JPS634145B2 - - Google Patents
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Description
本発明は溶血性溶液および血液を溶血し、そし
て溶血された血液中のグルコースの濃度を安定化
する方法に関する。 僅かの研究しか行なわれていないことから、グ
ルコースの濃度の測定は血漿または血清中よりも
完全血液中の方が選ばれる。完全血液を使用する
ことによる別の利点は測定に非常に少量（たとえ
ば20μ）の血液ですでに十分であることにあ
る。しかしながら、採取した血液試料中では赤血
球に含まれる酵素が存在するグルコースの解糖分
解を行なつてしまう。この理由で、グルコースの
測定を血液の採取後に直ちに行なわなければなら
ないか、または適当な方法で解糖を抑制しなけれ
ばならない。この抑制は試料を溶血させず、また
は溶血させた後に等張溶液中で行なうことがで
き、これはたとえば滲透的シヨツクによりまたは
ジギトニンを用いて行なうことができる。 多くの解糖抑制剤、たとえばフツ素化物、ハロ
ゲノアセテート、Ｎ−アルキルマレイミド、酢酸
等がすでに文献に記載されている。完全血液中の
グルコース測定のためのこれらの抑制剤を含有す
る既知の溶血性溶液の主な欠点は、これらの溶液
が制限された期間だけ安定であるか、または解糖
を完全に抑制しない点にある。すなわち、たとえ
ば西ドイツ公告特許第1813848号による溶血性溶
液の寿命は僅かに約３〜４週間にすぎない。すな
わちこれらの溶液は、短い時間的間隔をもつて新
らたに調製して常時完全に機能できることを確実
にする必要がある。 本発明は良好な溶血性を有し、解糖を抑制し、
そして事実上無制限の期間にわたり保存できる、
完全血液中のグルコース測定用溶血性溶液を提供
する目的に基づいている。 本発明によればこの目的は緩衝剤および塩化ナ
トリウムに加えて、キレート化剤および表面活性
剤を含有する溶血性溶液により達成される。 従つて、本発明は基本的に緩衝剤および塩化ナ
トリウムを含有し、そして少なくとも１種のキレ
ート化剤および少なくとも１種の表面活性剤を含
有することを特徴とする。血液中のグルコース測
定用溶血性溶液に関する。 さらにまた、本発明は血液を溶血させ、そして
その中のグルコース濃度を安定化する方法も包含
し、この方法は基本的に緩衝剤、塩化ナトリウ
ム、キレート化剤および表面活性剤を含有する溶
血性水溶液で完全血液を処理することを特徴とす
る。 本発明はまた、血液中のグルコース測定用の溶
血性溶液に少なくとも１種のキレート化剤および
少なくとも１種の表面活性剤の組合せを使用する
ことに関する。 驚くべきことに、キレート化剤と表面活性剤と
の組合せが溶血物中で解糖の完全な抑制を行なう
こと、そして安定な溶血性溶液が得られることも
見出された。２価金属陽イオンを錯化することに
より多くの解糖酵素を抑制できるエチレンジアミ
ンテトラアセテートのようなキレート化剤が溶血
性溶液に安定剤として使用されたことは今迄にな
かつた。これはキレート化剤単独では血液中の解
糖を効果的に抑制しないこともあるが、むしろ、
たとえば１ｇ／のエチレンジアミンテトラアセ
テート濃度では血液中に含まれるグルコースが分
解するからである。これに対して、本発明による
溶血性溶液を用いて作られた溶血生成物中のグル
コース濃度は12日間後にも依然として変化しな
い。本発明による溶血性溶液の別の利点は溶血生
成物に混濁が生じないことである。 適当な表面活性剤はドデシル硫酸ナトリウム、
セチルトリメチルアンモニウムブロミド、ラウリ
ルサルコシンまたはタウログリココレートのよう
なイオン性表面活性剤であるが、特に非イオン性
表面活性剤、好ましくはアルキルフエノールポリ
グリコールエーテルも使用できる。 好適なキレート化剤には、たとえばエチレンジ
アミンテトラアセテート、ニトリロトリアセテー
ト、シクロヘキシレン−１・２−ジニトリロテト
ラアセテート、ジエチレントリアミンペンタアセ
テートおよびビス−（アミノエチル）−グリコール
エーテル−Ｎ・Ｎ・N′・N′−テトラアセテート
があり、エチレンジアミンテトラアセテートが好
ましい。 溶血性溶液にはキレート化剤と表面活性剤との
