KR100292212B1 - 치환된아미노티에노피리딘,이의제조방법및이를포함하는약제학적조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 일반식(Ⅰ)의 치환된 아미노티에노피리딘, 이의 제조방법 및 약제로서 이의 용도에 관한 것이며, 이 화합물은 세로토닌 작동성 및 아드레날린 작동성과 같은 신경 전달물질의 작용의 조절자로서 유용하며, 이에 따라, 우울증 치료제, 불안해소제, 비정규적 정신병 치료제, 진토제로서 유용하며 또한 강박관념성 질환과 같은 성격 질환치료에 유용하다. 이들 화합물의 일부는 글라이신 부분 동근으로서도 유용하다. 본 발명은 또한 일반식(Ⅰ) 화합물의 제조방법에 관한 것이다.
상기식에서, R1, R2, R3, m 및 n은 명세서의 정의와 같다.

Description

[발명의 명칭]
치환된 아미노티에노피리딘, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 약제학적 조성물
[발명의 상세한 설명]
본 발명은 아드레날린 작동성 및 세로토닌 작동성과 같은 신경전달물질 작용의 조절자로서 유용하며, 이에 따라, 항우울제, 불안해소제, 비정형 정신병 치료제, 제토제로서 유용하며 또한 강박성 장애와 같은 인격장애 치료에 유용한, 하기 일반식(Ⅰ)의 화합물, 약제학적으로 허용되는 이의 부가염 및 광학 또는 기하 이성체 또는 이의 라세미 혼합물에 관한 것이다.
상기식에서,
R1은 수소, (C1-C6)알킬, (C3-C6)알케닐, (C3-C6)알키닐, 아릴(C1-C6)알킬, (C1-C6)알킬카보닐, 포르밀, (C1-C6)알콕시카보닐, 아릴(C1-C6)알콕시카보닐, 아릴(C1-C6)알콕시카보닐아미노(C1-C18)알킬카보닐, (C1-C6)알콕시카보닐아미노(C1-C18)알킬카보닐, (C1-C6)알킬아미노(C1-C6)알킬카보닐, 아미노(C1-C18)알킬카보닐, (C1-C6)디알킬카보닐(C1-C6)알킬아미노, 아미노(C1-C6)알킬, (C1-C6)알킬아미노(C1-C6)알킬 또는 (C1-C6)디알킬아미노(C1-C6)알킬이고,
R2는 수소, (C1-C6)알킬 또는이고, 단 R1및 R2가 동시에 수소가 아니며,
R3은 수소, (C1-C6)알킬 또는 (C1-C6)알콕시카보닐이고,
X는 수소, (C1-C6)알킬, 할로, (C1-C6)알콕시 또는 니트로이고,
n은 0, 1, 2 또는 3이며,
m은 0, 1, 2 또는 3이고, 단 m과 n의 합은 항상 3이고,
p는 0 또는 1이다.
이들 화합물 중 특정 화합물은 또한, 글리이신의 부분적 효능제로서도 유용하다. 본 발명은 또한, 이들 화합물을 함유하는 약제학적 조성물, 이들의 사용방법 및 이들 화합물의 제조 방법에 관한 것이다.
달리 언급하거나 지시하지 않는한, 다음의 정의는 명세서와 첨부된 청구범위 전체에 적용될 것이다.
(C1-C6)알킬 및 (C1-C18)알킬은 직쇄 또는 측쇄 알킬 그룹, 예를 들어, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, 이소-부틸, 2급-부틸, 3급-부틸 및 직쇄 및 측쇄 펜틸 및 헥실을 나타내며, (C1-C18)알킬의 경우는 임의로 하이드록시메틸 또는 트리플루오로메틸로 치환된다.
할로(할로겐)은 불소, 염소, 브롬 또는 요오드를 나타낸다.
아릴은 0, 1 또는 2개의 치환체로 치환된 페닐 그룹을 나타내며, 각각의 치환체는 독립적으로 (C1-C6)알킬, (C1-C6)알콕시, 할로겐, 니트로 또는 트리풀루오로메틸이다.
명세서와 첨부된 청구범위를 통해, 당해 화학식 또는 화합물명은 입체, 광학 및 토토머 이성체가 존재한다면 이들 이성체를 포함한다.
본 발명 화합물의 한 부류는 다음 일반식(Ⅱ)의 화합물이다.
상기식에서,
R1, R2및 R3는 상기 정의한 바와 같다.
이 부류의 한 가지 바람직한 양태는 다음 일반식(Ⅲ)의 화합물이다.
상기식에서,
R1은 수소, (C1-C6)알킬, (C3-C6)알케닐, (C3-C6)알키닐, 아릴(C1-C6)알킬, (C1-C6)알콕시카보닐아미노(C1-C18)알킬카보닐, 아릴(C1-C6)알콕시카보닐아미노(C1-C18)알킬카보닐, (C1-C6)알콕시카보닐, 아미노(C1-C18)알킬카보닐, (C1-C6)알킬카보닐, 아미노(C1-C6)알킬 또는 (C1-C6)알킬아미노(C1-C6)알킬이고,
R3은 수소, (C1-C6)알킬 또는 (C1-C6)알콕시카보닐이고,
X는 수소, (C1-C6)알킬, 할로 또는 니트로이고,
p는 0 또는 1이다.
보다 바람직하게는, 이 양태에서,
R1이 수소, (C1-C6)알킬 또는 (C1-C6)알킬카보닐이고,
R3은 수소 또는 (C1-C6)알콕시카보닐이며,
X는 수소이고,
p는 0이다.
가장 바람직하게는 하기 일반식(Ⅳ)의 화합물이다.
상기식에서,
R1은 수소, (C1-C6)알킬 또는 (C1-C6)알킬카보닐이고,
R3은 수소이다.
이 부류의 다른 양태는 하기 일반식(Ⅴ)의 화합물이다.
상기식에서,
R1은 (C1-C6)알콕시카보닐아미노(C1-C18)알킬카보닐, 아릴(C1-C6)알콕시카보닐아미노(C1-C18)알킬카보닐, 아미노(C1-C18)알킬카보닐, (C1-C6)알킬아미노(C1-C6)알킬카보닐 또는 (C1-C6)디알킬아미노(C1-C6)알킬카보닐이고,
R3는 수소이다.
가장 바람직하게는, R1이 (C1-C6)알콕시카보닐아미노(C1)알킬카보닐 또는 아미노(C1)알킬카보닐인 화합물이다.
본 발명의 다른 부류의 화합물은 하기 일반식(Ⅵ)의 화합물이다.
상기식에서,
R1, R2및 R3는 상기 정의한 바와 같다.
이 부류의 바람직한 양태는 다음 일반식(Ⅶ)의 화합물이다.
상기식에서,
R1은 수소, (C1-C6)알킬, (C3-C6)알케닐, (C3-C6)알키닐, 아릴(C1-C6)알킬, (C1-C6)알콕시카보닐아미노(C1-C18)알킬카보닐, 아릴(C1-C6)알콕시카보닐아미노(C1-C18)알킬카보닐, (C1-C6)알콕시카보닐, 아미노(C1-C18)알킬카보닐, (C1-C6)알킬카보닐, 아미노(C1-C6)알킬 또는 (C1-C6)알킬아미노(C1-C6)알킬이고,
R3는 수소, (C1-C6)알킬 또는 (C1-C6)알콕시카보닐이고,
X는 수소, (C1-C6)알킬, 할로 또는 니트로이고,
p는 0 또는 1이다.
보다 바람직하게는, 이 양태에서,
R1이 수소, (C1-C6)알킬 또는 (C1-C6)알킬카보닐이고,
R3이 수소 또는 (C1-C6)알콕시카보닐이며,
X가 수소이고,
p가 0이다.
가장 바람직하게는 다음 일반식(Ⅷ)의 화합물이다.
상기식에서,
R1은 수소, (C1-C6)알킬 또는 (C1-C6)알킬카보닐이고,
R3는 수소이다.
이 부류의 다른 양태는 하기 일반식(Ⅸ)의 화합물이다.
상기식에서,
R1은 (C1-C6)알콕시카보닐아미노(C1-C18)알킬카보닐, 아릴(C1-C6)알콕시카보닐아미노(C1-C18)알킬카보닐 또는 아미노(C1-C18)알킬카보닐이고,
R3는 수소이다.
가장 바람직하게는,
R1은 (C1-C6)알콕시카보닐아미노(C1)알킬카보닐 또는 아미노(C1)알킬카보닐이다.
이 부류의 다른 바람직한 양태는 하기 일반식(Ⅹ)의 화합물이다.
상기식에서,
R1, R2및 R3는 상기 정의한 바와 같다.
이 부류의 바람직한 양태는 하기 일반식(XI)의 화합물이다.
상기식에서,
R1은 수소, (C1-C6)알킬, (C3-C6)알케닐, (C3-C6)알키닐, 아릴(C1-C6)알킬, (C1-C6)알콕시카보닐아미노(C1-C18)알킬카보닐, 아릴(C1-C6)알콕시카보닐아미노(C1-C18)알킬카보닐, (C1-C6)알콕시카보닐, 아미노(C1-C18)알킬카보닐, (C1-C6)알킬카보닐, 아미노(C1-C6)알킬 또는 (C1-C6)알킬아미노(C1-C6)알킬이고,
R3는 수소, (C1-C6)알킬 또는 (C1-C6)알콕시카보닐이고,
X 는 수소, (C1-C6)알킬, 할로 또는 니트로이고,
p 는 0 또는 1이다.
