KR100204983B1 - 담자균류의 액체종균 배양방법과 그 배양장치 및 그 액체종균 - Google Patents

Abstract

본 발명은 담자균류의 액체종균 배양방법과 그의 배양장치 및 그 방법에 의한 액체종균에 관한 것으로서, 특히 고품질의 각종 버섯의 재배에 유용한 액체종균을 대량으로 생산할 수 있는 배양방법과 배양장치 및 그 방법에 의하여 수득된 액체종균에 관한 것이다.

본 발명은 통상의 담자균류의 액체배양방법에 있어서, 전배양 공정을 (a) 탄소원 2~7%(w/v), 질소원 0.1~1.0%(w/v), KH₂PO₄0~0.15%(w/v), MgSO₄·7H₂O 0~15%(w/v), 그리고 나머지 증류수로 이루어진 전배양액에 평판 배양된 담자균류를 접종시키고, (b) 상기의 접종된 전배양물을 80~200rpm, 22~30℃의 진탕배양기에서 6일 내지 8일간 배양시키고; 상기의 액체배양공정을 (a) 탄소원 2~7%(w/v), 질소원 0.1~1.0%(w/v), KH₂PO₄0~0.15%(w/v), MgSO₄·7H₂O 0~15%(w/v), 그리고 나머지 증류수로 이루어진 액체배양액을 준비하고, (b) 상기의 액체배양액에 상기의 전배양접종원을 무균적으로 자동접종시키며, (c) 상기의 접종된 액체배양물을 5~100rpm, 22~28℃에서, 0.1 내지 1.0vvm 정도의 제균된 공기로 5일 내지 12일동안 통기배양시키는 단계로 구성된다.

본 발명은 담자균류의 원균을 채취한 이후에, 전배양공정과 액체배양공정을 각각 엄격한 조건하에서 일련불가분적으로 연결된 일련의 단계로 구성시키고 액체배양물을 강제로 교반시키는 점에 그 특징이 있는 것이다.

Description

담자균류의 액체종균 배양방법과 그 배양장치 및 그 액체종균

제1도는 전배양접종원의 접종단계에서 무균접종을 효율적으로 수행하기 위한 개발된 접종기구의 개략도.

제2도는 액체배양물의 통기배양단계에서 투입·배양·배출과정을 효율적으로 수행하기 위하여 개발된 액체배양물의 통기배양기구의 개략도.

제3도는 상기 제2도의 또다른 실시형태를 예시한 개략도이다.

* 도면의 주요부분에 대한 부호의 설명

10 : 접종기구 11 : 접종용기

12 : 마개부 13 : 전배양접종원

14 : 공기주입라인 15 : 여과수단

16 : 공기공급수단 18 : 배출라인

20 : 통기배양기구 21: 액체종균 배양기

22 : 뚜껑부 23 : 액체배양물

24 : 공기주입관 25a, 25b : 여과수단

26 : 접종관 27 : 액체유동량 측정기

28 : 공기배출관 29 : 액체종균의 배출관

30 : 겸용관 31 : 연결수단

32a, 32b, 32c, 32d : 잠금장치 41 : 교반부

42 : 전기모터 44 : 회전축

46 : 교반날개

[발명의 목적]

[발명이 속하는 기술분야]

본 발명은 담자균류의 액체종균 배양방법과 그의 배양장치 및 액체종균에 관한 것으로서, 특히 고품질의 각공 버섯의 재배에 유용한 액체종균을 대량으로 생산할 수 있는 방법과 그 방법에 사용되는 배양장치 및 그에 의해 배양된 액체종균에 관한 것이다.

[발명의 배경]

버섯류는 생물의 분류 체계상 담자균류에 속하는 미생물로서, 독성이 있는 것을 제외하고 대부분 식용으로 이용되고 있다. 이러한 버섯류는 고단백 식품으로서 미래에 육류를 대체할 수 있는 식품으로 기대되고 있으며, 특히 최근의 각종 연구보고에 의하면, 버섯류에 함유된 다당류인 글루칸(glucan) 및 그 유도체가 항암 작용을 하는 것으로 알려져 있고[김병각 외, 한국산 담자균류의 항암성분에 관한 연구. 한국균학회지, 8 : 107(1980); Chiraha et al., Fractionation and purification of the polysaccharides with maked antitumer activity from Lentinus edodes(Berk.). Cancer Res. 30 : 2776-2781(1970); 강창진 외, 한국산 담자균류의 항암성분에 관한 연구, 불노초의 균사 배양 및 항암 성분. 한국 생화학회지, 14 : 101(1981); Yamamura et al., A selective inhivitor of myxovirus from shiitake(Lemtinus edodes) Mushroom Sci 9(1) : 495-507(1976) 참조], 이로 인하여 버섯류는 통상의 식품대용으로서 뿐만 아니라 건강식품으로서 크게 각광을 받고 있다.

이러한 담자균류(버섯류)는 각각의 종류마다 그 재배방법 내지 재배조건이 다르지만, 통상적으로는 최초의 원균을 채취하여 한천배지 등에서 배양한 다음, 이를 액체 또는 고형물에 일정기간 배양하여 버섯종균을 얻고, 이러한 버섯종균을 일반 농가 등에서 재배하여 최종적인 버섯을 채취하게 된다.

그런데, 원균의 채취 및 배양은 통상적인 방법으로 행해지는 반면, 버섯종균의 배양방법은 날로 새로운 방법이 등장하고 있다. 버섯종균의 배양방법은 오늘날 가장 일반화된 고체종균배양법과, 최근에 비로소 연구 개발이 진행되고 있는 액체종균배양법이 있다. 고체종균배양법은 통상적으로 톱밥을 주원재료로 하고 여기에 미강 등의 보조재료로 하여 이것을 멸균시킨 후 담자균의 균사체를 접종시켜서 제조한다. 그러나, 이 방법은 나무원목이나 빗짚 또는 병재배시에 배양용기 내의 종균덩어리를 잘게 부수어 사용해야 하는 번거로움이 있었고, 더구나 종균덩어리를 잘게 부수는 과정에서 서로 뒤엉켜 있던 균사체들이 톡톡 끊어져 버려 톱밥종균에 심한 손상을 주게 되었으며, 이로 인해 톱밥종균의 활력을 현저하게 떨어뜨리게 되는 단점이 있었다. 또한, 이때 잡균의 혼입에 특히 유의하여야 하고, 그 종균 덩어리를 고르게 잘 혼합하여야 할 뿐만 아니라, 적은 재배면적에 다량한 배양용기를 필요로 하므로 사용된 이후에 전량 회수하여 재활용하지 않는 한 환경 오염의 문제가 심각하게 대두되고 있었던 것이다.

