JPWO2007114340A1 - 緑膿菌の外膜タンパク質pa0427 - Google Patents
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Abstract
Description
(i)配列番号:4で表されるアミノ酸配列を含んでなるタンパク質;
(ii)配列番号:4で表されるアミノ酸配列において、1もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列を含んでなり、かつ配列番号:4で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質と同等の機能を有するタンパク質;
(iii)配列番号:4で表されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされ、かつ配列番号:4で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質と同等の機能を有するタンパク質;および
(iv)配列番号:4で表されるアミノ酸配列と70%以上の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなり、かつ配列番号:4で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質と同等の機能を有するタンパク質。
PA0427タンパク質は緑膿菌由来の外膜PA0427タンパク質である。該タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号:3に、該タンパク質をコードするポリヌクレオチドの塩基配列は、配列番号:1に記載される。
(i)配列番号:4で表されるアミノ酸配列を含んでなるタンパク質;
(ii)配列番号:4で表されるアミノ酸配列において、1もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列を含んでなり、かつ配列番号:4で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質と同等の機能を有するタンパク質;
(iii)配列番号:4で表されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされ、かつ配列番号:4で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質と同等の機能を有するタンパク質;および
(iv)配列番号:4で表されるアミノ酸配列と70%以上の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなり、かつ配列番号:4で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質と同等の機能を有するタンパク質。
配列番号:5で表されるアミノ酸配列、または1若しくは数個の保存的置換を有する配列番号:5で表されるアミノ酸配列を含んでなるペプチド;および
配列番号:6で表されるアミノ酸配列、または1若しくは数個の保存的置換を有する配列番号:6で表されるアミノ酸配列を含んでなるペプチド。
本発明によるタンパク質または本発明によるペプチドは、タンパク質抗原またはペプチド抗原として用いることができる。従って、本発明によれば、緑膿菌由来の外膜PA0427タンパク質に対する抗体を産生することができる該タンパク質抗原または該ペプチド抗原を含んでなる抗原組成物が提供される。
本発明による抗原組成物は、ワクチンとして用いることができる。従って、本発明によれば、緑膿菌由来の外膜PA0427タンパク質に対する抗体を産生することができる抗原組成物を含んでなるワクチン組成物が提供される。
本発明による抗体は、緑膿菌の外膜PA0427タンパク質またはその一部を認識しかつ、緑膿菌に結合することができる。
緑膿菌に関連する疾患
緑膿菌は宿主の抵抗力の低下につれて致命的な結果となる日和見感染の病原菌であり、また、抗生物質に抵抗性であるため、院内感染の主要な原因菌でもある。後記実施例により示されるように、本発明による第三の態様の抗体は、オプソニン作用を有することが確認された(実施例9)。また、ムチン投与によりマクロファージの機能を低下させたマウス緑膿菌易感染性モデルにおいて、本発明による抗血清が実際に感染防御効果を有すること(実施例11)、また、Cyclophosphamide monohydrate投与により好中球を減少させたマウス緑膿菌易感染性モデルにおいて、本発明による抗体が実際に感染防御効果を有すること(実施例12)が確認された。さらに、マウス多剤耐性緑膿菌易感染性モデルにおいて、本発明による第三の態様の抗体が実際に感染防御効果を有することが確認された(実施例13)。従って、本発明による抗体は、緑膿菌に関連する疾患の予防または治療に有用である。
