JP2639568B2 - 細胞増殖抑制剤 - Google Patents
細胞増殖抑制剤Info
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Description
【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、細胞増殖抑制作用，血管新生抑制作用を有
し、癌または自己免疫疾患の治療および予防に用いられ
る細胞増殖抑制剤に関するものである。
し、癌または自己免疫疾患の治療および予防に用いられ
る細胞増殖抑制剤に関するものである。
［従来技術］ 細胞増殖は生物が成長あるいは生命を維持していくう
えで欠くことの出来ない機能である。高等動物では多く
の組織や臓器が各々独自の増殖機構を有しており、それ
らは様々な制御機構によって調節されている。近年、生
体内から数10種類の細胞増殖を正に制御する物質、即ち
“細胞増殖因子”が分離、精製されつつあり、個体の形
成、維持に重要な役割を果たしていることが明らかにさ
れている。一方、細胞増殖の異常、特に制御を外れた無
制限の増殖が各種の疾患と関係しているとの報告も多
い。例えば、ガンはその典型といえる。またガン細胞は
増殖を維持していくために、血管の新生を促進させる物
質を放出して、ガン組織周辺やその内部に脈管を形成さ
せることが分かってきているが、この因子（血管新生因
子）が血管内皮細胞に対して強力な増殖促進活性を持つ
ことが明らかにされつつある。またこのような血管新生
は慢性炎症、糖尿病性網膜症、乾せん、リマウチ性関節
炎等の病態時にも認められ、これらの疾患の進展に対す
る関与が示唆されている。
えで欠くことの出来ない機能である。高等動物では多く
の組織や臓器が各々独自の増殖機構を有しており、それ
らは様々な制御機構によって調節されている。近年、生
体内から数10種類の細胞増殖を正に制御する物質、即ち
“細胞増殖因子”が分離、精製されつつあり、個体の形
成、維持に重要な役割を果たしていることが明らかにさ
れている。一方、細胞増殖の異常、特に制御を外れた無
制限の増殖が各種の疾患と関係しているとの報告も多
い。例えば、ガンはその典型といえる。またガン細胞は
増殖を維持していくために、血管の新生を促進させる物
質を放出して、ガン組織周辺やその内部に脈管を形成さ
せることが分かってきているが、この因子（血管新生因
子）が血管内皮細胞に対して強力な増殖促進活性を持つ
ことが明らかにされつつある。またこのような血管新生
は慢性炎症、糖尿病性網膜症、乾せん、リマウチ性関節
炎等の病態時にも認められ、これらの疾患の進展に対す
る関与が示唆されている。
また、免疫担当細胞特にリンパ球の活性化にも種々の
細胞増殖因子が関与していることが分かってきており、
自己免疫疾患あるいはアレルギー疾患の憎悪因子の一つ
として、これら細胞増殖因子の過剰産生や過剰応答が考
えられている。従って、上記疾患に関与している細胞増
殖因子に対して選択的に阻害したり、応答を抑制する薬
物が開発されれば、これらの疾患に対して有効な予防、
治療手段となりうるし、臓器移植時の拒否反応の抑制に
も有効と思われる。
細胞増殖因子が関与していることが分かってきており、
自己免疫疾患あるいはアレルギー疾患の憎悪因子の一つ
として、これら細胞増殖因子の過剰産生や過剰応答が考
えられている。従って、上記疾患に関与している細胞増
殖因子に対して選択的に阻害したり、応答を抑制する薬
物が開発されれば、これらの疾患に対して有効な予防、
治療手段となりうるし、臓器移植時の拒否反応の抑制に
も有効と思われる。
［発明が解決しようとする課題］ 本発明はヒドロキサム酸誘導体を含有してなる細胞増
殖抑制剤を提供するものである。
殖抑制剤を提供するものである。
［課題を解決するための手段］ 本発明は、 一般式 （式中、R1,R2は同一または異なってメチル基またはメ
トキシ基を示すか、R1とR2が互いに結合しR1とR2で−CH
＝CH−CH−を示す。R3は置換されていてもよい芳香族基
または異項環基を、ｎは２〜８の整数を示す。）で表わ
されるヒドロキサム酸誘導体を有効成分として含有して
なる細胞増殖抑制剤。
トキシ基を示すか、R1とR2が互いに結合しR1とR2で−CH
＝CH−CH−を示す。R3は置換されていてもよい芳香族基
または異項環基を、ｎは２〜８の整数を示す。）で表わ
されるヒドロキサム酸誘導体を有効成分として含有して
なる細胞増殖抑制剤。
である。
本発明の細胞増殖抑制剤は有効成分として一般式
（Ｉ）で表わされるヒドロキサム酸を含む組成物であ
る。
（Ｉ）で表わされるヒドロキサム酸を含む組成物であ
る。
前記一般式（Ｉ）中、R3で示される芳香族基としては
