JPS63316730A - 抗ウイルス剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、植物種子から抽゛出される血球凝集素すなわ
らレクチン類より（ワられる蛋白又は蛋白多糖体を有効
成分とする抗ウィルス剤に関係している。

Ｃいる。ウィルス病に対してはこれまでワクチンによる
予防接種で対応し、天然痘根絶をはじめ、黄熱病、ポリ
オウィルスの制「がなされてきた。

しかしＡＩＤＳなどのような持続感染や潜伏ＦＡ染が問
題となる病気に対してはワクチンだけでは対応出来ず、
安全ですぐれた効果を示す抗ウイルス感染症剤の開発が
期待されているのが環状である。

そこで、本発明者らは各種の薬剤を鋭意検Ｂ′Ｊシたと
ころ、驚くべきことに本発明のレクチン類より得られる
蛋白又は蛋白多糖体が抗ウイルス感染作用の薬理効果を
有していることを見出して本発明に至ったものである。

植物種子から抽出される血球凝集素すなわらレクチン類
より得られる蛋白又は蛋白多糖体を有効成分とする抽出
物が、ＨｒＶの吸着阻害活性、ＲＴａｓｅ阻害活性を有
することを見出した。本発明はレクチン類ｔ”ＨＭｋｅ
ｌａの分類（０，Ｈ菖ｋｅｌａ、＾ｎｎ、　Ｈｅｄ。

Ｅｘｐ、Ｂｉｏｌ、、　Ｆ［ＮＮ　３５５ｕｐ１．　Ｉ
ｆ　（１９５７）　；４良−１大沢利昭共著「レクチン
」講談社昭和５１年６月１０日発行）によって分けられ
る１群、２群、３群に属するすべてのものが含まれる。

すなわち２群からは＾ｂｒｕｓ　ｐｒｅｃａｔｏｒｉｕ
ｓ、Ａｒａｃｈｔｓ　ｈｙｐｏｇａｅａ　（ピーナッツ
）　、　Ｂａｎｄｅｉｒａｅａ　ｓｉｍｐｌｉｆｏｌｉ
ａ、　Ｂａｕｈｉｎｉａｌ）ｕｒＤＩＪｎｅａ、Ｃａ１
ｐｕｒｉａ　　ａｅＯｇｐｔ；ａｎａ、ＦＯｌｅＳ　　
ｆｏｒｌＱＯｎｔａｒｉｕｓ、　Ｇｌｙｃｉｎｅ　ｌａ
Ｘ　（ダイス）　、　　Ｍａａｋｉａａｍｕｒｅｎｓｉ
ｓ（イヌエンジａ　）　、　ｐｈａｓｅｏｌｕｓ　１ｕ
ｎａｔａｓ（す？？メ）　、　Ｐｈａｓｅｏｌｕｓ　ｖ
ｕｌｇａｒｉｓ　（インゲンマメ）　、　Ｒｉｃｉｎｕ
ｓ　ｃｏｉＩＩｌｕｎｉｓ　（ｔ：　ｖ　）　、　ｌ１
ｏｂｉｎｉａ　ｐｓｅｕｄｏｃａｃｉａにセアカシア）
　、　５ｏｐｈｏｒａ　ｊａｐｏｎｉｃａ　（エンジー
ｖ　）　、　Ｗｉｓｔａｒｉａ　ｒｌｏｒｉｄｕｎｄａ
（フジ）　、　Ｖｉｃｉａｃｒａｃｃａ　（クリフジ）
からなるものが選ばれ、３群からはＣａｎａｖａｌｉａ
　ｅｎｓｉｆｏｒｍｉｓ　（ナタマメ）　、　１．ｅｎ
ｓｃｕｌｉｎａｒｉｓ　（レンズマメ）　、　Ｐｉｓｕ
ｉ　５ａｔｉｖｕａ＋　　（ｘンドウマメ）　、　Ｖｉ
ｃｉａ　ｆａｂａ　（ソラマメ）、ｃｙｔｒｓｕｓｓｃ
ｓｓｉｌｉｒｏｌｉｕｓ、　Ｌａｂｕｒｎｕｉ　ａｌｐ
ｉｎｕｍ、　Ｃｅｒａｓｔｒｉｕｎ＋ｆｏｌ（！ｎｔＯ
３ＬＩｓ、　Ｕｌｅｘ　ｅｕｒｏｐｅｕｓ　　（Ａす１
ニシダ）からなるものが選ばれる。数は少ないが、１群
からはＬｏｔｕｓ　ｔｅｔｒａｇｏｎｏｌｏｂｕｓ、　
Ｕｌｅｘ　ｅｕｒｏｐｅｕｓ　　（ハリエニシダ）から
なるものが選ばれる。