それぞれの組合せも使用できる。 本発明による溶血性溶液は表面活性剤を１〜４
ｇ／、好ましくは２ｇ／の濃度で含有し、キ
レート化剤を0.5〜２ｇ／、好ましくは１ｇ／
の濃度で含有する。 さらにまた、本発明の溶血性溶液は少なくとも
１種の緩衝剤および塩化ナトリウムを含有する。
緩衝剤は溶血性溶液のPH値をグルコースの測定に
好適な約６〜８の範囲に調整する作用をする。適
当な緩衝剤は、たとえば50〜500ミリモル／の
濃度のリン酸塩緩衝剤、トリス緩衝剤、トリエタ
ノールアミン緩衝剤またはイミダゾール緩衝剤で
あることが判つた。7.6のPH値のリン酸塩緩衝剤
を120ミリモル／の濃度で用いることが好まし
い。塩化ナトリウム濃度は0.8モル／より大き
くあるべきであり、好ましくは約１モル／であ
る。微生物汚染を避けるために５〜120ミリモル
のアルカリ金属アジドを加えることもでき、14ミ
リモル／のナトリウムアジドを加えることが好
ましい。 完全血液中のグルコース濃度の安定化を同時的
に伴なう完全血液の溶血は、被検完全血液を本発
明による溶血性水溶液中に加え、その後または僅
か数日間後にこの種の溶液を用いる慣用の方法に
よりグルコースの酵素式測定を行なう方法により
行なう。 本発明を次の例でさらに詳細に説明する。 例 １ 採血後、その血液の20μを直ちに、次の組成
を有する溶血性溶液２ml中に加える。 リン酸塩緩衝剤（PH7.6） 120ミリモル／ 塩化ナトリウム １モル／ ナトリウムアジド 14ミリモル／ エチレンジアミンテトラアセテート １ｇ／ および ポリオキシエチレン10−アルキルフエノールエー
テル〔商品名ルテンゾル（Lutensol）AP10〕
２ｇ／ この溶液１mlをセル中にピペツトで入れ、次の
組成を有する緩衝剤溶液２mlを加える。 リン酸塩緩衝剤（PH7.6） 120ミリモル／ 塩化ナトリウム 150ミリモル／ ナトリウムアジド 14ミリモル／ エチレンジアミンテトラアセテート
2.8ミリモル／ エコチンアミド−アデニンジヌレクオチド
3.6ミリモル／ および ムタロターゼ 150U／ この溶液の吸光を340nｍの波長で、または
Hg334またはHg365フイルターを用いて測定し、
グルコースデヒドロゲナーゼ500kU／を含有す
る酵素溶液20μを加えて反応を開始させる。約
５分間後にこの反応が終り、その吸光を読み取
る。被検試料のグルコース濃度を次式に従い吸光
△Ｅの差から算出する。 グルコース濃度(C)＝△E334×889.2mg／dl グルコース濃度は一週間一定にとどまり、この
溶血溶液は無期限に安定である。 例 ２ 溶血した血液試料中のグルコース濃度を例１と
同様にして測定する。溶血生成物を６部分に分割
し、それぞれについて数日間の間隔で測定し、評
価した。比較のために、キレート化剤および表面
活性剤の組合せの代りにフツ化ナトリウムを含有
する溶血性溶液を用いて、この血液試料を処理し
た。 下表に種々の溶血生成物中のグルコース濃度を
初期数値に対する％で示す。この数値はグルコー
ス70mg／dlを含有する試料を用いて得た。
て溶血された血液中のグルコースの濃度を安定化
する方法に関する。 僅かの研究しか行なわれていないことから、グ
ルコースの濃度の測定は血漿または血清中よりも
完全血液中の方が選ばれる。完全血液を使用する
ことによる別の利点は測定に非常に少量（たとえ
ば20μ）の血液ですでに十分であることにあ
る。しかしながら、採取した血液試料中では赤血
球に含まれる酵素が存在するグルコースの解糖分
解を行なつてしまう。この理由で、グルコースの
測定を血液の採取後に直ちに行なわなければなら
ないか、または適当な方法で解糖を抑制しなけれ
ばならない。この抑制は試料を溶血させず、また
は溶血させた後に等張溶液中で行なうことがで
き、これはたとえば滲透的シヨツクによりまたは
ジギトニンを用いて行なうことができる。 多くの解糖抑制剤、たとえばフツ素化物、ハロ
ゲノアセテート、Ｎ−アルキルマレイミド、酢酸
等がすでに文献に記載されている。完全血液中の
グルコース測定のためのこれらの抑制剤を含有す
る既知の溶血性溶液の主な欠点は、これらの溶液
が制限された期間だけ安定であるか、または解糖
を完全に抑制しない点にある。すなわち、たとえ