이러한 실정을 감안하고 보다 효율적인 버섯종균을 얻기 위하여 개발된 방법이 액체종균의 제조방법이다. 그러나, 이 방법은 고체종균배양법과는 달리 배양배지로서 순수한 액체를 사용하므로, 원균을 일정한 수준으로까지 배양시키는데 고도의 기술이 필요하고, 그 배양조건이 매우 까다로워, 실용화 단계에 이르지 못한 결점이 있었으며, 최근들어 연구가 진행되고 있는 실정이다[박영재, 배지 만드는 법과 종균 배양법. 영지·표고·느타리. 내외출판사. 308-322(1993); 대한민국 특허 공개 제95-26976호. 참조]

그런데 위에서 간략히 소개된 액체배양법[박영재, 배지 만드는 법과 종균 배양법. 영지·표고·느타리. 내외출판사. 308-322(1993)]은 실험실적인 배양방법으로서 매우 간략히 조성물을 소개하는 정도로 그치고 있으며, 또다른 액체배양법[대한민국 특허 공개 제95-26976호]은 좀더 구체적으로 기술내용을 설명하고 있으나, 이 역시 반복적인 호환단계 및 멸균단계를 거쳐야 하므로 제조공정이 번거롭고, 다량의 에너지를 필요로 하며, 각각의 제품을 각각 개별적으로 반복하여 진행시켜야 하므로 잡균이 혼입될 염려가 있었다. 따라서, 이로 인하여 액체종균의 균일화를 기하기 어렵고, 대량생산이 불가능한 단점이 있었다. 또한, 액체종균의 배양방법에서 필수적으로 사용되는 배양장치에 관해서는 전혀 언급된 바 없었다.

[발명의 목적]

본 발명은 위와 같은 종래의 액체종균의 제조방법의 문제점을 해결하기 위하여 개발된 것으로서, 제조공정 중에 잡균의 혼입을 방지할 수 있고 제품의 균일화를 기할 수 있으며, 일련의 공정에 이해 대량생산이 가능한 액체종균의 배양방법과 그 방법에 직접 실시하기 위하여 사용되는 배양장치 및 그에 의해 배양된 액체종균을 제공하는데 그 목적이 있다.

본 발명은 담자균류의 원균을 채취한 이후에, 전배양공정과 액체배양공정을 각각 엄격한 조건하에서 일련불가분적으로 연결되고 액체배양물을 강제적으로 교반시켜 혼합시키는 일련의 단계로 구성된 액체종균의 배양방법이라는 점에 그 특징이 있는 것이다.

또한, 본 발명은 상기의 배양방법을 실시하는데 있어서 액체배양공정을 엄격한 조건하에서 효율적으로 수행할 수 있고, 무균적으로 접종할 수 있으며, 대량생산에 접합하도록 구성된 액체종균의 통기배양장치라는 점에 그 특징이 있는 것이다.

[발명의 구성]

[발명의 기술적 구성]

본 발명은 상기의 목적을 달성하기 위하여, 담자균류의 원균을 분양받아 이를 평판배양시키는 공정, 평판배양된 접종원을 전배양시키는 공정, 그리고 전배양된 접종원을 액체배양시키는 공정으로 구성된 담자균류의 액체배양방법에 있어서, 상기의 전배양공정은 (a) 탄소원 2~7%(w/v), 질소원 0.1~1.0%(w/v), KH₂PO₄0~0.15%(w/v), MgSO₄·7H₂O 0~15%(w/v), 그리고 나머지 증류수로 이루어진 전배양액의 준비단계, (b) 상기의 전배양액에 평판배양된 담자균류를 접종하는 단계, (c) 상기의 접종된 전배양물을 80~200rpm, 22~30℃의 진탕배양기에서 6일 내지 8일간 배양시키는 단계로 구성되고; 상기의 액체배양공정은 (a) 탄소원 2~7%(w/v), 질소원 0.1~1.0%(w/v), KH₂PO₄0~0.15%(w/v), MgSO₄·7H₂O 0~15%(w/v), 그리고 나머지 증류수로 이루어진 액체배양액을 준비하는 단계, (b) 상기의 액체배양액에 상기의 전배양접종원을 무균적으로 자동접종시키되 상기의 액체 배양액 : 상기의 전배양접종원=20 내지 200 : 1의 비율로 접종시키는 단계, (c) 상기의 접종된 액체배양물을 5~100rpm, 22~28℃에서, 0.1 내지 1.0vvm 정도의 제균된 공기로 5일 내지 12일동안 통기배양시키는 단계로 구성된다.

또한, 본 발명은 상기의 제반공정 중에서 액체배양공정을 효율적이고 무균적으로 실시하기 위하여 사용되는 통기배양장치에 관한 것으로서, 이는 액체배양물을 수용하는 배양기 몸체부와, 상기 액체배양물을 고르게 혼합시켜주기 위한 교반부를 포함하고 있다. 상기의 몸체부에는 외부로부터 공기를 주입시키는 공기주입관과, 외부에서 액체배양액을 투입시키거나 그 액체배양액에 균사체를 접종시키는 접종관과, 배양기 몸체부의 내부로부터 공기를 배출시키는 공기배출관과, 통기배양 후 액체종균을 배출시키는 액체종균의 배출관이 설치되어 있다. 또한, 상기의 교반부는 회전동력을 제공하는 전기모터와, 상기 전기모터로부터 소정의 회전력을 제공하는 전기모터와, 상기 전기모터로부터 소정의 회전력을 전달하는 회전축과, 상기 회전축으로부터 전달된 회전력으로 상기의 액체배양물을 고르게 혼합시켜주는 교반날개로 구성되어 있다. 상기의 공기주입관과 공기배출관에는 잡균을 여과할 수 있는 여과수단이 설치되어 있다.

본 발명에 있어서는 상기의 접종관과 배출관을 하나로 통합하여 사용할 수 있으며, 이 경우 본 발명에 의한 액체종균의 통기배양장치를 보다 간단하게 구성하여 사용할 수 있게 된다.

본 발명에 의한 담자균류의 배양방법 및 그 배양장치는 느타리버섯, 검은비늘버섯, 만가닥버섯, 버들송이버섯, 표고버섯, 양송이버섯 등과 같은 각종의 식용버섯과, 복령, 영지버섯, 상황버섯 등과 같은 각종의 약용버섯, 그리고 천마와 같은 버섯 유사체 등의 액체종균 제조시에 모두 사용할 수 있다.

[본 발명의 바람직한 실시형태]

이하, 본 발명의 바람직한 실시형태를 보다 상세히 설명한다.

(가) 원균채취 및 평판배양

본 발명은 담자균류의 원균을 농촌진흥청이나 산림청으로부터 분양받거나 자연산의 식용버섯(담자균류)의 신성한 갓조직에서 조직분리하여 이용한다. 분양받거나 조직분리한 원균을 페트리접시에서 평판배양시켜서, 이를 전배양용 접종원으로 확대배양한다. 페트리접시에서 평판배양은 통상의 방법으로 실시할 수 있다.

(나) 담자균류(원균)의 전배양공정

페트리접시에서 확대배양된 원균은 이어서 전배양공정으로 이행되어진다. 전배양공정은 소정의 액체배지를 준비하는 단계와, 확대배양된 원균을 액체배지에 접종시키는 단계와, 그 접종된 배양물을 엄격한 조건하에서 배양시키는 단계로 구성된다.

(a) 전배양액의 준비단계

페트리접시에서 확대배양된 원균은 본 발명에 의한 액체배지에서 충분히 배양되어야 한다. 본 발명에 의한 액체배지는 탄소원 2~7%(w/v), 질소원 0.1~1.0%(w/v), KH₂PO₄0~0.15%(w/v), MgSO₄·7H₂O 0~15%(w/v), 그리고 나머지 증류수로 이루어진다.

