JPWO2005097984A1 - リパーゼ粉末、その製造方法及びその使用 - Google Patents
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Abstract
Description
リパーゼは、脂肪酸などの各種カルボン酸とモノアルコールや多価アルコールなどのアルコール類とのエステル化反応、複数のカルボン酸エステル間のエステル交換反応などに幅広く使用されている。このうち、エステル交換反応は動植物油脂類の改質をはじめ、各種脂肪酸のエステル、糖エステルやステロイドの製造法として重要な技術である。これらの反応の触媒として、油脂加水分解酵素であるリパーゼを用いると、室温ないし約70℃程度の温和な条件下でエステル交換反応を行うことができ、従来の化学反応に比べ、副反応の抑制やエネルギーコストが低減化されるだけでなく、触媒としてのリパーゼが天然物であることから安全性も高い。また、その基質特異性や位置特異性により目的物を効率良く生産することができる。ところが、リパーゼ粉末をそのままエステル交換反応に用いても活性が十分に発現しないばかりか、元来が水溶性のリパーゼを油性原料中に均一に分散させることは困難であり、その回収も困難である。このため、従来はリパーゼを何らかの担体、たとえば陰イオン交換樹脂(特許文献1)、フェノール吸着樹脂(特許文献2)、疎水性担体(特許文献3)、陽イオン交換樹脂(特許文献4)、キレート樹脂(特許文献5)等に固定化してエステル化やエステル交換反応などに用いることが一般的である。
このような状況に鑑み、リパーゼ粉末を用いる各種技術が開発されている。例えば、不活性有機溶媒の存在下または非存在下、エステル交換反応時に分散リパーゼ粉末粒子の90%以上を1〜100μmの範囲の粒径に保つように、エステルを含有する原料にリパーゼ粉末を分散させてエステル交換反応を行う方法が提案されている(特許文献6)。又、リン脂質および脂溶性ビタミンを含む酵素溶液を乾燥してえた酵素粉末を用いることが提案されている(特許文献7)。
しかしながら、さらにリパーゼ活性及び安定性が向上したリパーゼ粉末が求められている。
本発明は、又、1,3選択性が向上したリパーゼ粉末を提供することを目的とする。
本発明は、又、上記リパーゼ粉末を油脂に浸漬又は浸潤されてなるリパーゼ組成物を提供することを目的とする。
本発明は、又、上記リパーゼ粉末の製造方法を提供することを目的とする。
本発明は、又、上記リパーゼ粉末を用いる油脂のエステル交換方法を提供することを目的とする。
本発明のこれらの目的及び他の目的は、以下の記載から明らかとなるであろう。
すなわち、本発明は、リパーゼと獣乳の固形分を含有する造粒物であることを特徴とするリパーゼ粉末を提供する。
本発明は、又、上記リパーゼ粉末が油脂に浸漬又は浸潤されているリパーゼ組成物を提供する。
本発明は、又、リパーゼ含有水溶液に獣乳又は獣乳由来のクリームを添加し、スプレードライ、フリーズドライ又は溶剤沈澱することを特徴とするリパーゼ粉末の製造方法を提供する。
本発明は、又、上記リパーゼ粉末を含有するエステル交換用又はエステル化用リパーゼを提供する。
本発明は、又、エステル交換用リパーゼを用いることを特徴とする油脂のエステル交換方法を提供する。
