JPH107575A - 細菌性赤痢の処置 - Google Patents
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- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Abstract
(57)【要約】
【課題】 腸内E. coli感染症に関連する志賀様毒素の
中和のための、この感染症の溶血性尿毒症症候群への進
行を阻止する方法を提供すること。 【解決手段】 患者に有効量の、支持体に非ペプチド性
リンカーアームを介して結合されているαGal(1→4)βG
alサブユニットを含む薬学的に不活性な親和性支持体を
含む薬学的組成物を投与する。ここでこのサブユニット
はSLT毒素を結合し、ここで該薬学的組成物は感染症の
発現の約３日間以内に投与される。この方法により、志
賀様毒素に仲介される腸管出血性E. coli感染症に起因
する患者における溶血性尿毒症症候群の発症が阻止され
る。
中和のための、この感染症の溶血性尿毒症症候群への進
行を阻止する方法を提供すること。 【解決手段】 患者に有効量の、支持体に非ペプチド性
リンカーアームを介して結合されているαGal(1→4)βG
alサブユニットを含む薬学的に不活性な親和性支持体を
含む薬学的組成物を投与する。ここでこのサブユニット
はSLT毒素を結合し、ここで該薬学的組成物は感染症の
発現の約３日間以内に投与される。この方法により、志
賀様毒素に仲介される腸管出血性E. coli感染症に起因
する患者における溶血性尿毒症症候群の発症が阻止され
る。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、病原性E. coli感
染によって引き起こされる下痢の処置に関する。さらに
詳細には、本発明は、腸のE. coli感染症に関連する志
賀様毒素（SLT）の中和のための方法に関し、この方法
はこの感染症の溶血性尿毒症症候群への進行を阻止す
る。
染によって引き起こされる下痢の処置に関する。さらに
詳細には、本発明は、腸のE. coli感染症に関連する志
賀様毒素（SLT）の中和のための方法に関し、この方法
はこの感染症の溶血性尿毒症症候群への進行を阻止す
る。
【０００２】
【従来の技術】病原性E. coliの株によって引き起こさ
れる下痢は、種々のエンテロトキシンの産生に関連する
ことが見出された。ある種の病原性E. coliは、志賀赤
痢菌性赤痢（Shigella-caused dysentery）に関連する
志賀毒素に密接に関連するエンテロトキシンを産生す
る。単離すべき志賀様毒素（SLT）のファミリーの最初
のメンバーは、アフリカミドリザル（Vero）細胞に細胞
傷害性であり、最初はベロ毒素と呼ばれた。その構造の
志賀毒素への類似性がそれに関する遺伝子の配列決定に
より確立されて以来、この毒素は現在、より一般的に志
賀様毒素Ｉ（SLTI）と呼ばれている[５、６、７]。
れる下痢は、種々のエンテロトキシンの産生に関連する
ことが見出された。ある種の病原性E. coliは、志賀赤
痢菌性赤痢（Shigella-caused dysentery）に関連する
志賀毒素に密接に関連するエンテロトキシンを産生す
る。単離すべき志賀様毒素（SLT）のファミリーの最初
のメンバーは、アフリカミドリザル（Vero）細胞に細胞
傷害性であり、最初はベロ毒素と呼ばれた。その構造の
志賀毒素への類似性がそれに関する遺伝子の配列決定に
より確立されて以来、この毒素は現在、より一般的に志
賀様毒素Ｉ（SLTI）と呼ばれている[５、６、７]。
【０００３】その後、SLTファミリーのさらなるメンバ
ーが単離され、それらは遺伝子配列に基づいて、または
宿主特異性に基づいて血清学的に区別され得る[37〜4
3]。種々のタイプのSLTIIが記載され、そしてそれらが
単離されたE. coli株および冒された宿主によって種々
の名称が当てられた。このようにして、変種はSLTII; v
tx2ha; SLTIIvh; vtx2hb; SLTIIc; SLTIIvpなどと命名
された。
ーが単離され、それらは遺伝子配列に基づいて、または
宿主特異性に基づいて血清学的に区別され得る[37〜4
3]。種々のタイプのSLTIIが記載され、そしてそれらが
単離されたE. coli株および冒された宿主によって種々
の名称が当てられた。このようにして、変種はSLTII; v
tx2ha; SLTIIvh; vtx2hb; SLTIIc; SLTIIvpなどと命名
された。
【０００４】すべてのSLTは酵素（Ａ）サブユニットお
よび複数（Ｂ）サブユニットからなる多量体タンパク質
である。Ｂオリゴマーは、宿主細胞レセプターへの結合
を可能にする毒素の結合部分である。SLTI、SLTIIおよ
びSLTIIvhのＢサブユニットは、非還元末端に少なくと
も二糖サブユニットαGal(1→4)βGalを含有する宿主細
胞のグロボ系糖脂質レセプターを認識し；SLTIIvpはこ
のサブユニットを含有するレセプターには結合するが必
ずしも非還元末端には結合しないことが示された[２、4
4〜51]。Ａサブユニットは、哺乳動物細胞中で28Sリボ
ソームRNAを脱プリン化する酵素活性（Ｎ−グリコシダ
ーゼ）を有する。この酵素活性は毒素感染細胞のタンパ
ク質合成を行う能力を失わせる。
よび複数（Ｂ）サブユニットからなる多量体タンパク質
である。Ｂオリゴマーは、宿主細胞レセプターへの結合
を可能にする毒素の結合部分である。SLTI、SLTIIおよ
びSLTIIvhのＢサブユニットは、非還元末端に少なくと
も二糖サブユニットαGal(1→4)βGalを含有する宿主細
胞のグロボ系糖脂質レセプターを認識し；SLTIIvpはこ
のサブユニットを含有するレセプターには結合するが必
ずしも非還元末端には結合しないことが示された[２、4
4〜51]。Ａサブユニットは、哺乳動物細胞中で28Sリボ
ソームRNAを脱プリン化する酵素活性（Ｎ−グリコシダ
ーゼ）を有する。この酵素活性は毒素感染細胞のタンパ
ク質合成を行う能力を失わせる。
【０００５】SLTの作用部位は腎臓および腸管膜血管系
に見出される内皮細胞であり、そしてSLTは腎不全およ
び尿中ヘモグロビンを生じ得る損傷を引き起こし得る。
SLTは溶血性尿毒症症候群における原因物質である。SLT
はまた出血性大腸炎（血下痢）に一部関与し得る。
に見出される内皮細胞であり、そしてSLTは腎不全およ
び尿中ヘモグロビンを生じ得る損傷を引き起こし得る。
SLTは溶血性尿毒症症候群における原因物質である。SLT
はまた出血性大腸炎（血下痢）に一部関与し得る。
【０００６】溶血性尿毒症症候群（HUS）は小児期の急
性腎不全の主な原因であり、E. coliO157:H7および他の
ベロ毒素/志賀様毒素産生E. coli（VTEC）への感染後５
〜10日内に約７〜10%の小児を冒す。
性腎不全の主な原因であり、E. coliO157:H7および他の
ベロ毒素/志賀様毒素産生E. coli（VTEC）への感染後５
〜10日内に約７〜10%の小児を冒す。
【０００７】このような病原性E. coliに関する最近の
関心は、特定の食肉のE. coli汚染とそれに続くこの食
肉の摂取後のヒトにおける感染との間の公知の相関に集
中している。問題はハンバーガー用の肉に関して特に深
刻であって、不十分に調理されたこの肉の摂取が感染の
原因であると見出されている。この問題は、SLTの発現
を介した病原性E. coli感染症からHUSへの迅速な進行
が、腸管の最初のコロニー形成に続いて、感染した個体
の血流中へのSLT毒素の貫膜送達により内皮損傷および
その後の腎臓への関与が起こるという仮説を示唆すると
いう事実と結びつけられる。
関心は、特定の食肉のE. coli汚染とそれに続くこの食
肉の摂取後のヒトにおける感染との間の公知の相関に集
中している。問題はハンバーガー用の肉に関して特に深
刻であって、不十分に調理されたこの肉の摂取が感染の
原因であると見出されている。この問題は、SLTの発現
を介した病原性E. coli感染症からHUSへの迅速な進行
が、腸管の最初のコロニー形成に続いて、感染した個体
の血流中へのSLT毒素の貫膜送達により内皮損傷および
その後の腎臓への関与が起こるという仮説を示唆すると
いう事実と結びつけられる。
【０００８】悪化を招く因子として、当該分野は腸管出
血性E. coli感染症の処置における抗生物質の使用を示
唆する[８]。抗運動性薬物（antimotility drug）の使
用もまた逆効果であるようである[９]。
血性E. coli感染症の処置における抗生物質の使用を示
唆する[８]。抗運動性薬物（antimotility drug）の使
用もまた逆効果であるようである[９]。
【０００９】このような感染症の処置のための１つの報
告された方法は、感染した患者へのαGal(1→4)βGalサ
ブユニットを含む薬学的に不活性な親和性支持体の経口
投与である[10]。この支持体は患者の腸管を通過し、こ
こでαGal(1→4)βGalサブユニットは志賀様毒素を結合
する。次いで、この固体支持体に結合した毒素は糞便の
一部として身体から排泄される。この手順は、このよう
な毒素を身体から排除し、次いで毒素の蓄積に関連した
症状の出現を阻止するための最初に報告された（唯一か
もしれない）方法の１つである。
告された方法は、感染した患者へのαGal(1→4)βGalサ
ブユニットを含む薬学的に不活性な親和性支持体の経口
投与である[10]。この支持体は患者の腸管を通過し、こ
こでαGal(1→4)βGalサブユニットは志賀様毒素を結合
する。次いで、この固体支持体に結合した毒素は糞便の
一部として身体から排泄される。この手順は、このよう
な毒素を身体から排除し、次いで毒素の蓄積に関連した
症状の出現を阻止するための最初に報告された（唯一か
もしれない）方法の１つである。
【００１０】この報告された方法によりもたらされた顕
著な前進にもかかわらず、腸管出血性E. coli感染症の
処置におけるさらなる前進が、HUSの発生およびそれに
関連した高い死亡率のレベルを減少させるために必要で
ある。
著な前進にもかかわらず、腸管出血性E. coli感染症の
処置におけるさらなる前進が、HUSの発生およびそれに
関連した高い死亡率のレベルを減少させるために必要で
ある。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】本発明は上記の問題を
解決するためのものである。本発明の目的は、志賀様毒
素に仲介される腸管出血性E. coli感染症に起因する患
者における溶血性尿毒症症候群の発症を阻止するための
方法を提供することにある。
解決するためのものである。本発明の目的は、志賀様毒
素に仲介される腸管出血性E. coli感染症に起因する患
者における溶血性尿毒症症候群の発症を阻止するための
方法を提供することにある。
【００１２】
【課題を解決するための手段】本発明は、腸管出血性E.