たとえばフェニル基，ナフチル基，インダニル基（４−
インダニル,5−インダニル）などのアリール基があげら
れ、異項環基としては酸素原子，窒素原子および硫黄原
子の少なくとも一個を環構成原子として含有する５また
は６員環の単環性化合物または二環性化合物があげられ
その具体例としては、たとえばチエニル基（２−チエニ
ル,3−チエニル），フリール基（２−フリール,3−フリ
ール），ピリジル基（２−ピリジル,3−ピリジル,4−ピ
リジル），キノリル基（４−キノリル,8−キノリル），
イソキノリル（４−イソキノリル,8−イソキノリル）な
どがあげられる。なかでもフェニル，チエニルが好まし
い。これら芳香族基および異項環基は環上の任意の位置
に１〜５個、好ましくは１〜３個の置換基を有していて
もよく、このような置換基としてはたとえばフッ素，塩
素，臭素などのハロゲン原子、メチル，エチル，プロピ
ルなど炭素数１〜３のアルキル基，メトキシ，エトキ
シ，プロポキシなど炭素数１〜３のアルコキシ基などが
あげられる。R3としては、フェニル,4−フルオロフェニ
ル,4−メトキシフェニル,5−メチル−２−チエニルが好
ましい。ｎは４〜６の整数が好ましく、さらに好ましく
は5,6である。
たとえばフェニル基，ナフチル基，インダニル基（４−
インダニル,5−インダニル）などのアリール基があげら
れ、異項環基としては酸素原子，窒素原子および硫黄原
子の少なくとも一個を環構成原子として含有する５また
は６員環の単環性化合物または二環性化合物があげられ
その具体例としては、たとえばチエニル基（２−チエニ
ル,3−チエニル），フリール基（２−フリール,3−フリ
ール），ピリジル基（２−ピリジル,3−ピリジル,4−ピ
リジル），キノリル基（４−キノリル,8−キノリル），
イソキノリル（４−イソキノリル,8−イソキノリル）な
どがあげられる。なかでもフェニル，チエニルが好まし
い。これら芳香族基および異項環基は環上の任意の位置
に１〜５個、好ましくは１〜３個の置換基を有していて
もよく、このような置換基としてはたとえばフッ素，塩
素，臭素などのハロゲン原子、メチル，エチル，プロピ
ルなど炭素数１〜３のアルキル基，メトキシ，エトキ
シ，プロポキシなど炭素数１〜３のアルコキシ基などが
あげられる。R3としては、フェニル,4−フルオロフェニ
ル,4−メトキシフェニル,5−メチル−２−チエニルが好
ましい。ｎは４〜６の整数が好ましく、さらに好ましく
は5,6である。
一般式（Ｉ）で表わされる化合物は （式中、各記号は前記と同意義である）で表わされる化
合物にカルボン酸活性化剤を反応させてカルボキシル基
における反応性誘導体に導きついでこれにヒドロキシル
アミンを反応させることによって製造することができ
る。
合物にカルボン酸活性化剤を反応させてカルボキシル基
における反応性誘導体に導きついでこれにヒドロキシル
アミンを反応させることによって製造することができ
る。
化合物（II）とカルボン酸活性化剤の反応において、
カルボン酸活性化剤としてはたとえばチオニルクロライ
ド，五塩化リン，クロル炭酸エステル（クロル炭酸メチ
ル，クロル炭酸エチル，），オキザリルクロライド，カ
ルボジイミド類（例、N,N−ジシクロヘキシルカルボジ
イミド（DCC））などがあげられるが、カルボジイミド
類とパラニトロフェノールまたはヒドロキシコハク酸イ
ミドを併用してもよい。この反応は通常たとえば塩化メ
チルン，クロロホルムなどのハロゲン化炭化水素類、テ
トラヒドロフラン（THF），ジオキサン，ジメチルエー
テル，ジエチルエーテル、イソプロピルエーテルなどの
エーテル類,N,N−ジメチルホルムアミドまたはこれらの
混合溶媒などの存在下におこなわれる。反応温度は通常
−10℃〜50℃である。
カルボン酸活性化剤としてはたとえばチオニルクロライ
ド，五塩化リン，クロル炭酸エステル（クロル炭酸メチ
ル，クロル炭酸エチル，），オキザリルクロライド，カ
ルボジイミド類（例、N,N−ジシクロヘキシルカルボジ
イミド（DCC））などがあげられるが、カルボジイミド
類とパラニトロフェノールまたはヒドロキシコハク酸イ
ミドを併用してもよい。この反応は通常たとえば塩化メ
チルン，クロロホルムなどのハロゲン化炭化水素類、テ
トラヒドロフラン（THF），ジオキサン，ジメチルエー
テル，ジエチルエーテル、イソプロピルエーテルなどの
エーテル類,N,N−ジメチルホルムアミドまたはこれらの
混合溶媒などの存在下におこなわれる。反応温度は通常
−10℃〜50℃である。
この反応において、カルボン酸活性化剤として塩化チ
オニル，オキザリルクロライドまたは五塩化リンを用い
た場合は反応性誘導体として酸ハライドが得られ、カル
