JPS63500282A - １５α―ヒドロキシ―プロスタグランジン中間体の製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 １５−ケト基を有するプロスタサイクリン中間生成物の微生物学的還元 本発明は、双環式のプロスタサイクリン中間生成物をエナンチオ選択的に還元し て相応する１５α−ヒドロキシ化合物ｔａ造する微生物学的方法に関する。

本発明は、特に以下に記載のプロスタサイクリン中間段階１〜６の微生物学的還 元のために適当である。

前記プロスタサイクリン中間生成物の本発明による微生物学的還元は、以下の微 生物Ｍ味を用いて実施する：カンジダ・ソラニ（Ｃａｎｄｉｄａ　５ｏｌａｎｉ 二ＮＣＹＣ４１）、カンジダ・グイリエルモンディ（Ｃａｎｄｉｄａ　ｑｕｉｌ ｌｉｅｒｍ−ｏｎｄｉｉ　：　ＮＲＲＬ　−ｙ　−１１８）及びビチア・ファリ ノサ（ＰｉＣｈｉａ　ｆａｒｉｎｏｓａ　：　ＣＢＳ　１１３５　）。これらの ｍｉのうちでもカンジダ・ソラニＭ株が特に有利であることが立証された。

ヨーロッパ特許第１２７１０号明細書から、以下の技術水通が公知であるニ プロスタグランジン及びプロスタグランジン中間体内の１５−ケト基の、例えば ホウ水素化す）　Ｉ）ラムを用いた化学的還元は、相応する１５α−及び１５β −ヒドロキシ化合物の混合物？介してのみ、かつ引続いての分離のために、収率 損失を伴ってのみ所望の１５α−ヒドロキシゾロスタグランソンを生成するが、 米国特許第３６８７８１１号明細誓により、１１−ヒドロキシ−１５−オキソ− プロスタグランシン中の１５−ケト基をその都度の既存の１１−ヒドロキシ基の 配置に基づき相応するトランス−１５−ヒドロキシ基に転化する一連の微生物が 公知である。西ドイツ国特許出願公開第２３５７８１５号明細簀記載の方法によ れば、技術水準は、例えば１１−ヒドロキシ−１５−オキソ−プロスタグランジ ンを１１α、１５α−及び１１β。

１５β−ジヒドロキシ−ゾロスタブランジンから成る混合物に転化する微生物学 的方法と提供する。１１α。

１５α−ヒドロキシ基のシス配置は、生物学的に活性のプロスタグランジン中の それに相当する。

西ドイツ国特肝出願公開第２４０１７６１号明細簀に記載の方法は、全ての前記 方法と同様に役に立たない。

ヨーロッパ荷粁第１２７１０号明細酋に記載された菌株フレケラ（ＫＩＯθｃｋ θｒａ）、サツカロマイセス（Ｅｌａｃｃｈａｒｏｎｃｙｃｅｓ　）及びハンセ ヌラ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ　）は、プロスタサイクリン中間体中の１５−ケト基 を極く部分的に還元しかつ１５α−ヒドロキシ基を有するプロスタサイクリン中 間体の収率ｌｌ−を著しく悪い。

ところで、前記プロスタサイクリン中間段階は、そのためにカンジダ−又はピチ アー菌味を使用すると、本発明による方法に基づき製造された１５α−ヒドロキ シ化合物からは、１５位に不斎中心を維持すると薬理学的に有効なプロスタサイ クリンを製造することができる。例えば（ＩＳ＃２８，３Ｒ，５Ｒ）−７゜７− エチレンジオキシ−６−ペンゾイルオキシー２−（（ＩＫ）、（４Ｒ８）−４− メチル−６−オキソ−オクト−１−エン−６−インーイル〕−ビシクロ（５，３ ，ＤＪオクタン（１）から出発して多工程式合成において有効物質のイロゾロス ト（工１ｏｐｒｏｓｔ　）　ｆｃ　＠遅できる（ヨーロッパ特許第１１５９１号 明細書に記載）：０、ＣＤ　、Ｃ６Ｈ５０，ＣＯ，Ｃ６Ｈ。