これらのリパーゼを産生する微生物としては、細菌、酵母、糸状菌、放線菌等特に限定されるものではないが、シュードモナス属(Psudomonas sp.)、アルカリゲネス属(Alcaligenes sp.)、アスロバクター属(Arthrobacter sp.)、スタフィロコッカス属(Staphylococcus sp.)、トルロプシス属(Torulopsis sp.)、エスチエリシア属(Escherichia sp.)、マイコトルラ属(Micotorula sp.)、プロピオニバクテリウム属(Propionibacterum sp.)、クロモバクテリウム属(Chromobacterum sp.)、キサントモナス属(Xanthomonas sp.)、ラクトバチルス属(Lactobacillus sp.)、クロストリデイウム属(Clostridium sp.)、キャンデイダ属(Candida sp.)、ジオトリカム属(Geotrichum sp.)、サッカロマイコプシス属(Sacchromycopsis sp.)、ノカルデイア属(Nocardia sp.)、フザリウム属(Fuzarium sp.)、アスペルギルス属(Aspergillus sp.)、ペニシリウム属(Penicillum sp.)、ムコール属(Mucor sp.)、リゾプス属(Rhizopus sp.)、フィコマイセス属(Phycomycese sp.)、プチニア属(Puccinia sp.)、バチルス属(Bacillus sp.)、ストレプトマイセス属(Streptmycese sp.)、サーモマイセス属(Thermomyces sp.)などが挙げられる。
本発明では、これらのうち、1,3−特異性リパーゼが好ましく、特に、リゾムコール属及びアルカリゲネス属由来の1,3−特異性リパーゼが好ましく、さらにリゾムコール属のRhizomucor miehei及びアルカリゲネス属のAlcaligenes sp.由来の1,3−特異性リパーゼが好ましい。尚、従来、リゾムコール ミーヘイ(Rhizomucor miehei)は、ムコール属(Mucor sp.)として扱われていた場合もある。
本発明では、又、リゾプス属及びサーモマイセス属由来の1,3−特異性リパーゼが好ましく、特に、リゾプス オリザエ(Rhizopus oryzae)及びサーモマイセス ラヌゲノウス(Thermomyces lanugenousu)由来の1,3−特異性リパーゼが好ましい。
リパーゼと獣乳の割合は、種々の割合とすることができるが、獣乳の固形分で、リパーゼ質量の0.1〜20倍の量とするのが好ましく、1〜20倍の量とするのがより好ましい。
本発明のリパーゼ粉末は、リパーゼと獣乳の固形分を含有することを必須とするが、これ以外に、リパーゼの培地成分などを含有することができる。
本発明のリパーゼ粉末は、水分含量が10質量%以下であるのが好ましく、特に、6.5〜8.5質量%であるのが好ましい。
本発明のリパーゼ粉末の粒径は任意とすることができるが、リパーゼ粉末の90質量%以上が粒径1〜100μmであるのが好ましい。平均粒径は20〜80μmが好ましく、より好ましくは20〜50μmである。又、リパーゼ粉末の粒径は球状であるのが好ましい。
リパーゼ粉末の粒径は、例えば、HORIBA社の粒度分布測定装置(LA−500)を用いて測定することができる。
ここで、リパーゼ含有水溶液としては、菌体を除去したリパーゼ培養液、精製培養液、これらから得たリパーゼ粉末を再度水に溶解・分散させたもの、市販のリパーゼ粉末を再度水に溶解・分散させたもの、市販の液状リパーゼ等が挙げられる。さらに、リパーゼ活性をより高めるために塩類等の低分子成分を除去したものがより好ましく、また、粉末性状をより高めるために糖等の低分子成分を除去したものがより好ましい。
