KR100254027B1

KR100254027B1 - 치환된 3-(피리디닐아미노)-인돌 및 벤조(b)티오펜 및 이의 제조방법

Info

Publication number: KR100254027B1
Application number: KR1019920006338A
Authority: KR
Inventors: 찰스 에플랜드 리차드; 토마스 클라인 조셉; 레오 마틴 로렌스
Original assignee: 훽스트-러셀 파마슈티칼즈 인코포레이티드
Priority date: 1991-04-17
Filing date: 1992-04-16
Publication date: 2000-05-01
Also published as: PL294239A1; NO180486B; HU9201297D0; TW200477B; RU2060254C1; JPH05117266A; EP0509402B1; IL101599A0; PL168905B1; DE69223837D1; AU655253B2; HUT62572A; NZ242359A; GR3026317T3; US5177088A; CS117192A3; JP2617650B2; DE69223837T2; EP0509402A1; IL101599A

Abstract

본 발명은 세로토닌성 물질이나 아드레날린성 물질과 같은 신경전달기능의 조절제로서 알쯔하이머병과 같은 다양한 기억장애를 완화시키는 데 유용하고, 항우울제, 불안해소제, 비정규 정신병치료제, 제토제로서 유용하며, 강박반응질환과 같은 성격장애의 치료에 유용한 다음 일반식(Ⅰ)의 화합물에 관한 것이다.

상기식에서,

R₁은 수소, 저급알킬, 저급알케닐, 저급알키닐, 아릴저급알킬, 아미노저급알킬, 저급알킬아미노저급알킬, 포르밀, 저급알킬카보닐, 아미노저급알킬카보닐 또는 저급알콕시카보닐이고 ;

그룹-X-Y=는또는

(여기서, R₂및 R₃은 독립적으로 수소 또는 저급알킬이다.)이고 ;

W는 수소, 할로겐, 하이드록시, 저급알콕시, 아릴저급 알콕시, 또는

[여기서, R4는 수소, 저급알킬 또는 아릴저급알킬이고, R5는 저급알킬 또는 아릴저급알킬이거나, 또는 전체적으로 그룹

(여기서, R₆은 수소, 저급알킬, 아릴 또는 아릴저급알킬이다.)이다]이며;

Z는 수소, 할로겐, 저급알킬, 니트로 또는 아미노이다.

Description

치환된 3-(피리디닐 아미노)인돌 및 벤조[b]티오펜 및 이의 제조방법

본 발명은 세로토닌성 물질이나 아드레날린성 물질과 같은 신경전달 기능의 조절제로서 알츠하이머병과 같은 다양한 기억장애를 완화시키는데 유용하고, 항우울제, 불안해소제, 비정형 정신병치료제, 제토제로서 유용하며, 강박 질환과 같은 인성 장애의 치료에 유용한 일반식(Ⅰ)의 화합물에 관한 것이다.

상기식에서,

R₁은 수소, 저급 알킬, 저급 알케닐, 저급 알키닐, 아릴 저급 알킬, 아미노 저급 알킬, 저급 알킬 아미노 저급 알킬, 포르밀, 저급 알킬카보닐, 아미노 저급 알킬카보닐 또는 저급 알콕시카보닐이고;

그룹 -X-Y=는

(여기서, R₂및 R₃은 독립적으로 수소 또는 저급 알킬이다.)이며,

W는 수소, 할로겐, 하이드록시, 저급 알콕시, 아릴 저급 알콕시, 또는

[여기서, R₄는 수소, 저급 알킬 또는 아릴 저급 알킬이고, R₅는 저급 알킬 또는 아릴 저급 알킬이거나, 전체적으로 그룹은또는

(여기서, R₆은 수소, 저급 알킬, 아릴 또는 아릴 저급 알킬이다)이다]이고, Z는 수소, 할로겐, 저급 알킬, 니트로 또는 아미노이다.

다른 언급이나 지시가 없는 한, 다음 정의가 본 명세서 및 첨부된 청구범위를 통하여 적용될 것이다.

용어 "저급알킬"은 탄소수 1내지 6의 직쇄 또는 측쇄 알킬 그룹을 의미한다. 저급 알킬의 예에는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소-부틸, 2급-부틸, 3급-부틸과 직쇄 및 측쇄 펜틸 및 헥실이 포함된다.

용어"할로겐"은 불소, 염소, 브롬 또는 요오드를 의미한다.

용어 "아릴"은 0, 1 또는 2개의 치환체(이들 치환체는 각각 독립적으로 저급 알킬, 저급 알콕시, 할로겐 또는 트리플루오로메틸이다)에 의해 치환된 페닐 그룹이다.

본 명세서 및 첨부된 청구범위를 통해서, 주어진 일반식 또는 화학명은 이성질체가 존재하는 경우 모든 입체, 광학 및 호변 이성질체를 포함한다.

본 발명의 화합물은 이후 기재하는 하나 이상의 합성 단계를 이용하여 제조한다.

합성 단계의 기술을 통하여, 기호 R₁내지 R₆및 W,X, Y및 Z는 다른 언급이나 지시가 없는 한 위에서 언급한 각각의 의미를 가지며, 다른 기호들도 처음에서 정의한 각각의 의미를 갖는다.

출발물질인 일반식(Ⅱ)의 3-아미노인돌은, 예를 들면 Na₂S₂O₄를 사용한 3-니트로소인돌의 환원과 같은 당해 분야에서 공지된 방법으로 제조할 수 있다.[참조 ; W.J.Houlihan(Wiley-Interscience, New York, 1972년)에 편집된 "Indoles", Part Ⅱ 및 유럽 특허원 제 0,224,830호(1987)].

(Ⅱ)

출발물질인 일반식(Ⅲ)의 3-아미노벤조[b]티오펜 또한 당해 분야에 공지된 방법으로 제조할 수 있다. [참조 ; D.E.Boswell et al., J. Heterocyclic Chem., 5,69(1968), 및 Heilbron, "Dictionary of Organic Compounds", p.151].

(Ⅲ)

출발물질인 일반식(Ⅳ)의 3-아미노인다졸 또한 당해 분야에 공지된 방법으로 제조할 수 있다.

(Ⅳ)

예를 들면, 문헌[참조 : Virona et al., J. Heterocyclic Chem., 16, 783(1989)]에 다음의 반응이 기재되어 있다.

(여기서, R₂는 수소 또는 메틸이다.)

단계 A

화합물(Ⅱ)을 일반식(Ⅴ)의 클로로피리딘 하이드로클로라이드와 반응시켜 일반식(Ⅵ)의 화합물을 생성시킨다.

상기 반응은 전형적으로 약 20 내지 150℃의 온도에서 비스(2-메톡시에틸)에테르, 디에틸 에테르, 디메톡시에탄, 디옥산 또는 테트라하이드로푸란과 같은 에테르성 용매, 디메틸포름아미드, 디메틸아세트아미드, N-메틸-2-피롤리돈, 헥사메틸포스포르아미드 또는 디메틸설폭사이드와 같은 극성 비양자성 용매 또는 에탄올 또는 이소프로판올과 같은 양자성 용매 속에서 수행한다.

유사하게는, 화합물(Ⅲ)을 상기와 실질적으로 동일한 방법으로 화합물(Ⅴ)과 반응시켜 일반식(Ⅶ)의 화합물을 생성시킨다.

단계 B

화합물(Ⅵ)을 일반식 C1-CO-OR₇의 저급 알킬 클로로포르메이트(여기서, R₇은 저급 알킬이다)와 반응시켜 일반식(Ⅷ)의 화합물을 생성시킨다.

상기 반응은 전형적으로 약 20 내지 60℃의 온도에서 중탄산나트륨 또는 트리에틸아민과 같은 적합한 염기의 존재하에 디클로로메탄과 같은 적합한 용매 속에서 수행한다.

단계 C

화합물(Ⅷ)을 당해 분야에 공지된 일상의 방법으로 일반식 R₂-Hal의 저급알킬 할라이드(여기서, R₂는 저급 알킬이고 Hal은 염소 또는 브롬이다) 또는 일반식(R₂O)₂SO₂의 디 저급 알킬 설페이트와 반응시켜 일반식(Ⅸ)의 화합물을 생성시킨다.