抽出に際して用いる水系溶媒とは水又は水に可ば１０％
稈度以下含有づる水溶液から選択される１種又は２Ｖｊ
以上の組合せよりなるものである。有機溶媒としてはメ
タノール、エタノール、イソプロピルアルコールなどが
主として用いられる。酸としては、塩酸、硫酸、酢酸な
どである。塩基としてはアンモニヤ、苛性ソーダ、苛性
カリ、炭酸ソーダなどである。

抽出は原料（乾燥基準）に対して５倍乃至２００１の抽
出液を使用１ノ、通常は４℃乃至１５０℃で２０分乃至
２０時間処理するものである。

ＩＮ製処理工程とは、塩析、アフィニティクロ？トゲラ
フイー、透析、限外減退、逆滲透処理、ゲルは過、０機
溶媒による沈澱処理などの１種又は２種以上の方法の適
用により低分子物を除去することを意味するものである
。工学的には加圧による膜分離法である限外濾過法、逆
滲透処１！ＩＩ法の、単独又は組合せが特に好ましい。

又場合にまり塩析工程後これらの処理を行ってもよい。

塩析工程に用いる塩析剤は硫安、食塩、塩化力り、炭酸
バリウム等であるが、硫安の使用が最も好ましい。又塩
析工程の侵処理として透析、限外濾過、ゲル濾過、逆滲
透処理等のいずれか１つ又はこれらの２以上の工程の組
合せが必要である。

アフィニティクロマトグラフィーは、担体にデキストラ
ン、アガ［１−ス、ポリアクリルアミドゲル等を用い、
それ単独か或いはそれらの担体に化学的１法で精製され
るレクチンに特異性の高い糖鎖構造を有する物質を固定
化したカラムが通常用いられる。

透析は通常セロファン膜、コロジオン膜などの゛Ｖ透股
を用いて実施されるものである。ゲル濾過はアキストラ
ン又はポリアクリルアミドゲルなどを充填したカラムを
用いて実施する。セファデックス、バイオゲルの名称で
販売せられている充填剤が通常用いられる。

限外濾過、逆滲透圧法はいずれら加圧トで膜を用いて分
画する方法である。部名は０．５・〜５Ｋｙ／ｌｉｓ＊
ａは２０〜３５Ｋｙ／ｄで行うのが通常である。

有機溶媒に−よる沈澱法はメタノール、エタノール、イ
ソプロパツール、アセトンなどを用いるのが一般的であ
る。又、上記操作に加えて必要に応じイオン交換処理を
行っても良い。

上記精製操作が終った後は噴霧乾燥、凍結乾燥などで水
分を除去した後製品化するものである。

尚本物質を、アルカリ性水溶液で処理すると、驚くべき
ことには抗ウイルス効果が増強されるので更に好ましい
。

本物質を５倍乃至２００倍量の０．０ＩＮ乃至５Ｎの好
ましくは０．１乃至２Ｎのアルカリ性水溶液で、４０℃
乃至２５０℃、好ましくは６０℃乃至２００℃最も好ま
しくは１００℃乃至１５０℃で５分乃至２１１１１．好
ましくは１０分乃至１時間処理する。次に該処理液を中
和し、精製処理工程を行なう。Ｉｌ製処理工工程、前記
の塩析透析、限外濾過、逆滲透処理、ゲル濾過、有機溶
媒による沈澱処理などの１種又は２種以上の方法の適用
により行なうことが出来る。条件は前記と同じである。

上記精製操作が終った後は、噴霧乾燥、凍結乾燥などで
水分を除去した後製品化でる。

また、本物質をジエチルアミノエチル（Ｄ［ＡＥ　）−
セルロース等のイオン交換セルロースゲル等を用いたク
ロマトグラフィー、で更に精製を行うと、ましい。

本物質はα−プフトール硫酸反応、インドール硫酸反応
、アンスロン硫酸反応、フェノール硫酸反応及び又は日
−クイ−フォーリン法、ｍＭ加水分解後のニンヒドリン
反応で陽性を示す。元素分析の結果、炭素１０〜５５％
、水素３〜９％、窒素０．１〜１６．０％を主成分とし
て含有する。

