JPH01104033A - ヒドロキサム酸誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、細胞増殖抑制作用、血管新生抑制作用を有し
、癌または自己免疫疾患の治療および予防作用を有する
新規なヒドロキサム酸誘導体に関するものである。

［従来技術］ 細胞増殖は生物が成長あるいは生命を推持していくうえ
で欠くことの出来ない機能である。高等動物では多くの
組織や臓器が各々独自の増殖機構を有しており、それら
は様々な制御機構によって調節されている。近年、生体
内から数１０種類の細胞増殖を正に制御する物質、即ち
“細胞増殖因子“が分離、精製されつつあり、個体の形
成、維持に重要な役割を果たしていることが明らかにさ
れている。一方、細胞増殖の異常、特に制御を外れた無
制限の増殖が各種の疾患と関係しているとの報告も多い
。例えば、ガンはその典型といえる。

またガン細胞は増殖を維持していくために、血管の新生
を促進させる物質を放出して、ガン組織周辺やその内部
に脈管を形成させることが分かってきているが、この因
子（血管新生因子）が血管内皮細胞に対して強力な増殖
促進活性を持つことが明らかにされつつある。またこの
ような血管新生は慢性炎症、糖尿病性網膜症、乾せん、
リウマチ性関節炎等の病態時にも認められ、これらの疾
患の進展に対する関与が示唆されている。

また、免疫担当細胞特にリンパ球の活性化にら種々の細
胞増殖因子が関与していることが分かってきており、自
己免疫疾患あるいはアレルギー疾患の憎悪因子の一つと
して、これら細胞増殖因子の過剰産生や過剰応答が考え
られている。従って、上記疾患に関与している細胞増殖
因子に対して選択的に阻害したり、応答を抑制する薬物
が開発されれば、これらの疾患に対して有効な予防、治
療手段となりうるし、臓器移植時の拒否反応の抑制にも
有効と思われる。

［発明が解決しようとする課Ｍ］ 本発明は細胞増殖抑制作用を有する新規なヒドロキサム
酸誘導体を提供するものである。

［課題を解決するための手段］ 本発明は、 一般式 （式中、Ｒ＋、　Ｒ１は同一または異なってメチル基ま
たはメトキシ基を示すか、Ｒ１とＲ２が互いに結合しＲ
１とＲ１で−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−を示す。

Ｒ３は置換されていてもよい芳香族基または異項環基を
、ｎは５または６を示す。）で表わされるヒドロキサム
酸誘導体 である。

前記−数式（Ｉ）中、Ｒ３で示される芳香族基としては
たとえばフェニル基、ナフチル基、インダニル基（４−
インダニル、５−インダニル）などのアリール基があげ
られ、異項環基としては酸素原子。

窒素原子および硫黄原子の少なくとも一個を環構成原子
として含有する５または６員環の単環性化合物または二
環性化合物があげられその具体例としては、たとえばチ
エニル基（２−チエニル、３−チエニル）、フリール基
（２−フリール、３−フリール）、ピリジル基（２−ピ
リジル、３−ピリジル、４−ピリジル）、キノリル基（
４−キノリル、８−キノリル）、イソキノリル（４−イ
ソキノリル、８−イソキノリル）などがあげられる。な
かでもフェニル。

チエニルが好ましい。これら芳香族基および異項環基は
環上の任意の位置に１〜５個、好ましくは１〜３個の置
換基を有していてしよく、このような置換基としてはた
とえばフッ素、塩素、臭素などのハロゲン原子、メチル
、エチル、プロピルなど炭素数１〜３のアルキル基、メ
トキシ、エトキシ、プロポキシなど炭素数１〜３のアル
コキシ基などがあげられる。

一般式（Ｉ）で表わされる化合物は 一般式 （式中、各記号は前記と同意義である）で表わされる化
合物にカルボン酸活性化剤を反応させてカルボキシル基
における反応性誘導体に導びきついでこれにヒドロキシ
ルアミンを反応させることによりて製造することができ
る。