상기 반응은 전형적으로 약 0 내지 120℃의 온도에서 수소화나트륨, 수소화칼륨 또는 칼륨-t-부톡사이드와 같은 적합한 염기의 존재하에 디메틸포름아미드 또는 테트라하이드로푸란과 같은 적합한 용매 속에서 수행한다.

단계 D

화합물(Ⅸ)을 가수분해시켜 일반식(Ⅹ)의 화합물을 생성시킨다.

상기의 가수분해는 전형적으로 약 20 내지 100℃의 온도에서 화합물(Ⅸ),수산화나트륨과 같은 알칼리 수산화물 및 에탄올 또는 다른 저급 알칸올에 물을 합한 것과 같은 적합한 매질을 포함하는 혼합물을 교반함으로써 수행한다.

단계 E

화합물(Ⅹ)을 약 -10 내지 80℃, 바람직하게는 0내지 25℃의 온도에서, 일반식 R₈-Hal의 할라이드 화합물(여기서, R₈은 저급 알킬, 저급 알케닐, 저급 알키닐 또는 아릴 저급 알킬이다)과 반응시켜 일반식(XI)의 화합물을 생성시킨다.

상기 반응은 전형적으로 수소화나트륨, 수소화칼륨 또는 칼륨-t-부톡사이드와 같은 적합한 염기의 존재하에 디메틸포름아미드, 디메틸설폭사이드, 에테르성 용매 또는 방향족 탄화수소와 같은 적합한 용매 속에서 수행한다.

화합물(X)은 당해 분야에 공지된 일상의 방법으로 일반식의 화합물(여기서, Alk는 저급 알킬렌 그룹이고 Hal은 Cl 또는 Br이다)과 반응시켜 일반식(XII)의 화합물을 생성시킨다. 이어서, 화합물(XII)을 당해 분야에 공지된 일상의 방법으로 하이드라진 또는 메틸아민으로 처리하여 일반식(XIII)의 화합물을 생성시킨다.

화합물(X)을 당해 분야에 공지된 일상의 방법으로 일반식 Hal-Alk-Hal의 디할로 저급 알칸과 반응시켜 일반식(XIV)의 화합물을 생성시킨 다음, 당해 생성물을 당해 분야에 공지된 일상의 방법으로 일반식 R'NH₂의 화합물(여기서, R'는 수소 또는 저급 알킬이다)과 반응시켜 일반식(XV)의 화합물을 생성시킨다.

단계 F

일반식(X)의 화합물[여기서, R₂는 화합물 (VI)에 상응하여, 수소일 수 있다]을 당해 분야에 공지된 일상의 방법으로 일반식의 산 할라이드(여기서, R₉는 저급 알킬이다)와 반응시켜 일반식(XVI)의 화합물을 생성시킨다.

R₉가 수소 또는 저급 알킬인 경우, 대안으로서, 일반식 R₉-CO-O-CO-R₉의 산할라이드를 당해 분야에 공지된 일상의 방법으로 사용하여 동일한 목적을 달성할 수 있다.

화합물(X)을 당해 분야에 공지된 일상의 방법으로 일반식의 화합물(여기서, R은 t-부틸 또는 벤질이다)과 반응시켜 일반식(XVII)의 화합물을 생성시킨 다음, 생성물을 당해 분야에 공지된 일상의 방법으로 가수분해시키거나 촉매적 가수소분해시켜 일반식(XVIII)의 화합물을 생성시킨다.

상기 반응식의 대안으로, 화합물(X)을 디사이클로헥실카보디이미드의 존재하에 일반식(XIX)의 카복실산과 반응시켜 화합물(XVII)을 생성시킨다.

단계 G

단계 F로부터 수득한 화합물(XVIa)을 당해 분야에 공지된 일상의 방법으로 LiAIH₄또는 다른 적합한 환원제로 환원시켜 일반식(XX)의 화합물을 생성시킨다.

단계 H

화합물(VII)을 단계 B와 실질적으로 동일한 방법으로 일반식 C1-CO-OR₇의 저급 알킬 클로로포르메이트와 반응시켜 일반식(XXI)의 화합물을 생성시킨다.

단계 Ⅰ

화합물(VII)을 단계 E와 실질적으로 동일한 방법으로 일반식 R₈-Hal의 할라이드 화합물과 반응시켜 일반식(XXIV)의 화합물을 생성시킨다.

화합물(VII)을 일반식의 화합물과 반응시켜 일반식(XXIII)의 화합물을 생성시킨 다음, 생성물을 단계 E와 실질적으로 동일한 방법으로 하이드라진 또는 메틸아민으로 처리하여 일반식(XXIV)의 화합물을 생성시킨다.

화합물(VII)를 일반식 Hal-Alk-Hal의 화합물과 반응시켜 일반식(XXV)의 화합물을 생성시키고 생성물은 단계 E와 실질적으로 동일한 방법으로 일반식 R'NH₂의 화합물과 반응시켜 일반식(XXVI)의 화합물을 생성시킨다.

단계 J

화합물(VII)을 단계 F와 실질적으로 동일한 방법으로 일반식의 산할라이드와 반응시켜 일반식(XXVII)의 화합물을 생성시킨다.

화합물(VII)을 일반식의 화합물과 반응시켜 일반식(XXVIII)의 화합물을 생성시킨 다음, 생성물을 단계 F와 실질적으로 동일한 방법으로 가수 분해시키거나 촉매적 가수소분해시켜 일반식(XXIX)의 화합물을 생성시킨다.

화합물(VII)을 단계 F와 실질적으로 동일한 방법으로 디사이클로헥실카보디이미드의 존재하에 화합물(XIX)과 반응시켜 화합물(XXVIII)을 생성시킨다.

단계 K

화합물(IV)을 단계 A와 실질적으로 동일한 방법으로 화합물(V)과 반응시켜 일반식(XXX)의 화합물을 생성시킨다.

단계 L

화합물(XXX)을 단계 B와 실질적으로 동일한 방법으로 일반식 C1-CO-OR₇의 저급 알킬 클로로포르메이트와 반응시켜 일반식(XXXI)의 화합물을 생성시킨다.

단계 M

화합물(XXX)을 단계 E와 실질적으로 동일한 방법으로 일반식 R₈-Hal의 할라이드 화합물과 반응시켜 일반식(XXXII)의 화합물을 생성시킨다.

화합물(XXX)을 일반식의 화합물과 반응시켜 일반식(XXXIII)의 화합물을 생성시킨 다음, 생성물을 단계 E와 실질적으로 동일한 방법으로 하이드라진 또는 메틸아민으로 처리하여 일반식(XXXIV)의 화합물을 생성시킨다.

화합물(XXX)을 일반식 Hal-Alk-Hal의 화합물과 반응시켜 일반식(XXXV)의 화합물을 생성시키고 생성물을 단계 E와 실질적으로 동일한 방법으로 일반식 R'NH₂의 화합물과 반응시켜 일반식(XXXVI)의 화합물을 생성시킨다.

단계 N

화합물(XXX)을 단계 F와 실질적으로 동일한 방법으로 일반식의 산할라이드와 반응시켜 일반식(XXXVII)의 화합물을 생성시킨다.

화합물(XXX)을 일반식의 화합물과 반응시켜 일반식(XXXVIII)의 화합물을 생성시킨 다음, 생성물을 단계 F와 실질적으로 동일한 방법으로 가수분해시키거나 촉매적 가수소분해시켜 일반식(XXXIX)의 화합물을 생성시킨다.

화합물(XXX)을 단계 F와 실질적으로 동일한 방법으로 디사이클로헥실카보디이미드의 존재하에 화합물(XIX)과 반응시켜 화합물(XXXVIII)을 생성시킨다.

전술한 합성 단계에서 그룹 -Z가 -NH₂인 화합물이 바람직한 경우, 이는 당해 분야에서 공지된 일상의 방법으로 그룹 -Z가 -NO₂인 상응하는 화합물을 아연 및 염산과 같은 적합한 환원제로 환원시키거나 수소 및 팔라듐 또는 백금과 같은 적합한 귀금속 촉매로 촉매적으로 환원시킴으로써 제조할 수 있다.

