JPWO2005103670A1 - ラボオンチップ用基板 - Google Patents
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Abstract
Description
タンパク質精製部の幅、深さの好ましい範囲は特に限定しないが、タンパク質を精製するための担体が入る大きさであれば良い。
試料溶液中のタンパク質の濃度としては特に限定しないが、測定精度の観点から、0.05〜2000ng/μlが好ましく、0.1〜2000ng/μlがより好ましく、0.5〜200ng/μlが特に好ましい。
本発明を以下の実施例により更に具体的に説明するが本発明の範囲はこれらの実施例に限定されるものではない。
大きさ20×60mm、厚さ0.2mmのポリメチルメタクリレートの基板を分子量500000、2000ppmのポリエチレングリコール水溶液に浸漬した。浸漬したポリメチルメタクリレート板を密封し、2.5kGyのガンマ線を照射し、グラフト化した。ガンマ線を照射した基板を乾燥し、透光部に穴を開けた蛍光プレートに貼付した。貼付した蛍光プレートに10μg/mlに希釈したFITC標識BSAタンパクおよびIgGタンパクの水溶液を室温で10分間固層化し、溶液を除去後リン酸緩衝液(PBS)で洗浄し蛍光強度を測った。
大きさ20×60mm、厚さ0.2mmのポリメチルメタクリレートの基板にガンマ線を照射せず透光部に穴を開けた蛍光プレートに貼付し、10μg/mlに希釈したFITC標識BSAタンパクおよびIgGタンパクの水溶液を室温で10分間固層化し、溶液を除去後リン酸緩衝液で洗浄したものを比較例1とした。
大きさ20×60mm、厚さ0.2mmのポリメチルメタクリレートの基板にガンマ線を照射せず透光部に穴を開けた蛍光プレートに貼付し、1mg/mlのウシ血清アルブミン(BSA)リン酸緩衝溶液を室温で1時間固層化しリン酸緩衝溶液で洗浄後10μg/mlに希釈したFITC標識BSAタンパクおよびIgGタンパクの水溶液を室温で10分間固層化し、溶液を除去後リン酸緩衝液で洗浄したものを参考例とした。この参考例は、親水性高分子をコーティングする方法であり、親水性高分子が剥離するためにラボオンチップとしては実用的でないが、タンパク質の吸着を抑制できる既存の方法として本発明と比較した。
幅100μm×深さ60μm×長さ50cmのマイクロ流路を持つポリメタクリレート基板のマイクロ流路中に分子量500000、2000ppmのポリエチレングリコール水溶液を充填し、2.5kGyのガンマ線を照射し、グラフト化した。照射後、マイクロ流路中のポリエチレングリコール水溶液を取り出し、精製水で洗浄した。大腸菌由来の無細胞タンパク質合成反応駅をマイクロ流路に注入後、30℃で1時間放置し、クロラムフェニコールの3’−水酸基にアセチルCoAからアセチル基を転移する分子量26000の酵素であるChloramphenicol Acetyltransferase(CAT)を合成した。マイクロ流路中で合成されたCATタンパク質を回収し、ELISA法で定量したものを実施例2とした。
幅100μm×深さ60μm×長さ50cmのマイクロ流路を持つポリメタクリレート基板のマイクロ流路を精製水で洗浄した。大腸菌由来の無細胞タンパク質合成反応液をマイクロ流路に注入後、30℃で1時間放置し、CATタンパク質を合成した。マイクロ流路中で合成されたCATタンパク質を回収し、ELISA法で定量したものを比較例2とした。
ポリメチルメタクリレートを原料とし直径100μmの流路を有する電気泳動用チップを分子量500000、2000ppmのポリエチレングリコール水溶液に浸漬した。浸漬した電気泳動用チップを密封し、2.5kGyのガンマ線を照射し、グラフト化した。流路内のポリエチレングリコールを除去し、5%ポリアクリルアミド(分子量60万〜100万)0.1MTris−Aspartic Acid(pH8)溶液を充填し図3のA、B、Cの部分に5%ポリアクリルアミド(分子量60万〜100万)0.1MTris−Aspartic Acid(pH8)溶液を入れ、Dの部分に蛍光標識トリプシンインヒビターおよび蛍光標識BSAの1%SDSを含む0.05MTris−HCl(pH8)溶液を入れた。ポリアクリルアミド、タンパク質溶液を充填した電気泳動用チップのA、B、C、Dの部分に電極を差し、Bに350Vの電圧を1分間加えた。その後Cに500V、B、Dに150Vの電圧を加え泳動を行ったものを実施例3とした。
ポリメチルメタクリレートを原料とし直径100μmの流路を有する電気泳動用チップに5%ポリアクリルアミド(分子量60万〜100万)0.1MTris−Aspartic Acid(pH8)溶液を充填し図3のA、B、Cの部分に5%ポリアクリルアミド(分子量60万〜100万)0.1MTris−Aspartic Acid(pH8)溶液を入れ、Dの部分に蛍光標識トリプシンインヒビターおよび蛍光標識BSAの1%SDSを含む0.05MTris−HCl(pH8)溶液を入れた。ポリアクリルアミド、タンパク質溶液を充填した電気泳動用チップのA、B、C、Dの部分に電極を差し、Bに350Vの電圧を1分間加えた。その後Cに500V、B、Dに150Vの電圧を加え泳動を行ったものを比較例3とした。
