JPS6392671A - 保存安定性に優れたペプチド及びその製造法 - Google Patents
保存安定性に優れたペプチド及びその製造法Info
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Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
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- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
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- A61K8/65—Collagen; Gelatin; Keratin; Derivatives or degradation products thereof
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Birds (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Compositions Of Macromolecular Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
(産業上の利用分野)
本発明は、高品質でしかも保存安定性に優れた粉末[1
フイブロインペプチド及びその水浴液さらにそれ等の製
造法に係り、特に化粧料基剤に好適な絹フイブロインペ
プチド及びその製造法に関する。
フイブロインペプチド及びその水浴液さらにそれ等の製
造法に係り、特に化粧料基剤に好適な絹フイブロインペ
プチド及びその製造法に関する。
(従来の技術)
絹フィブロイン(シルク)は、その適度な吸湿性や保湿
性、皮膚や毛髪に対する優れた親和性や保御作用等の特
γEを有しているために、従来から絹フィブロイン粉末
がメーキャップ化粧料基剤等の用途に使用されてきた。
性、皮膚や毛髪に対する優れた親和性や保御作用等の特
γEを有しているために、従来から絹フィブロイン粉末
がメーキャップ化粧料基剤等の用途に使用されてきた。
従来、絹フィブロインや絹フイブロインペプチド粉末と
して、特公昭40−24920号公報、特公昭26−4
947号公報並びに特公昭58−88449号公報には
、絹糸をそのまま或いは化学的処理で脆化させたものを
粉砕した繊維状の紹フィブロインパウダー、絹フィブロ
インを過当なO厚中性塩等に溶解透析し得られたコロイ
ド溶液を松露乾燥して製造したゲル状絹フィブロインを
粉砕した粒状の絹フイブロインパウダー、並ヒニ絹フィ
ブロインを、14当な無機中性塩或いはアルカリ性水溶
液に溶解後透析し或いはしないで得られたコロイド溶液
から、凝固性塩の添加、空気吹込み2等′、1を点凝固
、超音波処理或いは高すり変形速度での攪拌等で絹フィ
ブロインを凝固析出せしめ、脱水、乾燥後粉砕した微粉
末状絹フィブロインが開示されている。
して、特公昭40−24920号公報、特公昭26−4
947号公報並びに特公昭58−88449号公報には
、絹糸をそのまま或いは化学的処理で脆化させたものを
粉砕した繊維状の紹フィブロインパウダー、絹フィブロ
インを過当なO厚中性塩等に溶解透析し得られたコロイ
ド溶液を松露乾燥して製造したゲル状絹フィブロインを
粉砕した粒状の絹フイブロインパウダー、並ヒニ絹フィ
ブロインを、14当な無機中性塩或いはアルカリ性水溶
液に溶解後透析し或いはしないで得られたコロイド溶液
から、凝固性塩の添加、空気吹込み2等′、1を点凝固
、超音波処理或いは高すり変形速度での攪拌等で絹フィ
ブロインを凝固析出せしめ、脱水、乾燥後粉砕した微粉
末状絹フィブロインが開示されている。
しかし特公昭40−24920号公報に記載の絹フイブ
ロインパウダーはla維状であり、粒子も大きいため化
粧料基剤として使用した場合には種々の欠点を有する。
ロインパウダーはla維状であり、粒子も大きいため化
粧料基剤として使用した場合には種々の欠点を有する。
又、特公昭26−4947号公報に記載の絹フイブロイ
ンパウダーは、松露乾燥のため水溶性と非水溶性の絹フ
ィブロインが混在し再凝集が起こり易く、化粧料基剤と
して不適当である。
ンパウダーは、松露乾燥のため水溶性と非水溶性の絹フ
ィブロインが混在し再凝集が起こり易く、化粧料基剤と
して不適当である。
いずれにしてもこれらの方法で得られた絹フイブロイン
パウダーは水に不溶性ないしは大部分が水に不溶性であ
るため、化粧料用途としてはノーキャップ化粧用基剤に
限られていて、水性化粧料(基礎化粧料)基剤としては
不適当である。
パウダーは水に不溶性ないしは大部分が水に不溶性であ
るため、化粧料用途としてはノーキャップ化粧用基剤に
限られていて、水性化粧料(基礎化粧料)基剤としては
不適当である。
また絹繊維を原料とした水性化粧N基剤に関しては、絹
H&維を塩酸、硫酸、リン酸等の強酸水溶液中で煮沸分