보다 바람직하게는, 이 양태에서,
R1이 수소, (C1-C6)알킬 또는 (C1-C6)알킬카보닐이고,
R3이 수소 또는 (C1-C6)알콕시카보닐이며,
X가 수소이고,
p가 0이다.
가장 바람직하게는, 하기 일반식(XⅡ)의 화합물이다.
상기식에서,
R1은 수소, (C1-C6)알킬 또는 (C1-C6)알킬카보닐이고
R3는 수소이다.
이 부류의 다른 양태는 하기 일반식(XⅢ)의 화합물이다.
상기식에서,
R1은 (C1-C6)알콕시카보닐아미노(C1-C18)알킬카보닐, 아릴(C1-C6)알콕시카보닐아미노(C1-C18)알킬카보닐 또는 아미노(C1-C18)알킬카보닐이고,
R3은 수소이다.
가장 바람직하게는, R1이 (C1-C6)알콕시카보닐아미노(C1)알킬카보닐 또는 아미노(C1)알킬카보닐이다.
본 발명의 또 다른 부류의 화합물은 하기 일반식(XIV)의 화합물이다.
상기식에서,
R1, R2및 R3는 상기 정의한 바와 같다.
이 부류의 바람직한 양태는 하기 일반식(XV)의 화합물이다.
상기식에서,
R1은 수소, (C1-C6)알킬, (C3-C6)알케닐, (C3-C6)알키닐, 아릴(C1-C6)알킬, (C1-C6)알콕시카보닐아미노(C1-C18)알킬카보닐, 아릴(C1-C6)알콕시카보닐아미노(C1-C18)알킬카보닐, (C1-C6)알콕시카보닐, 아미노(C1-C18)알킬카보닐, (C1-C6)알킬카보닐, 아미노(C1-C6)알킬 또는 (C1-C6)알킬아미노(C1-C6)알킬이고,
R3은 수소, (C1-C6)알킬 또는 (C1-C6)알콕시카보닐이고,
X는 수소, (C1-C6)알킬, 할로 또는 니트로이고,
p는 0 또는 1이다.
보다 바람직하게는 이 양태에서,
R1이 수소, (C1-C6)알킬 또는 (C1-C6)알킬카보닐이고,
R3이 수소 또는 (C1-C6)알콕시카보닐이며,
X가 수소이고
p가 0인 것이다.
가장 바람직하게는 하기 일반식(XVI)의 화합물이다.
상기식에서,
R1은 수소, (C1-C6)알킬 또는 (C1-C6)알킬카보닐이고,
R3은 수소이다.
이 부류의 다른 양태는 하기 일반식(XVⅡ)의 화합물이다.
상기식에서,
R1은 (C1-C6)알콕시카보닐아미노(C1-C18)알킬카보닐, 아릴(C1-C6)알콕시카보닐아미노(C1-C18)알킬카보닐 또는 아미노(C1-C18)알킬카보닐이고
R3은 수소이다.
가장 바람직하게는 R1이 (C1-C6)알콕시카보닐아미노(C1)알킬카보닐 또는 아미노(C1)알킬카보닐이다.
본 발명 화합물의 비제한적인 예로는 다음을 들 수 있다:
3-(4-피리디닐아미노)티에노[2,3-b]피리딘;
3-(프로필-4-피리디닐아미노)티에노[2,3-b]피리딘;
3-(메틸-4-피리디닐아미노)티에노[2,3-b]피리딘;
3-(에틸-4-피리디닐아미노)티에노[2,3-b]피리딘;
3-(부틸-4-피리디닐아미노)티에노[2,3-b]피리딘;
3-(4-피리디닐아미노)티에노[3,2-c]피리딘;
3-(프로필-4-피리디닐아미노)티에노[3,2-c]피리딘;
3-(메틸-4-피리디닐아미노)티에노[3,2-c]피리딘;
3-(에틸-4-피리디닐아미노)티에노[3,2-c]피리딘;
3-(부틸-4-피리디닐아미노)티에노[3,2-c]피리딘;
3-(4-피리디닐아미노)티에노[3,2-b]피리딘;
3-(프로필-4-피리디닐아미노)티에노[3,2-b]피리딘;
3-(메틸-4-피리디닐아미노)티에노[3,2-b]피리딘;
3-(에틸-4-피리디닐아미노)티에노[3,2-b]피리딘;
3-(부틸-4-피리디닐아미노)티에노[3,2-b]피리딘;
3-(4-피리디닐아미노)티에노[2,3-c]피리딘;
3-(메틸-4-피리디닐아미노)티에노[2,3-c]피리딘;
3-(에틸-4-피리디닐아미노)티에노[2,3-c]피리딘;
3-(프로필-4-피리디닐아미노)티에노[2,3-c]피리딘;
3-(부틸-4-피리디닐아미노)티에노[2,3-c]피리딘;
3-(아세틸-4-피리디닐아미노)티에노[2,3-c]피리딘;
3-(아세틸-4-피리디닐아미노)티에노[2,3-b]피리딘;
3-(프로피오닐-4-피리디닐아미노)티에노[2,3-b]피리딘;
3-(아세틸-4-피리디닐아미노)티에노[3,2-c]피리딘;
3-(프로피오닐-4-피리디닐아미노)티에노[3,2-c]피리딘;
3-(아세틸-4-피리디닐아미노)티에노[3,2-b]피리딘;
3-(프로피오닐-4-피리디닐아미노)티에노[3,2-b]피리딘;
3-(프로피오닐-4-피리디닐아미노)티에노[2,3-c]피리딘;
2-아미노-N-(티에노[2,3-b]피리딘-3-일)아세트아미드;
2-아미노-N-(티에노[3,2-c]피리딘-3-일)아세트아미드;
2-아미노-N-(티에노[3,2-b]피리딘-3-일)아세트아미드;
2-아미노-N-(티에노[2,3-c]피리딘-3-일)아세트아미드;
3급-부틸[2-(티에노[2,3-b]피리딘-3-일아미노)-2-옥소에틸]카바메이트;
3급-부틸[2-(티에노[3,2-c]피리딘-3-일아미노)-2-옥소에틸]카바메이트;
3급-부틸[2-(티에노[3,2-b]피리딘-3-일아미노)-2-옥소에틸]카바메이트;
3급-부틸[2-(티에노[2,3-c]피리딘-3-일아미노)-2-옥소에틸]카바메이트;
본 발명의 화합물은 하기 기술한 하나 이상의 합성 경로로 제조한다.
[반응도식 A]
합성 도식 설명을 통해, R1, R3, X, m, n 및 p는 달리 언급하지 않거나 나타내지 않는 한 각각 상기 주어진 정의와 같으며 다른 표시는 이들의 최초에 나타낸 정의와 같다.
보다 특히는, 반응 도식 A에 나타낸 바와 같이, 일반식(XVⅢ)의 아미노티에노피리딘을 일반식(XIX)의 할로피리딘 또는 일반식(XX)의 화합물(여기에서, R4는 수소, (C1-C6)알킬 또는 하이드록시(C1-C6)알킬이고, R5는 수소 또는 (C1-C6)알킬이며, R6은 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, R7은 (C1-C6)알킬 또는 아릴(C1-C6)알킬이며, k 및 q는 독립적으로 0 내지 5이나 단, k와 q의 합이 5 이하이다)과 반응시켜 각각 일반식(XXI) 또는 일반식(XXⅡ)의 N-치환된 화합물을 수득한다.
생성물이 반응 도식 A의 일반식(XXI) 화합물일 경우, 반응을 일반적으로 약 0℃ 내지 200℃, 바람직하게는 약 20℃ 내지 150℃, 가장 바람직하게는 약 50℃ 내지 100℃ 사이의 온도에서, 비스(2-메톡시에틸)에테르, 디에틸 에테르, 디메톡시에탄, 디옥산 또는 테트라하이드로푸란과 같은 에테르성 용매 디메틸포름아미드, 디메틸아세트아미드, N-메틸-2-피롤리돈, 헥사메틸포스포르아미드 또는 디메틸설폭사이드와 같은 극성 비양자성 용매 또는 에탄올 또는 이소프로판올과 같은 극성 용매중에서 수행한다.
그후 일반식(XXI)의 화합물을, 약 -10℃ 내지 약 80℃, 바람직하게는 약 0℃ 내지 약 25℃ 사이의 온도에서, 일반식 R8hal 또는 일반식(R9O)2SO2의 할라이드 또는 설페이트(여기에서, R8은 (C1-C6)알킬, (C3-C6)알케닐, (C3-C6)알키닐 또는 아릴(C1-C6)알킬이고, R9는 (C1-C6)알킬이다)와 반응시켜 일반식(Ⅲ), (VⅡ), (XI) 또는 (XV)의 화합물(여기에서, R1은 상기 R8또는 R9에 상응한다)을 수득한다.
생성물이 일반식(XXⅡ)의 화합물인 경우, 이 반응은 디사이클로헥실카보디이미드(DCC)와 같은 축합제의 존재하에 수행한다. 전형적으로, 이 반응은 약 0℃ 내지 약 100℃, 바람직하게는 약 15℃ 내지 약 80℃, 가장 바람직하게는 약 20℃ 내지 약 50℃의 온도에서, 비양자성 유기 용매, 예를 들어 디클로로메탄, 디옥산 또는 테트라하이드로푸란과 같은 같은 적절한 용매중에서 수행한다.
일반식(XXⅡ)의 화합물을 당해 분야에 공지된 방법으로 탈보호시킨다. R7이 페닐메틸인 경우, 일반식(XXⅡ)의 화합물은, 예를 들어, 탄소상 팔라듐과 같은 촉매 존재하에 수소로 처리하여 탈보호시켜, 일반식(V), (IX), (VⅢ) 또는 (XVⅡ)의 아미노 화합물을 수득한다. 이 반응은 전형적으로 약 10℃ 내지 50℃, 바람직하게는 약 15℃ 내지 약 30℃에서, 메탄올 또는 에탄올과 같은 극성 용매 중에서 수행한다.
