JPS634541B2

JPS634541B2 -

Info

Publication number: JPS634541B2
Application number: JP55030702A
Authority: JP
Inventors: Mitsuko Asai; Susumu Shinagawa; Satoru Imada
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Current assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1980-03-10
Filing date: 1980-03-10
Publication date: 1988-01-29
Also published as: JPS56127382A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は抗菌剤として有用な新規β―ラクタム
化合物およびその製造法に関する。さらに詳しく
は、本発明の目的物は式（）で示される化合物またはその塩であり、式（）で示される化合物またはその塩を環元反応に付す
ことによつて製造することができる。上記還元反応としては、たとえば接触還元反応
が挙げられる。この接触還元反応は通常の方法が
採用でき、触媒としては、たとえば白金線、白金
海綿、白金黒、酸化白金、コロイド白金などの白
金触媒、パラジウム海綿、パラジウム黒、酸化パ
ラジウム、パラジウム硫酸バリウム、パラジウム
炭酸バリウム、パラジウム炭素、パラジウムシリ
カゲル、コロイドパラジウムなどのパラジウム触
媒、還元ニツケル、酸化ニツケル、ラネーニツケ
ル、漆原ニツケルなどのニツケル触媒が挙げられ
る。また、使用されうる溶媒としては、原料化合
物（）を溶解する性質の溶媒、たとえば水また
は水とジオキサン、テトラハイドロフラン、ジメ
チルホルムアミド、メタノール、エタノール、プ
ロパノールのような極性有機溶媒との混合液など
が挙げられる。この反応は０〜50℃，１〜２気圧
の水素下で行われるのが好ましい。反応終了後、
目的化合物（）は反応液から、たとえばろ過に
より触媒を除去したあとXAD―２樹脂（ロー
ム・アンド・ハース社、米国）のようなポリスチ
レン系吸着性樹脂に吸着させ水又は含水アルコー
ルを溶出溶媒とするカラムクロマトグラフイーに
付することにより容易に未反応の原料物質あるい
は反応副生成物から分離できる。典型的には
XAD―２樹脂から溶出された留分の検出は
254nmUV検出器およびマイクロボンダパツク
C₁₈（ウオーターズ社製）を用いる高速液体クロマ
トグラフイーの系に本留分の一部の試料を注入す
ることによつて実施される。化合物（）および（）の塩としては、たと
えばナトリウム、カリウム、リチウムなどのアル
カリ金属塩、マグネシウム、カルシウム、バリウ
ムなどのアルカリ土類金属塩、トリメチルアミ
ン、トリエチルアミン、ピリジンなどの有機アミ
ン塩があげられる。本発明の原料化合物（）は、たとえばストレ
プトミセス・エスピーＣ―19393（FERM―Ｐ
―No.4774，IFO 13886，ATCC 31486）を微生物
が利用し得る栄養物を含有する培地で培養するこ
とにより生産され、抗生物質Ｃ―19393H₂と称さ
れるものである（特願昭54―81141）。実施例で得られた化合物の抗菌スペクトルは第
１表に示すとおりである。

