JPWO2018181276A1 - ヒト組織幹細胞及びその使用 - Google Patents
ヒト組織幹細胞及びその使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2018181276A1 JPWO2018181276A1 JP2019509868A JP2019509868A JPWO2018181276A1 JP WO2018181276 A1 JPWO2018181276 A1 JP WO2018181276A1 JP 2019509868 A JP2019509868 A JP 2019509868A JP 2019509868 A JP2019509868 A JP 2019509868A JP WO2018181276 A1 JPWO2018181276 A1 JP WO2018181276A1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- gene
- stem cell
- stem cells
- cancer
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 260
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 152
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 claims abstract description 41
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 198
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 154
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 137
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 128
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 89
- 210000002220 organoid Anatomy 0.000 claims description 78
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 claims description 68
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 54
- 102100031036 Leucine-rich repeat-containing G-protein coupled receptor 5 Human genes 0.000 claims description 26
- 101001063456 Homo sapiens Leucine-rich repeat-containing G-protein coupled receptor 5 Proteins 0.000 claims description 25
- 101150017554 LGR5 gene Proteins 0.000 claims description 23
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 23
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 claims description 20
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 13
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 12
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 11
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 claims description 6
- 101710174256 Leucine-rich repeat-containing G-protein coupled receptor 5 Proteins 0.000 claims description 3
- 238000010362 genome editing Methods 0.000 claims description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 18
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 18
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 17
- NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N Tamoxifen Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(/CC)=C(C=1C=CC(OCCN(C)C)=CC=1)/C1=CC=CC=C1 NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N 0.000 description 16
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 15
- 229960005395 cetuximab Drugs 0.000 description 14
- 108010054624 red fluorescent protein Proteins 0.000 description 13
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 12
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 11
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 11
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 11
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 10