일반식(XXⅡ)의 R7이 3급-부틸인 경우, 이 화합물은 당해 분야에 공지된 방법, 예를 들어, 약 -50℃ 내지 약 100℃에서, 에틸 아세테이트, 테트라하이드로푸란, 메탄올, 클로로포름 및 등과 같은 유기 용매중에서, 염산, 브롬산 또는 트리플루오로아세트산과 같은 산으로 처리하여 탈보호시킨다. 바람직하게는 이 반응은 약 -15℃ 내지 약 30℃의 온도에서 메탄올중 염산의 존재하에 수행한다.
아미노티에노피리딘 출발 물질은 당해 분야에 공지된 방법에 따라, 예를 들어, 적절한 시아노할로피리딘을 메틸티오글리콜레이트의 반응시킨 후[참조: J. Het. Chem., 24 85(1987), J. Het, Chem., 7 373 (1970)], 반응 도식 B에 나타낸 바대로 2-에스테르 그룹을 제거하여 3-아미노티에노[2,3-b]피리딘 및 3-아미노티에노[2,3-c]피리딘을 제조한다. 출발 피리딘 화합물 3-클로로-4-시아노피리딘은 문헌[참조: J. Het. Chem., 15 683 (1978)]에 공지된 방법으로 4-시아노피리딘 N-옥사이드로부터 제조할 수 있다.
[반응 도식 B]
본 발명의 일반식(Ⅲ), (V), (VⅡ), (IX), (XI), (XⅢ), (XV) 및 일반식(XVⅡ)의 화합물은 세로토닌 작동성 및 아드레날린 작동성과 같은 신경전달물질 작용의 조절자로서 유용하며, 이에 따라, 항우울제, 불안해소제, 비정형 정신병 치료제, 제토제로서 유용하며 또한 강박성 장애와 같은 인격장애의 치료에 유용하다. 이들 화합물 중 특정 화합물은 또한 글라이신의 부분적 효능제로서도 유용하다.
[세로토닌(5TH1A) 수용체에 대한 [3H]-8-하이드록시-2-(디-n-프로필아미노)-테트랄린([3H]DPAT)의 결합]
[목적]
이 검정의 목적은 뇌에서 시험 화합물의 5HT1A수용체에 대한 친화도를 측정하는 것이다. 시험 화합물은 신규한 불안해소제(1-4), 비정형 정신병 치료제로서 잠재적 용도를 갖거나 강박성 장애와 같은 인격장애 치료에 유용한 세로토닌 작동성 특성을 갖는 화합물을 예측하는데 유용한 것으로 여겨진다.
[도입]
래트 뇌에서 2가지 5TH 수용체군의 존재는 스피로페리돌(5)에 대한 차등 감도에 의해 입증된 바 있다. 스피로페리돌-민감성 수용체는 5HT1A서브타입으로 나타내며, 불감성 수용체는 5TH1B서브타입으로 나타낸다(6). 이어서, 다른 5HT 결합부위(5HT1C, 5HT1D및 5HT3)는 이들의 5HT 길항제에 대한 차등 감도에 근거하여 여러 가지 종에서 동정된 바 있다. 5HT 수용체 분류에서의 중요한 전진은 5HT1A수용체에 대한 선택적 리간드인 [3H]DPAT의 동정으로부터 시작되었다(8). 이들 발견자들은, [3H]DPAT가 자가수용체를 표시한다고 보고하였다. 장해 연구는 [3H]DPAT 표지된 수용체가 말단 자가수용체가 아니라 체세포성 수지상 자가 수용체임을 제시하고 있다(9). 물론 DPAT가 레이프 핵(Raphe nucleus)에서의 발생율을 감소시키고 5HT 방출을 억제하지만, 실제적인 위치와 작용은 어느정도 논쟁의 여지가 있다(2). 이들 연구와 [3H]DPAT의 구아닌 뉴클레오타이드에 대한 결합 감수성 및 아데닐레이트사이클라제에 대한 영향은 DPAT가 5HT1A수용체에서 효능제로서 작용함을 제시하고 있다(10).
[방법 I]
A. 시약
1. 트리스 완충액, pH 7.7
(a) 57.2g의 트리스 HCl
16.2g의 트리스 염기
증류수로 용적을 1ℓ로 한다(0.5M 트리스 완충액, pH 7.7).
(b) 탈이온화 H2O로 1:10의 희석물을 제조(0.05M 트리스 완충액, pH 7.7)
(c) 10μM 파길린, 4mM CaCl2및 0.1% 아스코르브산을 함유하는 0.05M 트리스 완충액, pH 7.7.
0.49mg 파길린·HCl
111mg CaCl2
250 아스코르브산
0.05M 트리스 완충액 pH 7.7(시약 1b)로 250ml가 되게함.
2. 애머샴(Amersham)으로부터 8-하이드록시[3H]-DPAT(2-(N,N-디[2,3(n)-3H]프로필아미노)-8-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌)(160-206Ci/mmol)을 입수.
IC50측정을 위해 : 10nM의 스톡 용액을 제조하고 각각의 튜브에 50μl를 가한다(최종 농도=0.5nM).
3. 세로토닌 크레아티닌 설페이트. 0.01N HCl중에서 0.5mM 스톡 용액을 제조하고 비특이적 결합을 측정하기 위해 20μl를 3개의 튜브에 가한다(최종 농도=10μM).
4. 시험 화합물. 대부분의 검정에서, 적절한 용매중에서 1mM 스톡 용액을 제조하고 연속적으로 희석시켜, 검정 범위내의 최종 농도가 2 x 10-5내지 2x10-8M이 되도록 한다. 각각의 검정에 대해 7가지 농도가 사용된다. 약물의 효능을 기준하여, 보다 높거나 보다 낮은 농도가 사용될 수 있다.
B. 조직 제조
수컷 위스타 래트를 참수시켜 폐사시킨다. 해마(hippocampus)를 제거하고 칭량하여, 20배 용적의 0.05M 트리스 완충액 pH 7.7중에서 균질화시킨다. 균질물을 48,000g에서 10분간 원심분리시키고 상등액을 제거한다. 펠렛을 등용적의 0.05M 트리스 완충액중에 재현탁시키고 37℃에서 10분간 배양하며 48,000g에서 10분간 재원심분리시킨다. 최종 막 펠렛을 4mM CaCl2, 0.1% 아스코르브산 및 10μM 파길린을 함유하는 0.05M 트리스 완충액중에 재현탁시킨다.
C. 검정
800μl 조직
130μl 0.05M 트리스 + CaCl2+ 파길린 + 아스코르브산
20μl 비히클/5HT/약물
50μl[3H]DPAT
튜브를 25℃에서 15분간 배양한다. 와트만 GF/B 필터를 통해 진공 여과하여 검정을 정지시키고, 그후 5ml의 빙-냉 0.05M 트리스 완충액으로 2회 세척한다. 그 후 필터를 10ml의 리퀴신트 신틸레이션 칵테일과 함께 신틸레이션 용기중에 넣고 계수한다.
[계산]
특이적 결합은 전체 결합과 10μM 5HT 존재하의 결합의 차로서 정의한다. IC50값은 각 약물 농도에서 특이적 결합률(%)로부터 계산한다.
[방법 II]
A. 시약
1. 트리스 완충액, pH 7.7
(a) 57.2g의 트리스 HCl
16.2g의 트리스 염기
증류수로 1ℓ가 되게 한다(0.5M 트리스 완충액, pH 7.7).
(b) 증류 H2O로 1:10으로 희석한다(0.05M 트리스 완충액, 25℃에서 pH 7.7)
(c) 10μM 파길린, 4mM CaCl2및 0.1% 아스코르브산을 함유하는 0.05M 트리스 완충액, pH 7.7.
0.49mg 파길린·HCl
110.99mg CaCl2
250 아스코르브산
0.05M 트리스 완충액으로 250ml가 되게 함, pH 7.7(시약 1b).
2. 애머샴으로부터 8-하이드록시[3H]-DPAT(2-N,N-디[2,3(n)-3H]프로필아미노)-8-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌)(160-206 Ci/mmol)을 입수.
IC50측정을 위해 :3H-DPAT를 트리스 완충액(1c)중에서 3.3nM의 농도로 제조하고, 이로써, 각각의 튜브에 150μl를 가하여 때 1ml 검정물중에서 0.5nM의 최종 농도가 수득되도록 한다.
3. 세로토닌 크레아티닌 설페이트를 시그마 케미칼 캄파니로부터 수득한다. 세로토닌 크레아티닌 설페이트를 트리스 완충액 (1C)중에서 100μM의 농도로 만든다. 비특이적 결합을 측정하기 위해 100μl를 각각의 3개 튜브에 가한다(이는 1ml 검정물중에 최종 농도 10μM을 나타낸다).
4. 시험 화합물. 대부분의 검정에서, 적절한 용매중에서 100μM의 스톡 용액을 제조하고 트리스 완충액(1c)으로 연속희석시켜 100μl의 약물이 총 1ml의 검정물과 혼합될때 최종농도가 10-5내지 10-8M 범위가 되도록 한다. 각각의 검정에 대해 특징적인 7가지 농도가 조사된다: 그러나, 약물의 효능에 따라 보다 높거나 보다 낮은 농도가 사용될 수도 있다.
