JPH01110624A - 細胞増殖抑制剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、細胞増殖抑制作用、血管新生抑制作用を有し
、癌または自己免疫疾患の治療および予防に用いられる
細胞増殖抑制剤に関するものである。

［従来技術］ 細胞増殖は生物が成長あるいは生命を維持していくうえ
で欠くことの出来ない機能である。高等動物では多くの
組織や臓器が各々独自の増殖機構を有しており、それら
は様々な制御機構によって調節されている。近年、生体
内から数１０種類の細胞増殖を正に制御する物質、即ち
“細胞増殖因子”が分離、精製されつつあり、個体の形
成、維持に重要な役割を果たしていることが明らかにさ
れている。一方、細胞増殖の異常、特に制御を外れた無
制限の増殖が各種の疾患と関係しているとの報告ら多い
。例えば、ガンはその典型といえる。

またガン細胞は増殖を維持していくために、血管の新生
を促進させる物質を放出して、ガン組織周辺やその内部
に脈管を形成させることが分かってきているが、この因
子（血管新生因子）が血管内皮細胞に対して強力な増殖
促進活性を持つことが明らかにされつつある。またこの
ような血管新生は慢性炎症、糖尿病性網膜症、乾せん、
リウマチ性関節炎等の病態時にも認められ、これらの疾
患の進展に対する関与が示唆されている。

また、免疫担当細胞特にリンパ球の活性化にも種々の細
胞増殖因子が関与していることが分かってきており、自
己免疫疾患あるいはアレルギー疾患の憎悪因子の一つと
して、これら細胞増殖因子の過剰産生や過剰応答が考え
られている。従って、上記疾患に関与している細胞増殖
因子に対して選択的に阻害したり、応答を抑制する薬物
が開発されれば、これらの疾患に対して有効な予防、治
療手段となりうるし、臓器移植時の拒否反応の抑制にも
有効と思われる。

［発明が解決しようとする課題］ 本発明はヒドロキサム酸誘導体を含有してなる細胞増殖
抑制剤を提供するものである。

［課題を解決するための手段］ 本発明は、 一般式 （式中、Ｒ’、Ｒ’は同一または異なってメチル基また
はメトキシ基を示すか、Ｒ１とＲ２が互いに結合しＲ１
とＲ２で−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−を示す。

Ｒ３は置換されていてもよい芳香族基または異項環基を
、ｎは２〜８の整数を示す。）で表わされるヒドロキサ
ム酸誘導体を有効成分として含有してなる細胞増殖抑制
剤。

である。

本発明の細胞増殖抑制剤は有効成分として一般式（Ｉ）
で表わされるヒドロキサム酸を含む組成物である。

萌記一般式（Ｉ）中、Ｒ３で示される芳香族基としては
たとえばフェニル基、ナフチル基、インダニル基（４−
インダニル、５−インダニル）などのアリール基があげ
られ、異項環基としては酸素原子。

窒素原子および硫黄原子の少なくとも一個を環構成原子
として含有する５または６員環の単環性化合物または二
環性化合物があげられその具体例としては、たとえばチ
エニル基（２−チエニル、３−チエニル）、フリール基
（２−フリール、３−フリール）、ピリジル基（２−ピ
リジル、３−ピリジル、４−ピリジル）、キノリル基（
４−キノリル、８−キノリル）、イソキノリル（４−イ
ソキノリル、８−イソキノリル）などがあげられる。な
かでもフェニル。

チエニルが好ましい。これら芳香族基および異項環基は
環上の任意の位置に１〜５個、好ましくは１〜３個の置
換基を有していてらよく、この上う゛な置換基としては
たとえばフッ素、塩素、臭素などのハロゲン原子、メチ
ル、エチル、プロピルなど炭素数１〜３のアルキル基、
メトキシ、エトキシ、プロポキンなど炭素数Ｉ〜３のア
ルコキシ基などがあげられる。Ｒ３としては、フェニル
、４−フルオロフェニル、４−メトキシフェニル、５−
メチル−２−チエニルが好ましい。ｎは４〜６の整数が
好ましく、さらに好ましくは５．６である。