【表】ム
(Salmonella typhimurium）

【表】注）培地：肉汁寒天
本発明によつて得られる化合物（）は上記の
抗菌スペクトルから明らかなように、グラム陽性
菌およびグラム陰性菌に対して抗菌力を示す。し
たがつて、化合物（）は哺乳動物（例、マウ
ス、ラツト、イヌ、人）および家禽（例、ニワト
リ、アヒル）の細菌感染症の治療に用いることが
できる。化合物（）をたとえば大腸菌感染症の治療薬
として用いるには、たとえば化合物（）を生理
的食塩水に溶解して注射剤として非経口的に皮下
または筋肉内に0.1〜200mg／Kg／日、好ましくは
１〜50mg／Kg／日投与する。また経口剤として、
化合物（）を乳糖と混合してカプセル剤とし、
化合物（）として１〜500mg／Kg／日好ましく
は５〜200mg／Kg／日投与する。また、本発明によつて得られる化合物（）
は、殺菌剤として用いることができる。たとえば
化合物（）を0.01〜1.0W／Ｖ％の濃度で蒸留
水に溶解した液剤、またはワセリン、ラノリンを
基剤とし、１ｇあたり化合物（）を0.5〜50mg、
好ましくは２〜20mg含有する軟膏剤として、上記
の動物の手、足、眼、耳などの殺菌，消毒に用い
ることができる。化合物（）は、ベータ・ラクタマーゼ阻害作
用を示し、ベータ・ラクタマーゼ産生能に起因す
るペニシリン系またはセフアロスポリン系薬剤耐
性菌に対するアンピシリンやセフオチアムに対す
る感受性を著しく増強する。したがつて化合物
（）をペニシリン系またはセフアロスポリン系
薬剤と組合わせることにより、哺乳動物（例、マ
ウス、ラツト、イヌ、人）および家禽（例、ニワ
トリ、アヒル）の細菌、とくにベータ・ラクタム
抗生物質耐性菌による感染症の治療に用いること
ができる。化合物（）を他のベータ・ラクタム系薬剤と
組合わせて、たとえばベータ・ラクタム抗生物質
耐性の大腸菌による感染症の治療に用いるには、
たとえば同量の化合物（）およびアンピシリン
を生理的食塩水に溶解して注射剤として非経口的
に皮下または筋肉内に0.1〜20mg／Kg／日，好ま
しくは0.5〜５mg／Kg／日投与する。また経口剤
として、化合物（）とセフアレキシンを同量含
むカプセル剤として１〜200mg／Kg／日、好まし
くは５〜100mg／Kg／日投与する。殺菌剤としては、たとえば化合物（）0.1〜
10W／Ｖ％濃度およびベンジルペニシリン0.1〜
1.0W／Ｖ％濃度を含む水溶液を液剤として、ま
たはワセリン、ラノリンを基剤とし、１ｇあたり
化合物（）を５〜20mgおよびベンジルペニシリ
ンを５〜20mg含有する軟膏剤として上記の動物の
手、足、眼、耳などの殺菌、消毒に用いることが
できる。化合物（）はまた新しい医薬品の合成中間体
としても極めて有望な化合物である。本発明の化
合物の水溶液は中性領域のPHで安定である。次に参考例および実施例をもつてさらに詳細に
本発明の内容を説明するが、これによつて本発明
が限定されるものではない。参考例においてパー
セントは、特にことわりのないかぎり重量／容量
％を示す。参考例ストレプトミセス・エスピーＣ―19393
（FERM―Ｐ No.4774，IFO 13886，ATCC
31486）を１容三角フラスコ内に分注した200ml
のＴ培地※上で生育させ、胞子を着生させる。つ
いで胞子を滅菌水に生菌数が1.2×10⁸／mlになる
ように懸濁する。胞子懸濁液を減菌水で10倍希釈
し、その１mlを200ml容三角フラスコ内のシード
培地40mlに接種し、28℃で２日間回転式振盪培養
機上で培養し、その培養液を２容坂口振盪フラ
スコ内のシード培地500mlに接種し、28℃で２日
間往復振盪培養機上で培養し培養液を50容ステ
ンレス・スチール製醗酵槽内のアクトコール15ml
を含むシード培地30に移植し、28℃で通気量30
／分、撹拌280回転／分で３日間培養した。つ
いで培養液を２m³容醗酵槽内の主培地1.2m³に移
植し、30℃で、通気量840／分、撹拌180回転／
分で４日間培養した。なおシード培地は１あた
りブドウ糖20ｇ、可溶性デンプン３ ※ ２％オートミール、２％トマトペースト、
0.2％ボブリル（英国ボブリル社製造）、および
２％寒天よりなるPH7.0の培地０ｇ、生大豆粉10ｇ、コーン・スチープ・リカー
ト10ｇ、ポリペプトン（大五栄養化学社製造）５
ｇ、食塩３ｇ、沈降性炭酸カルシウム５ｇを含
み、そのPHは滅菌前7.0に調節した。また主培地
は１あたりブドウ糖30ｇ、可溶性デンプン30
ｇ、脱脂大豆粉15ｇ、棉実粉15ｇ、リン酸２水素
カリウム0.25ｇ、リン酸１水素カリウム0.6ｇ、
塩化コバルト0.002ｇ、アクトコール0.5ｇを含
み、そのPHは滅菌前7.0に調節した。培地はすべ
て120℃で20分間蒸気滅菌した。上記のようにして得られた培養液にハイフロス
ーパーセルを加え、過して液1230を得た。
液をPH６ないし７に調整後、活性炭100を充
填したカラムを通過させた。水300で洗滌後抗
生物質を７％イソブタノール水（700）で溶出
