔을 제거하고 반응 생성물에 EtOAc을 가하여 녹인후 냉장보관 하였다. 하룻밤 지난 후 얻어진 침상결정을 여과하여 6 g을 얻었다.

합성실시예 2 : Com2

1,3-디메톡시-5-(1'-트리데세닐)벤젠

1,3-dimethoxy-5-(1'-cis-n-tridecenyl)benzene 합성

도데실-트리페닐포스포니움-브로마이드(dodecyl-triphenylphosphonium-bromide) 3.6 g (7.2 mmol)을 무수 THF 20 ml 에 녹인 후 n-BuLi (4.5 ml, 1.6 M hexane solution)을 질소기류하 0℃에서 서서히 가하였다. 15분 동안 교반한 후 3,5-디메톡시 벤즈알데히드(3,5-dimethoxy benzaldehyde) 용액을 (1 g/THF 10ml)을서서히 가 하였다. 2시간 동안 교반한 후 물을 가하여 반응을 중지하고 반응혼합물을 EtOAc로 추출하였다. EtOAc층은 순차적으로 물과 포화 소디움클로라이드용액(sat. NaCl sol.)으로 세척한 후 무수 MgSO₄을 가하여 2시간동안 탈수시켰다.

감압 건고하여 얻은 반응 생성물은 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(silicagel column chromatography)(eluent : Hexane : EtOAc = 100 : 1)하여 무색 액상의 혼합물질(cis/trans 혼합물)1.25 g을 얻었고 또한 순수한 시스/트란스 이성질체(cis/trans isomer)를 각각 분리하였다.(yield 65.5 %)

합성실시예 2의 물리적 데이터는 다음과 같다.

1,3-dimethoxy-5-(1'-cis-n-tridecenyl) benzene

C₂₁H₃₄O₂

Mw : 318

Oil

MS[EI+, m/z](Rel. Int. %) : 318(30), 240(5), 191(100), 152(96)

¹H-NMR : 0.87(3H, t, J=6.6Hz), 1.24(16H, m), 1.43(2H, m), 2.33(2H, m),

3.79(6H,s), 5.65(1H, dt, J=11.7Hz, 7.5Hz), 6.32-6.44(4H,m)

1,3-dimethoxy-5-(1'-trans-n-tridecenyl) benzene

C₂₁H₃₄O₂

Mw : 318

Oil

MS[EI+, m/z](Rel. Int. %) : 318(14), 240(5.2), 191(24.5), 177(23),

152(100)

¹H-NMR : 0.88(3H, t, J=6.6Hz), 1.26(16H, m), 1.45(2H, m), 2.18(2H, m),

3.78(6H, s), 6.16-6.25(1H, dt, J=15.6Hz, 6.6Hz),

6.309(1H, d, J=15.6Hz), 6.32(1H, t, J=2.1Hz), 6.50(2H, d, J=2.1Hz)

합성실시예 3 : Com3

1,3-디메톡시-5-트리데실 벤젠 합성

둥근 플라스크에 1,3-디메톡시-5-(1'-트리데세닐)벤젠(1,3-dimethoxy-5-(1'-tridecenyl)benzene) 1.2 g과 Pd/c 0.5g을 넣고 수소치환 한 후 무수 에탄올 10 ml을 가하여 실온에서 5시간 동안 교반하였다. Pd/c을 여과하여 제거하고 여액은 감압농축 하였다. MeOH 상에서 재결정하여 약 1 g의 침상결정을 얻었다. (yield 79%)

1,3-dimethoxy-5-tridecyl-benzene

C₂₁H₃₆O₂

mp = 43℃

Mw : 320

¹H-NMR : 0.907(3H, t, J=6.6Hz), 1.28(20H, m), 1.62(2H, q, J=7.5Hz),

2.56(2H, t, J=7.5Hz), 3.79(6H, s), 6.31-6.37(3H, m)

합성실시예 4 : Com4

2-메톡시-6-트리데카닐-1,4-벤조퀴논 합성

80% 초산수용액 5 ml에 CrO3 0.075 g을 녹였다. 빙초산 15ml에 1,3-디메톡시-5-트리데카닐 벤젠(1,3-dimethoxy-5-tridecyl benzene) 1g을 녹인 용액을 얼음 중탕(ice bath) 상에서 CrO3/80% 초산수용액에 교반하면서 서서히 점적하였다.