ば西ドイツ公告特許第1813848号による溶血性溶
液の寿命は僅かに約３〜４週間にすぎない。すな
わちこれらの溶液は、短い時間的間隔をもつて新
らたに調製して常時完全に機能できることを確実
にする必要がある。 本発明は良好な溶血性を有し、解糖を抑制し、
そして事実上無制限の期間にわたり保存できる、
完全血液中のグルコース測定用溶血性溶液を提供
する目的に基づいている。 本発明によればこの目的は緩衝剤および塩化ナ
トリウムに加えて、キレート化剤および表面活性
剤を含有する溶血性溶液により達成される。 従つて、本発明は基本的に緩衝剤および塩化ナ
トリウムを含有し、そして少なくとも１種のキレ
ート化剤および少なくとも１種の表面活性剤を含
有することを特徴とする。血液中のグルコース測
定用溶血性溶液に関する。 さらにまた、本発明は血液を溶血させ、そして
その中のグルコース濃度を安定化する方法も包含
し、この方法は基本的に緩衝剤、塩化ナトリウ
ム、キレート化剤および表面活性剤を含有する溶
血性水溶液で完全血液を処理することを特徴とす
る。 本発明はまた、血液中のグルコース測定用の溶
血性溶液に少なくとも１種のキレート化剤および
少なくとも１種の表面活性剤の組合せを使用する
ことに関する。 驚くべきことに、キレート化剤と表面活性剤と
の組合せが溶血物中で解糖の完全な抑制を行なう
こと、そして安定な溶血性溶液が得られることも
見出された。２価金属陽イオンを錯化することに
より多くの解糖酵素を抑制できるエチレンジアミ
ンテトラアセテートのようなキレート化剤が溶血
性溶液に安定剤として使用されたことは今迄にな
かつた。これはキレート化剤単独では血液中の解
糖を効果的に抑制しないこともあるが、むしろ、
たとえば１ｇ／のエチレンジアミンテトラアセ
テート濃度では血液中に含まれるグルコースが分
解するからである。これに対して、本発明による
溶血性溶液を用いて作られた溶血生成物中のグル
コース濃度は12日間後にも依然として変化しな
い。本発明による溶血性溶液の別の利点は溶血生
成物に混濁が生じないことである。 適当な表面活性剤はドデシル硫酸ナトリウム、
セチルトリメチルアンモニウムブロミド、ラウリ
ルサルコシンまたはタウログリココレートのよう
なイオン性表面活性剤であるが、特に非イオン性
表面活性剤、好ましくはアルキルフエノールポリ
グリコールエーテルも使用できる。 好適なキレート化剤には、たとえばエチレンジ
アミンテトラアセテート、ニトリロトリアセテー
ト、シクロヘキシレン−１・２−ジニトリロテト
ラアセテート、ジエチレントリアミンペンタアセ
テートおよびビス−（アミノエチル）−グリコール
エーテル−Ｎ・Ｎ・N′・N′−テトラアセテート
があり、エチレンジアミンテトラアセテートが好
ましい。 溶血性溶液にはキレート化剤と表面活性剤との
それぞれの組合せも使用できる。 本発明による溶血性溶液は表面活性剤を１〜４
ｇ／、好ましくは２ｇ／の濃度で含有し、キ
レート化剤を0.5〜２ｇ／、好ましくは１ｇ／
の濃度で含有する。 さらにまた、本発明の溶血性溶液は少なくとも
１種の緩衝剤および塩化ナトリウムを含有する。
緩衝剤は溶血性溶液のPH値をグルコースの測定に
好適な約６〜８の範囲に調整する作用をする。適
当な緩衝剤は、たとえば50〜500ミリモル／の
濃度のリン酸塩緩衝剤、トリス緩衝剤、トリエタ
ノールアミン緩衝剤またはイミダゾール緩衝剤で
あることが判つた。7.6のPH値のリン酸塩緩衝剤
を120ミリモル／の濃度で用いることが好まし
い。塩化ナトリウム濃度は0.8モル／より大き
くあるべきであり、好ましくは約１モル／であ
る。微生物汚染を避けるために５〜120ミリモル
のアルカリ金属アジドを加えることもでき、14ミ
リモル／のナトリウムアジドを加えることが好
ましい。 完全血液中のグルコース濃度の安定化を同時的
に伴なう完全血液の溶血は、被検完全血液を本発
明による溶血性水溶液中に加え、その後または僅
か数日間後にこの種の溶液を用いる慣用の方法に
よりグルコースの酵素式測定を行なう方法により
行なう。 本発明を次の例でさらに詳細に説明する。 例 １ 採血後、その血液の20μを直ちに、次の組成