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 10
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 10
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 10
- 102100032700 Keratin, type I cytoskeletal 20 Human genes 0.000 description 9
- 108010066370 Keratin-20 Proteins 0.000 description 9
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 9
- 229960001603 tamoxifen Drugs 0.000 description 8
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 8
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 7
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 7
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 102100038454 Noggin Human genes 0.000 description 4
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 4
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 4
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 4
- 108010051219 Cre recombinase Proteins 0.000 description 3
- 108010091086 Recombinases Proteins 0.000 description 3
- 102000018120 Recombinases Human genes 0.000 description 3
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 3
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 3
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 3
- 108091005957 yellow fluorescent proteins Proteins 0.000 description 3
- 102100024485 Cell division cycle-associated protein 7 Human genes 0.000 description 2
- 102100026245 E3 ubiquitin-protein ligase RNF43 Human genes 0.000 description 2
- 101710109241 E3 ubiquitin-protein ligase RNF43 Proteins 0.000 description 2
- 101150066002 GFP gene Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000980893 Homo sapiens Cell division cycle-associated protein 7 Proteins 0.000 description 2
- 101000619640 Homo sapiens Leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000708790 Homo sapiens SPARC-related modular calcium-binding protein 2 Proteins 0.000 description 2
- 102100022170 Leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains protein 1 Human genes 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 101710109505 Olfactomedin-4 Proteins 0.000 description 2
- 102100026071 Olfactomedin-4 Human genes 0.000 description 2
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 2
- 108700039576 Repulsive guidance molecule B Proteins 0.000 description 2
- 102100022814 Repulsive guidance molecule B Human genes 0.000 description 2
- 102100032724 SPARC-related modular calcium-binding protein 2 Human genes 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 2
- 230000002301 combined effect Effects 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- -1 for example Proteins 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 102000047766 human LGR5 Human genes 0.000 description 2
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 2
- UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N irinotecan Chemical compound C1=C2C(CC)=C3CN(C(C4=C([C@@](C(=O)OC4)(O)CC)C=4)=O)C=4C3=NC2=CC=C1OC(=O)N(CC1)CCC1N1CCCCC1 UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N 0.000 description 2