一般式（Ｉ）で表わされる化合物は （式中、各記号は前記と同意義である）で表わされる化
合物にカルボン酸活性化剤を反応させてカルボキシル基
における反応性誘導体に導びきついでこれにヒドロキシ
ルアミンを反応させることによって製造することができ
る。

化合物（Ｉｔ）とカルボン酸活性化剤の反応において、
カルボン酸活性化剤としてはたとえばチオニルクロライ
ド、五塩化リン、クロル炭酸エステル（クロル炭酸メチ
ル、クロル炭酸エチル）、オキザリルクロライド、カル
ボジイミド類（例、Ｎ、Ｎ−ジシクロへキシルカルボジ
イミド（ＤＣＣ））などがあげられるが、カルボジイミ
ド類とパラニトロフェノールまたはヒドロキシコハク酸
イミドを併用してもよい。この反応は通常たとえば塩化
メチレン。

クロロホルムなどのハロゲン化炭化水素類、テトラヒド
ロフラン（ＴＨＦ）、ジオキサン、ジメチルエーテル、
ジエチルエーテル、イソプロピルエーテルなどのエーテ
ル類、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはこれらの混
合溶媒などの存在下におこなわれる。反応温度は通常−
１０℃〜５０℃である。

この反応において、カルボン酸活性化剤とじて塩化チオ
ニル、オキザリルクロライドまたは五塩化リンを用いた
場合は反応性誘導体として酸ハライドが得られ、カルボ
ン酸活性化剤としてクロル炭酸エステルを用いた場合に
は反応性誘導体として混合酸無水物が得られ、またカル
ボン酸活性化剤としてカルボジイミド類を用いた場合に
は反応性誘導体として活性エステルが得られる。

化合物（ＩＩ）のカルボキシル基における反応性誘導体
とヒドロキシルアミンとの反応は、該反応性誘導体が酸
ハライドである場合はたとえばジクロルメタン、テトラ
ヒドロフラン、アセトンなどの溶媒中、脱酸剤（ピリジ
ン、トリエチルアミン、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム
、炭酸水素カリウム、炭酸水素ナトリウムなど）の存在
下に無水または含水条件下に行なわれる。反応温度は一
り０℃〜３０℃程度である。該反応性誘導体が活性エス
テルまたは混合酸無水物である場合は化合物（ＩＩ）と
カルボン酸活性化剤との反応で用いた溶媒と同様な溶媒
中で行なうことができる。この場合の反応温度は通常Ｏ
〜３０℃で反応時間は１〜５時間である。

かくして製造されるヒドロキサム酸誘導体（Ｉ）は、自
体公知の分離、精製手段（例、クロマトグラフィー、結
晶化法）などにより単離採取することができる。

ヒドロキサム酸誘導体（Ｉ）は、構造上キノン核側鎖ア
ルファ（α）炭素において不斉中心をもつため光学活性
を有する化合物が存在する。従って化合物（Ｉ）は光学
活性化合物およびラセミ化合物のいずれも含むことを意
味する。

化合物（Ｄは各種細胞（内皮細胞、リンパ球、ガン細胞
など）の増殖抑制作用を有し、そのため、血管新生抑制
作用、免疫抑制作用、ガン細胞増殖抑制作用を有する。

しかも毒性、副作用は極めて低い。したがって化合物（
Ｉ）は哺乳動物（マウス、ラット、ウサギ、サル、馬１
人など）に対して糖尿病性網膜症、乾せん、リウマチ、
慢性炎症、自己免疫疾患。

癌などの諸疾患の治療および予防に有用である。

また臓器移植時における拒否反応の抑制にも有用である
。

さらに、化合物（＋）は、多価不飽和脂肪酸（リノール
酸、γ−リルン酸、α−リルン酸、アラキドン酸、ジホ
モ−γ−リルン酸、エイコサペンタエン酸）の代謝改善
、特に過酸化脂肪酸の生成抑制作用（抗酸化作用）ある
いは５−リポキシゲナーゼ系代謝産物（例、ロイコトリ
エン類、５−ヒドロキシエイコサテトラエン酸、５−パ
ーオキシエイコサテトラエン酸、リボキシン類など）の
生成抑制作用も有しており、哺乳動物に対して気管支喘
息、炎症、即時性アレルギー、動脈硬化、アテローム変
性動脈硬化、脂肪肝、肝炎、肝硬変、過敏症肺臓炎など
の諸疾患に対、して治療および予防効果が期待され、た
とえば抗喘息剤、抗アレルギー剤、脳循環器系改善剤、
冠状動脈硬化予防剤、免疫調整剤、プロスタグランジン
−トロンボキサン代謝改善剤。