본 발명의 일반식(Ⅰ)의 화합물은 세로토닌성 물질이나 아드레날린성 물질과 같은 신경전달기능의 조절제로서 알CM하이머병과 같은 다양한 기억장애를 치료하는데 유용하며, 항우울제, 불안해소제, 비정형 정신병치료제, 제토제로서 및 강박 질환과 같은 인성 장애를 치료하는데 유용하다.

세로토닌(5HT_1A)수용체에 결합하는 [³H]-8-하이드록시-2-(디-n-프로필아미노)테트랄린([³H]DPAT)

목적

본 분석의 목적은 뇌 속의 5HT_1A수용체에 대한 시험 화합물의 친화성을 측정하는 것이다. 이는 신규한 불안해소제 또는 비정형 정신병치료제로서 강력한 효용가치가 있는 세로토닌성 특성을 갖는 화합물을 예견하는데 유용하거나 강박 질환과 같은 인성 장애의 치료에 유용한 것으로 여겨진다.

도입

래트의 뇌 속에 5HT 수용체 개체군이 2개 존재하는 것이 스피로페리돌에 대한 차별 민감도에 의해 나타난다(참조 문헌 1). 스피로페리돌 민감성 수용체는 아류형 5HT_1A로 표시하고, 둔감성 수용체는 아류형 5HT_1B로 표시한다(참조 문헌 2).5HT 길항제에 대한 차별 민감도를 근거로 하여 연속적으로 기타 5HT 결합 위치 (5HT_1C, 5HT_1C, 5HT_1D및 5HT₃)들을 다양한 종에서 동정하였다 (참조 문헌 3). 5HT 수용체의 분류는 5HT_1A수용체, [³H]DPAT에 대한 선택적 리간드의 동정에 의해 상당히 진보되었다 (참조 문헌 4). [³H]DPAT가 자동수용체(autorecepter)라고 명명되었다. 정신기능장애의 연구로 [³H]DPAT로 칭해진 수용체가 최종 자동수용체가 아니며, 체수상돌기 자동수용체일 수 있음이 제시되었다 (참조 문헌 5). DPAT가 봉선 핵에서 소성률을 감소시키고 5HT 방출을 억제함에도 불구하고, 실제 위치 및 기능은 다소 논쟁의 여지가 있다 (참조 문헌 6). 이러한 연구 및 구아닌 뉴클레오티드에 결합하는 [³H]DPAT의 민감도 및 아데닐레이트 사이클라제에 대한 효과는 DPAT가 5HT_1A수용체에서 효능제로서 작용한다는 것을 제시한다 (참조 문헌 7)

과정 Ⅰ

A. 시약

1. 트리스 완충액, pH 7.7

(a) 트리스 HCl 57.2g,

트리스 염기 16.2g

증류슈로 1ℓ를 만든다.

(0.5M 트리스 완충액, pH 7.7, 완충액 1a).

(b) 탈이온수로 1:10의 희석액을 만든다

(0.05M 트리스 완충액, pH 7.7, 완충액 1b).

(c) 0.05M 트리스 완충액, pH 7.7, 10㎛ 파르기린, 4mM CaCl₂및 0.1% 아스코브산 함유(완충액 1c)

파르기린·HCl 0.49mg,

CaCl₂111mg,

아스코브산 250mg.

pH 7.7, 0.05M 트리스 완충액(시약 1b)으로 250ml를 만든다.

2. 8-하이드록시[³H]DPAT(2-(N,N-디[2,3(n)-³H]프로필아미노)-8-하이드록시-1, 2, 3,4-테트라하이드로나프탈렌)(160 내지 206 Ci/mmol)을 아머샴(Amersham)으로부터 구입한다.

IC₅₀측정 : 10nM 원액을 만들고 50㎕를 각각의 튜브에 가한다 (최종 농도 = 0.5nM).

3. 세로토닌 크레아티닌 설페이트 : 0.5mM 원액을 0.01N HCl 속에서 만들고 비특이성 결합을 측정하기 위해 20㎕를 3개의 튜브에 가한다 (최종 농도 = 10㎛)

4. 시험 화합물 : 대부분의 분석에서 1mM 원액을 적합한 용매 속에서 제조하고 순차적으로 희석시켜 분석시 최종 농도 범위를 2x10^-5내지 2x10^-8M로 한다. 7가지 농도가 각각의 분석에 대해 사용된다. 약제의 효능에 따라 더 높거나 더 낮은 농도를 사용할 수 있다.

B. 조직 제조

수컷 위스타 래트를 참수시킨다. 해마상 융기를 제거하고 측량한 후, pH 7.7의 0.05M 트리스 완충액 20용적 속에서 균질화시킨다. 균질화물을 10분 동안 48,000g로 원심분리시키고 상등액은 폐기시킨다. 펠렛(pellet)을 등용적의 0.05M트리스 완충액에 재현탁시키고, 37℃에서 10분동안 항온처리한 후, 10분 동안 48,000g로 다시 원심분리시킨다. 최종 막 펠렛을 4mM CaCl₂, 0.1% 아스코르브산 및 10㎛ 파르기린을 함유하는 0.05M 트리스 완충액에 다시 현탁시킨다.

C. 분석

조직 800㎕,

0.05M 트리스 +CaCl₂+파르기린+아스코르브산 130㎕,

비히클/5HT/약제 20㎕,

[³H]DPAT 50㎕.

튜브를 25℃에서 15분 동안 항온처리한다. 분석은 와트만 GF/B 여과기를 통해 진공 여과하여 중지시킨 다음, 빙냉 0.05M 트리스 완충액 5ml로 2회 세척한다. 여과기를 리퀴신트 신틸레이션 칵테일(Liquiscint scintillation cocktail)10ml가 들어 있는 신틸레이션 바이알에 넣고 계수한다.

계산

특이성 결합은 결합 전체와 10㎛ 5HT 존재하의 결합간의 차이로 정의된다.

IC₅₀값은 각 약제 농도에서의 특이성 결합률로부터 계산한다.

과정 Ⅱ

A. 시약

1. 트리스 완충액, pH 7.7

(a)트리스 HCl 57.2g,

트리스 염기 16.2g.

증류수로 1ℓ를 만든다.

(0.5M 트리스 완충액, pH 7.7, 완충액 1a).

(b) 증류수로 1:10의 희석액을 만든다 (25℃의 0.05M 트리스 완충액, pH 7.7, 완충액 1b).

(c) 0.05M 트리스 완충액, pH 7.7, 10㎛ 파르기린, 4mM CaCl₂및 0.1% 아스코르브산 함유 (완충액 1c).

파르기린·HCl 0.49mg,

CaCl₂110.99mg,

아스코르브산 250mg.

pH 7.7, 0.05M 트리스 완충액(완충액 1b)으로 250ml를 만든다.

2. 8-하이드록시[³H]DPAT(2-(N,N-디[2,3(n)-³H]프로필아미노)-8-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌)](160 내지 206 Ci/mmol)을 아머샴(Amersham)으로부터 구입한다.

IC₅₀측정 :³H-DPAT를 트리스 완충액(1c)중의 3.3nM의 농도로 제조하여 150㎕를 각각의 튜브에 가한 경우 1ml 분석물에서 0.5nM의 최종 농도가 수득되도록 한다.

3. 세로토닌 크레아티닌 설페이트를 시그마 케미칼 캄파니(Sigma Chemical Company)로부터 구입한다. 세로토닌 크레아티닌은 트리스 완충액(1c)중에서 100㎛ 이하의 농도로 제조한다. 100㎕를 비특이성 결합의 측정을 위해 3개의 튜브 각각에 가한다. (이로써 1ml 분석물에서 10㎛의 최종 농도가 수득된다).

4. 시험 화합물 : 대부분의 분석에서 100㎛ 원액을 적합한 용매 속에서 제조하고 트리스 완충액(1c)으로 순차적으로 희석시켜 약제 100㎕가 총 1ml의 분석물과 합해질때 최종 농도 범위가 10^-5내지 10^-8M로 수득되도록 한다. 특징적으로, 7가지 농도가 각각의 분석에 대해 사용된다. 약제의 효능에 따라 더 높거나 더 낮은 농도를 사용할 수 있다.