ボン酸活性化剤としてクロル炭酸エステルを用いた場合
には反応性誘導体として混合酸無水物が得られ、またカ
ルボン酸活性化剤としてカルボジイミド類を用いた場合
には反応性誘導体として活性エステルが得られる。
オニル，オキザリルクロライドまたは五塩化リンを用い
た場合は反応性誘導体として酸ハライドが得られ、カル
ボン酸活性化剤としてクロル炭酸エステルを用いた場合
には反応性誘導体として混合酸無水物が得られ、またカ
ルボン酸活性化剤としてカルボジイミド類を用いた場合
には反応性誘導体として活性エステルが得られる。
化合物（II）のカルボキシル基における反応性誘導体
とヒドロキシルアミンとの反応は、該反応性誘導体が酸
ハライドである場合はたとえばジクロルメタン，テトラ
ヒドロフラン，アセトンなどの溶媒中、脱酸剤（ピリジ
ン，トリエチルアミン，炭酸カリウム，炭酸ナトリウ
ム，炭酸水素カリウム，炭酸水素ナトリウム）の存在下
に無水または含水条件下に行なわれる。反応温度は−10
℃〜30℃程度である。該反応性誘導体が活性エステルま
たは混合酸無水物である場合は化合物（II）とカルボン
酸活性化剤との反応で用いた溶媒と同様な溶媒中で行な
うことができる。この場合の反応温度は通常０〜30℃で
反応時間は１〜５時間である。
とヒドロキシルアミンとの反応は、該反応性誘導体が酸
ハライドである場合はたとえばジクロルメタン，テトラ
ヒドロフラン，アセトンなどの溶媒中、脱酸剤（ピリジ
ン，トリエチルアミン，炭酸カリウム，炭酸ナトリウ
ム，炭酸水素カリウム，炭酸水素ナトリウム）の存在下
に無水または含水条件下に行なわれる。反応温度は−10
℃〜30℃程度である。該反応性誘導体が活性エステルま
たは混合酸無水物である場合は化合物（II）とカルボン
酸活性化剤との反応で用いた溶媒と同様な溶媒中で行な
うことができる。この場合の反応温度は通常０〜30℃で
反応時間は１〜５時間である。
かくして製造されるヒドロキサム酸誘導体（Ｉ）は、
自体公知の分離，精製手段（例、クロマトグラフィー，
結晶化法）などにより単離採取することができる。
自体公知の分離，精製手段（例、クロマトグラフィー，
結晶化法）などにより単離採取することができる。
ヒドロキサム酸誘導体（Ｉ）は、構造上キノン核側鎖
アルファ（α）炭素において不斉中心をもつため光学活
性を有する化合物が存在する。従って化合物（Ｉ）は光
学活性化合物およびラセミ化合物のいずれも含むことを
意味する。
アルファ（α）炭素において不斉中心をもつため光学活
性を有する化合物が存在する。従って化合物（Ｉ）は光
学活性化合物およびラセミ化合物のいずれも含むことを
意味する。
化合物（Ｉ）は各種細胞（内皮細胞，リンパ球，ガン
細胞など）の増殖抑制作用を有し、そのため、血管新生
抑制作用，免疫抑制作用，ガン細胞増殖抑制作用を有す
る。しかも毒性，副作用は極めて低い。したがって化合
物（Ｉ）は哺乳動物（マウス，ラット，ウサギ，サル，
馬，人など）に対して糖尿病性網膜症，乾せん，リマウ
チ，慢性炎症，自己免疫疾患，癌などの諸疾患の治療お
よび予防に有用である。また臓器移植時における拒否反
応の抑制にも有用である。
細胞など）の増殖抑制作用を有し、そのため、血管新生
抑制作用，免疫抑制作用，ガン細胞増殖抑制作用を有す
る。しかも毒性，副作用は極めて低い。したがって化合
物（Ｉ）は哺乳動物（マウス，ラット，ウサギ，サル，
馬，人など）に対して糖尿病性網膜症，乾せん，リマウ
チ，慢性炎症，自己免疫疾患，癌などの諸疾患の治療お
よび予防に有用である。また臓器移植時における拒否反
応の抑制にも有用である。
さらに、化合物（Ｉ）は、多価不飽和脂肪酸（リノー
ル酸，γ−リノリン酸，α−リノレン酸，アラキドン
酸，ジホモ−γ−リノレン酸，エイコサペンタエン酸）
の代謝改善、特に過酸化脂肪酸の生成抑制作用（抗酸化
作用）あるいは５−リポキシゲナーゼ系代謝産物（例、
ロイコトリエン類,5−ヒドロキシエイコサテトラエン
酸,5−パーオキシエイコサテトラエン酸，リポキシン類
など）の生成抑制作用も有しており、哺乳動物に対して
気管支端息，炎症，即時性アレルギー，動脈硬化，アテ
ローム変性動脈硬化，脂肪肝，肝炎，肝硬変，過敏症肺
臓炎などの諸疾患に対して治療および予防効果が期待さ
れ、たとえば抗端息剤，抗アレルギー剤，脳循環器系改
善剤，冠状動脈硬化予防剤，免疫調整剤，プロスタグラ
ンジン−トロンボキサン代謝改善剤，脂肪肝，肝炎，肝
硬変，過敏症肺臓炎治療剤などの医薬として有用であ
る。
ル酸，γ−リノリン酸，α−リノレン酸，アラキドン
酸，ジホモ−γ−リノレン酸，エイコサペンタエン酸）
の代謝改善、特に過酸化脂肪酸の生成抑制作用（抗酸化
作用）あるいは５−リポキシゲナーゼ系代謝産物（例、