解し、絹繊維の分解で生成する混合アミノ酸を主成分と
する粉末を得る方法、特公昭42−17080号公報に
記載の様に、絹フィブロインを高濃度リン酸で処理して
得られる溶液にアセトン等の特定の有機溶媒よりなる凝
固剤を混合して部分分解物を析出せしめ、再びこれを水
に分散した後、蛋白分解酵婚を作用させ、次いで前記凝
固剤を用いて沈澱を析出させる方法が知られている。
H&維を塩酸、硫酸、リン酸等の強酸水溶液中で煮沸分
解し、絹繊維の分解で生成する混合アミノ酸を主成分と
する粉末を得る方法、特公昭42−17080号公報に
記載の様に、絹フィブロインを高濃度リン酸で処理して
得られる溶液にアセトン等の特定の有機溶媒よりなる凝
固剤を混合して部分分解物を析出せしめ、再びこれを水
に分散した後、蛋白分解酵婚を作用させ、次いで前記凝
固剤を用いて沈澱を析出させる方法が知られている。
これ等の方法のうち、前者は混合アミノ酸を主成分とす
るものであるため、化粧用基剤として特を3有用という
ものではない。又、後者の場合、本質的に固液反応であ
るため分子量分布は広くならざるを得ず、又平均分子量
を低くすればアミノ酸の生成量が必然的に増加し凝固剤
で析出し難くなる等のため品質、コスト両面に問題があ
り、操作も煩雑である。
るものであるため、化粧用基剤として特を3有用という
ものではない。又、後者の場合、本質的に固液反応であ
るため分子量分布は広くならざるを得ず、又平均分子量
を低くすればアミノ酸の生成量が必然的に増加し凝固剤
で析出し難くなる等のため品質、コスト両面に問題があ
り、操作も煩雑である。
一方、特開昭55−124798号公報には、銅−エチ
レンジアミン水溶液、水酸化銅−アルカリ−グリセリン
水溶液、臭化リチウム水溶液、カルシウム或いはマグネ
シウム又は亜鉛の塩酸塩或いはbl!I酔塩又はチオシ
アン酸塩の水浴液、チオシアン酸ナトリウム水溶液より
なる群からJバばれた少なくとも一神の溶媒に精練紐原
料を溶解後透析して得た0、 5〜20痘敏%の蒼1]
フィブロイン水浴液を酵素或いは酸又はアルカリにより
加水分1拌することを特徴とする六41フィブロインペ
プチドの製造法が提案されている。
レンジアミン水溶液、水酸化銅−アルカリ−グリセリン
水溶液、臭化リチウム水溶液、カルシウム或いはマグネ
シウム又は亜鉛の塩酸塩或いはbl!I酔塩又はチオシ
アン酸塩の水浴液、チオシアン酸ナトリウム水溶液より
なる群からJバばれた少なくとも一神の溶媒に精練紐原
料を溶解後透析して得た0、 5〜20痘敏%の蒼1]
フィブロイン水浴液を酵素或いは酸又はアルカリにより
加水分1拌することを特徴とする六41フィブロインペ
プチドの製造法が提案されている。
該方法の場合、#媒が柑やがなものであるため絹フィブ
ロインの化粧料用基剤として有用な蛋白質構造を損傷す
ることが無く、又透析をを満足する多層膜構造物又は中
空糸束構造物を使用して実施し、又加水分解が液−液反
応で均一に行なわれるため、iヒられた*11フィブロ
インペプチドは分子量分布の巾が狭く、その平均分子量
の調祭が容易である等、水性化粧料用として高品質で有
用なペプチド基剤である。
ロインの化粧料用基剤として有用な蛋白質構造を損傷す
ることが無く、又透析をを満足する多層膜構造物又は中
空糸束構造物を使用して実施し、又加水分解が液−液反
応で均一に行なわれるため、iヒられた*11フィブロ
インペプチドは分子量分布の巾が狭く、その平均分子量
の調祭が容易である等、水性化粧料用として高品質で有
用なペプチド基剤である。
特開昭56−40695号公報及び特願昭60−225
77では、前記溶解−透析法で得られた高品質のペプチ
ド水溶液を、いずれも特殊な条件で乾燥することを特徴
とする再解解性に優れ、熱劣化のない粉末状絹フイブロ
インペプチドの製造法が提案されている。
77では、前記溶解−透析法で得られた高品質のペプチ
ド水溶液を、いずれも特殊な条件で乾燥することを特徴
とする再解解性に優れ、熱劣化のない粉末状絹フイブロ
インペプチドの製造法が提案されている。
又、コラーゲンを原料とするペプチドも水溶液や粉末の
形で市販されている(商品名「ブロモイス」、[ニツビ
ペプタイt’J等)。
形で市販されている(商品名「ブロモイス」、[ニツビ
ペプタイt’J等)。
ところで、これ等のペプチドの長期保存の品質安定性は
やや不充分であって、神々の問題点や使用上の制約があ
る。例えば数ケ月間の保存で譲褐色に変色したり、濁り
が生じたり、著しい場合はゲル状物が大量に沈澱する。
やや不充分であって、神々の問題点や使用上の制約があ
る。例えば数ケ月間の保存で譲褐色に変色したり、濁り
が生じたり、著しい場合はゲル状物が大量に沈澱する。
この対策としては、ペプチドを冷暗所に保存したり、製
造後短期間に消費したり、製品への配合量を少量に限定
したりしているので実情でありて、根本的な解決策は未
だ見出されていない。
造後短期間に消費したり、製品への配合量を少量に限定
したりしているので実情でありて、根本的な解決策は未
だ見出されていない。
(ツヲ明が解決しようとする問題点)