本物質の糖成分は少な（とちグル」−ス、Ｎ−７セチル
グルコサミンを含み、蛋白成分としては少なくともグル
タミン酸、アスパンギン酸、リジンを含有する。

近にはアミド基に由来する吸収を認めることが出来た。

本物質は水系１１１１１Ｍに可溶で、有機溶媒に不溶で
ある。水系溶媒は水又は水を主体として水に可溶のアル
コール、酸、塩基等を含むものであり、有機溶媒はクロ
ロホルム、ペンピン、１−チル等を古う。

本物質は白色又は褐色でや＃分子量はゲル濾過クロント
ゲラフイーにより１０３〜３ス１０６である。

ラット（容重系）４〜５週令迎合重１００〜１５０りの
ものを用い、本物質を１０００■／Ｋｙ経口投与し、７
日間１！察を行ったが仝匹生存していた。

本物？’Ｊはその毒性が極めて低り１１つ副作用も殆ん
ど生起しないなど安全な物質である。

一般にウィルスは、標的細胞に吸着し、ウィルスの核酸
が細胞内に注入され、さらに細胞のゲノムにインチグレ
ートされる過程を経てウィルスが複製されることが知ら
れている。また、特にレトロウィルスについては、細胞
のゲノムにインチグレートされる前に、ウィルス由来の
核酸であるＲ　Ｎ△から、逆転写酵素の作用によってＤ
ＮＡに転写される過程が必要である。本発明者等は、本
発明の抽出物がＨＩ　Ｖ　（ＨｕＩＩｌａｎ　［ｎ＋ｍ
ｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙＶｉｒｕｓ　）のヒト由来
リンパ系細胞への吸着および、それに引き続く感染を阻
害すること、および、逆転写酵素活性を阻害りることを
見出した。すなわち、ＨＩＶを５０〜１０００／ｌＩｇ
／　ｄの濃度の本物質で０℃にて２時間処理した後トＭ
Ｖを洗浄し、Ｍ］−−４細胞に加えて感染さゼ、３日間
培養後のＨＩＶ抗原陽性細胞を測定づる方法にて、本物
質レクチン抽出物の効果を検討したところ、本物質によ
る前処理により、ＨＩＶ抗原１！ｊｌ性細胞がほと／Ｖ
ど消失し、ＨＩＶのヒト由来リンパ系細胞に対する強い
吸着阻害効果が認められた。一方、本物質の逆転写酵素
活性に及ぼす影響をラット肝臓全メッゼンジャーＲＮ　
Ａを鋳型として測定したところ、本物＊　５００４／Ｉ
Ｉｉの添加により強い逆転写酵素活性の阻害がみられた
。

これらのことは、本発明の抽出物がウィルスの感染を阻
害する作用をもつこと、特に逆転写酵素をもつレトロウ
ィルスの感染を阻害すること、就中、Ｈ［Ｖ感染によっ
て引き起こされるＡＩＤＳＴ）の場合、正常細胞に対し
ても分裂阻害作用を丞す副作用がみられるが、本発明の
蛋白又は蛋白多糖体は急性毒性も極めて低く、安全な物
質であり、ウィルス感染、特にレトロウィルス感染を阻
害する作用を示すことより抗ウイルス感染症剤として有
用である。即ちウィルス感染症、特にレトロウィルス感
染症、就中ＡＩＤＳに自効である。

本発明の蛋白又は蛋白多糖体は、抗ウイルス感染症剤と
して用いる場合、任意の剤型にすることができる。又、
投与も各経路で行なわれる。更に本発明の薬剤は、ウィ
ルス感染症治療剤として用いられている前記の　　　　
　−　　　　　・秦△’；！　Ｔ　％　’２どとの併用
においても効ツノを減することがなく、これら他の薬剤
との０１用は自効な手段としで使用し得る。