coli感染に起因するHUSの臨床的発症が、SLTを結合す
るαGal(1→4)βGalサブユニットを含む薬学的に不活性
な親和性支持体を含む薬学的組成物の、時間が重要であ
る（time critical）投与により顕著に軽減されるとい
う驚くべきそして予期しなかった発見に関する。詳細に
は、腸管出血性E. coli感染に起因するHUSの臨床的発症
は、この薬学的組成物が感染症の発現の３日間以内に投
与された場合に軽減されることが見出された。反対に、
この時間帯の後または腸以外の器官が感染に関与すると
きのこの薬学的組成物の投与は、この組成物のHUSの発
症を軽減する能力を実質的に減少させる。
coli感染に起因するHUSの臨床的発症が、SLTを結合す
るαGal(1→4)βGalサブユニットを含む薬学的に不活性
な親和性支持体を含む薬学的組成物の、時間が重要であ
る（time critical）投与により顕著に軽減されるとい
う驚くべきそして予期しなかった発見に関する。詳細に
は、腸管出血性E. coli感染に起因するHUSの臨床的発症
は、この薬学的組成物が感染症の発現の３日間以内に投
与された場合に軽減されることが見出された。反対に、
この時間帯の後または腸以外の器官が感染に関与すると
きのこの薬学的組成物の投与は、この組成物のHUSの発
症を軽減する能力を実質的に減少させる。
【００１３】従って、１つのこの方法の局面において、
本発明は、志賀様毒素により仲介される腸管出血性E. c
oli感染症に起因する患者における溶血性尿毒症症候群
の発症を阻止する方法に関する。この方法は、この患者
に、αGal(1→4)βGalサブユニットを含む薬学的に不活
性な親和性支持体を含む有効量の薬学的組成物を投与す
る工程を包含する。このαGal(1→4)βGalサブユニット
は、非ペプチド性リンカーアームを介して薬学的に不活
性な親和性支持体に結合している。ここで、このサブユ
ニットはSLT毒素を結合し、そしてここでこの薬学的組
成物は感染症の発現の約３日間以内に投与される。好ま
しい実施態様において、腸への関与以外の器官への関与
に及ぶ前に、この薬学的組成物は患者に投与される。
本発明は、志賀様毒素により仲介される腸管出血性E. c
oli感染症に起因する患者における溶血性尿毒症症候群
の発症を阻止する方法に関する。この方法は、この患者
に、αGal(1→4)βGalサブユニットを含む薬学的に不活
性な親和性支持体を含む有効量の薬学的組成物を投与す
る工程を包含する。このαGal(1→4)βGalサブユニット
は、非ペプチド性リンカーアームを介して薬学的に不活
性な親和性支持体に結合している。ここで、このサブユ
ニットはSLT毒素を結合し、そしてここでこの薬学的組
成物は感染症の発現の約３日間以内に投与される。好ま
しい実施態様において、腸への関与以外の器官への関与
に及ぶ前に、この薬学的組成物は患者に投与される。
【００１４】本発明の目的のために、感染症の発現はSL
Tに仲介されるE. coli感染症に関連する少なくとも１つ
の症状の同定の後に決定される。このような症状は、例
えば下痢および以下のうち１つを有する患者を包含す
る：腹部痙攣（abdominal cramping）、糞便中の血液、
直腸脱、患者糞便中でのベロ毒素産生E. coliの検出；
ベロ毒素産生E. coliを含むことが疑わしい食物の接
種；またはSLT仲介感染症を有することが既知である個
体との密接な接触。好ましくは、感染症の発現は血下痢
によって出現する。特に好ましい実施態様において、個
体がSLT仲介E. coli感染症を患っているいるという最初
の臨床的評価は、糞便の診断的評価により確認される。
SLT仲介E. coli感染症を検出するための１つの市販の診
断的道具は、Meridian Diagnostic, Inc., Cincinnati,
Ohio, USA 45244によりPremier EHECの名称で販売され
ている。
Tに仲介されるE. coli感染症に関連する少なくとも１つ
の症状の同定の後に決定される。このような症状は、例
えば下痢および以下のうち１つを有する患者を包含す
る：腹部痙攣（abdominal cramping）、糞便中の血液、
直腸脱、患者糞便中でのベロ毒素産生E. coliの検出；
ベロ毒素産生E. coliを含むことが疑わしい食物の接
種；またはSLT仲介感染症を有することが既知である個
体との密接な接触。好ましくは、感染症の発現は血下痢
によって出現する。特に好ましい実施態様において、個
体がSLT仲介E. coli感染症を患っているいるという最初
の臨床的評価は、糞便の診断的評価により確認される。
SLT仲介E. coli感染症を検出するための１つの市販の診
断的道具は、Meridian Diagnostic, Inc., Cincinnati,
Ohio, USA 45244によりPremier EHECの名称で販売され
ている。
【００１５】さらなる局面において、本発明は、志賀様
毒素に仲介される腸管出血性E. coli感染症を発現する
患者における溶血性尿毒症症候群の発症を阻止する方法
を提供する。この方法は、患者に有効量の薬学的に不活
性な親和性支持体を含む薬学的組成物を投与する工程を
包含する。この薬学的に不活性な親和性支持体は、αGa
l(1→4)βGal、αGal(1→4)βGal(1→4)βGlcNAcおよび
αGal(1→4)βGal(1→4)βGlcからなる群より選択され
るオリゴ糖を含む。このオリゴ糖は該支持体に非ペプチ
ド性リンカーアームを介して結合されている。ここでこ
の薬学的組成物は感染症の発現の約３日間以内に投与さ
れる。好ましい実施態様において、腸への関与以外の器
官への関与に及ぶ前に、この薬学的組成物は患者に投与
される。
毒素に仲介される腸管出血性E. coli感染症を発現する
患者における溶血性尿毒症症候群の発症を阻止する方法
を提供する。この方法は、患者に有効量の薬学的に不活
性な親和性支持体を含む薬学的組成物を投与する工程を
包含する。この薬学的に不活性な親和性支持体は、αGa
l(1→4)βGal、αGal(1→4)βGal(1→4)βGlcNAcおよび
αGal(1→4)βGal(1→4)βGlcからなる群より選択され
るオリゴ糖を含む。このオリゴ糖は該支持体に非ペプチ
ド性リンカーアームを介して結合されている。ここでこ
の薬学的組成物は感染症の発現の約３日間以内に投与さ
れる。好ましい実施態様において、腸への関与以外の器
官への関与に及ぶ前に、この薬学的組成物は患者に投与
される。
【００１６】本発明によれば、志賀様毒素に仲介される
腸管出血性E. coli感染症に起因する患者における溶血
性尿毒症症候群の発症を阻止するための方法であって、
該方法は該患者に有効量のαGal(1→4)βGalサブユニッ
トを含む薬学的に不活性な親和性支持体を含む薬学的組
成物を投与する工程を包含し、該αGal(1→4)βGalサブ
ユニットは該支持体に非ペプチド性リンカーアームを介
して結合されており、ここで該サブユニットはSLT毒素
を結合し、ここで該薬学的組成物は感染症の発現の約３
日間以内に投与される、方法が提供される。
腸管出血性E. coli感染症に起因する患者における溶血
性尿毒症症候群の発症を阻止するための方法であって、
該方法は該患者に有効量のαGal(1→4)βGalサブユニッ
トを含む薬学的に不活性な親和性支持体を含む薬学的組
成物を投与する工程を包含し、該αGal(1→4)βGalサブ
ユニットは該支持体に非ペプチド性リンカーアームを介
して結合されており、ここで該サブユニットはSLT毒素
を結合し、ここで該薬学的組成物は感染症の発現の約３
日間以内に投与される、方法が提供される。
【００１７】好ましい実施態様においては、前記リンカ
ーアームは１〜10の炭素原子を含む。
ーアームは１〜10の炭素原子を含む。
【００１８】好ましい実施態様においては、前記リンカ
ーアームは-(CH2)8C(O)-である。
ーアームは-(CH2)8C(O)-である。
【００１９】好ましい実施態様においては、前記不活性
な親和性支持体はシリカである。
な親和性支持体はシリカである。
【００２０】好ましい実施態様においては、腸への関与
以外の器官への関与に及ぶ前に、前記薬学的組成物が患
者に投与される。
以外の器官への関与に及ぶ前に、前記薬学的組成物が患
者に投与される。
【００２１】本発明によれば、志賀様毒素に仲介される
腸管出血性E. coli感染症を発現する患者における溶血
性尿毒症症候群の発症を阻止するための方法であって、
該方法は該患者に有効量のαGal(1→4)βGal、αGal(1
→4)βGal(1→4)βGlcNAcおよびαGal(1→4)βGal(1→
4)βGlcからなる群より選択されるオリゴ糖を含む薬学
的に不活性な親和性支持体を含む薬学的組成物を投与す
る工程を包含し、該オリゴ糖は該支持体に非ペプチド性
リンカーアームを介して結合されており、ここで該薬学
的組成物は感染症の発現の約３日間以内に投与される、
方法が提供される。
腸管出血性E. coli感染症を発現する患者における溶血
性尿毒症症候群の発症を阻止するための方法であって、
該方法は該患者に有効量のαGal(1→4)βGal、αGal(1
→4)βGal(1→4)βGlcNAcおよびαGal(1→4)βGal(1→
4)βGlcからなる群より選択されるオリゴ糖を含む薬学
的に不活性な親和性支持体を含む薬学的組成物を投与す
る工程を包含し、該オリゴ糖は該支持体に非ペプチド性
リンカーアームを介して結合されており、ここで該薬学
的組成物は感染症の発現の約３日間以内に投与される、
方法が提供される。
【００２２】好ましい実施態様においては、前記オリゴ
糖の配列はαGal(1→4)βGalである。
糖の配列はαGal(1→4)βGalである。
【００２３】好ましい実施態様においては、前記オリゴ
糖の配列はαGal(1→4)βGal(1→4)βGlcNAcである。
糖の配列はαGal(1→4)βGal(1→4)βGlcNAcである。
【００２４】好ましい実施態様においては、前記オリゴ
糖の配列はαGal(1→4)βGal(1→4)βGlcである。
糖の配列はαGal(1→4)βGal(1→4)βGlcである。
【００２５】好ましい実施態様においては、前記リンカ
ーアームは１〜10の炭素原子を含む。
ーアームは１〜10の炭素原子を含む。
【００２６】好ましい実施態様においては、前記リンカ
ーアームは-(CH2)8C(O)-である。
ーアームは-(CH2)8C(O)-である。
【００２７】好ましい実施態様においては、前記不活性
な親和性支持体はシリカである。
な親和性支持体はシリカである。
【００２８】好ましい実施態様においては、腸への関与
以外の器官への関与に及ぶ前に、前記薬学的組成物が患
者に投与される。
以外の器官への関与に及ぶ前に、前記薬学的組成物が患
者に投与される。
【００２９】
【発明の実施の形態】上記のように、本発明は腸のE. c
oli感染症に関連する志賀様毒素（SLT）の中和方法に関
し、この方法はこの感染症の溶血性尿毒症症候群（HU
S）への進行を阻止する。しかし、本発明をさらに詳細
に考察する前に、以下の用語が先ず定義される： Ａ．定義 本明細書中で用いられる以下の用語は以下の意味を有す
る：用語「志賀様毒素」または「SLT」または「ベロ毒
素」は、当該分野で一般的に理解されるように、志賀赤
痢菌産生志賀毒素に類似する腸管出血性E. coliにより
産生される毒素の群をいう。これらの毒素は、酵素的に
活性なＡサブユニットおよび多量体レセプター結合Ｂサ
ブユニットを含む。このようなSLTはSLTIおよび当該分
野でSLTIIと命名される種々のグループ化された毒素を
包含する。
oli感染症に関連する志賀様毒素（SLT）の中和方法に関
し、この方法はこの感染症の溶血性尿毒症症候群（HU
S）への進行を阻止する。しかし、本発明をさらに詳細
に考察する前に、以下の用語が先ず定義される： Ａ．定義 本明細書中で用いられる以下の用語は以下の意味を有す
る：用語「志賀様毒素」または「SLT」または「ベロ毒
素」は、当該分野で一般的に理解されるように、志賀赤
痢菌産生志賀毒素に類似する腸管出血性E. coliにより
産生される毒素の群をいう。これらの毒素は、酵素的に
活性なＡサブユニットおよび多量体レセプター結合Ｂサ
ブユニットを含む。このようなSLTはSLTIおよび当該分
野でSLTIIと命名される種々のグループ化された毒素を
包含する。
【００３０】SLTのP1二糖、P1三糖、またはPk三糖への
迅速で強固な結合は、本明細書中に含まれるベロ細胞傷
害性（verocytotoxicity）中和アッセイにより表され
る。
迅速で強固な結合は、本明細書中に含まれるベロ細胞傷
害性（verocytotoxicity）中和アッセイにより表され
る。
【００３１】用語「器官への関与」は、SLTに仲介され
る臨床的に定義される器官への関与をいい、これは疾病
の自然な進行に相関する。腸以外の器官としては、例え
ば、腎臓、心臓、中枢神経系（「CNS」）のエレメント
（すなわち、脳、脊髄など）、肝臓などが挙げられる。
従来の血液化学的検査は、肝臓、心臓、および腎臓への
関与を評価し得る一方で、痴呆、痙攣、失見当などを包
含する臨床的徴候は、CNSへの関与を決定するために用
いられる。
る臨床的に定義される器官への関与をいい、これは疾病
の自然な進行に相関する。腸以外の器官としては、例え
ば、腎臓、心臓、中枢神経系（「CNS」）のエレメント
（すなわち、脳、脊髄など）、肝臓などが挙げられる。
従来の血液化学的検査は、肝臓、心臓、および腎臓への
関与を評価し得る一方で、痴呆、痙攣、失見当などを包