- 229960004768 irinotecan Drugs 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 2
- 229960001756 oxaliplatin Drugs 0.000 description 2
- DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L oxaliplatin Chemical compound O1C(=O)C(=O)O[Pt]11N[C@@H]2CCCC[C@H]2N1 DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L 0.000 description 2
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 2
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 210000001988 somatic stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002660 stem cell treatment Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 2
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N Ala-Gln Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 102100035683 Axin-2 Human genes 0.000 description 1
- 101150013907 BHLH gene Proteins 0.000 description 1
- 238000010356 CRISPR-Cas9 genome editing Methods 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 208000031404 Chromosome Aberrations Diseases 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010046276 FLP recombinase Proteins 0.000 description 1
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 101000874569 Homo sapiens Axin-2 Proteins 0.000 description 1
- PWKSKIMOESPYIA-BYPYZUCNSA-N L-N-acetyl-Cysteine Chemical compound CC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O PWKSKIMOESPYIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 108010085895 Laminin Proteins 0.000 description 1
- 108010052014 Liberase Proteins 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241000235343 Saccharomycetales Species 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 229960004308 acetylcysteine Drugs 0.000 description 1
- 229940125644 antibody drug Drugs 0.000 description 1
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 1
- 210000000013 bile duct Anatomy 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 230000005907 cancer growth Effects 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 108010082025 cyan fluorescent protein Proteins 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 108010043649 gastrin I Proteins 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 238000013537 high throughput screening Methods 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 102000045246 noggin Human genes 0.000 description 1
- 108700007229 noggin Proteins 0.000 description 1
- 210000004798 organs belonging to the digestive system Anatomy 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000000277 pancreatic duct Anatomy 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 238000009751 slip forming Methods 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000005740 tumor formation Effects 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 238000002689 xenotransplantation Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5011—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing antineoplastic activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/65—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression using markers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0693—Tumour cells; Cancer cells