탄소원으로서는 설탕, 맥아당, 과당, 포도당, 자당, 맥아추출물, 그리고 물엿으로 구성된 그룹 중에서 1 또는 2 이상을 선택하여 사용한다. 2%(w/v) 이하에서는 균사체가 성장하는데 지장을 초래하고, 7%(w/v) 이상에서는 타영양원에 비해 과량으로서 비경제적이 되므로 적절하지 못하다. 탄소원은 버섯균의 대사에 필요한 분자의 골격을 이루는 구성물질로 이용되는 동시에, 세포합성 및 분해대사에 필요한 에너지원으로 사용된다. 원래 버섯균은 자연계에서 죽거나 노화된 식물이나 그로부터 발생한 유기물을 기주로 하여 살아가는 종속영양 생물이므로, 이들의 구성성분인 셀룰로스, 헤미셀룰로스, 리그닌을 주요 영양원으로 하고 있다. 이러한 사실을 근거로 하여, 통상의 버섯재배방법에서는 담자균의 영양배지로서 톱밥이나 미강(쌀겨) 또는 볏짚 등을 사용하고 있다. 그러나, 이 방법을 이용할 경우, 원균의 균사체가 살아가기 위해서는 상기의 톱밥 등을 다시 분해하여 흡수하기 쉬운 형태로 전환시켜야 하므로, 또다른 에너지가 필요하게 되고, 흡수량도 많지 못하게 된다. 한편, 상기의 대한민국 특허공개 제95-26976호에서는 탄소원으로서 쌀가루, 밀가루, 옥수수가루, 전분 등을 사용하고 있으나, 이 역시 담자균의 균사체가 이를 영양원으로 하여 이용하기 쉽게 하기 위해서는 이를 호화시켜야 하고, 이 과정에서 다량으로 에너지를 필요로 하게 되는 단점이 잇다. 또한, 호화된 이후에도 역시 다당류의 형태를 벗어날 수 없으므로, 균사체가 이를 흡수하기 위해서는 효소를 분비하여 이를 분해하여야 하는 바, 흡수된 탄소원이 모두 균사체의 성장에 사용되지 못하고 그 중에서 일부가 에너지원으로 사용되어지는 단점이 있는 것이다. 따라서, 본 발명에서는 담자균의 균사체가 탄소원을 더 이상 분해할 필요없이 가장 흡수하기 쉬운 형태인 포도당, 맥아당, 설탕, 과당, 젖당 등의 단당류 또는 이당류로 구성된 그룹 중에서 1 또는 2 이상을 선택하여 사용한다. 이들은 모두 물에 잘 녹기 때문에 종래와 같이 별도의 호화(糊化)공정을 거칠 필요가 없고, 그 상태에서 흡수가 가능하므로 균사체가 이를 분해하기 위하여 별도의 에너지를 사용할 필요도 없게 되는 잇점이 있기 때문이다.

질소원으로서는 대두분이나 펩톤 중에서 어느 하나 또는 둘을 함께 사용하며, 0.1~1.0%(w/v)의 범위내에서 사용한다. 대두분이나 펩톤을 0.1%(w/v) 이하로 사용할 경우엔 균사체의 질소원이 부족하여 바람직하지 못하고, 1.0%(w/v) 이상으로 사용할 경우엔 균사체의 성장에 큰 차이가 없으므로 경제적인 측면에서 바람직스럽지 못하다. 질소원은 버섯균의 DNA와 같은 유전물질의 합성과 단백질의 합성·분해에 필요한 효소의 생성에 필수불가결한 영양원이다. 균사체의 배양에 통상적으로 사용되는 질소원은 효모추출액과 같은 유기질소원과, 염화암모늄(NH₄Cl) 질산염(KNO₃)과 같은 무기질소원이 있다. 그러나, 이들은 균사체에 단일의 질소원만을 제공할 뿐이고, 더 이상의 기능을 제공하지 아니한다. 따라서, 균사체의 정상적인 성장을 위해서는 그 밖의 영양소의 제공이 필연적이다. 이에 반하여, 대두분은 다른 식품류(식물)에 비하여 단백질 성분과 기타 영양소가 풍부하여 균사체가 성장하는데 최적의 영양원이 되기 때문에, 이와 관련된 별도의 영양원을 제공하지 아니하여도 균사체의 성장에 큰 지장이 없게 되는 잇점이 있다. 또한, 대부분은 언제 어느 곳에서나 손쉽게 구할 수 있고, 값도 다른 유기질소원에 비하여 매우 저렵한 장점이 있다. 또한, 대두분은 미세하기는 하지만 액상 매질 속에서 균사체가 응집하여 균사체구를 형성하는 응집핵으로서의 기능을 수행하므로, 상기의 탄소원에 비하여 현저하게 적은 량으로도 균사체가 성장하면서 계속하여 유기질소원 및 기타 영양원을 흡수하는데 매우 효과적인 것으로 여겨진다. 한편, 펩톤은 저분자 단백질 성분이므로 균사체가 질소원보다 쉽게 흡수할 수 있는 잇점이 있다. 상기의 질소원은 상기의 탄소원에 비하여 약 1/10 정도의 범위내에서 사용하는 것이 가장 바람직한 것으로 관찰되었다.

무기염료로서는 인의 공급원으로서 KH₂PO₄를 사용하고, 마그네슘의 공급원으로서 MgSO₄·7H₂O를 사용할 수 있다. 이들 무기염류는 담자균이 종류에 따라 액체배지에 선택적으로 사용할 수 있다는 점에서, 상기의 선특허출원(대한민국 특허공개 제95-26976호)과 상이하다. 예컨대, 양송이버섯과 상황버섯 등에 있어서는 이들 무기염류를 사용하지 않는 것이 바람직한 반면에, 느타리버섯, 검은비늘버섯, 만가닥버섯, 버들송이버섯, 표고버섯, 그리고 복령에 있어서는 이들 무기염류를 사용하는 것이 바람직하다. 그러나 이들 무기염류에 사용한 경우에도 관찰되었으므로, 각각 0.15%(w/v)를 초과하면 균사체의 성장에 장애를 일으키는 것으로 관찰되었으므로, 각각 0.15%(w/v) 이하로 제한하는 것이 바람직스럽다.

그리고, 나머지는 증류수 또는 멸균한 음용수를 사용한다. 통상의 음용수를 사용할 경우엔 반드시 고온고압하에서 살균하여 사용하여야 한다.

(b) 담자균류(원균)의 접종단계.

상기와 같이 구성된 전배양액을 전배양용기에 넣고, 그 상태에서 평판배양된 담자균류를 접종시켜서 전배양물을 얻는다. 전배양용기는 실험실적 배양에서는 삼각플라스크가 바람직하지만, 대량생산의 경우 반드시 이에 한정되는 것은 아니다. 접종 시기는 평판 배양기의 균사체가 평판면적의 약 70%정도 자랐을 때이고, 코크보러 또는 백금구로 균사체 조각을 전배양용기 내의 전배양액에 무균접종시킨다. 접종방법 자체는 통상의 방법으로 시행할 수 있다. 이때, 접종되는 균사체 조각이 많을수록 접종원의 배양일수가 단축되어지고, 접종되는 균사체의 밀도가 높을수록 배양 후 형성되는 균사구(펠렛 형상의 균사체 덩어리)의 직경이 작아지는 경향이 있는 것으로 관찰되었다.