含する臨床的徴候は、CNSへの関与を決定するために用
いられる。
【００３２】「溶血性尿毒症症候群」は、腎損傷、およ
び溶血または血小板減少のいずれかがある場合、存在す
ると考えられる。腎臓損傷は、血清クレアチニン濃度の
上昇（５歳未満については＞50μmol/L、５〜６歳につ
いては＞60μmol/L）、または疾患の急性期の間に記録
されたクレアチニンの値に50%より大きい差があるこ
と、または尿顕微鏡検査で高倍率での視野当たり少なく
とも10個の赤血球があることを必要とする。溶血は、ヘ
モグロビン濃度が≦105 g/Lである場合またはスメアに
赤血球フラグメントがある場合またはヘモグロビンが≦
105 g/Lに下がる前に赤血球が輸注された場合に、存在
すると判断される。血小板減少は、150×109/Lより少な
いの血小板濃度として定義される。
び溶血または血小板減少のいずれかがある場合、存在す
ると考えられる。腎臓損傷は、血清クレアチニン濃度の
上昇（５歳未満については＞50μmol/L、５〜６歳につ
いては＞60μmol/L）、または疾患の急性期の間に記録
されたクレアチニンの値に50%より大きい差があるこ
と、または尿顕微鏡検査で高倍率での視野当たり少なく
とも10個の赤血球があることを必要とする。溶血は、ヘ
モグロビン濃度が≦105 g/Lである場合またはスメアに
赤血球フラグメントがある場合またはヘモグロビンが≦
105 g/Lに下がる前に赤血球が輸注された場合に、存在
すると判断される。血小板減少は、150×109/Lより少な
いの血小板濃度として定義される。
【００３３】用語「生体適合性」は、動物またはヒトの
組織または体液に関する化学的不活性をいう。生体適合
性物質は非感作性である。
組織または体液に関する化学的不活性をいう。生体適合
性物質は非感作性である。
【００３４】用語「適合性リンカーアーム」は、オリゴ
糖構造に生体適合性固体支持体から間隔をもたせそして
二官能性であり、ここで一方の官能基は支持体の相互的
な（reciprocal）官能基に共有結合し得、そして他方の
官能基はオリゴ糖構造の相互的な官能基に結合し得る。
本発明において好ましい適合性リンカーアームは、非ペ
プチド性リンカーアームである。すなわち、リンカーア
ームはオリゴ糖構造を固体支持体に結合するためにペプ
チド基を用いない。
糖構造に生体適合性固体支持体から間隔をもたせそして
二官能性であり、ここで一方の官能基は支持体の相互的
な（reciprocal）官能基に共有結合し得、そして他方の
官能基はオリゴ糖構造の相互的な官能基に結合し得る。
本発明において好ましい適合性リンカーアームは、非ペ
プチド性リンカーアームである。すなわち、リンカーア
ームはオリゴ糖構造を固体支持体に結合するためにペプ
チド基を用いない。
【００３５】用語「固体支持体」は、オリゴ糖配列が適
合性リンカーアームを介して結合する不活性な固体物質
をいう。使用がインビボである場合、固体支持体は生体
適合性である。
合性リンカーアームを介して結合する不活性な固体物質
をいう。使用がインビボである場合、固体支持体は生体
適合性である。
【００３６】本発明のオリゴ糖構造が結合する固体支持
体は、粒子の形状であり得る。多様な生体適合性の固体
支持体物質が当該分野で公知である。その例としては、
シリカ、多孔性ガラスのような合成シリケート、けい藻
土のような生物起源のシリケート、カオリナイトのよう
なシリケート含有ミネラル、ポリスチレン、ポリプロピ
レンのような合成ポリマー、および多糖である。無機物
質でできた固体支持体が好ましい。好ましくは、固体支
持体は、インビボでの使用のために、約10〜500μmの粒
子サイズを有する。特に、100〜200μmの粒子サイズが
好ましい。
体は、粒子の形状であり得る。多様な生体適合性の固体
支持体物質が当該分野で公知である。その例としては、
シリカ、多孔性ガラスのような合成シリケート、けい藻
土のような生物起源のシリケート、カオリナイトのよう
なシリケート含有ミネラル、ポリスチレン、ポリプロピ
レンのような合成ポリマー、および多糖である。無機物
質でできた固体支持体が好ましい。好ましくは、固体支
持体は、インビボでの使用のために、約10〜500μmの粒
子サイズを有する。特に、100〜200μmの粒子サイズが
好ましい。
【００３７】用語「SYNSORB」は、CHROMOSORB P（商
標）（Manville Corp., Denver, Colorado）[11]（誘導
体化したシリカ粒子である）に共有結合した合成8-メト
キシカルボニルオクチルオリゴ糖構造をいう。
標）（Manville Corp., Denver, Colorado）[11]（誘導
体化したシリカ粒子である）に共有結合した合成8-メト
キシカルボニルオクチルオリゴ糖構造をいう。
【００３８】生体適合性固体支持体（例えば、CHROMOSO
RB P（商標）（SYNSORB））に共有結合した合成オリゴ
糖配列が、SLT毒素またはベロ毒素を結合するために使
用され得る。これらの組成物は、HUSおよび関連の症状
の防止に有用である。SYNSORBはこれらの組成物に特に
有用である。なぜならこれは非毒性でありそして機械的
および化学的分解に耐性であるからである。SYNSORBは
ラット胃腸管を影響を受けずに通過することが見出され
た。これらは、経口投与の後、完全にそして迅速に（72
時間内に99%排出される）排出されることが示されてい
る。さらに、SYNSORB上の高密度のオリゴ糖部分がベロ
毒素の結合のために特に有用である。
RB P（商標）（SYNSORB））に共有結合した合成オリゴ
糖配列が、SLT毒素またはベロ毒素を結合するために使
用され得る。これらの組成物は、HUSおよび関連の症状
の防止に有用である。SYNSORBはこれらの組成物に特に
有用である。なぜならこれは非毒性でありそして機械的
および化学的分解に耐性であるからである。SYNSORBは
ラット胃腸管を影響を受けずに通過することが見出され
た。これらは、経口投与の後、完全にそして迅速に（72
時間内に99%排出される）排出されることが示されてい
る。さらに、SYNSORB上の高密度のオリゴ糖部分がベロ
毒素の結合のために特に有用である。
【００３９】この出願の目的のために、すべての糖は従
来の３文字命名法を用いて参照される。記さない限りす
べての糖はＤ型であるとみなされるが、フコースは例外
でＬ型である。さらに、すべての糖はピラノース型であ
る。
来の３文字命名法を用いて参照される。記さない限りす
べての糖はＤ型であるとみなされるが、フコースは例外
でＬ型である。さらに、すべての糖はピラノース型であ
る。
【００４０】間接的な結合に使用される結合部分は、好
ましくは適切な長さの（少なくとも１炭素原子）の有機
二官能性分子であり、これは単にオリゴ糖構造を固体支
持体の表面から隔てるために作用する。
ましくは適切な長さの（少なくとも１炭素原子）の有機
二官能性分子であり、これは単にオリゴ糖構造を固体支
持体の表面から隔てるために作用する。
【００４１】本発明の組成物は好ましくは以下の式で表
される： (オリゴ糖-Y-R)n-固体支持体 ここでオリゴ糖はαGal(1→4)βGalサブユニットを含み
少なくとも２の糖単位で好ましくは６以下の糖単位を含
有し、このオリゴ糖は志賀様毒素に結合する。Ｙは酸
素、イオウまたは窒素である。Ｒは少なくとも１炭素原
子のアグリコン結合アームである。固体支持体は先に定
義した。そしてｎは１以上である。好ましいアグリコン
は１〜約10炭素原子である。約２〜10の糖単位を含有す
るオリゴ糖配列が使用され得る。約２〜３の糖単位を有
する配列が好ましい。好ましくは、ｎは組成物が、組成
物１グラム当たり約0.25〜2.50μmolのオリゴ糖を含有
するような数字である。
される： (オリゴ糖-Y-R)n-固体支持体 ここでオリゴ糖はαGal(1→4)βGalサブユニットを含み
少なくとも２の糖単位で好ましくは６以下の糖単位を含
有し、このオリゴ糖は志賀様毒素に結合する。Ｙは酸
素、イオウまたは窒素である。Ｒは少なくとも１炭素原
子のアグリコン結合アームである。固体支持体は先に定
義した。そしてｎは１以上である。好ましいアグリコン
は１〜約10炭素原子である。約２〜10の糖単位を含有す
るオリゴ糖配列が使用され得る。約２〜３の糖単位を有
する配列が好ましい。好ましくは、ｎは組成物が、組成
物１グラム当たり約0.25〜2.50μmolのオリゴ糖を含有
するような数字である。
【００４２】多数のアグリコン結合アームが当該分野で
公知である。例えば、p-ニトロフェニル基（すなわち、
-OC6H4pNO2）を含む結合アームが開示された[29]。合成
中の適切な時期で、ニトロ基はアミノ基に還元される
が、このアミノ基はN-トリフルオロアセトアミドとして
保護され得る。支持体への結合の前に、トリフルオロア
セトアミド基が取り除かれ、それによりアミノ基が脱保
護される。
公知である。例えば、p-ニトロフェニル基（すなわち、
-OC6H4pNO2）を含む結合アームが開示された[29]。合成
中の適切な時期で、ニトロ基はアミノ基に還元される
が、このアミノ基はN-トリフルオロアセトアミドとして
保護され得る。支持体への結合の前に、トリフルオロア
セトアミド基が取り除かれ、それによりアミノ基が脱保
護される。
【００４３】イオウを含有する結合アームが開示された
[30]。詳細には、この結合アームは2-ブロモエチル基に
由来し（チオヌクレオフィルを用いた置換反応で）、こ
の2-ブロモエチル基は、-OCH2CH2SCH2CO2CH3および-OCH
2CH2SC6H4-pNH2のような種々の末端官能基を保有する結
合アームに導くことが示されている。これらの末端官能
基は、固体支持体上の相補的な官能基への反応を可能
し、それにより固体支持体への共有結合が形成される。
このような反応は当該分野で周知である。
[30]。詳細には、この結合アームは2-ブロモエチル基に
由来し（チオヌクレオフィルを用いた置換反応で）、こ
の2-ブロモエチル基は、-OCH2CH2SCH2CO2CH3および-OCH
2CH2SC6H4-pNH2のような種々の末端官能基を保有する結
合アームに導くことが示されている。これらの末端官能
基は、固体支持体上の相補的な官能基への反応を可能
し、それにより固体支持体への共有結合が形成される。
このような反応は当該分野で周知である。
【００４４】6-トリフルオロアセトアミド-ヘキシル結
合アーム(-O-(CH2)6-NHCOCF3)が開示され[31]、ここで
トリフルオロアセトアミド保護基は取り除かれ得、結合
に用いた第１（primary）アミノ基が脱保護される。
合アーム(-O-(CH2)6-NHCOCF3)が開示され[31]、ここで
トリフルオロアセトアミド保護基は取り除かれ得、結合
に用いた第１（primary）アミノ基が脱保護される。
【００４５】公知の結合アームの他の例示は、以下を包
含する：7-メトキシカルボニル-3,6,ジオキサヘプチル
結合アーム[32] (-OCH2-CH2)2OCH2CO2CH3)；2-(4-メト
キシカルボニルブタンカルボキシアミド)エチル[33] (-
OCH2CH2NHC(O)(CH2)4CO2CH3)；アリル結合アーム[34]
(-OCH2CH＝CH2)、これは、適切なモノマーを用いたラジ
カル共重合により、コポリマーに導く；他のアリル結合
アーム[35]が公知である(-O(CH2CH2O)2CH2CH＝CH2)。さ
らに、アリル結合アームは2-アミノエタンチオールの存
在下で誘導体化されて[36]、結合アーム-OCH2CH2CH2SCH
2CH2NH2を提供し得る。他の適切な結合アームも開示さ
れた[12〜14、16、17]。
含する：7-メトキシカルボニル-3,6,ジオキサヘプチル
結合アーム[32] (-OCH2-CH2)2OCH2CO2CH3)；2-(4-メト
キシカルボニルブタンカルボキシアミド)エチル[33] (-
OCH2CH2NHC(O)(CH2)4CO2CH3)；アリル結合アーム[34]
(-OCH2CH＝CH2)、これは、適切なモノマーを用いたラジ
カル共重合により、コポリマーに導く；他のアリル結合
アーム[35]が公知である(-O(CH2CH2O)2CH2CH＝CH2)。さ
らに、アリル結合アームは2-アミノエタンチオールの存
在下で誘導体化されて[36]、結合アーム-OCH2CH2CH2SCH
2CH2NH2を提供し得る。他の適切な結合アームも開示さ
れた[12〜14、16、17]。
【００４６】好ましくは、アグリコン結合アームは疎水
性基であり、もっとも好ましくはアグリコン結合アーム
は-(CH2)8C(O)-、-(CH2)5OCH2CH2CH2-および-(CH2)8CH2
O-からなる群から選択される疎水性基である。非ペプチ
ド性結合アームが本発明の適合性の結合アームとしての
使用のために好ましい。
性基であり、もっとも好ましくはアグリコン結合アーム
は-(CH2)8C(O)-、-(CH2)5OCH2CH2CH2-および-(CH2)8CH2
O-からなる群から選択される疎水性基である。非ペプチ
ド性結合アームが本発明の適合性の結合アームとしての
使用のために好ましい。
【００４７】糖ペプチドの使用は所望されない。なぜな
ら糖ペプチドは、同じタンパク質に結合したいくつかの
（しばしば異なる）オリゴ糖を含有するからである。糖
ペプチドはまた、大量に得ることが困難であり、そして
費用と時間のかかる精製を必要とする。同様に、BSAま
たはHASコンジュゲートの使用は、例えば経口投与した
場合の胃腸管における安定性に疑問があるので所望され
ない。
ら糖ペプチドは、同じタンパク質に結合したいくつかの