微生物の前記綱の種々異なった種類のうちでも、もちろん本発明における還元に おける作用効果の差が生じる。カンジダ・ソラニ（ＮＣ’ｌＣ４１）　、カンジ ダ・グイリエルモンデイ（ＮＲＲＴ、　−ｙ　−１１８）及びビチア・ファリノ サＣＣＢＳ　１８５　）によって、艮好な結果が得られ、この場会菌床カンシダ ・ソラニ（ＮＣＹＣ４１）を用いた還元が特に良好な収藁を生じた・従って、本 発明は、双環式プロスタグランジン中間体中の１５−ケト基をエナンチオ選択的 ＩＣ還元して、Ｘ６＝酸素原子又はＣＨ２−基を表し、Ａはトランス−ＣＨ−Ｃ Ｆ！−又は−〇−Ｃ−基を表し、Ｒ１は水素原子、テトラヒドロどラニル基、ベ ンゾイル基、ｔ−プチルゾメチルギリル基又はｔ−プチルジフェニルイリル基を 表し、 Ｒ２は基： を表すｊで示される１５α−ヒドロキシ化合物を改造する方法に関し、該方法は 一般式■二 〔式中、Ａ、Ｂ、Ｘ、Ｒ，及びＲ２は前記のものを表す〕で示されるケトンをカ ンシダー又はビチア菌体で処理しかつその際生成した１５−ヒドロキシ−ゾロス タブランジン中間体を単離することを特徴とするＯ ０１〜Ｃ４−アルキル基としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、 ブチル、イソブチル、８−ブチル及びｔ−ブチルが挙げられる。

へＭＮＵ１１．Ｉ百吻〒りれｔ　〃ｈへ／ｙ１ルτ衣わ丁力１ρｉ特に有利に操 作される。最終的に所望される、Ｒ１が表わすものに基づき、保錘基金自体公知 方法で分離することができる。

まず、前記微生物にとって一般的ｖｃ使用される培養条件下で過白な培養基でか つ換気しながら液中培養体を培養する。次いで、該培養体に培養基（適当な齢剤 ｃｊｐＩＣ溶かすか又は好ましくは乳化した形）を加え、かつ最大の基質変換が 達成されるまで、発酵させる。

適当な基質溶剤は、例えばメタノール、工′タノール、グリコールモノメチルエ ーテル、ジメチルホルムアミド又はジメチルスルホキシドである。基質の乳化は 、例えＩＩｉ該ｆ５ＪＲを微小体化した形又は水と昆和可能な溶剤（例えばメタ ノール、エタノール、アセトン、グリコールモノメチルエルチル、ジメチルホル ムアミド、ジメチルスルホキシド）中に浴解して、激しい乱流下に、常用の乳化 助剤を含有する（好ましくはカルシウムを除去した）水中に噴射することにより 実廁することができる。適当な乳化助剤は、非イオン性乳化剤、例、ｔ、ばエチ レンオキシドアダクト又はポリグリコールの脂肪酸エステルである。適当な乳化 剤としては、市販の湿潤剤Ｔａｇｉｎｇ、Ｔａｇａｔ”及び５ｐａｎＯが例とし て挙げられる。

しばしば、基質の乳化は高められた基質装入量、ひいては基質濃度の上昇を可能 にする。しかしもちるム本発明による方法においては、例えば発酵技術分野の専 門家にとって周知であるような、基質装入量を上昇させる方法ｔ−適用すること が可能である。

最適な基質濃度、基質供Ｘ３時間及び発酵時間は、使用される基質の構造及び使 用される微生物の種類ｉｃ低存する。こｎらのパラメータは、微生物学的変換に おいて一般に必要であるように、個々の場合、洸業者（Ｃ流布してしいるような 前災験により確認することができる。・ ＠株：カンゾダ・ソラニ（↑たＹＣ４ｉ）及びピチア・ファリノサ（ＣＨ２１８ ５）は、ＤＳＭに番号ｎ５ｕ３３１５及びＤＳＭ　３３１６で１９８５年５月２ １日付けで寄託した。

次ｉＣ災施例により本発明による方法を説明する。

例　１ オートクレーブ中で１２０℃で６０分間滅菌した、１．５％グルコース−水和物 、０．５％イースト抽出物（Ｄｉｆｃｏ　）、０．５係コーン・スチープ（Ｃｏ ｒｎ　ｅｔｓｅｐ　）液及び０．５係硫酸アンモニウムから成り、Ｐｌ（を６． ６に調整した培養基？ｉ　５０　Ｃ１ｍｔを入れた２１のエーレンマイヤーフラ スコに、菌株のカンシダ・ソラニ（ＮＣ’ｌ’Ｃ４１）の斜面寒天培地１ｃ接種 しかつ回転振盪機で６０”Ｃで２８半振盪する。

