JPWO2016021447A1 - 糖化酵素組成物、糖化反応液及び糖の製造方法 - Google Patents
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Abstract
Description
窒素吸着法測定装置(平均一次粒子径の測定):Monosorb MS−16(カンタクローム・インスツルメンツ・ジャパン合同会社製)
動的光散乱法粒子径測定装置:ゼータサイザーナノS(マルバーンインスツルメンツ製)
まず、以下の手順で、糖化酵素水溶液として、セルラーゼ水溶液を作製した。なお、セルラーゼとしては、pH3以上、6以下の範囲で至適な酵素活性を有するAspergillus niger属由来のセルラーゼ(MP biomedicals製)を用いた。
水ガラス法で製造された中実で球状のコロイダルシリカ(平均一次粒子径:35nm、動的光散乱法による測定粒子径:55nm)が水に分散されたアルカリ性シリカゾル(pH9.0、シリカ濃度40質量%)15g中に、上述のセルラーゼ水溶液4.0gを撹拌しながら添加し、更にpH調整として、1M相当の酢酸Na0.5g及び1M相当NaOH0.5gを添加し、シリカ濃度30質量%、セルラーゼ濃度3質量%の糖化酵素組成物を得た。得られた糖化酵素組成物について動的光散乱法による測定粒子径を確認したところ55nmであり、コロイダルシリカの分散体における粒子径は変化していなかった。表1に、実施例1〜8の糖化酵素組成物を示す。
本発明の糖化酵素組成物において、全糖化酵素に対してコロイダルシリカに固定化されていない糖化酵素の割合は、遠心分離法により得られた上澄み中の糖化酵素の濃度を、Bradford法(CBB法)により定量して算出した。
コロイダルシリカを添加しない代わりに脱イオン水で糖化酵素の濃度調整をした以外は、実施例1〜8と同様に行って、コロイダルシリカを含まない糖化酵素組成物を得た。該糖化酵素組成物を表1に示す。
水ガラス法で製造された中実で球状のコロイダルシリカ(平均一次粒子径:35nm、動的光散乱法による測定粒子径:55nm)が水に分散されたアルカリ性シリカゾル(pH9.0、シリカ濃度40質量%)20gを、強酸性水素型陽イオン交換樹脂アンバーライト(登録商標)IR−120B(オルガノ製)で処理してアルカリ金属イオンを除去し酸性シリカゾル(pH2.1、シリカ濃度40質量%)20gを得た。得られた酸性シリカゾル15g中に、脱イオン水5g添加し、シリカ濃度30質量%の糖化酵素組成物を得た。糖化酵素組成物を併せて表1に示す。
実施例1〜8の糖化酵素組成物に、微結晶セルロース粉末を2.5質量%添加し、分散させて糖化反応液とした。
実施例1〜8の糖化反応液を、24℃の恒温室中で、攪拌下で14日間酵素反応させた。
糖化反応液の作製及び糖の製造方法は、実施例1〜8と同様に行った。結果を表2に示す。また、比較例1〜8の糖化反応液の酵素反応14日後の糖化率とpHとの関係を図2に示す。図1、図2より各pH領域において、糖化酵素単独に比べて、コロイダルシリカが配合され、且つ全糖化酵素に対してコロイダルシリカに固定化されていない糖化酵素の割合が42%以上、100%以下の糖化反応液の方が糖化率が高いことが判る。
酵素法(G6PDH−HK法)を用いて、糖化反応液の酵素反応時のグルコース生成濃度を定量し、糖化率を算出した。
A:酢酸
B:酢酸ナトリウム塩緩衝液(pH=3.5)
C:酢酸ナトリウム塩緩衝液(pH=4.0)
D:酢酸ナトリウム塩緩衝液(pH=4.5)
E:酢酸ナトリウム塩緩衝液(pH=5.0)
F:酢酸ナトリウム
G:NaOH
H:HCl
まず、以下の手順で糖化酵素水溶液として、セルラーゼ水溶液を作製した。なお、セルラーゼとしては、pH3以上、6以下の範囲で至適な酵素活性を有するAspergillus niger属由来のセルラーゼ(MP biomedicals製)を用いた。
コロイダルシリカを添加しない代わりに脱イオン水で糖化酵素の濃度調整をした以外は、実施例9〜26と同様に行った。糖化酵素組成物を表3に示す。