하룻밤방치후 침전물을 여과하고 물로 세척 하였다. 침전물은 다시 EtoAc에서 재결정하여 침상결정 0.56 g을 얻었다.(yield 58.3 %)

2-methoxy-6-tridecanyl-1,4-benzoquinone

C₂₀H₃₂O₃

mp = 78 ℃

Mw : 320

MS[EI+, m/z](Rel. Int. %) : 320 [M]+ (72), 194(6), 165(55), 152(100)

¹H-NMR : 0.87(3H, t, J=6.6Hz), 1.24(20H, m), 1.48(2H, q, J=7.2Hz)

2.40(2H, t, J=7.2Hz), 3.80(3H, S), 5.87(1H, d, J=2.4Hz), 6.47(1H, m)

실험예 4

벤조퀴논류 화합물 합성

2-메톡시-1,4-벤조퀴논(2-methoxy-1,4-benzoquinone) 핵을 중심으로 측쇄(side chain)의 활성에 미치는 영향을 알아보기 위한 연구의 일환으로 우선 알킬체인의 길이와 벌크니스(bulkyness) 효과를 알아보고자 1-브로모옥탄(1-bromooctane), 1-브로모프로판(1-bromopropane)을 이용하여 8개, 4개의 메틸렌기를도입한 화합물과 벤질 브로마이드를 이용하여 페닐알킬기를 도입한 화합물을 합성실시예 1 내지 4와 같은 방법으로 다음의 화합물들을 합성하였다.

합성실시예 5 : Com5

1,3-디메톡시-5-(1'-시스-노르말부테닐)벤젠

(1,3-dimethoxy-5-(1'-cis-n-butenyl)benzene 합성

C₁₂H₁₆O₂

MS(EI+, m/z](Rel. Int. %) : 192 [M]+(100), 177(62), 161(35),

151(17), 91(51)

¹H-NMR : 0.86(3H, t, J=6.6Hz), 1.74(2H, m), 3.78(6H, s),

5.65(1H, dt, J=11.7Hz, 6.6Hz), 6.27(1H, t, J=2.4Hz),

6.30(1H, d, J=11.7Hz), 7.17(2H, d, J=2.4Hz),

합성실시예 6 : Com6

1,3-디메톡시-5-(1'-트란스-노르말부테닐)벤젠(1,3-dimethoxy-5-(1'-trans-n-butenyl)benzene 합성

C₁₂H₁₆O₂

MS[EI+, m/z](Rel. Int. %) : 192 [M]⁺(85), 177(32), 161(55), 151(37)

¹H-NMR : 0.87(3H, t, J=6.6Hz), 2.20(2H, dq, J=6.6Hz, 6.0Hz),

3.78(6H, s), 6.20(1H, dt, J=15.9Hz, 6.0Hz),

6.31(1H, d, J=15.9Hz), 6.32(1H, d, J=2.4Hz),

6.50(2H, d, J=2.4Hz),

합성실시예 7 : Com7

1,3-디메톡시-5-노르말부틸벤젠(1,3-dimethoxy-5-n-butyl)benzene 합성

C₁₂H₁₈O₂

MS[EI+, m/z](Rel. Int. %) : 194 [M]⁺(85), 152(100), 121(11), 91(11)

¹H-NMR : 0.88(3H, t, J=6.6Hz), 1.30(2H, m), 1.59(2H, q, J=7.5Hz),

2.54(2H, t, J=7.5Hz), 3.78(6H, s), 6.29-6.35(3H, m)

합성실시예 8 : Com8

2-메톡시-6-노르말-부틸-1,4-벤조퀴논(2-methoxy-6-n-butyl-1,4-benzoquinone)합성

C₁₁H₁₄O₃

MS[EI+, m/z](Rel. Int. %) : 194 [M]⁺(11%), 169(100%), 152(65%),

138(13%),

¹H-NMR : 0.87(3H, t, J=6.6Hz), 1.25(2H, m), 1.49(2H, q, J=6.3Hz)

2.40(2H, t, J=6.3Hz), 3.81(3H, s)

5.87(1H, d, J=2.1Hz), 6.48(1H, dt, J=2.1Hz, 1.5Hz)