リパーゼ培養液としては、例えば、大豆粉、ペプトン、コーン・ステープ・リカー、K2HPO4、(NH4)2SO4、MgSO4・7H2O等含有する水溶液があげられる。これらの濃度としては、大豆粉0.1〜20質量%、好ましくは1.0〜10質量%、ペプトン0.1〜30質量%、好ましくは0.5〜10質量%、コーン・ステープ・リカー0.1〜30質量%、好ましくは0.5〜10質量%、K2HPO40.01〜20質量%、好ましくは0.1〜5質量%である。又、(NH4)2SO4は0.01〜20質量%、好ましくは0.05〜5質量%、MgSO4・7H2Oは0.01〜20質量%、好ましくは0.05〜5質量%である。培養条件は、培養温度は10〜40℃、好ましくは20〜35℃、通気量は0.1〜2.0VVM、好ましくは0.1〜1.5VVM、攪拌回転数は100〜800rpm、好ましくは200〜400rpm、pHは3.0〜10.0、好ましくは4.0〜9.5に制御するのがよい。
遠心分離は200〜20,000×g、膜濾過はMF膜、フィルタープレスなどで圧力を3.0kg/m2以下にコントロールするのが好ましい。菌体内酵素の場合は、ホモジナイザー、ワーリングブレンダー、超音波破砕、フレンチプレス、ボールミル等で細胞破砕し、遠心分離、膜濾過などで細胞残さを除去することが好ましい。ホモジナイザーの攪拌回転数は500〜30,000rpm、好ましくは1,000〜15,000rpm、ワーリングブレンダーの回転数は500〜10,000rpm、好ましくは1,000〜5,000rpmである。攪拌時間は0.5〜10分、好ましくは1〜5分がよい。超音波破砕は1〜50KHz、好ましくは10〜20KHzの条件で行うのが良い。ボールミルは直径0.1〜0.5mm程度のガラス製小球を用いるのがよい。
本発明では、リパーゼ含有水溶液としては、固形分として5〜30質量%含むものを用いるのが好ましい。
ここで、リパーゼ含有水溶液中の固形分濃度、及び獣乳又は獣乳由来のクリーム中の固形分濃度は、例えば、糖度計((株)シー・アイ・エス社製 BRX−242)を用いてBrix.%として求めることができる。
獣乳又は獣乳由来のクリームを添加した後、リパーゼ含有水溶液のpHを6〜7.5に調整するのが好ましい。特にpHを7.0以下に、さらにpHを6.5〜7.0の範囲となるように調整するのが好ましい。pH調整は、スプレードライなどの乾燥工程の直前に行うのが好ましいが、その前のいずれかの工程において行ってもよく、乾燥工程の直前のpHが上記範囲内となるように、予めリパーゼ含有水溶液のpHを調整しておいてもよい。pH調整には、各種アルカリ剤や酸を用いることができるが、水酸化ナトリウムなどアルカリ金属水酸化物を用いるのが好ましい。
又、乾燥工程前の途中の工程において、リパーゼ含有水溶液を濃縮してもよい。濃縮方法は、特に限定されるものではないが、エバポレーター、フラッシュエバポレーター、UF膜濃縮、MF膜濃縮、無機塩類による塩析、溶剤による沈殿法、イオン交換セルロース等による吸着法、吸水性ゲルによる吸水法等があげられる。好ましくはUF膜濃縮、エバポレーターがよい。UF膜濃縮用モジュールとしては、分画分子量3,000〜100,000、好ましくは6,000〜50,000の平膜または中空糸膜、材質はポリアクリルニトリル系、ポリスルフォン系などが好ましい。
又、フリーズドライ(凍結乾燥)も好ましく、例えば、ラボサイズの少量用凍結乾燥機、棚段式凍結乾燥により行うのが好ましい。さらに、減圧乾燥により調製することもできる。
このようにして調製されたリパーゼ粉末はそのまま使用することができるが、油脂に浸漬又は浸潤させたリパーゼ組成物として用いるのが取り扱い性の点から好ましい。ここで、リパーゼ組成物中の油脂の質量は、リパーゼ粉末に対し0.1〜20倍であるのが好ましく、1〜20倍であるのがより好ましい。