ポリメチルメタクリレートを原料とし直径100μmの流路を有する電気泳動用チップを分子量500000、2000ppmのポリエチレングリコール水溶液に浸漬した。浸漬した電気泳動用チップを密封し、2.5kGyガンマ線を照射し、グラフト化した。流路内のポリエチレングリコールを除去し、10規定の塩酸で流路を洗浄した。洗浄後、5%ポリアクリルアミド(分子量60万〜100万)0.1MTris−Aspartic Acid(pH8)溶液を充填し図3のA、B、Cの部分に5%ポリアクリルアミド(分子量60万〜100万)0.1MTris−Aspartic Acid(pH8)溶液を入れ、Dの部分に蛍光標識トリプシンインヒビターおよび蛍光標識BSAの1%SDSを含む0.05MTris−HCl(pH8)溶液を入れた。ポリアクリルアミド、タンパク質溶液を充填した電気泳動用チップのA、B、C、Dの部分に電極を差し、Bに350Vの電圧を1分間加えた。その後Cに500V、B、Dに150Vの電圧を加え泳動を行ったものを実施例4とした。
ポリメチルメタクリレートを原料とし直径100μmの流路を有する電気泳動用チップを分子量500000、2000ppmのポリエチレングリコール水溶液に浸漬した。浸漬した電気泳動用チップを密封し、2.5kGyのガンマ線を照射し、グラフト化した。流路内のポリエチレングリコールを除去し、10規定の水酸化ナトリウム水溶液で流路を洗浄した。洗浄後、5%ポリアクリルアミド(分子量60万〜100万)0.1MTris−Aspartic Acid(pH8)溶液を充填し図3のA、B、Cの部分に5%ポリアクリルアミド(分子量60万〜100万)0.1MTris−Aspartic Acid(pH8)溶液を入れ、Dの部分に蛍光標識トリプシンインヒビターおよび蛍光標識BSAの1%SDSを含む0.05MTris−HCl(pH8)溶液を入れた。ポリアクリルアミド、タンパク質溶液を充填した電気泳動用チップのA、B、C、Dの部分に電極を差し、Bに350Vの電圧を1分間加えた。その後Cに500V、B、Dに150Vの電圧を加え泳動を行ったものを実施例5とした。
ポリメチルメタクリレートを原料とし直径100μmの流路を有する電気泳動用チップを分子量500000、2000ppmのポリエチレングリコール水溶液に浸漬した。浸漬した電気泳動用チップを密封し、5.0kGyのガンマ線を照射し、グラフト化した。流路内のポリエチレングリコールを除去し、10規定の水酸化ナトリウム水溶液で流路を洗浄した。洗浄後、5%ポリアクリルアミド(分子量60万〜100万)0.1MTris−Aspartic Acid(pH8)溶液を充填し図3のA、B、Cの部分に5%ポリアクリルアミド(分子量60万〜100万)0.1MTris−Aspartic Acid(pH8)溶液を入れ、Dの部分に蛍光標識トリプシンインヒビターおよび蛍光標識BSAの1%SDSを含む0.05MTris−HCl(pH8)溶液を入れた。ポリアクリルアミド、タンパク質溶液を充填した電気泳動用チップのA、B、C、Dの部分に電極を差し、Bに350Vの電圧を1分間加えた。その後Cに500V、B、Dに150Vの電圧を加え泳動を行ったものを実施例6とした。
ポリメチルメタクリレートを原料とし直径100μmの流路を有する電気泳動用チップを分子量500000、2000ppmのポリエチレングリコール水溶液に浸漬した。浸漬した電気泳動用チップを密封し、10.0kGyのガンマ線を照射し、グラフト化した。流路内のポリエチレングリコールを除去し、10規定の水酸化ナトリウム水溶液で流路を洗浄した。洗浄後、5%ポリアクリルアミド(分子量60万〜100万)0.1MTris−Aspartic Acid(pH8)溶液を充填し図3のA、B、Cの部分に5%ポリアクリルアミド(分子量60万〜100万)0.1MTris−Aspartic Acid(pH8)溶液を入れ、Dの部分に蛍光標識トリプシンインヒビターおよび蛍光標識BSAの1%SDSを含む0.05MTris−HCl(pH8)溶液を入れた。ポリアクリルアミド、タンパク質溶液を充填した電気泳動用チップのA、B、C、Dの部分に電極を差し、Bに350Vの電圧を1分間加えた。その後Cに500V、B、Dに150Vの電圧を加え泳動を行ったものを実施例7とした。
Claims (11)
- ケイ素の含有率が重量比で10%以下である樹脂を基材とし、その表面に親水性高分子が共有結合したラボオンチップ用基板。
- 基材の表面に親水性高分子を高エネルギー線で共有結合させた請求項1記載のラボオンチップ用基板。
- 高エネルギー線がガンマ線である請求項1記載のラボオンチップ用基板。
- ガンマ線の吸収エネルギーが10kGy以下であることを特徴とする請求項3に記載のラボオンチップ用基板。
- 親水性高分子がポリアルキレングリコールである請求項1に記載のラボオンチップ用基板。
- ポリスルホン系樹脂、ポリメタクリル酸系樹脂、ポリアミド系樹脂、ポリアクリロニトリルから選ばれる少なくとも一種の樹脂を基材とする請求項1に記載のラボオンチップ用基板。
- タンパク質処理チップである請求項1記載のラボオンチップ用基板。
- タンパク質処理チップの流路のみにポリアルキレングリコールを高エネルギー線で共有結合させた請求項7記載のタンパク質処理チップ。
- タンパク質泳動用である請求項7に記載のタンパク質処理チップ。
- タンパク質電気泳動用である請求項7記載のタンパク質処理チップ。
- 上記電気泳動において電気浸透流を抑えることを特徴とする請求項7記載のタンパク質処理チップ。
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