KR100188836B1 - 하이드록시아파타이트-항원 복합체 및 폴리-ig면역반응을 일으키는방법 - Google Patents

하이드록시아파타이트-항원 복합체 및 폴리-ig면역반응을 일으키는방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 하이드록실화된 칼슘 포스페이트(하이드록시아파타이트)와 함께 항원 또는 항원 혼합물을 포함하는 면역원을 사용하여 포유 동물의 점막 표면에 투여함으로써 포유동물에서 항원-감작 Ig-A-생성 임파아구를 생성하는 방법에 관한 것이다.

Description

[발명의 명칭]
하이드록시아파타이트(hydroxyapatite)-항원 복합체 및 폴리-Ig 면역 반응을 일으키는 방법
[발명의 배경]
본 발명은 미국 정부로부터 일부의 자금 지원을 받아 이루어졌으며, 미국 정부는 본 발명에 대해 일정한 권리를 갖는다.
본 발명은 수동 점막 면역 보호의 일반적 분야, 그리고 폴리-Ig 면역 시약 및 기법의 일반적 분야에 관한 것이다. 본 명세서에 사용된 폴리-Ig라는 용어는 중합체류의 항체, 예를 들면 IgA 및 IgM을 나타내는 것이다. IgM 항체는 일반적으로 면역 반응 초기 단계에서 생성되며 보호 점막 면역에서 중요한 인자는 아니다. 그러므로, 본 발명은 일반적으로 중합체 Ig 항체에 관한 것이며, 본 발명의 모든 관점에서 통상적이고 양호한 항체는 IgA 류 항체로서, 이 항체는 통상 다이머[이량체(二量體) 형태로 분비되며, 다소는 고분자 IgA 중합체 형태로 분비된다.
다수의 병원성 박테리아 및 비루스는 초기에 위장관, 호흡기 또는 생식기 계통의 세포(상피)와의 교차 반응에 의해 체내에 침투된다. 특정의 항체류인 IgA 항체는 이들의 표면을 보호한다. IgA 항체는 상피 표면하의 조직에 위치한 세포에 의해 생성된 다이머 또는 중합체 분자이다. 그 항체는 상피 세포에 의해 점막 분비물 내로 이동되어 가교 결합하고 아직 체내로 침투하지 못한 병원균을 피복하여 병원균이 상피 세포에 접촉해서 접착하는 것을 방지한다. 이와 같이 IgA 항체는 체외에 있는 병원균에 작용하며, 이들은 상피 표면을 통해 체내로 침투되는 것을 방지함으로써 보호한다.
천연의 IgA 반응은 항원을 점막 표면으로 운반함으로써 개시된다. 상기 항원은 점막 면역 시스템의 세포로 이루어진 특수화되고 조직화된 집합체(collection)를 함유하는 점막 이면층 영역으로 경상피의 항원을 운반하는 특수한 추출 위치(마이크로포울드(microfold) 또는 M세포)를 통해 체내로 주입된다. 보다 구체적으로 설명하자면, 제1도에 도시된 바와 같이 내강(lumen)(1)의 항원 A(●로 표시한 부분)는 위치(2)에서 M세포의 내강 표면에 결합한다. 상기 항원은 내재화되고 위치(3)에서 세포간 유출(transcytosis)을 일으켜 림프양 세포L(B 세포 및 T세포) 및 대식세포(M)와 같은 항원 처리/제공 세포를 함유하는 상피내 포켓(pocket)(4)에서 방출된다.