リパーゼ粉末に含浸させる油脂としては、特に限定されず、菜種油、大豆油、ハイオレイックヒマワリ油、オリーブ油、サフラワー油、コーン油、ヤシ油、ゴマ油などの植物油、トリオレイン(グリセリン トリオレエート)、トリカプリリン(グリセリン トリオクタノエート)、トリアセチン(グリセリン トリアセテート)、トリブチリン(グリセリン トリブチレート)などのトリアシルグリセロール、脂肪酸エステル、ステロールエステルなどの1種又は2種以上の混合物があげられる。
リパーゼが、1,3−特異性リパーゼである場合、特に、Rhizomucor miehei又はAlcaligenes sp.由来のリパーゼである場合には、本発明によると1,3−選択性が極めて高くなるので、該リパーゼ粉末をエステル交換用リパーゼ又はエステル化用リパーゼとして好適に使用することができる。そして、このリパーゼ粉末を用い、常法により、油脂などのエステル交換反応、油脂と脂肪酸エステルとのエステル交換反応、アルコリシスやアシドリシスのエステル交換反応、又はグリセリンと脂肪酸とのエステル化反応を効率的に行うことができる。
次に本発明を実施例により詳細に説明する。
水溶液にリパーゼが溶解・分散した形態にあるノボザイムズ ジャパン(株)社製のRhizomucor miehei由来の液状リパーゼ(商品名Palatase20000L)を、UFモジュール(旭化成工業(株)社製SIP−0013)を用いて低分子成分を除去してリパーゼ含有水溶液1(固形分濃度20.1質量%)を得た。詳しくは、液状リパーゼ(パラターゼ20000L)を氷冷下でUF膜処理を行い、1/2量の体積に濃縮後、濃縮液と同量のpH7の0.01Mリン酸バッファーを添加した。得られた溶液について、同じようにUF膜処理後リン酸バッファーを添加する操作を2回繰り返した後、さらにUF膜処理をし、得られたリパーゼ濃縮液をリパーゼ含有水溶液1とした。
このリパーゼ含有水溶液1、20mlに対して、牛乳(小岩井乳業(株)社製小岩井牛乳おいしさしたて:固形分濃度12.9質量%)20mlを添加した。このようにして得られた溶液のpHを水酸化ナトリウム水溶液を用いてpH6.8〜6.9に調整した。
リパーゼ濃縮液(=リパーゼ含有水溶液1):牛乳の体積比は、1:1であり、牛乳の固形分は、リパーゼ含有水溶液1の固形分質量の0.64倍の量であった。
この液を、スプレードライヤー(SD−1000型:東京理化器械(株)社製)を用い、入口温度130℃、乾燥空気量0.7〜1.1m3/min、噴霧圧力11〜12kpaの条件下噴霧し、リパーゼ粉末を得た。リパーゼ粉末粒子の形状は球状で、リパーゼ粉末の90質量%以上が粒径1〜100μmの範囲内にあり、平均粒径は7.6μmであった。粒径は、HORIBA社の粒度分布測定装置(LA−500)を用いて測定した。
尚、リパーゼ含有水溶液中の固形分濃度及び牛乳の固形分濃度は、以下の方法により求めた。
糖度計((株)シー・アイ・エス社製 BRX−242)を用いてBrix.%として求めた。
実施例1で得られたリパーゼ濃縮液に、濃縮液と同量の水を添加し、リパーゼ含有水溶液2(リパーゼ濃縮液:水の体積比は1:1)を得た。以下、実施例1のリパーゼ含有水溶液1をリパーゼ含有水溶液2に代えた以外は、実施例1と同様にしてリパーゼ粉末を得た。リパーゼ濃縮液:水:牛乳の体積比は、0.5:0.5:1であり、牛乳の固形分は、リパーゼ含有水溶液(UF)の固形分質量の1.05倍の量であった。
実施例1で得られたリパーゼ濃縮液に、濃縮液と同量のpH7の0.01Mリン酸バッファーを添加し、リパーゼ含有水溶液3(リパーゼ濃縮液:バッファーの体積比は1:1)を得た。以下、実施例1のリパーゼ含有水溶液1をリパーゼ含有水溶液3に代えた以外は、実施例1と同様にしてリパーゼ粉末を得た。リパーゼ濃縮液:リン酸バッファー:牛乳の体積比は、0.5:0.5:1であり、牛乳の固形分は、リパーゼ含有水溶液の固形分質量の1.03倍の量であった。