（しばしば異なる）オリゴ糖を含有するからである。糖
ペプチドはまた、大量に得ることが困難であり、そして
費用と時間のかかる精製を必要とする。同様に、BSAま
たはHASコンジュゲートの使用は、例えば経口投与した
場合の胃腸管における安定性に疑問があるので所望され
ない。
【００４８】本発明の方法の実施において有用な組成物
は、αGal(1→4)βGal二糖サブユニットを含み、このサ
ブユニットは単独でまたはより高次のオリゴ糖（例え
ば、αGal(1→4)βGal(1→4)βGlcNAc三糖またはαGal
(1→4)βGal(1→4)βGlc三糖）と共に使用され得る。α
Gal(1→4)βGal二糖サブユニットは、好ましくはオリゴ
糖の非還元末端で見出される。
は、αGal(1→4)βGal二糖サブユニットを含み、このサ
ブユニットは単独でまたはより高次のオリゴ糖（例え
ば、αGal(1→4)βGal(1→4)βGlcNAc三糖またはαGal
(1→4)βGal(1→4)βGlc三糖）と共に使用され得る。α
Gal(1→4)βGal二糖サブユニットは、好ましくはオリゴ
糖の非還元末端で見出される。
【００４９】オリゴ糖は、固体支持体に結合されるかま
たは好ましくはLemieuxら[11]に記載のような結合アー
ムを介して直接結合される。二および三糖単位はまた、
薬学的に受容可能なキャリアに直接結合されるかまたは
このようなキャリアに結合されたオリゴ糖の一部を構成
し得る。
たは好ましくはLemieuxら[11]に記載のような結合アー
ムを介して直接結合される。二および三糖単位はまた、
薬学的に受容可能なキャリアに直接結合されるかまたは
このようなキャリアに結合されたオリゴ糖の一部を構成
し得る。
【００５０】Ｂ．合成 オリゴ糖構造合成のための化学的方法は、当該分野に公
知の方法により達成され得る。これらの物質は代表的に
は適切に保護された個々の単糖を用いて組み立てられ
る。
知の方法により達成され得る。これらの物質は代表的に
は適切に保護された個々の単糖を用いて組み立てられ
る。
【００５１】用いられる特定の方法は、代表的には合成
されるべき各々の個別の構造について適応され至適化さ
れる。一般に、オリゴ糖グリコシドの全部または一部の
化学合成は、まず還元糖または単糖のアノマー炭素原子
上のグリコシド結合の形成を包含する。詳細には、適切
に保護された形状の天然のまたは化学的に修飾されたサ
ッカリド構造（グリコシルドナー）が、ハロゲン化合
物、トリクロロアセトイミデート、アセチル、チオグリ
コシドなどを包含する脱離基を導入するように還元単位
のアノマー中心（anomeric center）で選択的に修飾さ
れる。次いで、ドナーはアグリコンまたはグリコシド結
合が確立されるべき位置に１つの遊離ヒドロキシル基を
保有する炭水化物アクセプターの適切な形状について当
該分野で周知の触媒条件下で反応される。多数のアグリ
コン部分が当該分野で公知であり、そして適切な配置で
還元単位のアノマー中心に付着され得る。
されるべき各々の個別の構造について適応され至適化さ
れる。一般に、オリゴ糖グリコシドの全部または一部の
化学合成は、まず還元糖または単糖のアノマー炭素原子
上のグリコシド結合の形成を包含する。詳細には、適切
に保護された形状の天然のまたは化学的に修飾されたサ
ッカリド構造（グリコシルドナー）が、ハロゲン化合
物、トリクロロアセトイミデート、アセチル、チオグリ
コシドなどを包含する脱離基を導入するように還元単位
のアノマー中心（anomeric center）で選択的に修飾さ
れる。次いで、ドナーはアグリコンまたはグリコシド結
合が確立されるべき位置に１つの遊離ヒドロキシル基を
保有する炭水化物アクセプターの適切な形状について当
該分野で周知の触媒条件下で反応される。多数のアグリ
コン部分が当該分野で公知であり、そして適切な配置で
還元単位のアノマー中心に付着され得る。
【００５２】適合性保護基の適切な使用（炭水化物合成
の当該分野で周知である）は、合成された構造の選択的
な修飾またはさらなる糖単位または糖保護（sugar bloc
k）のアクセプター構造へのさらなる付着を可能にす
る。
の当該分野で周知である）は、合成された構造の選択的
な修飾またはさらなる糖単位または糖保護（sugar bloc
k）のアクセプター構造へのさらなる付着を可能にす
る。
【００５３】グリコシド結合の形成後、サッカリドグリ
コシドは、さらなるサッカリド単位の結合をもたらすた
めに用いられるか、選択された位置で化学的に修飾され
るか、または従来の脱保護後の酵素的な合成に使用され
得る。一般に、天然のまたは化学的に修飾されたサッカ
リド単位のサッカリドグリコシドへの化学的な結合は、
文献に詳細に記載されている確立された化学を用いるこ
とにより達成される[12〜28]。
コシドは、さらなるサッカリド単位の結合をもたらすた
めに用いられるか、選択された位置で化学的に修飾され
るか、または従来の脱保護後の酵素的な合成に使用され
得る。一般に、天然のまたは化学的に修飾されたサッカ
リド単位のサッカリドグリコシドへの化学的な結合は、
文献に詳細に記載されている確立された化学を用いるこ
とにより達成される[12〜28]。
【００５４】オリゴ糖構造は、固体支持体上に共有結合
されるかまたは非共有的に（受動的に）吸着される。共
有結合は、支持体上の官能基とオリゴ糖構造の適合性リ
ンカーアームとの間の反応を介し得る。
されるかまたは非共有的に（受動的に）吸着される。共
有結合は、支持体上の官能基とオリゴ糖構造の適合性リ
ンカーアームとの間の反応を介し得る。
【００５５】本発明の方法で使用される非ペプチド性リ
ンカーアームを介して支持体に結合されるαGal(1→4)
βGalサブユニットを含む不活性な親和性支持体は、当
該分野で公知の方法[11、12]により以下のように作製さ
れる。各々の場合において、それぞれのハプテンの8-メ
トキシカルボニルオクチルグリコシドは、活性化されて
シリルアミン化された（silylaminated）固体支持体に
結合される。ここでマトリックスはSiO2からなり、次い
で支持体上の残りのアミン基がアセチル化される。これ
らの式は以下のとおりである：P1-di、これは少なくと
も0.60μmol/gのαGal(1-4)βGal二糖を含有する；P1-t
ri、これは少なくとも0.91μmol/gのαGal(1-4)βGal(1
-4)βGlcNAc三糖を含有する；そしてPk-tri、これは少
なくとも0.74μmol/gのαGal(1-4)βGal(1-4)βGlc三糖
を含有する。
ンカーアームを介して支持体に結合されるαGal(1→4)
βGalサブユニットを含む不活性な親和性支持体は、当
該分野で公知の方法[11、12]により以下のように作製さ
れる。各々の場合において、それぞれのハプテンの8-メ
トキシカルボニルオクチルグリコシドは、活性化されて
シリルアミン化された（silylaminated）固体支持体に
結合される。ここでマトリックスはSiO2からなり、次い
で支持体上の残りのアミン基がアセチル化される。これ
らの式は以下のとおりである：P1-di、これは少なくと
も0.60μmol/gのαGal(1-4)βGal二糖を含有する；P1-t
ri、これは少なくとも0.91μmol/gのαGal(1-4)βGal(1
-4)βGlcNAc三糖を含有する；そしてPk-tri、これは少
なくとも0.74μmol/gのαGal(1-4)βGal(1-4)βGlc三糖
を含有する。
【００５６】Ｃ．薬学的組成物 本発明の方法は、１以上のオリゴ糖構造を含有する薬学
的組成物を用いることにより達成される。このオリゴ糖
構造は固体支持体に付着して、SLT毒素および/またはベ
ロ毒素を結合する。
的組成物を用いることにより達成される。このオリゴ糖
構造は固体支持体に付着して、SLT毒素および/またはベ
ロ毒素を結合する。
【００５７】経口投与に使用される場合（これが好まし
い）、これらの組成物は種々の方法で製剤化され得る。
液体形状または半固体形状が好ましい。水のような液体
の薬学的に不活性なキャリアを含有する組成物が、経口
投与のために考慮され得る。他の薬学的に適合性の液体
または半固体も用いられ得る。このような液体および半
固体の使用は、当業者に周知である。
い）、これらの組成物は種々の方法で製剤化され得る。
液体形状または半固体形状が好ましい。水のような液体
の薬学的に不活性なキャリアを含有する組成物が、経口
投与のために考慮され得る。他の薬学的に適合性の液体
または半固体も用いられ得る。このような液体および半
固体の使用は、当業者に周知である。
【００５８】アップルソース、アイスクリームまたはプ
ディングのような半固体食品と混合され得る組成物はま
た好ましくあり得る。不快な味または後味を有さない製
剤（例えば、SYNSORB）が好ましい。経鼻胃管も、組成
物を胃に直接送達するために使用され得る。
ディングのような半固体食品と混合され得る組成物はま
た好ましくあり得る。不快な味または後味を有さない製
剤（例えば、SYNSORB）が好ましい。経鼻胃管も、組成
物を胃に直接送達するために使用され得る。
【００５９】固体組成物も使用され得、そして薬学的に
不活性なキャリアを含有する製剤に必要に応じてそして
簡便に使用され得る。薬学的に不活性なキャリアは、例
えば、ラクトース、デンプン、デキストリンまたはマグ
ネシウムステアレートなどの従来の固体キャリアを包含
し、これらは簡便に錠剤またはカプセル剤で提供され
る。SYNSORB自体もまた、不活性な薬学的キャリアの添
加なしに、特にカプセル剤での使用のために、使用され
得る。薬学的に不活性なキャリアが用いられる場合、こ
のキャリアは、代表的には組成物の総重量に基づいて約
１〜約99%、より好ましくは約75〜約95重量%の範囲の量
で用いられる。
不活性なキャリアを含有する製剤に必要に応じてそして
簡便に使用され得る。薬学的に不活性なキャリアは、例
えば、ラクトース、デンプン、デキストリンまたはマグ
ネシウムステアレートなどの従来の固体キャリアを包含
し、これらは簡便に錠剤またはカプセル剤で提供され
る。SYNSORB自体もまた、不活性な薬学的キャリアの添
加なしに、特にカプセル剤での使用のために、使用され
得る。薬学的に不活性なキャリアが用いられる場合、こ
のキャリアは、代表的には組成物の総重量に基づいて約
１〜約99%、より好ましくは約75〜約95重量%の範囲の量
で用いられる。
【００６０】用量はSLT毒素の中和および排除および/ま
たは冒された患者の腸中で見出されるE.coliの除去を提
供するために選択される。好ましい用量は約0.25〜1.25
μmolオリゴ糖/kg体重/日であり、より好ましくは約0.5
〜1.0μmolオリゴ糖/kg体重/日である。上記のSYNSORB
組成物を使用するとき、これは約0.5〜1.0g SYNSORB/kg
体重/日を意味し、これは約20 mg/mlの腸内SYNSORB濃度
を与える。投与は１日に２〜４回であることが期待さ
れ、好ましくは１週間の期間である。特定の用量レベル
および投与のスケジュールは、用いる特定のオリゴ糖構
造、被験体の年齢および症状、病態の程度などの因子に
依存して各々の個体について当然変化するが、これらは
すべて良好に当該分野の技術範囲にある。
たは冒された患者の腸中で見出されるE.coliの除去を提
供するために選択される。好ましい用量は約0.25〜1.25
μmolオリゴ糖/kg体重/日であり、より好ましくは約0.5
〜1.0μmolオリゴ糖/kg体重/日である。上記のSYNSORB
組成物を使用するとき、これは約0.5〜1.0g SYNSORB/kg
体重/日を意味し、これは約20 mg/mlの腸内SYNSORB濃度
を与える。投与は１日に２〜４回であることが期待さ
れ、好ましくは１週間の期間である。特定の用量レベル
および投与のスケジュールは、用いる特定のオリゴ糖構
造、被験体の年齢および症状、病態の程度などの因子に
依存して各々の個体について当然変化するが、これらは
すべて良好に当該分野の技術範囲にある。
【００６１】本発明のオリゴ糖含有組成物の７日間まで
の投与は、SLT関連下痢および関連症状の処置において
有用である。
の投与は、SLT関連下痢および関連症状の処置において
有用である。
【００６２】先に考察したように、経口投与が好ましい
が、製剤は経直腸のような他の投与手段についても考慮
され得る。これらの製剤の有用性は使用される特定の組
成物および処置を受ける特定の被験体に依存し得る。こ
れらの製剤は、油性であるか、水性であるか、乳化され
得る液体キャリアを含有し得るかまたは投与の様式に適
切な特定の溶媒を含有し得る。
が、製剤は経直腸のような他の投与手段についても考慮
され得る。これらの製剤の有用性は使用される特定の組
成物および処置を受ける特定の被験体に依存し得る。こ
れらの製剤は、油性であるか、水性であるか、乳化され
得る液体キャリアを含有し得るかまたは投与の様式に適
切な特定の溶媒を含有し得る。
【００６３】組成物は、単位用量形状、あるいは複数ま
たはサブ単位用量で製剤化され得る。上記の期待される
用量のためには、経口投与される液体組成物は好ましく
は約１μmolオリゴ糖/mlを含有するべきである。
たはサブ単位用量で製剤化され得る。上記の期待される
用量のためには、経口投与される液体組成物は好ましく
は約１μmolオリゴ糖/mlを含有するべきである。
【００６４】Ｄ．方法論 SLT毒素はαGal(1→4)βGalサブユニット（この配列は
毒素を結合する）を含むオリゴ糖配列により中和され得
る。特に、固体支持体に非ペプチド性の適合性リンカー
アームを介して共有結合されたこのようなオリゴ糖配列