(c) 담자균류의 전배양단계

균사체가 접종된 전배양물은 전배양용기에 충전된 상태로 진탕배양과정으로 이행된다. 진탕배양은 회전진탕배양기 또는 왕복진탕배양기에서 상기의 접종된 전배양물을 80~200rpm 정도의 회전수로 배양시킨다. 전배양물을 80rpm 이하로 회전시키면, 성장한 균사체가 전배양물 내에 고르게 분포하지 못하고 서로 엉켜붙게 되고, 또한 이로 인해 균사체가 성장하는데 필요한 산소의 공급이 전배양물 내에 충분하게 이루어지지 못하므로, 이후에 액체배양단계에서 고품질의 액체종균을 얻을 수 없게 된다. 한편, 200rpm 이상이 되면 산소의 공급은 충분하지만, 과도한 회전력 때문에 균사체의 성장이 저하되거나 균사체가 절단되어 바람직스럽지 못하다. 이러한 현상은 균사체가 배양된 초기에 현저하게 나타나고, 균사체가 배양된 환경에 어느 정도 적응된 상태에서는 그 영향이 줄어들게 된다. 따라서, 전배양의 초기에는 저속회전이 바람직하고, 시간이 지남에 따라 상기의 범위내에서 고속회전시켜도 무방하다. 상기의 회전속도 범위에서는 액상배지에서 자라는 균사체가 성장하면서 어느 정도의 길이로 자란 경우, 그 회전력에 의해 끊어져 새로운 균사체구를 형성하여 계속적으로 성장하는 것으로 추정된다. 그러나, 상기의 범위를 벗어날 경우, 이미 성장한 균사체 뿐만 아니라 아직도 더 자라나야할 균사체마저 서로 끊어져버림으로써 액상배지내에서 균사체구가 제대로 형성하지 못하는 것으로 여겨지므로, 바람직스럽지 못하다.

한편, 진탕배양은 담자균의 배양온도조건에 다라 적절하게 선택할 수 있다. 통상적으로는 22~30℃의 범위에서 6일 내지 8일간 배양한다. 동일한 담자균에 있어서는, 배양액의 온도가 균사체의 최적온도조건에 가까울수록 배양기간은 단축되어지는 경향이 있는 것으로 관찰되었다.

(다) 액체종균의 배양공정

진탕배양기에서 전배양된 균사체는 이이서 액체종균의 배양공정으로 이행되어진다. 액체종균의 배양공정은 소정의 액체배양액을 준비하는 단계와, 전배양된 균사체를 접종시키는 단계와, 그 접종된 배양물을 엄격한 조건하에서 배양시키는 단계로 구성된다.

(a) 액체배양액의 준비단계

진탕배양기에서 전배양된 균사체는 본 발명에 의한 액체배양액에서 충분히 배양되어야 한다. 본 발명에 의한 액체배양액은 탄소원 2~7%(w/v), 질소원 0.1~1.0%(w/v), KH₂PO₄0~0.15%(w/v), MgSO₄·7H₂O 0~15%(w/v), 그리고 나머지 증류수로 이루어진 액체배양액으로 구성된다.

탄소원으로는 설탕, 맥아당, 과당, 포도당, 자당, 맥아추출물, 그리고 물엿으로 구성된 그룹 중에서 1 또는 2 이상을 선택하여 사용한다. 2%(w/v) 이하에서는 균사체가 성장하는데 지장을 초래하고, 7%(w/v) 이상에서는 타영양원에 비해 과량으로서 비경제적이 되므로 적절하지 못하다. 선택의 이유는 앞서 설명한 바와 같다(이하, 같음).

질소원으로서는 대부분이나 펩톤 중에서 어느 하나 도는 둘을 함께 사용하며, 0.1~1.0%(w/v)의 범위내에서 사용한다. 대부분이나 펩톤을 0.1%(w/v) 이하로 사용할 경우엔 균사체의 질소원이 부족하여 바람직하지 못하고, 1.0%(w/v) 이상으로 사용할 경우엔 균사체의 성장에 큰 차이가 없으므로 경제적인 측면에서 바람직스럽지 못하다. 이 경우, 질소원의 보조성분으로 통상적으로 사용되는 효모추출물을 사용할 수도 있다.

무기염료로서는 인의 공급원으로서 KH₂PO₄를 사용하고, 마그네슘의 공급원으로서 MgSO₄·7H₂O를 사용할 수 있다. 이들 무기염류는 역시 담자균이 종류에 따라 액체배지에 선택적으로 사용할 수 있다. 이 점에서, 상기의 선특허출원(대한민국 특허공개 제95-26976호)과 상이하다. 예컨대, 액체종균의 배양공정에서는 느타리버섯, 검은비늘버섯, 만가닥버섯, 버들송이버섯, 양송이버섯과 상황버섯 등에 있어서는 이들 무기염류를 사용하지 않는 것이 바람직한 반면에, 표고버섯, 그리고 복령에 있어서는 이들 무기염류를 사용하는 것이 바람직하다. 그러나 이들 무기염류에 사용한 경우에도 관찰되었으므로, 각가 0.15%(w/v)를 초과하면 균사체의 성장에 장애를 일으키는 것으로 관찰되었으므로, 역시 0.15%(w/v) 이하로 제한하는 것이 바람직스럽다.

그리고, 나머지는 증류수 또는 멸균한 음용수를 사용한다. 통상의 음용수를 사용할 경우엔 반드시 고온고압하에서 살균하여 사용하여야 한다.

본 발명에서는 상기의 배지성분을 물에 용해시켜 액체배양액을 준비한다. 액체배양액을 제조하기 위해서는 상기의 배지성분을 평량하여 물에 넣고, 임펠러(교반날개)가 부착된 혼합기에서 균일하게 혼합시키는 것이 바람직하다. 한편, 액체종균의 배양시에 발생하는 거품을 없애기 위하여, 혼합이 완료된 배양액에 거품제거제를 첨가하는 것이 바람직하다. 거품제거제로서는 액상배양액의 표면위에 얇은 피막을 형성하는 각종의 동물성 기름과 식물성 기름을 사용할 수 있다. 식물성 기름으로는, 예컨대 가정용 식용유, 면실유, 파자마유, 올리브유, 야자유 등으로 구성된 그룹 중에서 1 또는 2 이상을 사용할 수 있다. 첨가량은 배양액의 상층부분에 전체적으로 퍼질 수 있는 정도이어야 하고, 이를 위해서는 액체배양액에 대하여 0.1~1.0%(v/v)인 것이 바람직하다. 거품제거제는 배양액의 표면에서 얇은 막을 형성하므로, 본 발명의 통기식 액상배양법에서와 같이 액상배양액에 공기(산소)를 강제적으로 공급하는 시스템에서는 별 물제가 없으나, 액상배양액에 공기를 강제적으로 공급하지 않는 시스템에서는 균사체의 성장에 필수적으로 요구되는 산소가 공급될 수 없으므로 절대 사용되어서는 아니됨을 유의하여야 한다. 따라서, 상기의 전배양공정에서는 사용될 수 없으며, 강제 통기방식인 액체종균의 배양공정에서만 사용될 수 있는 것이다(다만, 상기의 전배양공정을 강제통기방식으로 전환시킬 경우엔, 거품제거제의 사용이 가능하게 된다).