実施例1で得られたリパーゼ濃縮液に、濃縮液と同量のpH8の0.01Mリン酸バッファーを添加し、リパーゼ含有水溶液4(リパーゼ濃縮液:バッファーの体積比は1:1)を得た。このリパーゼ含有水溶液4、20mlに対して、牛乳(小岩井乳業(株)社製小岩井牛乳おいしさしたて:固形分濃度12.9質量%)10mlを添加した。このようにして得られた溶液のpHを水酸化ナトリウム水溶液を用いてpH6.8〜6.9に調整した。
リパーゼ濃縮液:リン酸バッファー:牛乳の体積比は、0.5:0.5:0.5であり、牛乳の固形分は、リパーゼ含有水溶液の固形分質量の0.52倍の量であった。
以下、実施例1と同様にしてリパーゼ粉末を得た。
実施例1で得られたリパーゼ濃縮液に、濃縮液と同量のpH8の0.01Mリン酸バッファーを添加し、リパーゼ含有水溶液5(リパーゼ濃縮液:バッファーの体積比は1:1)を得た。このリパーゼ含有水溶液5、20mlに対して、生クリーム(商品名:北海道純正クリーム35、高梨乳業(株)製、固形分濃度43質量%)を2ml添加した。このようにして得られた溶液のpHを水酸化ナトリウム水溶液を用いてpH6.8〜6.9に調整した。
リパーゼ濃縮液:リン酸バッファー:生クリームの体積比は、0.5:0.5:0.1であり、生クリームの固形分は、リパーゼ含有水溶液の固形分質量の0.34倍の量であった。
以下、実施例1と同様にしてリパーゼ粉末を得た。
実施例1で得られたリパーゼ濃縮液に、濃縮液と同量のpH8の0.01Mリン酸バッファーを添加し、リパーゼ含有水溶液6(リパーゼ濃縮液:バッファーの体積比は1:1)を得た。このリパーゼ含有水溶液6、20mlに対して、ジャージー牛乳(阿蘇小国ジャージー4.5牛乳:阿蘇農業共同組合製、固形分濃度13.2質量%)20mlを添加した。このようにして得られた溶液のpHを水酸化ナトリウム水溶液を用いてpH6.8〜6.9に調整した。
リパーゼ濃縮液:リン酸バッファー:牛乳の体積比は、0.5:0.5:1であり、牛乳の固形分は、リパーゼ含有水溶液の固形分質量の1.06倍の量であった。以下、実施例1と同様にしてリパーゼ粉末を得た。
粉末化の方法としてスプレードライを行う代わりに、フリーズドライを行った以外は、実施例1と同様にしてリパーゼ粉末を得た。フリーズドライは、pHが6.8〜6.9に調整されたリパーゼ含有水溶液をナスフラスコに入れ、ドライアイスメタノールで凍結後、東京理化器械(株)社製のフリーズドライヤー(FDU−830)を用い、0.15Torrで1〜2日凍結乾燥を行った。乾燥後、乳鉢で軽く粉砕しリパーゼ粉末を得た。
牛乳を添加しない以外は実施例3と同様にしてリパーゼ粉末を得た。リパーゼ濃縮液:リン酸バッファーの体積比は1:1であった。
このようにして得られたリパーゼ粉末のリパーゼ活性を以下の方法により測定した。結果を表−1に示す。
リパーゼ活性
トリオレインとトリカプリリンを1:1(w)の割合で混合した油に、粉末リパーゼを添加し60℃で反応させた。経時的に10μlをサンプリングし、ヘキサン1.5mlで希釈後、粉末リパーゼをろ過した溶液をガスクロサンプルとした。ガスクロ(カラム:DB−1ht)で分析し下式より反応率を求めた。ガスクロ条件は、カラム温度:初期150℃、昇温15℃/min.、最終370℃であり、これ以外の条件は、下記の1.3−選択性試験におけると同様である。
反応率(%)={C34area/(C24area+C34area)}×100