は、SLT毒素を効果的に中和することが見出された。こ
のような組成物の例は特定のSYNSORBであり、これはSLT
毒素活性を結合しそして中和する。
毒素を結合する）を含むオリゴ糖配列により中和され得
る。特に、固体支持体に非ペプチド性の適合性リンカー
アームを介して共有結合されたこのようなオリゴ糖配列
は、SLT毒素を効果的に中和することが見出された。こ
のような組成物の例は特定のSYNSORBであり、これはSLT
毒素活性を結合しそして中和する。
【００６５】Chromosorb Pに8-メトキシカルボニルオク
チル（MCO）スペーサーアームを介して付着したいくつ
かのオリゴ糖配列のSLT毒素を中和する能力が試験され
た。
チル（MCO）スペーサーアームを介して付着したいくつ
かのオリゴ糖配列のSLT毒素を中和する能力が試験され
た。
【００６６】本発明において有用な固体支持体に付着し
たオリゴ糖配列は、SLT毒素を結合するオリゴ糖配列を
包含する。オリゴ糖のSLT毒素に対する結合親和性は、
例えば以下の実施例１に記載のような、簡単なインビト
ロ試験により容易に検出可能である。本発明の目的のた
めには、SLT毒素を結合する固体支持体に付着したオリ
ゴ糖配列は、実施例の項に記載のアッセイを用いて、ve
ro細胞アッセイにおける細胞傷害活性からのエンドポイ
ント力価を少なくとも50%そして好ましくは少なくとも9
5%減少させるオリゴ糖組成物を意味する。
たオリゴ糖配列は、SLT毒素を結合するオリゴ糖配列を
包含する。オリゴ糖のSLT毒素に対する結合親和性は、
例えば以下の実施例１に記載のような、簡単なインビト
ロ試験により容易に検出可能である。本発明の目的のた
めには、SLT毒素を結合する固体支持体に付着したオリ
ゴ糖配列は、実施例の項に記載のアッセイを用いて、ve
ro細胞アッセイにおける細胞傷害活性からのエンドポイ
ント力価を少なくとも50%そして好ましくは少なくとも9
5%減少させるオリゴ糖組成物を意味する。
【００６７】本発明において有用な固体支持体に付着し
た他のオリゴ糖配列は、いずれの付着したオリゴ糖配列
をも含まないコントロールの支持体（例えば、CHROMOSO
RB P）よりも有意に（p≦0.05、Wilcoxonまたはスチュ
ーデントのＴ検定のような適切な標準的な統計方法を用
いて）良好にSLT毒素を結合し得るオリゴ糖配列であ
る。
た他のオリゴ糖配列は、いずれの付着したオリゴ糖配列
をも含まないコントロールの支持体（例えば、CHROMOSO
RB P）よりも有意に（p≦0.05、Wilcoxonまたはスチュ
ーデントのＴ検定のような適切な標準的な統計方法を用
いて）良好にSLT毒素を結合し得るオリゴ糖配列であ
る。
【００６８】本発明の組成物のSLTの中和における効果
は、組成物での処置のある場合のSLTの活性と、ない場
合のSLTの活性とを比較することにより測定し得る。SLT
の活性はこれらの化合物のVero細胞に対する毒性を利用
することによりアッセイし得る。Vero細胞（ATCC CCL8
1）はアメリカンタイプカルチャーコレクション, Rockv
ille MDから入手可能である。
は、組成物での処置のある場合のSLTの活性と、ない場
合のSLTの活性とを比較することにより測定し得る。SLT
の活性はこれらの化合物のVero細胞に対する毒性を利用
することによりアッセイし得る。Vero細胞（ATCC CCL8
1）はアメリカンタイプカルチャーコレクション, Rockv
ille MDから入手可能である。
【００６９】本発明の方法において、腸管出血性E. col
i感染に起因するHUSの臨床的発症は、上記の薬学的組成
物が感染の発現の３日以内および腸への関与以外の器官
への関与の前に投与される場合に軽減されることが見出
された。反対に、腸以外の器官が感染症に関与するこの
時間帯後この薬学的組成物の投与は、この組成物のHUS
の発症を軽減する能力を実質的に減少させる。
i感染に起因するHUSの臨床的発症は、上記の薬学的組成
物が感染の発現の３日以内および腸への関与以外の器官
への関与の前に投与される場合に軽減されることが見出
された。反対に、腸以外の器官が感染症に関与するこの
時間帯後この薬学的組成物の投与は、この組成物のHUS
の発症を軽減する能力を実質的に減少させる。
【００７０】好ましくは、個体がSLT仲介E. coli感染症
を患っているという最初の臨床的評価は、糞便の診断的
評価を介して確認される。SLT仲介E. coli感染症を検出
するための市販の診断的な道具は、Meridian Diagnosti
c, Inc., Cincinnati, Ohio,USA 45244からPremier EHE
Cの名称で販売されている。
を患っているという最初の臨床的評価は、糞便の診断的
評価を介して確認される。SLT仲介E. coli感染症を検出
するための市販の診断的な道具は、Meridian Diagnosti
c, Inc., Cincinnati, Ohio,USA 45244からPremier EHE
Cの名称で販売されている。
【００７１】上記の開示から理解され得るように、本発
明は広範囲の適用を有する。従って、以下の実施例は例
示するため提供されるのであって、限定するためではな
い。
明は広範囲の適用を有する。従って、以下の実施例は例
示するため提供されるのであって、限定するためではな
い。
【００７２】
【実施例】以下の実施例において、すべての温度は摂氏
で与えられ、そして以下の略語は以下の意味を有する。
以下で定義されない場合は、略語はそれらの当該分野で
認識される意味を有する。
で与えられ、そして以下の略語は以下の意味を有する。
以下で定義されない場合は、略語はそれらの当該分野で
認識される意味を有する。
【００７３】ASA ＝ アセチル化シリルアミノ化疎
水性8-メトキシカルボニルオクチル結合アーム BSA ＝ ウシ血清アルブミン cm ＝ センチメートル dpm ＝ １分当たりの崩壊 EDTA ＝ エチレンジアミン四酢酸 g ＝ グラム HUS ＝ 溶血性尿毒症症候群 kg ＝ キログラム L ＝ リットル LPS ＝ リポ多糖 M ＝ モル濃度 MEM ＝ 最少イーグル培地 mg ＝ ミリグラム mL ＝ ミリリットル min. ＝ 分 mm ＝ ミリメートル nm ＝ ナノメートル PBS ＝ リン酸緩衝化生理食塩水 pg ＝ ピコグラム SDS ＝ ドデシル硫酸ナトリウム SLT ＝ 志賀様毒素 μg ＝ マイクログラム μL ＝ マイクロリットル μmol ＝ マイクロモル 以下の実施例において、実施例１〜３はArmstrongら、
[10]に由来し、そしてこれは、αGal(1→4)βGalサブユ
ニットを含むオリゴ糖が同様なインビトロ特性を保有す
ることを確立するために本明細書中に含まれる。以下の
実施例４は、Pk三糖についてのインビボでの結果を例示
し、そしてHUSの発症の軽減において組成物の投与のタ
イミングの影響を表す。
水性8-メトキシカルボニルオクチル結合アーム BSA ＝ ウシ血清アルブミン cm ＝ センチメートル dpm ＝ １分当たりの崩壊 EDTA ＝ エチレンジアミン四酢酸 g ＝ グラム HUS ＝ 溶血性尿毒症症候群 kg ＝ キログラム L ＝ リットル LPS ＝ リポ多糖 M ＝ モル濃度 MEM ＝ 最少イーグル培地 mg ＝ ミリグラム mL ＝ ミリリットル min. ＝ 分 mm ＝ ミリメートル nm ＝ ナノメートル PBS ＝ リン酸緩衝化生理食塩水 pg ＝ ピコグラム SDS ＝ ドデシル硫酸ナトリウム SLT ＝ 志賀様毒素 μg ＝ マイクログラム μL ＝ マイクロリットル μmol ＝ マイクロモル 以下の実施例において、実施例１〜３はArmstrongら、
[10]に由来し、そしてこれは、αGal(1→4)βGalサブユ
ニットを含むオリゴ糖が同様なインビトロ特性を保有す
ることを確立するために本明細書中に含まれる。以下の
実施例４は、Pk三糖についてのインビボでの結果を例示
し、そしてHUSの発症の軽減において組成物の投与のタ
イミングの影響を表す。
【００７４】実施例１．SYNSORB−ベロ毒素性中和アッ
セイ。 E. coli株O157:H-(E32511)（SLTII/SLTIIcを産生する）
およびO26:H11(H19)（STLIのみを産生する）または株C6
00(933W)（SLTIIのみを産生する）を、一夜37℃でトリ
プチックソイブロス（tryptic soy broth）（Difco, De
troit, MI）寒天プレート上で増殖させた。ポリミキシ
ン抽出物およびリゾチーム抽出物を以前の記載のとおり
に調製した[１、２]。
セイ。 E. coli株O157:H-(E32511)（SLTII/SLTIIcを産生する）
およびO26:H11(H19)（STLIのみを産生する）または株C6
00(933W)（SLTIIのみを産生する）を、一夜37℃でトリ
プチックソイブロス（tryptic soy broth）（Difco, De
troit, MI）寒天プレート上で増殖させた。ポリミキシ
ン抽出物およびリゾチーム抽出物を以前の記載のとおり
に調製した[１、２]。
【００７５】第１の中和アッセイを、30min.間室温で２
〜50 mgのSYNSORBを含む回転ローテータ（end-over-end
rotator）上の1.5 mLマイクロ遠心チューブ（Fisher）
中でE. coli抽出物からSLT活性を吸収するSYNSORBの能
力を試験するために設計した。次いでチューブを装置か
ら取り出し、そしてSYNSORBが底に沈降した後（数秒）
吸収された抽出物の５倍系列希釈を非添加MEM中に調製
した。20μLの各々の希釈液を、Vero細胞を含有する96
ウェルマイクロタイタープレート中の適切なウェルに添
加した。SYNSORBを添加しない細菌抽出物をコントロー
ルとした。一旦細胞傷害効果が明らかになると（インキ
ュベーター中で２〜３日）、増殖培地を各々のウェルか
ら吸い出して、まだ生存しているVero細胞を95%メタノ
ールで固定してギームザ染色（Fisher）で染色した。次
いで既に記載のとおり[３]、結果を波長620 nmにセット
したマイクロプレートリーダーを用いて記録した。次い
で、吸収のデータを抽出物の希釈の対数に対してプロッ
トした。単層の50%破壊を生じる抽出物の希釈（CD50）
を、得られたVero細胞殺傷曲線からの外挿により決定し
た。個々の実験は常に２点平行で行い、指示のない限り
少なくとも２回繰り返した。中和の百分率は、以下の式
から算出した：100-(100[CD50オリゴ糖SYNSORB処理抽出
物＋CD50アセチル化シリルアミノ化(ASA)SYNSORB処理抽
出物])。両側統計Ｔ（two-tailed statistic T）を用い
た非媒介変数表示（non-parametric）Mann-Whitney検定
を、独立した観察の群間の差の有意レベルを算出するた
めに用いた[４]。
〜50 mgのSYNSORBを含む回転ローテータ（end-over-end
rotator）上の1.5 mLマイクロ遠心チューブ（Fisher）
中でE. coli抽出物からSLT活性を吸収するSYNSORBの能
力を試験するために設計した。次いでチューブを装置か
ら取り出し、そしてSYNSORBが底に沈降した後（数秒）
吸収された抽出物の５倍系列希釈を非添加MEM中に調製
した。20μLの各々の希釈液を、Vero細胞を含有する96
ウェルマイクロタイタープレート中の適切なウェルに添
加した。SYNSORBを添加しない細菌抽出物をコントロー
ルとした。一旦細胞傷害効果が明らかになると（インキ
ュベーター中で２〜３日）、増殖培地を各々のウェルか
ら吸い出して、まだ生存しているVero細胞を95%メタノ
ールで固定してギームザ染色（Fisher）で染色した。次
いで既に記載のとおり[３]、結果を波長620 nmにセット
したマイクロプレートリーダーを用いて記録した。次い
で、吸収のデータを抽出物の希釈の対数に対してプロッ
トした。単層の50%破壊を生じる抽出物の希釈（CD50）
を、得られたVero細胞殺傷曲線からの外挿により決定し
た。個々の実験は常に２点平行で行い、指示のない限り
少なくとも２回繰り返した。中和の百分率は、以下の式
から算出した：100-(100[CD50オリゴ糖SYNSORB処理抽出
物＋CD50アセチル化シリルアミノ化(ASA)SYNSORB処理抽
出物])。両側統計Ｔ（two-tailed statistic T）を用い
た非媒介変数表示（non-parametric）Mann-Whitney検定
を、独立した観察の群間の差の有意レベルを算出するた
めに用いた[４]。
【００７６】第２の中和アッセイ（同時インキュベーシ
ョンアッセイ）を、Pk三糖SYNSORBのVero細胞をSLT活性
から３日間37℃で保護する能力を試験するために設計し
た。このアッセイは、各々が２、５または10 mgのPk三
糖SYNSORBを含むエチレンオキシド滅菌1.5 mLマイクロ
遠心チューブ中の、180μLのポリミキシン抽出物の５倍
系列希釈をインキュベートする工程を包含した。SYNSOR
Bとの１時間のインキュベーション後に、各々のマイク
ロ遠心チューブの内容物全体を、上記のように調製した
マイクロタイタープレート中のVero細胞単層に添加し
た。次いで、マイクロタイタープレートを37℃で３日間
インキュベートし、そして実験の結果を上記のように記
録した（図１および２）。
ョンアッセイ）を、Pk三糖SYNSORBのVero細胞をSLT活性
から３日間37℃で保護する能力を試験するために設計し
た。このアッセイは、各々が２、５または10 mgのPk三