本発明者等は、各種ペプチドの製品性状や品質の改良に
ついて鋭意研究した結果、本づを明を完成したものであ
る。本発明の目的は、過度な吸湿性や保γ昆性、皮膚や
毛髪に対する優れたツマ和性や保護作用等の特性を・持
ち、しかも長期間の保存安定性に髪れたペプチドを提供
するにある。−11!Jの目的は、斯るペプチドを工業
的容易巨っ安価に製造する方法を提供するにある。
ついて鋭意研究した結果、本づを明を完成したものであ
る。本発明の目的は、過度な吸湿性や保γ昆性、皮膚や
毛髪に対する優れたツマ和性や保護作用等の特性を・持
ち、しかも長期間の保存安定性に髪れたペプチドを提供
するにある。−11!Jの目的は、斯るペプチドを工業
的容易巨っ安価に製造する方法を提供するにある。
(問題点を解決するための手段)
上述の目的は、キレート化剤をペプチドに対し0.10
〜10重量%含有する平均重合度が2〜600のペプチ
ド粉末またはその水溶液、並びに絹フィブロイン又はコ
ラーゲンを水系媒体にi′8解して得られた蛋白質水溶
液を加水分解し、又は加水分解することなく、次いで該
水溶液にキレート化剤をペプチドに対して0.10 =
10 重&t%添加し、T)H4,5〜7.5に調製
した後、ろ過孔径1μm以下の精密濾過処理を実施する
、そして必要により乾燥することを特徴とする平均重合
度が2〜600のペプチド水溶液またはその粉末の製造
法によって達成される。
〜10重量%含有する平均重合度が2〜600のペプチ
ド粉末またはその水溶液、並びに絹フィブロイン又はコ
ラーゲンを水系媒体にi′8解して得られた蛋白質水溶
液を加水分解し、又は加水分解することなく、次いで該
水溶液にキレート化剤をペプチドに対して0.10 =
10 重&t%添加し、T)H4,5〜7.5に調製
した後、ろ過孔径1μm以下の精密濾過処理を実施する
、そして必要により乾燥することを特徴とする平均重合
度が2〜600のペプチド水溶液またはその粉末の製造
法によって達成される。
本発明のキレート化剤の添加効果は、特に61フイブロ
インペプチドの場合顕著である。
インペプチドの場合顕著である。
本発明のペプチドの平均、4【合皮は2〜600、好ま
しくは4〜100、特に好ましくは6〜40である。平
均重合度が2未讃ではアミノ酸含有量が増加して、例え
ば化粧料用原料として使用する場合、ペプチド特有の皮
膚に対する床温、調湿作用が損なわれ、更に水性化粧料
基剤として使用する場合に皮膜形成性に欠ける。一方、
平均重合度が600(平均分子量≠50,000)を上
側ると、水系での溶解安定性が低下し、午レート化剤を
混合しても濁りやゲル状物が発生する。
しくは4〜100、特に好ましくは6〜40である。平
均重合度が2未讃ではアミノ酸含有量が増加して、例え
ば化粧料用原料として使用する場合、ペプチド特有の皮
膚に対する床温、調湿作用が損なわれ、更に水性化粧料
基剤として使用する場合に皮膜形成性に欠ける。一方、
平均重合度が600(平均分子量≠50,000)を上
側ると、水系での溶解安定性が低下し、午レート化剤を
混合しても濁りやゲル状物が発生する。
本発明にjΔ用する蛋白質水溶液としては各拙蛋白質を
原料とすることができるが、特に絹フィブロイン、コラ
ーゲンを原料として、公知である通常の方法で調製した
水溶液が好ましい。
原料とすることができるが、特に絹フィブロイン、コラ
ーゲンを原料として、公知である通常の方法で調製した
水溶液が好ましい。
本発明に使用する絹フイブロイン原料は、まゆ、生糸、
まゆ屑、生糸屑、ビス、揚り綿、絹布屑、ブーレット等
を常法に従い必要に応じて活性剤の存在下、温水中で又
は酵素の存在下温水中でセリシンを除去し乾燥したもの
を使用する。
まゆ屑、生糸屑、ビス、揚り綿、絹布屑、ブーレット等
を常法に従い必要に応じて活性剤の存在下、温水中で又
は酵素の存在下温水中でセリシンを除去し乾燥したもの
を使用する。
本発明に適用する絹フィブロインの溶媒は、銅−エチレ
ンジアミン水溶液、水酸化銅−アンモニア水溶液(シニ
ワイサー試桑)、水へ曾化銅−アルカリーグリセリン水
溶液(ローエ試薬)、臭化リチウム水浴液、カルシウム
或いはマダイ・シウム又はLlfj鉛の塩酸塩或いは硝
酸塩又はチオシアン酸塩の水溶液、チオシアン酸ナトリ
ウム水溶液が挙げられるが、コスト及び使用−1〕の点
からカルシウム又はマグネシウムの塩酸塩又は硝酸塩が
好ましい。
ンジアミン水溶液、水酸化銅−アンモニア水溶液(シニ
ワイサー試桑)、水へ曾化銅−アルカリーグリセリン水
溶液(ローエ試薬)、臭化リチウム水浴液、カルシウム
或いはマダイ・シウム又はLlfj鉛の塩酸塩或いは硝
酸塩又はチオシアン酸塩の水溶液、チオシアン酸ナトリ
ウム水溶液が挙げられるが、コスト及び使用−1〕の点
からカルシウム又はマグネシウムの塩酸塩又は硝酸塩が
好ましい。
又、これ等の水溶液の濃度は使用する溶媒の線類、温度
等により異なるが、金h4塩昂の計度はノI(4常10
〜8o r@ 31重%、好ましくは20〜40汀?J
%である。80重(fo4以上でも溶解するが、生成す