化合物（ＩＩ）とカルボン酸活性化剤の反応において、
カルボン酸活性化剤としてはたとえばチオニルクロライ
ド、五塩化リン、クロル炭酸エステル（クロル炭酸メチ
ル、クロル炭酸エチル）、オキザリルクロライド、カル
ボジイミド類（例、Ｎ、Ｎ−ジシクロへキンル力ルポジ
イミド（ＤＣＣ））などがあげられるが、カルボジイミ
ド類とパラニトロフェノールまたはヒドロキシコハク酸
イミドを併用してらよい。この反応は通常たとえば塩化
メチレン。

クロロホルムなどのハロゲン化炭化水素類、テトラヒド
ロフラン（Ｔ）ＴＦ）、ジオキサン、ジメチルエーテル
、ジエヂルエーテル、イソプロピルエーテルなどのエー
テル類、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはこれらの
混合溶媒などの存在下におこなわれる。反応温度は通常
−１日℃〜５０℃である。

この反応において、カルボン酸活性化剤として塩化チオ
ニル、オキザリルクロライドまたは五塩化リンを用いた
場合は反応性誘導体として酸ハライドが得られ、カルボ
ン酸活性化剤としてクロル炭酸エステルを用いた場合に
は反応性誘導体として混合酸無水物が得られ、またカル
ボン酸活性化剤としてカルボジイミド類を用いた場合に
は反応性誘導体として活性エステルが得られる。

化合物（Ｉｆ）のカルボキシル基における反応性誘導体
とヒドロキシルアミンとの反応は、該反応性誘導体が酸
ハライドである場合はたとえばジクロルメタン、テトラ
ヒドロフラン、アセトンなどの溶媒中、脱酸剤（ピリジ
ン、トリエチルアミン、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム
、炭酸水素カリウム、炭酸水素ナトリウムなど）の存在
下に無水または含水条件下に行なわれる。反応温度は一
り０℃〜３０℃程度である。該反応性誘導体が活性エス
テルまたは混合酸無水物である場合は化合物（ｎ）とカ
ルボン酸活性化剤との反応で用いた溶媒と同様な溶媒中
で行なうことができる。この場合の反応温度は通常０〜
３０°Ｃで反応時間は１〜５時間である。

かくして製造されるヒドロキサム酸誘導体（Ｉ）は、自
体公知の分離、精製手段（例、クロマトグラフィー、結
晶化法）などにより単離採取することができる。

ヒドロキサム酸誘導体（Ｉ）は、構造上キノン核側鎖ア
ルファ（α）炭素において不斉中心をもつため光学活性
を有する化合物が存在する。従って本発明化合物（Ｉ）
は光学活性化合物およびラセミ化合物のいずれも含むこ
とを意味する。

本発明の化合物は各種細胞（内皮細胞、リンパ球。

ガン細胞など）の増殖抑制作用を有し、そのため、血管
新生抑制作用、免疫抑制作用、ガン細胞増殖抑制作用を
有する。しかも毒性、副作用は極めて低い。したがって
本発明の化合物（Ｉ）は哺乳動物（マウス、ラット、ウ
サギ、サル、馬３人など）に対して糖尿病性網膜症、乾
せん、リウマチ、慢性炎症、自己免疫疾患、癌などの諸
疾患の治療および予防剤として有用である。また臓器移
植時における拒否反応の抑制剤としても有用である。

さらに、本発明化合物（Ｉ）は、多価不飽和脂肪酸（リ
ノール酸、γ−リルン酸、α−リルン酸。

アラキドン酸、ジホモ−γ−リルン酸、エイコサペンタ
エン酸）の代謝改善、特に過酸化脂肪酸の生成抑制作用
（抗酸化作用）あるいは５−リポキシゲナーゼ系代謝産
物（例、ロイコトリエン類、５−ヒドロキシエイコサテ
トラエン酸、５−パーオキシエイコサテトラエン酸、リ
ボキシン類など）の生成抑制作用も有しており、哺乳動
物に対して気管支喘息、炎症、即時性アレルギー、動脈
硬化、アテローム変性動脈硬化、脂肪肝、肝炎、肝硬変
、過敏症肺臓炎などの諸疾患に対して治療および予防効
果が期待され、たとえば抗喘息剤、抗アレルギー剤、脳
循環器系改善剤、冠状動脈硬化予防剤、免疫調整剤。