- C12N5/0695—Stem cells; Progenitor cells; Precursor cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6897—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids involving reporter genes operably linked to promoters
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/15—Medicinal preparations ; Physical properties thereof, e.g. dissolubility
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
[1]幹細胞マーカー遺伝子の遺伝子座に目的遺伝子が導入されたヒト組織幹細胞。
[2]前記幹細胞マーカー遺伝子がLeucine Rich Repeat Containing G Protein−Coupled Receptor 5(LGR5)遺伝子である、[1]に記載のヒト組織幹細胞。
[3]Lgr5遺伝子座の第18エクソンに目的遺伝子が導入された、[2]に記載のヒト組織幹細胞。
[4]前記目的遺伝子がレポーター遺伝子である、[1]又は[2]に記載のヒト組織幹細胞。
[5]前記目的遺伝子が第1のレポーター遺伝子であり、強制発現用プロモーターで作動する第2のレポーター遺伝子が更に導入された、[1]〜[4]のいずれかに記載のヒト組織幹細胞。
[6]癌組織由来の幹細胞である、[1]〜[5]のいずれかに記載のヒト組織幹細胞。
[7]ヒト組織幹細胞の幹細胞マーカー遺伝子の遺伝子座に目的遺伝子を導入する方法であって、ヒト組織幹細胞を含む培養オルガノイドの前記幹細胞マーカー遺伝子の遺伝子座に前記目的遺伝子をゲノム編集により導入する工程を備える方法。
[8]前記目的遺伝子を導入する前記工程がエレクトロポレーションにより行われ、前記目的遺伝子を導入した後に前記培養オルガノイドを30℃で2日間培養する工程を更に備える、[7]に記載の方法。
[9]前記幹細胞マーカー遺伝子の遺伝子座がLgr5遺伝子座である、[7]又は[8]に記載の方法。
[10]Lgr5遺伝子座の第18エクソンに前記目的遺伝子を導入する、[9]に記載の方法。
[11]前記目的遺伝子が、細胞系譜標識誘導タンパク質をコードする遺伝子である、[7]〜[10]のいずれかに記載の方法。
[12][11]に記載の方法で作製されたヒト組織幹細胞が幹細胞であるか否かを試験する方法であって、前記ヒト組織幹細胞の細胞系譜解析により前記ヒト組織幹細胞の自己複製及び分化を検出する工程を備え、前記ヒト組織幹細胞の自己複製及び分化の双方が検出されることが、前記ヒト組織幹細胞が幹細胞であることを示す、方法。
[13]前記ヒト組織幹細胞が癌組織由来の幹細胞である、[7]〜[12]のいずれかに記載の方法。
[14]癌幹細胞に有効な抗癌剤のスクリーニング方法であって、被験物質の存在下で、癌幹細胞マーカー遺伝子のプロモーターで作動するレポーター遺伝子が導入された癌幹細胞を培養する工程と、前記レポーター遺伝子の発現量を測定する工程と、を備え、前記レポーター遺伝子の発現量の低下が、前記被験物質が癌幹細胞に有効な抗癌剤であることを示す、方法。
[15]癌幹細胞及び癌細胞に対する抗癌剤の有効性を試験する方法であって、前記抗癌剤の存在下で、癌幹細胞マーカー遺伝子のプロモーターで作動する第1のレポーター遺伝子及び強制発現用プロモーターで作動する第2のレポーター遺伝子が導入された癌幹細胞を培養する工程と、前記第1及び前記第2のレポーター遺伝子の発現量を測定する工程と、を備え、前記第1のレポーター遺伝子の発現量の低下が、前記抗癌剤が癌幹細胞に有効な抗癌剤であることを示し、前記第2のレポーター遺伝子の発現量の低下が、前記抗癌剤が癌幹細胞及び癌細胞に有効な抗癌剤であることを示す、方法。
[P1]目的遺伝子座に目的遺伝子が導入された組織幹細胞。
[P2]前記目的遺伝子座が幹細胞マーカー遺伝子の遺伝子座である、[P1]に記載の組織幹細胞。
[P3]前記幹細胞マーカー遺伝子がLeucine Rich Repeat Containing G Protein−Coupled Receptor 5(LGR5)遺伝子である、[P2]に記載の組織幹細胞。
[P4]前記目的遺伝子がレポーター遺伝子である、[P3]に記載の組織幹細胞。
[P5]前記目的遺伝子が第1のレポーター遺伝子であり、強制発現用プロモーターで作動する第2のレポーター遺伝子が更に導入された、[P1]〜[P4]のいずれかに記載の組織幹細胞。
[P6]癌組織由来の幹細胞である、[P1]〜[P5]のいずれかに記載の組織幹細胞。
[P7]組織幹細胞の目的遺伝子座に目的遺伝子を導入する方法であって、組織幹細胞を含む培養オルガノイドの前記目的遺伝子座に前記目的遺伝子を導入する工程を備える方法。
[P8]前記目的遺伝子を導入する前記工程がエレクトロポレーションにより行われ、前記目的遺伝子を導入した後に前記培養オルガノイドを30℃で2日間培養する工程を更に備える、[P7]に記載の方法。
[P9]前記目的遺伝子座が幹細胞マーカーの遺伝子座である、[7]又は[8]に記載の方法。
[P10]前記目的遺伝子が、細胞系譜標識誘導タンパク質をコードする遺伝子である、[P9]に記載の方法。
[P11][P10]に記載の方法で作製された組織幹細胞が幹細胞であるか否かを試験する方法であって、前記組織幹細胞の細胞系譜解析により前記組織幹細胞の自己複製及び分化を検出する工程を備え、前記組織幹細胞の自己複製及び分化の双方が検出されることが、組織幹細胞が幹細胞であることを示す、方法。
[P12]前記組織幹細胞が癌組織由来の幹細胞である、[P7]〜[P11]のいずれかに記載の方法。