본 발명에서는 액체배양액의 제조시 통상의 경우와 마찬가지로 액체배양액을 균일하게 혼합한 다음, 이를 고온고압솥에서 살균시키는 것이 바람직하다. 이는 액체배양액이 다른 잡균에 의해 오염됨으로써 소망하는 담자균의 액상배지로 사용할 수 없게 되는 가능성을 사전에 차단하기 위함이다. 그러나, 대량 생산의 경우, 액체배양액을 별도의 용기에서 살균시키고, 이 액체배양액을 미리 살균된 액체종균의 배양기에 각각 충전시켜 제조할 수 있다.

(b) 전배양접종원의 접종단계

본 발명은 살균된 액체배양액에 진탕배양시킨 전배양접종원을 접종시켜 균사체의 액체배양물을 제조한다. 접종과정은 반드시 무균적으로 실시되어야 한다. 이 단계는 통상적인 방법으로 실시될 수 있으나, 본 발명에서는 이를 위하여 소정의 접종기구를 사용한다.

제1도는 상기의 접종기구(10)를 개략적으로 도시한 개념도이다. 접종용기(11)의 마개부(12)에는 공기의 주입라인(14)과 전배양접종원(13)의 배출라인(18)이 설치되어 있다. 상기의 공기주입라인(14)에는 공기속의 잡균을 여과할 수 있는 여과수단(15)이 설치되어 있고, 그 일단은 접종용기(11)의 밑바닥에 위치하고, 그 타단은 외부의 공기 공급수단(16)(예컨대, 에어콤프레서)에 연결되어 있다. 이때, 상기의 여과수단(15)은 공기중의 잡균을 걸러내여 액체배양액 및 액체매양물이 접균에 의해 오염되는 것을 방지해준다. 이러한 여과수단(15)은 미생물 배양용 필터, 공기제균용 필터, 솜마개 필터 등을 사용할 수 있다. 한편, 상기의 전배양접종원의 배출라인(18)은 그 일단이 접종용기(11)의 밑바닥에 위치하고, 그 타단은 액체종균 배양기(21)에 설치된 액체종균의 접종관(26)에 연결되어 있다[제2도 참조].

따라서, 접종용기(21) 내에 들어있는 전배양접종원을 액체종균 배양기(21) 속으로 접종시키기 위해서는, 진탕배양단계를 마친 이후에, 공기주입라인(14)을 공기공급수단(16)에 연결시키고, 상기의 전배양접종원의 배출라인(18)을 상기의 접종관(26)에 연결시킨 다음, 대기압 보다도 높은 압력으로 주입시키면, 접종용기(11) 속에 들어 있는 전배양접종원(13)이 상기의 배출라인(18)과 접종원(26)을 따라 이동하여, 액체종균 배양기(21) 속으로 모두 이동하게 된다. 이때, 상기의 전배양접종원의 배출라인(18)과 접종관(26) 사이에 액체유동량 측정기(27)를 설치하면, 전배양접종원(13)의 첨가량을 보다 정확하게 측정할 수 있게 된다[제2도 참조].

본 발명에 있어서, 상기의 액체배양액 : 상기의 전배양접종원=20~200 : 1의 비율로 접종시킨다. 보다 바람직하기로는 50~100 : 1의 비율이다. 전배양접종원을 너무 적게 접종시키면 균사체의 성장이 더디거나 실패할 가능성이 커지는 반면에, 상기의 양을 초과하여 접종시키면 경제적인 측면에서 바람직하지 않기 때문이다.

한편, 상기의 제1도에서는 접종용기(11)에서 직접 액체종균 배양기(21) 속으로 무균적으로 접종시키는 방법을 설명하였으나, 진탕배양용기에서 전배양된 전배양접종원을 상기의 접종용기(11)에 옮겨 담은 다음, 상기의 제반공정으로 진행시킬 수도 있다.

(c) 액체배양물의 통기배양단계

본 발명에서는 진탕배양된 균사체(전배양접종원)를 상기의 액체종균 배양기에 접종시킨 후, 균사체가 접종된 액체배양물을 5~100rpm 22~28℃에서 0.1 내지 1.0vvm 정도의 제균된 공기로 5일 내지 12일 동안 통기배양시킨다. 이로써 본 발명의 최종목적물인 소정의 액체배양물의 통기배양기구를 이용하여 효율적으로 수행되어진다.

제2도는 본 발명에 의한 액체배양물의 통기배양단계를 보다 효율적으로 수행하기 위하여 개발된 액체배양물의 통기배양기구(20)에 관한 개략도이다. 이 통기배양기구(20)는 액체배양물을 수용하는 액체종균 배양기 몸체부(21)와, 상기 액체배양물을 고르게 혼합시켜주기 위한 교반부(41)를 포함하고 있다. 상기의 몸체부(21)에는 외부로부터 공기를 주입시키는 공기주입관(24)과, 외부에서 액체배양액을 투입시키거나 그 액체 배양액에 균사체를 접종시키는 접종관(26)과, 액체종균 배양기(21)의 내부로부터 공기를 배출시키는 공기배출관(28)과, 통기배양 후 액체종균을 배출시키는 액체종균의 배출관(29)이 설치되어 있다. 상기의 공기주입관(24)에는 공기 속의 잡균을 여과할 수 있는 여과수단(25a)이 설치되어 있고, 그 일단은 배양기 몸체부(21)의 바닥부분에 연결되고, 그 타단은 외부의 공기 공급수단(16)(예컨대, 에어콤프레서)에 연결되어진다. 또한, 상기의 접종관(26)은 그 일단이 배양기 몸체부(21)에 연결되고, 그 타단은 다른 연결관(도시되지 않음)에 연결되어 액체배양액이나 전배양접종원을 공급받는다. 이때, 상기의 타단 안족에는 액체유동량 측정기(27)를 설치하는 것이 바람직하다.

또한, 상기의 공기배출관(28)은 그 일단이 배양기 몸체부(21)의 윗쪽에 연결되고, 그 타단은 외부의 대기에 개방되어 있으나, 그 타단부에 여과수단(25b)을 설치하는 것이 바람직하다. 이때, 상기의 여과수단(25a)은 외부로부터 공급되는 공기중에서 잡균을 여과시키는 반면에, 상기의 또다른 여과수단(25b)은 배양기 몸체부(21) 내에서 발생했을지도 모를 해독성 유해균이 외부로 방출되는 것을 막아준다. 한편, 상기의 액체종균의 배출관(29)은 그 일단이 배양기 몸체부(21)의 바닥부분에 연결되고, 그 타단은 외부에 개방되어 있으나, 그 타단부에 액체유동량 측정기(27)를 설치하는 것이 바람직스럽다. 상기의 액체유동량 측정기(27)는 배양기 몸체부(21)로 유입되는 액체배양액이나 전배양접종원의 투입량과, 배양기 몸체부(21)로부터 유출되는 액체종균의 배출량을 정확히 계량할 수 있도록 한다. 상기의 공기주입(24)과 공기배출관(28) 그리고 접종관(26) 및 액체종균의 배출관(29)의 타단부에는 다른 부재와의 효율적인 연결을 위하여 각각 연결수단(31)을 설치하고, 그곳을 흐르는 공기 또는 액체를 통제하기 위하여 각각 잠금장치(32a)(32b)(32c)(32d)를 설치하는 것이 바람직스럽다.