자연 면역된 숙주에서 IgA 항체는 호흡기와 소화기 계통, 생식기 계통 및 유선을 통해 상피 세포와 선 세포의 기저(내부)면상의 특이 수용체(폴리-Ig 수용체로 명명됨)에 결합됨으로써 분비물로 운반된다. 이에 관해서는 문헌[Solari 및 Krehenbuhl,Receptor-Mediated Transepithelial Transport of Polymeric Immunoglobulins, pp. 269-298, The Mammary Gland, Nelville 및 Daniel 편집, Plenum Publishing, Cambridge(1987); Mestecky(1987) J. Clin. Innunol. 7:265-276]을 참조할 수 있다. 수용체-IgA 복합체는 이들 세포를 통과하여 운반되어 내강(외부)세포 표면상으로 세포외 유출되고, 이 표면에서 상기 수용체는 효소 분해되며 IgA를 분비 성분(SC)으로 명명되는 수용체 단편과 함께 분비물내로 방출한다. 이에 관해서는 문헌[Mostov 등 (1980) Proc. Nat'l Acad. Sci. U.S.A. 77 : 7257-7261: Solari, R. 및 Kraehenbuhl, J.P. Cell 36:61-71(1984); Kuhn 및 Kraehenbuhl, J. Biol. Chem. 256: 12490-12495(1981)]을 참조할 수 있다. 분비 성분은 IgA의 단백질 분해 작용을 감소시키는 것으로 보고되어있다. 이에 대해서는 문헌[Lindh, J., J. Immunol. 114:284-286 (1975): Brown, Neucomb, Ishizaka, J. Clin. Invest. 49:1374 (1974)]를 참조할 수 있다.
일반적으로, 항원을 주입하는 것으로 구성된 기존의 면역화 방법은 IgG 류항체의 생성을 유발시키며, 이 항체들은 체내로 침투된 후 전신적으로 순환하여 병원균을 중화시킨다. 항원의 주입은 일반적으로 실질적인 IgA 응답을 유발시키지 못한다.
점막 방벽에서 IgA를 보호하는 데 이용되는 방법은 면역된 포유 동물의 능동적 보호 또는 면역된 동물의 점막 분비물을 사용하는 다른 포유 동물의 수동적 보호를 위한 경구 면역화 방법으로 구성된다. 이에 관해서는 문헌[Glass 등, New Eng. J. Med., 308:1389-1392(1983); Fubara 등, J. Immunol. 111(2):395-403(1973)]을 참조할 수 있다. 병원균 침투로부터 보호하기 위해서 단클론성(monoclonal)IgA 항체를 생성하여 호흡 점막 표면에 직접적으로 적용한바 있다. 이 방법에 관해서는 문헌[Mazanec 등. J. Virol., 61 : 2624-2625(1987)]을 참조할 수 있다.
능동 면역화 방법은 점막 표면을 무상(죽은) 박테리아 또는 비루스로 공격시키는 것으로 이루어질 수 있다. 특정 병원균에 대하여 상기 방법과 관련된 위험을 피하기 위해, 병원균의 면역원 표면 성분과 같은 성분 항원을 점막 표면에 적용할 수 있다. 경우에 따라서, 상기 항원을 더 큰 분자에 결합시킨다. 예를 들면, 콜레라(cholera) 독소 B 소단위를 항원에 결합시킨다. 이에 관해서는 문헌[Czerkinsky 등, Infection and Immunity 57 : 1072-1077 (1989): 콜레라 독소 B 소단위에 결합된 연쇄상 구균성 항원의 경구 투여]를 참조할 수 있다. 또한 생분해성 중심체를 항원 담체로서 사용한 예도 있다. 이에 관해서는 문헌[Eldridge 등, Curr. Top. Microbial Immunol. 146:59 이하(1989); 항원을 생분해성 미소구에 결합시키는 방법]을 참조할 수 있다. 상기 건조 단백질 항원은 화학 결합없이 공중합체 매트릭스(matrix)에 분산시킨다.
[발명의 요약]
본 발명자들은 하이드록시화된 칼슘 포스페이트(HCP) 입자가 특히 점막 표면을 통해 주입되는 치료제에 대해 유용한 담체라는 것을 발견하였다. HCP 와 치료용 활성 성분(예: 항원 또는 약제와같은 생물학적 활성 물질)의 복합체는 상피를 통해 운반되어 바람직한 치료 반응을 일으키는데, 예를 들면 그 복합체는 폴리 Ig 면역 반응을 일으킨다.
가장 일반적인 형태에 있어서, 본 발명의 특징은 하이드록시화된 칼슘 포스페이트와 활성 성분의 복합체를 포유 동물의 점막 표면에 적용함으로써 활성 성분을 포유 동물에 투여하는 것이다.
본 발명의 구체적인 제1 실시양태는 포유 동물에서 항원-감작 Ig-A-생성 림프아구를 생성시키는 방법이다. 상기 방법에서는, 하이드록시화된 칼슘 포스페이트 (HCP) 입자와 결합된 항원 또는 항원 혼합물로 구성되는 면역원을 포유 동물의 점막 표면에 투여한다.이와 같은 본 발명의 바람직한 제1 실시양태에서는 항원-감작림프아구를 회수해서 영구 생존시켜 Ig-A 생성 하이브리도마(hybridoma)를 산출한다.