、るペプチドに実質的な差異が無く経済性の点で問題で
ある。
等により異なるが、金h4塩昂の計度はノI(4常10
〜8o r@ 31重%、好ましくは20〜40汀?J
%である。80重(fo4以上でも溶解するが、生成す
、るペプチドに実質的な差異が無く経済性の点で問題で
ある。
精練後の絹原料を+3if記水溶液よりなる溶媒に添加
し、温度60〜95℃、好ましくは70〜85°Cでニ
ーダの如き装置内で均一に溶解するが、液比は通常2〜
50.好ましくは3〜30である。
し、温度60〜95℃、好ましくは70〜85°Cでニ
ーダの如き装置内で均一に溶解するが、液比は通常2〜
50.好ましくは3〜30である。
得られた絹フイブロイン溶解液から高純度の刊フィブロ
インペプチドを得るためには、引続いて透析する。透析
はセロファン膜に代表されろ透析膜や中空繊維を1νろ
出した透析器を用い、前記の塩類等をほぼ完全に除去す
る。この場合目的とする絹フイブロインペプチドの分子
針分布を極力狭くするためと、a構造のペプチドの割合
を50重毎%以上に調整するためには、透析量と透析膜
面積を特定する必要がある。即ち下記式を満足する多層
膜構造物又は中空糸集束榊造物を使用して脱塩を行なう
。
インペプチドを得るためには、引続いて透析する。透析
はセロファン膜に代表されろ透析膜や中空繊維を1νろ
出した透析器を用い、前記の塩類等をほぼ完全に除去す
る。この場合目的とする絹フイブロインペプチドの分子
針分布を極力狭くするためと、a構造のペプチドの割合
を50重毎%以上に調整するためには、透析量と透析膜
面積を特定する必要がある。即ち下記式を満足する多層
膜構造物又は中空糸集束榊造物を使用して脱塩を行なう
。
(ここで、プライミング容量とは透析チューブ又は膜間
の内容積を示す) 上記数値が10未満の場合、膜分離が迅速に行なわれな
いため透析器中での滞留時間が長くなり、得られるフィ
ブロイン水溶液は、既に腐敗が始まっている事が多い。
の内容積を示す) 上記数値が10未満の場合、膜分離が迅速に行なわれな
いため透析器中での滞留時間が長くなり、得られるフィ
ブロイン水溶液は、既に腐敗が始まっている事が多い。
その場合、フィブロイン蛋白は回数による変性で水不溶
(β(4造)化し、これを再び冷水易溶性化することは
msである。
(β(4造)化し、これを再び冷水易溶性化することは
msである。
特に本発明を円滑に且つ経済的に行うために、上記数値
は80以上が好ましく、50以上が特に好ましい。該条
件を満足させる為には、例えば中空糸集束亭1馨造物の
場合中空糸の直径を4 mm以下にする必要がある。
は80以上が好ましく、50以上が特に好ましい。該条
件を満足させる為には、例えば中空糸集束亭1馨造物の
場合中空糸の直径を4 mm以下にする必要がある。
本発明方法に於いて得られた透析液は、残留塩濃度が0
.008〜0.06重量%と極めて少なく、特に中空糸
の径が0.2 mm N度になると、となり透析器中で
の沸留時間数10分で、これを達成することができ、こ
れより極めて高品質の絹フイブロインペプチドを得るこ
とができる。
.008〜0.06重量%と極めて少なく、特に中空糸
の径が0.2 mm N度になると、となり透析器中で
の沸留時間数10分で、これを達成することができ、こ
れより極めて高品質の絹フイブロインペプチドを得るこ
とができる。
本発明に適用するコラーゲン、特にアテロコラーゲンは
、例えば若い牛の皮を細砕神、水に分散させ、T)H=
1.5〜4.0にIM整後、これに耐酸性プロテアー
ゼ(例ペプシン)を加え、2〜8日間攪拌を続け、不溶
物をか過で除き蛋白質水溶液とする。
、例えば若い牛の皮を細砕神、水に分散させ、T)H=
1.5〜4.0にIM整後、これに耐酸性プロテアー
ゼ(例ペプシン)を加え、2〜8日間攪拌を続け、不溶
物をか過で除き蛋白質水溶液とする。
本発明に於て蛋白質濃度は本質的なものではないが、通
常0.5〜40重量%、好ましくは1〜80イ(量%、
更に好ましくは2〜20重敏%で、必要に応じて濃縮さ
れる。0.5重畦%以下では後工程で#縮の必要があり
不経済であるし、40重量%以上では粘性が高くなって
反応や操作に無理がある。
常0.5〜40重量%、好ましくは1〜80イ(量%、
更に好ましくは2〜20重敏%で、必要に応じて濃縮さ
れる。0.5重畦%以下では後工程で#縮の必要があり
不経済であるし、40重量%以上では粘性が高くなって
反応や操作に無理がある。
ペプチドの平均分子1Aが数百〜数千のものを得ようと
する場合、これを酵素或いは酸又はアルカリを用いて加
水分解を行なう。
する場合、これを酵素或いは酸又はアルカリを用いて加
水分解を行なう。
本発明に適用される加水分解酵素としては通常の蛋白質
分解酵素、例えば放線菌から1!ネられるプロナーゼ、
パパイヤから得られるプロラーゼ等の数棟のプロテアー
ゼ混合物と考えられる酵素群、アスペルギルス・ニゲル
等のカビから得られろプロテアーゼやバチルス・ズブチ
リス等の細菌から得られるプロテアーゼ例えばズブチリ
シンB、P。