[P13]癌幹細胞に有効な抗癌剤のスクリーニング方法であって、被験物質の存在下で、癌幹細胞マーカー遺伝子のプロモーターで作動するレポーター遺伝子が導入された癌幹細胞を培養する工程と、前記レポーター遺伝子の発現量を測定する工程と、を備え、前記レポーター遺伝子の発現量の低下が、前記被験物質が癌幹細胞に有効な抗癌剤であることを示す、方法。
[P14]癌幹細胞及び癌細胞に対する抗癌剤の有効性を試験する方法であって、前記抗癌剤の存在下で、癌幹細胞マーカー遺伝子のプロモーターで作動する第1のレポーター遺伝子及び強制発現用プロモーターで作動する第2のレポーター遺伝子が導入された癌幹細胞を培養する工程と、前記第1及び前記第2のレポーター遺伝子の発現量を測定する工程と、を備え、前記第1のレポーター遺伝子の発現量の低下が、前記抗癌剤が癌幹細胞に有効な抗癌剤であることを示し、前記第2のレポーター遺伝子の発現量の低下が、前記抗癌剤が癌幹細胞及び癌細胞に有効な抗癌剤であることを示す、方法。
1実施形態において、本発明は、目的遺伝子座に目的遺伝子が導入された組織幹細胞を提供する。
1実施形態において、本発明は、組織幹細胞の目的遺伝子座に目的遺伝子を導入する方法であって、組織幹細胞を含む培養オルガノイドの前記目的遺伝子座に前記目的遺伝子を導入する工程を備える方法を提供する。本実施形態の方法は、培養オルガノイドを構成する細胞の目的遺伝子座に目的遺伝子を導入する工程を備える方法であるということができる。
1実施形態において、本発明は、対象遺伝子のプロモーターで作動する細胞系譜マーカーで標識された組織幹細胞が幹細胞であるか否かを試験する方法であって、前記組織幹細胞の細胞系譜解析により前記組織幹細胞の自己複製及び分化を検出する工程を備え、前記組織幹細胞の自己複製及び分化の双方が検出されることが、組織幹細胞が幹細胞であることを示す方法を提供する。細胞系譜マーカーについては後述する。
1実施形態において、本発明は、癌幹細胞に有効な抗癌剤のスクリーニング方法であって、被験物質の存在下で、癌幹細胞マーカー遺伝子のプロモーターで作動するレポーター遺伝子が導入された癌幹細胞を培養する工程と、前記レポーター遺伝子の発現量を測定する工程と、を備え、前記レポーター遺伝子の発現量の低下が、前記被験物質が癌幹細胞に有効な抗癌剤であることを示す方法を提供する。
(大腸癌幹細胞のLGR5遺伝子座へのレポーター遺伝子の導入)
《コンストラクトの作製》
LGR5遺伝子の第18エクソンを標的とするCRISPR−Cas9プラスミドを定法により作製した。図1(a)は、ヒトLGR5遺伝子座の模式図である。また、LGR5遺伝子の第18エクソンにレポーター遺伝子を導入するターゲッティングコンストラクトを作製した。レポーター遺伝子として、緑色蛍光タンパク質(GFP)をコードする遺伝子を用いた。図1(b)は、作製したターゲッティングコンストラクトの構造を示す模式図である。
慶應大学医学部の倫理委員会により承認を受けて実験を行った。患者から摘出した大腸癌組織を小さな断片に切断し、氷冷したリン酸バッファー(PBS)で少なくとも10回洗浄した。続いて、リベラーゼ(型式「TH」、ロシュ・ライフサイエンス社)を添加し、15分ごとに激しくピペッティングしながら37℃で60分間消化した。続いて、残った断片を、酵素(型式「TrypLE Express」、インビトロジェン社)を用いて37℃で20分間更に消化した。
エレクトロポレーション法により、上記の培養オルガノイドに遺伝子を導入した。遺伝子導入の後、培養オルガノイドを30℃で2日間培養した。続いて、遺伝子導入から3日後に、2μg/mLピューロマイシンの存在下で3日間選択培養を行った。
(幹細胞ヒエラルキーの確認)
《オルガノイドの異種移植》
動物実験は、慶應大学医学部の動物実験委員会により承認を受けて行った。実験例1で作製した3クローンのLGR5−GFPオルガノイドを、免疫不全マウスの腎被膜下にそれぞれ異種移植した。免疫不全マウスとしては、NOD/Shi−scid IL−2Rγnull(NOG)マウス(7〜12週齢、オス)を使用した。
各マウスから、形成された腫瘍を摘出し、直ちに4%パラホルムアルデヒドで固定し、凍結組織切片を作製した。続いて、作製した組織切片において、癌幹細胞の存在を示すGFPの蛍光を検出した。また、分化マーカーであるKeratin 20(KRT20)を免疫染色により検出した。
(LGR5遺伝子発現細胞が癌幹細胞であることの証明)
癌幹細胞を細胞系譜マーカーで標識し、細胞系譜解析を行うことにより、1個の細胞が自己複製及び分化の双方を行っているか否かを検討した。
まず、癌幹細胞をLGR5遺伝子のプロモーターで作動する細胞系譜マーカーで標識した。図3(a)〜(c)は、細胞系譜マーカーによる標識を説明する図である。
癌幹細胞は、LGR5遺伝子を発現する。このため、LGR5−CreER/Rainbowオルガノイドに含まれる癌幹細胞はCreERを発現し、タモキシフェンの存在下で、nGFPの蛍光を発する細胞から、YFP、RFP、mCFPの蛍光を発する細胞に変化する。
(癌幹細胞を標的とした癌治療の有効性の検討)
癌幹細胞に薬剤誘導型自殺遺伝子を組み込み、癌幹細胞を標的とした癌治療の有効性を検討した。
まず、実験例1と同様の手法により、大腸癌由来の培養オルガノイドのLGR5遺伝子座にIRES−iCaspase9−T2A−tdTomatoコンストラクトを導入した。以下、このオルガノイドを「LGR5−iCTオルガノイド」という場合がある。
実験例2と同様の方法により、NOGマウス(7〜12週齢、オス)の腎被膜下に、LGR5−iCTオルガノイドを異種移植した。続いて、腫瘍が形成された後、マウスにAP20187を5日間毎日投与した。また、対照マウスには溶媒のみを5日間毎日投与した。その後、各マウスの腫瘍サイズを経時的に測定した。
(癌幹細胞特異的抗癌剤と抗癌剤との併用モデルの検討)
実験例4で作製したLGR5−iCTオルガノイドの異種移植により作製した腫瘍において、AP20187は仮想的な癌幹細胞特異的抗癌剤であるといえる。そこで、AP20187と既存の抗癌剤との組み合わせによる癌治療の効果を検討した。
(癌幹細胞及び癌細胞に対する抗癌剤の有効性の検討)
実験例4で作製したLGR5−iCTオルガノイドに、CMV−GFPコンストラクトを更に導入した。CMV−GFPコンストラクトでは、強制発現用プロモーターであるCMVプロモーターの下流にGFP遺伝子が連結されていた。このため、LGR5遺伝子を発現しているか否かに関わらず、全ての細胞でGFP遺伝子が発現し、GFPタンパク質の蛍光を発する。以下、このオルガノイドを「LGR5−iCT/CMV−GFPオルガノイド」という場合がある。
Claims (15)
- 幹細胞マーカー遺伝子の遺伝子座に目的遺伝子が導入されたヒト組織幹細胞。
