JPWO2020214777A5 - - Google Patents

Description

１つの例示的な実施形態では、目的のタンパク質を有する試料マトリックス中の宿主細胞タンパク質を同定する方法は、目的のタンパク質から宿主細胞タンパク質を解離することと、解離した宿主細胞タンパク質を分子量カットオフフィルタを使用して濾過することと、濾過した宿主細胞タンパク質を加水分解剤に接触させることと、宿主細胞タンパク質を同定することと、を含むことができる。本実施形態の一態様では、タンパク質解離は、タンパク質解離剤を使用して実施することができる。本実施形態の特定の態様では、タンパク質解離剤は、デオキシコール酸ナトリウムを含むことができる。本実施形態の別の特定の態様では、タンパク質解離剤は、Ｎ－ラウロイルサルコシンを含むことができる。本実施形態の更に別の特定の態様では、タンパク質解離剤は、デオキシコール酸ナトリウム及びＮ－ラウロイルサルコシンを含むことができる。本実施形態の特定の態様では、タンパク質解離剤は、本質的に分解性であり得る。本実施形態の一態様では、分子量カットオフフィルタは、少なくとも約１００ＫＤａのカットオフを有することができる。本実施形態の一態様では、分子量カットオフフィルタは、少なくとも約５０ＫＤａのカットオフを有することができる。本実施形態の一態様では、加水分解剤はトリプシンであり得る。本実施形態の一態様では、本方法は、少なくとも約１ｐｐｍの濃度である宿主細胞タンパク質を検出するように構成することができる。本実施形態の一態様では、濾過ステップは、解離した宿主細胞タンパク質を少なくとも約５０倍濃縮する。本実施形態の一態様では、宿主細胞タンパク質の同定は、質量分析計を使用して実施することができる。本実施形態の特定の態様では、質量分析計は、液体クロマトグラフィーシステムに結合することができる。本実施形態の別の特定の態様では、液体クロマトグラフィーシステムは、ナノ液体クロマトグラフィーシステムであり得る。本実施形態の別の特定の態様では、質量分析計は、タンデム質量分析計であり得る。本実施形態の一態様では、本方法は、濾過された宿主細胞タンパク質をタンパク質還元剤に接触させることを更に含むことができる。本実施形態の特定の態様では、タンパク質還元剤はＴＣＥＰであり得る。本実施形態の別の態様では、本方法は、濾過された宿主細胞タンパク質をタンパク質アルキル化剤に接触させることを更に含むことができる。本実施形態の特定の態様では、タンパク質アルキル化剤はＣＡＡであり得る。本実施形態の更に別の態様では、本方法は、濾過された宿主細胞タンパク質を遠心分離することを更に含むことができる。
[本発明１００１]
目的のタンパク質を有する試料マトリックス中の宿主細胞タンパク質を同定するための方法であって、
前記目的のタンパク質から前記宿主細胞タンパク質を解離させることと、
前記解離した宿主細胞タンパク質を、分子量カットオフフィルタを使用して濾過することと、
前記濾過された宿主細胞タンパク質を加水分解剤に接触させることと、
前記宿主細胞タンパク質を同定することと
を含む、方法。
[本発明１００２]
前記タンパク質解離が、タンパク質解離剤を使用して実施される、本発明１００１の方法。
[本発明１００３]
前記濾過された宿主細胞タンパク質をタンパク質還元剤に接触させることを更に含む、本発明１００１の方法。
[本発明１００４]
前記濾過された宿主細胞タンパク質をタンパク質アルキル化剤に接触させることを更に含む、本発明１００１の方法。
[本発明１００５]
前記濾過された宿主細胞タンパク質を遠心分離することを更に含む、本発明１００１の方法。
[本発明１００６]
前記宿主細胞タンパク質を約１３０００ｒｐｍで約８分間遠心分離することを更に含む、本発明１００１の方法。
[本発明１００７]
前記目的のタンパク質が抗体である、本発明１００１の方法。
[本発明１００８]
前記目的のタンパク質が治療用抗体である、本発明１００１の方法。
[本発明１００９]
ステップ（ｃ）の前記宿主細胞タンパク質の同定が、質量分析計を使用して実施される、本発明１００１の方法。
[本発明１０１０]
前記質量分析計が、液体クロマトグラフィーシステムに結合されている、本発明１００９の方法。
[本発明１０１１]