後記の実施例において示されるように、本発明による第一の態様の抗体は、本発明によるタンパク質、本発明による第一の態様のペプチド、および本発明による第二の態様のペプチドとそれぞれ結合することが確認された(実施例7)。また、本発明による第二の態様の抗体は、本発明によるタンパク質および本発明による第一の態様のペプチドと結合することが確認された(実施例7)。さらに、本発明による第三の態様の抗体は、本発明によるタンパク質および本発明による第二の態様のペプチドと結合することが確認された(実施例7)。また、本発明による第一ないし第三の態様の抗体は、緑膿菌の細胞表面に露出するPA0427タンパク質の細胞外領域と結合することが確認された(実施例8)。
これらの結果から、本発明による抗体は、緑膿菌の存在を検出することができることが示唆された。従って、本発明による抗体は、緑膿菌感染症診断剤として用いることができる。
本発明によれば、緑膿菌の存在を検出するためのキットであって、本発明による抗体を少なくとも含んでなるキットが提供される。
本発明による医薬組成物または用剤は、本発明による抗体を有効成分として用い、好ましくは、精製した抗体と任意の成分、例えば生理食塩水、葡萄糖水溶液又はリン酸塩緩衝液などを含有する組成物の形態で使用しても良い。
ヒト血清添加培地で発現している遺伝子を探索する手法として、GeneChip(R)発現解析システム(Affymetrix社製GeneChip(R) P.aeruginosaゲノムアレイ)を用いた。緑膿菌PAO1菌株(ATCC BAA−47)を用いて、3通りの培養条件、すなわち0%、20%、50%ヒト血清添加Luria−Bertani(LB)培地(ナカライテスク社製)(最終のLB培地組成は均一)で37℃にて595nmの吸光度が1.0になるまで振とう培養し、RNeasy Protect Bacteria Miniキット(QIAGEN GmbH社製)を用い、添付文書の方法に従って、全RNAを抽出し、2100バイオアナライザー(Agilent Technologies社製)により定量を行った。その後、GeneChip(R)の添付文書の方法に従って実験を行った。遺伝子発現データの解析はMicroarray Suite 5.0(Affymetrix社製)により行い、シグナルならびにディテクションを計算した。このとき、全プローブセットのシグナルの平均値が1000となるように補正を行った。実験は独立に2回実施した。
使用菌株は、全国の臨床施設において各種臨床材料より分離された緑膿菌95株(明治製菓株式会社 横浜研究所に保管)を試験に供した。これらの株は血液、尿、喀痰、膿、咽頭粘液などに由来しており、血清型は緑膿菌研究会主催の型別検討委員会の決定(1975年)による血清学的分類に基づくA群、B群、E群、F群、G群、I群、M群などが含まれている
(1)ゲノムDNAの調製
臨床分離の緑膿菌95株について、ミューラーヒントン培地(ベクトン・ディッキンソン社製)で37℃にて一晩培養し、低速遠心によって集菌した。得られた菌体からDNeasy Tissueキット(QIAGEN GmbH社製)を用い、添付文書の方法に従って、ゲノムDNAを調製した。
調製したゲノムDNAを鋳型に、PA0427遺伝子を含む領域をPCRにより増幅した。具体的には、緑膿菌PAO1菌株のゲノム配列(NCBIのデータベースにおけるアクセッション番号: NC_002516)をもとに、PA0427遺伝子を特異的に増幅するプライマーセット(配列番号:7、配列番号:8)を設計し、Takara ExTaq(タカラバイオ株式会社製)で添付の説明書に従い、GeneAmp PCR System 9700(Applied BioSystems社製)を用いてPCRを実施した。PCRにて増幅されたDNA断片は、アガロースゲル電気泳動により、目的のサイズ(1628塩基対)であることを確認した。
PCR産物は、MultiScreen PCRプレート(Millipore Corporation社製)にて精製後、シーケンス反応に供した。PAO1菌株のゲノム配列(NC_002516)をもとに、各PCR産物をシーケンシングできるプライマー(配列番号:9〜配列番号:13)を設計し、シーケンス反応にはBigDye Terminator v1.1 Cycle Sequencingキット(Applied BioSystems社製)を用いた。シーケンス反応は添付の説明書に従い、GeneAmp PCR System 9700(Applied BioSystems社製)で実施した。シーケンス反応産物は、あらかじめ水で膨張させたSephadex G−50 Fine DNA Grade(Amersham Biosciences AB社製)をつめたMultiScreen-HVプレート(Millipore Corporation社製)で精製後、Applied Biosystems 3730 DNA Analyzer(Applied BioSystems社製)を用いてポリヌクレオチド配列の解析を行った。