経口投与の場合には、それに適用される錠剤、顆粒剤、
散剤、カプセル剤などは、それらの組成物中に製剤上一
般に使用される結合剤、包含剤、試形剤、潤滑剤、崩壊
剤、湿潤剤のような添加物を含有していてもよく、又経
日用液体製剤として用いる場合は、内用水剤、振盪合剤
、懸濁液剤、乳剤、シロップ剤の形態であってもよく、
又使用する前に再溶解させる乾燥生成物の形態ぐあって
もよい。さらに、このような液体製剤は普通用いられる
添加剤、保存剤のいヂれを含有してもよい。

注射用の場合には、その組成物は安定剤、緩衝剤、保存
剤、等張化剤などの添加剤を含んぐいてもよく、単位投
）量アンプル、又は多投り缶容器中で提供される。なお
、上記組成物は水溶液、懸濁液、溶液、油性または水性
ベヒクル中の乳液のような形態であってもよく、一方活
性成分は使用する前に適当なベヒクルたとえば発熱物質
不含の滅菌した水で再溶解させる粉末であってもよい。

本発明の抗ウイルス感染症剤は人間及び動物に経口的ま
たは非経口的に投与される。経口的投与は舌下投与を包
含する。非経口的投与は注射例えば皮下、筋肉、静脈注
射、点滴などを含む。本発明の抗ウイルス感染症剤の投
与量は動物か人間ににより、また年齢、個人差、病状な
どに影響されるので１場合によっては下記範囲外の電を
投与する場合も生ずるが、一般に人間を対象とする場合
、本発明活性物質の経口投与りは体重１Ｋｇ、１日当り
０．１〜１０００η、好ましくは１〜１００　ｊｌｌｊ
ｌを１回から３回に分けて投与する。

以下、実施例を示す。

実施例　１ 乾燥したハリエニシダ（Ｕｌｅｘ　ｅｕｒｏｐｅｕｓ）
　　１００９を１１の生理食塩水に溶かし、４℃で１晩
撹拌抽出した後遠心分離により沈渣と、Ｆ澄に分けた。

上澄み液に０．３飽和となるように硫安を加え、２時聞
稈撹拌し、遠心分離により沈澱と上澄に分けた。上澄に
は更に０．８飽和となるように硫酸アンモニウムを加え
、よく撹拌した。遠心分離により沈澱を集め、生理食塩
水に対して透析した。透析内液をデンプンにエピクロル
ヒドリンを用いてし一フ］−スを架橋さゼたカラムを用
いて精製した。すなわら０．１５８食塩含有５ｉＭリン
酸緩衝液（ｐＨ７，０）でよく洗浄したし一７コース・
デンプンカラムを用いて、同じ緩衝液で溶出を行ない、
不活性タンパク質の大きなピークの溶出が終ってから、
０．５日食塩含有０．０５Ｍグリシンー塩１’ｌ！緩衝
液（１）１１３．０）で溶出を行なうと、目的とする両
分が得られた。、限外濾過により塩類を除き、凍結乾燥
により白色粉末を得た。

実施例　２ よく砕いたイ、ｉｃエンジュ（ＨａａＣｋｉａ　ａｌＬ
Ｉｒｅｎｓｉｓ）種子１００ｇを生理食塩水１１に懸濁
し、１夜４℃で撹拌したのち、遠心分離により沈漬と上
澄に分けた。上澄みに０．５飽和となる様に硫安を加え
２時間稈撹拌し、遠心分離により沈澱と上澄に分けた。

上澄には更に０．８飽和となる様に硫酸アンモニウムを
加えよく撹拌した。遠心分離により沈澱を集め、０．１
５Ｎ　ｇ塩含有０．００１８リン酸緩衝液（ｐｌ＋　７
．０）に溶かし、セファ０−ス４Ｂ−ブタ甲状腺チログ
ロブリン糖ペプチドのカラムにのせ、上記リン酸緩衝液
にて溶出を行う。初めに不活性のタンパクの大きなピー
クが溶出されたのちのタンパクピークを集めた。限外濾
過により塩類を除き、凍結乾燥により白色粉末を得た。