ロイコトリエン類,5−ヒドロキシエイコサテトラエン
酸,5−パーオキシエイコサテトラエン酸，リポキシン類
など）の生成抑制作用も有しており、哺乳動物に対して
気管支端息，炎症，即時性アレルギー，動脈硬化，アテ
ローム変性動脈硬化，脂肪肝，肝炎，肝硬変，過敏症肺
臓炎などの諸疾患に対して治療および予防効果が期待さ
れ、たとえば抗端息剤，抗アレルギー剤，脳循環器系改
善剤，冠状動脈硬化予防剤，免疫調整剤，プロスタグラ
ンジン−トロンボキサン代謝改善剤，脂肪肝，肝炎，肝
硬変，過敏症肺臓炎治療剤などの医薬として有用であ
る。
本発明の細胞増殖抑制剤は、その有効成分である化合
物（Ｉ）自体をそのまま投与することもできるが、一般
には種々の自体公知の薬学的に許容される担体，賦形剤
などと混合した医薬組成物として投与される。このよう
な医薬組成物の剤形としてはたとえば錠剤，カプセル剤
（ソフトカプセル，マイクロカプセルを含む），顆粒
剤，散剤，シロップ剤，液剤，注射剤，坐剤などがあげ
られ、これらは常法によって調整することができる。本
発明の細胞増殖抑制剤は経口的もしくは非経口的に人を
含む哺乳動物に投与することができる。投与量は投与対
象，投与ルート，症状などによっても異なるが、たとえ
ば、成人１日当り通常約0.1mg/kg〜40mg/kg体重程度，
好ましくは0.2mg/kg〜20mg/kg体重程度を経口的または
非経口的に投与するのが好都合である。
物（Ｉ）自体をそのまま投与することもできるが、一般
には種々の自体公知の薬学的に許容される担体，賦形剤
などと混合した医薬組成物として投与される。このよう
な医薬組成物の剤形としてはたとえば錠剤，カプセル剤
（ソフトカプセル，マイクロカプセルを含む），顆粒
剤，散剤，シロップ剤，液剤，注射剤，坐剤などがあげ
られ、これらは常法によって調整することができる。本
発明の細胞増殖抑制剤は経口的もしくは非経口的に人を
含む哺乳動物に投与することができる。投与量は投与対
象，投与ルート，症状などによっても異なるが、たとえ
ば、成人１日当り通常約0.1mg/kg〜40mg/kg体重程度，
好ましくは0.2mg/kg〜20mg/kg体重程度を経口的または
非経口的に投与するのが好都合である。
化合物（II）はたとえば特開昭61−44840に記載の方
法によって製造することができる。
法によって製造することができる。
［発明の効果］ 本発明に係る細胞増殖抑制剤は細胞増殖抑制作用を有
し、血管の新生を阻止し、癌細胞の増殖を抑制し、免疫
を抑制するため、制癌剤として用いられるほか、臓器移
植時における拒否反応を抑制するために用いることがで
きる。
し、血管の新生を阻止し、癌細胞の増殖を抑制し、免疫
を抑制するため、制癌剤として用いられるほか、臓器移
植時における拒否反応を抑制するために用いることがで
きる。
［実施例］ 参考例１ ７−（４−メトキシフェニル）−７−（3,5,6−トリ
メチル−1,4−ベゾキノン−２−イル）−ヘプタン酸
（1.3g,3.3mmol）をジクロメタン（20ml）に溶かし、オ
キザリルクロライド（1ml）を室温にて加えた。反応液
を50℃で１時間撹拌した後、減圧下に溶媒を留去した。
得られた残留物をTHF（5ml）を溶かし、ヒドロキシルア
ミン塩酸塩（1g,14mmol）のTHF（10ml）と飽和重曹水
（10ml）の混合液に室温下で滴下した。室温にて１時間
撹拌後反応液に酢酸エチル（20ml）を加えた。有機層を
水洗、乾燥後、減圧濃縮して７−（４−メトキシフェニ
ル）−７−（3,5,6−トリメチル−1.4−ベゾキノン−２
−イル）−ヘプタノヒドロキサム酸（0.6g,42％）を得
た。物性は第１表に化合物No.8として記載した。同様に
して第１表中の化合物No.1,4,10,11,12,13,14,15,16,1
7,19,20,21,22,23,24,25および26を製造した。
メチル−1,4−ベゾキノン−２−イル）−ヘプタン酸
（1.3g,3.3mmol）をジクロメタン（20ml）に溶かし、オ
キザリルクロライド（1ml）を室温にて加えた。反応液
を50℃で１時間撹拌した後、減圧下に溶媒を留去した。
得られた残留物をTHF（5ml）を溶かし、ヒドロキシルア
ミン塩酸塩（1g,14mmol）のTHF（10ml）と飽和重曹水
（10ml）の混合液に室温下で滴下した。室温にて１時間
撹拌後反応液に酢酸エチル（20ml）を加えた。有機層を
水洗、乾燥後、減圧濃縮して７−（４−メトキシフェニ
ル）−７−（3,5,6−トリメチル−1.4−ベゾキノン−２
−イル）−ヘプタノヒドロキサム酸（0.6g,42％）を得
た。物性は第１表に化合物No.8として記載した。同様に