緑膿菌PA0427遺伝子(配列番号:1)のアミノ酸コード領域1458塩基中の340番目から1017番目のDNA断片(配列番号:2)を、以下の方法により、ベクターpIVEX2.4d(Roche Diagnostics社)を用いてクローニングし、発現ベクターpET15b(Novagen社)に組み込んだ。
組換えタンパク質の発現には、T7 RNAポリメラーゼ遺伝子が組み込まれた大腸菌BL21(DE3)菌株とT7プロモーターを有するpETベクターの発現系(Novagen社製)を使用した。大腸菌発現ベクターpET-PA0427-2は、T7プロモーターの下流にHis-タグ(6個の連続したヒスチジン)が融合したPA0427部分タンパク質をコードするプラスミドである(実施例3参照)。BL21(DE3)菌株を塩化カルシウムで処理(Molecular Cloning第2版、Sambrook他(1989)参照)し、pET-PA0427-2により形質転換した。形質転換体を50μg/mlアンピシリンを含むLB培地で一晩培養し、新しい培地に200倍希釈で懸濁して37℃で4時間培養後、IPTGを最終濃度0.5mMで添加して発現誘導し、さらに3時間培養した。細胞を遠心で回収し、−20℃で凍結した。細胞をタンパク質抽出試薬B-PER Bacterial Protein Extraction Reagent(Pierce社製)で溶解し、発現タンパク質を含む不溶性画分を回収し、最終濃度100μg/mlのリゾチーム(卵白リゾチーム、生化学工業社製)で処理後、1%Triton X-100を添加したダルベッコリン酸緩衝塩類溶液(PBS)で洗浄した。
緑膿菌はPA103菌株(ATCC29260)をミューラーヒントン寒天培地上にて一晩37℃で培養し、数個のコロニーをLB培地に懸濁後、一晩37℃で振とう培養し、PBSで洗浄、再懸濁した後、1%となるようにホルマリンを加え、24時間以上不活化処理した不活化菌(以下、「ホルマリン不活化PA103菌株」ということがある)を使用した。
ラット抗血清からのIgG画分の精製は、McCauley R & Racker, E ; Molecular and Cellular Biochemistry 1, 73-81 (1973)らの方法に従った。氷冷飽和硫酸アンモニウム溶液(pH8)を43(v/v) %になるように添加し、得られた懸濁液を室温で15分間攪拌した。10,000xgで20分間遠心することにより沈殿を回収し、10%グリセロールを添加した10mMリン酸カリウム緩衝液(pH8)に溶解後、氷冷飽和硫酸アンモニウム溶液(pH8)を50(v/v)%になるように添加し再度沈殿を析出させることにより2回洗浄を行った。沈殿を、10%グリセロール添加した10mMリン酸カリウム緩衝液(pH8)に溶解し、次いで当該緩衝液に対して一夜透析した。遠心後、陰イオン交換クロマトグラフィー(DEAE-Toyopearl 650M(TOSOH社製))に添加し、280nmの紫外吸収を測定することにより素通り容積をIgG画分として回収した。最終標品は、Amicon Ultra-15 (Millipore社製)を用い濃縮し、最終的にPBS(−)溶液に交換した。PA0427組換えタンパク質免疫ラット血清5mlより精製を行い、IgG画分として14.5mgのタンパク質を回収し、これを抗PA0427 IgGと命名した。タンパク定量はLowry法に基づくDC Protein Assay(Bio-Rad社製)、IgGの純度はSDS-PAGEにより評価した。
PA0427組換えタンパク質並びに合成ペプチド0427L1および0427L2Qに結合する抗体をELISA法で検出するため、PA0427組換えタンパク質は8M尿素を添加したPBSに溶解し、合成ペプチド0427L1および0427L2Qは炭酸バッファー(0.15%Na2CO3、0.3%NaHCO3)に溶解し、96ウェルELISAプレート(MaxiSorp Type,NUNC社製)に入れ、終夜4℃に置いて固相化した。PBSで洗浄し、0.5%BSAを添加したPBSでブロッキング後、試料として実施例6で得られた各精製IgG画分をウェルに加え、室温で反応させた。0.05%Tween20含有PBSで洗浄後、2次抗体(ペルオキシダーゼ標識ヤギ抗ラットIgG抗体、10000倍希釈、Sigma社製)を添加し、室温で反応後に洗浄した。発色基質(TMB Microwell Peroxidase substrate System、KPL社製)を添加して反応後、1Mリン酸溶液で酵素反応を停止し、450nmの吸光度を測定した。