B. 조직 제조
수컷 위스타 래트를 참수시켜 폐사시킨다. 해마(hippocampus)를 제거하고 20배 용적의 빙냉 0.05M 트리스 완충액 pH 7.7 (1b)중에서 균질화시킨다. 균질물을 4℃, 48,000g에서 10분간 원심분리시킨다. 생성된 펠렛을 새로 제조한 트리스 완충액 (1b)중에 재현탁시키고 37℃에서 10분간 배양하며 48,000g에서 10분간 재원심분리시킨다. 최종 막 펠렛을 4mM CaCl2, 0.1% 아스코르브산 및 10μM 파길린을 함유하는 0.05M 트리스 완충액(1c)중에 재현탁시킨다. 비특이적 결합률은 총 결합된 리간드의 약 90%이다.
C. 검정
750μl 조직
150μl [3H]DPAT
100μl 비히클(전체 결합용) 또는 100μM 세로토닌 크레아티닌 설페이트(비특이적 결합용) 또는 적절한 약물농도
튜브를 25℃에서 15분간 배양한다. 와트만 GF/B 필터를 통해 진공 여과하여 검정을 정지시키고 그후 5ml의 빙-냉 0.05M 트리스 완충액 (1b)으로 2회 세척한다. 그후 필터를 10ml의 리퀴신트 신틸레이션 칵테일과 함께 신틸레이션 용기중에 넣고 카운팅한다. 특이적 결합은 10μM 세로토닌 크레아티닌 설페이트의 부재 또는 존재하의 전체 결합간의 차이로 정의한다. IC50값은 각 약물 농도에서 % 특이적 결합으로 부터 계산한다.
[3H]DPAT 결합에 대한 KD값은 수용체 포화 실험의 분석(Scatchard analysis)에 의해 1.3nM인 것으로 밝혀졌다. 그후 Ki 값은 다음의 식(Cheng-Prusoff equation)으로 계산한다:
Ki=IC50/1+L/KD
참고문헌:
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2. Verge, D., Daval, G., Marcinkiewicz, M, Patey, A., El Mestikawy,H. Gozlan and Hamon, M.: Quantitative autoradiography of multiple 5-HT1receptor subtypes in the brain of control or 5,7, dihydroxxtryptamine-treated rats. J. Neurosci. 6:3474-3482(1986).
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10. Schlegel, R. and Peroutka, S.J.: Nucleotide interactions with 5-HT1Abinding sites directly labeled by [3H]-8-hydroxy-2-(di-n-propylamino)tetralin([3H]-8-OH-DPAT). Biochem. Pharmacol. 35:1943-1949(1986).
11. Peroutka, S.J.:Selective interaction of novel anxiolytics with 5-hydroxytryptamine1A-receptors. Biol. Psychiatry. 20:971-979(1985).
[레트 전뇌 시넵토좀에서3H-세로토닌 흡수]
[목적]
이 검정은 세로토닌(5HT)흡수를 차단하는 잠재적인 항우울제에 대한 생화학적 스크린으로서 사용되며, 이는 강박성 장애와 같은 인격장애를 치료하는데 유용할수 있다.
[도입]
에스버그(Asberg)와 공동연구자들은 세로토닌 작동성 기능장애를 갖는 환자들이 우울증 환자의 생화학적 아그룹을 포함한다고 가정한바 있으나(1), 다른 연구자들(2)은 변형된 세로토닌 작동성 기능이 정서질환과 관련된 기분의 변화를 결정한다고 하였다. 물론 우울증 병원학에서 5HT의 역할이 불분명하긴 하지만, 다수의 항우울제가 5TH 재흡수 기작을 차단하는 것은 사실이다. 시험관내 수용체 결합 검정에서는 [3H]-이미프라민이 5HT 흡수 부위를 표지함을 보여주었다(10). 트라조돈과 지멜리딘은 5TH 흡수에 대해 뚜렷한 선택성을 나타내는 임상적으로 유효한 항우울제(3)이다(4,5). 보다 최근에, 플루옥세틴이 선택적으로 잠재적인 5HT 흡수 억제제임이 밝혀졌다.
[3H]-5HT 수송이 CNS 조직에서 특징화된바 있으며(6,7), 포화성이고, 나트륨-및 온도-의존성이며, 우아베인(ouabain), 물질대사 억제제, 트립트아민 동족체(8) 및 트리사이클릭 항우울제(3차아민 ≫ 2차 아민)(9)로 억제된다고 밝혀졌다. 후자의 발견은 5HT 흡수와 카테콜아민 흡수를 분별해준다. [3H]-5H 흡수는 또한 세로토닌 신경 말단에 대한 마커로서도 사용될 수 있다.
[방법]
A. 동물체 : 수컷 CR 위스타 래트(100-125g)
B. 시약
1. 크랩스-헨젤라이트(Krebs-Henseleit) 중탄산나트륨 완충액, pH 7.4(KHBB):
다음의 염을 함유하는 1ℓ 뱃치를 제조한다.
g/L mM
NaCl 6.92 118.4
KCl 0.35 4.7
MgSO4·7H2O 0.29 1.2
KH2PO40.16 2.2
NaHCO32.10 24.9
CaCl20.14 1.3
사용전에 다음을 가한다:
덱스트로스 2mg/ml 11.1
이프로니아지드 포스페이트 0.30mg/ml 0.1
95% O2/5% CO2를 사용하여 60분간 통기시키고 pH를 측정한다(7.4±0.1).
2. 0.32m 자당 : 21.9g 자당, 200ml이 되게 함.
3. 시그마 케미칼 캄파니로부터 세로토닌 크레아티닌 SO4를 입수한다. 0.01N HCl 중에서 0.1mM 스톡용액을 제조한다. 이를 방사능 표지된 5HT의 비활성을 희석시키는데 사용한다.
4. 뉴 잉글랜드 뉴클리어(New England Nuclear)로부터 5-[1,2-3H(N)]하이드록시트립타민 크레아티닌 설페이트(세로토닌), 비활성 20-30 Ci/mmol을 입수한다.
검정물중 목적하는3H-5HT의 최종 농도는 50nM이다. 희석계수는 0.8이다. 따라서, KHBB는 62.5mM[3H]-5HT를 함유하도록 제조된다.
100ml KHBB에,
A) 56.1μl의 0.1mM 5HT = 56.1mM
*B) 0.64nmole의3H-5HT = 6.4nM
62.5nM을 가한다.
*계산된 용적을3H-5HT의 비활성으로부터 합한다.
5. 대부분의 검정에서, 1mM 용액의 시험 화합물을 적절한 용매중에서 제조하고 연속희석시켜 검정물중의 최종 농도가 2x10-8내지 2x10-5M이 되도록 한다. 각 검정에 대해 7가지 농도를 사용한다. 화합물의 효능에 따라서 보다 높거나 보다 낮은 농도가 사용될 수도 있다.
C. 조직 제조
수컷 위스타 래트를 참수시키고 뇌를 신속히 적출해낸다. 전뇌에서 소뇌를 제외한 무게를 재고 9배 용적의 빙냉시킨 0.32M 자당 중에서 포터-앨베헴(Potter-Elvejhem) 균질화기를 사용하여 균질화시킨다. 시냅토좀 용해를 최소화하기 위해 균질화 작업을 반드시 중간 스피드에서 4-5회 업 및 다운 스트로크로 실시한다. 균질화물을 0-4℃에서 10분간 1000g로 원심분리시킨다. 상등액(S1)을 제거하고 흡수실험에 사용한다.
D. 검정
800μl KHBB+[3H]-5HT
20μl 비히클 또는 적절한 약물 농도
200μl 조직 현탁액
튜브를 37℃에서 95% O2/5% CO2대기하에 5분간 배양한다. 각 검정에서, 3개의 튜브를 0℃의 빙욕조에서 20μl의 비히클과 배양한다. 배양후, 모든 튜브를 즉시 4000g에서 10분간 원심분리한다. 상등액을 흡입 여과, 제거하고 펠렛을 1ml의 가용화제(트리톤 X-100 + 50% EtOH, 1:4 v/v)를 가하여 용해시킨다. 튜브를 격렬하게 와등시키고 경사시켜 신틸레이션 바이알로 따라내고 10ml의 리퀴신트 신틸레이션 카운팅 칵테일중에서 계수한다. 능동 흡수는 37℃ 및 0℃에서 cpm간의 차이이다. 각 약물 농도에서 % 억제는 3가지 측정치의 평균값이다. IC50값은 로그-프로빗(log-probit) 분석으로부터 수득된다.
참고문헌
1. Asberg, M., Thoren, P., Traskman, L., Bertilsson, L., and Ringberger, V. "Serotonin deperssion:-A biochemical subgoup within the affective disorders. Science 191: 478-480(1975).
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10. Langer, S.Z., Moret, C., Raisman, R., Dubocovich, M.L. and Briley M. High affinity [3H]imipramine binding in rat hypothalamus : Association with uptake of serotonin but not norepinephrine, Science 210 : 1133-1135(1980).
상기 기술한 두가지 검정 방법에 대한 결과는, 본 발명의 대표적 화합물에 대해 표1에 나타내었다.
[3H]글라이신 결합
[목적]
이 검정은 방사성리간드로서 [3H] 글라이신을 사용하여 N-메틸-D-아스파르테이트(NMDA) 수용체 복합체와 관련된 글라이신 결합 부위에 대한 화합물의 친화도를 평가하는데 사용된다.