プロスタグランジン−トロンボキサン代謝改善剤。

脂肪肝、肝炎、肝硬変、過敏症肺臓炎治療剤などの医薬
として有用である。

本発明化合物は毒性が低く、そのままもしくは自体公知
の薬学的に許容される担体、賦形剤などと混合した医薬
組成物［例、錠剤、カプセル剤（ソフトカプセル、マイ
クロカプセルを含む）、液剤、注射剤、坐剤］として経
口的もしくは非経口的に安全に投与することができる。

投与量は投与対象、投与ルート、症状などによっても異
なるが、たとえば、成人には１日当り通常的ｏ、　１ｍ
ｇ／　ｋｇ　〜４０ｍｇ／ｋｇ体重程度、好ましくは０
．２ｍｇ／　ｋｇ〜２０ｍｇ／　ｋｇ体重程度である。

化合物（ｎ）はたとえば特開昭６１−４４８４０に記載
、の方法によって製造することができる。

［発明の効果］ 本発明に係る新規ヒドロキサム酸誘導体は細胞増殖抑制
作用を有し、血管の新生を阻止し、癌細胞の増殖を抑制
し、免疫を抑制するため、制癌剤として用いられるほか
、臓器移植時における拒否反応を抑制するために用いる
ことができる。

［実施例］ 実施例１ ７−（４−メトキシフェニル）−７−（３，５，６−ド
リメチルー１．４−ベンゾキノン−２−イル）−へブタ
ン酸（Ｉ，３ｇ、　　３．３ｍｍｏｌ）をジクロルメタ
ン（２０りに溶かし、オキザリルクロライド（ｌ成）を
室温にて加えた。反応液を５０℃で１時間攪拌した後、
減圧下に溶媒を留去した。得られた残留物をＴＨＦ（５
ｄ）に溶かし、ヒドロキシルアミン塩酸塩（Ｉｇ、　　
１４ｍｍｏｌ）のＴ９Ｆ（ｌ　Ｏｄ）と飽和重曹水（Ｉ
１）の混合液に室温下で滴下した。

室温にて１時間攪拌後反応液に酢酸エチル（２０滅）を
加えた。有機層を水洗、乾燥後、減圧濃縮して７−（４
−メトキシフェニル）−７−（３，５゜６−ドリメチル
ー１．４−ベンゾキノン−２−イル）−ヘプタノヒドロ
キサム酸（０，６ｇ、４２％）を得た。物性は第１表に
化合物Ｎ０１４として記載した。同様にして第１表中の
化合物Ｎｏ、６．７．８゜９．１０，１１，１２．１３
，１４，１５．１６および１７を製造した。

実施例２ ７−（４−フルオロフェニル）−７−（３，５，６−ド
リメチルー１．４−ベンゾキノン−２−イル）−へブタ
ン酸（０，８ｇ、　　２．２ｍｍｏｌ）をジクロルメタ
ン（２０ｄ）に溶かし、オキザリルクロライド（０，５
ｄ）を室温にて加えた。反応液を５０℃で１時間攪拌し
た後、減圧下に溶媒を留去した。得られた残留物をＴＨ
Ｅ（５戒）に溶かし、ヒドロキシルアミン塩酸塩（０、
５ｇ＋　　７　ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（Ｉ０蔵）と飽和重
曹水（Ｉ０ｄ）の混合液に室温下で滴下した。室温にて
１時間攪拌後反応液に酢酸エチ圧濃縮し、残留物をイソ
プロピルエーテルから再結晶して７−（４−フルオロフ
ェニル）−７−（３。