この培養基２５０ｍ１を２０７の前発酵器に接種し、該前発酵器ＶＣ接種培養基 と同じ組成の、１２１°Ｃ及び１．１バールの過圧で３０分間滅菌した培養基を 装入する。抑泡剤としてのシリコーンＢＫを系別して、２５℃及び０．７パール の過圧で換気（１５１７ｍｉｎ）及び攪拌（２２０ｒｐｍ　）下に３６時間培養 する。

次いで、この前発酵培養体０．９１を無耐条件下で取出し、それを創発酵培養体 と同じ組成の滅菌した１０１の培養溶液を入れた２０１の主発酵器に接種する。

前発酵器条件下で６時間の成長期の後で、ジメチルホルムアミド１００ｍ１中Ｖ Ｃ浴かした（１８．２Ｂ、３Ｒ＃５Ｒ）−７，７−ニチレンゾオキシー３−ベン ゾイルオキシ−２−４（１ｘ）、（４Ｒｓ）−４−メチル−３−オキシーオクト −１−エン−６−インーイル〕−ビシクロ［３，３，０３オクタン４Ｉの無菌ｍ ？ＩＩを加えかつ更に攪拌しかつ侠気する。

９０時間の接触時間後に、反応は終了する。培養液をメチルイソブチルケトンで ６回抽出し、抽出物を合しかつ真空中で蒸発乾固する。油状残留物をメタノール 中に回収し、シリコーン油ｔ−濾別しかつ再び蒸発乾固する。後に残った油状粗 製生成物を塩化メチレン中に溶かしかつ更に浄化するためにシリカゲルカラム上 でヘキサン５Ｉ！／ヘキサン４１＋アセトン１１の溶剤勾配を用いてクロマトグ ラフィー処理する。この際に、無色の油状物の形の純粋な（Ｉｓ、２Ｂ、５Ｒ＃ ５Ｒ）−７，７−エチレンジオキシ−３−ベンゾイルオキシ−２−（（Ｉ　ＪＩ Ｃ）、（３８，４Ｐ、Ｅ＋）−３−ヒドロキシ−４−メチル−オクト−１−エン −６−インーイル〕−ピシクロ（３，３，ＯＪオクタン２．７！Ｍが得られる。

例　２ 例１に記載の条件下で、所望のケト還元のために菌株のカンジダ・グイリエルモ ンジイ（ＮＲＲＬ−ｙ−１１８）を使用する。

例　６ 例１に記載の条件下で、所望のケト還元のためｉＣ菌抹のビチア・７アリノ＋ｊ （ｃｎｓ１８５）ｋ２用する。

・ソラニ（ＮＣＹＣ４１）を用いて相応する１５α−ヒドロキシ化合物に還元す る。

・ソラニ（ＮＣＹＣ４１）　’ｒ用いて相応する１５α−ヒドロキシ化合物に還 元する。

国際調査報告 ＡＮＮＥＸ　Ｔｏ　ＴＩ（Ｅ　工ＮτＥＲＮＡＴ工０ＮＡＬ　５ＥＡＲＣＨＲＥ ＰＯＲＴ　ＯＮ

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １．一般式： ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）〔式中、 Ｘは酸素原子又はＣＨ２−基を表し、 Ａはトランス−ＣＨ＝ＣＨ−又は−Ｃ＝Ｃ−基を表し、Ｂは酸素原子、基：▲数 式、化学式、表等があります▼又は▲数式、化学式、表等があります▼又は▲数 式、化学式、表等があります▼（該式中、Ｒ３はＣ１〜Ｃ４−アルキル基を表す ）を表し、 Ｒ１は水素原子、テトラヒドロピラニル基、ベンゾイル基、ｔ−ブチルジメチル シリル基又はｔ−ブチル−ジフェニルシリル基を表しかつ Ｒ２は基： ▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼又は▲ 数式、化学式、表等があります▼を表す〕で示される１５α−ヒドロキシ−プロ スタグランジン中間体を製造する方法において、一般式ＩＩ：▲数式、化学式、 表等があります▼（ＩＩ）〔式中、Ａ、Ｂ、Ｘ、Ｒ１及びＲ２は前記のものを表 す〕で示されるケトンをカンジダ−又はピチア菌株で処理しかつその際生成する １５−ヒドロキシ−プロスタグランジン中間を処理することを特徴とする、１５ α−ヒドロキシ−プロスタグランジン中間体の製法。