実施例　３ 脱脂ダイス（Ｇｌｙｃｉｎｅ　ｗａｘ）粉末１００ｇを
生理的食塩水５００ｄで室温、１〜２時間撹拌、抽出を
行った。遠心分離により上澄を集め、上Ｗ１１００Ｉ１
１当り４℃で３０ｇの１１１１１アンモニウムを加え、
よく撹拌し遠心分離により沈澱を除き上澄に更に硫酸ア
ンモニウム２５９を加えて生ずる沈澱を集めた。歩合の
水に溶かし、水、つぎに生理的食塩水に対して透析した
。これを生理食塩水で充分洗ったセファロース−１（ε
−アミノカプロイル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシルア
ミンのカラム（４，Ｏｘ　３０α）にのせ、生理的食塩
水で不活性タンパク質の溶出が終るまで洗った。つぎに
０．５％Ｄ−ガラクトース含有生理的食塩水で流出させ
ると高い凝集活性をもつレクチンが得られた。充分に水
で透析してから凍結乾燥により白色粉末を得た。

実施例　４ よく砕いて乾燥させたナタマメ（Ｊａｃｋ　Ｂｅａｎ）
２００９を１１の１８　Ｍａｃｅ　　（１）Ｈ７，０）
に溶かし、４℃で１０時間抽出した。抽出液を遠心分離
して上澄と沈渣に分けた。上清を３０％硫安飽和（ｐＨ
７，０）にして４℃２時間放置後、遠心分離によって沈
渣を除去した。得られた上清を８０％硫安飽和（ｐＨ７
，０）として４℃で６時間撹拌り、、この混合物を遠心
分離によって分離し、沈渣を集めた。この沈漬を少量の
水に溶かし、水に対して１時間、次いで１ＨＭａｃ１（
１）Ｉ＋　７．０）に対して１０時間透析を行なった。

この透析内液を１８　ＮａＣｊ２　、　ａｌｌ　７．０
で平衡化した５ＯｐｈａｄｅＸ　Ｇ−７５（４Ｘ　５０
３　）にかけ、カラムを同液でよく洗った。

１８　Ｍａｃｌ、　０．ＩＨグル］−スで溶出すると目
的物が得られる。この溶出液を限外濾過により脱塩し、
凍結乾燥することによって白色粉末を得た。

実施例　５ よく砕いて乾燥させたレンズマメ（＋、０ｎＳｃｕｌｉ
ｎａｒｉｓ）　２００ｔＪを１１の１８　Ｍａｃｌ　（
ｐＨ７，０）に溶かし、４℃で１晩抽出した。抽出液を
遠心分囚１して上澄と沈渣に分けた。上清を３０％硫安
飽和（ａｌｌ７．０　＞にして４℃で２時間放置後、遠
心分離によって沈渣を除去した。得られた上清を８０％
硫安飽和（ａｌｌ７．０）として４℃で６時間撹拌し、
この混合物を遠心分離によって分離し沈漬を集めた。

この沈渣を少量の水に溶かし、水に対して１時間、次い
で１８　ＮａＣ１）　　（ｐＨ７，０）　ｋ：対し１１
０時間透析を行なった。この透析内液を１８　ＮａＣ１
，ａｌｌ　７．０で平衡化した５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ−
７５（４ｘ　５０ｃｍ　）にかけ、カラムを同液でよく
洗った。

１８　ＮａＣ１、０，ＩＮグルコースで溶出すると１」
約物が得られた。この溶出液を限外濾過により脱塩し、
凍結乾燥することによって白色粉末を１！また。

各種豆類より新しく抽出された物質の物理化学的性質を
示しているのが表−１である。木表において、フェノー
ル硫酸呈色反応は糖類の°存在を表わし、ローリイー−
フォーリン法はベブブド結合の存在を示している。分子
４についてはゲル濾過法によって平均的に多く存在する
両分を記載した。