糖SYNSORBを含むエチレンオキシド滅菌1.5 mLマイクロ
遠心チューブ中の、180μLのポリミキシン抽出物の５倍
系列希釈をインキュベートする工程を包含した。SYNSOR
Bとの１時間のインキュベーション後に、各々のマイク
ロ遠心チューブの内容物全体を、上記のように調製した
マイクロタイタープレート中のVero細胞単層に添加し
た。次いで、マイクロタイタープレートを37℃で３日間
インキュベートし、そして実験の結果を上記のように記
録した（図１および２）。
【００７７】先の測定は種々の量のPk-triおよび種々の
インキュベーション時間を用いて、繰り返し、図３のＡ
およびＢに示す結果を得た。図３のＡに示すように、わ
ずか５mgのSYNSORBが、E32511およびH19の両方の株の抽
出物の活性を中和し得た；同様に、図３のＢに示すよう
にわずか約５min.のインキュベーションがいずれの抽出
物においてもこの結果を達成するために必要であった。
インキュベーション時間を用いて、繰り返し、図３のＡ
およびＢに示す結果を得た。図３のＡに示すように、わ
ずか５mgのSYNSORBが、E32511およびH19の両方の株の抽
出物の活性を中和し得た；同様に、図３のＢに示すよう
にわずか約５min.のインキュベーションがいずれの抽出
物においてもこの結果を達成するために必要であった。
【００７８】実施例２．ヨウ素化SLTI結合アッセイ。 精製したSLTIを、40μgのIodo Gen（Pierce Chemical C
o., Rockford, Illinois, USA）でコートした12×75 mm
酸洗浄したガラス培養チューブ中でヨウ素化した。約６
μgの精製SLTIを１min.間、100μL PBS中の20 MBqの125
-I標識ヨウ化ナトリウムとインキュベートした。反応混
合物を、 Armstrong,G.D.ら、[52]に記載のように、ガ
ラスウールで栓をしたパスツールピペットからPBS中の
システイン（１mg/mL）の溶液を含有する200μLのPBSへ
通した。１min.後、１% BSAを含有する200μLのPBSを混
合物に添加し、そしてヨウ素化されたSLTIを、この溶液
を１cm×30 cm Sephadex-G 25ゲル濾過カラムにPBS中の
0.1% BSAを用いて通すことにより精製した。ヨウ素化反
応の効率を、トリクロロ酢酸沈殿タンパク質中に取り込
まれたカウント数を測定することにより決定した。ヨウ
素化SLTIのアリコートを-90℃で貯蔵した。
o., Rockford, Illinois, USA）でコートした12×75 mm
酸洗浄したガラス培養チューブ中でヨウ素化した。約６
μgの精製SLTIを１min.間、100μL PBS中の20 MBqの125
-I標識ヨウ化ナトリウムとインキュベートした。反応混
合物を、 Armstrong,G.D.ら、[52]に記載のように、ガ
ラスウールで栓をしたパスツールピペットからPBS中の
システイン（１mg/mL）の溶液を含有する200μLのPBSへ
通した。１min.後、１% BSAを含有する200μLのPBSを混
合物に添加し、そしてヨウ素化されたSLTIを、この溶液
を１cm×30 cm Sephadex-G 25ゲル濾過カラムにPBS中の
0.1% BSAを用いて通すことにより精製した。ヨウ素化反
応の効率を、トリクロロ酢酸沈殿タンパク質中に取り込
まれたカウント数を測定することにより決定した。ヨウ
素化SLTIのアリコートを-90℃で貯蔵した。
【００７９】アッセイを非特異的な結合を減少させるた
めに0.15% BSAを含有するPBS中で実施した。２mgのSYNS
ORBを30 min.間、回転ローテーター上で先に調製した約
20,000 dpmのヨウ素化SLTI（比活性、2.2×107 dpm/μ
g、ベロ細胞傷害性アッセイにおけるCD50、0.4 pg/mL）
と共にインキュベートした。次いで、SYNSORBを１mLず
つ３回のPBS/BSAで洗浄して非結合カウントを除去し
た。誘導体化されたSYNSORBを、LKB Rackgammaモデル12
70 Gamma Counterで計数した。同様に、ASAもこの物質
を用いた効果を測定するために用いた。
めに0.15% BSAを含有するPBS中で実施した。２mgのSYNS
ORBを30 min.間、回転ローテーター上で先に調製した約
20,000 dpmのヨウ素化SLTI（比活性、2.2×107 dpm/μ
g、ベロ細胞傷害性アッセイにおけるCD50、0.4 pg/mL）
と共にインキュベートした。次いで、SYNSORBを１mLず
つ３回のPBS/BSAで洗浄して非結合カウントを除去し
た。誘導体化されたSYNSORBを、LKB Rackgammaモデル12
70 Gamma Counterで計数した。同様に、ASAもこの物質
を用いた効果を測定するために用いた。
【００８０】結果を表１に示す。
【００８１】
【表１】
【００８２】Pk-tri SYNSORBに結合したSLTは、0.1 M酢
酸、６MグアニジンHClを用いることにより、または沸騰
水浴中で30 min.間10% SDS中で加熱することにより部分
的に放出し得た。しかし、0.5 Mラクトース、0.5 Mガラ
クトース、または0.2 M EDTAのいずれもが、結合したSL
TIを外せなかった（図４）。
酸、６MグアニジンHClを用いることにより、または沸騰
水浴中で30 min.間10% SDS中で加熱することにより部分
的に放出し得た。しかし、0.5 Mラクトース、0.5 Mガラ
クトース、または0.2 M EDTAのいずれもが、結合したSL
TIを外せなかった（図４）。
【００８３】続く実験は、２mgのPk-tri SYNSORBがE. c
oli H19（SLTI）中の活性の約90%を中和したが、約10 m
gのPk-tri SYNSORBがE. coli 32511（SLTII/SLTIIc）ま
たはE. coli C600/933W（SLTII）の活性を同程度まで中
和するために必要であることを示した（図５）。
oli H19（SLTI）中の活性の約90%を中和したが、約10 m
gのPk-tri SYNSORBがE. coli 32511（SLTII/SLTIIc）ま
たはE. coli C600/933W（SLTII）の活性を同程度まで中
和するために必要であることを示した（図５）。
【００８４】実施例３．消化管条件下での実施。 Pk三糖SYNSORBを胃の中の状態を刺激するために種々の
時間37℃で0.01 M HCl中でインキュベートし、次いでPB
S中で十分に洗浄してHClを除去した。次いで、HCl処理
したSYNSORBを、本明細書中およびArmstrong, G.D.ら[5
3]で先に記載したVero細胞傷害性アッセイにおけるSLTI
およびSLTII中和活性について試験した。
時間37℃で0.01 M HCl中でインキュベートし、次いでPB
S中で十分に洗浄してHClを除去した。次いで、HCl処理
したSYNSORBを、本明細書中およびArmstrong, G.D.ら[5
3]で先に記載したVero細胞傷害性アッセイにおけるSLTI
およびSLTII中和活性について試験した。
【００８５】簡単に記載すると、E. coli O26:H11(SLT
I)またはO157:H(SLTII)を37℃でトリプチックソイ寒天
（TSA）上で一夜増殖させた。５つのプレートからの細
菌を0.1mg/mLのポリミキシンＢ硫酸を含有する3.0 mLの
PBS中に回収した。次いで、生じた懸濁液を遠心分離に
より明澄化した。
I)またはO157:H(SLTII)を37℃でトリプチックソイ寒天
（TSA）上で一夜増殖させた。５つのプレートからの細
菌を0.1mg/mLのポリミキシンＢ硫酸を含有する3.0 mLの
PBS中に回収した。次いで、生じた懸濁液を遠心分離に
より明澄化した。
【００８６】５mgのPk三糖SYNSORBを約１mLの以下に表
に列挙した細菌株のポリミキシン抽出物と混合した。デ
ータは２回の独立した測定値の平均を表し、各々は２点
平行で実施した。括弧内の値は、各々の値の範囲を与え
る。
に列挙した細菌株のポリミキシン抽出物と混合した。デ
ータは２回の独立した測定値の平均を表し、各々は２点
平行で実施した。括弧内の値は、各々の値の範囲を与え
る。
【００８７】
【表２】
【００８８】表２に示すように、HClとのインキュベー
ションは中和活性を認識し得るほど減少させない。腸の
状態を刺激するために、種々のSYNSORBを２時間37℃で
緩衝液中でまたはラット腸嚢（intestinal sac）中でイ
ンキュベートした。インキュベートしたSYNSORBを、概
ね上記のように、SLTIおよびSLTIIに対する中和活性に
ついてアッセイした。簡単に記載すると、ラット腸から
回収したSYNSORBを30〜60秒間Branson Model B-220 Ult
rasonic Cleaner中で超音波処理して凝集した材料の集
塊を破壊した。次いで、超音波処理したSYNSORBを５mL
の２回蒸留脱イオンH2Oで４回洗浄して減圧下で乾燥さ
せた。コントロールのSYNSORBを同様の方法で処理し
た。上記のポリミキシン抽出物をPBSで８mLに希釈し
た。５mgのSYNSORBを希釈したポリミキシン抽出物の一
部の0.9 mLに添加した。次いで、これらを室温で１時
間、回転ローテーター上でインキュベートした。得られ
た上清溶液を、SLTIまたはSLTII活性について分析し
た。中和百分率を、ASAコントロールSYNSORBと共にイン
キュベートしたポリミキシン抽出物のCD50と比較して算
出した。結果を表３〜６に示す。
ションは中和活性を認識し得るほど減少させない。腸の
状態を刺激するために、種々のSYNSORBを２時間37℃で
緩衝液中でまたはラット腸嚢（intestinal sac）中でイ
ンキュベートした。インキュベートしたSYNSORBを、概
ね上記のように、SLTIおよびSLTIIに対する中和活性に
ついてアッセイした。簡単に記載すると、ラット腸から
回収したSYNSORBを30〜60秒間Branson Model B-220 Ult
rasonic Cleaner中で超音波処理して凝集した材料の集
塊を破壊した。次いで、超音波処理したSYNSORBを５mL
の２回蒸留脱イオンH2Oで４回洗浄して減圧下で乾燥さ
せた。コントロールのSYNSORBを同様の方法で処理し
た。上記のポリミキシン抽出物をPBSで８mLに希釈し
た。５mgのSYNSORBを希釈したポリミキシン抽出物の一
部の0.9 mLに添加した。次いで、これらを室温で１時
間、回転ローテーター上でインキュベートした。得られ
た上清溶液を、SLTIまたはSLTII活性について分析し
た。中和百分率を、ASAコントロールSYNSORBと共にイン
キュベートしたポリミキシン抽出物のCD50と比較して算
出した。結果を表３〜６に示す。
【００８９】表３は、緩衝液中でインキュベートしたSY
NSORBによるSLTI活性の中和の結果を示す；表４は腸嚢
中でインキュベートしたSYNSORBによるSLTI活性の中和
を示す；表５は、緩衝液中でインキュベートしたSYNSOR
BによるSLTII活性の中和を示す；そして表６は腸嚢中で
インキュベートしたSYNSORBによるSLTII活性の中和を示
す。
NSORBによるSLTI活性の中和の結果を示す；表４は腸嚢
中でインキュベートしたSYNSORBによるSLTI活性の中和
を示す；表５は、緩衝液中でインキュベートしたSYNSOR
BによるSLTII活性の中和を示す；そして表６は腸嚢中で
インキュベートしたSYNSORBによるSLTII活性の中和を示
す。
【００９０】
【表３】
【００９１】a. ２点平行測定の平均。括弧内の範囲。 b. アセチル化シリルアミノ化（ASA）疎水性8-メトキ
シカルボニルオクチル結合アームのみを含むコントロー
ルのSYNSORB。
シカルボニルオクチル結合アームのみを含むコントロー
ルのSYNSORB。
【００９２】
【表４】
【００９３】a. ３点平行測定の平均±平均の標準偏
差。 b. アセチル化シリルアミノ化（ASA）疎水性8-メトキ
シカルボニルオクチル結合アームのみを含むコントロー
ルのSYNSORB。
差。 b. アセチル化シリルアミノ化（ASA）疎水性8-メトキ
シカルボニルオクチル結合アームのみを含むコントロー
ルのSYNSORB。
【００９４】
【表５】
【００９５】a. １回の測定の結果。
【００９６】
【表６】
【００９７】a. ３点平行測定の平均±平均の標準偏
差。 b. １回の測定の結果。 上に示したように、胃または小腸の条件のいずれもが、
誘導体下されたSYNSORBのSLTIまたはSLTIIの中和におけ
る活性に有害ではない。
差。 b. １回の測定の結果。 上に示したように、胃または小腸の条件のいずれもが、
誘導体下されたSYNSORBのSLTIまたはSLTIIの中和におけ
る活性に有害ではない。
【００９８】実施例４．ヒト患者における実施。 PkSYNSORBを含む薬学的組成物を、小児にカナダの13ヶ
所で投与した。
所で投与した。
【００９９】胃腸疾患において最も初期と思われる時点
における処置を可能にするために、糞便培養物の結果が
明らかになる前の小児を、本研究への加入に適格とし
た。小児は６ヶ月から15歳までの年齢に限定された。小
児は、下痢（24時間以前に少なくとも２回の軟便を経験
した）および以下のうち１つを有する場合に適格とし
た：腹部痙攣、糞便中の血液、直腸脱、VTEC感染または
HUSあるいは糞便から培養されたE. coli O157:H7が既知
である個体との密接な接触。患者は、慢性腎疾病または
血液学的疾病を有した場合、あるいは急性または慢性の