본 발명에 있어서는 배양기 몸체부(21) 내의 액체배양물(23)을 균일하게 혼합시켜주는 교반부(41)를 포함하고 있다. 상기의 교반부(41)는 회전동력을 제공하는 전기모터(42)와, 상기 전기모터(42)로부터 소정의 회전력을 전달하는 회전축(44)과, 상기 회전축(44)으로부터 전달된 회전력으로 상기의 액체배양물(23)을 고르게 혼합시켜주는 교반날개(46)로 구성되어 있다. 전기모터(42)는 상기의 교반날개(46)의 회전속도를 통제하며, 이 교반날개(46)는 직접 상기의 액체배양물(23)을 혼합시키게 된다. 이때, 상기 교반날개(46)의 회전속도가 바람직스럽지 못하고 100rpm 이상일 경우에는 지나친 혼합작용으로 액체배양물(23) 내의 균사체에 과도한 스트레스를 주게 되므로 바람직스럽지 못하다. 본 발명에 의한 교반부(41)는 통기배양기구(20)가 통상적으로 채용되는 10~20ℓ 내외에서는 공급공기의 기포에 의해서도 혼합효과가 있으므로 채용의 실익이 크지 아니하나, 100ℓ 이상의 대용량에서는 공급되는 공기의 기포가 통기배양기구(20) 내에 존재하는 액체배양물에 충분하게 혼합되지 못한 상태에서 배출되어지고, 또한 그로 인하여 액체배양물 내의 균사체에 균일하게 산소를 공급하지 못하여 최종적인 액체종균의 품질도 고르지 못하므로, 소용량일 경우보다는 대용량일 경우에 더욱 적합하다. 이 경우, 공기주입관(24)에서 배출되는 공기의 기포가 회전물쌀에 의해 잘게 부서지면서 액체배양물(23)에 고르게 퍼짐과 동시에 회전물쌀의 와류와 함께 계속적으로 혼합되어지므로, 액체배양물(23) 내의 균사체를 산소에 더욱 더 효율적으로 공급할 수 있게 되는 것이다. 따라서, 본 발명에 의한 교반부(41)를 채용했을 경우에는 이 배양기간 동안 공기 중의 산소가 더욱 효율적이고 균일하게 공급되므로, 교반부(41)를 채용하지 않았을 경우에 비하여, 배양이 완료된 액체종균의 품질도 향상되어진다.

따라서, 상기의 통기배양기구(20)를 이용할 경우, 다음과 같이 통기배양단계를 효율적으로 수행할 수 있게 된다. 먼저, 상기의 접종관(26)을 통하여, 상기 액체배양액의 준비단계에서 준비한 액체배양액과 상기 전배양액의 준비단계에서 준비한 전배양접종원을 차례로 배양기 몸체부(21)에 투입함으로써, 균사체가 접종된 액체배양물(23)을 만든다. 이때, 상기의 액체배양액과 상기의 전배양접종원의 배합비율은 미리 설정된 용량의 배양용기를 통해 이루어질 수도 있으나, 대량생산의 경우, 상기의 액체유동량 측정기(27)를 통해 간편하게 해결할 수 있다. 그후, 상기의 공기주입관(24)을 통하여 공기를 강제적으로 투입하면서, 상기의 전기모터(42)에 전원을 가하여 교반날개(46)를 회전시키면, 공기주입관(24)에서 배출되는 기포가 잘게 부서져 미세 기포를 형성하고, 그 미세한 기포가 액체배양물(23)과 혼합되면서 위쪽으로 이동함에 따라서 액체배양물(23)에 산소를 공급시키게 되며, 이와 같이 공급된 산소를 액체배양물(23) 내의 균사체가 흡수하게 된다. 공기의 주입량은 통상의 경우와 마찬가지로 0.1 내지 1.0vvm 정도가 바람직하다. 공기의 주입량이 0.1vvm 이하일 경우엔 액체배양물(23)에 충분한 산소의 공급이 어려운 반면에, 공기의 주입량이 1.0vvm 이상일 경우에 산소의 공급은 충분하므로 더 이상의 과잉공기를 굳이 공급할 필요가 없기 때문이다. 또한, 이러한 배양과정은 22~28℃에서 행해지는데, 이는 담자균의 균사체가 이 온도번위에서 최적의 성장환경을 갖기 때문이다.

이러한 조건하에서 5일 내지 12일 정도 배양시키면, 액체배양물(23) 내에 존재하는 각각의 균사체가 점점 성장하여 작은 균사체구를 형성하고, 이러한 균사체구가 무수히 고르게 성장하며, 본 발명에서 요구하는 고품질의 액체종균이 되는 것이다.

소망하는 액체종균이 얻어지면, 다음과 같은 과정을 거쳐 무균적으로 액체종균을 자동배출시킨다. 먼저, 공기배출관(28)의 잠금장치(32c)를 닫고(이 경우, 상기 접종관(26)의 잠금장치(32b)는 닫혀 있음), 배출관(29)의 잠금장치(32d)를 열어주면, 공기주입관(24)을 통해 들어온 공기압에 의해, 액체종균 배양기(21) 속의 액체종균[즉, 통기배양이 완료된 액체배양물(23)]이 배출관(29)을 통해 외부로 자동적으로 배출되어진다.

제3도는 본 발명에 의한 액체종균의 통기배양기구(20)의 또다른 실시형태를 나타낸 개략도이다. 이는 상기의 접종관(26)과 상기의 배출관(29)을 하나로 통합하여 구성한 것으로서, 전배양접종원과 액체배양액 및 액체종균을 하나의 겸용관(30)에 의해 투입 및 배출이 가능하도록 한 것이다. 이 경우엔 2개의 관을 단지 1개의 겸용관(30)으로 한 것이기므로, 그 구조가 매우 간단해지는 잇점이 있다.

[실시예]

이하, 본 발명을 실시예에 의하여 보다 구체적으로 설명한다. 본 실시예에 있어서 제시된 조건은 본 발명의 기술사상을 보다 상세히 설명하기 위한 것으로서 이를 예시한 것에 불과하다. 따라서, 본 발명은 하기의 실시예에 제시된 조건으로 한정되는 것은 아니며, 또한 그러한 의미로 해석되어서도 안된다.

(가) 느타리버섯의 액체종균 배양

패트리접시에서 확대배양된 느타리버섯의 균사체가 약 70% 정도 자랐을 때, 균사체 조각을 표 1과 같은 조성의 액체배지에 접종시킨다.