합성실시예 9 : Com9

1,3-디메톡시-5-(1'-시스-노네닐)벤젠(1,3-dimethoxy-5-(1'-cis-nonenyl)benzene) 합성

C₁₇H₂₆O₂

MS[EI+, m/z](Rel. Int. %) : 262(78) [M]⁺, 205(14), 191(84), 177(89)

152(100), 91(28)

¹H-NMR : 0.87(3H, t, J=6.6Hz), 1.26(8H, m), 1.45(2H, m), 2.20(2H, m)

3.78(6H, s), 4.28(2H, dd, J=6.6Hz), 6.27(1H, t, J=2.4Hz),

7.17(2H, d, J=2.4Hz)

합성실시예 10 : Com10

1,3-디메톡시-5-(1'-트란스-노네닐)벤젠(1,3-dimethoxy-5-(1'-trans-nonenyl)benzene) 합성

C₁₇H₂₆O₂

MS[EI+, m/z](Rel. Int. %) : 262(2), 182(78), 165(54), 138(70.5)

¹H-NMR : 0.87(3H, t, J=6.6Hz), 1.26(8H, m), 1.45(2H, m), 1.74(2H, m)

3.78(6H, s), 6.15-6.25(1H, dt, J=15.9Hz, 6.0Hz), 6.31(d, J=15.9Hz),

6.32(1H, d, J=2.4Hz), 6.50(2H, d, J=2.4Hz)

합성실시예 11 : Com11

1,3-디메톡시-5-노닐벤젠(1,3-dimethoxy-5-nonylbenzene) 합성

C₁₇H₂₈O₂

MS[EI+, m/z](Rel. Int. %) : 264(35) [M]⁺, 182(32), 165(50), 152(100)

138(10.5), 91(13)

¹H-NMR : 0.88(3H, t, J=6.6Hz), 1.3(12H, m), 1.59(2H, quintet, J=7.5Hz)

2.54(2H, t, J=7.5Hz), 3.78(6H, s), 6.29-6.35(3H, m)

합성실시예 12 : Com12

2-메톡시-6-노닐-1,4-벤조퀴논(2-methoxy-6-nonyl-1,4-benzoquinone)합성

C₁₆H₂₄O₃

MS[EI+, m/z](Rel. Int. %) : 264 [M]⁺(36%), 194(5%), 182(32%),

165(49%), 152(100%)

¹H-NMR : 0.875(3H, t, J=6.6Hz), 1.25(12H, m), 1.49(2H, m),

2.40(2H, t, J=6.3Hz), 3.81(3H, s), 5.87(1H, d, J=2.1Hz),

6.484(1H, dt, J=2.1Hz, 1.5Hz)

합성실시예 13 : Com13

시스-1-(3',5'-디메톡시페닐)-2-페닐에칠렌 (cis-1-(3',5'- dimethoxyphenyl)-2-phenylethylene 합성

C₁₆H₁₆O₂

MS[EI+, m/z](Rel. Int. %) : 240 [M]⁺(100%), 209(25%), 194(22%),

165(71%), 152(41%)

¹H-NMR : 3.68(6H, s), 6.38(1H, t, J=2.4Hz), 6.48(1H, d, J=2.4Hz),

6.63(2H, dd, J=12Hz), 7.24-7.37(5H, m)

합성실시예 14 : Com14

트란스-1-(3',5'-디메톡시페닐)-2-페닐에칠렌(trans-1-(3',5'-dimethoxyphenyl)-2-phenylethylene 합성

C₁₆H₁₆O₂

MS[EI+, m/z](Rel. Int. %) : 240 [M]⁺(100%), 209(39%), 194(32%),

165(80%), 152(41%)

¹H-NMR : 3.84(6H, s), 6.41(1H, t, J=2.4Hz), 6.68(2H, d, J=2.4Hz),

7.07(2H, dd, J=16.5Hz), 7.06-7.53(5H, m)

합성실시예 15 : Com15

1-(3',5'-디메톡시페닐)-2-페닐에탄 (1-(3',5'-dimethoxyphenyl) -2-phenylenthane) 합성

C₁₆H₁₈O₂

MS[EI+, m/z](Rel. Int. %) : 242 (15) [M]⁺, 227(17), 193(5), 91(100),

77(15)