して第１表中の化合物No.1,4,10,11,12,13,14,15,16,1
7,19,20,21,22,23,24,25および26を製造した。
参考例２ ７−（４−フルオロフェニル）−７−（3,5,6−トリ
メチル−1,4−ベゾキノン−２−イル）−ヘプタン酸
（0.8,2.2mmol）をジクロルメタン（20ml）に溶かし、
オキザリルクロライド（0.5ml）を室温にて加えた。反
応液を50℃で１時間撹拌した後、減圧下に溶媒を留去し
た。得られた残留物をTHF（5ml）に溶かし、ヒドロキシ
ルアミン塩酸塩（0.5g,7mmol）のTHF（10ml）と飽和重
曹水（10ml）の混合液に室温下で滴下した。室温にて１
時間撹拌後反応液に酢酸エチル（20ml）を加えた。有機
層を水洗、乾燥後、減圧濃縮し、残留物をイソプロピル
エーテルから再結晶して７−（４−フルオロフェニル）
−７−（3,5,6−トリメチル−1,4−ベゾキノン−２−イ
ル）−ヘプタノヒドロキサム酸（0.7g,85％）を得た。
物性は第１表に化合物No.6として記載した。同様にして
第１表中の化合物No.2,3,5,7,9および18製造した。
メチル−1,4−ベゾキノン−２−イル）−ヘプタン酸
（0.8,2.2mmol）をジクロルメタン（20ml）に溶かし、
オキザリルクロライド（0.5ml）を室温にて加えた。反
応液を50℃で１時間撹拌した後、減圧下に溶媒を留去し
た。得られた残留物をTHF（5ml）に溶かし、ヒドロキシ
ルアミン塩酸塩（0.5g,7mmol）のTHF（10ml）と飽和重
曹水（10ml）の混合液に室温下で滴下した。室温にて１
時間撹拌後反応液に酢酸エチル（20ml）を加えた。有機
層を水洗、乾燥後、減圧濃縮し、残留物をイソプロピル
エーテルから再結晶して７−（４−フルオロフェニル）
−７−（3,5,6−トリメチル−1,4−ベゾキノン−２−イ
ル）−ヘプタノヒドロキサム酸（0.7g,85％）を得た。
物性は第１表に化合物No.6として記載した。同様にして
第１表中の化合物No.2,3,5,7,9および18製造した。
実施例１ （カプセル剤） （１）化合物No.5 50mg （２）微粉末セルロース 30mg （３）ラクトース 37mg （４）ステアリン酸マグネシウム 3mg 計 120mg （１），（２），（３）および（４）を混合してゼラ
チンカプセルに充填した。
チンカプセルに充填した。
実施例２ （軟カプセル剤） （１）化合物No.13 50mg （２）トウモロコシ油 100mg 計 150mg 実施例３ （錠剤） （１）化合物No.6 50 mg （２）ラクトース 34 mg （３）トウモロコシ澱粉 10.6mg （４）トウモロコシ澱粉（のり状） ５ mg （５）ステアリン酸マグネシウム 0.4mg （６）カルボキシメチルセルロースカルシウム 20 mg 計 120 mg 常法に従ってこれらを混合して錠剤機により打錠し
た。
た。
実験例１ 〔モルモット多形核白血球由来の５−リポキ
シゲネースに対する阻害作用（10-5M）〕 ５−リポキシゲネースは、モルモット腹腟白血球より
得た酵素標品を用いた。リポキシゲネース活性測定には
25μＭ［１−14C］アラキドン酸（５×104cpm）を基質
として、50mMリン酸緩衝液（pH7.4）,2mMCaCl2,2mM ATP
および酵素を含む反応液（200μ）を用いた。25℃で,
2分間プレインキュベートした後、［１−14C］アラキド
ン酸（５×104cpm）を添加し、25℃で３分間反応後、そ
の反応液を酸性にし、アラキドン酸および代謝産物をエ
ーテルで抽出した。エーテル層の放射活性はシリカゲル
薄層クロマトグラフィーで石油エーテル：エチルエーテ
ル：酢酸（15:85:0.1）の展開溶媒を用い、−10℃で展
開した。展開後、薄層プレートのオートラジオグラフィ
ーをとった後、薄層プレートから放射活性部位のシリカ
ゲルをかき取り、生成物の放射活性を計数した。薬物は
反応開始２分前に添加した。
シゲネースに対する阻害作用（10-5M）〕 ５−リポキシゲネースは、モルモット腹腟白血球より
得た酵素標品を用いた。リポキシゲネース活性測定には
25μＭ［１−14C］アラキドン酸（５×104cpm）を基質
として、50mMリン酸緩衝液（pH7.4）,2mMCaCl2,2mM ATP
および酵素を含む反応液（200μ）を用いた。25℃で,
2分間プレインキュベートした後、［１−14C］アラキド
ン酸（５×104cpm）を添加し、25℃で３分間反応後、そ
の反応液を酸性にし、アラキドン酸および代謝産物をエ
ーテルで抽出した。エーテル層の放射活性はシリカゲル
薄層クロマトグラフィーで石油エーテル：エチルエーテ
ル：酢酸（15:85:0.1）の展開溶媒を用い、−10℃で展