実施例　６ 実施例１〜５で得られた物質について、レトロウィルス
が特異的に保持する逆転写酵素の阻害度を以下の方法に
より測定した。

被験物質はすべて凍結乾燥品１０！Ｉｔｇを滅菌蒸留水
１０ＩＩｄｌに溶解した（濃度：１ｊ１９／ｍｌ）。

１ｄの２０　ｍＨＤ、Ｔ、Ｔ、　（ジチオスレイトール
：シグマ社製）、５μの５倍濃度酵素反応液（２５０ｍ
ＨＴｒｉｓ−ＩＩＣｌ（ｐＨ８，３）−２５０ｍＨＫＣ
ｌ２−４０ａＨＨａＣＩ　２　）、１１１１の３ｄ　Ｎ
ＴＰ溶液（１ａ＋Ｈｄ＾ＴＰ−１ｍＨＧＴＰ−１１８ｄ
ＴＴＰ　：シグマ社製）、２μの１００１４／−オリゴ
（ｄＴ）　　　　（ＰＩ−ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ社
）、１成のメツ１２〜１８ センジｐ−ＲＮＡ（正常ラット肝臓由来：　１ｎ／麿）
、　ｏ、５１１１のＲＮａ５ｅ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　
（１６ｕｎ目／屑：宝酒造社ｙ！Ｊ）と１−の［α−３
２Ｐ　１　ｄＣＴＰ　（〜８００Ｃｉ／ｍａ＋ｏｌ　、
　１０μＣｉ／成：アマジャムジャパン社製）を１．５
−容量のエツペンドルフチュープに加え、３７℃ウォー
ターバス中におく。

５分後、先に調製した１１９／ｇｅ１度の被験物質１２
．５ＩＩｉを反応チ１−ブに添加し、更に１成の逆転写
酵素（１ユニット／バ：宝酒造社製、１ｌｏｕｓａｓｓ
ｏｃｉａｔｅｄ　Ｖｉｒｕｓ由来）を加え、最終反応液
量を２５ＩＩＩｌとして、３７℃で反応させた。

１時間後５屑の反応液を２０×２１のＤ　Ｅ　Ａ　ＩＥ
紙（東洋口紙社製）にしみこませ、風乾後、口紙１枚あ
たり１０Ｉ１１の０．５Ｍ−１’ｌａ２　ＨＰＯ４水溶
液に浸し、振盪しながらＯ紙ＦのＤＮＡ合成に使用され
なかった［α−３２Ｐ　１　ｄ　ＣＴＰを洗浄した（こ
の操作を５分間おきに５回実施した）。

その後１０−の液体シンチレーりョン力クデル（アマジ
ャムジャパン社製）の入っているガラスバイヤル瓶に上
記ＤＥＡＥ紙を入れ、シンチレーションカウンター（ア
ロカ社製）にて１分間放射活性（Ｃ，ｌ）、１．）をカ
ウントした。

阻害率（％）は以下の式により求めた。

Ｃ５：被験物質添加の放射活性 各被験物質の逆転写酵素活性阻害効果を表−２に示す。

表−２二逆転写酵素（ＲＴａｓｅ）活性阻害率ｍ…　７
０〜１００％　阻害活性 ◆＋　　　３０〜６９　％ 十　　　　　〇〜　２９　％ 実施例　７ 被験物質によるＨＩＶ（ＡＩＤＳウィルス）のヒトリン
パ球への吸着阻害は以下の方法により実施した（尚、す
べての操作は無菌条件下で行なった）。

ＨＩ　Ｖ　（Ｈｕｍａｎ　Ｔｍｍｕｎｃｄｅｆｉｃｉｅ
ｎｃｙ　Ｖｉｒｕｓ）浮遊液１１ｄと被験物質溶液（８
００Ｒ／ｄ）　　１ｍを試験管に入れ、水中に静置した
。２時間接試験管から１ｄのウィルス浮遊液をとり、ヒ
トリンパ球由来細胞株Ｍ　丁−４［Ｊｐｎ、　Ｊ、　Ｃ
ａｎｃＯｒ　Ｒｅｓ、　（Ｇａｎｎ）、　２８゜２１９
−２２９　（１９８２）］に多重感染度（Ｈ，Ｏ，ｌ）
　！＝；２でウィルスを吸着させた。遠心（毎分２，０
００回転。

１０分間）後、上清をすて沈澱したＭ　Ｔ−４細胞を２
０％ＦＣ８を含むＲＰ　Ｍ　Ｔ　１６４０　（Ｇｉｂｃ
ｏ　Ｌａｂｏｒａｔ。

ｒｉｅｓ、ＮＹ）中に、細胞開度２×１０５／ｄになる
ように浮遊させた。

９６穴プレートに上記ＭＴ−４細胞浮遊液を１００庫づ
つ分注して、５％Ｃ０２，３７℃の条件下で培養した。

培養３日目に間接蛍光抗体法によりＨ１■感染細胞と非
感染細胞を算出した。

すなわちＭＴ−４１１胞をメタノール処理により固定化
し、抗ＨＩＶ感染患者血清と３７℃で反応さＵた。３０
分後ＰＢＳで細胞を洗浄し、フルオレツレインイソチオ
シアネート結合ウサギ抗ヒトＩｇＧ（免疫グロブリン）
と３７℃で反応させた。