５．６−ドリメチルー１．４−ベンゾキノン−２−イル
）−ヘプタノヒドロキサム酸（０，７ｇ、８５％）を得
た。物性は第１表に化合物ＮＯ１２として記載した。同
様にして第１表中の化合物Ｎｏ、　１　、３および５を
製造した。

（以　下　余　白） 実施例３ 製剤例 Ａ）　カプセル （Ｉ）化合物Ｎｏ、　１　　　　　　　　　５０ｍｇ（
２）微粉末セルロース　　　　　　３０ｍｇ（３）ラク
トース　　　　　　　　　３７ｍｇ（４）ステアリン酸
マグネシウム　　　３ｍｇ計１２０ｍｇ （Ｉ）、（２）、（３）および（４）を混合してゼラチ
ンカプセルに充填した。

Ｂ）軟カプセル （Ｉ）化合物Ｎｏ、　７　　　　　　　　　５０ｍｇ（
２）トウモロコシ油　　　　　　　１００ｍｇ計１５０
ｍｇ Ｃ）錠剤 （Ｉ）化合物Ｎｏ、　２　　　　　　　　　５０ｍｇ（
２）ラクトース　　　　　　　　　　３４ＩＩ１ｇ（３
）トウモロコシ澱粉　　　　　　　１０．８ｍｇ（４）
トウモロコシ澱粉（のり状）　　　　５ｍｇ（５）ステ
アリン酸マグネシウム　　　０．４ｍｇ（６）カルボキ
シメチルセルロースカルシウム０ｍｇ 計１２０ｍｇ 常法に従ってこれらを混合して錠剤機により打錠した。

実験例１　〔モルモット多形核白血球由来の５−リボキ
シゲネースに対する阻害作用（Ｉ０−’Ｍ））５−リポ
キシゲネースは、モルモット腹腔白血球より得た酵素標
品を用いた。リボキシゲネース活性測定には２５μＭ［
１−１′Ｃ］アラキドン酸（５ｘ　１０　’ｃｐｍ）を
基質として、５０ｍＭリン酸緩衝液（Ｊ）Ｈ７，４）、
２ｍＭＣａＣ（２＊、２ｍＭ　ＡＴＰおよび酵素を含む
反応液（２００μＱ）を用いた。２５℃で、２分間ブレ
インキュベートした後、［１−”Ｃ］アラキドン酸（５
Ｘ　１０　’ｃｐｍ）を添加し、２５℃で３分間反応後
、その反応液を酸性にし、アラキドン酸および代謝産物
をエーテルで抽出した。エーテル層の放射活性はシリカ
ゲル薄層クロマトグラフィーで石油エーテル：エチルエ
ーテル：酢酸（Ｉ５：８５：０．１）の展開溶媒を用い
、−１０℃で展開した。展開後、薄層プレートのオート
ラジオグラフィーをとった後、薄層プレートから放射活
性部位のシリカゲルをかき取り、生成物の放射活性を計
数した。薬物は反応開始２分前に添加した。

実験例２　〔血小板膜画分とＵ−４６６１９（ＰＧＨ２
／ＴＸＡ２）の結合阻害反応〕 モルモットの採血および血小板膜画分の調製はニス・シ
ー・ハング（Ｓ、　Ｃ，Ｈｕｎｇ）らの方法［Ｂｉｏｃ
ｈｉｍ。

Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ａｃｔａ、　７２８．１７１−１７８
（Ｉ９８３）］に準じて行なった。ハートレー（Ｈａｒ
ｔ　ｌｅ）系モルモットをエーテル麻酔下、心臓から採
血し、３．１５％クエン酸ナトリウム液（最終濃度１ｍ
Ｍアスピリン含有）に懸濁した（クエン酸ナトリウム液
：全血＝　１　：９）。