- 前記幹細胞マーカー遺伝子がLeucine Rich Repeat Containing G Protein−Coupled Receptor 5(LGR5)遺伝子である、請求項1に記載のヒト組織幹細胞。
- Lgr5遺伝子座の第18エクソンに目的遺伝子が導入された、請求項2に記載のヒト組織幹細胞。
- 前記目的遺伝子がレポーター遺伝子である、請求項1又は2に記載のヒト組織幹細胞。
- 前記目的遺伝子が第1のレポーター遺伝子であり、強制発現用プロモーターで作動する第2のレポーター遺伝子が更に導入された、請求項1〜4のいずれか一項に記載のヒト組織幹細胞。
- 癌組織由来の幹細胞である、請求項1〜5のいずれか一項に記載のヒト組織幹細胞。
- ヒト組織幹細胞の幹細胞マーカー遺伝子の遺伝子座に目的遺伝子を導入する方法であって、ヒト組織幹細胞を含む培養オルガノイドの前記幹細胞マーカー遺伝子の遺伝子座に前記目的遺伝子をゲノム編集により導入する工程を備える方法。
- 前記目的遺伝子を導入する前記工程がエレクトロポレーションにより行われ、前記目的遺伝子を導入した後に前記培養オルガノイドを30℃で2日間培養する工程を更に備える、請求項7に記載の方法。
- 前記幹細胞マーカー遺伝子の遺伝子座がLgr5遺伝子座である、請求項7又は8に記載の方法。
- Lgr5遺伝子座の第18エクソンに前記目的遺伝子を導入する、請求項9に記載の方法。
- 前記目的遺伝子が、細胞系譜標識誘導タンパク質をコードする遺伝子である、請求項7〜10のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項11に記載の方法で作製されたヒト組織幹細胞が幹細胞であるか否かを試験する方法であって、前記ヒト組織幹細胞の細胞系譜解析により前記ヒト組織幹細胞の自己複製及び分化を検出する工程を備え、前記ヒト組織幹細胞の自己複製及び分化の双方が検出されることが、前記ヒト組織幹細胞が幹細胞であることを示す、方法。
- 前記ヒト組織幹細胞が癌組織由来の幹細胞である、請求項7〜12のいずれか一項に記載の方法。
- 癌幹細胞に有効な抗癌剤のスクリーニング方法であって、被験物質の存在下で、癌幹細胞マーカー遺伝子のプロモーターで作動するレポーター遺伝子が導入された癌幹細胞を培養する工程と、前記レポーター遺伝子の発現量を測定する工程と、を備え、前記レポーター遺伝子の発現量の低下が、前記被験物質が癌幹細胞に有効な抗癌剤であることを示す、方法。
- 癌幹細胞及び癌細胞に対する抗癌剤の有効性を試験する方法であって、前記抗癌剤の存在下で、癌幹細胞マーカー遺伝子のプロモーターで作動する第1のレポーター遺伝子及び強制発現用プロモーターで作動する第2のレポーター遺伝子が導入された癌幹細胞を培養する工程と、前記第1及び前記第2のレポーター遺伝子の発現量を測定する工程と、を備え、前記第1のレポーター遺伝子の発現量の低下が、前記抗癌剤が癌幹細胞に有効な抗癌剤であることを示し、前記第2のレポーター遺伝子の発現量の低下が、前記抗癌剤が癌幹細胞及び癌細胞に有効な抗癌剤であることを示す、方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2023108239A JP2023126873A (ja) | 2017-03-28 | 2023-06-30 | ヒト組織幹細胞及びその使用 |
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2017063171 | 2017-03-28 | ||
JP2017063171 | 2017-03-28 | ||
PCT/JP2018/012356 WO2018181276A1 (ja) | 2017-03-28 | 2018-03-27 | ヒト組織幹細胞及びその使用 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2023108239A Division JP2023126873A (ja) | 2017-03-28 | 2023-06-30 | ヒト組織幹細胞及びその使用 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2018181276A1 true JPWO2018181276A1 (ja) | 2020-02-06 |
Family
ID=63677172
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019509868A Pending JPWO2018181276A1 (ja) | 2017-03-28 | 2018-03-27 | ヒト組織幹細胞及びその使用 |
JP2023108239A Pending JP2023126873A (ja) | 2017-03-28 | 2023-06-30 | ヒト組織幹細胞及びその使用 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2023108239A Pending JP2023126873A (ja) | 2017-03-28 | 2023-06-30 | ヒト組織幹細胞及びその使用 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11698366B2 (ja) |
EP (1) | EP3604522B1 (ja) |
JP (2) | JPWO2018181276A1 (ja) |
CN (1) | CN110546258A (ja) |
ES (1) | ES2924861T3 (ja) |
WO (1) | WO2018181276A1 (ja) |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2005528115A (ja) * | 2002-05-31 | 2005-09-22 | ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ リーランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティ | 幹細胞および癌幹細胞を同定および単離する方法 |
WO2009142271A1 (ja) * | 2008-05-21 | 2009-11-26 | 財団法人新産業創造研究機構 | Sld5を高発現するがん幹細胞 |
US20100275280A1 (en) * | 2007-08-10 | 2010-10-28 | Hubrecht Institute | Method for identifying, expanding and removing adult stem cells and cancer stem cells |