蛍光顕微鏡下で５００個のＭＴ−４細胞を観察し、蛍光
陽性細胞をＨＩＶ感染細胞として口出した。

その結果を表−３に示１゜ 表−３＝本物質のＨＩＶ感染阻害効果（％）に十＋７０
〜１００％　阻害活性 ÷＋　　　３０〜６９　％ ０〜２９　％

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. （１）被子植物亜門、双子葉植物綱の植物より得られる
   蛋白又は蛋白多糖体を有効成分とする抗レトロウイルス
   剤。
2. （２）被子植物亜門、双子葉植物綱の植物より得られる
   蛋白又は蛋白多糖体は、Ｍ■ｋｅｌａによる分類によっ
   て示されるもので１群のｌｏｔｕｓ　ｔｅｔｒａｇｏｎ
   ｏｌｏ−ｂｕｓ、Ｕｌｅｘ　ｅｕｒｏｐｅｕｓ（ハリエ
   ニシダ）から選ばれる特許請求の範囲第１項の抗レトロ
   ウイルス剤。
3. （３）被子植物亜門、双子葉植物綱の植物より得られる
   蛋白又は蛋白多糖体は、Ｍ■ｋｅｌａによる分類によっ
   て示されるもので２群のＡｂｒｕｓ　ｐｒｅｃａｔｏｒ
   ｉｕｓ、Ａｒａｃｈｉｓ　ｈｙｐｏｇａｅａ（ピーナッ
   ツ）、Ｂａｎｄｅｉｒａｅａｓｉｍｐｌｉｆｏｌｉａ、
   Ｂａｕｈｉｎｉａ　ｐｕｒｐｕｎｅａ、Ｃａｌｐｕｒｉ
   ａａｅｇｇｐｔｉａｎａ、Ｆｏｍｅｓ　ｆｏｒｍｅｎｔ
   ａｒｉｕｓ、Ｇｌｙｃｉｎｅ　ｍａｘ（ダイズ）、Ｍａ
   ａｋｉａ　ａｍｕｒｅｎｓｉｓ（イヌエンジュ）、Ｐｈ
   ａｓｅｏｌｕｓ　ｌｕｎａｔａｓ（リママメ）、Ｐｈａ
   ｓｅｏｌｕｓｖｕｌｇａｒｉｓ（インゲンマメ）、Ｒｉ
   ｃｉｎｕｓ　ｃｏｍｍｕｎｉｓ（ヒママメ）、Ｒｏｂｉ
   ｎｉａ　ｐｓｅｕｄｏｃａｃｉａ（ニセアカシア）、Ｓ
   ｏｐｈｏｒａ　ｊａｐｏｎｉｃａ（エンジュ）、Ｗｉｓ
   ｔａｒｉａｆｌｏｒｉｄｕｎｄａ（フジ）、Ｖｉｃｉａ
   　ｃｒａｃｃａ（クサフジ）から選ばれる特許請求の範
   囲第１項の抗レトロウイルス剤。
4. （４）被子植物亜門、双子葉植物綱の植物より得られる
   蛋白又は蛋白多糖体は、Ｍ■ｋｅｌａによる分類によっ
   て示されるもので３群のＣａｎａｖａｌｉａｅｎｓｉｆ
   ｏｒｍｉｓ（ナタマメ）、Ｌｅｎｓ　ｃｕｌｉｎａｒｉ
   ｓ（レンズマメ）、Ｐｉｓｕｍ　ｓａｔｉｖｕｍ（エン
   ドウマメ）、Ｖｉｃｉａｆａｂａ（ソラマメ）、Ｃｙｔ
   ｉｓｕｓ　ｓｅｓｓｉｌｉｆｏｌｉｕｓ、Ｌａｂｕｒｎ
   ｕｍ　ａｌｐｉｎｕｍ、Ｃｅｒａｓｔｒｉｕｍ　ｆｏｍ
   ｅｎｔｏｓｕｓ、Ｕｌｅｘｅｕｒｏｐｅｕｓ（ハリエニ
   シダ）から選ばれる特許請求の範囲第１項の抗レトロウ
   イルス剤。
5. （５）抗レトロウイルス剤が抗エイズ−ウイルス剤であ
   る特許請求の範囲第２〜４項のいずれかに記載の抗レト
   ロウイルス剤。