B. 조직 제조

수컷 위스타 래트를 참수시키고 해마상 융기를 제거하고 pH 7.7의 빙냉 0.05M 트리스 완충액(1b) 20용적 속에서 균질화시킨다. 균질화물을 4℃에서 10분동안 48,000g로 원심분리시킨다. 생성된 펠렛을 신선한 트리스 완충액(1b)속에서 다시 균질화시키고, 37℃에서 10분 동안 배양시킨 다음, 10분 동안 48,000g로 다시 원심분리시킨다. 최종 막 펠렛을 4mM CaCl₂. 0.1% 아스코르브산 및 10㎛ 파르기린을 함유하는 0.05M 트리스 완충액(1c)에 다시 현탁시킨다. 특이성 결합은 전체 결합 리간드의 약 90%이다.

C. 분석

조직 750㎕,

[³H]DPAT 150㎕,

비히클(전체 결합을 위한 것) 또는 100㎛ 세로토닌 크레아틴 설페이트(비특이성 결합을 위한 것) 또는 적당한 약제 농축물 100㎕.

튜브를 25℃에서 15분 동안 항온처리한다. 분석은 와트만 GF/B 여과기를 통해 진공 여과하여 중지시킨 다음, 빙냉 0.05M 트리스 완충액(1b) 5ml로 2회 세척한다. 이어서, 여과기를 리퀴신트 신틸레이션 칵테일 10ml가 들어 있는 신틸레이션 바이알에 넣고 계수한다. 특이성 결합은 10㎛ 세로토닌 크레아티닌 설페이트의 부재 또는 존재시의 전체 결합간의 차이로 정의된다. IC₅₀값은 각 약제 농도에서의 특이성 결합률로부터 계산한다.

[³H]DPAT 결합의 K_D값은 수용체 포화 실험의 스캇차드(Scatchard)분석에 의해 1.3nM인 것으로 밝혀졌다. Ki 값은 다음의 쳉-프루소프(Cheng-Prusoff)등식에 의해 계산된다:

Ki = IC₅₀/1+L/K_D

참조 문헌

1. Pedigo, N.W., Yammamura, H.I and Nelson, D.L.: Discrimination of multiple [³H]-5-hydroxytryptamine binding sites by the neuroleptic spiperone in rat rain. J. Neurochem.36: 220-226(1981)

2. Middlemiss, D.N. and Fozard J.R.: 8-Hydroxy-2-(di-n-propylamino) tetralin discriminates between subtypes of the 5HT1 recognition site. Eur.J. pharmacol., 90: 151-151(1983)

3. peroutka, S.J.: Pharmacological differentiation and characterization of 5-HT_1A, 5-HT_1B, and1C binding sites in rat frontal cortex. J. Neurochem. 47: 529-540(1986).

4. Peroutka, S.J.: 5-Hydrozytryptamine receptor subtypes: molecular, biochemical and physiological characterization TINS 11: 496-500(1988).

5. gozlan, H., El Mestikawy, S., Pichat, L. Glowinsky, J. and Hamon, M.: Identification of presynaptic serotonin autoreceptors using a new ligand:³H-DPAT. Nature 305: 140-142(1983)

6. Verge, D., Daval. G., Marcinkiewicz, M., Pztey, A., El Mestikawy, H. Glzlan Hamon, M.: Quantitative autoradiograghy of multiple 5-HT₁receptor subtypes in the brain of control or 5, 7, dihydroxytrypamine-treated rats. J. Neurosci. 6: 3474-3482(1986).

7. Schlegel,. R. and Peroutka, S.J.: Nucleotide interactions with 5-HT_1Abinding sites directly labeled by [³H]-8-hydroxy-2-(di-n-propylamino)tetralin ([³H]-8-OH-DPAT). Biochem. Pharmacol. 35 1943-1949(1986).

8. Dourish C.T., Hutson, P.H. and Curzon, G.:Putative anxiolytics. TIPS 8: 432-437(1987).

9. Iversen, S.D.: 5HT and anxiety. Neuropharmacol. 23: 1553-1560(1984).

10. Traber J. and Glassr, T.: 5HT1A receptor-related anxiolytics. TIPS 8: 432-437(1987)

11. Peroutka, S.J.: Selective interaction of novel anxiolytics with 5-hydroxytryptamine1A receptors. Biol. Psychiatry. 20: 971-979(1985).

레트의 엔토히날 외피 막에 결합하는³H-GR65630: 5HT₃수용체 결합 분석

목적

본 분석의 목적은 뇌 속의 5HT₃결합 위치에 대한 화합물의 친화성을 측정하는 것이다. 이는 제토성, 불안해소성 또는 비전형 정신병치료성 프로필을 나타내는 화합물의 잠재성을 예견하는데 유용한 것으로 여겨진다.

도입

현재, 신경전달제 세로토닌(5HT)에는 5HT₁, 5HT₂및 5HT₃의 세가지의 상이한 수용체 아류형이 있다는것이 일반적으로 수용되고 있다; 5HT₁및 5HT₂결합위치는 잘 규정되어 있으며 추가로 결합 및 기능 활성 연구로부터의 데이타를 근거로 세분화되어 있다(참조 문헌 1 및 2). 한편, 5HT₃결합위치는 단지 최근에 규정되기 시작했다. 원래, 5HT₃결합위치는 단지 말초에서만 존재하는 것으로 여겨졌다(참조 문헌 3). 그러나, 최근 GR65630, 자코프라이드, ICS 205 930 및 MDL 72222와 같은 강력하고 선택적인 5HT₃길항제의 도입과 함께, 결합 연구에 대한 데이타는 5HT₃결합 위치가 또한 뇌의 선택적 영역에 위치한다는 것을 나타낸다(참조 문헌 4, 5 및 6). 5HT₃결합위치의 최고 농도는 림빅 및 도파민을 포함하는 뇌 영역(엔토히날 외피, 편도선, 측좌핵 및 후제결렬)에서 검출된다(참조 문헌 4). 도파민이 많은 영역에서의 선택성 결합을 포함시키는것 이외에도, 5HT₃길항제는 특정한 남용되는 약제(니코틴 및 몰핀)와 연관된 행동 효과를 차단하며 불안해소성 활성이 예견되는 행동 시험에서 활성이 있는 것으로 보고되었다. 이들 선택성 부위 결합 결과 및 행위 관련 연구를 근거로 해서, 5HT₃길항제는 과도한 도파민 활성과 관련된 것으로 여겨지는 질환 상태, 예를 들면 정신분열증 및 약물남용에서 치료 잇점이 있다고 믿어진다.

과정

A. 시약

1. 0.05M 크렙스-헤페스 완충액, pH 7,4

Hepes 11.92g,

NaCl 10.52g,

KCl 0.373g,

CaCl₂0.277g,

MaCl₂·6H₂O 0.244g

증류수로 1ℓ를 만든다.

5N NaOH로 pH 7.4 이하로 만든다(4℃).

2. [³H]-GR65630(87.0 Ci/m㏖)을 뉴 잉글랜드 뉴클리어(New England Nuclear)로부터 구입한다.

IC₅₀측정: [³H]-GR65630을 크렙스-헤페스(Krebs-Hepes) 완충액 중에서 1.0nM의 농도로 제조하여 100㎕를 각각의 튜브에 가한 경우 250㎕ 분석물에서 0.4nM의 최종 농도가 수득되도록 한다.

3. 자코프라이드 말레에이트는 리서치 바이오케미칼 인코포레이티드(Research Biochemical Inc.)로부터 구입한다. 자코프라이드 말레에이트를 크랩스-헤페스 완충액 중에서 500μM의 농도로 제조한다. 50㎕를 비특이성 결합의 특정을 위해 3개의 튜브 각각에 가한다.(250㎕ 분석물에서 100μM의 최종 농도를 수득한다).