開した。展開後、薄層プレートのオートラジオグラフィ
ーをとった後、薄層プレートから放射活性部位のシリカ
ゲルをかき取り、生成物の放射活性を計数した。薬物は
反応開始２分前に添加した。
実験例２ 〔血小板膜画分とＵ−46619（PGH2/TXA2）の
結合阻害反応〕 モルモットの採血および血小板膜画分の調製はエス・
シー・ハング（S.C.Hung）らの方法［Biochim.Biophys
Acta,728,171−178（1983）］に準じて行なった。ハー
トレー（Hartle）系モルモットをエーテル麻酔下、心臓
から採血し、3.15％クエン酸ナトリウム液（最終濃度1m
Mアスピリン含有）に懸濁した（クエン酸ナトリウム
液：全血＝1:9）。クエン酸ナトリウム加血液を3000rp
m,5−６秒間遠心し、platelet rich plasma（PRP）を
分離した。PRPをさらに4800rpm,10分間４℃で遠心し、
血小板ペレットを得た。血小板ペレットは30mlの25mM T
ris−Hcl緩衝液（5mM MgCl2含有,pH7.4）で洗浄し、同
じ緩衝液で懸濁し、血小４板はsonicatorを用いて、破
壊した後、10000rpmで1hr遠心し、膜画分を緩衝液で懸
濁した。蛋白定量はBiorad protein assayキットを用い
て行ない、１−1.5mg/ml蛋白に調製した。
結合阻害反応〕 モルモットの採血および血小板膜画分の調製はエス・
シー・ハング（S.C.Hung）らの方法［Biochim.Biophys
Acta,728,171−178（1983）］に準じて行なった。ハー
トレー（Hartle）系モルモットをエーテル麻酔下、心臓
から採血し、3.15％クエン酸ナトリウム液（最終濃度1m
Mアスピリン含有）に懸濁した（クエン酸ナトリウム
液：全血＝1:9）。クエン酸ナトリウム加血液を3000rp
m,5−６秒間遠心し、platelet rich plasma（PRP）を
分離した。PRPをさらに4800rpm,10分間４℃で遠心し、
血小板ペレットを得た。血小板ペレットは30mlの25mM T
ris−Hcl緩衝液（5mM MgCl2含有,pH7.4）で洗浄し、同
じ緩衝液で懸濁し、血小４板はsonicatorを用いて、破
壊した後、10000rpmで1hr遠心し、膜画分を緩衝液で懸
濁した。蛋白定量はBiorad protein assayキットを用い
て行ない、１−1.5mg/ml蛋白に調製した。
Binding assayは次の方法で行なった。［3H］Ｕ−466
19 4nM,薬液10-9−10-5Mおよび血小板膜画分100μｇ蛋
白からなる反応液を25℃（室温）で30分インキュベート
した。反応液はグラスフィルター（GF/C）でろ過し、上
記緩衝液で２回洗浄し、グラスフィルターを液体シンチ
レーター（アニオン系）4mlに入れ、放射能活性を測定
した。化合物番号 IC50（Ｍ） ８ 6.0 14 2.6 実験例３ 〔ヒト臍帯静脈血管内皮細胞の細胞増殖阻害
の検定〕 ヒト血管内皮細胞はヒト臍帯静脈より、トリプシン酵
素溶液による流法により得られ、GIT培地（大五栄養化
学）に、2.5％ウシ胎児血清および2.0ng/mlのヒト組み
替え線維芽細胞増殖因子（以下、rFGFと略す。当社生物
工学研究所において作製）を添加した培養液にて継代維
持されたものを使用した。
19 4nM,薬液10-9−10-5Mおよび血小板膜画分100μｇ蛋
白からなる反応液を25℃（室温）で30分インキュベート
した。反応液はグラスフィルター（GF/C）でろ過し、上
記緩衝液で２回洗浄し、グラスフィルターを液体シンチ
レーター（アニオン系）4mlに入れ、放射能活性を測定
した。化合物番号 IC50（Ｍ） ８ 6.0 14 2.6 実験例３ 〔ヒト臍帯静脈血管内皮細胞の細胞増殖阻害
の検定〕 ヒト血管内皮細胞はヒト臍帯静脈より、トリプシン酵
素溶液による流法により得られ、GIT培地（大五栄養化
学）に、2.5％ウシ胎児血清および2.0ng/mlのヒト組み
替え線維芽細胞増殖因子（以下、rFGFと略す。当社生物
工学研究所において作製）を添加した培養液にて継代維
持されたものを使用した。
２×103個のヒト血管内皮細胞の懸濁液、100μを、
96穴培養皿（Nunc,1−67008）に播種し、ガス制御恒温
槽で培養する。翌日、終濃度2ng/mlになるようなrFGF
と、種々の濃度の検体を含む培地、100μを加えた。
検体はジメチルスルホキシド（以下、DMSO）溶液に溶解
し、DMSO終濃度が0.25％以下になるように培養液にて希
釈した。３日目培養の後、検体を含む培養液を吸引除去
し、1mg/mlのMTT溶液（３−（4,5−ジメチル−２−チア