CN104593512A (zh) * | 2015-02-04 | 2015-05-06 | 中国人民解放军第三军医大学第一附属医院 | 双荧光报告系统在肿瘤干细胞靶向性药物筛选中的应用及方法 |
JP2015173601A (ja) * | 2014-03-13 | 2015-10-05 | 大日本住友製薬株式会社 | がん幹細胞の増殖抑制物質のスクリーニング方法 |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2013062083A1 (ja) * | 2011-10-28 | 2013-05-02 | ファーマロジカルズ・リサーチ プライベート リミテッド | 癌幹細胞特異的分子 |
JP6214691B2 (ja) | 2014-05-01 | 2017-10-18 | 采▲ぎょく▼科技股▲ふん▼有限公司VisEra Technologies Company Limited | 固体撮像装置 |
JP2016028569A (ja) * | 2014-07-16 | 2016-03-03 | 学校法人慶應義塾 | がん幹細胞集団の調製方法、異種移植片の調製方法、スクリーニング方法、miR−34aの発現量を低下させる方法及びがん幹細胞増殖抑制剤 |
KR101911725B1 (ko) * | 2017-01-16 | 2018-12-28 | 주식회사 코어파마 | 적색형광단백질을 발현하는 유전자 및 틴 에틸 에티오푸르푸린을 이용한 광역학 치료용 조성물 및 이를 이용한 광역학 치료방법 |
-
2018
- 2018-03-27 US US16/497,659 patent/US11698366B2/en active Active
- 2018-03-27 WO PCT/JP2018/012356 patent/WO2018181276A1/ja unknown
- 2018-03-27 EP EP18775344.7A patent/EP3604522B1/en active Active
- 2018-03-27 ES ES18775344T patent/ES2924861T3/es active Active
- 2018-03-27 CN CN201880020841.5A patent/CN110546258A/zh active Pending
- 2018-03-27 JP JP2019509868A patent/JPWO2018181276A1/ja active Pending
-
2023
- 2023-06-30 JP JP2023108239A patent/JP2023126873A/ja active Pending
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2005528115A (ja) * | 2002-05-31 | 2005-09-22 | ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ リーランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティ | 幹細胞および癌幹細胞を同定および単離する方法 |
US20100275280A1 (en) * | 2007-08-10 | 2010-10-28 | Hubrecht Institute | Method for identifying, expanding and removing adult stem cells and cancer stem cells |
WO2009142271A1 (ja) * | 2008-05-21 | 2009-11-26 | 財団法人新産業創造研究機構 | Sld5を高発現するがん幹細胞 |
JP2015173601A (ja) * | 2014-03-13 | 2015-10-05 | 大日本住友製薬株式会社 | がん幹細胞の増殖抑制物質のスクリーニング方法 |
CN104593512A (zh) * | 2015-02-04 | 2015-05-06 | 中国人民解放军第三军医大学第一附属医院 | 双荧光报告系统在肿瘤干细胞靶向性药物筛选中的应用及方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
STEM CELLS, vol. Vol. 30, Issue 12, JPN6023013323, 2012, pages 2631 - 2644, ISSN: 0005027073 * |
下川真理子 他, ヒト大腸がんオルガノイドを用いたがん幹細胞の可視化と 遺伝学的細胞系譜解析, 再生医療, JPN6018022536, 2015, ISSN: 0005027072 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3604522A1 (en) | 2020-02-05 |
CN110546258A (zh) | 2019-12-06 |
EP3604522A4 (en) | 2020-12-16 |
US11698366B2 (en) | 2023-07-11 |
EP3604522B1 (en) | 2022-07-13 |
WO2018181276A1 (ja) | 2018-10-04 |
JP2023126873A (ja) | 2023-09-12 |
ES2924861T3 (es) | 2022-10-11 |
US20210102934A1 (en) | 2021-04-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Lüönd et al. | Distinct contributions of partial and full EMT to breast cancer malignancy | |
Laugsch et al. | Modeling the pathological long-range regulatory effects of human structural variation with patient-specific hiPSCs | |
US10940180B2 (en) | Method for identifying, expanding, and removing adult stem cells and cancer stem cells | |