[도입]
아미노산 글라이신은 NMDA 서브타입의 자극성 아미노산 수용체의 활성화를 조절하거나 활성화에 요구되는 것일 수 있다(1). 시험관내에서 글라이신은, [3H]TCP 결합자극(2,3,4) 및 [3H]노르에피네프린 방출(5)에 대해 1-글루타메이트 또는 NMDA의 영향을 가능케하거나 생체내에서는 소뇌에서 글루타메이트-활성화된 cGMP 반응의 양적 조절자로서 작용하는 것으로 밝혀졌다(6,7). 글라이신의 존재를 필요로 하는 NMDA 수용체의 활성화는 학습과정에 기본이될 수 있는 시냅스의 적응성의 한 유형인 장기상승작용(LTP; long-term potentiation)으로 시작되어야 한다(8). 뇌에서 [3H]글라이신 결합부위가 확인된 바 있으며 NMDA 수용체 복합체와 관련된 스트리크닌-불감성 부위로서 특징지워진다(10,11,12). 자기방사선사진 연구는 [3H]글라이신 및 [3H]TCP(NMDA 이온 체널 방사선 리간드) 결합 부위의 유사한 분포를 나타낸다(13,14). 글라이신 부위와 상호작용하는 화합물은 NMDA 수용체 작용을 방해하는 신규한 억제작용의 기작을 제공한다.
[방법]
A. 시약
1. 완충액 A: 0.5M 트리스 말레에이트, pH 7.4
59.3g 트리스 말레에이트를 증류수로 0.5ℓ가 되게 하고 0.5M 트리스 염기를 사용하여 pH 7.4로 조정한다.
2. 완충액 B: 0.5mM 트리스 말레에이트, pH 7.4
완충액 A를 증류수로 1:10으로 희석하고 50mM 트리스 말레에이트(산) 또는 50mM 트리 염기를 사용하여 pH를 조정한다.
3. 글라이신, 5x10-2M
3.755mg의 글라이신(시그마 G7126)을 증류수로 용해시킨다. 검정물에 대한 20μl의 분취량은 10-3M의 최종 농도를 제공하게 된다.
4. 45~50 Cl/mmole의 비활성을 갖는 [3H]글라이신을 뉴 잉글랜드 뉴클리어로부터 입수한다. IC50측정을 위해, 증류수를 사용하여 200nM의 스톡 용액을 제조한다. 최종 검정농도 10nM을 수득하기 위해 50μl의 분취량을 가한다.
5. 시험 화함물. 적절한 용매를 써서 5mM의 스톡용액을 제조하고 연속적으로 희석시켜, 검정물중 최종농도가 10-4내지 10-7M이 되도록 한다. 화합물의 효능에 따라서 보다 높거나 낮은 농도가 사용될 수도 있다.
6. 트리톤-x100, 10%(v/v)(National Diagnostics, EC-606), 10% 트리톤-x100의 스톡 용액을 제조할 수 있으며 냉장고내에 저장한다. 1.0ml의 트리톤-X 100을 증류수를 사용하여 10.0ml로 희석한다. 검정당일에, 조직 균질화물(1:15 희석)을 10% 용액의 분취량과 전배양하여 최종 농도 0.04%(v/v)를 수득한다.
B. 조직 제조
수컷 위스타 래트의 피질을 얼음상에서 절개해내고, 70에 세팅시킨 티슈마이져(Tissumizer)에서 30초간 빙냉시킨 0.32M 자당(1:15W/V)중에서 균질화시킨다. 균질화물을 1000g에서 10분간 원심분리시킨다(SS34, 3,000rpm, 4℃). 상등액을 20,000g에서 (SS34, 12,000rpm, 4℃) 20분간 원심분리시킨다. 펠렛을 15배 용적의 빙냉 증류수중에 재현탁시키고(티슈마이져는 70에 세팅, 15초간) 7,600g에서 (SS34, 8,000rpm, 4℃) 20분간 회전시킨다. 상등액을 저장한다. 상부의 거품성 펠렛층을 저어내고 상등액에 가한다. 상등액을 48,000g에서 (SS34, 20,000rpm, 4℃) 20분간 원심분리시킨다. 펠렛을 15배 용적의 냉증류수로 재현탁시키고 원심분리시킨다. 상등액을 제거하고 펠렛을 -70℃에 저장한다.
검정 당일에 펠렛을 15배 용적의 빙냉시킨 50mM의 트리스 말레에이트, pH 7.4중에 재현탁시킨다. 균질화물을 37℃에서 교반과 함께 30분간 최종농도 0.04%(v/v)로 트리톤-X와 예비배양한다. 현탁액을 48,000g(SS34, 20,000rpm, 4℃)로 20분간 원심분리한다. 펠렛을 냉완충액으로 재현탁시켜 추가로 3회 세척하고 원심분리시킨다. 최종 펠렛을 최초 습윤 중량의 25배 용적중에 재현탁시킨다.
C. 검정
1. 3개의 분석 튜브 제조.
380μl의 증류수
50μl의 완충액 A, 0.5M 트리스 말레에이트, pH 7.4
20μl 글라이신, 10-3M 최종농도, 또는 증류수 또는 적절한 농도의 억제제
50μl [3H]글라이신, 최종농도 10nM
500μl 조직 균질화물
1000μl의 최종 용적
2. 조직 첨가에 따라, 튜브를 빙욕중 0~4℃에서 20분간 배양한다. 결합은 20분간 원심분리(HS4, 7,000rpm, 4℃)하여 종료시킨다. 튜브를 다시 얼음중에 둔다. 상등액을 흡입시켜 여과 제거한다. 펠렛을 1ml의 빙냉 완충액으로 주의깊게 2회 세정하여 펠렛 파손을 방지하며 펠렛을 2ml의 신틸레이션액으로 와동시켜 신틸레이션 바이알로 옮기며 튜브를 2ml로 2회 세정하고 추가로 4ml의 신틸레이션액을 가한다.
3. 특이적 결합은 10-3M 글라이신의 부재 또는 존재하의 결합 차이로부터 측정하며, 전형적으로는 전체 결합의 60~70%이다. 경쟁 화합물에 대한 IC50값을 데이터의 로그-프로빗 분석으로 계산한다.
참고문헌:
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3. Snell, L.D., Morter, R.S. and Johnson, K.M. Structural requirements for activation of the glycine receptor that modulates the N-methyl-D-aspartate operated ion channel. Eur. J. Pharmacol. 156: 105-110, 1988.
4. Bonhaus,D.W., Yeh, G-C., Skaryak, L. and McNamara, J.O. Glycine regulation of the N-methyl-D-aspartate receptor-gated ion channel in hippocampal membranes. Mol. Pharmacol. 36: 273-279, 1989.
5. Ransom, R.Q. and Deschenes, N.L. NMDA-induced hippocampal [3H]norepinephrine release is modulated by glycine. Eur. J. Pharmacol. 156: 149-155, 1988.
6. Danysz, W., Wroblewski, J.T., Brooker, G and Costa, E. Modulation of glutamate receptors by phencyclidine and glycine in the rat cerebellum: cGMP increase in vivo. Brain Res. 479: 270-276, 1989.
7. Rao,T.S., Cler, J.A., Emmett, M.R. Mick, S.J., Iyengar, S. and Wood, P.L. Glycine, glycinamide and D-serine act as positive modulators of signal transduction at the N-methyl-D-aspartate(NMDA) receptor in vivo: differential effects on mouse cerebellar cyclic guanosine monophosphate levels. Neuropharmacol. 29: 1075-1080, 1990.
8. Oliver, M.W., Kessler, M., Larson, J., Schottler, F. and Lynch, G. Glycine site associated with the NMDA receptor modulates long-term potentiation. Synapse 5: 265-270, 1990.
9. Kishimoto, J., Simon, J.R. and Aprison, M.H. Determination of the equilibrium dissociation constants and number of glycine blinding sites in several areas of the rat central nervous system, using a sodium-independent system. J. Neurochem. 37: 1015-1024, 1981.
10. Kessler, M., Terramani, T., Lynch, B. and Baudry, M. A glycine site associated with N-methyl-D-aspartic acid receptors: characterization and identification of a new class of antagonists. J. Neurochem, 52: 1319-1328, 1989.
11. Monahan, J.B., Corpus, V.M., Hood, W.F., Thomas, J.W. and Compton, R.P. Characterization of a [3H] glycine recognition site as a modulatory site of the N-methyl-D-aspartate receptor complex. J. Neurochem. 53: 370-375, 1989.
12. Cotman, C.W., Monaghan, D.T., Ottersen, O.P. and Storm-Mathsen, J. Anatomical organization of excitatory amino acid receptors and their pathways. Trends in Neuroscience 10: 273-280, 1987.
13. Jansen, K.L.R., Dragunow, M. and Faull, R.L.M. [3H] Glycine binding sites, NMDA and PCP receptors have similar distributions in the human hippocampus: an autoradiographic study. Brain Res. 482: 174-178, 1989.
[3H]TCP 결합의 증강
글루타메이트는 중추신경계에서 주요 흥분성 신경전달 물질인 것으로 간주되고 있다. 또한, 글루타메이트는 허혈성 스트레스(예: 심장발작)로 인한 신경손상 및 소실과 같은 다수의 병리학적 상태 및 헌팅톤 질환, 근위축성 측부 경화증, 뉴로래티리즘(neurolathyrism: 이집트콩의 유독성 알칼로이드에 의한 중독증), 알쯔하이머 질환 및 기타를 포함하는 신경퇴행성 질환에 관련된 것으로 가정된 바 있다(1,2). 중추 도파민작동성-글루타메이트 작동성 균형은 또한 무동증 운동성 질환(예, 파킨스씨병) 및 정신질환(예: 정신분열증환자) 모두에 중요한 것으로 여겨졌다(3).