본 발명의 구체적인 제2 실시양태는 상기 기재된 면역원을 포유 동물의 점막 표면에 투여하는 것을 포함하여 포유 동물(특히 사람)에 백신을 접종하는 방법이다.
또 다른 실시양태는 점막을 통해 치료제(예: 약제)를 운반하는 방법이다.
또한 본 발명은 일반적으로 상피를 통해 운반하기에 적합한 크기의 하이드록시화된 칼슘 포스페이트 입자와 활성 성분을 포함하는 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 바람직한 실시양태중 어느것에서도, 상기 하이드록시화된 칼슘 포스페이트는 상피를 통해 운반하기에 적합한 소립자(microparticle) 형태이다. 또한, 상기 항원은 병원균 또는 정자의 외인성 결정 인자(예: 비루스 외막(coat) 또는 외피(envelope) 단백질, 리포다당류 또는 세포 표면 단백질)로 구성된다. HCP의 한 형태는 하이드록시아파타이트(HA)로서, 이것은 이하에서 설명하는 시판되는 결정형의 하이드록시화된 칼슘 포스페이트이다.
본 발명에 따른 바람직한 활성 성분 투여방식은 구강, 질, 코, 직장, 눈, 또는 중이(middle ear)를 경유해서 투여하는 것이다. 경구 투여는 장 점막을 비롯한 다른 위장 점막으로 활성 성분을 운반할 수 있다.
본 발명은 생물학적 효과(예를 들면, 점막 면역 시스템에 대한 발현)를 위해 점막에 접착될 수있고, 또한 상피 지지체를 통해 효율적으로 운반될 수 있는 유효한 다가 복합체를 제공한다. 활성 성분, 특히 단백질의 HCP에의 흡착은 비교적 간단하고 신속하며 저렴하므로, 본 발명은 경제적으로 실시할 수 있다. 또한, HCP는 단백질 및 다른 항원을 비롯한 당해 항원에 대해 일반적으로 높은 친화도를 가지므로, 본 발명은 광범위하게 적용될 수 있다. HCP는 일반적으로 HA가 골격의 필수 성분이고 전신 면역 시스템이 정상적인 골격 재흡수 기간 동안에 통상 HA와 접촉한다는 사실에 의해 입증된 바와 같이 비독성이며, 상기 골격 재흡수는 건강한 개체에서 극미한 정도로 일정하게 일어나는 과정이다. 따라서, 순수한 HA는 숙주 면역반응 없이 안전하게 투여 가능하고, 항 매개체 면역 반응없이 동일하거나 상이한 항원에 대해 매개체로서 반복 투여가 가능하다. 또한, HCP, 특히 HA는 비교적 저렴하다. HA는 M 세포에 의해 경상피 운반하기에 적합한 크기로 쉽게 감소될 수 있으며, 이와같이 감소된 크기는 면역 반응을 향상시킬 수 있도록 망내계(網內系)의 대식 세포 및 다른 세포에 의해 섭취되기에 적합하다. 결과적으로, 본 발명의 면역원의 M 세포 흡수 및 운반은 비교적 선택성이 있다.
이하, 본 발명의 다른 특징 및 장점들을 바람직한 실시양태의 개시를 통해 설명하고자 한다.
[바람직한 실시양태의 개시]
[도면]
제1도는 M 세포를 통한 항원의 세포간 유출을 개략적으로 나타낸 것이다.
[시약]
일반적으로, 하기의 방법과 재료를 Neutra, Kraehenbuhl 및 Weltzin에 의해 본 출원과 동시에 출원된 공유 특허출원(발명의 명칭 : 합성 폴리-Ig 수용체, 수용체-항체 복합체, 그것의 제조 방법 및 용도)에 더욱 상세히 설명된 IgA 보호를 위한 방법의 일부로 사용할 수 있으며, 상기특허출원은 본 명세서에 참고로 인용하였다. 특히, 본 발명의 면역원 및 방법은 수동 면역화를 위한 폴리 Ig 시약을 산출하기 위해 상기 출원에 개시된 바와 같이 안정제 단백질과 함께 이용될 수 있다.