分解酵素、例えば放線菌から1!ネられるプロナーゼ、
パパイヤから得られるプロラーゼ等の数棟のプロテアー
ゼ混合物と考えられる酵素群、アスペルギルス・ニゲル
等のカビから得られろプロテアーゼやバチルス・ズブチ
リス等の細菌から得られるプロテアーゼ例えばズブチリ
シンB、P。
N或いはトリプシン、キモトリプシン、パパイン、ブロ
メリン等が挙げられ、これらを単独或いは2種以上混合
して使用することができる。使用する酵素の蹟は酵素の
種類、純度、反応条件、或いは目的とする絹フィブロイ
ンの平均重合度等により異なるが、通常絹フィブロイン
に対して0.01〜10.0電制%、好ましくは0.0
2〜6.0重1ij%である。この場合の側木分解の条
件は使用する酵素の種類、濃度等により異なるが、通常
pIiは5〜9、好ましくは6〜8.5、温度は20〜
70℃、好!シ<は80〜45°Cで0.1〜72時間
、好ましくは0.5〜12時間行う。
メリン等が挙げられ、これらを単独或いは2種以上混合
して使用することができる。使用する酵素の蹟は酵素の
種類、純度、反応条件、或いは目的とする絹フィブロイ
ンの平均重合度等により異なるが、通常絹フィブロイン
に対して0.01〜10.0電制%、好ましくは0.0
2〜6.0重1ij%である。この場合の側木分解の条
件は使用する酵素の種類、濃度等により異なるが、通常
pIiは5〜9、好ましくは6〜8.5、温度は20〜
70℃、好!シ<は80〜45°Cで0.1〜72時間
、好ましくは0.5〜12時間行う。
加水分解に用いる酸としては塩酸、硫酸等の無機酸又は
くえん酸、酒石酸、マロン酸、こはく酸及びマレイン酸
等の41“機酸が挙げられる。またアルカリとしては水
酸化ナトリウム、水酸化力リークム、水酸化リチウム、
アンモニア水等の無機アルカリ、メチルアミン等の有機
アルカリが便用し得るが、反応性、経済性、安定性のf
fiから、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムが好まし
い。
くえん酸、酒石酸、マロン酸、こはく酸及びマレイン酸
等の41“機酸が挙げられる。またアルカリとしては水
酸化ナトリウム、水酸化力リークム、水酸化リチウム、
アンモニア水等の無機アルカリ、メチルアミン等の有機
アルカリが便用し得るが、反応性、経済性、安定性のf
fiから、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムが好まし
い。
酸又はアルカIJ 4こよる加水分解の条件は使用する
酸又はアルカリのttfl類、目的とするペプチドの平
均重合ff及び−V【今度分布等により異なるが、通f
l’c)、Q s 〜8.o N、 qF* L<ハ0
.8 N以下(り濃度で、温度は20〜110℃、好ま
しくは80〜100°Cで、0.5〜48時間、好まし
くは1〜24時間反宅を行い、その後アルカリ又は酸を
加えて中相する。
酸又はアルカリのttfl類、目的とするペプチドの平
均重合ff及び−V【今度分布等により異なるが、通f
l’c)、Q s 〜8.o N、 qF* L<ハ0
.8 N以下(り濃度で、温度は20〜110℃、好ま
しくは80〜100°Cで、0.5〜48時間、好まし
くは1〜24時間反宅を行い、その後アルカリ又は酸を
加えて中相する。
本発明に於いて、ペプチドに長IU1間の保存安定性を
伺与するため、キレート化剤をペプチドに対して0.1
0〜10重購%、好ましくは0.5〜511rに%添加
する。冷加する時期は加水分解終了後又は中和した後が
好ましい。さらにキレート化剤の添加後、50°C以上
に数時間以上加熱した方がより好ましい結果が得られる
。0.10重量%未満では、室温で数ケ月保存したペプ
チド水溶液や再溶解した粉末ペプチドの水溶液に色相の
褐変や濁りが認められろ。一方、10%を超える添加は
保存安定性に有意差が無く経済的でないし、又ペプチド
の純度がそれだけ低くなり好ましくない。
伺与するため、キレート化剤をペプチドに対して0.1
0〜10重購%、好ましくは0.5〜511rに%添加
する。冷加する時期は加水分解終了後又は中和した後が
好ましい。さらにキレート化剤の添加後、50°C以上
に数時間以上加熱した方がより好ましい結果が得られる
。0.10重量%未満では、室温で数ケ月保存したペプ
チド水溶液や再溶解した粉末ペプチドの水溶液に色相の
褐変や濁りが認められろ。一方、10%を超える添加は
保存安定性に有意差が無く経済的でないし、又ペプチド
の純度がそれだけ低くなり好ましくない。
本発明のキレート化剤は、通常の午レート化剤がペプチ
ドの用途で問題がなければすべて適用できるが、経済性
の点でEDTA又はトリボ17 r4シソーダ或いはへ
キサメタIffソーダか望ましい。
ドの用途で問題がなければすべて適用できるが、経済性
の点でEDTA又はトリボ17 r4シソーダ或いはへ
キサメタIffソーダか望ましい。
EDTAはpHとの関保で2Na塩又は8 Na塩がよ
り望ましい。
り望ましい。
本発明方法に於いては、得られたペプチド水溶液を、引
き続き凍結乾燥法やスプレードライ法により乾燥するこ