まず、以下の手順で糖化酵素水溶液として、セルラーゼ水溶液を作製した。なお、セルラーゼとしては、pH3以上、6以下の範囲で至適な酵素活性を有するAspergillus niger属由来のセルラーゼ(MP biomedicals製)を用いた。
水ガラス法で製造された中実で球状のコロイダルシリカ(平均一次粒子径:12nm、動的光散乱法による測定粒子径:20nm)が水に分散された酸性シリカゾル(pH2.6、シリカ濃度20質量%)5.0g中に、脱イオン水13.0g、上述の10質量%セルラーゼ水溶液1.0gを撹拌しながら添加し、更にpH調整として、1M相当の酢酸−酢酸ナトリウム塩緩衝液(pH4.0)1.0g添加し、シリカ濃度5質量%、セルラーゼ濃度0.5質量%の糖化酵素組成物を得た。得られた糖化酵素組成物について動的光散乱法による測定粒子径を確認したところ20nmであり、コロイダルシリカの分散体における粒子径は変化していなかった。
水ガラス法で製造された中実で球状のコロイダルシリカ(平均一次粒子径:80nm、動的光散乱法による測定粒子径:120nm)が水に分散されたアルカリ性シリカゾル(pH9.5、シリカ濃度40質量%)20gを、強酸性水素型陽イオン交換樹脂アンバーライト(登録商標)IR−120B(オルガノ製)で処理してアルカリ金属イオンを除去し酸性シリカゾル(pH2.0、シリカ濃度40質量%)20gを得た。得られた酸性シリカゾル2.5g中に、脱イオン水15.5g、上述の10質量%セルラーゼ水溶液1.0gを撹拌しながら添加し、更にpH調整として、1M相当の酢酸−酢酸ナトリウム塩緩衝液(pH4.0)1.0g添加し、シリカ濃度5質量%、セルラーゼ濃度0.5質量%の糖化酵素組成物を得た。得られた糖化酵素組成物について動的光散乱法による測定粒子径を確認したところ120nmであり、コロイダルシリカの分散体における粒子径は変化していなかった。
水ガラス法で製造された中実で球状のコロイダルシリカ(平均一次粒子径:160nm、動的光散乱法による測定粒子径:200nm)が水に分散されたアルカリ性シリカゾル(pH9.3、シリカ濃度40質量%)20gを、強酸性水素型陽イオン交換樹脂アンバーライト(登録商標)IR−120B(オルガノ製)で処理してアルカリ金属イオンを除去し酸性シリカゾル(pH2.3、シリカ(SiO2)濃度40質量%)20gを得た。得られた酸性シリカゾル2.5g中に、脱イオン水15.5g、上述の10質量%セルラーゼ水溶液1.0gを撹拌しながら添加し、更にpH調整として、1M相当の酢酸−酢酸ナトリウム塩緩衝液(pH4.0)1.0g添加し、シリカ濃度5質量%、セルラーゼ濃度0.5質量%の糖化酵素組成物を得た。得られた糖化酵素組成物について動的光散乱法による測定粒子径を確認したところ200nmであり、コロイダルシリカの分散体における粒子径は変化していなかった。
水ガラス法で製造された中実で球状のコロイダルシリカ(平均一次粒子径:310nm、動的光散乱法による測定粒子径:450nm)が水に分散されたアルカリ性シリカゾル(pH8.5、シリカ濃度40質量%)20gを、強酸性水素型陽イオン交換樹脂アンバーライト(登録商標)IR−120B(オルガノ製)で処理してアルカリ金属イオンを除去し酸性シリカゾル(pH3.3、シリカ濃度40質量%)20gを得た。得られた酸性シリカゾル2.5g中に、脱イオン水15.5g、上述の10質量%セルラーゼ水溶液1.0gを撹拌しながら添加し、更にpH調整として、1M相当の酢酸−酢酸ナトリウム塩緩衝液(pH4.0)1.0g添加し、シリカ濃度5質量%、セルラーゼ濃度0.5質量%の糖化酵素組成物を得た。得られた糖化酵素組成物について動的光散乱法による測定粒子径を確認したところ450nmであり、コロイダルシリカの分散体における粒子径は変化していなかった。
まず、以下の手順で糖化酵素水溶液として、セルラーゼ水溶液を作製した。なお、セルラーゼとしては、pH3以上、6以下の範囲で至適な酵素活性を有するTrichoderma reesei属由来のセルラーゼ(Sigma Aldrich製)を用いた。
コロイダルシリカを添加しない代わりに脱イオン水で糖化酵素の濃度調整をした以外は、実施例32〜37と同様に行った。糖化酵素組成物を表7に示す。