본 발명의 바람직한 실시양태는 하이드록시아파타이트-항원 복합체 및 그것의 용도이다. 특히, 하이드록시아파타이트는 결정형 칼슘 포스페이트, Ca10(PO4)6(OH)2의 변형된 형태이다. 이것은 그 보편적인 단백질 결합력으로 인해 단백질 분류제로서 사용된다. 일반적으로 시판되는 HA는 정상의 골격 조직에서 무기HA와 화학적 및 물리적으로 유사한 슬랩(slab)형 결정으로 구성된다. 출발 물질에 오염 물질이 없는 한, HA의 섭취는 섭취용으로 만들어진 분쇄된 골격으로부터 유도된 영양 칼슘/인의 보충물이 존재한다는 사실로 입증된 바와 같이 비교적 안전해야 한다.
시판되는 고분해능 HA(칼바이오켐(Calbiochem) 제품)는 크기가 광범위한 결정으로 구성된다. 제조업자에 의해서 제시된 바에 의하면, HA 결정은 너무 커서 그 전체로서는 상피 지지체를 효율적으로 통과할 수 없을 것 같다. 예를 들면, 길이 1㎛ 이상의 결정은 M 세포에 의해 흡수되지 않을 가능성이 있다. 그러므로, 본 발명에 사용하기 위해서는, 시판되는 HA 결정을 초음파 처리 등에 의해 작고 비교적 균일한 결정 분절로 파쇄시킨다.
최종 생성되는 초음파 처리된 결정은 크기에 있어서 다소 다르기는 하지만, 그 크기는 일반적으로 1㎛를 초과하지 않는다. 대부분의 HA가 약 0.01㎛-0.1㎛의 분절로 존재하는 것이 바람직하다. 분절은 표준 기법을 이용하여 전자 현미경과 광 산란에 의해 측정할 수 있다.
HA는 높은 결합력과 속도로 저농도 또는 생리적으로 안정한 농도하에 대부분의 단백질을 결합한다. 결합은 칼슘 부위와 단백질의 산성기 및 포스페이트 기와의 상호작용, 및 포스페이트와 염기성 단백질 기와의 상호작용에 좌우되는 것으로 생각된다. 고분자량 단백질은 HA에 더욱 단단히 흡착되는 경향이 있지만, 단백질 하전 또한 그러한 역할을 한다. 예를 들면, HA 1g은 소 혈청 알부민 약30mg을 결합할 수 있다. 이와 같이, HA는가교 결합용 화학물질을 첨가하는 일 없이, 극심하거나 변성을 일으키는 조건을 사용하지 않고, 또한 유용한 순수 항원을 소비하는 일 없이 희석된 용액으로부터 단백질 항원을 효율적으로 포획할 수 있다.
[용도]
HA에 흡착된 항원은 사람 또는 다른 포유 동물의 활성 백신에 사용할 수 있다.본 발명은 특히, 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa), 헤모필러스 인플루엔자(Hemophilus influenzae), 비브리오 콜레라(Vibrio cholerae), 보르데텔라 페르투시스(Bordetella pertussis), 코리네박테리아 디프테리아(Corynebacterium diphtheriae), 에스케리치아 콜리(Escherichia coli),살모넬라 타이피(Salmonella typhi) 및 타이피뮤리움(typhimurium), 클로스트리디움 페르프린겐스(Clostridium perfringens) 및 다른 장의 클로스트리디아 (clostridiae), 시겔라 다이센테리아(Shigella dysenteriae), 시겔라 플렉스네리 네이스세리아 고노르헤아(Shigella flexnerii Neisseria gonorrheae), 트리코모나스(Trichomonas), 엔타메바 히스토리타카(Entameba histolytica), 기아르디아 람브리아(Giardia lamblia), 스트렙토코커스(Streptococcus), 호흡 합포체 비루스, 로타비루스(rotavirus), 레오비루스(reovirus), 인체 면역결핍 비루스; 인체 T 세포 림프 친화성 비루스, 타임 I 및 II, 폴리오(polio) 비루스, 라이노비루스(Rhinovirus), 인플루엔자 비루스, 헤르페스(herpes) 비루스, 인체 유동종 비루스: AIDS 2° 병원균(예: 뉴모시스티스(Pneumocystis)), 및 효모(예: 모닐리아(monilia))에 대해 보호하는데 유용하다. 또한 본 발명은 호흡기 또는 소화기 점막 표면에 접촉하는 알레르기 항원에 대해 보호하는데 유용하다. 이외에도, 본 발명은 질에서 정자가 가교 결합하여 임신하는 것을 막고, 자궁경부(cervix) 및 자궁을 통한 정자의 운동을 막는데 유용하다.