式中、C24はトリカプリリン、C34はトリカプリリンの1つの脂肪酸が18に置き換わったものを示し、areaはそれらのエリア面積である。
各時間における反応率に基づき解析ソフト(Orijin ver.6.1)により反応速度定数K値を求めた。リパーゼ活性は、比較例1のK値を100とした時の相対活性で表した。
表−1の結果から明らかなように、本発明によるとリパーゼの酵素活性が各段に向上することがわかる。
次に、実施例1、実施例7及び比較例1のリパーゼ粉末の1,3−選択性を以下の方法で測定した。
反応基質としてGRYCERYL−1,3−PALMITATE−2−OLEATE(POP)1mol及びOCTANOIC ETHYL(C8Et)3molを用い、酵素活性に応じて基質の0.5〜5w%となるようにリパーゼ粉末を添加し、60℃で反応を行い、経時的にサンプリングしヘキサンで希釈した。このサンプルをGC分析し以下の式により1・3位(C16:0Et)と2位(C18:1Et)の反応率を求めた。
C16:0Et(%)={C16:0Et aria/(C16Et+C18:1Et area+C8Et area)}×100
C18:1Et(%)={C18:1Et area/(C16Et+C18:1Et area+C8Et area)}×100
各時間における各々の反応率から解析ソフト(orijin ver.6.1)により反応速度定数Kを求めた。この時の最終反応率の値は可変とする。2位の反応性を1とした時の1,3位の反応性を求めた。
<GC条件>
カラム :DB−1ht 5m
注入量 :1μl
キャリアガス:ヘリウム
気化室温度:360℃
検出器温度:370℃
カラム温度:初期50℃、昇温15℃/min、最終370℃
表−2の結果から、本発明によると1,3−特異性リパーゼの1,3−選択性が各段に向上することがわかる。
次に、実施例1及び比較例1で得られたそれぞれのリパーゼ粉末の安定性を次の方法で試験した。
トリカプリリン5g、トリオレイン5g、60℃で反応を24時間〜72時間行い、各バッチの初期活性の低下度合いをプロットして延べ反応時間と活性の低下度合いから半減期を算出した。
その結果、実施例1で得られたリパーゼ粉末の半減期は913時間であり、比較例1で得られたリパーゼ粉末の半減期は234時間であったので、本発明のリパーゼ粉末によれば、安定性が2倍以上向上することがわかる。
名糖産業社製の粉末リパーゼ(商品名リパーゼQL、Alcaligenes sp.由来)を水に懸濁してリパーゼ含有水溶液(固形分濃度2.0質量%)を得た。このリパーゼ含有水溶液20mlに対して、牛乳(小岩井乳業(株)社製小岩井牛乳おいしさしたて:固形分濃度12.9質量%)2mlを添加した。リパーゼ含有水溶液:牛乳の体積比は10:1であり、牛乳の固形分は、リパーゼ含有水溶液の固形分質量の0.65倍の量であった。このようにして得られた溶液のpHを水酸化ナトリウム水溶液を用いてpH6.8〜6.9に調整した。
この液を、スプレードライヤー(SD−1000型:東京理化器械(株)社製)を用い、噴出し口温度130℃、乾燥空気量0.7〜1.1m3/min、噴霧圧力11〜12kpaの条件下噴霧し、リパーゼ粉末を得た。リパーゼ粉末粒子の形状は球状で、リパーゼ粉末の90質量%以上が粒径1〜100μmの範囲内であり、平均粒径は35μmであった。粒径は、HORIBA社の粒度分布測定装置(LA−500)を用いて測定した。
牛乳を添加しない以外は、実施例8と同様にしてスプレードライすることによりリパーゼ粉末を得た。
これらのリパーゼ粉末のリパーゼ活性を測定し、比較例1のリパーゼ粉末の活性を100とした時の相対値として表した。結果をまとめて表−3に示す。