ともできる。この場合、乾燥は通常の凍結乾燥機やスプ
レードライ材により実施し得るが、水溶液中のペプチド
濃度が40%を上側る場合、得られた乾燥物の水に対す
る溶解度、浴解速度が極めて低くなり、例えば水性化S
EN用基剤として実用的でない。
き続き凍結乾燥法やスプレードライ法により乾燥するこ
ともできる。この場合、乾燥は通常の凍結乾燥機やスプ
レードライ材により実施し得るが、水溶液中のペプチド
濃度が40%を上側る場合、得られた乾燥物の水に対す
る溶解度、浴解速度が極めて低くなり、例えば水性化S
EN用基剤として実用的でない。
(発明の効果)
以上の如く、本命uniの方法により得られたペプチド
は、その添加されたキレート化剤の効果で、水浴液の場
合、長期間液の着色や濁り或いはゲル状物の発生を抑え
た状態で保存でき、又粉末の場合はペプチドの変性を防
いで、水に対する溶)¥を度及び溶解速度を低下させな
いで保存することができろ。
は、その添加されたキレート化剤の効果で、水浴液の場
合、長期間液の着色や濁り或いはゲル状物の発生を抑え
た状態で保存でき、又粉末の場合はペプチドの変性を防
いで、水に対する溶)¥を度及び溶解速度を低下させな
いで保存することができろ。
さらに本発明で得られたペプチドは、水溶液からの皮膜
形成能が良く、吸湿性、保湿性が良好であり、さらに皮
膚に対する親和性や保4作用等にトψれた特性を持って
おり、化粧料用基剤、医桑品カプセル剤、分析用基剤、
その他に有用である。
形成能が良く、吸湿性、保湿性が良好であり、さらに皮
膚に対する親和性や保4作用等にトψれた特性を持って
おり、化粧料用基剤、医桑品カプセル剤、分析用基剤、
その他に有用である。
(実施例)
以下、冥施例を挙げて本発明を具体的に説明する。なお
、実施例中の測定及び測定結果の算出は次の方法で行な
った。
、実施例中の測定及び測定結果の算出は次の方法で行な
った。
a、ペプチド平均重合度の測定
ペプチドを完全加水分解した場合のアミツヤモル酸を求
め、これを(a)とする。ペプチドの末@基量を測定し
これをtb)とする。平均重合度=(萄/山として求め
る。(a)を得るには(1)絶乾固形分量より灰分量を
差引き、これとペプチド構成アミノ酸の平均分子量より
求める。(2)ケルブール窒素測定より求めた窒素原子
量をアミノ酸モル量とする。(3)水酸化ナトリウム又
は塩酸加水分解後、生成アミノ酸をニンヒドリン比色定
量する等の方法に依る。
め、これを(a)とする。ペプチドの末@基量を測定し
これをtb)とする。平均重合度=(萄/山として求め
る。(a)を得るには(1)絶乾固形分量より灰分量を
差引き、これとペプチド構成アミノ酸の平均分子量より
求める。(2)ケルブール窒素測定より求めた窒素原子
量をアミノ酸モル量とする。(3)水酸化ナトリウム又
は塩酸加水分解後、生成アミノ酸をニンヒドリン比色定
量する等の方法に依る。
各測定法に若干の違いがあるが、一般に良い一致を示す
。(b)はフォルモール測定法により末a C02H基
を測定すれば良い。
。(b)はフォルモール測定法により末a C02H基
を測定すれば良い。
b、光透過度の測定
日立567型二波長分光光度計を用い、420mμでの
光透過度を測定した。i’t+q定試料はペプチド濃度
6%に調整し、セル長は10 rrlmである。
光透過度を測定した。i’t+q定試料はペプチド濃度
6%に調整し、セル長は10 rrlmである。
実施例1
絹フイブロイン原料として絹紡IN屑を用いて、これの
100部をマルセル石けん30部、水aoo。
100部をマルセル石けん30部、水aoo。
部の溶液で95〜98°Cにおいて8時間JM ?−F
M練し、残膠を0.1%以下にまで減少させ、水洗後
80″Cで熱風乾燥した。
M練し、残膠を0.1%以下にまで減少させ、水洗後
80″Cで熱風乾燥した。
塩化カルシウム(CaCJ2−2)I20) 100部
に水100部を混合して88重訃%塩化カルシウム水溶
液200部を調製して110″Cに加熱した。これに#
j 練ずみの絹紡H′140部をニーダを用いて5分間
で々拌しながら投入後、さらに30分間恒押し完全に溶
解させた。
に水100部を混合して88重訃%塩化カルシウム水溶
液200部を調製して110″Cに加熱した。これに#
j 練ずみの絹紡H′140部をニーダを用いて5分間
で々拌しながら投入後、さらに30分間恒押し完全に溶
解させた。
次に、内径200μ、膜厚20μ、長さ500mmの再
生セルロース系中空糸を2000本束ね、これの両端を
中空穴を閉塞することなく集束固定(シール)したホロ
ーファイバー型の透析装置を用いて、前記溶解液を0.
2(17時間の割合で流入させて脱イオン水を用いて透
析し、フィブロイン水浴液を得た。該フィブロイン水溶
液のフィブロイン濃度は18重墳%で、残留塩化カルシ
ウムは0.001重fir l路であった。
生セルロース系中空糸を2000本束ね、これの両端を
中空穴を閉塞することなく集束固定(シール)したホロ
ーファイバー型の透析装置を用いて、前記溶解液を0.