前記液体クロマトグラフィーシステムが、ナノ液体クロマトグラフィーシステムである、本発明１０１０の方法。
[本発明１０１２]
前記質量分析計がタンデム質量分析計である、本発明１００９の方法。
[本発明１０１３]
前記タンパク質解離剤がデオキシコール酸ナトリウムを含む、本発明１００２の方法。
[本発明１０１４]
前記タンパク質解離剤がＮ－ラウロイルサルコシンを含む、本発明１００２の方法。
[本発明１０１５]
前記タンパク質加水分解剤がトリプシンである、本発明１００１の方法。
[本発明１０１６]
前記タンパク質還元剤がＴＣＥＰである、本発明１００３の方法。
[本発明１０１７]
前記タンパク質アルキル化剤がＣＡＡである、本発明１００４の方法。
[本発明１０１８]
前記分子量カットオフフィルタが約１００ＫＤａのカットオフを有する、本発明１００１の方法。
[本発明１０１９]
前記分子量カットオフフィルタが約５０ＫＤａのカットオフを有する、本発明１００１の方法。
[本発明１０２０]
前記タンパク質解離剤が分解性である、本発明１００１の方法。
[本発明１０２１]
前記宿主細胞タンパク質の検出限界が少なくとも約１ｐｐｍである、本発明１００１の方法。
[本発明１０２２]
前記濾過ステップが、前記解離した宿主細胞タンパク質を少なくとも約５０倍濃縮する、本発明１００１の方法。
[本発明１０２３]
宿主細胞タンパク質の検出限界が、分子量カットオフフィルタを使用して前記解離した宿主細胞タンパク質を濾過するためのステップを含まない別の方法の検出限界よりも少なくとも約５倍優れている、本発明１００１の方法。
[本発明１０２４]
目的のタンパク質を有する試料マトリックス中の宿主細胞タンパク質を同定するための方法であって、
前記目的のタンパク質から前記宿主細胞タンパク質を解離させることと、
前記解離した宿主細胞タンパク質を、分子量カットオフフィルタを使用して濾過することと、
前記宿主細胞タンパク質を同定することと
を含む、方法。
[本発明１０２５]
前記濾過ステップが、前記解離した宿主細胞タンパク質を少なくとも約５０倍濃縮する、本発明１０２５の方法。
[本発明１０２６]
前記宿主細胞タンパク質の同定が、質量分析計を使用して実施される、本発明１０２５の方法。
[本発明１０２７]
目的のタンパク質を有する試料マトリックス中の宿主細胞タンパク質を同定するための方法であって、
前記目的のタンパク質から前記宿主細胞タンパク質を、タンパク質解離剤を使用して解離させることと、
前記解離した宿主細胞タンパク質を、分子量カットオフフィルタを使用して濾過することと、
前記宿主細胞タンパク質を同定することと
を含む、方法。
[本発明１０２８]
目的のタンパク質を有する試料マトリックス中の宿主細胞タンパク質を同定するための方法であって、
前記目的のタンパク質から前記宿主細胞タンパク質を、タンパク質解離剤を使用して解離させることと、
前記解離した宿主細胞タンパク質を、分子量カットオフフィルタを使用して濾過することと、
前記宿主細胞タンパク質を質量分析計を使用して同定することと
を含む、方法。
[本発明１０２９]
目的のタンパク質を有する試料マトリックス中の宿主細胞タンパク質を同定するための方法であって、
前記目的のタンパク質から前記宿主細胞タンパク質を、タンパク質解離剤を使用して解離させることと、
前記解離した宿主細胞タンパク質を分子量カットオフフィルタを使用して濾過することであって、前記濾過が、前記解離した宿主細胞タンパク質を少なくとも約５０倍濃縮する、前記濾過することと、
前記宿主細胞タンパク質を同定することと
を含む、方法。
[本発明１０３０]
目的のタンパク質を有する試料マトリックス中の宿主細胞タンパク質を同定するための方法であって、
前記目的のタンパク質から前記宿主細胞タンパク質を、タンパク質解離剤を使用して解離させることと、
前記解離した宿主細胞タンパク質を分子量カットオフフィルタを使用して濾過することであって、前記濾過が、前記解離した宿主細胞タンパク質を少なくとも約５０倍濃縮する、前記濾過することと、
前記宿主細胞タンパク質を質量分析計を使用して同定することと
を含む、方法。
[本発明１０３１]
目的のタンパク質を有する試料マトリックス中の宿主細胞タンパク質を同定するための方法であって、