¹H-NMR : 2.83-2.93(4H, m), 3.75(6H, s), 6.32(2H, m), 7.17-7.31(6H, m)

합성실시예 16 : Com16

2-메톡시-6-페닐에칠-1,4-벤조퀴논(2-methoxy-6-phenylethyl-1,4-benzoquinone

C₁₅H₁₄O₃

MS[EI+, m/z](Rel. Int. %) : 242 [M]⁺(13%), 227(17%), 181(4%),

91(100%)

¹H-NMR : 2.75-2.83(4H, m), 3.82(3H, s), 5.88(1H, dd, J=0.3Hz, 2.4Hz)

6.42(1H, dt, J=2.4Hz, 1.5Hz), 7.16-7.31(5H, m)

실험예 5

벤조퀴논 유도체들의 구조활성 상관 관계 연구

실험 재료

Com17 : 2,6-dimethylbenzoquinone

Com18 : Vit K1 (phylloquinone)

Com19 : Vit K3 (menadione)

Com20 : 2-methyl-1,4-naphthoquinone

Com21 : Lapachol (2-undecyl-1,4-benzoquinone)

Com22 : Coenzyme Q0

Com23 : Coenzyme Q2

Com24 : Coenzyme Q10

Com25 : 쉬코닌(Shikonin)

Com26 : 2,3-dimethoxy-5-methyl-(10'-hydroxy-decyl)-1,4-benzoquinone

Com27 : 2-hydroxy-3-(3-methyl-2-butenyl)1,4-naphthoquinone

Com28 : 2,3-dimethoxy-5-methyl-1,4-benzoquinone

실험예 6

새로운 시험관내 인테그린 응집체 분석법(In vitro integrin aggregation assay) 확립

1. 겔 여과된 혈소판(Gel filtered platelet) 조제

Sod. citrate 용액 (3.0%) 1 용량을 주사기에 미리 취한 후 백서 (200-300 g SD, male)의 심장에서 혈액을 9 용량 취하여 섞은 후 1200 rpm에서 10분간 원심분리하여 혈소판 항유 플라즈마(platelet rich plasma) (PRP)를 얻었다. PRP 4 ml를 용리 완충용액(elution buffer)(137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1 mM MgCl₂, 5.6mM glucose, 0.35 mg/ml bovine serum albumin (fraction V. sigma), 3.3 mM NaH₂PO₄, 4mM Hepes)으로 평형(equilibrium)된 세파로스(sepharose) 2B (Pharmacia) 칼럼에 장착(loading)하였다. 최고농도의 혈소판 파편(fraction)을 모아 혈소판 농도를 코울터 카운터(Coulter counter)로 측정하였다.

2. 시험관내 인테그린 응집체 분석법(In vitro integrin aggregation assay)

겔 여과된 혈소판(Gel-filtered platelet) 현탁액을 이용한 시험관내 인테그린 수용체 결합분석법(in vitro integrin receptor binding assay)는 2-채널 옵티멀 응집도계(2-channel optimal aggregometer)(Chrono-log aggregometer)를 이용하여 37℃에서 수행하였다. 500 μl의 겔 여과된 혈소판(gel-filtered platelet) 현탁액에 2.5 mM의 CaCl₂, 50 μM의 인도메타신, 5mg/ml 피브리노겐, 그리고 25μl의 검체용액 또는 생리식염수를 첨가하고 3 분동안 배양(incubation) 시킨 후 ADP 10 μM을 첨가하여 혈소판응집을 유도하였다. 이 계(system)에서 ADP에 의해 활성화된 혈소판막에 인테그린이 노출되어 피브리노겐과 결합하여 혈소판응집이 일어난다.

실험예 7

벤조퀴논(Benzoquinone)류의 암전이 억제작용에 관한 연구

1. 실험재료

엥겔브레쓰-홀름-스왐(Engelbreth-Holm-Swarm : EHS)종양에서 제작된 라미닌(Laminin)과 마트리겔(Matrigel)은 서울 의대 병리학 교실(김우호 교수)로부터 제공받았고 B16-F10 뮤린 멜라노마 셀(murine melanoma cells)은 계대 배양하여 사용하였다. 합성 펩타이드들은 미국, NIH(H. Kleinman 박사)로부터 제공받았다.