クエン酸ナトリウム加血液を３００　Ｏｒｐｍ、５−６
秒間遠心し、ｐｌａｔｅｌｅｔ　　ｒｉｃｈ　　ｐｌａ
ｓｍａ（Ｐ　ＲＰ　）を分離した。ＰＲＰをさらに４８
００μａｍ、１０分間４℃で遠心し、血小板ペレットを
得た。血小板ペレットは３０成の２５ｍＭ　Ｔｒｉｓ−
ＨＣＱ緩衝液（５ｍ　Ｍ　Ｍ　ｇ　ＣＱ　を含有、ｐＨ
７，４）で洗浄し、同じ緩衝液で懸濁し、血小板は５ｏ
ｎｉｃａｔｏｒを用いて、破壊した後、１１００００ｒ
ｐでｌｈｒ遠心し、膜画分を緩衝液で懸濁した。蛋白定
量はＢｉｏｒａｄ　ｐｒｏｔｅｉｎａｓｓａｙキットを
用いて行ない、Ｉ　−１，５ｍｇ／滅蛋白に調製した。

Ｂｉｎｄｉｎｇ　ａｓｓａｙは次の方法で行なった。［
３Ｈ］Ｕ−４６６１９４ＨＭ、薬液ｔｏ−９−１０″″
５Ｍおよび血小板膜画分１００μｇ蛋白からなる反応液
を２５℃（室温）で３０分インキュベートした。反応液
はグラスフィルター（ＧＦ／Ｃ）でろ過し、上記緩衝液
で２回洗浄し、グラスフィルターを液体シンチレータ−
（アニオン系）４７ｎｆｌに入れ、放射能活性を測定し
た。

化合物番号　　　　ＩＣ！。（Ｍ） ４　　　　　　６．０ ７　　　　　　２．６ 実験例３　〔ヒト屑帯静脈血管内皮細胞の細胞増殖阻害
の検定〕 ヒト血管内皮細胞はヒト謄帯静脈より、トリプシン酵素
溶液による漂流法により得られ、ＧＩＴ培地（大五栄養
化学）に、２，５％ウシ胎児血清および２．Ｏｎｇ／蔵
のヒト組み替え線維芽細胞増殖因子（以下、ｒＦＧＦと
略す。当社生物工学研究所において作製）を添加した培
養液にて継代維持されたものを使用した。

２Ｘ１０３個のヒト血管内皮細胞の懸濁液、１００μｍ
２を、９６穴培養皿（Ｎｕｎｃ、１−６７００８）に播
種し、ガス制御恒温槽で培養する。翌日、終濃度２１ｇ
／ｄになるようなｒＦＧＦと、種々の濃度の検体を含む
培地、ｌα０μａを加えた。検体はジメチルスルホキシ
ド（以下、ＤＭＳＯ）溶液に溶解し、ＤＭＳＯ終濃度が
０．２５％以下になるように培養液にて希釈した。３日
間培養の後、検体を含む培ａ液を吸引除去し、１ｍｇ／
ｄのＭＴＴ溶液（３−（４，５−ジメチル−２−チアゾ
リル）−２゜５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウムブ
ロマイドを培養液に溶解）を１００μＱ加え、４時間保
温した。その後、ｌＯＯμＱの１０％ＳＤＳ溶液（ソジ
ウムドデシルスルフェート水溶液）を加えて５−６時間
保温して、細胞およびＭＴＴ色素を可溶化し、分光光度
計にて０Ｄ５９０値を測定した。検体を加えない対照群
のＯＤ値を１００％とし、５０％のＯＤ値を与える化合
物濃度、ＩＣ５（＋値により各検体の、内皮細胞増殖阻
害活性を比較検討した。

