JPWO2017110767A1 - 抗ノロウイルス組成物及びその利用 - Google Patents
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Abstract
Description
紅茶発酵の過程を経た茶葉(強発酵茶)を、水、含水アルコール等の溶媒により、加熱もしくは常温条件で、数分から数時間撹拌することにより抽出し、紅茶抽出物を得ることができる。この紅茶抽出物は、精製、濃縮、粉末化などの加工度が進んだものであってもよい。このような紅茶抽出物において、テアフラビン類化合物の含量を高めるためには、例えば、紅茶発酵の過程で発酵時間を延長する方法の他、エピカテキン、エピガロカテキン、エピカテキン−3−ガレート、エピガロカテキン−3−ガレートなどのカテキン類を紅茶抽出物に追加で投入したり、ポリフェノールオキシダーゼ活性及び/又はペルオキシダーゼ活性を有する酵素を添加したり、あるいはその両方を行なったりして、加熱もしくは常温条件で、数分から数時間反応させる方法が挙げられる。ポリフェノールオキシダーゼ活性及び/又はペルオキシダーゼ活性を有する酵素としては、リンゴ、バナナなど果実に由来するものや、該酵素を含む茶葉抽出物、該酵素を含む茶葉粉砕物、該酵素を含む植物細胞培養液などを利用することができる。また、上記カテキン類としては、茶由来カテキン製剤やカテキンを高濃度に含む茶抽出物など茶由来のものの他、カカオ等のその他の植物由来のカテキン製剤やカテキンを高濃度に含む抽出物を利用してもよい。
水等の溶媒に溶解し又は溶解された茶抽出成分に、ポリフェノールオキシダーゼ活性及び/又はペルオキシダーゼ活性を有する酵素を添加して、加熱もしくは常温条件で、数分から数時間反応させる。これにより、茶抽出成分に含まれるカテキン類からテアフラビン類化合物が生成する。ポリフェノールオキシダーゼ活性及び/又はペルオキシダーゼ活性を有する酵素としては、リンゴ、バナナなど果実に由来するものや、該酵素を含む茶葉抽出物、該酵素を含む茶葉粉砕物、該酵素を含む植物細胞培養液などを利用することができる。このようにして得られた茶抽出成分の酵素処理物は、精製、濃縮、粉末化などの加工度が進んだものであってもよい。
茶葉を粉砕してスラリー状に調製し、必要に応じて水等の溶媒を添加して、加熱もしくは常温条件で、数分から数時間発酵させる。これにより、茶葉に含まれるカテキン類から、茶葉に含まれるポリフェノールオキシダーゼ活性及び/又はペルオキシダーゼ活性を有する酵素の作用により、テアフラビン類化合物が生成する。発酵後は、必要に応じて、固液分離したり、更に水、含水アルコール等の溶媒により、加熱もしくは常温条件で、数分から数時間撹拌することにより抽出したりしてもよい。このようにして得られた茶葉発酵抽出物は、精製、濃縮、粉末化などの加工度が進んだものであってもよい。
エピカテキン、エピガロカテキン、エピカテキン−3−ガレート、エピガロカテキン−3−ガレートなどのカテキン類を原料にして、水等の溶媒中で、ポリフェノールオキシダーゼ活性及び/又はペルオキシダーゼ活性を有する酵素を添加して、加熱もしくは常温条件で、数分から数時間反応させる。これにより、エピカテキン、エピガロカテキン、エピカテキン−3−ガレート、エピガロカテキン−3−ガレートなどのカテキン類からテアフラビン類化合物が生成する。ポリフェノールオキシダーゼ活性及び/又はペルオキシダーゼ活性を有する酵素としては、リンゴ、バナナなど果実に由来するものや、該酵素を含む茶葉抽出物、該酵素を含む茶葉粉砕物、該酵素を含む植物細胞培養液などを利用することができる。また、上記カテキン類としては、茶由来カテキン製剤やカテキンを高濃度に含む茶抽出物など茶由来のものの他、カカオ等のその他の植物由来のカテキン製剤やカテキンを高濃度に含む抽出物を利用してもよい。このようにして得られたカテキン類の酵素処理物は、精製、濃縮、粉末化などの加工度が進んだものであってもよい。