위와 같은 액체배지에 균사체를 접종시켜 전배양물을 얻고, 이 전배양물을 100±5rpm, 약 25℃에서 7일간 진탕배양시켜서 전배양접종원을 얻는다. 그 후, 표 1과 같은 조성의 액체배양액을 준비하고, 이 액체배양액을 본 발명에 의한 통기배양기구에 모두 충전시킨다. 상기의 액체배양액 1,000ℓ에 대하여 상기의 전배양접종원을 20ℓ를 접종시키고, 30rpm 약 25℃에서 제균된 공기를 0.3vvm의 속도로 5일간 계속 공급하여 액체종균을 얻는다. 그 후, 배양이 완료된 액체종균을 볏짚배지에 균일하게 살포하여 느타리버섯을 재배한다.

(나) 표고버섯의 액체종균 배양

페트리접시에서 확대배양된 표고버섯의 균사체가 약 70%정도 자랐을 때, 균사체 조각을 표 2와 같은 조성의 액체배지에 접종시킨다.

위와 같은 액체배지에 균사체를 접종시켜 전배양물을 얻고, 이 전배양물을 90±5rpm, 약 25℃에서 7일간 진탕배양시켜서 전배양접종원을 얻는다. 그 후, 표 2와 같은 조성의 액체배양액을 준비하고, 이 액체배양액을 본 발명에 의한 통기배양기구에 모두 충전시킨다. 이 때, 거품제거제로서는 가정용 식용유인 옥수수기름을 사용한다. 상기의 액체배양액 1,000ℓ에 대하여 상기의 전배양접종원을 10ℓ를 접종시키고, 50rpm 약 26℃에서 제균된 공기를 0.4vvm의 속도로 6일간 계속 공급하여 액체종균을 얻는다. 그 후, 배양이 완료된 액체종균을 볏짚배지에 균일하게 살포하여 느타리버섯을 재배한다.

(다) 복령의 액체종균 배양

패트리접시에서 확대배양된 느타리버섯의 균사체가 약 70% 정도 자랐을 때, 전배양과정으로 이행한다. 이는 확대배양된 복령의 균사체 조각을 표 3과 같은 조성의 액체배지에 접종시킴으로써 이루어진다.

위와 같은 액체배지에 균사체를 접종시켜 전배양물을 얻고, 이 전양물을 120±5rpm, 약 25℃에서 8일간 진탕배양시켜서 전배양접종원을 얻는다. 그 후, 표 3과 같은 조성의 액체배양액을 준비하고, 이 액체배양액을 본 발명에 의한 통기배양기구에 모두 충전시킨다. 이 때, 거품제거제로서는 가정용 식용유인 대두유를 사용한다. 상기의 액체배양액 1,000ℓ에 대하여 상기의 전배양접종원을 40ℓ를 접종시키고, 50±5rpm 약 27℃에서 제균된 공기를 0.5vvm의 속도로 9일간 계속 공급하여 액체종균을 얻는다. 그 후, 배양이 완료된 액체종균을 볏짚배지에 균일하게 살포하여 느타리버섯을 재배한다.

(라) 상황버섯의 액체종균 배양

평판접시에서 확대배양된 상황버섯의 균사체가 약 80%정도 자랐을 때, 전배양으로 이행한다. 이는 확대배양된 상황버섯의 균사체 조각을 표 4와 같은 조성의 액체배지에 접종시킴으로써 이루어진다.

위와 같은 액체배지에 균사체를 접종시켜 전배양물을 얻고, 이 전양물을 100±5rpm, 약 27℃에서 9일간 진탕배양시켜서 전배양접종원을 얻는다. 그 후, 표 4와 같은 조성의 액체배양액을 준비하고, 이 액체배양액을 본 발명에 의한 통기배양기구에 모두 충전시킨다. 이 때, 거품제거제로서는 가정용 식용유인 옥수수유를 사용한다. 상기의 액체배양액 1,000ℓ에 대하여 상기의 전배양접종원을 40ℓ를 접종시키고, 60±5rpm 약 27℃에서 제균된 공기를 0.5vvm의 속도로 10일간 계속 공급하여 액체종균을 얻는다. 그 후, 배양이 완료된 액체종균을 볏짚배지에 균일하게 살포하여 느타리버섯을 재배한다.

[발명의 효과]

본 발명에 의한 액체종균의 제조방법은 종래와는 달리, 전 과정이 일련의 공정으로 진행되므로 대량생산이 가능하고, 또한 그 일련의 공정이 무균적으로 수행되므로 잡균의 감염에 의한 불량품의 발생이 현저하게 줄어들게 되는 효과가 있다. 또한, 종래의 액체배양방법과 같이 강제통기방식에 있어서는 액체배양물이 대용량일 경우 공기의 혼합효과가 적어서 액체종균의 품질이 조악하였으나, 본 발명에 있어서는 통기배양기구(20)의 교반부(41)를 이용하여 액체배양물에 대한 공기의 혼합효과를 극대화시킬 수 있으므로 고품질의 액체종균을 얻을 수 있게 된다.

또한, 본 발명의 제조방법에 있어서 제조된 액체종균은, 담자균의 균사체가 전배양의 초기부터 액체종균의 배양단계까지 심한 요동 내지 회전에 의한 환경속에서 성장한 반면에, 그 과정에서 종래와는 달리 효소분해과정이 없이 필요한 영양원을 직접 흡수하면서 성장하였으므로, 균사체의 자생력 및 활력이 뛰어난 효과가 있는 것이다. 따라서, 본 발명에 의한 액체종균을 사용할 경우, 동일한 재배조건하에서 비교할 때, 종래에 비하여 고품질의 버섯제품을 얻을 수 있다.

이상에서 본 발명의 바람직한 실시형태를 첨부된 도면에 의거하여 설명하였고, 그 실시예를 들어 상세히 설명하였으나, 이는 본 발명의 기술사상을 설명하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 그에 한정되는 것은 아니다. 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면, 상기의 명세서를 기준으로 하여 본 발명의 기술사상의 범위내에서 다양한 형태의 모방 및 변형이 가능함을 알 수 있을 것이다. 예컨대, 본 발명에 의한 액체종균의 배양방법에 통상의 방법을 부가하는 것들을 들 수 있다.

[ ※ 본 발명은 본 발명자(강원대학교 농업생명과학대학 성재모 교수)에 의해, 지난 1996.11.22.자로, '강원도'가 주최하고 '강원대학교 농촌개발연구소'에서 주관한『버섯 경쟁력 제고방안 세미나』에서 간행물로 발표되었는 바, 본 발명자는 특허법 제30조 제1항 제1호에 의거하여 신규성의제의 적용을 받고자 합니다.]