4. 시험 화합물: 대부분의 분석에서 50μM 원액을 적합한 용매 속에서 제조하고 크렙스-헤페스 완충액으로 순차적으로 희석시켜 약제 50㎕가 총 250㎕의 분석물과 합해질때 최종 농도 범위가 10^-5내지 10^-8M로 수득되도록 한다. 특징적으로 7가지 농도를 각각의 분석에서 연구하지만, 약제의 효능에 따라 더 높거나 더 낮은 농도를 사용할 수 있다.

B. 조직 제조

수컷 위스타 래트(150 내지 200g)를 참수시키고, 엔토히날 외피를 제거한 다음, 측량하고 pH 7.4의 빙냉 0.05M 크렙스-헤페스 완층액 10용적 속에서 균질화시킨다. 균질화물을 4℃에서 15분 동안 48,000g로 원심분리시킨다. 생성된 펠렛은 신선한 크렙스-헤페스ㅡ 완충액 속에서 다시 균질화시키고 4℃에서 15분 동안 48,000g로 다시 원심분리시킨다. 최종 펠렛을 원래 용적의 크렙스-헤페스 완충액에 다시 현탁시킨다. 이로써 분석물에 100μl 를 가하면 최종 조직 농도가 1.2 내지 1.6mg/ml로 수득된다. 특이성 결합은 전체 결합 리간드의 약 55 내지 65%이다.

C. 분석

조직 현탁액 100μl,

[³H]-GR65630 100μl,

비히클(전체 결합을 위한 것) 또는 500μM 자코프라이드 말레에이트(비특이성 결합을 위한 것) 또는 적합한 약제 농축물 50μl.

샘플 튜브는 첨가를 위해 차가운 상태를 유지시키고, 와동시킨 다음, 37℃에서 30분 동안 연속적으로 진탕시켜 항온처리한다. 항온처리 기간이 끝날쯤에, 이를 빙냉 크렙스-헤페스 완충액 5ml로 희석시키고 즉시 와트만 GF/B 여과기를 통해 진공 여과한 다음, 빙냉 크렙스-헤페스 완충액으로 5ml씩 2회 세척한다. 여과기를 건조시키고 액체 신틸레이션 칵테일 10ml 속에서 계수한다. 특이성 GR65630 결합은 전체 결합과 100μM 자코프라이드 존재하의 결합간의 차이로서 정의된다. IC₅₀은 컴퓨터 유도된 로그-프로빗 분석법을 이용하여 계산한다.

참조문헌

1. Peroutka, S.J. 5-Hydroxytryptamine receptor subtypes: Molecular biochemical and physiological chracterization. Tends In Neuroscience 11: 496-500(1988).

2. Watling, K.J. 5HT₃receptor agonists and antagonists. Neurotransmission 3: 1-4(1989).

3. Costell, B., Naylor, R.J. and Tyers, M.B. Recent advances in the neuropharacology of 5HT₃agonists and antagonists. Rev. Neuroscince 2: 41-65(1988).

4. Kilpatrick, G.J., B.P. and Tyers, M.B. Identification and distribution of 5HT₃receptors in rat brain using radiologand binding. nature 330: 746-748(1987).

5. Barnes, N.M., Costell, B. and Naylor, R.J. [³H]Zacopride: Ligand for the eidenfification of 5HT₃recognition sites. J. Pharm. Pharmacol. 40: 548-551(1988).

6. Watling, K.J., Aspley, S., Swain, C.J. and Saunders, J. [³H]Quaternised ICS 205-930 labels 5HT₃receptor binding sites in rat brain. Eur. J. Pharmacol. 149: 397-398(1888)

래트의 전뇌 시납토솜에서의³H-세로토닌의 흡수

목적

본 분석은 항우울제로서 및 강박 질환과 같은 인성 장애의 치료에 유용할 수 있는 세로토닌(5HT) 흡수 차단 화합물에 대한 생화학적 스크린으로서 사용된다.

도입

아스베르그(Asberg)와 그 동료들은 세로토닌성 과기능을 가진 대상에는 생화학적 하위 그룹의 우울증 환자가 포함되는 것으로 제안(참조 문헌 1)하고 있지만, 다른 이들 (참조 문헌 2)은 변형된 세로토닌성 기능이 정서적인 질환과 연관된 기분 변화를 결정한다고 주장한다. 우울증의 병인학에서 5HT의 역활이 명확하지 않음에도 불구하고, 많은 항우울제가 5HT 재흡수 메카니즘을 차단하는 것은 사실이다. 실험실에서의 수용체 결합 분석은 [³H]-이미프라민이 5HT 흡수 위치에 결합함을 보여준다(참조 문헌10). 트라조돈 및 지멜리딘은 5HT 흡수에 대한 상당한 선택성 효과를 지는(참조 문헌 4 및 5) 임상적으로 효력있는 항우울제이다(참조 문헌 3). 더욱 최근에는 플루오제틴이 선택적이고 강력한 5HT 흡수 억제제인 것으로 밝혀졌다.

[³H]-5HT 수송은 CNS조직에서 특성화되었으며(참조 문헌 6 및 7) 포화가능하고, 나트륨 및 온도에 의존적인 것으로 밝혀졌고, 와바인, 대사 억제제, 트립타민 동족제(참조 문헌 8) 및 트리사이클릭 항우울제(3급 아민 》 2급 아민)(참조 문헌 9)에 의해 억제되는 것으로 밝혀졌다. 후자의 발견은 카테콜아민 흡수로부터의 5HT 흡수를 차별화한다. [³H]-5HT 흡수는 또한 세로토닌 신경 말단의 마커(marker)로서 사용될 수 있다.

과정

A. 동물 : 수컷 CR 위스타 래트(100 내지 125g)

B. 시약

1. 크렙스-헨 셀라이트 중탄산염 완충액, pH 7.4(KHBB) :

다음의 염을 함유하는 1ℓ 배치를 만든다.

사용하기 전에 다음을 가한다 :

95% O₂/5% CO₂로 60분 동안 호기성화하고 pH(7.4±0.1)를 점검한다.

2. 0.32M 수크로즈 : 수크로즈 21.9g을 200ml 로 만든다.

3. 세로토닌 크레아티닌 SO₄를 시그마 케미칼 캄파니로부터 구입한다. 0.1mM 원액을 0.01N HCl 중에서 제조한다. 이는 방사선 표지된 5HT의 비활성을 감소시키기 위해 사용된다.

4. 비활성이 20 내지 30Ci/m㏖ 인 5-[1,2-³H(N)]-하이드록시트립타민 크레아티닌 설페이트(세로토닌)를 뉴 잉글랜드 뉴클리어로부터 구입한다.

분석시³H-5HT의 바람직한 최종농도는 50Mm이다. 희석률은 0.8이다. 그러므로, KHBB는 62.5nM [³H]-5HT를 함유하도록 제조된다.

KHBB 100ml에 다음을 가한다.

*³H-5HT의 비활성으로부터 첨가된 용적을 계산한다.

5. 대부분의 분석에서, 시험 화합물 1mM 용액은 적합한 용매 속에서 제조하고 순차적으로 희석시켜 분석물의 최종 농도 범위가 2x10^-8내지 2x10^-5M이 되도록 한다. 7가지 농도가 각각의 분석에 대해 사용된다. 화합물의 효능에 따라 더 높거나 더 낮은 농도를 사용할 수 있다.

C. 조직 제조

수컷 위스타 래트를 참수시키고 뇌를 신속히 적출한다. 소뇌를 뺀 전뇌를 측량하고 포터-엘베이헴(Potter-Elvejhem) 균질화기를 사용하여 빙냉 0.32M 수크로즈 9용적 속에서 균질화시킨다. 시납토솜 분해를 최소화하기 위해 균질화는 4 내지 5회 상하로 세게 흔들며 중속으로 해야 한다. 균질화물을 0 내지 4℃에서 10분동안 1000g로 원심분리시킨다. 상등액(S₁)을 기울여 따라서 흡수 실험에 사용한다.

D. 분석

KHBB + [³H]-5HT 800㎕,

비히클 또는 적합한 약제 농축물 20㎕,

조직 현탁액 200㎕.