2(17時間の割合で流入させて脱イオン水を用いて透
析し、フィブロイン水浴液を得た。該フィブロイン水溶
液のフィブロイン濃度は18重墳%で、残留塩化カルシ
ウムは0.001重fir l路であった。
得られたフィブロイン水溶液に、ナガセ生化学工業社1
裂ビオブラーゼ・コンクを絹フイブロイン固形分に対し
て0.5 *、債%添卯し20°Cから70°Cに昇温
しながら4時間反応させた。反応を終了させるために1
5分間沸とうし、冷却後、これに壌1表に示した濃度で
El)TA・2 Na塩を添加し0.6μの孔径のメン
プラン濾過後そ封下に室温で保存した。ペプチド平均重
合度の測定の結果、本発明例の平均重合域は12.5で
あった。1ケ月、これの着色度と淘りの程度を分光光度
計及び肉眼で測定した。着色度す420 mμでの光の
透過度で測定した。その結果をEDTA添加直後の透過
度と併せて第1表に示す。
裂ビオブラーゼ・コンクを絹フイブロイン固形分に対し
て0.5 *、債%添卯し20°Cから70°Cに昇温
しながら4時間反応させた。反応を終了させるために1
5分間沸とうし、冷却後、これに壌1表に示した濃度で
El)TA・2 Na塩を添加し0.6μの孔径のメン
プラン濾過後そ封下に室温で保存した。ペプチド平均重
合度の測定の結果、本発明例の平均重合域は12.5で
あった。1ケ月、これの着色度と淘りの程度を分光光度
計及び肉眼で測定した。着色度す420 mμでの光の
透過度で測定した。その結果をEDTA添加直後の透過
度と併せて第1表に示す。
以上のように、午レート化剤の添加量は0.10重量%
で実用的には効果が認められ、0.50重量%以上では
ペプチド水溶液の劣化は殆んど認められない。又、10
重量%以上の添加は効果のνり1に経済的でない。
で実用的には効果が認められ、0.50重量%以上では
ペプチド水溶液の劣化は殆んど認められない。又、10
重量%以上の添加は効果のνり1に経済的でない。
実施例2
実権例1で得た透析液を、第2表に示す鳴酸γ4度で5
時間95°Cに加熱し、攪拌して加水分解した後、5N
−NaOH水溶液で中和した。次いでEDTA −8N
a塩を3%ij量(対ペプチド重量)添加し、06μの
孔径のメンプラン濾過後、密封下室温で保存した。1ケ
月後の着色度、濁りの程度を実施例1に準じて第2表に
示す。
時間95°Cに加熱し、攪拌して加水分解した後、5N
−NaOH水溶液で中和した。次いでEDTA −8N
a塩を3%ij量(対ペプチド重量)添加し、06μの
孔径のメンプラン濾過後、密封下室温で保存した。1ケ
月後の着色度、濁りの程度を実施例1に準じて第2表に
示す。
第 2 表
註) 平均重合度100以上の数字は測定方法の限界で
やや不正確 り表から判るように、420mμでの透過度の変化は本
発明例に於いては軽微であって、キレート化剤の1呆存
安定作用が平均重合度600程廉まで実用的に効果的で
ある。平均重合度660での透過度の劣化はrDりのた
めであって、>hl < it色したためではない。
やや不正確 り表から判るように、420mμでの透過度の変化は本
発明例に於いては軽微であって、キレート化剤の1呆存
安定作用が平均重合度600程廉まで実用的に効果的で
ある。平均重合度660での透過度の劣化はrDりのた
めであって、>hl < it色したためではない。
実施例8
幼生の皮の毛及び肉組織を除去し、i(1砕し、水にて
充分洗浄した。該不溶性コラーゲン100部を水100
0部に懸濁させ、これに0.2部のペプシン(耐酸性蛋
白分解酵素)を混合し、希塩酸にてp)1=2〜Bに用
祭し攪拌を続けた。蒋酵素反応を72時間続けると不溶
性コラーゲンは、テロペブタイドとアテロコラーゲンの
結合が分解され水に溶解した。次いで、溶解液を濾過し
、未溶解物をン戸別したのち、溶解液を希水酸化ナトリ
ウム液でpH=7〜8に1閂整しアテロコラーゲンのみ
を沈澱させた。これを分離し、1000部の水に混合後
、希塩酸にてpH8に調整し痔拌することで5.6重量
%のアテロコラーゲン水溶液を製造した。これを塩1’
ff0.15N、95℃×8時間の条件で加水分解した
後、5N−NaOH水溶液で中和した。次いでこれにE
DTA・2Na塩を添加した後、0.45μの孔径でメ
ンプランが過し、密封保存した。ペプチド平均重合度を
測定したところ、本発明例の平均重合度は18.0であ
った。
充分洗浄した。該不溶性コラーゲン100部を水100
0部に懸濁させ、これに0.2部のペプシン(耐酸性蛋
白分解酵素)を混合し、希塩酸にてp)1=2〜Bに用
祭し攪拌を続けた。蒋酵素反応を72時間続けると不溶
性コラーゲンは、テロペブタイドとアテロコラーゲンの
結合が分解され水に溶解した。次いで、溶解液を濾過し
、未溶解物をン戸別したのち、溶解液を希水酸化ナトリ
ウム液でpH=7〜8に1閂整しアテロコラーゲンのみ
を沈澱させた。これを分離し、1000部の水に混合後
、希塩酸にてpH8に調整し痔拌することで5.6重量
%のアテロコラーゲン水溶液を製造した。これを塩1’
ff0.15N、95℃×8時間の条件で加水分解した
後、5N−NaOH水溶液で中和した。次いでこれにE
DTA・2Na塩を添加した後、0.45μの孔径でメ
ンプランが過し、密封保存した。ペプチド平均重合度を
測定したところ、本発明例の平均重合度は18.0であ
った。
結果を実施例1に準じて第8表に示す。
第 3 表
以上のように、コラーゲンペプチドの場合も、キレート
化剤の添加はシルクペプチドの場合とほとんど同様の効
果が認められ、効果と経済性の総合に・ト価としては0
.50〜5.0重量%の添加が最も好ましい。
化剤の添加はシルクペプチドの場合とほとんど同様の効
果が認められ、効果と経済性の総合に・ト価としては0
.50〜5.0重量%の添加が最も好ましい。
実施例4
実施例8で得たコラーゲンペプチドに
a)トリポリ燐酸ソーダを2.5 重量%(対ペプチド
)添加した。
)添加した。
b)へキサメタ燐酸ソーダを5.0電源%(対ペプチド
)添加した。
)添加した。
C)キレート化剤を添加しない。
以上3撞の水溶液を0.45μ孔径でメンプラン濾過し
、この水溶液を一80°Cに急冷し凍結せしめた。これ
を乾燥初期は0,5torr、終了時点では0.05t
orr稈度の通常の凍結乾燥法で乾燥し、粉末状のコラ
ーゲンペプチドを製造し、密封下室湛で保存した。保存
1ケ月後、これを水に再溶解し5.0%の水溶液とし、
これの着色度を実施例3に準じて測定した。その結果を
第4表に示す。
、この水溶液を一80°Cに急冷し凍結せしめた。これ
を乾燥初期は0,5torr、終了時点では0.05t
orr稈度の通常の凍結乾燥法で乾燥し、粉末状のコラ
ーゲンペプチドを製造し、密封下室湛で保存した。保存