脂肪肝、肝炎、肝硬変、過敏症肺臓炎治療剤などの医薬
として有用である。

本発明の細胞増殖抑制剤は、その有効成分である化合物
（Ｉ）自体をそのまま投与することもできるが、一般に
は種々の自体公知の薬学的に許容される担体、賦形剤な
どと混合した医薬組成物として投与される。このような
医薬組成物の剤形としてはたとえば錠剤、カプセル剤（
ソフトカプセル。

マイクロカプセルを含む）、顆粒剤、散剤、ソロツブ剤
、液剤、注射剤、半開などがあげられ、これらは常法に
よって調整することができる。本発明の細胞増殖抑制剤
は経口的もしくは非経口的に人を含む哺乳動物に投与す
ることができる。投与量は投与対象、投与ルート、症状
などによっても異なるが、たとえば、成人１日当り通常
約０．１ｍｇ／　ｋｇ　〜４０ｍｇ／ｋｇ体重程度、好
ましくは０．２ｍｇ／　ｋｇ〜２０ｍｇ／　ｋｇ体重程
度を経口的または非経口的に投与するのが好都合である
。

化合物（ＩＩ）はたとえば特開昭６１−４４８４０に記
載の方法によって製造することができる。

［発明の効果］ 本発明に係る細胞増殖抑制剤は細胞増殖抑制作用を何し
、血管の新生を阻止し、癌細胞の増殖を抑制し、免疫を
抑制するため、制癌剤として用いられるほか、臓器移植
時における拒否反応を抑制するために用いることができ
る。

［実施例］ 参考例１ ７−（４−メトキシフェニル）−７−（３，５，６−ド
リメチルー１．４−ベンゾキノン−２−イル）−へブタ
ン酸（Ｉ，３ｇ、　　３．３ｍｍｏｌ）をジクロルメタ
ン（２０ｄ）に溶かし、オキザリルクロライド（ｌ滅）
を室温にて加えた。反応液を５０°Ｃで１時間攪拌した
後、減圧下に溶媒を留去した。得られた残留物をＴＨＦ
（５ｄ）に溶かし、ヒドロキシルアミン塩酸塩（Ｉｇ、
　　１４ｍｍｏｌ）のＴｌ１ｒ’（Ｉ０ｄ）と飽和重曹
水（Ｉ０りの混合液に室温下で滴下した。

室温にて１時間攪拌後反応液に酢酸エチル（２０蔵）を
加えた。有機層を水洗、乾燥後、減圧濃縮して７−（４
−メトキシフェニル）−７−（３，５゜６−ドリメチル
ー１．４−ベンゾキノン−２−イル）−ヘプタノヒドロ
キサム酸（０，６ｇ、４２％）を得た。物性は第１表に
化合物Ｎ０１８として記載した。同様にして第１表中の
化合物Ｎｏ、Ｉ、４゜１０．１１．＋　２．１３，１４
．＋　５．１６．１７．１９゜２０．２　＋、２２，２
３，２４．２５および２６を製造した。

参考例２ ７〜（４−フルオロフェニル）−７−（３，５，６−ド
リメヂルー１．４−ベンゾキノン−２−イル）−へブタ
ン酸（０，８ｇ、　　２．２ｍｍｏｌ）をジクロルメタ
ン（２Ｍりに溶かし、オキザリルクロライド（０，５威
）を室温にて加えた。反応液を５０℃で１時間攪拌した
後、減圧下に溶媒を留去した。得られた残留物をＴＨＦ
（５ｄ）に溶かし、ヒドロキシルアミン塩酸塩（０、５
ｇ、　　７　ｍｍｏｌ）のＴＩ−ＩＦ’（Ｉ０−）と飽
和重曹水（Ｉ０Ｍｌ）の混合液に室温下で滴下した。室
温にて１時間攪拌後反応液に酢酸エチル（２０Ｍｌ）を
加えた。有機層を水洗、乾燥後、減圧濃縮し、残留物を
イソプロピルエーテルから再結晶して７−（４−フルオ
ロフェニル’Ｉ−７−（３。