튜브를 37℃에서 95% O₂/5% CO₂의 대기하에 5분동안 항온처리한다. 각각의 분석에서, 튜브는 0℃의 빙욕에서 비히클 20㎕와 함께 항온처리한다. 항온처리 후 모든 튜브는 즉시 10분 동안 4000g 로 원심분리시킨다. 상등액을 흡인시키고 펠렛은 가용화제(트리톤 x -100 + 50% EtOH, 1:4 v/v) 1ml를 가하여 용해시킨다. 튜브를 격렬하게 와동시키고 신틸레이션 바이알에 기울여 따른 다음, 리퀴신트 신틸레이션 계수 칵테일 10ml 속에서 계수한다. 활성 흡수율은 37℃에서 흡수율(cpm)과 0℃에서 흡수율(cpm)간의 차이이다. 각각의 약물 농축물에서의 억제율은 3회 측정값의 평균이다. IC₅₀값은 로그-프로빗 분석법으로부터 유도된다.

참조문헌

1. Asberg, M., thorn, P., Traskman, L., Bertilsson, L., and Ringberger, V. "serotonin depression: -A biochemical subgroup within the affective disorders, Science 191: 474-480(1975).

2. DeMontigy, C. Enhancement of 5HT neurotransmission by antigepressant treatments. J. physiol. (Paris) 77: 455-461(1980).

3. Feighner, J.P. Clinical efficacy of the newer antidepressantes. J. Clin. Psychopharmacol. 1 234-265(1981).

4. Ogren, S.O., Ross, S.B., Hall, H., Holm, A.C. and Renyi, A.L. The Pharmacology of zimelidine: A 5HT selective reuptake inhibitor. Acta Psychiat. Scand. 290: 127-151(1981).

5. Clements-Jewry, S., Robson, P.A. and Chidly, L.J. Biochemical investigations into the mode of action of trazodone. Neuropharmacol. 19: 1165-1173(1980).

6. Ross, S.B. Neuronal transport of 5-hydroxytryptamine. Pharmacol. 21: 123-131(1980)

7. Shaskan, E.G. and Snyder, S.H. Kinetics of serotonin accumulation into slices from rat brain: Relationship to catecholamine uptake. J. Pharmacol. Exp. Ther. 175: 404-418(1970).

8. Horn, S.A. Structure activity relations for the inhibition of 5HT uptake into rat hypothalamic homogenates by serotons and tryptamine analogues. J. Neurochem. 21: 883-888(1973).

9. Horn, A.S. and Trace, R.C.A.M. Structure-activity relations for the inhibition of 5-hydroxytrypamine uptake by tricyclic antidepressant into synaptosomes from serotonergic neurones in rat brain homegenates. Brit. J. Phatmacol. 51: 399-403(1974)

10. Langer, S.Z., Moret, C., raisman, R., Dubocovin, M.L. and Briley M. High affinity [³H]imipramine binding in rat hypothalamus: Association with uptake of serotonin vut not norepinephrine. Science 210: 113-1135(1980)

본 발명의 대표적인 화합물에 대한 상기 3가지 분석방법의 결과를 표 1에 나타낸다.

본 발명의 유효량의 화합물은, 예를 들면 캡슐제 또는 정제로 경구 투여하거나, 멸균 용액 또는 현탁액의 형태로 비경구 투여하거나 어떤 경우에는 멸균 용액 형태로 피하 투여하는 것과 같은 다양한 방법으로 환자에게 투여할 수 있다. 유리 염기 최종 생성물은 그 자체로도 유효한 한편, 안정성, 편리한 결정화, 증가된 용해도 등의 목적으로 약제학적으로 허용되는 산 부가염의 형태로 제형화되어 투여할 수 있다.

본 발명의 약제학적으로 허용되는 산 부가염의 제조에 적합한 산에는 타르타르산, 시트르산, 아세트산, 석신산, 말산, 푸마르산 및 옥살산과 같은 유기산 뿐만 아니라 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산 및 과염소산과 같은 무기산도 포함한다.

본 발명의 활성 화합물은, 예를 들면, 불활성 희석제 또는 식용 담체와 함께 경구 투여하거나 젤라틴 캡슐로 둘러싸거나 정제로 압축할 수 있다. 치료학적 경구투여의 목적을 위하여, 본 발명의 활성 화합물에 부형제를 혼입할 수 있으며 정제, 트로키(troche)제, 캡슐제, 엘릭서제, 현탁제, 시럽, 웨이퍼, 씹는 검 등의 형태로 가용한다. 이러한 제제는 활성 화합물을 0.5% 이상 함유해야 하지만, 특정 형태에 따라 변화할 수 있으며 4 내지 약 70중량%의 범위가 편리할 수 있다. 그러나, 조성물 중의 활성 화합물의 양은 적합한 투여량이 수득될 수 있는 정도이어야 한다. 본 발명에 따르는 바람직한 조성물 및 제제를 제조하여 경구 투여단위 형태가 활성 화합물을 1.0 내지 300mg 함유하도록 한다.

정제, 환제, 캡슐제, 트로키제 등은 또한 다음 성분을 함유할 수 있다: 미세 결정성 셀룰로즈, 트라가칸트 고무 젤라틴과 같은 결합제; 전분 또는 락토즈와 같은 부형제, 알긴산, 프리모겔, 옥수수 전분 등과 같은 붕해제; 마그네숨 스테아레이트 또는 스테로택스와 같은 윤활제; 콜로이드성 이산화실리콘과 같은 활탁제; 및 첨가될 수 있는 수크로즈 또는 사카린과 같은 감미제 또는 박하, 메틸 살리실레이트 또는 오렌지 향과 같은 향미제, 투여단위 형태가 캡슐일때, 상술한 형태의 물질 이외에, 지방산 오일과 같은 액체 담체도 함유할 수 있다. 기타 투여단위형태는 투여 단위의 물리적 형태를 변형시키는 기타 다양한 물질, 예를 들면, 피복물을 함유할 수 있다. 그러므로, 정제 또는 환제는 슈가, 셀락 또는 기타 장 피복제로 피복할 수 있다. 시럽제는 활성 화합물 이외에, 감미료로서의 수크로즈 및 특정 방부제, 염료, 착색제 및 향미제를 함유할 수 있다. 이러한 다양한 조성물을 제조하는데 사용되는 물질은 약제학적으로 순수하고 사용량의 범위내에서 무독성이어야만 한다.

치료학적 비경구 투여의 목적을 위해, 본 발명의 활성 화합물은 용액 또는 현탁액에 혼입될 수 있다. 이들 제제는 활성 화합물을 0.1% 이상 함유해야 하나, 이의 0.5 내지 약 30중량% 사이에서 변화될 수 있다. 그러한 조성물 중의 활성 화합물의 양은 적합한 투여량이 수득될 수 있는 정도이어야 한다. 본 발명에 따르는 바람직한 조성물 및 제제를 제조하여 비경구 투여단위가 활성 화합물을 0.5 내지 100mg 함유 되도록 한다.

용약 또는 현탁액은 또한 다음 성분을 포함할 수 있다: 주사용 물, 염수 용액, 비휘발성 오일, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 기타 합성 용매와 같은 멸균 희성제; 벤질 알콜 또는 메틸 파라벤과 같은 항균제; 아스코르브산 또는 중아황산나트륨과 같은 산화방지제; 에틸렌디아민테트라아세트산과 같은 킬레이트화제; 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트와 같은 완충액 및 염화 나트륨 또는 덱스트로스와 같은 강장제. 비경구 제제는 1회용 주사기 또는 유리 또는 플라스틱으로 만들어진 다중 투여병에 충전할 수 있다.