2. 시험관 내 실험방법

세포 부착도 실험, 세포 침윤도 실험, 세포독성 실험 방법은 다음 스킴과 같다.

3. 폐전이능 측정 동물 실험

베르센(Versene)을 이용하여 제조한 B16-F10 세포 배양액 2.5x105/DMEM0.2ml을 C57BL6/N 마우스의 꼬리 정맥에 투여한 직후 시료를 꼬리 정맥 투여, 또는 복강으로 투여하였다. 5마리를 1군으로 하였고 15일 후에 해부하여 폐를 적출하였다. 폐에 전이된 콜로니 수를 계수하여 약제 투여군과 대조군간에 전이 능력에 차이가 있는지 조사하였다.

실험예 8

급성독성실험

ICR 생쥐(수컷) 10마리를 1군으로 하여 3가지 이상의 용량으로 시료를 제조하여 꼬리 정맥투여하였다. 2주동안 생사여부를 관찰하여 치사 동물수를 측정하여 프로비트 분석(Probit Analysis)에 의하여 LD₅₀를 구하였다.

결과

1. 화합물 AC7-1의 PAF 길항작용

[표 1]

2. 화합물 AC7-1의 비특이성 혈소판응집 억제작용

화합물 AC7-1은 실험관내 혈소판 응집 분석법(in vitro platelet aggregation assay)에서 PAF, ADP, 콜라겐, 트롬빈에 의해서 유도된 혈소판 응집을모두 강력하게 억제하였다. PAF 수용체 길항제로 분리된 화합물 AC7-1은 예상과는 다르게 PAF 특이적인 응집억제능을 보여 주지 않고 모든 응집유도제에 의한 혈소판 응집을 비특이적으로 강력하게 억제하였다.

화합물 AC7-1을 백서에 80 mg/kg의 용량으로 경구 투여한 후 시간별로 혈액을 채취하여 생체 밖 혈소판 응집분석(ex vivo platelet aggregation assay) 한 결과 콜라겐, ADP으로 응집을 유도한 경우에는 2 시간대에서 응집억제 효과가 최대로 나타났고 트롬빈으로 응집을 유도한 경우에는 1 시간대에서 응집억제 효과가 최대로 나타났다. 4 시간 이후에는 응집억제 작용이 현저히 감소하였다.

상기의 실험결과는 표 2 및 도 1 내지 도 3에 나타내었다.

[표 2]

3. 벤조퀴논 유도체들의 구조활성 상관 관계 연구

합성한 벤조퀴논 유도체들과 퀴논모핵을 중심으로 유사관련 화합물들의 PAF 수용체 결합 저해 활성을 측정하였다.

1,4-벤조퀴논(1,4-benzoquinon)의 알킬체인 길이가 메틸렌기가 9개의 경우13개인 화합물 AC 7-1 보다 약간 우수한 PAF 길항작용 효과를 나타냈다.

메틸렌기가 4개인 경우는 활성이 급격히 감소하였고 2, 6번 위치에 메틸기가 있는 경우 작용이 거의 없었다. 또한 단순한 1,4-벤조퀴논은 작용이 없었다.

6번 위치에 벤질기와 같은 벌크니스(bulkyness)가 도입되면 활성이 약간 감소하였다. 이상의 결과로 볼 때 6번 위치에 적당한 길이의 즉 6개 이상의 알킬체인이 필수적인 인자임을 알 수 있었다.

화합물 AC7-1의 환원형인 하이드로퀴논과 반응 중간 생성물인 디메톡시-트리데실벤젠(dimethoxy-tridecyl benzene)은 작용이 없었다. 따라서 1,4-벤조퀴논 핵이 활성에 중요한 인자임을 알 수 있었다.

퀴논(Quinone)과 관련된 유사화합물들에 대한 구조 활성 상관 관계 연구 결과 Vit K 계열 나프토퀴논(naphthoquinone) 물질, 코엔자임 Q(Coenzyme Q) 계열물질들은 거의 작용이 없었다.