Whole cell ELISAは、LB培地にて終夜培養したPA103菌株の菌液を96ウェルELISAプレート(MaxiSorp Type,NUNC社製)にウェルあたり100μL分注し、4℃、1時間で固相化後、洗浄バッファー(0.05%Tween20含有TBS)で洗浄し、ブロッキングバッファー(2%ウシ血清アルブミン含有TBS)でブロッキング後、実施例6で得られた各精製IgG画分をウェルに加え、37℃で1時間反応させた。洗浄後、2次抗体(ペルオキシダーゼ標識ヤギ抗ラットIgG抗体、5000倍希釈、Sigma社製)を添加し、室温で1時間反応後に洗浄した。発色基質(TMB Microwell Peroxidase substrate System、KPL社製)を添加して暗所で反応後、1Mリン酸溶液で酵素反応を停止し、450nmの吸光度を測定した。
実施例6で得られた0427L2Q-KLH免疫ラット血清から得られた精製IgG画分(抗0427L2Q IgG)について、マウス好中球による緑膿菌の貪食作用を指標にしてオプソニン作用を検討した。
BALB/c雄性マウス(日本チャールズリバー社より購入)の腹腔内に8%カゼイン溶液を投与し、6時間後に腹腔細胞を回収した。腹腔細胞は遠心洗浄後、RPMI1640培地(Gibco社製)に2×106 cells/mLになるよう懸濁し、ラット補体(ICNバイオメディカル社製)および抗0427L2Q IgGまたはアジュバントのみを投与し得た対照ラット血清より精製したIgG存在下、4%パラホルムアルデヒドで処理した蛍光標識P.aeruginosa PA103菌株と25:1の割合で1.5時間混合培養した。培養後、貪食されたP.aeruginosaをフローサイトメーター(Epics LXII, コールター社)により測定した。好中球領域にゲートを施し1万個の細胞の蛍光強度を測定し平均蛍光強度をオプソニン作用の指標とした。
緑膿菌PA0427タンパク質の2次構造ならびに立体構造情報(J.Biol. Chem.,2004,279,52816-52819)と、大腸菌のTolCタンパク質の立体構造情報(Nature,2000,405,914−919)から得られる情報を基に、独自に推測した推定細胞外領域(配列番号:6)を含むKLHコンジュゲートペプチド0427L2Q-KLHの実施例5における初回免疫の1週間後に不完全アジュバントとともに追加免疫を行い、その3日後に麻酔下、無菌的に膝下リンパ節を摘出した。得られたリンパ節をRPMI−1640培地(Gibco社製)で洗浄した後、スライドグラスのフロスト部にリンパ節を挟んですり潰し、微小片として供試リンパ節細胞を得た。得られたリンパ節細胞はRPMI−1640培地で1000rpm5分間遠心し洗浄した。一方10%FCS(ウシ胎児血清)を含むRPMI−1640培地で5%CO2、相対湿度100%、37℃で予め培養して対数増殖期にあるミエローマ細胞(P3X63Ag8U1細胞)をRPMI−1640培地で遠心洗浄し、先に述べたリンパ節細胞とミエローマ細胞の比が4:1程度になるように混合した。混合した細胞を1000rpmで5分間遠心し、上清を捨て細胞を充分にほぐした。この細胞を含む遠心管にポリエチレングリコール(M.W. 1000 和光純薬社製)2g、RPMI−1640培地2mLおよびDMSO(ナカライテスク社製)0.2mLからなる溶液1mLを静かに加え、遠心管をゆっくり回転させ細胞を混合させた。一分後、遠心管をゆっくり回転させながらRPMI−1640培地15mLを3分かけ加えた。1000rpmで5分間遠心後、上清を捨て充分に細胞をほぐした後、HT培地(Gibco社製)50mLで懸濁し、一晩培養した。その後、1000rpmで10分間遠心して細胞を回収し10mLのRPMI培地で懸濁後、90mLのメチルセルロールHAT選択培地(Stem Cell Technologies社製)のボトルに細胞液を加え十分に混合した。混合したメチルセルロース培地の細胞を9cmデッシュに10mLずつまいた。5%CO2、相対湿度100%、37℃で約10〜14日間培養後、メチルセルロース培地上に生育しているハイブリドーマのコロニーが観察された。これらのコロニーを拾い、96穴マイクロプレートでさらに数日培養した。
PA0427組換えタンパク質ならびに推定細胞外領域(配列番号:6)を含む合成ペプチド(配列番号:18)に結合する抗体を実施例7に記載したELISA法で検出した。また、緑膿菌の細胞表面に結合する抗体を実施例8に記載したwhole cell ELISA法で検出した。