まず、以下の手順で糖化酵素水溶液として、セルラーゼ水溶液を作製した。なお、セルラーゼとしては、pH3以上、6以下の範囲で至適な酵素活性を有するTrichoderma reesei属由来のセルラーゼ(Sigma Aldrich製)を用いた。
コロイダルシリカを添加しない代わりに脱イオン水で糖化酵素の濃度調整をした以外は、実施例38〜43と同様に行った。糖化酵素組成物を表9に示す。
まず、以下の手順で糖化酵素水溶液として、セルラーゼ水溶液を作製した。なお、セルラーゼとしては、pH3以上、6以下の範囲で至適な酵素活性を有するAspergillus niger属由来のセルラーゼ(MP biomedicals製)を用いた。
水ガラス法で製造された中実で球状のコロイダルシリカ(平均一次粒子径:45nm、動的光散乱法による測定粒子径:75nm)が水に分散された酸性シリカゾル(pH2.9、シリカ濃度20質量%)5.0g中に、脱イオン水12.0g、アルファイン83(ポリ塩化アルミニウム、大明化学工業製)7ppm、上述の5質量%セルラーゼ水溶液2.0gを撹拌しながら添加し、更にpH調整として、1M相当の酢酸−酢酸ナトリウム塩緩衝液(pH4.0)1.0g添加し、シリカ濃度5質量%、セルラーゼ濃度0.5質量%の糖化酵素組成物を得た。
水ガラス法で製造された中実で球状のコロイダルシリカ(平均一次粒子径:45nm、動的光散乱法による測定粒子径:75nm)が水に分散された酸性シリカゾル(pH2.9、シリカ濃度20質量%)5.0g中に、脱イオン水12.0g、アルファイン83(ポリ塩化アルミニウム、大明化学工業製)10ppm、上述の5質量%セルラーゼ水溶液2.0gを撹拌しながら添加し、更にpH調整として、1M相当の酢酸−酢酸ナトリウム塩緩衝液(pH4.0)1.0g添加し、シリカ濃度5質量%、セルラーゼ濃度0.5質量%の糖化酵素組成物を得た。
水ガラス法で製造された中実で球状のコロイダルシリカ(平均一次粒子径:45nm、動的光散乱法による測定粒子径:75nm)が水に分散された酸性シリカゾル(pH2.9、シリカ濃度20質量%)5.0g中に、脱イオン水12.0g、アルファイン83(ポリ塩化アルミニウム、大明化学工業製)14ppm、上述の5質量%セルラーゼ水溶液2.0gを撹拌しながら添加し、更にpH調整として、1M相当の酢酸−酢酸ナトリウム塩緩衝液(pH4.0)1.0g添加し、シリカ濃度5質量%、セルラーゼ濃度0.5質量%の糖化酵素組成物を得た。
水ガラス法で製造された中実で球状のコロイダルシリカ(平均一次粒子径:45nm、動的光散乱法による測定粒子径:75nm)が水に分散された酸性シリカゾル(pH2.9、シリカ濃度20質量%)5.0g中に、脱イオン水12.0g、アルファイン83(ポリ塩化アルミニウム、大明化学工業製)15ppm、上述の5質量%セルラーゼ水溶液2.0gを撹拌しながら添加し、更にpH調整として、1M相当の酢酸−酢酸ナトリウム塩緩衝液(pH4.0)1.0g添加し、シリカ濃度5質量%、セルラーゼ濃度0.5質量%の糖化酵素組成物を得た。
水ガラス法で製造された中実で球状のコロイダルシリカ(平均一次粒子径:45nm、動的光散乱法による測定粒子径:75nm)が水に分散された酸性シリカゾル(pH2.9、シリカ濃度20質量%)5.0g中に、脱イオン水12.0g、アルファイン83(ポリ塩化アルミニウム、大明化学工業製)16ppm、上述の5質量%セルラーゼ水溶液2.0gを撹拌しながら添加し、更にpH調整として、1M相当の酢酸−酢酸ナトリウム塩緩衝液(pH4.0)1.0g添加し、シリカ濃度5質量%、セルラーゼ濃度0.5質量%の糖化酵素組成物を得た。
水ガラス法で製造された中実で球状のコロイダルシリカ(平均一次粒子径:45nm、動的光散乱法による測定粒子径:75nm)が水に分散された酸性シリカゾル(pH2.9、シリカ濃度20質量%)5.0g中に、脱イオン水12.0g、アルファイン83(ポリ塩化アルミニウム、大明化学工業製)20ppm、上述の5質量%セルラーゼ水溶液2.0gを撹拌しながら添加し、更にpH調整として、1M相当の酢酸−酢酸ナトリウム塩緩衝液(pH4.0)1.0g添加し、シリカ濃度5質量%、セルラーゼ濃度0.5質量%の糖化酵素組成物を得た。