본 발명의 화합물이 예는 다음과 같다:

3-(4-피리디닐아미노)-1H-인돌;

N-(1H-인돌-3-일)-N-(4-피리디닐)프로판아미드;

3-(4-피리디닐아미노)벤조[b]티오펜;

N-(벤조[b]티오펜-3-일)-N-(4-피리디닐)프로판아미드;

3-(3-플루오로-4-피리디닐아미노)-1H-인돌;

3-(프로필-4-피리디닐아미노)-1H-인돌;

1-메틸-3-(4-피리디닐아미노)-1H-인돌;

6-플루오로-3-(4-피리디닐아미노)벤조[b]-티오펜;

5-페닐메톡시-3-(4-피리디닐아미노)-1H-인돌;

5-하이드록시-3-(4-피리디닐아미노)-1H-인돌;

6-플루오로-3-(프로필-4-피리디닐아미노)벤조[b]티오펜;

3-(4-피리디닐아미노)벤조[b]티오펜;

3-(4-피리디닐아미노)-1H-인돌-5-일 메틸카바메이트;

3-(4-피리디닐아미노)-1H-인돌-5-일 벤질카바메이트;

3-[N-프로필-N-(3-플루오로-4-피리디닐)아미노]-1H-인돌-5-일 벤질카바메이트;

3-[N-프로필-N-(3-플루오로-4-피리디닐)아미노]-1H-인돌;

3-(4-피리디닐아미노)-1H-인다졸;

3-[N-프로필-N-(4-피리디닐)아미노]-1H-인다졸;

1-메틸-3-(4-피리디닐아미노)-1H-인다졸;

1-메틸-3-(프로필-4-피리디닐)아미노-1H-인다졸;

2-아미노-N-(1H-인돌-3-일)-N-(4-피리디닐)아세트아미드;

2-아미노-N-(1-메틸-1H-인돌-3-일)-N-(4-피리디닐)아세트아미드;

2-아미노-N-(1-메틸-1H-인다졸-3-일)-N-(4-피리디닐)아세트아미드;

2-아미노-N-(1H-인다졸-3-일)-N-(4-피리디닐)아세트아미드 및

2-아미노-N-(벤조[b]티오펜-3-일)-N-(4-피리디닐)아세트아미드.

다음 실시예는 본 발명을 설명하기 위한 것이다.

[실시예 1]

3-(4-피리디닐아미노)-1H-인돌 말레에이트

1-메틸-2-피롤리디논 150ml중의 3-아미노인돌(8g)과 4-클로로피리딘 하이드로클로라이드(12g)의 용약을 70 내지 75℃에서 1시간 동안 교반한 후, 4-클로로피리딘 하이드로클로라이드(4g)를 추가로 가한다. 총 2시간 동안 교반한 후, 혼합물을 냉각시키고, 물과 함께 교반한 다음, 탄산나트륨으로 염기성화하고 에틸 아세테이트로 추출한다. 유기 추출물을 물과 염화나트륨 포화 용액으로 연속적으로 세척한 다음, 건조(무수 황산마그네슘)시키고, 여과한 다음, 20g의 검은색 오일로 농축시킨다. 이를 HPLC(고성능 액체 크로마토그래피)로 디클로로메탄중의 20% 메탄올을 사용하여 실리카 겔을 통해 용출시키면 검은색 오일 7g이 수득된다. 당해 오일을 아세토니트릴로부터 결정화하여 융점이 192내지 193℃인 담갈색 결정을 3g 수득한다. 이중 2.8g을 50% 메탄올/에테르 중에서 말레에이트염으로 전환시켜 융점이 149내지 151℃인 밝은 황갈색 결정을 3.5g 수득한다. 50% 메탄올/에테르로부터 재결정화하면 융점이 149내지 151℃인 밝은 황갈색 결정이 3.4g 수득된다.

분석

[실시예 2]

N-(1H-인돌-3-일)-N-(4-피리디닐) 프로판아미드

3-(4-피리디닐아미노)-1H-인돌(3g)을 무수 프로피온산(3g), 디클로로메탄 10mL 및 톨루엔 10mL로부터 제조된 용액에 가한다. 생성된 용약은 주위 온도에서 1시간 동안 교반한 후, 물과 함께 교반하고 탄산나트륨으로 염기성화한다. 생성물은 디클로로메탄으로 추출한다. 건조(무수 황산마그네슘)된 유기층을 여과하여 농축시킨다. 잔사는 섬광 컬럼 크로마토그래피로 디클로로메탄 중의 50% 에틸 아세테이트를 사용하여 실리카 겔을 통해 용출시켜 융점이 166 내지 168℃인 밝은 황갈색 고체를 3.5g 수득한다. 이중 1.5g을 아세토니트릴로부터 재결정화하여 융점이 168내지 170℃인 밝은 황갈색 결정을 1.3g 수득한다.

분석

[실시예 3]

3-(3-플루오로-4-피리디닐아미노)-1H-인돌 하이드로클로라이드

1-메틸-2 피롤리디논 200mL 중의 3-아미노인돌(7g)과 4-클로로-3-플루오로피리딘 하이드로클로라이드(13g)의 용약을 75 내지 80℃에서 2시간 동안 교반한 후, 4-클로로-3-플루오로피리딘 하이드로클로라이드(5g)를 추가로 가한다. 총 3시간 동안 교반한 후, 혼합물을 냉각시키고 물로 교반한 다음, 탄산나트륨으로 염기성화하고 에틸 아세테이트로 추출한다. 건조(무수 황산마그네슘)된 유기층을 여과하여 20g의 검은색 오일로 농축시킨다. 섬광 컬럼 크로마토그래피로 처음에는 디클로로메탄을 사용하여, 다음에는 디클로로메탄중의 50% 에틸 아세테이트를 사용하여 실리카 겔을 통해서 용출시켜 검은색 오일을 17g 수득한다. 당해 오일을 섬광 컬럼 크로마토그래피로 에테르를 사용하여 실리카 겔을 통해 용출시켜 검은색 오일을 10.6g 수득한다. 당해 오일을 HPLC로 디클로로메탄중의 20% 에틸 아세테이트를 사용하여 실리카 겔을 통해 용출시켜 검은색 오일을 8g 수득한다. 이중 6g을 메탄올/에테르 중에서 하이드로클로라이드 염으로 전환시켜 융점이 250℃ 이상인 고체를 3.5g 수득한다. 에테르 중의 30 메탄올로부터 재결정화하여 융점이 256 내지 258℃(분해)인 결정을 2.7g 수득한다.

분석

[실시예 4]

6-플루오로-3-(4-피리디닐아미노)벤조[b]티오펜 말레에이트

1-메틸-2-피롤리디논 200mL 중의 3-아미노-6-플루오로벤조[b]티오펜(7g)과 4-클로로피리딘 하이드로클로라이드(7g)의 용액을 80 내지 85℃에서 1시간 동안 교반한 후, 냉각시키고, 물과 함께 교반한 다음, 탄산나트륨으로 염기성화하고 에틸 아세테이트로 추출한다. 유기 추출물을 물과 염화나트륨 포화 용액으로 연속적으로 세척한후, 건조(무수 황산마그네슘)시키고, 여과한 다음, 10g의 검은색 오일로 농축시킨다. 당해 오일을 HPLC로 디클로로메탄 중의 10% 메탄올을 사용하여 실리카 겔을 통해 용출시켜 20% 메탄올 중의 말레에이트 염으로 전환시킨 후, 즉시 에테르 중의 20% 메탄올로부터 재결정화하여 융점이 172 내지 174℃(분해)인 백색 결정을 2.9g 수득한다.

분석

[실시예 5]

6-플루오로-3-(프로필-4-피리디닐아미노)벤조[b]티오펜 하이드로클로라이드

디메틸포름아미드 20mL 중의 6-플루오로-3-(4-피리디니아미노)벤조[b]티오펜(4.2g) 용액을 디메틸아미드 5mL 중의 수소화나트륨(0.42g)의 현탁액에 서서히 가한다. 음이온이 형성되면 디메틸포름아미드 10mL 중의 1-브로모프로판(2.3g)의 용액을 가한다. 1시간후 반응 혼합물을 물과 함께 교반하고 에틸 아세테이트로 추출한다. 유기 추출물을 물과 염화나트륨 포화 용액으로 연속적으로 세척한 후, 건조(무수 황산마그네슘)시키고, 여과하여 5g의 검은색 오일로 농축시킨다. 당해 오일을 섬광 컬럼 크로마토그래피로 에틸 아세테이트를 사용하여 실리카 겔을 통해 용출시켜 황색 오일을 3.3g 수득한다. 당해 에테르 중에서 20% 메탄올 중에서 하이드로클로라이드 염으로 전환시켜, 융점이 290 내지 292℃(분해)인 황색 결정을 3.3g 수득한다.