세포독성으로 인한 항암작용이 보고된 쉬코닌(shikonin)의 경우 고농도(20g/ml에서 75%억제)에서 작용을 나타내는 듯 하였으나 저농도(2g/ml에서 2%억제)에서 급격히 감소하였다. 쉬코닌(shikonin)은 세포독성이 있는 것으로 보고 되었다. 따라서, 고농도에서는 억제 작용은 세포 독성에 의한 세포붕괴(celllysis)로 인한 가상증폭(false positive) 효과 때문인 것으로 추정된다. 1,4-벤조퀴논 핵을 중심으로 4개의 관능기(functional groups)을 가지고 있는 2,3-디메톡시-5-메틸-(10'-하이드록시데실)-1,4-벤조퀴논(2,3-dimethoxy-5-methyl-10'hydroxydecyl)-1,4-benzoquinone)의 경우 화합물 AC 7-1 보다 약간 활성이 감소하였으나 유의성 있는 억제 활성을 보여 주었다.

알킬체인(Alkyl chain) 길이가 4배 긴 유사 계열 화합물 코엔자임 Q10(coenzyme Q10)의 경우 활성이 없는 것으로 나타났다. 또한 6번 위치에 메틸기가 치환된 코엔자임 Q0(Coenzyme Q0)의 경우도 작용이 없었다.

지금까지의 구조 활성 상관관계 연구결과는 다음과 같다.

- 1,4-벤조퀴논(1,4-benzoquinone) 핵과 6번 위치에 적당한 길이의 알킬체인이 활성에 중요한 인자이다.

- 나프토퀴논(Naphtoquinone), 안트라퀴논(anthraquinone)계열 물질은 PAF 수용체 결합 저해 작용이 없었다.

- 1,4-친핵성첨가반응(nucleophilic addition)을 할 수 없는 2,3-디메톡시-5-메틸-(10'-하이드록시데실)-1,4-벤조퀴논(2,3-dimethoxy-5-methyl-(10'-hydroxydecyl)-1,4-benzoquinone)의 경우에도 강력한 저해 활성이 나타나는 것으로 보아 화합물 AC 7-1의 PAF 수용체 결합 저해활성은 수용체와 리간드사이의 친핵성 상호작용(nucleophilic interaction)에 의한 공유결합 때문은 아닌 것으로 추정된다.

이상의 실험 결과를 다음 스킴 4에 나타냈다.

4. AC7-1의 전합성

수립한 합성법을 다음의 스킴 5에 나타내었다.

상기식에서 R1, R2 및 R3는 각각 수소원자, 탄소수 1-4의 저급알킬, 탄소수 1-4의 저급알콕시기이고, R4는 탄소수 4-18의 알킬기, 탄소수 4-18의 알킬렌기, 탄소수 4-18의 하이드록시알킬기, 탄소수 4-18의 하이드록시알킬렌기, 페닐기 또는 벤질기이며, R5는 R4에서 탄소수가 두 개 적은 그룹이며, X는 이탈기이다.

5. 인테그린 수용체(Integrin (GPIIb/IIIa)Receptor) 길항 작용에 관한 연구

GPIIb/IIIa 수용체 결합분석법(receptor binding assay)에서 AC7-1은 용량의존적으로 피브리노겐 결합(fibrinogen binding)을 억제하였다.

(IC₅₀= 6.4x10^-6M).

6. 급성독성실험

[표 3]

이상의 실시예 및 실험예들에 의하여 확인되는 바와 같이 본 발명의 화합물들은 강력한 항혈전 및 암전이 억제작용을 가지며, 독성이 적으므로 의약품으로 사용될 수 있다.

본 발명의 화합물들은 일일 0.1 내지 1000mg의 용량을 약제학적으로 통상으로 허용되는 부형제나 보조제와 혼합하고 통상의 약제학적인 방법으로 경구 또는 비경구로 투여할 수 있는 약학적 제제로 제제화하여 의약품으로 사용될 수 있다.

다음에 제제실시예로서 제제의 제조예를 예시한다.

제제실시예 1 : 정제의 제조

합성실시예 4의 화합물 10mg

유당 20mg

전분 20mg

스테아린산 마그네슘 적량

상기의 성분을 혼합하고 통상의 정제의 제조방법에 따라서 50mg의 정제로 타정한다.