前記目的のタンパク質から前記宿主細胞タンパク質を、タンパク質解離剤を使用して解離させることと、
前記解離した宿主細胞タンパク質を分子量カットオフフィルタを使用して濾過することであって、前記濾過が、前記解離した宿主細胞タンパク質を少なくとも約５０倍濃縮する、前記濾過することと、
前記濾過された宿主細胞タンパク質を加水分解剤に接触させることと、
前記宿主細胞タンパク質を質量分析計を使用して同定することと
を含む、方法。
[本発明１０３２]
試料マトリックス中の宿主細胞タンパク質を同定するための方法であって、
前記宿主細胞タンパク質を有する前記試料マトリックスをタンパク質解離剤に接触させることと、
前記解離した宿主細胞タンパク質を、分子量カットオフフィルタを使用して濾過することと、
前記濾過された宿主細胞タンパク質を加水分解剤に接触させることと、
前記宿主細胞タンパク質を同定することと
を含む、方法。
[本発明１０３３]
試料マトリックス中の宿主細胞タンパク質を同定するための方法であって、
前記宿主細胞タンパク質及び目的のタンパク質を有する前記試料マトリックスをタンパク質解離剤に接触させることであって、前記タンパク質解離剤が、前記目的のタンパク質を変性させる、前記接触させることと、
前記宿主細胞タンパク質を、分子量カットオフフィルタを使用して濾過することと、
前記濾過された宿主細胞タンパク質を加水分解剤に接触させることと、
前記宿主細胞タンパク質を同定することと
を含む、方法。

Claims (15)

1. 目的のタンパク質を有する試料マトリックス中の宿主細胞タンパク質を同定するための方法であって、
   前記目的のタンパク質から前記宿主細胞タンパク質を解離させることと、
   前記解離した宿主細胞タンパク質を、少なくとも３０ｋＤａのカットオフを有する分子量カットオフフィルタを使用して濾過することと、
   前記濾過された宿主細胞タンパク質を遠心分離することと、
   宿主細胞タンパク質を分解するために、前記濾過され、遠心分離された宿主細胞タンパク質を加水分解剤に接触させることと、
   前記宿主細胞タンパク質を同定することと
   を含む、方法。
2. 前記タンパク質解離が、タンパク質解離剤を使用して実施される、請求項１に記載の方法。
3. 前記濾過された宿主細胞タンパク質をタンパク質還元剤に接触させることを更に含む、請求項１に記載の方法。
4. 前記濾過された宿主細胞タンパク質をタンパク質アルキル化剤に接触させることを更に含む、請求項１に記載の方法。
5. 前記宿主細胞タンパク質を１３０００ｒｐｍで８分間遠心分離することを更に含む、請求項１に記載の方法。
6. 前記宿主細胞タンパク質の同定が、質量分析計を使用して実施される、請求項１に記載の方法。
7. 前記質量分析計が、液体クロマトグラフィーシステムに結合されている、請求項６に記載の方法。
8. 前記液体クロマトグラフィーシステムが、ナノ液体クロマトグラフィーシステムである、請求項７に記載の方法。
9. 前記質量分析計がタンデム質量分析計である、請求項６に記載の方法。
10. 前記分子量カットオフフィルタが１００ＫＤａのカットオフを有する、請求項１に記載の方法。
11. 前記分子量カットオフフィルタが５０ＫＤａのカットオフを有する、請求項１に記載の方法。
12. 前記宿主細胞タンパク質の検出限界が少なくとも１ｐｐｍである、請求項１に記載の方法。
13. 前記濾過ステップが、前記解離した宿主細胞タンパク質を少なくとも５０倍濃縮する、請求項１に記載の方法。
14. 宿主細胞タンパク質の検出限界が、分子量カットオフフィルタを使用して前記解離した宿主細胞タンパク質を濾過するためのステップを含まない別の方法の検出限界よりも少なくとも５倍優れている、請求項１に記載の方法。
15. 目的のタンパク質を有する試料マトリックス中の宿主細胞タンパク質を同定するための方法であって、
    前記目的のタンパク質から前記宿主細胞タンパク質を解離させることと、
    前記解離した宿主細胞タンパク質を、少なくとも３０ｋＤａのカットオフを有する分子量カットオフフィルタを使用して濾過することと、
    前記濾過された宿主細胞タンパク質を遠心分離することと、
    前記宿主細胞タンパク質を同定することと
    を含む、方法。