緑茶由来カテキン製剤(カテキン含量90%以上、商品名「サンフェノン90」、太陽化学株式会社製)0.3gを水400mLに溶解した。別途、茶葉3gに水100mLを加えて、粉砕し、茶粉砕物を得た。この茶粉砕物に上記のカテキン溶液を合わせ、30〜35℃で3時間反応させた。反応後の反応液を合成吸着剤「セパビーズSP−700」(商品名、三菱化学株式会社製)に通して精製を行い、フリーズドライにより粉末化して、テアフラビン含有粗抽出物0.1gを得た。HPLCで分析したところ、このテアフラビン含有粗抽出物中にはテアフラビンが6質量%、テアフラビン−3−O−ガレートが14質量%、テアフラビン−3'−O−ガレートが4質量%、テアフラビン−3,3'−O−ジガレートが18質量%含まれており、テアフラビン類化合物の合計含量は42質量%であった。
製造例1と同様の調製により得たテアフラビン含有粗抽出物の4gを、20%アセトンに溶解し、同じく20%アセトンで膨潤したゲル濾過カラム「SephadexLH−20」(商品名、GEヘルスケア・ジャパン株式会社製)に供して分画し、テアフラビン含有抽出液を得た。このテアフラビン含有抽出液をフリーズドライにより粉末化して、テアフラビン含有精製抽出物1.5gを得た。HPLCで分析したところ、このテアフラビン含有精製抽出物中にはテアフラビンが16質量%、テアフラビン−3−O−ガレートが27質量%、テアフラビン−3'−O−ガレートが7質量%、テアフラビン−3,3'−O−ジガレートが40質量%含まれており、テアフラビン類化合物の合計含量は90質量%であった。
緑茶用茶葉50gに熱水400mLを添加し、撹拌した後、固液分離して緑茶抽出液を得た。別途、緑茶用茶葉3gに水100mLを加えて、粉砕し、緑茶粉砕物を得た。この緑茶粉砕物に上記の緑茶抽出液を合わせ、30〜35℃で3時間反応させた。反応後の反応液を合成吸着剤「セパビーズSP−700」(商品名、三菱化学株式会社製)に通して精製を行い、フリーズドライにより粉末化して、テアフラビン含有粗抽出物0.1gを得た。HPLCで分析したところ、このテアフラビン含有粗抽出物中にはテアフラビンが4質量%、テアフラビン−3−O−ガレートが10質量%、テアフラビン−3'−O−ガレートが3質量%、テアフラビン−3,3'−O−ジガレートが14質量%含まれており、テアフラビン類化合物の合計含量は31質量%であった。
[試験方法]
(1)ウイルス
マウスノロウイルスS7株を入手し、使用した。
マウスマクロファージ由来細胞株であるRAW264.7細胞(ATCC(American Type Culture Collection) TIB-71)を入手し、使用した。
製造例2で得たテアフラビン含有精製抽出物(以下、「テアフラビン精製品」という。)を、被検試料として使用した。また、比較のための被検試料として、非特異的な蛋白結合能を有し、ノロウイルスに対する有効性も報告されているタンニン酸や、既存のウイルス対策用製品である製品A及び製品Bを使用した。
テアフラビン精製品は、ジメチルスルホキシドに71.7mg/mLとなるように溶解し、以下の試験に使用した。
RAW264.7細胞を96穴プレートのウェルに単層培養し、PBS (Phosphate Buffered Saline)で2回洗浄し、200μLの細胞維持培地(2%ウシ胎児血清含DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium)培地)を添加して、以下の試験に使用した。
各被検試料について、濃度を以下のように調整し、試験液とした。
結果を表1及び図1に示す。
[試験方法]
(1)ウイルス
ノロウイルスの代替ウイルスとして、ネコカリシウイルスF9株を入手し、使用した。
ネコ腎臓細胞由来細胞株であるCRFK(Crandell Rees feline kidney)細胞(ATCC CCL-94)を入手し、使用した。
製造例2で得たテアフラビン含有精製抽出物(以下、「テアフラビン精製品」という。)を、被検試料として使用した。
テアフラビン精製品は、ジメチルスルホキシドに71.7mg/mLとなるように溶解し、以下の試験に使用した。
CRFK細胞を96穴プレートのウェルに単層培養し、PBSで2回洗浄し、200μLの細胞維持培地(2%ウシ胎児血清含イーグルMEM(Minimun Essential Medium)培地)を添加して、以下の試験に使用した。