を有する溶血性溶液２ml中に加える。 リン酸塩緩衝剤（PH7.6） 120ミリモル／ 塩化ナトリウム １モル／ ナトリウムアジド 14ミリモル／ エチレンジアミンテトラアセテート １ｇ／ および ポリオキシエチレン10−アルキルフエノールエー
テル〔商品名ルテンゾル（Lutensol）AP10〕
２ｇ／ この溶液１mlをセル中にピペツトで入れ、次の
組成を有する緩衝剤溶液２mlを加える。 リン酸塩緩衝剤（PH7.6） 120ミリモル／ 塩化ナトリウム 150ミリモル／ ナトリウムアジド 14ミリモル／ エチレンジアミンテトラアセテート
2.8ミリモル／ エコチンアミド−アデニンジヌレクオチド
3.6ミリモル／ および ムタロターゼ 150U／ この溶液の吸光を340nｍの波長で、または
Hg334またはHg365フイルターを用いて測定し、
グルコースデヒドロゲナーゼ500kU／を含有す
る酵素溶液20μを加えて反応を開始させる。約
５分間後にこの反応が終り、その吸光を読み取
る。被検試料のグルコース濃度を次式に従い吸光
△Ｅの差から算出する。 グルコース濃度(C)＝△E334×889.2mg／dl グルコース濃度は一週間一定にとどまり、この
溶血溶液は無期限に安定である。 例 ２ 溶血した血液試料中のグルコース濃度を例１と
同様にして測定する。溶血生成物を６部分に分割
し、それぞれについて数日間の間隔で測定し、評
価した。比較のために、キレート化剤および表面
活性剤の組合せの代りにフツ化ナトリウムを含有
する溶血性溶液を用いて、この血液試料を処理し
た。 下表に種々の溶血生成物中のグルコース濃度を
初期数値に対する％で示す。この数値はグルコー
ス70mg／dlを含有する試料を用いて得た。
【表】
この表から、本発明による溶血性溶液で生成し
た溶血生成物中のグルコース濃度が実験期間にわ
たり一定にとどまるのに対し、フツ化ナトリウム
を含有する溶血生成物中のグルコース濃度が絶え
ず減少することを知ることができる。 例 ３ 採血直後の血液20μを直ちに、次の組成を有
する溶血性溶液２ml中に加える： リン酸塩緩衝剤（PH7.6） 120ミリモル／ 塩化ナトリウム １モル／ ナトリウムアジド 14ミリモル／ エチレンジアミンテトラアセテート １ｇ／ および ポリオキシエチレン−７−モノアルキルエーテル
（商品名ルテンゾルON70） １ｇ／ この溶液１mlをセル中にピペツトで入れ、例１
の緩衝剤溶液２mlを加える。例１に記載のとおり
にして、グルコース測定を行ない、グルコース濃
度が数周間一定にとどまる結果が得られた。この
溶血性溶液は無期限に安定である。 例 ４ 採血直後の血液20μを直ちに、次の組成を有
する溶血性溶液２mlに加える： リン酸塩緩衝剤（PH7.6） 120ミリモル／ 塩化ナトリウム １モル／ ナトリウムアジド 14ミリモル／ ジエチレントリアミンペンタアセテート１ｇ／ および ポリオキシエチレン−10−アルキルフエノールエ
ーテル（商品名ルテンゾルAP10） １ｇ／ 例１の結果と均しい結果が得られた。 例 ５ 採血直後の血液20μを直ちに、次の組成を有
する溶血性溶液２ml中に加える： リン酸塩緩衝剤（PH7.6） 120ミリモル／ 塩化ナトリウム １モル／ ナトリウムアジド 14ミリモル／ ジエチレントリアミンペンタアセテート１ｇ／ および ポリオキシエチレン−10−アルキルフエノールエ
ーテル（商品名ルテンゾルAP10） １ｇ／ および ポリオキシエチレン−７−モノアルキルエーテル
（商品名レテゾルON70） 0.5ｇ／ 例１の結果と均しい結果が得られた。 例 ６ 採血直後の血液20μを直ちに、次の組成を有
する溶血性溶液２ml中に加える： リン酸塩緩衝剤（PH7.6） 120ミリモル／ 塩化ナトリウム １モル／ ナトリウムアジド 14ミリモル／ シクロヘキシレン−１・２−ジニトリロテトラア
セテート ２ｇ／ および ラウリルザルコシン １ｇ／ 例１の結果と均しい結果が得られた。
た溶血生成物中のグルコース濃度が実験期間にわ
たり一定にとどまるのに対し、フツ化ナトリウム
を含有する溶血生成物中のグルコース濃度が絶え
ず減少することを知ることができる。 例 ３ 採血直後の血液20μを直ちに、次の組成を有