５．６−ドリメチルー１．４−ベンゾキノン−２−イル
）−ヘプタノヒドロキサム酸（０，７ｇ、８５％）を得
た。物性は第１表に化合物Ｎｏ、６として記載した。同
様にして第１表中の化合物Ｎｏ、２．３，５゜７．９お
よび１８製造した。

（以　下　余　白） 実施例１ （カプセル剤） （Ｉ）化合物Ｎｏ、　５　　　　　　　　　５０ｍｇ（
２）微粉末セルロース　　　　　　３０ｍｇ（３）ラク
トース　　　　　　　　　　３７ｍｇ（４）ステアリン
酸マグネシウム　　　３ｍｇ計１２０ｍｇ （Ｉ）、（２）、（３）および（４）を混合してゼラチ
ンカプセルに充填した。

実施例２ （軟カプセル剤） （Ｉ）化合物Ｎｏ、１３　　　　　　　　　５０ｍｇ（
２）トウモロコン油　　　　　　　１００ｍｇ計１５０
ｍｇ 実施例３ （錠剤） （Ｉ）化合物Ｎｏ、　６　　　　　　　　　５０ｍｇ（
２）ラクトース　　　　　　　　　　３４ｍｇ（３）ト
ウモロコン澱粉　　　　　　　１０．６ｍｇ（４）トウ
モロコシ澱粉（のり状）　　　　５ｍｇ（５）ステアリ
ン酸マグネシウム　　　０．４ｍｇ（６）カルボキシメ
チルセルロースカルシウム０ｍｇ 計１２０ｍｇ 常法に従ってこれらを混合して錠剤機により打錠した。

実験例１　〔モルモット多形核白血球由来の５＝リボキ
シゲネースに対する阻害作用（Ｉ０−５Ｍ））５−リボ
キンゲネースは、モルモット腹腔臼「１球より得た酵素
標品を用いた。リボキンゲネーヌ活性測定には２５μＭ
［Ｉ−”Ｃ］アラキドン酸（５ｘ　ｌ　Ｏ’ｃｐｍ）を
基質として、５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７，４）、２
ｍＭＣａＣ１２ｔ、２ｍＭ　ＡＴＰおよび酵素を含む反
応液（２００μｍ２）を用いた。２５℃で、２分間ブレ
インキュベートした後、［１−Ｉ′Ｃ］アラキドン酸（
５Ｘ　１０　’ｃｐｍ）を添加し、２５℃で３分間反応
後、その反応液を酸性にし、アラキドン酸および代謝産
物をエーテルで抽出した。エーテル屓の放射活性はシリ
カゲル薄層クロマトグラフィーで石油エーテル゛エチル
エーテル：酢酸（Ｉ５：８５：０．１）の展開溶媒を用
い、−１０℃で展開した。展開後、薄層プレートのオー
トラジオグラフィーをとった後、薄層プレートから放射
活性部位のシリカゲルをかき取り、生成物の放射活性を
計数した。薬物は反応開始２分前に添加した。

実験例２　〔血小板膜画分とＵ−４６６１９（ＰＧＩ＋
２／ＴＸＡ２）の結合阻害反応〕 モルモットの採血および血小板膜画分の調製はニス・シ
ー・ハング（Ｓ、Ｃ」ｕｎｇ）らの方法［Ｂｉｏｃｈｉ
ｍ。

Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ａｃｔａ、　７２８．１７１−１７８
（Ｉ９８３）］に帛じて行なった。パートレー（Ｉｌａ
ｒｔｌｅ）系モルモットをエーテル麻酔下、心臓から採
血し、３．１５％クエン酸ナトリウム液（最終濃度１ｍ
Ｍアスピリン含有）に懸濁した（クエン酸ナトリウム液
：全血＝　Ｉ　二９）。