水ガラス法で製造された中実で球状のコロイダルシリカ(平均一次粒子径:45nm、動的光散乱法による測定粒子径:75nm)が水に分散された酸性シリカゾル(pH2.9、シリカ濃度20質量%)5.0g中に、脱イオン水12.0g、アルファイン83(ポリ塩化アルミニウム、大明化学工業製)27ppm、上述の5質量%セルラーゼ水溶液2.0gを撹拌しながら添加し、更にpH調整として、1M相当の酢酸−酢酸ナトリウム塩緩衝液(pH4.0)1.0g添加し、シリカ濃度5質量%、セルラーゼ濃度0.5質量%の糖化酵素組成物を得た。
コロイダルシリカを添加しない代わりに脱イオン水で糖化酵素の濃度調整をした以外は、実施例44〜49と同様に行って、コロイダルシリカを含まない糖化酵素組成物を得た。該糖化酵素組成物を表11に示す。
まず、脱イオン水9g中にセルラーゼ粉末1gを添加し、2時間、室温でマグネティックスターラーで撹拌しながら溶解して10質量%のセルラーゼ水溶液を得た。次に、沈降法シリカ粉末(商品名:カープレックス #80、DSL.ジャパン製、平均一次粒子径:7nm、動的光散乱法による測定粒子径:1750nm)0.1gに、脱イオン水17.9g、上述の10質量%セルラーゼ水溶液1.0gを撹拌しながら添加し、更にpH調整として、1M相当の酢酸−酢酸ナトリウム塩緩衝液(pH4.0)1.0g添加し、シリカ濃度5質量%、セルラーゼ濃度0.5質量%の糖化酵素組成物を得た。
沈降法シリカ粉末(商品名:トクシール GU−N、トクヤマ製、平均一次粒子径:11nm、動的光散乱法による測定粒子径:4740nm)0.1gに、脱イオン水17.9g、上述の10質量%セルラーゼ水溶液1.0gを撹拌しながら添加し、更にpH調整として、1M相当の酢酸−酢酸ナトリウム塩緩衝液(pH4.0)1.0g添加し、シリカ濃度5質量%、セルラーゼ濃度0.5質量%の糖化酵素組成物を得た。
Claims (9)
- セルロース及びヘミセルロースの少なくとも一方を糖化する糖化反応液であって、セルロース及びヘミセルロースの少なくとも一方と、糖化酵素と、コロイダルシリカとを分散状態で含有し、且つ全糖化酵素に対してコロイダルシリカに固定化されていない糖化酵素の割合が25%以上、100%以下であることを特徴とする糖化反応液。
- 請求項1記載の糖化反応液において、前記コロイダルシリカの平均一次粒子径が、1nm以上、400nm以下、且つ動的光散乱法による測定粒子径が5nm以上、500nm未満であることを特徴とする糖化反応液。
- 請求項1又は2記載の糖化反応液において、前記糖化酵素の濃度が、0.005質量%以上、3.0質量%以下であることを特徴とする糖化反応液。
- 請求項1〜3の何れか一項記載の糖化反応液において、前記コロイダルシリカの濃度が、0.005質量%以上、40質量%以下であることを特徴とする糖化反応液。
- 請求項1〜4の何れか一項記載の糖化反応液において、前記糖化酵素と前記コロイダルシリカとの質量比率(糖化酵素/コロイダルシリカ)が、0.002以上、300以下であることを特徴とする糖化反応液。
- 請求項1〜5の何れか一項記載の糖化反応液において、pHが3以上、11以下であることを特徴とする糖化反応液。
- 請求項1〜6の何れか一項記載の糖化反応液において、前記糖化酵素が、Aspergillus属由来のもの及びTrichoderma属由来のものの少なくとも一方を含むことを特徴とする糖化反応液。
- セルロース及びヘミセルロースの少なくとも一方を糖化する糖化組成物であって、糖化酵素と、平均一次粒子径が1nm以上、400nm以下、且つ動的光散乱法による測定粒子径が5nm以上、500nm未満であるコロイダルシリカとを分散状態で含有し、且つ全糖化酵素に対してコロイダルシリカに固定化されていない糖化酵素の割合が25%以上、100%以下であることを特徴とする糖化酵素組成物。
- 請求項1〜7の何れか一項記載の糖化反応液を用いて糖を製造することを特徴とする糖の製造方法。
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