１　　　　　　　　　　０．６３ ２　　　　　　　　　　１．２５ ３　　　　　　　　　　１．２５ ４　　　　　　　　　　０．６３ ５　　　　　　　　　　１．２５ ７　　　　　　　　　　＜０．６３ ８　　　　　　　　　　＜０．６３ ９　　　　　　　　　　１．２５ 実験例４　　（ＩＬ−２依存性細胞（ＮＫＣ−３）の細
胞増殖阻害の検定〕 ９６穴平底マイクロプレートの各人にＮＫＣ−３細胞（
４ＸｌＯ５個／穴）を５０μＣＳ　ＩＬ−２溶液（０，
０６７Ｕ／１ｎ１）を２０μ（、更に検体（ＤＭｓｏ溶
液）を４０μＱ入れ、３７°Ｃで２０時間培養した（培
養液＋ＲＰＭＩ　１６４０−２０％ＥＣ８）。

各人にＭＴＴ溶液２０μｇを加え、３７℃で４時間保温
した。続いて各人に１０％ＳＤＳ溶液１００μｇを加え
、３７℃で一晩放置して、細胞およびＭＴＴ色素を可溶
化し、分光光度計にて５９０ｎｍの吸光度を測定した。

検体を加えない場合の吸光度を１００として、５０％吸
光度を与える化合物濃度をＩＣ５ｏ値とした。

化合物番号　　　　ＩＣｓｏ（Ｍ） １　　　　　　　４．１ＸｌＯ−’ 実験例５　〔ニワトリ胚漿尿膜法による血管新生抑制活
性アッセイ法〕 培養ニワトリ胚漿尿膜を使用する血管新生抑制活性のア
ッセイ法は、ティラーらの方法の変法を用いて評価した
〔ティラーほか、Ｓ、Ｔａｙｌｏｒ　＆　Ｊ。

Ｆｏｌｋｍａｎ、　Ｎａｔｕｒｅ、　２９７．３０７（
Ｉ９ｇ２））。３日齢の有精卵の殻を除去して培養し、
１０（または１１）日齢に達した胚を使用した。血管新
生物質であるＥ　ＣＧ　Ｓ　（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ
　ｃｅｌｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ１コ
ラボレイチプリサーチ社）とともに検体（Ｉ００μｇ）
の水溶液または水懸濁液を透明プラスチック製ディスク
上で乾固し、漿尿膜上に付置し、２（または３）日後に
実体顕微鏡下に血管新生の有無をコントロールと比較し
て判定した。

化合物番号　　　　有　効　性 ４　　　　　　　　＋ ５　　　　　　　　＋ ７　　　　　　　　＋ ８　　　　　　　　＋ 実験例６ 各群５匹ずつの雄性ＩＣＲマウス（８週齢）を使用した
。３日間検体（化合物番号ｌ） １００　ｍｇ／　ｋｇ／　ｄａｙを皮下投与した。投与
液は０．５％アラビアゴムを含む生理食塩水に溶解し１
００　ｍｇ／　１０　ｄ／　ｋｇ体重で投与した。

［結果］ 薬物投与開始後４日間の観察機関中、死亡例はなく、体
重減少等の異状は観察されなかった。

代理人　　弁理士　岩　１）　　弘

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、Ｒ＾１、Ｒ＾２は同一または異なってメチル基
   またはメトキシ基を示すか、Ｒ＾１とＲ＾２が互いに結
   合しＲ＾１とＲ＾２で−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−を示
   す。 Ｒ＾３は置換されていてもよい芳香族基または異項環基
   を、ｎは５または６を示す。）で表わされるヒドロキサ
   ム酸誘導体。 ２、一般式（ I ）中、ｎが５である請求項１記載のヒ
   ドロキサム酸誘導体。 ３、一般式（ I ）中Ｒ＾３がメチルで置換されていて
   もよいチエニル基である請求項１記載のヒドロキサム酸
   誘導体。 ４、一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ′） （式中Ｒ＾１、Ｒ＾２およびｎは前記と同意義であり、
   Ｒ＾４は水素原子、メチル基、メトキシ基、塩素原子ま
   たはフッ素原子を示す。）で表わされる請求項１記載の
   ヒドロキサム酸誘導体。 ５、Ｒ＾１、Ｒ＾２がメチル基でＲ＾４が水素原子であ
   る請求項４記載のヒドロキサム酸誘導体。