각각의 경우에, 공지된 적절한 항원, 예를 들면 전체 병원균 또는 외부에서 제공된 특이성 항원(예: 비루스 외막 단백질, 또는 박테리아 세포표면 단백질, 자모(pilus) 단백질), 리포다당류, 비루스 캡시드(capsid)또는 외피 단백질, 원생 동물의 원형질막 표면 성분, 정자 표면 단백질, 또는 호흡기 알레르기 항원을 사용한다. 톡소이드(toxoid), 예를 들면 CRM-197, 및 비활성 디프테리아 독소(Uchida 등, J. Biol. Chem. 248:3838-3844 (1973))를 사용할 수있다.상기 항원은 상기 방법에 따라 바람직한 보호성 항체를 분비하는 하이브리도마를 생성하는데 사용된다. 몇가지 예를 들어 보면, 항 비루스 콜레라 단클론성 폴리-Ig 항체를 생성하기에 적합한 tcPA 자모 단백질이 국제출원 공개 WO 88/08437호(본 명세서에 참고로 인용함)에 기재되어 있다.미국 특허 제4,725,669호에는 항 HIV 폴리-Ig 단클론성 항체를 생성하기에 적합한 HIV(HTLV-III) 피막 당단백질이 기재되어있다. 연쇄상 구균의 감염, 특히 그룹 B 연쇄상 구균의 감염에 대해 보호하기 위한 항원 제법이 하기 특허 및 특허 출원에 개시되어 있다 : 미국 특허 제4,367,221호, 제4.367.222호, 제4,367,223호, 제4,356,263호, 제4,207,414호(재발행 31,672호) 및 WO 87/06267호.
다른 적합한 항원이 문헌[Bacterial Vaccines and Local Immunity Proceedings of the Sclavo International Conf., Siena, Italy(17-19 November 1986)]에 개시되어 있다. HIV 항원에 적합한 특이적인 시약에 대해서는 [AIDS Research and Reference Reagent Program, National Institute of Health (1989.6)]에 개시되어 있다. 예를 들면, 마이크로진시스 사(MicroGeneSys, Inc,)에서 gp 120이 시판된다. 또한 LDH-C4와 같은 정자 세포 표면 항원이 알려져 있다.[참조: Shaha 등 및 Talwar 등, Vaccine 7:97-100(1989): 및 Shaha 등. Int. J. Androl. 11 : 479(1988)].
본 발명의 실시를 위한 항원의 선택에 있어서 특히 중요한 것은 점막 보호가 체내로 침투되는 것을 막는 가교 결합을 한다는 것이며, 이러한 기작에서는 중합성 항체가 병원균을 죽이거나 또는 중화시킬 필요가 없다. 대조적으로, 전신(IgG)보호에 있어서는 일반적으로 병원균을 중화시키는 데 효과적인 결합이 수반된다. 따라서, 특히 비브리오 콜레라와 결합하는 단클론성 항체의 존재로 입증된 바와 같이 병원균에 결합하는 모든 IgG 항체가 보호성이 있는 것이 아니라, 그것은 숙주내에서 임상 증후의 전이 증식, 성장 및 발현을 예방한다는 측면에서 볼 때 병원균을 중화시키지 않는다. 따라서, 보호성 IgA 항체를 유발시키는데 유용한 일반적인 항원 및 결정 인자가 현저하게 증가된다.
특히, 상기 HA에 흡착된 항원은 전술한 방법에 따라 대량으로 생성하기 위해 적절히 변형시켜 제조된다. 상기 HA에 흡착된 항원 또는 항원 혼합물은 생리적으로 허용가능한 부형제에 혼합되어, 직접적으로 점막 표면 조직(예: 구강, 코, 직장 및/또는 질표면)에 적용되거나 또는 운반된다.상기 제제는 에어로졸 (aerosol), 현탁액, 캡슐 및/또는 좌약 형태로 투여된다. 당업자라면 공지된 기법에 의해 상기 부형제를 제제화하는 방법을 알 수 있을 것이다.