した。溶出液をダウエツクス１×２（C1^-型、12
）のカラム中を通過させ、水６で洗浄後、５
％食塩水180で溶出した。溶出液を活性炭25
を充填したカラムを通過させた。水75で洗浄
後、７％イソブタノール水175で抗生物質を溶
出した。水75で洗浄後、７％イソ―ブタノール
水175で抗生物質を溶出した。溶出液を減圧下
に２ないし３まで濃縮後、これにメタノール15
を加え、生じた沈殿物を去した。液を２
になるまで濃縮後、濃縮液をHP―20（50メツシ
ユ以下）５を充填したカラム中を通過させ、水
５および10％メタノール水10で溶出分画し
た。有効区分を集めて濃縮し、濃縮液をDEAE―
セフアデツクスA25（C1^-型）３を充填したカラ
ムを通過させ、0.02M食塩水９で洗滌後、
0.05M食塩水12で抗性物質を溶出分画した。有
効区分をあらかじめ５％食塩水（４）で処理し
たHP―20（50メツシユ以下）２を充填したカ
ラムを通過させ、５％食塩水（10）で洗滌後メ
タノール：５％食塩水（５：95）10およびメタ
ノール：５％食塩水（１：９）10で溶出分画し
た。有効区分を活性炭500mlを充填したカラムを
通過させ、水1.5で洗つた後、７％イソブタノ
ール水2.5で溶出した。溶出液を濃縮後、濃縮
液をHP―20（50―100メツシユ）１を充填した
カラムを通過させ、水で溶出、分画した。抗菌性
区分を集めて濃縮し、濃縮液をあらかじめ0.02M
食塩水400mlで処理したQAE―セフアデツクス
A25（C1^-型）200mlを充填したカラムを通過させ、
0.02M，0.03Mおよび0.04M―食塩水（各１）
で溶出分画した。有効区分を活性炭200mlを充填
したカラムを通過させ、水0.6で洗浄後、７％
イソ―ブタノール水１で溶出した。溶出液を濃
縮し、濃縮液にプロパノールを加えて90％プロパ
ノール水溶液とし、これをあらかじめ90％プロパ
ノール水で処理したアビセルのカラムクロマトグ
ラフイーに付し、90％プロパノール水で溶出分画
した。有効区分を濃縮し、濃縮液をXAD―
（100―200メツシユ）350mlのカラムクロマトグラ
フイーに付し、水で溶出分画する。有効区分を濃
縮し、濃縮液を担体としてRP―18（メルク社製）
を用いた製造的高速液体クロマトグラフイーに付
し、10％メタノール／0.02Mリン酸緩衝液で溶出
分画した。活性区分をHP―20（100―200メツシ
ユ）40mlを充填したカラムを通過させ、水で溶
出、分画した。抗菌性の認められた分画をそれぞ
れ先に述べた液体クロマトグラフイーの分析に付
し、単一ピークを示す部分を集めて、濃縮、凍結
乾燥すると、抗生物質Ｃ―19393H₂ナトリウム塩
の白色粉末12mgが得られた。得られた粉末の比旋
光度は〔α〕²⁶ _D−134゜（Ｃ＝0.156、水）であつた。実施例抗性物質Ｃ―19393H₂ナトリウム塩の粗粉末
（30％純度、８mg）を10％メタノール水（10ml）
にとかし、この溶液を予め30分間水素を通じてお
いた10％メタノール水（10ml）と10％パラジウム
―炭素（20mg）との混合物に加えた。次いでその
混合物に室温で３時間１気圧で水素を通じて還元
した後、触媒をろ去し、ろ液を真空で濃縮し容積
を２mlとした。この溶液をXAD―２（100〜200メ
ツシユ）を充填したカラム（10ml）に流し、目的
化合物（）を吸着させつづいて水（50ml）で洗
つた後、20％メタノール―水で溶出し、目的化合
物（）を含有する画分をあつめた。有効画分の
メタノールを留去後凍結乾燥して1.0mgの〔5R，
6R〕―３―〔（Ｅ）―２―アセトアミドエテニル
チオ〕―６―〔１―（ヒドロキシ―１―メチルエ
チル〕―７―オキソ―１―アザビシクロ〔３，
２，０〕ヘプト―２―エン―２―カルボン酸ジナ
トリウムの粉末を得た。 UV：λmax（H₂O）229および310nm IR：νmax（KBr）1760，1620cm^-1 薄層クロマトグラフイー〔セルロースｆ（東京
化成社製造）〕：R_f＝0.87 （溶媒系：プロパノール：水＝４：１）高速液体クロマトグラフイー（ウオータース社
製，米国））：R_t＝8.2分〔マイクロボンダパツク
C₁₈／14％メタノール−0.02M―リン酸緩衝液
（PH6.3），２ml／min／cm（2000psi）〕、但し同一
条件で原料化合物のR_tは4.3分であつた。 NMR；δ（100MHz，D₂O，TMS）：1.33（3H，
Ｓ，C₈―ＣH₃ ）、1.44（3H，Ｓ，C₈−ＣH₃ ）、
2.10（3H，ｓ，COCH₃ ）、3.03（1H，dd，Ｊ＝10，
19，C₄−Ｈ）、3.85（1H，dd，Ｊ＝10.5.19，C₄−
Ｈ）、3.72（1H，ｄ，Ｊ＝６，C₆−Ｈ），4.28（1H，
ｍ，C₅−Ｈ），6.10（1H，ｄ，Ｊ＝14，Ｎ―ＣＨ
＝）7.20（1H，ｄ，Ｓ―ＣＨ＝）

Claims

【特許請求の範囲】１式で示される化合物およびその塩。 (2) 式で示される化合物またはその塩を還元反応に付す
ことを特徴とする式で示される化合物またはその塩の製造法。