する溶血性溶液２ml中に加える： リン酸塩緩衝剤（PH7.6） 120ミリモル／ 塩化ナトリウム １モル／ ナトリウムアジド 14ミリモル／ エチレンジアミンテトラアセテート １ｇ／ および ポリオキシエチレン−７−モノアルキルエーテル
（商品名ルテンゾルON70） １ｇ／ この溶液１mlをセル中にピペツトで入れ、例１
の緩衝剤溶液２mlを加える。例１に記載のとおり
にして、グルコース測定を行ない、グルコース濃
度が数周間一定にとどまる結果が得られた。この
溶血性溶液は無期限に安定である。 例 ４ 採血直後の血液20μを直ちに、次の組成を有
する溶血性溶液２mlに加える： リン酸塩緩衝剤（PH7.6） 120ミリモル／ 塩化ナトリウム １モル／ ナトリウムアジド 14ミリモル／ ジエチレントリアミンペンタアセテート１ｇ／ および ポリオキシエチレン−10−アルキルフエノールエ
ーテル（商品名ルテンゾルAP10） １ｇ／ 例１の結果と均しい結果が得られた。 例 ５ 採血直後の血液20μを直ちに、次の組成を有
する溶血性溶液２ml中に加える： リン酸塩緩衝剤（PH7.6） 120ミリモル／ 塩化ナトリウム １モル／ ナトリウムアジド 14ミリモル／ ジエチレントリアミンペンタアセテート１ｇ／ および ポリオキシエチレン−10−アルキルフエノールエ
ーテル（商品名ルテンゾルAP10） １ｇ／ および ポリオキシエチレン−７−モノアルキルエーテル
（商品名レテゾルON70） 0.5ｇ／ 例１の結果と均しい結果が得られた。 例 ６ 採血直後の血液20μを直ちに、次の組成を有
する溶血性溶液２ml中に加える： リン酸塩緩衝剤（PH7.6） 120ミリモル／ 塩化ナトリウム １モル／ ナトリウムアジド 14ミリモル／ シクロヘキシレン−１・２−ジニトリロテトラア
セテート ２ｇ／ および ラウリルザルコシン １ｇ／ 例１の結果と均しい結果が得られた。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 必須成分として、緩衝剤および塩化ナトリウ
ムを含有し、さらに少なくとも１種のキレート化
剤および少なくとも１種の表面活性剤を含有する
ことを特徴とする、血液中のグルコース測定用の
溶血性溶液。 ２ 前記表面活性剤として非イオン性表面活性剤
を含有する特許請求の範囲第１項に記載の溶血性
溶液。 ３ 前記表面活性剤としてアルキルフエノールポ
リグリコールエーテルを含有する特許請求の範囲
第１項または第２項に記載の溶血性溶液。 ４ 前記キレート化剤として、エチレンジアミン
テトラアセテート、ニトリロトリアセテート、シ
クロヘキシレン−１・２−ジニトリロテトラアセ
テート、ジエチレントリアミンペンタアセテート
および（または）ビス（アミノエチル）−グリコ
ールエーテル−Ｎ・Ｎ・N′・N′−テトラアセテ
ートを含有する特許請求の範囲第１項ないし第３
項のいずれかに記載の溶血性溶液。 ５ 前記表面活性剤を１〜４ｇ／の濃度で含有
する特許請求の範囲第１項ないし第４項のいずれ
かに記載の溶血性溶液。 ６ 前記キレート化剤を0.5〜２ｇ／の濃度で
含有する特許請求の範囲第１項ないし第５項のい
ずれかに記載の溶血性溶液。 ７ ナトリウムアジドをさらに含有する特許請求
の範囲第１項ないし第６項のいずれかに記載の溶
血性溶液。
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19782850603 DE2850603A1 (de) | 1978-11-22 | 1978-11-22 | Haemolysierloesung und verfahren zur haemolyse von blut |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
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|---|---|---|---|
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| EP (1) | EP0012184B1 (ja) |
| JP (1) | JPS5582053A (ja) |
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