글루타메이트의 후시냅스성 작용은 다수의 글루타메이트 수용체 서브타입으로 매개되며, 이는 N-메틸-D-아스팔테이트(NMDA) 및 비-NMDA(퀴스쿠알레이트, 카이네이트) 수용체 서브 타입으로서 분류된다. 글루타메이트 수용체 서브타입중, NMDA 수용체가 광범위하게 조사되어 왔다. 이 수용체는 효능제 결합 부위(NMDA 부위) 및 마그네슘과 기타 PCP, TCP 및 덱스트로메토판을 포함하는 다른 리간드와 결합하는 양이온 채널로 구성되어 있다. 아연, 폴리아민 및 글라이신에 대한 결합부위를 포함하는 NMDA 수용체와 관련된 다수의 조절성 부위가 동정된 바 있다(2). 글라이신 부위는 알쯔하이머 질환을 포함하는 여러 종류의 인식손상 치료에 대한 치료적 표적을 제공할 수 있다(4).
글라이신 조절성 부위(글라이신 B 부위)는 스트리크닌에 대해 불감성인 반면, 척수 뉴런과 관련된 스트리크닌에 민감성인 글라이신 결합 부위는 글라이신 A 부위로 나타내왔다. 래트 피질막의 격렬하게 세척시킨 제형에서, NMDA는 농도 의존적 방식으로 [3H]TCP의 특이적 결합을 증가시키며 (EC50=3.1μM), 글라이신(1μM)의 첨가는 1.7의 인자로 NMDA의 최대 효과를 가능케 한다(5). 이 제형은 NMDA 관련된 스트리크닌-불감성 글라이신 조절성 부위에서 화합물의 효과를 평가하기 위해 사용될 수 있다. 이 화합물은 이부위에서 글라이신-유사 효능제(글라이신의 최대 효과와 동등한 효과를 생성하는 화합물) 또는 글라이신 부분 효능제(글라이신의 최대 효과보다 낮은 효과를 생성하는 화합물)로서 특징화할 수 있다. 시원형 글라이신 부분 효능제는 D-사이클로세린이다(4).
방법(5):
폐사직후 수컷 스프라그 다울리(Sprague Dowley) 래트로부터 또는 -60℃에서 1개월 이상 냉동시키지 않는 냉동물로부터 수득한 피질조직으로부터 조시냅토좀성 균질화물을 제조한다. 조직을 빙-냉 0.32M 자당중에서 폴리트론(브링크만, 7에 60초간 세팅)으로 균질화시키고 1000g에서 20분간 원심분리시킨다. 생성된 상등액을 따라내고 17,500g에서 재원심분리시킨다. 그후 생성된 펠렛을 50배 용적의 빙냉시켜 증류수중에 재현탁시키고 37℃에서 30분간 용해시키며 이어서 36,000g에서 20분간 원심 분리시킨다. 생성된 펠렛을 2차 용해로 전달하고 50배 용적의 10mM HEPES:Na HEPES 완충액(pH 7.5, 4℃)중에서 재현탁시켜 세척한다. 균질화물을 다시 원심분리(36,000g, 20분)시키고, 30배 용적의 HEPES 완충액중에 재현탁시키고 실험 수행전까지 -60℃에서 냉동시켜둔다. 실험 당일에 결합을 수행하여, 균질화물을 해빙시키고 30배 용적의 사용전 완충액으로 3회 세척한다. 신선한 조직이나 냉동조직으로부터의 균질화물에서 결합상 차이는 없었다.
모든 결합 연구는 균질화물을(검정 튜브당 약 0.2mg 단백질) 2.5nM[3H]TCP(40Ci/mmol, New England Nuclear, Boston, MA)를 사용하여 25℃에서 120분동안 최종용적 1ml의 10mM HEPES 완충액(pH 7.5)에서 배양한다. 100μM PCP 존재하에 비-특이적 결합을 측정한다. 검정 튜브는 다음과 같이 3개를 준비한다:
360μl 증류수
50μl 0.1M HEPES 완충액, pH 7.5
20μl L-글루탐산, 5x10-6M(최종농도 = 10-7M)
20μl 글라이신, 최종 농도 10-8내지 10-3M 또는 화합물, 최종농도 10-8내지 10-3M 또는 증류수 또는 PCP, 최종농도 100μM
50μl [3H]TCP
500μl 조직 균질화물
1000μl 최종용적
결합 반응은, 필터에 결합을 감소시키고자 0.05% 폴리에틸렌이민(시그마 제조)중에 20~30분간 전함침시킨, GV/C 유리 섬유 필터상에서 진공여과하여 종료시킨다. 4ml의 빙냉 완충액으로 2회 세척한후 여과하고 보유되는 방사능활성은 액체 신틸레이션 분광계로 측정한다. 단백질의 농도는 Bradford의 방법(6)으로 측정한다.
초기 실험은 측정된 [3H]TCP 결합의 양이 각각의 막제형에 따라 어느 정도 다양함을 보이고 있다. 따라서, 각각의 실험에서, 어떤 추가의 약물 부재하에 [3H]TCP의 특이적 결합을 측정하고, 이를 기본값으로 사용하다. 이 값을 추가된 약제 존재하에 관찰된 특이적 결합으로부터 감한다. 따라서, 모든 데이타는 기본적 수준 이상 또는 이하의 실제 결합양으로써 표시된다. 음성값은 이 값에 대해 [3H]TCP 결합의 억제를 나타낸다.
참고 문헌:
1. J.W. Olney, Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol., 30, 47-71 (1990).
2. B.A. Lawlor and K.L. Davis, Biol. Psychiatry, 31, 337-350 (1992).
3. P. Riederer et al., Arzneim. Forsch., 42, 265-268 (1992).
4. P. T. Francis et al., Annals New York Academy of Sciences, J.H. Growdon et al., (edits.), 640, 184-188 (1991).
5. L.D. Snell et al., Neuroscience Letters, 83, 313-317(1987).
6. M. Bradford, Anal. Biochcm., 72, 248-254 (1976).
래트에게 복강내 투여함으로써 수득한, 화합물 3-(프로필-4-피리디닐아미노)티에노[2,3-b]피리딘 하이드로클로라이드(실시예 4의 표제 화합물)의 LD50측정치는 〈30mg/kg이다.
본 발명 화합물의 유효량은 여러가지 어떠한 방법, 예를 들어, 캡슐 또는 정제로서 경구로, 무균용액 또는 현탁액으로서 비경구적으로 및 일부의 경우 무균용액으로서 혈관내로 투여할 수 있다. 물론 그 자체가 유효하지만, 유리 염기 최종 생성물은 안정성, 결정화의 편리성 및 증가된 용해도 및 기타의 목적을 위해 이들의 약제학적으로 허용되는 산부가염 형태로 제형화되고 투여될 수도 있다.
본 발명의 약제학적으로 허용되는 산부가염 제조에 유용한 산에는 무기산(염산, 브롬산, 황산, 질산, 인산, 과염소산) 및 유기산(타르타르산, 시트르산, 아세트산, 숙신산, 말레산, 푸마르산 및 옥살산)이 포함된다.
본 발명의 활성 화합물은 불활성 희석제 또는 식용 담체와 함께 경구투여될 수 있거나, 이들이 젤라틴 캡슐내에 포함될 수 있거나 정제로 타정될 수도 있다. 경구 치료적 투여를 위해, 본 발명의 활성 화합물은 부형제와 함께 혼입될 수 있으며 정제, 트로키, 캡슐, 엘릭서, 현탁제, 시럽, 웨이퍼, 씹는껌 및 기타의 형태로 사용될 수 있다. 이들 제형은 반드시 적어도 0.5%의 활성 화합물을 함유해야만 하나, 특정한 형태에 따라 다양할 수 있으며 편의상 단위중량의 4% 내지 약 70% 사이일 수 있다. 이러한 조성물중 활성 화합물의 양은 적절한 투여량이 수득될 수 있는 양이 되게한다. 본 발명에 따른 바람직한 조성물 및 제형은 경구투여 형태가 1.0~300mg의 활성 화합물을 함유하도록 제조한다.
정제, 알약, 캡슐, 트로키 및 기타는 또한 다음의 성분을 포함할 수 있으며; 결합제(예: 미세결정성 셀룰로즈, 검트라가칸트 또는 젤라틴); 부형제(예: 전분 또는 락토스); 붕해제(예: 알긴산, 프리모겔, 옥수수전분 및 기타); 윤활제(예: 마그네슘 스테아레이트 또는 스테로텍스); 활탁제(예: 콜로이드성 이산화규소); 및 감미제(예: 자당 또는 사카린), 풍미제(예: 페파민트, 메틸 살리실레이트 또는 오렌지향)가 가해질 수도 있다. 투여단위 형태가 캡슐일때, 상기 타입의 물질외에 이는 지방오일과 같은 액체 담체를 함유할 수 있다. 다른 투여 단위 형태는, 투여단위의 물리적 형태를 변화시키는 다른 여러가지 물질, 예를 들어, 피복물을 함유할 수 있다. 따라서, 정제 또는 알약은 당, 셸락 또는 기타 장용 피복제로 피복시킬 수 있다. 시럽은, 활성 화합물외에, 감미제로서 자당 및 특정의 보존제, 염료, 착색제 및 풍미제를 함유할 수 있다. 이들 다양한 조성물을 제조하는데 사용된 물질은 반드시 약제학적으로 순수해야만 하며 사용된 양이 무독성이어야 한다.