スクリーニングの結果、目的抗体を産生していると判定されたハイブリドーマを1個/0.2mLとなるよう5%BM−Condimed H1 Hybridoma Cloning Supplement(ロシュダイアグノスティックス社製)を含む10%FCS/HT(Gibco社製)培地にて調整し、96穴プレートの各ウェルに0.2mLずつ分注して培養した。1〜2週間後にスクリーニングの項で述べた方法で分析し、目的の抗体を産生する単クローンを選択し、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターの受託番号がFERM BP−10782であるハイブリドーマを得た。
96穴マイクロプレートで充分増殖させた目的クローンは24穴プレート、50mL、250mLフラスコに徐々にスケールアップして10%FCS−RPMI培地で培養した。このようにして得られた細胞の培養上清に産生されているMAbを実施例7に記載したELISA法で検出した。
BALB/c-nu/nuマウス(日本チャールスリバー社より購入)に独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターの受託番号がFERM BP−10782であるハイブリドーマを1×107/mouseとなるように腹腔内投与し、1〜2週間後に腹水を採取した。腹水中に含まれるMAbは実施例6に記載した方法で精製し、得られた精製IgG画分を抗0427L2Q(48−5) IgGと命名した。このラットMAbのIgGのサブクラスは、モノクローナル抗体アイソタイピングキット(RMT1、大日本製薬社製)によって重鎖はIgG2a、軽鎖はκと判定された。
正常マウス全身感染モデルでの評価は、4週齡のCD−1雄性マウス(日本チャールズリバー社より購入)に5%ムチン含有生理食塩水500μlに懸濁したPA103菌株の7.0x104cfu/マウス(14LD50)を腹腔内に接種し、直後に生理食塩水で5倍希釈した血清サンプルを10ml/kgで尾静脈より投与し、7日後の生死で感染防御活性を判定した。
好中球減少マウス全身感染モデルでの評価は、cyclophosphamide(以下、CYとする。Sigma-Aldrich社製)の12.5mg/mL(生理食塩水)を調製し、4週齡のCD−1雄性マウスに125mg/kgの投与量でday−5、−2、0に合計3回腹腔内投与して末梢血中の好中球を減少させた。その後、生理食塩水250μlに懸濁したPA103菌株の1.0x105cfu/マウス(74LD50)を腹腔内に接種し、直後にサンプル(血清および精製IgG画分は、生理食塩水でそれぞれ5倍希釈および2.5mg/mLとした。)を10あるいは20mL/kgで尾静脈より投与し、7日後の生死で感染防御活性を判定した。
多剤耐性緑膿菌MSC06120菌株に対する各種抗菌剤の最小発育阻止濃度は、イミペネム:32μg/ml、アミカシン:64μg/ml、シプロフロキサシン:>256μg/mlであった。本菌株を用いた好中球減少マウス全身感染モデルでの評価は、CYの12.5mg/mL(生理食塩水)を調製し、4週齡のCD−1雄性マウスに125mg/kgの投与量でday−5、−2、0に合計3回腹腔内投与して末梢血中の好中球を減少させ、その後、生理食塩水250μlに懸濁したMSC06120菌株の0.925x105cfu/マウス(8.3LD50)を腹腔内に接種し、直後に精製IgGサンプルを20mL/kg(0.5mg/mouse)で尾静脈より投与し、7日後の生死で感染防御活性を判定した。
Claims (20)
- 緑膿菌由来のPA0427タンパク質に対する抗体を産生することができるタンパク質抗原またはペプチド抗原を含んでなる抗原組成物。
- 以下の(i)、(ii)、(iii)、および(iv)から選択されるタンパク質:
(i)配列番号:4で表されるアミノ酸配列を含んでなるタンパク質;
(ii)配列番号:4で表されるアミノ酸配列において、1もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列を含んでなり、かつ配列番号:4で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質と同等の機能を有するタンパク質;
(iii)配列番号:4で表されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされ、かつ配列番号:4で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質と同等の機能を有するタンパク質;および