いずれかに基づく溶血、腎損傷または血小板減少の証拠
を有した場合、慢性腸疾病を有した場合、経口投薬の摂
取を妨げるエンセファロパシーを有した場合、あるいは
抗痙攣薬の投薬または膵臓酵素の補給を受けていた場
合、除外された。患者は、糞便培養物で非VTECの糞便病
原体を同定しない限り、研究中に残した。
における処置を可能にするために、糞便培養物の結果が
明らかになる前の小児を、本研究への加入に適格とし
た。小児は６ヶ月から15歳までの年齢に限定された。小
児は、下痢（24時間以前に少なくとも２回の軟便を経験
した）および以下のうち１つを有する場合に適格とし
た：腹部痙攣、糞便中の血液、直腸脱、VTEC感染または
HUSあるいは糞便から培養されたE. coli O157:H7が既知
である個体との密接な接触。患者は、慢性腎疾病または
血液学的疾病を有した場合、あるいは急性または慢性の
いずれかに基づく溶血、腎損傷または血小板減少の証拠
を有した場合、慢性腸疾病を有した場合、経口投薬の摂
取を妨げるエンセファロパシーを有した場合、あるいは
抗痙攣薬の投薬または膵臓酵素の補給を受けていた場
合、除外された。患者は、糞便培養物で非VTECの糞便病
原体を同定しない限り、研究中に残した。
【０１００】完全血球算定、末梢血スミア、血清尿素お
よびクレアチニン尿検査ならびに抗O157抗体のための血
清を、登録の前にすべての被験体から得た。登録および
登録後60日からの血清サンプルを、抗O157 LPS抗体につ
いて受身血球凝集アッセイを用いて試験した。＞1:500
の抗O157 LPS力価は、最近感染したと考えた。
よびクレアチニン尿検査ならびに抗O157抗体のための血
清を、登録の前にすべての被験体から得た。登録および
登録後60日からの血清サンプルを、抗O157 LPS抗体につ
いて受身血球凝集アッセイを用いて試験した。＞1:500
の抗O157 LPS力価は、最近感染したと考えた。
【０１０１】すべての患者からの糞便サンプルを、病院
微生物試験室への入室時に提出し、そして改変ソルビト
ール−MacConkey寒天培地に通常通り接種した。ソルビ
トールを発酵しなかったコロニーを標準的な生化学試験
によりE. coliとして同定し、そして単離体は0157抗血
清を用いる凝集により血清分類（serogroup）された。
通常のネガティブな培養物を有する患者からの糞便サン
プルは、National Laboratory for Enteric Pathogens
at the Center for Disease Control in Ottawa, Canad
aに転送した。これらのサンプルは、他のベロ毒素−産
生E. coliの存在について評価した。
微生物試験室への入室時に提出し、そして改変ソルビト
ール−MacConkey寒天培地に通常通り接種した。ソルビ
トールを発酵しなかったコロニーを標準的な生化学試験
によりE. coliとして同定し、そして単離体は0157抗血
清を用いる凝集により血清分類（serogroup）された。
通常のネガティブな培養物を有する患者からの糞便サン
プルは、National Laboratory for Enteric Pathogens
at the Center for Disease Control in Ottawa, Canad
aに転送した。これらのサンプルは、他のベロ毒素−産
生E. coliの存在について評価した。
【０１０２】適格な被験体を年齢および施設に基づいて
層別して、次いで無作為抽出した。患者は、ベビーフー
ド中に混合したSYNSORB-Pkまたは類似の味およびテクス
チャー（texture）を有する等容積のひき割りコーンミ
ールの偽薬を服用した。目的とする一次的な結果は、処
置の７日目でHUSの証拠を有する患者の比率であった。
層別して、次いで無作為抽出した。患者は、ベビーフー
ド中に混合したSYNSORB-Pkまたは類似の味およびテクス
チャー（texture）を有する等容積のひき割りコーンミ
ールの偽薬を服用した。目的とする一次的な結果は、処
置の７日目でHUSの証拠を有する患者の比率であった。
【０１０３】試験薬物を７日間１日に２回投与した。 S
YNSORB-Pkの用量は、約500 mg/kg/日であった。偽薬は
ひき割りコーンミールであり、これはSYNSORB-Pkに類似
した中程度にザラつくテクスチャーを有し、そしてSYNS
ORB-Pkのように無味なので選択された。風味を改善する
ために、SYNSORB-Pkとコーンミール偽薬との両方を、市
販のベビーフード（フルーツ）と混合した。30分以内に
薬を嘔吐した場合は、再投与した。糞便培養物の結果、
E. coli O157を同定した場合または細菌性病原体が同定
されなかった場合、被験体は７日間、試験薬物の服用を
続けた。糞便培養物が徴候の別の原因（例えば、Salmon
ella、Shigella、CampylobacterまたはYersinia種）を
同定した場合、被験体は薬物の服用を停止した。
YNSORB-Pkの用量は、約500 mg/kg/日であった。偽薬は
ひき割りコーンミールであり、これはSYNSORB-Pkに類似
した中程度にザラつくテクスチャーを有し、そしてSYNS
ORB-Pkのように無味なので選択された。風味を改善する
ために、SYNSORB-Pkとコーンミール偽薬との両方を、市
販のベビーフード（フルーツ）と混合した。30分以内に
薬を嘔吐した場合は、再投与した。糞便培養物の結果、
E. coli O157を同定した場合または細菌性病原体が同定
されなかった場合、被験体は７日間、試験薬物の服用を
続けた。糞便培養物が徴候の別の原因（例えば、Salmon
ella、Shigella、CampylobacterまたはYersinia種）を
同定した場合、被験体は薬物の服用を停止した。
【０１０４】治験についての一次的な結果の尺度は、登
録後８〜10日の試験室再評価時までの溶血性尿毒症症候
群を有する被験体の比率であった。溶血性尿毒症症候群
は、腎損傷および溶血または血小板減少のいずれかが存
在した場合に存在すると考えられた。腎損傷は、血清ク
レアチニン濃度の上昇（５歳未満については＞50μmol/
L、５〜６歳については＞60μmol/L）、または疾患の急
性期間に記録されたクレアチニンの値に50%より大きい
差があること、または尿顕微鏡検査で高倍率での視野当
たり少なくとも10個の赤血球があることを必要とした。
溶血は、ヘモグロビン濃度が≦105 g/Lであった場合、
またはスメア上に赤血球フラグメントが存在した場合、
またはヘモグロビンが≦105 g/Lに下がる前に赤血球が
輸注された場合に、存在すると判断された。すべての末
梢血スメアは、Children's Hospital of Eastern Ontar
io in Ottawaの中央研究試験室に転送され、ここで被験
体の処置状態について知らされていない試験室の技術者
によりランク付けされた。
録後８〜10日の試験室再評価時までの溶血性尿毒症症候
群を有する被験体の比率であった。溶血性尿毒症症候群
は、腎損傷および溶血または血小板減少のいずれかが存
在した場合に存在すると考えられた。腎損傷は、血清ク
レアチニン濃度の上昇（５歳未満については＞50μmol/
L、５〜６歳については＞60μmol/L）、または疾患の急
性期間に記録されたクレアチニンの値に50%より大きい
差があること、または尿顕微鏡検査で高倍率での視野当
たり少なくとも10個の赤血球があることを必要とした。
溶血は、ヘモグロビン濃度が≦105 g/Lであった場合、
またはスメア上に赤血球フラグメントが存在した場合、
またはヘモグロビンが≦105 g/Lに下がる前に赤血球が
輸注された場合に、存在すると判断された。すべての末
梢血スメアは、Children's Hospital of Eastern Ontar
io in Ottawaの中央研究試験室に転送され、ここで被験
体の処置状態について知らされていない試験室の技術者
によりランク付けされた。
【０１０５】血小板減少は、150×109/Lより少ない血小
板濃度として定義された。軽度HUSは、クレアチン濃度
のピーク上昇が100μmol/Lより少ない場合存在した；中
度HUSは、101〜400μmol/Lのクレアチン濃度および７日
間未満の透析を必要とした；重度HUSは、400μmol/Lよ
り高いクレアチン濃度または７日間以上の透析または死
亡を必要とした。これらの一次的な結果に加え、先に定
義したように患者はまた、分離溶血性貧血、分離血小板
減少、または分離腎損傷の二次的な結果を有するとして
分類された。両親は、毎日の日誌に下痢の頻度および投
薬の嘔吐した用量ならびに可能な有害作用の頻度を記録
した。
板濃度として定義された。軽度HUSは、クレアチン濃度
のピーク上昇が100μmol/Lより少ない場合存在した；中
度HUSは、101〜400μmol/Lのクレアチン濃度および７日
間未満の透析を必要とした；重度HUSは、400μmol/Lよ
り高いクレアチン濃度または７日間以上の透析または死
亡を必要とした。これらの一次的な結果に加え、先に定
義したように患者はまた、分離溶血性貧血、分離血小板
減少、または分離腎損傷の二次的な結果を有するとして
分類された。両親は、毎日の日誌に下痢の頻度および投
薬の嘔吐した用量ならびに可能な有害作用の頻度を記録
した。
【０１０６】この評価の結果を、証明されたSLT仲介病
原性E. coli感染症を有し、そして処置方法に応諾した
患者に対するこのプロトコルの効果を決定するために分
析した。これらの結果の分析を、２つの群に分けた。す
なわちE. coli感染症の最初の徴候発現の３日間以内に
処置した患者およびE. coli感染症の最初の徴候発現の
３日間以降に処置した患者である。以下の表７および８
は、この評価の結果を記載する。
原性E. coli感染症を有し、そして処置方法に応諾した
患者に対するこのプロトコルの効果を決定するために分
析した。これらの結果の分析を、２つの群に分けた。す
なわちE. coli感染症の最初の徴候発現の３日間以内に
処置した患者およびE. coli感染症の最初の徴候発現の
３日間以降に処置した患者である。以下の表７および８
は、この評価の結果を記載する。
【０１０７】
【表７】
【０１０８】
【表８】
【０１０９】上記の結果は、SLT仲介E. coli感染症に帰
因する疾病徴候を有する患者がこれらの徴候の発現の３
日間以内に処置される場合、偽薬で処置した患者につい
ての29.4%の発症に比較して処置された患者におけるHUS
の全体の発症は13.5%であって、リスクの相対的減少は5
4.1%である。上記の結果は、SLT仲介E. coli感染症に帰
因する疾病徴候を有する患者がこれらの徴候の発現の３
日以降に処置される場合、偽薬に比較してHUSの発症に
ついてのリスクの相対的減少がないことをさらに表す。
因する疾病徴候を有する患者がこれらの徴候の発現の３
日間以内に処置される場合、偽薬で処置した患者につい
ての29.4%の発症に比較して処置された患者におけるHUS
の全体の発症は13.5%であって、リスクの相対的減少は5
4.1%である。上記の結果は、SLT仲介E. coli感染症に帰
因する疾病徴候を有する患者がこれらの徴候の発現の３
日以降に処置される場合、偽薬に比較してHUSの発症に
ついてのリスクの相対的減少がないことをさらに表す。
【０１１０】従って、これらの結果は、本発明の方法を
介したSLT仲介E. coli感染症における初期の処置介入の
重要性を表す。
介したSLT仲介E. coli感染症における初期の処置介入の
重要性を表す。
【０１１１】本発明は好ましい実施例であると考えられ
ることを参考に記載したが、本発明が開示された実施例
に制限されないことが理解される。反対に、本発明に
は、添付の請求の範囲の精神および範囲内に含まれる種
々の改変および等価な脚色が包含されることが意図され
る。
ることを参考に記載したが、本発明が開示された実施例
に制限されないことが理解される。反対に、本発明に
は、添付の請求の範囲の精神および範囲内に含まれる種
々の改変および等価な脚色が包含されることが意図され
る。
【０１１２】参考文献 以下の参考文献は本出願中において角括弧（[]）内の数
字として本出願の関連の箇所で引用される。
字として本出願の関連の箇所で引用される。
【０１１３】
【表９】
【０１１４】
【表１０】
【０１１５】
【表１１】
【０１１６】
【表１２】
【０１１７】
【表１３】
【０１１８】上記の出版物、特許および特許出願の開示
内容は、各々の個別の出版物、特許および特許出願内で
の言葉が特定して個別にその中に包含されるのと同程度
に、そのままの状態で本明細書中で参考として援用され
る。
内容は、各々の個別の出版物、特許および特許出願内で
の言葉が特定して個別にその中に包含されるのと同程度
に、そのままの状態で本明細書中で参考として援用され
る。
【０１１９】
【発明の効果】本発明により、腸のE. coli感染症に関
連する志賀様溶毒素の中和のための、この感染症の溶血
性尿毒症症候群への進行を阻止する方法が提供される。
連する志賀様溶毒素の中和のための、この感染症の溶血
性尿毒症症候群への進行を阻止する方法が提供される。
【図１】ＡおよびＢは、ポリミキシンＢを使用して得ら
れた細菌抽出物の毒性を、種々のSYNSORBの存在下およ
び非存在下でVero細胞を殺傷するそれらの能力について
表す図である。
れた細菌抽出物の毒性を、種々のSYNSORBの存在下およ
び非存在下でVero細胞を殺傷するそれらの能力について
表す図である。
【図２】ＡおよびＢは、リゾチームを使用して得られた
細菌抽出物の毒性を、種々のSYNSORBの存在下および非