제제실시예 2 : 캅셀제의 제조

합성실시예 5의 화합물 10mg

유당 20mg

전분 19mg

탈크 1mg

스테아린산 마그네슘 적량

상기의 성분을 혼합하고 통상의 캅셀제의 제조방법에 따라서 50mg이 젤라틴 캅셀에 충진하여 캅셀제를 제조한다.

제제실시예 3 : 주사제의 제조

합성실시예 6의 화합물 2mg

용해보조제 적량

주사용멸균증류수 적량

상기의 성분을 통상이 주사제의 제조방법에 따라서 2ml의 앰플에 충진하고 밀봉한다음 멸균하여 주사제를 지조한다.

제제실시예 4 : 시럽재의 제조

합성실시예 8의 화합물 100mg

틘 80 적량

설탕 5g

이성화당 5g

정제수 적량

전체 50ml

상기의 성분을 정제수에 넣고 잘 교반한다음 50ml의 유리병에 충진하고 멸균하여 시럽제를 제조한다.

제제실시예 5 : 연고제의 제조

합성실시예 10의 화합물 1000mg

디에탄올아민 1.5g

폴리비닐피롤리돈 5g

프로필렌글리콜 30g

증류수를 가하여 전체 100ml로 함

상기의 성분을 통상의 연고제의 제조방법에 따라서 연고제를 제조한다.

제제실시예 6 : 크림제의 제조

합성실시예 12의 화합물 1000mg

이소프로필 미리스테이트/이소프로필 팔미테이트 5g

/이소프로필 스테아레이트 혼합물

팔미트산 및 모노- 및 디-글리세라이드 혼합물 4g

극히 고분자량의 적당히 가교결합된 폴리아크릴산 0.5g

세틸팔미테이트 4g

글리세린 3g

세틸스테아릴알콜 1g

벤질알콜 3g

정제수를 가하여 전체 100ml

상기의 성분을 통상의 크림제의 제조방법에 따라서 크림제를 제조한다.

본 발명의 벤조퀴논류 화합물은 세포외 기질, 특히 피브로넥틴에 대한 암세포 부착을 강력하게 억제하고, 혈소판에서 피브리노겐의 GPIIb/IIIa 수용체에 대한 결합을 억제함으로써 강력한 암전이 억제작용 및 항혈소판, 항혈전 작용을 가지며, 독성이 적으므로 의약품으로 사용될 수 있다.

Claims

다음 화학식 (I)의 벤조퀴논 유도체

상기식에서, R₁은 탄소수 1-4의 저급알콕시기이고, R₂는 수소원자 또는 탄소수 1-4의 저급알콕시기이고, R₃은 수소원자 또는 탄소수 1-4의 저급알킬기이고, R₄는 탄소수 4-18의 알킬기, 탄소수 4-18의 하이드록시알킬기 또는 페닐알킬기이다.
다음 화학식 (II)의 화합물을 화학식 (III)의 X - R₄의 화합물과 축합제의 존재하에 반응시켜서 화학식 (IV)의 화합물을 환원시키고, 얻어진 다음 화학식(V)의 화합물을 산화시켜서 화학식 (I)의 화합물을 제조하는 방법.

상기식에서, R₁은 탄소수 1-4의 저급알콕시기이고, R₂는 수소원자 또는 탄소수 1-4의 저급알콕시기이고, R₃은 수소원자 또는 탄소수 1-4의 저급알킬기이고, R₄는 탄소수 4-18의 알킬기, 탄소수 4-18의 하이드록시알킬기 또는 페닐알킬기이고, R₅는 R₄에서 탄소수가 하나 적은 그룹이며, X는 이탈기이다.
다음 화학식 (I)의 벤조퀴논 화합물을 유효성분으로 함유하고 여기에 통상의 약제학적으로 허용되는 부형제 또는 보조제와 혼합하고 통상의 약제학적으로 허용되는 방법으로 통상의 약제학적 제제로 제제화하여 제조된 암전이 억제효과를 갖는 약학적 제제.

상기식에서, R₁은 탄소수 1-4의 저급알콕시기이고, R₂는 수소원자 또는 탄소수 1-4의 저급알콕시기이고, R₃은 수소원자 또는 탄소수 1-4의 저급알킬기이고, R₄는 탄소수 4-18의 알킬기, 탄소수 4-18의 하이드록시알킬기 또는 페닐알킬기이다.