クエン酸ナトリウム加血液を３００　Ｏｒｐｍ、５−６
秒間遠心し、ｐｌａｔｅｌｅｔ　　ｒｉｃｈ　　ｐｌａ
ｓｍａ（Ｐ　ＲＰ　）を分離した。ＰＲＰをさらに４８
００ｒｐｍ、１０分間４℃で遠心し、血小板ペレットを
得た。血小板ペレットは３０鑓の２５ｍＭ　Ｔｒｉｓ−
ＨＣｆ２緩衝液（５ｍ　Ｍ　Ｍ　ｇ　ＣＱ　を含有、ｐ
Ｈ７，４）で洗浄し、同じ緩衝液で＠濁し、血小板は５
ＯｎｉＣａｔＯｒを用いて、破壊した後、１１００００
ｒｐでｌｈｒ遠心し、膜画分を緩衝液で懸濁した。蛋白
定量はＢｉｏｒａｄ　ｐｒｏｔｅｉｎａｓｓａｙキット
を用いて行ない、１−１．５ｍｇ／旙蛋白に調製した。

Ｂｉｎｄｉｎｇ　ａｓｓａｙは次の方法で行なった。［
３Ｈ］Ｕ−４６６１９４ＨＭ、薬液１０−’−１０−’
Ｍおよび血小板膜画分１００μｇ蛋白からなる反応液を
２５°Ｃ（室温）で３０分インキュベートした。反応液
はグラスフィルター（ＧＦ／Ｃ）でろ過し、上記緩衝液
で２回洗浄し、グラスフィルターを液体シンチレータ−
（アニオン系）４ｄに入れ、放射能活性を測定した。

化合物番号　　　　ＩＣｓ。（Ｍ） ８　　　　　　６．０ １４　　　　　　　２．６ 実験例３　〔ヒト層相静脈血管内皮細胞の細胞増殖阻害
の検定〕 ヒト血管内皮細胞はヒト屑帯静脈より、トリプシン酵素
溶液による潅流法により得られ、ＧＩＴ培地（大五栄養
化学）に、２．５％ウシ胎児血清および２．Ｏｎｇ／戒
のヒト組み替え線維芽細胞増殖因子（以下、ｒＦＧＦと
略す。当社生物工学研究所において作製）を添加した培
養液にて継代維持されたものを使用した。

２ｘ１０３個のヒト血管内皮細胞の懸ω液、１００μＣ
を、９６穴培養皿（Ｎｕｎｃ、１−６７００８）に播種
し、ガス制御恒温槽で培養する。翌日、終濃度２ｎｇ／
ｄになるようなｒＦＧＦと、種々の濃度の検体を含む培
地、１００μＱを加えた。検体はジメチルスルホキシド
（以下、ＤＭＳＯ）溶液に溶解し、ＤＭＳＯ終濃度が０
．２５％以下になるように培養液にて希釈した。３日間
培養の後、検体を含む培養液を吸引除去し、１ｍｇ／蔵
のＭＴＴ溶液（３−（４，５−ジメチル−２−チアゾリ
ル）−２゜５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウムブロ
マイドを培養液に溶解）をｌＯＯμＱ加え、４時間保温
した。その後、１００μｇの１０％ＳＤＳ溶液（ソジウ
ムドデシルスルフェート水溶液）を加えて５−６時間保
温して、細胞およびＭＴＴ色素を可溶化し、分光光度計
にてＯＤ　６１１０値を測定した。検体を加えない対照
群のＯＤ値を１００％とし、５０％のＯＤ値を与える化
合物濃度、ＩＣｓ。値により各検体の、内皮細胞増殖阻
害活性を比較検討した。