存在下でVero細胞を殺傷するそれらの能力について表す
図である。
細菌抽出物の毒性を、種々のSYNSORBの存在下および非
存在下でVero細胞を殺傷するそれらの能力について表す
図である。
【図３】Ａは、わずか10 mgのPk三糖SYNSORBが＞90%のS
LT毒素を細菌抽出物から除くことを表す図であり、Ｂ
は、SLT毒素の結合が抽出物とPkSYNSORBとの混合の５分
以内に生じることを表す図である。
LT毒素を細菌抽出物から除くことを表す図であり、Ｂ
は、SLT毒素の結合が抽出物とPkSYNSORBとの混合の５分
以内に生じることを表す図である。
【図４】種々の溶出液を利用しての種々のSYNSORBから
の結合したI125標識SLTIの溶出の困難性を表す図であ
る。
の結合したI125標識SLTIの溶出の困難性を表す図であ
る。
【図５】＞90%のSLTI、SLTII/IIcおよびSLTII活性が、
わずか10 mgのPk三糖SYNSORBと、Vero細胞およびSLT抽
出物を３日間同時インキュベーションすることにより中
和されることを表す図である。
わずか10 mgのPk三糖SYNSORBと、Vero細胞およびSLT抽
出物を３日間同時インキュベーションすることにより中
和されることを表す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (71)出願人 596121219 201， 1204 Ｋｅｎｓｉｎｇｔｏｎ Ｒ ｏａｄ Ｎ．Ｗ．， Ｃａｌｇａｒｙ， Ａｌｂｅｒｔａ， Ｃａｎａｄａ Ｔ２Ｎ ３Ｐ５ (72)発明者 ブラッドリー ピー． トンプソン カナダ国 ティー２エヌ ０ゼット５， アルバータ， カルガリー， ダブリュー エヌディー． アベニュー エヌ．ダブリ ュー． 1775 (72)発明者 ピーター エヌ． マクライン カナダ国 ケイ１ケイ ０エイチ８， オ ンタリオ， オタワ， イーストボーン アベニュー 801 (72)発明者 ピーター シー． ロウエ アメリカ合衆国 メリーランド 21203, タウンソン， レンジ ロード 415 (72)発明者 エライン オーバイン カナダ国 ケイ１ブイ ９ジェイ５， オ ンタリオ， オタワ， オウル ドライブ 155 (72)発明者 テランス ピー． クラッセン カナダ国 ケイ１ダブリュー １ジー６, オンタリオ， グロウセスター，グレー ドウッズ プレイス 5876 (72)発明者 グレン ディー． アームストロング カナダ国 ティー６シー １ピー９， ア ルバータ， エドモントン， 91エスティ ー アベニュー 7591 (72)発明者 ポール アール． グッドヤー カナダ国 エイチ４エックス １ゼット ８， ケベック， モントレオール ウエ スト， ウールスレイ アベニュー 111 (72)発明者 アンドリュー エム． マッケンズィー カナダ国 ケイ１ジェイ ７ワイ７， オ ンタリオ， グロウセスター， リバーシ ョアー クレセント 522 (72)発明者 ジョージ エイ． ウェルズ カナダ国 ケイ１ブイ ９エイチ２， オ ンタリオ， オタワ， ワックスウイング ドライブ 34 (72)発明者 ハーミー ライオアー カナダ国 ケイ２ジー ４イー８， オン タリオ， ネピアン， チャーリング ク ロス 50 (72)発明者 フランコイス オークレアー カナダ国 ケイ４シー １エイチ６， オ ンタリオ， カンバーランド， フレンチ ロード 2247
Claims (13)
- 【請求項１】 志賀様毒素に仲介される腸管出血性E. c
oli感染症に起因する患者における溶血性尿毒症症候群
の発症を阻止するための方法であって、該方法は該患者
に有効量のαGal(1→4)βGalサブユニットを含む薬学的
に不活性な親和性支持体を含む薬学的組成物を投与する
工程を包含し、該αGal(1→4)βGalサブユニットは該支
持体に非ペプチド性リンカーアームを介して結合されて
おり、ここで該サブユニットはSLT毒素を結合し、ここ
で該薬学的組成物は感染症の発現の約３日間以内に投与
される、方法。 - 【請求項２】 前記リンカーアームが１〜10の炭素原子
を含む、請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】 前記リンカーアームが-(CH2)8C(O)-であ
る、請求項２に記載の方法。 - 【請求項４】 前記不活性な親和性支持体がシリカであ
る、請求項１に記載の方法。 - 【請求項５】 腸への関与以外の器官への関与に及ぶ前
に、前記薬学的組成物が患者に投与される、請求項１に
記載の方法。 - 【請求項６】 志賀様毒素に仲介される腸管出血性E. c
oli感染症を発現する患者における溶血性尿毒症症候群
の発症を阻止するための方法であって、該方法は該患者
に有効量のαGal(1→4)βGal、αGal(1→4)βGal(1→4)
βGlcNAcおよびαGal(1→4)βGal(1→4)βGlcからなる
群より選択されるオリゴ糖を含む薬学的に不活性な親和
性支持体を含む薬学的組成物を投与する工程を包含し、
該オリゴ糖は該支持体に非ペプチド性リンカーアームを
介して結合されており、ここで該薬学的組成物は感染症
の発現の約３日間以内に投与される、方法。 - 【請求項７】 前記オリゴ糖の配列がαGal(1→4)βGal
である、請求項６に記載の方法。 - 【請求項８】 前記オリゴ糖の配列がαGal(1→4)βGal
(1→4)βGlcNAcである、請求項６に記載の方法。 - 【請求項９】 前記オリゴ糖の配列がαGal(1→4)βGal
(1→4)βGlcである、請求項６に記載の方法。 - 【請求項１０】 前記リンカーアームが１〜10の炭素原
子を含む、請求項６に記載の方法。 - 【請求項１１】 前記リンカーアームが-(CH2)8C(O)-で
ある、請求項１０に記載の方法。 - 【請求項１２】 前記不活性な親和性支持体がシリカで
ある、請求項６に記載の方法。 - 【請求項１３】 腸への関与以外の器官への関与に及ぶ
前に、前記薬学的組成物が患者に投与される、請求項６
に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US66900496A | 1996-06-21 | 1996-06-21 | |
| US08/669,004 | 1996-06-21 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH107575A true JPH107575A (ja) | 1998-01-13 |
Family
ID=24684633
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8216507A Pending JPH107575A (ja) | 1996-06-21 | 1996-08-16 | 細菌性赤痢の処置 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5849714A (ja) |
| JP (1) | JPH107575A (ja) |
| KR (1) | KR19990082194A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005289907A (ja) * | 2004-03-31 | 2005-10-20 | Japan Science & Technology Agency | ベロ毒素中和剤 |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH107575A (ja) * | 1996-06-21 | 1998-01-13 | Synsorb Biotec Inc | 細菌性赤痢の処置 |
| AUPQ275799A0 (en) | 1999-09-10 | 1999-10-07 | Luminis Pty Limited | Recombinant bacterium expressing an oligosaccharide receptor mimic |
| US6541013B1 (en) | 2000-07-13 | 2003-04-01 | Idaho Research Foundation, Inc. | Methods and compositions for suppressing bovine leukemia virus with a Shiga toxin polypeptide |
| US7135173B2 (en) * | 2000-07-13 | 2006-11-14 | Idaho Research Foundation, Inc. | Antiviral activity of Shiga toxin |
| US6596707B2 (en) | 2001-05-24 | 2003-07-22 | Abbott Laboratories | Monovalent saccharides and uses thereof |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1544908A (en) * | 1975-07-08 | 1979-04-25 | Chembiomed Ltd | Artificial oligosaccharide antigenic determinants |
| US4362720A (en) * | 1977-04-14 | 1982-12-07 | Chembiomed Ltd. | Synthesis of 2-amino-2-deoxyglycoses and 2-amino-2-deoxyglycosides from glycals |
| DE3230736A1 (de) * | 1982-08-18 | 1984-02-23 | Herbert Prof. Dr. 8400 Regensburg Rupprecht | An siliciumdioxid als traeger gebundene wirkstoffe, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
| SE8406626D0 (sv) * | 1984-12-27 | 1984-12-27 | Bio Carb Ab | Forening och komposition for terapeutisk eller diagnostisk anvendning jemte anvendning av sadan forening och komposition for terapeutisk behandling och isolering av shigatoxin |
| IL83715A0 (en) * | 1987-08-31 | 1988-01-31 | Yeda Res & Dev | Pharmaceutical anti-protozoal compositions |
| US5079353A (en) * | 1987-12-02 | 1992-01-07 | Chembiomed, Ltd. | Sialic acid glycosides, antigens, immunoadsorbents, and methods for their preparation |
| US5443832A (en) * | 1990-04-16 | 1995-08-22 | Institut Swisse De Recherches Experimentales Sur Le Cancer | Hydroxyapatite-antigen conjugates and methods for generating a poly-Ig immune response |
| ES2154265T3 (es) * | 1991-10-18 | 2001-04-01 | Synsorb Biotech Inc | Tratamiento de la disenteria bacteriana. |
| US5484773A (en) * | 1994-02-14 | 1996-01-16 | Alberta Research Council | Treatment of antibiotic associated diarrhea |
| IL109519A (en) * | 1994-05-03 | 1999-03-12 | Yeda Res & Dev | Vaccines for oral immunization against infecting agents |
| JPH107575A (ja) * | 1996-06-21 | 1998-01-13 | Synsorb Biotec Inc | 細菌性赤痢の処置 |
-
1996
- 1996-08-16 JP JP8216507A patent/JPH107575A/ja active Pending
-
1997
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-
1999
- 1999-04-23 US US09/296,584 patent/US6121242A/en not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005289907A (ja) * | 2004-03-31 | 2005-10-20 | Japan Science & Technology Agency | ベロ毒素中和剤 |
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