ゾリル）−2,5−ジフェニル−2H−テトラゾリウムブロ
マイドを培養液に溶解）を100μ加え、４時間保温し
た。その後、100μの10％SDS溶液（ソジウムドデシル
スルフェート水溶液）を加えて５−６時間保温して、細
胞およびMTT色素を可溶化し、分光光度計にてOD590値を
測定した。検体を加えない対照群のOD値を100％とし、5
0％のOD値を与える化合物濃度、IC50値により各検体
の、内皮細胞増殖阻害活性を比較検討した。化合物番号 IC50（μg/ml） １ 10 ２ 0.63 ３ 1.25 ４ 0.63 ５ 0.63 ６ 1.25 ７ 1.25 ８ 0.63 ９ 1.25 10 25 11 5.0 12 0.08 13 ＜0.08 14 ＜0.63 15 ＜0.63 16 1.25 17 20 実験例４ 〔IL−２依存性細胞（NKC−３）の細胞増殖
阻害の検定〕 96穴平底マイクロプレートの各穴にNKC−３細胞（４
×105個／穴）を50μ、IL−２溶液（0.067U/ml）を20
μ、更に検体（DMSO溶液）を40μ入れ、37℃で20時
間培養した（培養液:RPMI1640−20％ESC）。各穴にMTT
溶液20μを加え、37℃で４時間保温した。続いて各穴
に10％SDS溶液100μを加え、37℃で一晩放置して、細
胞およびMTT色素を可溶化し、分光光度計にて590nmの吸
光度を測定した。検体を加えない場合の吸光度を100と
して、50％吸光度を与える化合物濃度をIC50値とした。化合物番号 IC50（Ｍ） ５ 4.1×10-5 実験例５ 〔ニワトリ胚漿尿膜法による血管新生抑制活
性アッセイ法〕 培養ニワトリ胚漿尿膜を使用する血管新生抑制活性の
アッセイ法は、テイラーらの方法の変法を用いて評価し
た〔テイラーほか、S.Taylor＆J.Folkman,Nature,297,3
07（1982）〕。３日齢の有精卵の殻を除去して培養し、
10（または11）日齢に達した胚を使用した。血管新生物
質であるECGS（endothelial cell growth supplement、
コラボレイチブ リサーチ社）とともに検体（100μ
ｇ）の水溶液または水懸濁液を透明プラスチック製ディ
スク上で乾固し、漿尿膜上に付置し、２（または３）日
後に実体顕微鏡下に血管新生の有無をコントロールと比
較して判定した。化合物番号 有 効 性 ８ ＋ ９ ＋ 14 ＋ 15 ＋ 実験例６ 各群５匹ずつの雄性ICRマウス（８週齢）を使用し
た。３日間検体（化合物番号５） 100mg/kg/dayを皮下投与した。投与液は0.5％アラビ
アゴムを含む生理食塩水に溶解し100mg/10ml/kg体重で
投与した。
96穴培養皿（Nunc,1−67008）に播種し、ガス制御恒温
槽で培養する。翌日、終濃度2ng/mlになるようなrFGF
と、種々の濃度の検体を含む培地、100μを加えた。
検体はジメチルスルホキシド（以下、DMSO）溶液に溶解
し、DMSO終濃度が0.25％以下になるように培養液にて希
釈した。３日目培養の後、検体を含む培養液を吸引除去
し、1mg/mlのMTT溶液（３−（4,5−ジメチル−２−チア
ゾリル）−2,5−ジフェニル−2H−テトラゾリウムブロ
マイドを培養液に溶解）を100μ加え、４時間保温し
た。その後、100μの10％SDS溶液（ソジウムドデシル
スルフェート水溶液）を加えて５−６時間保温して、細
胞およびMTT色素を可溶化し、分光光度計にてOD590値を
測定した。検体を加えない対照群のOD値を100％とし、5
0％のOD値を与える化合物濃度、IC50値により各検体
の、内皮細胞増殖阻害活性を比較検討した。化合物番号 IC50（μg/ml） １ 10 ２ 0.63 ３ 1.25 ４ 0.63 ５ 0.63 ６ 1.25 ７ 1.25 ８ 0.63 ９ 1.25 10 25 11 5.0 12 0.08 13 ＜0.08 14 ＜0.63 15 ＜0.63 16 1.25 17 20 実験例４ 〔IL−２依存性細胞（NKC−３）の細胞増殖
阻害の検定〕 96穴平底マイクロプレートの各穴にNKC−３細胞（４
×105個／穴）を50μ、IL−２溶液（0.067U/ml）を20
μ、更に検体（DMSO溶液）を40μ入れ、37℃で20時
間培養した（培養液:RPMI1640−20％ESC）。各穴にMTT
溶液20μを加え、37℃で４時間保温した。続いて各穴
に10％SDS溶液100μを加え、37℃で一晩放置して、細
胞およびMTT色素を可溶化し、分光光度計にて590nmの吸
光度を測定した。検体を加えない場合の吸光度を100と
して、50％吸光度を与える化合物濃度をIC50値とした。化合物番号 IC50（Ｍ） ５ 4.1×10-5 実験例５ 〔ニワトリ胚漿尿膜法による血管新生抑制活