ｌ　　　　　　　　　１０ ２　　　　　　　　　　０．６３ ３　　　　　　　　　　１．２５ ４　　　　　　　　　　０．６３ ５　　　　　　　　　　０．６３ ６　　　　　　　　　　１．２５ ７　　　　　　　　　　１．２５ ８　　　　　　　　　　０．６３ ９　　　　　　　　　　１．２５ １１　　　　　　　　　　　　　　５・０１２　　　　
　　　　　　　　　０．０８１３　　　　　　　　＜０
．０８ １４　　　　　　　　＜０．６３ １５　　　　　　　　　　　　　＜０．６３１６　　　
　　　　　　　　　　１．２５実験例４　　（ＩＬ−２
依存性細胞（ＮＫＣ−３）の細胞増殖阻害の検定〕 ９６穴平底マイクロプレートの各式にＮＫＣ−３細胞（
４Ｘ１０５個／穴）を５０μｍ２．ＩＬ−２溶液（０，
０６７Ｕ／ｄ）を２０μＱ１更に検体（ＤＭＳＯ溶液）
を４０μａ入れ、３７℃で２０時間培養した（培養液：
ＲＰＭｒ　ｌ　６４０−２０％ＥＣ９）。

各式にＭＴＴ溶液２０μＱを加え、３７℃で４時間保温
した。続いて各式にｌＯ％ＳＤＳ溶液ｌＯＯμＱを加え
、３７℃で一晩放置して、細胞およびＭＴＴ色素を可溶
化し、分光光度計にて５９０ｎｍの吸光度を測定した。

検体を加えない場合の吸光度を１００として、５０％吸
光度を与える化合物濃度をｒｃｓｏ値とした。

化合物番号　　　　ＩＣ６゜（Ｍ） ５　　　　　　　４、ｌＸ１０−５ 実験例５　〔ニワトリ胚漿尿膜法による血管新生抑制活
性アッセイ法〕 培養ニワトリ胚漿尿膜を使用する血管新生抑制活性のア
ッセイ法は、ティラーらの方法の変法を用いて評価した
［ティラーほか、Ｓ、Ｔａｙｌｏｒ　＆　Ｊ。

Ｆｏｌｋｍａｎ、　Ｎａｔｕｒｅ、　２９７．３０７（
Ｉ９８２）］。３日齢の有精卵の殻を除去して培養し、
１０（または１１）日齢に達した胚を使用した。血管新
生物質であるＥ　ＣＧ　Ｓ　（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ
　ｃｅｌｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ。

コラボレイチプリサーチ社）ととらに検体（Ｉ００μｇ
）の水溶液または水懸濁液を透明プラスチック製ディス
ク上で乾固し、漿尿膜上に付置し、２（または３）日後
に実体顕微鏡下に血管新生の有無をコントロールと比較
して判定した。

化合物番号　　　　有　効　性 ８　　　　　　　　＋ ９　　　　　　　　＋ ＋４　　　　　　　　　＋ １５　　　　　　　　＋ 実験例６ 各群５匹ずつの雄性ＩＣＲマウス（８週齢）を使用した
。３日間検体（化合物番号５） １００　ｍｇ／　ｋｇ／ｄａｙを皮下投与した。投与液
は０．５％アラビアゴムを含む生理食塩水に溶解し１０
０　ｍｇ／　ｌ　ＯＭｌ／に’ｇ体重で投与した。

［結果］ 薬物投与開始後４日間の観察機関中、死亡例はなく、体
重減少等の異状は観察されなかった。

代理人　　弁理士　岩　１）　　弘

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、Ｒ＾１、Ｒ＾２は同一または異なってメチル基
   またはメトキシ基を示すか、Ｒ＾１とＲ＾２が互いに結
   合しＲ＾１とＲ＾２で−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−を示
   す。 Ｒ＾３は置換されていてもよい芳香族基または異項環基
   を、ｎは２〜８の整数を示す。）で表わされるヒドロキ
   サム酸誘導体を有効成分として含有してなる細胞増殖抑
   制剤。 ２、一般式（ I ）中、ｎが４〜６である請求項１記載
   の細胞増殖抑制剤。 ３、一般式（ I ）中Ｒ＾３がメチルで置換されていて
   もよいチエニル基である請求項１記載の細胞増殖抑制剤
   。 ４、一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ′） （式中Ｒ＾１およびＲ＾２は前記と同意義であり、Ｒ＾
   ４は水素原子、メチル基、メトキシ基、塩素原子または
   フッ素原子を示す。）で表わされる請求項１記載の細胞
   増殖抑制剤。