被検試料は、上記(4)で調製した抗ウイルス試験用試料(高濃度)を、テアフラビン精製品濃度が1.8mg/mLとなるように25%エタノール添加血清不含イーグルMEM培地で希釈して、試験液とした。
結果を表2及び図2に示す。
[試験方法]
試験例2において、その「(4)抗ウイルス試験用試料の調製」及び「(6)抗ウイルス試験」を下記のようにして行った以外は、試験例2と同様にして、被検試料のネコカリシウイルスに対する抗ウイルス性を調べた。
テアフラビン精製品は、ジメチルスルホキシドに0.717mg/mL(低濃度)、7.17mg/mL(中濃度)、及び71.7mg/mL(高濃度)となるように溶解し、以下の試験に使用した。
被検試料は、(A)上記(4)で調製した抗ウイルス試験用試料(低濃度)を、エタノール非添加の血清不含イーグルMEM培地又は25%エタノール添加血清不含イーグルMEM培地で、テアフラビン精製品濃度が0.018mg/mLとなるように希釈し、(B)上記(4)で調製した抗ウイルス試験用試料(中濃度)を、エタノール非添加の血清不含イーグルMEM培地又は25%エタノール添加血清不含イーグルMEM培地で、テアフラビン精製品濃度が0.18mg/mLとなるように希釈し、(C)上記(4)で調製した抗ウイルス試験用試料(高濃度)を、エタノール非添加の血清不含イーグルMEM培地又は25%エタノール添加血清不含イーグルMEM培地で、テアフラビン精製品濃度が1.8mg/mLとなるように希釈し、それぞれジメチルスルホキシド濃度が等しくなるようにして、試験液とした。
結果を表3及び図3に示す。
下記表4の配合にて原料を撹拌混合し、抗ノロウイルス用消毒剤を得た。
下記表4の配合にて原料を撹拌混合し、抗ノロウイルス用マウスウオッシュを得た。
下記表6の配合にて原料を撹拌混合し、抗ノロウイルス用ハンドソープを得た。
下記表7に示す原料配合にて、常法に従い、抗ノロウイルス用ガムを得た。
下記表8に示す原料配合にて、常法に従い、抗ノロウイルス用ハードキャンディーを得た。
単位面積当たり0.24g/m2となるように、不織布に製造例1で得たテアフラビン含有粗抽出物(テアフラビン類化合物の含有量:42質量%)を添着させ、テアフラビン添着不織布を得た。その不織布を用いてマスクを成形し、抗ノロウイルス用マスクを得た。
Claims (9)
- テアフラビン類化合物を、ノロウイルスの感染を防御するための有効成分として含有することを特徴とする抗ノロウイルス組成物。
- 更にアルコールを含有する請求項1記載の組成物。
- 前記テアフラビン類化合物は、茶成分に由来するテアフラビン、テアフラビン−3−O−ガレート、テアフラビン−3’−O−ガレート、及びテアフラビン−3,3’−O−ジガレートからなる群から選ばれた1種又は2種以上である請求項1又は2記載の組成物。
- テアフラビン類化合物をノロウイルス感染防御のための有効成分として含有する抗ノロウイルス組成物の調製のための該テアフラビン類化合物の使用。
- 前記抗ノロウイルス組成物は、更にアルコールを含有する請求項4記載の使用。
- 前記テアフラビン類化合物は、茶成分に由来するテアフラビン、テアフラビン−3−O−ガレート、テアフラビン−3’−O−ガレート、及びテアフラビン−3,3’−O−ジガレートからなる群から選ばれた1種又は2種以上である請求項4又は5記載の使用。
- テアフラビン類化合物を感染防御の対象物に施与又は投与することを特徴とするノロウイルス感染防御方法(但し医療行為を除く)。
- 前記テアフラビン類化合物を、更にアルコールとともに前記対象物に施与又は投与する請求項7記載の方法。
- 前記テアフラビン類化合物は、茶成分に由来するテアフラビン、テアフラビン−3−O−ガレート、テアフラビン−3’−O−ガレート、及びテアフラビン−3,3’−O−ジガレートからなる群から選ばれた1種又は2種以上である請求項7又は8記載の方法。
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