性アッセイ法〕 培養ニワトリ胚漿尿膜を使用する血管新生抑制活性の
アッセイ法は、テイラーらの方法の変法を用いて評価し
た〔テイラーほか、S.Taylor＆J.Folkman,Nature,297,3
07（1982）〕。３日齢の有精卵の殻を除去して培養し、
10（または11）日齢に達した胚を使用した。血管新生物
質であるECGS（endothelial cell growth supplement、
コラボレイチブ リサーチ社）とともに検体（100μ
ｇ）の水溶液または水懸濁液を透明プラスチック製ディ
スク上で乾固し、漿尿膜上に付置し、２（または３）日
後に実体顕微鏡下に血管新生の有無をコントロールと比
較して判定した。化合物番号 有 効 性 ８ ＋ ９ ＋ 14 ＋ 15 ＋ 実験例６ 各群５匹ずつの雄性ICRマウス（８週齢）を使用し
た。３日間検体（化合物番号５） 100mg/kg/dayを皮下投与した。投与液は0.5％アラビ
アゴムを含む生理食塩水に溶解し100mg/10ml/kg体重で
投与した。
［結果］ 薬物投与開始後４日間の観察機関中、死亡例はなく、
体重減少等の異状は観察されなかった。
体重減少等の異状は観察されなかった。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｄ 333/24 Ｃ０７Ｄ 333/24 521/00 521/00
Claims (4)
- 【請求項１】一般式 （式中、R1,R2は同一または異なってメチル基またはメ
トキシ基を示すか、R1とR2が互いに結合しR1とR2で−CH
＝CH−CH＝CH−を示す。R3は置換されていてもよい芳香
族基または異項環基を、ｎは２〜８の整数を示す。）で
表わされるヒドロキサム酸誘導体を有効成分として含有
してなる細胞増殖抑制剤。 - 【請求項２】一般式（Ｉ）中、ｎが４〜６である請求項
１記載の細胞増殖抑制剤。 - 【請求項３】一般式（Ｉ）中R3がメチルで置換されてい
てもよいチエニル基である請求項１記載の細胞増殖抑制
剤。 - 【請求項４】一般式 （式中R1およびR2は前記と同意義であり、R4は水素原
子，メチル基，メトキシ基，塩素原子またはフッ素原子
を示す。）で表わされる請求項１記載の細胞増殖抑制
剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18736688A JP2639568B2 (ja) | 1987-07-29 | 1988-07-27 | 細胞増殖抑制剤 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18914387 | 1987-07-29 | ||
| JP62-189143 | 1987-07-29 | ||
| JP18736688A JP2639568B2 (ja) | 1987-07-29 | 1988-07-27 | 細胞増殖抑制剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01110624A JPH01110624A (ja) | 1989-04-27 |
| JP2639568B2 true JP2639568B2 (ja) | 1997-08-13 |
Family
ID=26504315
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18736688A Expired - Lifetime JP2639568B2 (ja) | 1987-07-29 | 1988-07-27 | 細胞増殖抑制剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2639568B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9193700B2 (en) * | 2011-05-26 | 2015-11-24 | Indiana University Research And Technology Corporation | Quinone compounds for treating Ape1 mediated diseases |
-
1988
- 1988-07-27 JP JP18736688A patent/JP2639568B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH01110624A (ja) | 1989-04-27 |
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