[용도]
또한, 본 발명은 IgA 생성 하이브리도마를 제조하는 데 특히 유용하다. 상기 하이브리도마는 포유동물을 공격함으로써, 예를 들면, 상기 기재된 조성물을 점막 표면에 적용하여 림프양 조직내에 풍부한 페이어(Peyer)의 패치(patch) 점막 또는 다른 점막으로부터 림프양 세포를 회수하고, 이어서 공지된 기법에 의해 림프양 세포를 골수종 세포에 결합시킴으로써 용이하게 제조된다.[참조 : 상기 기재된 출원과 동시에 출원된 공유의 미국 특허 출원 제07/510,161호].
이하, 실시예에 따라 본 발명을 설명하고자 하나, 후술하는 실시예들은 설명을 목적으로 제시한 것일 뿐, 본 발명을 제한하는 것은 아니다.
[실시예 1]
PBS 20㎖에 현탁된 HA(칼바이오켐사) 2g을 마이크로손(Microson) 세포분해기(뉴욕, 파밍데일 소재, 히트시스템 울트라소닉스사)를 고도로 설정(140, 사용율 80%)해서 사용하여 실온에서 30분 동안 탐침 초음파기로 초음파 처리하였다. 평균 결정의 크기는 전자 현미경으로 측정하였을 때 초츰파 처리후 약 0.01㎛ × 0.1㎛이다. 분광 분석기의 흡광도로 적당한 초음파 처리를 검사할 수 있다. 예를 들면, 초음파 처리전 현탁액 2mg/㎖의 흡광도(650nm에서 측정)는 0.108 O.D. 단위였고, 결정 크기를 감소시킨후에 O.D.는 2.060으로 증가하였다.
[실시예 2]
65kD (알부민) 내지 450kD(페리틴)범위의 다양한 크기를 갖는 단백질로 포화되도록 피복된 상기크기의 HA 결정은, 마우스와 토끼의 장 내강(lumen)에 주입했을 때, 페이어 패치의 M 세포에 의해 선택적으로 결합되어 운반되었다. 상기 방법은 미립자 면역원 형태로 단백질을 점막 면역 시스템 세포에 효과적으로 운반한다.
마우스(25g)의 경구 면역화: PBS 200㎕ 중의 소량의 단백질(예: 30㎍)을 적당량(예: 단백질 30㎍에 대해 HA 1 mg)의 예비 초음파 처리 및 세척된 HA와 혼합하였다. 상기 혼합물을 4℃에서 1시간 동안 교반하고, HA를 마이크로 퓨지(microfuge)에서 10,000 rpm 으로 2분 동안 회전시켜서 펠릿 형태로 만들었다. 상기 펠릿을, 위산을 중화시키는 완충제를 함유해도 좋은 물 200㎕중에서 회전시키거나 또는 초음파 처리하여 재현탁시켰다.
그밖의 실시양태도 하기 특허 청구의 범위에 포함된다.

Claims (7)

  1. 활성 성분과 하이드록시화된 칼슘 포스페이트를 포함하는 것을 특징으로 하는, 활성 성분을 포유 동물의 점막 표면에 투여하는 데 적합한 복합체.
  2. 제1항에 있어서, 상기 하이드록시화된 칼슘 포스페이트가 상피를 통해 운반하기에 적합한 입자의 형태로 존재하는 것인 복합체.
  3. 제1항에 있어서, 상기 활성 성분이 하이드록시화된 칼슘 포스페이트와 결합된 항원 또는 항원 혼합물을 포함하는 면역원인 것인 복합체.
  4. 제1항에 있어서, 상기 하이드록시화된 칼슘 포스페이트의크기가 1미크론 이하인 것인 복합체.
  5. 제4항에 있어서, 상기 하이드록시화된 칼슘 포스페이트의 크기가 약 0.01 미크론 내지 약 0.1 미크론인 것인 복합체.
  6. 제3항에 있어서, 상기 항원이 병원균 또는 정자의외인성 결정 인자로 구성되는 것인 복합체.
  7. 제3항에 있어서, 상기 항원이 비루스 외막 단백질, 비루스 외피 단백질, 세포표면 리포다당류 또는 세포 표면 단백질인 것인 복합체.
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