분석

Claims

일반식(Ⅰ)의 화합물 또는 약제학적으로 허용되는 이의 산 부가염.

상기식에서,

R₁은 수소, 저급 알킬, 저급 알케닐, 저급 알키닐, 아릴 저급 알킬, 아미노 저급 알킬, 저급 알킬 아미노 저급 알킬, 포르밀, 저급 알킬카보닐, 아미노 저급 알킬카보닐 또는 저급 알콕시카보닐이고,

그룹 -X-Y=는또는(여기서, R₂및 R₃는 독립적으로 수소 또는 저급 알킬기이다)이며,

W는 수소, 할로겐, 하이드록시, 저급 알콕시, 아릴 저급 알콕시, 또는[여기서, R₄는 수소, 저급 알킬 또는 아릴 저급 알킬이고, R₅는 저급 알킬 또는 아릴 저급 알킬이거나, 전체적으로 그룹은,또는(여기서 R₆는 수소, 저급 알킬, 아릴 또는 아릴 저급 알킬이다)이다]이고,

Z는 수소, 할로겐, 저급 알킬, 니트로 또는 아미노이다.
제 1항에 있어서, 그룹 -X-Y=가또는(여기서, R₂및 R₃은 제 1항에서 정의한 바와 같다)인 화합물.
제 2항에 있어서, R₁이 수소, 저급 알킬 또는 저급 알킬카보닐이고, W가 수소 또는 할로겐이며, Z가 수소 또는 할로겐인 화합물.
제 3항에 있어서, W가 수소 또는 플루오로이고, Z가 수소 또는 플루오로인 화합물.
제 4항에 있어서,

3-(4-피리디닐아미노)-1H-인돌,

N-(1H-인돌-3-일)-N-(4-피리디닐)프로판아미드.

3-(3-플루오로-4-피리디닐아미노)-1H-인돌,

6-플루오로-3-(4-피리디닐아미노)벤조[b]티오펜 및

6-플루오로-3-(프로필-4-피리디닐아미노)벤조[b]티오펜 또는

약제학적으로 허용되는 이의 산 부가염으로부터 선택되는 화합물.
일반식(Ⅴ)의 화합물(여기서, Z는 NH₂가 아니다)과 일반식(Ⅱ), 일반식(Ⅲ) 또는 일반식(Ⅳ)의 화합물을 반응시켜, -X-Y=, W, Z 및 R₃이 제 1항에서 정의한 바와 같고 R₁이 수소인 제1항에 따른 일반식(Ⅰ)의 화합물을 제조하는 방법.

상기식에서,

R₂, R₃및 W는 제1항에서 정의한 바와 같고, Z가 제1항에서 정의한 바와 같으나 아미노는 아니다.
-X-Y=가이고, R₃, W및 Z가 제1항에서 정의한 바와 같은 일반식(Ⅰ)의 화합물과 일반식의 화합물(여기서, R₇은 저급 알킬이다) 을 반응시켜, R₁이 그룹(여기서, R₇은 저급 알킬이다)이고, -X-Y=가이며, R₃, W 및 Z가 제1항에서 정의한 바와 같은 제 1항에 따른 일반식(Ⅰ)의 화합물을 제조하는 방법.
R₁이 그룹(여기서, R₇은 저급 알킬이다)이고, -X-Y=가이며, R₃, W및 Z가 제1항에서 정의한 바와 같은 제 1항에 따른 일반식(Ⅰ)의 화합물과 일반식 R₂Hal의 저급 알킬 할라이드(여기서, R₂는 저급 알킬이고, Hal은 염소 또는 브롬이다) 또는 일반식 (R₂O)₂SO₂의 디 저급 알킬설페이트를 반응시켜, 그룹-X-Y=가(여기서, R₂는 저급 알킬이다)이고, R₃, W 및 Z가 제 1항에서 정의한 바와 같으며 R₁이(여기서, R₇은 저급 알킬이다)인 제1항에 따른 일반식(Ⅰ)의 화합물을 제조하는 방법.
그룹 -X-Y=가(여기서, R₂는 저급 알킬이다)이고 R₃, W 및 Z가 제1항에서 정의한 바와 같으며 R₁이(여기서, R₇은 저급 알킬이다)인 제 1항에 따른 일반식(Ⅰ)의 화합물을 가수분해시켜, 그룹 -X-Y=가(여기서, R₂는 저급 알킬이다)이고 R₃, W 및 Z가 제1항에서 정의한 바와 같으며 R₁이 수소인 제 1항에 따른 일반식(Ⅰ)의 화합물을 제조하는 방법.
-X-Y=, W 및 R₃이 제 1항에서 정의한 바와 같고 Z가 제 1항에서 정의한 바와 같으나 아미노는 아니며 R₂가 존재하는 경우, 저급 알킬이고 R₁이 수소인 일반식(Ⅰ)의 화합물과 일반식 R₈-Hal의 화합물(여기서, R₈은 저급 알킬, 저급 알케닐, 저급 알키닐 또는 아릴 저급 알킬이고, Hal은 염소 또는 브롬이다)을 반응시켜, 그룹 -X-Y=, W 및 R₃이 제1항에서 정의한 바와 같고 Z가 제1항에서 정의한 바와 같으나 아미노는 아니며 R₂가, 존재하는 경우, 저급 알킬이고 R₁이 R₈의 의미를 갖는 제1항에 따른 일반식(Ⅰ)의 화합물을 제조하는 방법.
그룹 -X-Y=, W및 R₃이 제 1항에서 정의한 바와 같고 Z가 제1항에서 정의한 바와 같으나 아미노는 아니며 R₂가, 전재하는 경우, 저급 알킬이고 R₁이 수소인 일반식(Ⅰ)의 화합물과 Hal-Alk-Hal의 화합물(여기서, Alk는 저급 알킬렌이고, Hal은 염소 또는 브롬이다)을 반응시키고, 수득된 생성물과 일반식 R'NH₂의 화합물(여기서, R'는 수소 또는 저급 알킬이다)을 반응시켜 그룹 -X-Y=, W 및 R₃이 제1항에서 정의한 바와 같고 Z가 제1항에서 정의한 바와 같으나 아미노는 아니며 R₂가, 존재하는 경우, 저급 알킬이고 R₁이 아미노 저급 알킬 또는 저급 알킬 아미노 저급 알킬인 제1항에 따른 일반식(Ⅰ)의 화합물을 제조하는 방법
그룹 -X-Y=, W및 R₃이 제1항에서 정의한 바와 같고 Z가 제 1항에서 정의한 바와 같으나 아미노는 아니며 R₂가, 존재하는 경우, 저급 알킬이고 R₁이 수소인 일반식(Ⅰ)의 화합물과 일반식의 화합물 또는 일반식의 화합물(여기서, R₉는 저급 알킬이고, Hal은 염소 또는 브롬이다)을 반응시켜, 그룹 -X-Y=, W 및 R₃이 제1항에서 정의한 바와 같고 Z가 제1항에서 정의한 바와 같으나 아미노는 아니며 R₂가, 존재하는 경우, 저급 알킬이고 R₁이 저급 알킬카보닐인 제1항에 따른 일반식(Ⅰ)의 화합물을 제조하는 방법.
그룹 -X-Y=, W 및 R₃이 제1항에서 정의한 바와 같고 Z가 제 항에서 정의한 바와 같으나 아미노는 아니며 R₂가, 존재하는 경우, 저급 알킬이고 R₁이 저급 알킬카보닐인 일반식(Ⅰ)의 화합물을 적합한 환원제로 환원시켜, 그룹 -X-Y=, W 및 R₃이 제1항에서 정의하는 바와 같고 Z가 제₁항에서 정의한 바와 같으나 아미노는 아니며 R₂가, 존재하는 경우, 저급 알킬이고 R₁이 저급 알킬인 제1항에 따른 인반식(Ⅰ)의 화합물을 제조하는 방법.