비경구적 투여목적을 위해 본 발명의 화합물은 용액 또는 현탁액중에 혼입시킬 수 있다. 이들 제형은 반드시 적어도 0.1%의 활성 화합물을 함유해야만 하나 이들의 중량에 대해 0.5 내지 약 30% 사이에서 다양할 수 있다. 이런 조성물중의 활성 화합물의 양은 적절한 투여량이 수득되도록 한다. 본 발명에 따른 바람직한 조성물 및 제형은 비경구 투여 단위가 0.5 내지 100mg의 활성 화합물을 함유하도록 제조한다.
액제 또는 현탁제는 다음의 성분을 포함할 수도 있다: 주사용 물과 같은 무균 희석제, 염수 용액, 고정 오일, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 폴리프로필렌 글리콜 또는 기타 합성 용매; 벤질 알콜 또는 메틸 파라벤과 같은 항균제; 아스코르브산 또는 이황화나트륨과 같은 항산화제; 에틸렌디아민테트라 아세트산과 같은 킬레이트화제; 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트와 같은 완충액 및 등장 조절제(예: 염화나트륨 또는 덱스트로스). 이 비경구용 제형은 유리 또는 플라스틱으로 제조된 1회용 주사기 또는 복수 투여 용기중에 봉입할 수 있다.
다음의 실시예는 본 발명을 더 설명할것이나 어떤 방법으로든 제한하려는 의도는 아니다. 하기 표 3에 본 발명에서 제조된 화합물의 특정의 예를 기술하고 있다.
[실시예 1]
3-(4-피리디닐아미노)티에노[2,3-b]피리딘
75ml의 1-메틸-2-피롤리디논중의 3-아미노티에노[3,2-b]피리딘1.2(9g) 및 4-클로로피리딘 하이드로클로라이드(9g) 용액을 90℃에서 1시간 교반한다. 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 물과 교반하고 에테르로 세척하여 분리시킨다. 수성층을 30% 수성 수산화암모늄으로 염기화시키고 에틸 아세테이트로 추출한다. 유기 추출물을 물과 포화 염화나트륨으로 세척한 후 건조(무수 황산마그네슘)시키고 여과 및 증발시킨다. 잔사를 섬광 칼럼 크로마토그래피를 통해 에틸 아세테이트중에서 10% 메탄올을 사용하여 실리카겔을 통해 용출시켜 융점 200~204℃인 6g의 고체를 수득한다. 아세토니트릴로부터 2.5g을 재결정하여 융점 206~207℃인 2g의 고형물을 수득한다.
1L.H. Klemm, et al., J. Heterocyclic Chem., 14, 299 (1977).
2A.D. Dunn and R. Norrie, J. Heterocyclic Chem., 24, 85 (1987).
C12H9N3S에 대한 원소분석
계산치 : 63.41% C 3.99% H 18.49% N
실측치 : 63.09% C 3.86% H 18.75% N
[실시예 2]
3-(메틸-4-피리디닐아미노)티에노[2,3-b]피리딘
25ml의 디메틸포름아미드중의 3-(4-피리딜아미노)티에노[2,3-b]피리딘(4g)용액을 5ml의 디메틸포름아미드중의 나트륨 하이드라이드의 빙-냉시킨 현탁액(60%의 오일 분산액, 0.85g, 헵탄으로 세척)에 가한다. 음이온 형성 종료후, 5ml의 디메틸 포름아미드중의 디메틸 설페이트(2.4g) 용액을 가한다. 1시간 후 반응 혼합물을 빙수중에 붓고 에틸 아세테이트로 추출한다. 유기 추출물을 물과 포화 염화 나트륨으로 세척한 후 건조(무수 황산마그네슘)시키고 여과하여 증발시켜 4g의 고체를 수득한다. 섬광 컬럼 크로마토그래피를 통해 에틸 아세테이트중에서 10% 메탄올로 용출시켜 융점 143~145℃인 3g의 고형물을 수득한다. 아세토니트릴로부터 재결정하여 융점 150~152℃인 2.1g의 결정을 수득한다.
C13H11N3S에 대한 원소분석
계산치 : 64.71% C 4.59% H 17.42% N
실측치 : 64.47% C 4.55% H 17.39% N
[실시예 3]
3-(에틸-4-피리디닐아미노)티에노[2,3-b]피리딘
25ml의 디메틸포름아미드중의 3-(4-피리딜아미노)티에노[2,3-b]피리딘(4g)용액을 5ml의 디메틸포름아미드중의 나트륨 하이드라이드의 빙-냉시킨 현탁액(60%의 오일 분산액, 0.85g, 헵탄으로 세척)에 가한다. 음이온 형성 종료후, 5ml의 디메틸 포름아미드중의 디에틸 설페이트(3g) 용액을 가한다. 1시간 후 반응 혼합물을 빙수중에 붓고 에틸 아세테이트로 추출한다. 유기 추출물을 물과 포화 염화나트륨으로 세척한 후 건조(무수 황산마그네슘)시키고 여과하며 증발시켜 5g의 오일을 수득한다. 섬광 컬럼 크로마토그래피를 통해 에틸 아세테이트중에서 10% 메탄올로 용출시켜 2.1g의 고형물을 수득한다. 아세토니트릴로 부터 재결정하여 융점 123~125℃인 1.4g의 결정을 수득한다.
C14H13N3S에 대한 원소분석
계산치 : 65.85% C 5.13% H 16.46% N
실측치 : 65.56% C 5.14% H 16.57% N
[실시예 4]
3-(프로필-4-피리디닐아미노)티에노[2,3-b]피리딘 하이드로클로라이드
3-(4-피리디닐아미노)티에노[2,3-b]피리딘(3g)을 고체로서, 25ml 디메틸포름아미드중의 빙냉시킨 나트륨 하이드라이드 현탁액(60% 오일 현탁액, 0.8g, 헵탄으로 세척)에 소분량씩 가한다. 음이온 형성 종료후, 1-브로모프로판(1.9g)을 가한다. 주변 온도에서 1시간 동안 가온 및 교반시킨 후, 반응 혼합물을 빙수중에 붓고 에테르로 추출한다. 유기 추출물을 물과 포화 염화나트륨으로 세척한 후 건조(무수 황산마그네슘)시키고 여과 및 증발시켜 4g의 오일을 수득한다. 에틸 아세테이트로 실리카 겔을 통해 구배 용출시키고 에틸 아세테이트중에서 10% 메탄올로 섬광 컬럼 크로마토그래피를 통해 용출시켜 융점 136 내지 137℃의 고체 3.1g을 수득한다. 에테르 중의 50% 메탄올 중에서 하이드로클로라이드 염으로 전환시켜 3g의 흡습성 고형물을 수득한다. 에테르중의 5% 메탄올로부터 재결정하여 융점 256~258℃인 2.3g의 산제를 수득한다.
C15H16ClN3S에 대한 원소분석
계산치 : 58.91% C 5.27% H 13.74% N
실측치 : 58.69% C 5.26% H 13.61% N
[실시예 5]
3-(부틸-4-피리디닐아미노)티에노[2,3-b]피리딘 하이드로클로라이드
25ml의 디메틸포름아미드중의 3-(4-피리디닐아미노)티에노[2,3-b]피리딘(4g)용액을 5ml의 디메틸포름아미드중의 나트륨 하이드라이드의 빙-냉시킨 현탁액(60%의 오일 분산액, 0.8g, 헵탄으로 세척)에 가한다. 음이온 형성 종료후, 5ml의 디메틸 포름아미드중의 1-브로모부탄(2.7g) 용액을 가한다. 1시간 후 반응 혼합물을 빙수중에 붓고 에틸 아세테이트로 추출한다. 유기 추출물을 물과 포화 염화나트륨으로 세척한 후 건조(무수 황산마그네슘)시키고 여과하며 증발시킨다. 섬광 컬럼크로마토 그래피를 통해 에틸 아세테이트중에서 10% 메탄올로 용출시켜 4.2g의 오일을 수득한다. 에테르중의 10% 메탄올중에서 하이드로 클로라이드염으로 전환시켜 융점 248~250℃인 3.8g의 분말을 수득한다.
C16H18ClN3S에 대한 원소분석
계산치 : 60.08% C 5.67% H 13.14% N
실측치 : 60.02% C 5.49% H 13.00% N
[실시예 6]
3급-부틸[2-(티에노[2,3-b]피리딘-3-일아미노)-2-옥소에틸]카바메이트
1,3-디사이클로헥실카보디이미드(11g)를 교반과 함께 200ml의 디클로로메탄중의 3-아미노티에노[2,3-b]피리딘(8g) 및 N-(3급-부톡시카보닐)글라이신(10g) 용액에 가한다. 1시간 후, 반응 혼합물을 여과하여 분리된 1,3-디사이클로헥실우레아를 제거하고 오일까지 증발시킨다. 에틸 에테르로부터 결정화하여 융점 190~192℃인 14g의 고형물을 수득한다. 아세토니트릴로 부터 3g을 재결정화시켜 융점 192~194℃인 2.4g의 결정을 수득한다. 아세토니트릴로부터 최종 재결정화하여 융점 194~196℃인 2.0g의 결정을 수득한다.