(iv)配列番号:4で表されるアミノ酸配列と70%以上の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなり、かつ配列番号:4で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質と同等の機能を有するタンパク質。 - 配列番号:5で表されるアミノ酸配列、または1若しくは数個の保存的置換を有する配列番号:5で表されるアミノ酸配列を含んでなるペプチド。
- 配列番号:6で表されるアミノ酸配列、または1若しくは数個の保存的置換を有する配列番号:6で表されるアミノ酸配列を含んでなるペプチド。
- 請求項2に記載のタンパク質または請求項3もしくは4に記載のペプチドを含んでなる、抗原組成物。
- 請求項1または5に記載の抗原組成物と、場合によっては1種以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、および/またはアジュバントとを含んでなる、緑膿菌に関連する疾患の予防または治療に用いられるワクチン組成物。
- 緑膿菌由来のPA0427タンパク質またはその一部に対する抗体またはその機能的断片。
- 緑膿菌由来のPA0427タンパク質の一部が、緑膿菌由来のPA0427タンパク質の細胞表面表出部分である、請求項7に記載の抗体またはその機能的断片。
- 緑膿菌由来のPA0427タンパク質の細胞表面表出部分が、以下の(i)、(ii)、(iii)、および(iv)から選択されるタンパク質である、請求項8に記載の抗体またはその機能的断片:
(i)配列番号:4で表されるアミノ酸配列を含んでなるタンパク質;
(ii)配列番号:4で表されるアミノ酸配列において、1もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列を含んでなり、かつ配列番号:4で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質と同等の機能を有するタンパク質;
(iii)配列番号:4で表されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされ、かつ配列番号:4で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質と同等の機能を有するタンパク質;および
(iv)配列番号:4で表されるアミノ酸配列と70%以上の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなり、かつ配列番号:4で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質と同等の機能を有するタンパク質。 - 緑膿菌由来のPA0427タンパク質の細胞表面表出部分が、配列番号:5で表されるアミノ酸配列、または1若しくは数個の保存的置換を有する配列番号:5で表されるアミノ酸配列を含んでなるペプチドである、請求項8に記載の抗体またはその機能的断片。
- 緑膿菌由来のPA0427タンパク質の細胞表面表出部分が、配列番号:6で表されるアミノ酸配列、または1若しくは数個の保存的置換を有する配列番号:6で表されるアミノ酸配列を含んでなるペプチドである、請求項8に記載の抗体またはその機能的断片。
- FERM BP−10782の受託番号のもと寄託されたハイブリドーマにより産生される、請求項11に記載の抗体またはその機能的断片。
- 抗体が、モノクローナル抗体であることを特徴とする請求項7〜12のいずれか一項に記載の抗体またはその機能的断片。
- FERM BP−10782の受託番号のもと寄託されたハイブリドーマ。
- 請求項14に記載のハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体と同じ抗原と交差反応するモノクローナル抗体であることを特徴とする、請求項7に記載の抗体またはその機能的断片。
- 請求項7〜13、および15のいずれか一項に記載の抗体またはその機能的断片と、場合によっては1種以上の薬学的に許容される担体、および/または希釈剤とを含んでなる、緑膿菌に関連する疾患の予防または治療に用いられる医薬組成物。
- 緑膿菌に関連する疾患が、緑膿菌感染に起因する全身感染疾患である請求項6に記載のワクチン組成物または請求項16に記載の医薬組成物。
- 緑膿菌感染が、多剤耐性緑膿菌感染である、請求項17に記載のワクチン組成物または医薬組成物。
- 請求項7〜13、および15のいずれか一項に記載の抗体またはその機能的断片を含んでなる、緑膿菌感染症診断剤。
- 請求項7〜13、および15のいずれか一項に記載の抗体またはその機能的断片を含んでなる、緑膿菌の検出キット。
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