1ケ月後、これを水に再溶解し5.0%の水溶液とし、
これの着色度を実施例3に準じて測定した。その結果を
第4表に示す。
第 4 表
束合リン酸ソーダ系のキレート化MIJのペプチド保存
効果も顕著であり、その効果は粉末状で保存する場合も
有効であることが分る。
効果も顕著であり、その効果は粉末状で保存する場合も
有効であることが分る。
Claims (9)
- (1)キレート化剤をペプチドに対し0.10〜10重
量%含有する平均重合度が2〜600のペプチド粉末ま
たはその水溶液。 - (2)キレート化剤をペプチドに対し0.50〜5重量
%含有する特許請求の範囲第1項記載の粉末またはその
水溶液。 - (3)ペプチドがシルクペプチド又はコラーゲンペプチ
ドである特許請求の範囲第1項記載の粉末または水溶液
。 - (4)キレート化剤がEDTA又はトリポリ燐酸ソーダ
或いはヘキサメタ燐酸ソーダである特許請求の範囲第1
項記載の粉末または水溶液。 - (5)ペプチドの平均重合度が4〜100である特許請
求の範囲第1項記載の粉末または水溶液。 - (6)絹フィブロイン又はコラーゲンを水系媒体に溶解
して得られた蛋白質水溶液を加水分解し、又は加分分解
することなく、次いで該水溶液にキレート化剤をペプチ
ドに対して0.10〜10重量%添加し、PH4.5〜
7.5に調製した後、ろ過孔径1μm以下の精密ろ過処
理を実施する、そして必要により乾燥することを特徴と
する平均重合度が2〜600のペプチド水溶液またはそ
の粉末の製造法。 - (7)蛋白質水溶液が絹原料をカルシウム又はマグネシ
ウムの塩酸塩或いは硝酸塩の水溶液に溶解して得た絹フ
ィブロイン水溶液である特許請求の範囲第6項記載の製
造法。 - (8)蛋白質水溶液が、天然コラーゲンをPH=1.5
〜4.0の水中に於いて、耐酸性プロテアーゼで処理し
て得たコラーゲン水溶液である特許請求の範囲第6項記
載の製造法。 - (9)加水分解を酸又はアルカリ或いは酵素処理で実施
することを特徴とする特許請求の範囲第6項記載の製造
法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP23891586A JPS6392671A (ja) | 1986-10-07 | 1986-10-07 | 保存安定性に優れたペプチド及びその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP23891586A JPS6392671A (ja) | 1986-10-07 | 1986-10-07 | 保存安定性に優れたペプチド及びその製造法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS6392671A true JPS6392671A (ja) | 1988-04-23 |
Family
ID=17037162
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP23891586A Pending JPS6392671A (ja) | 1986-10-07 | 1986-10-07 | 保存安定性に優れたペプチド及びその製造法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS6392671A (ja) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR100354846B1 (ko) * | 2000-10-04 | 2002-10-05 | 동아화학 주식회사 | 고분자화합물 합성용 변성 폴리아미노산 화합물 및 그제조방법 |
US7060260B2 (en) | 2003-02-20 | 2006-06-13 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Water-soluble silk proteins in compositions for skin care, hair care or hair coloring |
JP2007321101A (ja) * | 2006-06-02 | 2007-12-13 | Toho Sangyosha:Kk | 膠を原料とした生成物、土砂加工物及び皮革製品のなめし用水溶液 |
CN114539553A (zh) * | 2022-04-26 | 2022-05-27 | 深圳湾实验室 | 广谱抗氧化丝素蛋白及其制备方法和应用 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS55141492A (en) * | 1979-04-12 | 1980-11-05 | Exxon Research Engineering Co | Stabilized organic compound |
-
1986
- 1986-10-07 JP JP23891586A patent/JPS6392671A/ja active Pending
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS55141492A (en) * | 1979-04-12 | 1980-11-05 | Exxon Research Engineering Co | Stabilized organic compound |
Cited By (5)
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---|---|---|---|---|
KR100354846B1 (ko) * | 2000-10-04 | 2002-10-05 | 동아화학 주식회사 | 고분자화합물 합성용 변성 폴리아미노산 화합물 및 그제조방법 |
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JP2007321101A (ja) * | 2006-06-02 | 2007-12-13 | Toho Sangyosha:Kk | 膠を原料とした生成物、土砂加工物及び皮革製品のなめし用水溶液 |
CN114539553A (zh) * | 2022-04-26 | 2022-05-27 | 深圳湾实验室 | 广谱抗氧化丝素蛋白及其制备方法和应用 |
CN114539553B (zh) * | 2022-04-26 | 2022-09-06 | 深圳湾实验室 | 广谱抗氧化丝素蛋白及其制备方法和应用 |
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