C14H17N3O3S에 대한 원소분석
계산치 : 54.71% C 5.57% H 13.67% N
실측치 : 55.14% C 5.84% H 13.55% N
[실시예 7]
2-아미노-N-(티에노[2,3-b]피리딘-3-일)아세트아미드
800ml의 메탄올과 25ml의 포화 에테르성 염화수소중의 3급-부틸[2-(티에노[2,3-b]피리딘-3-일아미노)-2-옥소에틸]카바메이트(11g) 용액을 주변온도에서 20시간 정치시키고, 그후 증발시킨다. 잔사를 물중에 용해시키고 30% 수성 수산화 암모늄으로 염기성화시키며 에틸 아세테이트로 추출한다. 물과 포화 염화나트륨으로 유기 추출물을 세척한 후, 건조(무수 황산 마그네슘)시키고 여과 및 증발시킨다. 잔사를 에틸 아세테이트를 사용하여 실리카를 통해 구배 용출시킨 후 섬광 컬럼 크로마토 그래피를 통해 20% 메탄올로 용출시켜 3g의 미반응 카바메이트를 수득하고, 이후에 3g의 생성물을 수득한다. 에테르로 분해시켜 융점 138~139℃인 2.5g의 고형물을 수득한다. 에테르중에서 10% 아세토니트릴로부터 재결정화하여, 융점 128~129℃인 1.5g의 밝은 황갈색 고형물을 수득한다.
C9H9N3O3S에 대한 원소분석
계산치 : 52.15% C 4.38% H 20.28% N
실측치 : 51.94% C 4.32% H 20.19% N
[실시예 8]
3-(4-피리디닐아미노)티에노[2,3-c]피리딘
200ml의 1-메틸-2-피롤리디논중의 3-아미노티에노[2,3-c]피리딘(10g) 및 4-클로로피리딘 하이드로클로라이드(10g) 용액을 80℃에서 4시간 교반한 후, 냉각시키고 빙수와 함께 교반시키고 중탄산나트륨으로 염기화시키며 에틸 아세테이트로 추출한다. 유기 추출물을 물과 포화 염화나트륨으로 세척하고 건조(무수 황산마그네슘)시키며 여과하고 증발시킨다. 디클로로메탄에 이어 디클로로메탄중의 10% 메탄올로 실리카를 통해 구배 용출시켜, 융점 236~238℃인 황갈색 고형물 4g(26%)을 수득한다.
[실시예 11]
3-(프로필-4-피리디닐아미노)티에노[2,3-c]피리딘
분말로서 3-(4-피리디닐아미노)티에노[2,3-c]피리딘(4g)을 50ml의 디메틸포름아미드중의 나트륨 하이드라이드 현탁액(60% 오일 분산액, 0.8g, 헵탄으로 세척)에 소분량씩 가한다. 음이온 형성이 종료된 후 1-브로모프로판(2.2g)을 가한다. 1시간 동안 교반시킨 후, 반응 혼합물을 빙수중에 넣고 에틸 아세테이트로 추출한다. 유기 추출물을 물과 포화 염화나트륨으로 세척하고 건조(무수 황산마그네슘)시키며, 여과 및 증발시켜 5g의 흑색 오일을 수득한다. 섬광 컬럼 크로마토그래피를 통해 에틸 아세테이트중의 5% 메탄올로 실리카를 통해 용출시켜 3.5g의 황색 고형물을 수득한다. 컬럼 크로마토그래피를 통해 에테르로 알루미나를 통해 용출시켜 2.8g의 황색 고형물을 수득한다. 헵탄으로부터 재결정하여 융점 119~120℃인 2.6g(54.8%)의 황색 결정을 수득한다.
C15H15N3S에 대한 원소분석
계산치 : 66.88% C 5.61% H 15.60% N
실측치 : 66.78% C 5.56% H 15.52% N
본 명세서와 실시예들은 제한이 아닌 설명의 목적으로 든 것이며 첨부된 청구범위로 한정하는 바와 같은 본 발명의 정신 및 범주로부터 출발함이 없이 다양한 개질과 변경이 가해질 수 있음을 이해해야만 한다.

Claims (11)

  1. 일반식(Ⅰ)의 화합물 또는 약제학적으로 허용되는 이의 부가염.
    상기식에서,
    R1은 수소, (C1-C6)알킬, (C3-C6)알케닐, (C3-C6)알키닐, 아릴(C1-C6)알킬, (C1-C6)알킬카보닐, 포르밀, (C1-C6)알콕시카보닐, 아릴(C1-C6)알콕시카보닐, 아릴(C1-C6)알콕시카보닐아미노(C1-C18)알킬카보닐, (C1-C6)알콕시카보닐아미노(C1-C18)알킬카보닐, (C1-C6)알킬아미노(C1-C6)알킬카보닐, 아미노(C1-C18)알킬카보닐, (C1-C6)디알킬카보닐(C1-C6)알킬아미노, 아미노(C1-C6)알킬, (C1-C6)알킬아미노(C1-C6)알킬 또는 (C1-C6)디알킬아미노(C1-C6)알킬이고,
    R2는 수소, (C1-C6)알킬 또는이고, 단 R1및 R2가 동시에 수소가 아니며,
    R3은 수소, (C1-C6)알킬 또는 (C1-C6)알콕시카보닐이고,
    X는 수소, (C1-C6)알킬, 할로, (C1-C6)알콕시 또는 니트로이고,
    n은 0, 1, 2 또는 3이며,
    m은 0, 1, 2 또는 3이고, 단 m과 n의 합은 항상 3이고,
    p는 0 또는 1이다.
  2. 제1항에 있어서, R1, R2및 R3이 제1항에서 정의한 바와 같고, n이 0이며 m이 3인 일반식(Ⅰ)의 화합물.
  3. 제2항에 있어서, 일반식(Ⅲ)의 화합물.
    상기식에서,
    R1은 수소, (C1-C6)알킬, (C3-C6)알케닐, (C3-C6)알키닐, 아릴(C1-C6)알킬, (C1-C6)알콕시카보닐아미노(C1-C18)알킬카보닐, 아릴(C1-C6)알콕시카보닐아미노(C1-C18)알킬카보닐, (C1-C6)알콕시카보닐, 아미노(C1-C18)알킬카보닐, (C1-C6)알킬카보닐, 아미노(C1-C6)알킬 또는 (C1-C6)알킬아미노(C1-C6)알킬이고,
    R3은 수소, (C1-C6)알킬 또는 (C1-C6)알콕시카보닐이며,
    X는 수소, (C1-C6)알킬, 할로 또는 니트로이고,
    p는 0 또는 1이다.
  4. 제3항에 있어서,
    R1이 수소 또는 (C1-C6)알킬이고,
    R3은 수소이며,
    X가 수소이고,
    p는 0이다.
    피리딜 그룹이 4-위치를 통해 결합된 화합물.
  5. 제1항에 있어서, R1, R2및 R3이 제1항에서 정의한 바와 같고, n이 1이고 m이 2인 화합물.
  6. 제5항에 있어서, 일반식(VⅡ)의 화합물.
    상기식에서,
    R1은 수소, (C1-C6)알킬, (C3-C6)알케닐, (C3-C6)알키닐, 아릴(C1-C6)알킬, (C1-C6)알콕시카보닐아미노(C1-C18)알킬카보닐, 아릴(C1-C6)알콕시카보닐아미노(C1-C18)알킬카보닐, (C1-C6)알콕시카보닐, 아미노(C1-C18)알킬카보닐, (C1-C6)알킬카보닐, 아미노(C1-C6)알킬 또는 (C1-C6)알킬아미노(C1-C6)알킬이며,
    R3는 수소, (C1-C6)알킬 또는 (C1-C6)알콕시카보닐이고,
    X는 수소, (C1-C6)알킬, 할로 또는 니트로이고,
    p는 0 또는 1이다.
  7. 제6항에 있어서,
    R1이 수소 또는 (C1-C6)알킬이고,
    R3이 수소이며,
    X가 수소이고,
    p가 0이며,
    피리딜 그룹이 4-위치를 통해 결합된 화합물.
  8. 제1항에 있어서, 3-(프로필-4-피리디닐아미노)-티에노[2,3-b]피리딘인 화합물 또는 약제학적으로 허용되는 이의 산 부가염.
  9. 제1항에 있어서, 3-(프로필-4-피리디닐아미노)-티에노[2,3-c]피리딘인 화합물 또는 약제학적으로 허용되는 이의 산 부가염.
  10. a) 일반식(XVⅢ)의 화합물을 일반식(XIX)의 할로피리딘과 반응시켜 R1이 수소이고 R2가 그룹인 일반식(Ⅰ)의 화합물을 수득하고,
    b) 단계 a)에서 수득한 일반식(Ⅰ)의 화합물을 임의로 각각 일반식 R8Hal 및 (R9O)2SO2의 할라이드 또는 설페이트와 반응시켜 R2가 그룹인 일반식(Ⅰ)의 화합물을 수득하거나,
    c) 일반식(XVⅢ)의 화합물을 일반식(XX)의 화합물과 반응시켜 R2가 수소이고 R1이 그룹
    인 일반식(Ⅰ)의 화합물을 수득함을 포함하여, 제1항에 따른 화합물을 제조하는 방법.
    상기식에서,
    R3, m, n, p 및 X는 제1항에서 정의한 바와 같고,
    할로는 할로겐이고,
    R4는 수소, (C1-C6)-알킬 또는 하이드록시(C1-C6)알킬이며,
    R5는 수소 또는 (C1-C6)-알킬이고,
    R6는 수소 또는 (C1-C6)-알킬이며,
    R7은 C1-C6-알킬 또는 아릴-(C1-C6)-알킬이고,
    k 및 q는 독립적으로 0 내지 5이고, 단 k와 q의 합이 5 이하이며,
    R8및 R9는 각각 수소를 제외하고는 제1항에서 R1에 대해 정의한 바와 같다.
  11. 활성 성분으로서 제1항에 따른 일반식(Ⅰ)의 화합물 및 이의 담체를 포함하는, 항우울제, 불안해소제, 비정형 정신병 치료제 또는, 강박성 장애를 포함하는 인격장애 치료제로서 유용한 약제학적 조성물.
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