実施例1で得られたリパーゼ粉末に、5倍量の菜種油を加えて、菜種油にリパーゼ粉末を含浸させ、濾過により過剰の油脂を除去し、リパーゼ粉末/菜種油の質量%が55/45であるリパーゼ組成物を調製した。
天野エンザイム(株)社製のRhizopus oryzae由来の粉末(凍結乾燥)リパーゼ(リパーゼD「アマノ」)を5質量%濃度で水に再懸濁し、スプレードライヤー(SD−1000型:東京理科器械(株)社製)を用い、入口温度130℃、乾燥空気量0.7〜1.1m3/min.、噴霧圧力11〜12Kpaの条件下噴霧し、リパーゼ粉末を得た。
比較例3と同様の粉末(凍結乾燥)リパーゼ(リパーゼD「アマノ」)を5質量%濃度で水に再懸濁し、このリパーゼ溶液5mlに対して、牛乳(明治乳業(株)社製、明治おいしい牛乳:固形分濃度12.9質量%)10mlを添加した。スプレードライヤー(SD−1000型:東京理科器械(株)社製)を用い、入口温度130℃、乾燥空気量0.7〜1.1m3/min.、噴霧圧力11〜12Kpaの条件下噴霧し、リパーゼ粉末を得た。
比較例3と同様の粉末(凍結乾燥)リパーゼ(リパーゼD「アマノ」)を5質量%濃度で水に再懸濁した。このリパーゼ溶液5mlに対して、牛乳(明治乳業(株)社製、明治おいしい牛乳:固形分濃度12.9質量%)10mlを添加した。このリパーゼ溶液を、予め0℃以下に冷却したエタノール150mlに徐々に添加し沈殿物を得た。得られた沈殿物を遠心分離機(ベックマン社製:GS−6KR)3000rpm.10min.で回収後、乾燥機(東京理科器械(株)社製:FDU−830)で16〜20時間、減圧乾燥しリパーゼ粉末を得た。
これらのリパーゼ粉末の活性を測定し比較例3のリパーゼ粉末の活性を100とした時の相対値として表した。結果をまとめて表−4に示す。
天野エンザイム(株)社製のRhizopus oryzae由来の粉末リパーゼ(リパーゼF−AP15)を15質量%濃度で水に再懸濁し、スプレードライヤー(SD−1000型:東京理科器械(株)社製)を用い、入口温度130℃、乾燥空気量0.7〜1.1m3/min.、噴霧圧力11〜12Kpaの条件下噴霧し、リパーゼ粉末を得た。
比較例4と同様の粉末リパーゼ(リパーゼF−AP15)を15質量%濃度で水に再懸濁し、このリパーゼ溶液10mlに対して、牛乳(明治乳業(株)社製、明治おいしい牛乳:固形分濃度12.9質量%)10mlを添加した。スプレードライヤー(SD−1000型:東京理科器械(株)社製)を用い、入口温度130℃、乾燥空気量0.7〜1.1m3/min.、噴霧圧力11〜12Kpaの条件下噴霧し、リパーゼ粉末を得た。
これらのリパーゼ粉末の活性を測定し、比較例4のリパーゼ粉末の活性を100とした時の相対値として表した。結果をまとめて表−5に示す。
ノボザイムズ ジャパン(株)社製のThermomyces lanugenousu由来の液状リパーゼ(商品名Lipozyme Tl 100L)をスプレードライヤー(SD−1000型:東京理科器械(株)社製)を用い、入口温度130℃、乾燥空気量0.7〜1.1m3/min.、噴霧圧力11〜12Kpaの条件下噴霧し、リパーゼ粉末を得た。
比較例5と同様の液状リパーゼ(商品名Lipozyme Tl 100L)1mlに対して、牛乳(明治乳業(株)社製、明治おいしい牛乳:固形分濃度12.9質量%)10mlを添加した。このリパーゼ液をスプレードライヤー(SD−1000型:東京理科器械(株)社製)を用い、入口温度130℃、乾燥空気量0.7〜1.1m3/min.、噴霧圧力11〜12Kpaの条件下噴霧し、リパーゼ粉末を得た。