Claims (14)

1. 담자균류의 원균을 분양받아 이를 평판배양시키는 공정, 평판배양된 접종원을 전배양시키는 공정, 그리고 전배양된 접종원을 액체배양시키는 공정으로 구성된 담자균류의 액체배양방법에 있어서, 1) 상기의 전배양공정은 (a) 탄소원 2~7%(w/v), 질소원 0.1~1.0%(w/v), KH₂PO₄0~0.15%(w/v), MgSO₄·7H₂O 0~15%(w/v), 그리고 나머지 증류수로 이루어진 전배양액의 준비단계, (b) 상기의 전배양액에 평판배양된 담자균류를 접종하는 단계, (c) 상기의 접종된 배양물을 80~200rpm, 22~30℃의 진탕배양기에서 6일 내지 8일간 배양시키는 단계로 구성되고; 2) 상기의 액체배양공정은 (a) 탄소원 2~7%(w/v), 질소원 0.1~1.0%(w/v), KH₂PO₄0~0.15%(w/v), MgSO₄·7H₂O 0~15%(w/v), 그리고 나머지 증류수로 이루어진 액체배양액을 준비하는 단계, (b) 상기의 액체배양액에 상기의 전배양접종원을 무균적으로 자동접종시키되 상기의 액체 배양액 : 상기의 전배양접종원=20 내지 200 : 1의 비율로 접종시키는 단계, (c) 상기의 접종된 액체배양물을 5~100rpm, 22~28℃에서, 0.1 내지 1.0vvm 정도의 제균된 공기로 5일 내지 12일동안 통기배양시키는 단계로 구성되는 것을 특징으로 하는 담자균류의 액체종균 배양방법.
2. 제1항에 있어서, 1) (a) 전배양액의 준비단계와, 2) (a) 액체배양액의 준비단계에서 각각의 탄소원은 설탕, 맥아당, 과당, 포도당, 자당, 맥아추출물, 그리고 물엿으로 구성된 그룹 중에서 1 또는 2 이상을 선택하여 사용하는 것을 특징으로 하는 담자균류의 액체종균 배양방법.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 1) (a) 전배양액의 준비단계와, 2) (a) 액체배양액의 준비단계에서 질소원은 대두분이나 펩톤 중에서 어느 하나 또는 둘을 함께 사용하는 것을 특징으로 하는 담자균류의 액체종균 배양방법.
4. 제3항에 있어서, 2) (a) 액체배양액의 준비단계에서 액체종균의 배양시에 발생하는 거품을 없애기 위하여, 혼합이 완료된 배양액에 거품제거제를 첨가하는 것을 특징으로 하는 담자균류의 액체종균 배양방법.
5. 제4항에 있어서, 거품제거는 각종의 동물성 기름과 식물성 기름인 것을 특징으로 하는 담자균류의 액체종균 배양방법.
6. 제5항에 있어서, 식물성 기름은 가정용 식용유, 면실유, 파자마유, 올리브유, 야자유 등으로 구성된 그룹 중에서 1 또는 2 이상을 사용하는 것을 특징으로 하는 담자균류의 액체종균 배양방법.
7. 제1항에 있어서, 2) (b) 액체배양액의 자동 접종단계는 접종기구(10)를 사용하는 것을 특징으로 하는 담자균류의 액체종균 배양방법.
8. 제1항에 있어서, 2) (c) 액체배양물의 통기배양단계는 통기배양기구(20)를 사용하는 것을 특징으로 하는 담자균류의 액체종균 배양방법.
9. 제8항에 있어서, 상기의 통기배양기구(20)는 액체배양물을 수용하는 액체종균 배양기 몸체부(21)와, 상기 액체배양물을 고르게 혼합시켜주기 위한 교반부(41)를 포함하고 있으며 상기의 몸체부(21)에는 외부로부터 공기를 주입시키는 공기주입관(24)과, 외부에서 액체배양액을 투입시키거나 그 액체 배양액에 균사체를 접종시키는 접종관(26)과, 액체종균 배양기(21)의 내부로부터 공기를 배출시키는 공기배출관(28)과, 통기배양 후 액체종균을 배출시키는 액체종균의 배출관(29)이 설치되어 있고, 상기의 교반부(41)는 회전동력을 제공하는 전기모터(42)와, 상기 전기모터(42)로부터 소정의 회전력을 전달하는 회전축(44)과, 상기 회전축(44)으로부터 전달된 회전력으로 상기의 액체배양물(23)을 고르게 혼합시켜주는 교반날개(46)로 구성된 것을 사용하는 것을 특징으로 하는 담자균류의 액체종균 배양방법.
10. 제9항에 있어서, 상기의 통기배양기구(20)는 접종관(26)과 배출관(29)을 하나로 통합시켜 2개의 기능을 동시에 수행하는 것을 특징으로 하는 담자균류의 액체종균 배양방법.
11. 액체배양물을 수용하는 배양기 몸체부(21)와, 상기 액체배양물을 고르게 혼합시켜주기 위한 교반부(41)를 포함하고 있으며, 상기의 몸체부(21)에는 외부로부터 공기를 주입시키는 공기주입관(24)과, 외부에서 액체배양액을 투입시키거나 그 액체배양액에 균사체를 접종시키는 접종관(26)과, 액체 종균 배양기(21)의 내부로부터 공기를 배출시키는 공기배출관(28)과, 통기배양 후 액체종균을 배출시키는 액체종균의 배출관(29)이 설치되어 있고, 상기의 교반부(41)는 회전동력을 제공하는 전기모터(42)와, 상기 전기모터(42)로부터 소정의 회전력을 제공하는 회전축(44)과, 상기 회전축(44)으로부터 전달된 회전력으로 상기의 액체배양물(23)을 고르게 혼합시켜주는 교반날개(46)로 구성된 것을 특징으로 하는 담자균류의 액체종균 배양방법.
12. 제11항에 있어서, 상기의 통기배양기구(20)는 접종관(26)과 배출관(29)을 하나로 통합시켜 2개의 기능을 동시에 수행하는 겸용관(30)으로 구성된 것을 특징으로 하는 담자균류의 액체종균 배양방법.
13. 담자균류의 원균을 분양받아 이를 평판배양시키는 공정, 평판배양된 접종원을 전배양시키는 공정, 그리고 전배양된 접종원을 액체배양시키는 공정으로 배양되는 담자균류의 액체종균에 있어서, 1) 상기의 전배양공정은 (a) 탄소원 2~7%(w/v), 질소원 0.1~1.0%(w/v), KH₂PO₄0~0.15%(w/v), MgSO₄·7H₂O 0~15%(w/v), 그리고 나머지 증류수로 이루어진 전배양액의 준비단계, (b) 상기의 전배양액에 평판배양된 담자균류를 접종하는 단계, (c) 상기의 접종된 배양물을 80~200rpm, 22~30℃의 진탕배양기에서 6일 내지 8일간 배양시키는 단계로 구성되고; 2) 상기의 액체배양공정은 (a) 탄소원 2~7%(w/v), 질소원 0.1~1.0%(w/v), KH₂PO₄0~0.15%(w/v), MgSO₄·7H₂O 0~15%(w/v), 그리고 나머지 증류수로 이루어진 액체배양액을 준비하는 단계, (b) 상기의 액체배양액에 상기의 전배양접종원을 무균적으로 자동접종시키되 상기의 액체 배양액 : 상기의 전배양접종원=20 내지 200 : 1의 비율로 접종시키는 단계, (c) 상기의 접종된 액체배양물을 5~100rpm, 22~28℃에서, 0.1 내지 1.0vvm 정도의 제균된 공기로 5일 내지 12일동안 통기배양시키는 단계로 이행되는 것을 특징으로 하여 배양되어지는 담자균류의 액체종균 배양방법.
14. 제13항에 있어서, 상기의 담자균류는 느타리버섯, 검은비늘버섯, 만가닥버섯, 버들송이버섯, 표고버섯, 양송이버섯, 복령, 영지버섯, 상황버섯, 천마로 구성된 그룹 중에서 선택된 것을 특징으로 하여 배양되어지는 액체종균.

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