Sandoval-Guzmán et al. | Fundamental differences in dedifferentiation and stem cell recruitment during skeletal muscle regeneration in two salamander species | |
US9771562B2 (en) | Method for culture of human and mouse prostate organoids and uses thereof | |
Xin | Cells of origin for prostate cancer | |
JP2024063065A (ja) | インビボのデュアルリコンビナーゼ媒介性カセット交換(dRMCE)のためのシステム及び方法ならびにその疾患モデル | |
Yasuda et al. | Transgenic zebrafish reveals novel mechanisms of translational control of cyclin B1 mRNA in oocytes | |
JP2015500637A (ja) | 一倍体細胞 | |
Maetzig et al. | All-in-One inducible lentiviral vector systems based on drug controlled FLP recombinase | |
Bapst et al. | Cre-mediated, loxP independent sequential recombination of a tripartite transcriptional stop cassette allows for partial read-through transcription | |
Choi et al. | Assessing and enhancing migration of human myogenic progenitors using directed iPS cell differentiation and advanced tissue modelling | |
JP6985293B2 (ja) | 分化細胞からの腎細胞の作製方法 | |
JPWO2018181276A1 (ja) | ヒト組織幹細胞及びその使用 | |
US20230000924A1 (en) | Compositions and methods for generation of sinoatrial node-like cells and their use in drug discovery | |
Li et al. | Genome-wide RNAi screen identify melanoma-associated antigen Mageb3 involved in X chromosome inactivation | |
US20170153224A1 (en) | Flattop (fltp) is a novel biomarker for beta cell maturation | |
Khalooghi | Transition-state, branch-point associated cells give rise to the majority of ciliated cells in the mouse lung | |
Grandela et al. | STRAIGHT-IN: A platform for high-throughput targeting of large DNA payloads into human pluripotent stem cells | |
JP2018042503A (ja) | 標的遺伝子の標識方法、ベクターシステム、細胞、及び遺伝子活性維持標的遺伝子編集キット | |
Zhang et al. | Amd1-skp2 cascade regulates hepatocyte proliferation during liver growth and hepatocellular carcinoma development in zebrafish | |
Pal et al. | Human bone marrow milieu identifies a clinically actionable driver of niche-mediated treatment resistance in leukaemia | |
Torborg et al. | Solid tumor growth depends on an intricate equilibrium of malignant cell states | |
Pan | Atrial Fibrillation Modelling and Targeted DNA Methylation Editing in Human Engineered Heart Tissue-Based Disease Models | |
Feng et al. | ERG activates a stem-like proliferation-differentiation program in prostate epithelial cells with mixed basal-luminal identity |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190830 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20201225 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220104 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20220304 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220426 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220830 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20221020 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20221227 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20221227 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20230404 |