比較例5と同様の液状リパーゼ(商品名Lipozyme Tl 100L)を10ml用い、予め0℃以下に冷却したエタノール60mlに徐々に添加し沈殿物を得た。得られた沈殿物を遠心分離機(ベックマン社製:GS−6KR)3000rpm.3min.で回収後、乾燥機(東京理科器械(株)社製:FDU−830)で16〜18時間、減圧乾燥しリパーゼ粉末を得た。
比較例5と同様の液状リパーゼ(商品名Lipozyme Tl 100L)1mlに対して、牛乳(明治乳業(株)社製、明治おいしい牛乳:固形分濃度12.9質量%)10mlを添加した。このリパーゼ液を予め0℃以下に冷却したエタノール60mlに徐々に添加し沈殿物を得た。得られた沈殿物を遠心分離機(ベックマン社製:GS−6KR)3000rpm.3min.で回収後、乾燥機(東京理科器械(株)社製:FDU−830)で16〜20時間、減圧乾燥しリパーゼ粉末を得た。
これらのリパーゼ粉末の活性を測定し、比較例5のリパーゼ粉末の活性を100とした時の相対値として表した。結果をまとめて表−6に示す。
Claims (19)
- リパーゼと獣乳の固形分を含有する造粒物であることを特徴とするリパーゼ粉末。
- リパーゼが1,3−特異性リパーゼである請求項1記載のリパーゼ粉末。
- 1,3−特異性リパーゼが、リゾムコール属又はアルカリゲネス属由来のリパーゼである請求項2記載のリパーゼ粉末。
- 1,3−特異性リパーゼが、リゾプス属及びサーモマイセス属由来の1,3−特異性リパーゼである請求項2記載のリパーゼ粉末。
- 1,3−特異性リパーゼが、リゾムコール ミーヘイ(Rhizomucor miehei)由来の1,3−特異性リパーゼである請求項3記載のリパーゼ粉末。
- 獣乳の固形分が牛乳又は牛乳由来のクリ−ムの固形分である請求項1〜5のいずれか1項記載のリパーゼ粉末。
- 水分含量が10質量%以下である請求項1〜6のいずれか1項記載のリパーゼ粉末。
- リパーゼ含有水溶液に獣乳又は獣乳由来のクリームを添加し、スプレードライ、フリーズドライ又は溶剤沈澱することにより得られる請求項1〜7のいずれか1項記載のリパーゼ粉末。
- 獣乳又は獣乳由来のクリームを添加した後、リパーゼ含有水溶液のpHが6〜7.5に調整されている請求項8記載のリパーゼ粉末。
- リパーゼ粉末の90質量%以上が粒径1〜100μmである請求項1〜9のいずれか1項記載のリパーゼ粉末。
- 請求項1〜10のいずれか1項記載のリパーゼ粉末が油脂に浸漬又は浸潤されているリパーゼ組成物。
- 前記リパーゼ組成物中の油脂の質量が、リパーゼ粉末に対し0.1〜20倍である請求項11記載のリパーゼ組成物。
- リパーゼ含有水溶液に獣乳又は獣乳由来のクリームを添加し、スプレードライ、フリーズドライ又は溶剤沈澱することを特徴とするリパーゼ粉末の製造方法。
- 添加する獣乳又は獣乳由来のクリームが、その固形分で、リパーゼ含有水溶液の固形分質量の0.1〜20倍量である請求項13記載の製造方法。
- 獣乳又は獣乳由来のクリームを添加した後、リパーゼ含有水溶液のpHを6〜7.5に調整する請求項13又は14記載の製造方法。
- リパーゼ含有水溶液が、菌体を除去したリパーゼ培養液、またはその精製培養液である請求項13〜15のいずれか1項記載の製造方法。
- リパーゼが、リゾムコール属又はアルカリゲネス属由来のリパーゼである請求項13〜16のいずれか1記載の製造方法。
- 請求項1〜10のいずれか1項記載のリパーゼ粉末を含有するエステル交換又はエステル化用リパーゼ。
- 請求項18記載のエステル交換用リパーゼを用いることを特徴とする油脂のエステル交換方法。
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