JPS63297330A - 安定化されたヘモグロビン製品およびその水溶液の製造方法 - Google Patents
安定化されたヘモグロビン製品およびその水溶液の製造方法Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は一般にバイオ高分子を独特の構造型（ｃｏｎｆ
ｏｒｍａｔｉｏｎａｌ ５ｔａｔｅ ） Ｋ安定化する
こと及び生物医学及び生物工学的応用のためにその関連
ある活性及び！２能を利用することに関するものである
。更に！！￥Ｉｍにはその阿れかの構造（ｃｏｎｆｏｒ
ｍａｔｉｏｎ）〔タイトＨｂ（Ｔｌ又はリラックス）ｌ
ｂ＠）の状態にあルヘモグロビン（Ｈｂ）を安定化及び
／又は架橋して解離を防止し所望のりガント−結合親和
性を得ることである。本発明の方法及び試剤は新規動物
−ヘモグロビン、人間−ヘモグロビン及び赤血球の酸素
運搬機能のための遺伝子工学的につくられたヘモグロビ
ンに基く代用品又は「代用血液」の製造；及びシアン化
物中毒治療に用いるためのオヤシヘモグロビン誘導体の
メトヘモグロビン誘導体への転換を開発するためのもの
である。
ｏｒｍａｔｉｏｎａｌ ５ｔａｔｅ ） Ｋ安定化する
こと及び生物医学及び生物工学的応用のためにその関連
ある活性及び！２能を利用することに関するものである
。更に！！￥Ｉｍにはその阿れかの構造（ｃｏｎｆｏｒ
ｍａｔｉｏｎ）〔タイトＨｂ（Ｔｌ又はリラックス）ｌ
ｂ＠）の状態にあルヘモグロビン（Ｈｂ）を安定化及び
／又は架橋して解離を防止し所望のりガント−結合親和
性を得ることである。本発明の方法及び試剤は新規動物
−ヘモグロビン、人間−ヘモグロビン及び赤血球の酸素
運搬機能のための遺伝子工学的につくられたヘモグロビ
ンに基く代用品又は「代用血液」の製造；及びシアン化
物中毒治療に用いるためのオヤシヘモグロビン誘導体の
メトヘモグロビン誘導体への転換を開発するためのもの
である。
輸注液としての血液の使用には重大な制約がある。これ
は主として赤血球（ＲＢＣ）の自然的特性及び病気のＭ
Ａ＠の危険性によるものである。
は主として赤血球（ＲＢＣ）の自然的特性及び病気のＭ
Ａ＠の危険性によるものである。
血液及び血液製品によるウィルス性の病気の感染は輸注
用薬剤の大きな問題である。
用薬剤の大きな問題である。
ウィルスに感染した血液を発見するための検査はコスト
が局〈つきしかも完全に有効なものではない。血液製剤
中のウィルス感染を不活性化するために利用できる方法
の中で工朶的に行なわれている方法は温熱低温殺菌であ
る。しかしＲ，ＢＣは低温殺菌不能である。
が局〈つきしかも完全に有効なものではない。血液製剤
中のウィルス感染を不活性化するために利用できる方法
の中で工朶的に行なわれている方法は温熱低温殺菌であ
る。しかしＲ，ＢＣは低温殺菌不能である。
輸血において全血を用いる場合のその他の制約としては
厳しい保存条件、短かい寿命及び赤血球の複雑な免疫特
性がある。したがってストローマを含まないヘモグロビ
ンの化学的修飾により細胞を含まないヘモグロビンに基
く代用血液の開発につき研究がなされて来た。
厳しい保存条件、短かい寿命及び赤血球の複雑な免疫特
性がある。したがってストローマを含まないヘモグロビ
ンの化学的修飾により細胞を含まないヘモグロビンに基
く代用血液の開発につき研究がなされて来た。
周知のように、ヘモグロビンは２つの７／ｌ／フア（司
及び２つのベーター（２）グロビン鎖より構成される４
つのサブユニットの四量体から成っている。
及び２つのベーター（２）グロビン鎖より構成される４
つのサブユニットの四量体から成っている。
このｖ５Ｉｉ１体の分子量は約６４−？ローダルトンで
あり、各サブユニットはほは同じ分子１をもっている。
あり、各サブユニットはほは同じ分子１をもっている。
稀釈溶液においては四量体ヘモグロビンはαβ二量体の
半分の分子に容易に解離する。これら二量体の比較的低
い分子量のため腎臓により循環系から速やかに濾過され
尿中に失われる。このため約２−３時間という短い半減
期（Ｔ３Ａ）となる。
半分の分子に容易に解離する。これら二量体の比較的低
い分子量のため腎臓により循環系から速やかに濾過され
尿中に失われる。このため約２−３時間という短い半減
期（Ｔ３Ａ）となる。
また、ヘモグロビンはその赤血球膜の保護がないと自然
リガンドジホスホグリセレート（ＤＰＧ）を失う。ＤＰ
Ｇは通常ヘモグロビンの酸素親和性を低下せしめるから
これが失われると可溶性ヘモグロビンが更に強く酸素と
結合し赤血球のように効率よく酸素を組織に運搬しなく
なる。この理由によりストローマを含まぬヘモグロビン
は代用血液として使用するのに適さない。
リガンドジホスホグリセレート（ＤＰＧ）を失う。ＤＰ
Ｇは通常ヘモグロビンの酸素親和性を低下せしめるから
これが失われると可溶性ヘモグロビンが更に強く酸素と
結合し赤血球のように効率よく酸素を組織に運搬しなく
なる。この理由によりストローマを含まぬヘモグロビン
は代用血液として使用するのに適さない。
今迄これらの欠点はピリドΦサールー５′−ホスフェー
ト（ＰＬＰ）のようなりＰＧアナローグをデオキシ状態
のＨｂ■に共有結合せしめＲＢＣＫ近い低い酸素親和性
を有するＰＬＰ−Ｈｂを生成することにより克服せんと
して来た。即ち、Ｇｒｅｅｎ−ｂｕｒｇ （Ｇｒｅｅｎ
ｂｕｒｇ ｅｔ ａｌ、 Ｓｕｒｇｅｒｙ、 ｖｏｌ、
８６（１９７９） 、 ｐｐ、 １３−１６）は生理
的酸素親和性を有するＰＬＰ−Ｈｂを代用血液として使
用することを試みた。しかし、分子内架橋なしにはＰＬ
Ｐ−Ｈｂは８１Ｈと同様に半分子に解離し、腎臓により
急速に放出されてしまう。また、Ｈｓｉａ及びその共同
研究者（ＭｃＧａｒｒｉｔｙ ｅｔ ａｌ、 Ｊｏｕｒ
ｎａｌｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、 ｖｏｌ
、 ４１９ （１９８７） ＊ Ｐｐ−３７−５０）は
Ｐｌ、Ｐ−Ｈｂはヘモグロビン１モルにつきＯ乃至６モ
ルのＰＬＰを含有する修飾ヘモグロビンの複雑な混合物
であり、これらのサブスピーシーズはそれぞれ異なった
酸素親和性を有することを示した。
ト（ＰＬＰ）のようなりＰＧアナローグをデオキシ状態
のＨｂ■に共有結合せしめＲＢＣＫ近い低い酸素親和性
を有するＰＬＰ−Ｈｂを生成することにより克服せんと
して来た。即ち、Ｇｒｅｅｎ−ｂｕｒｇ （Ｇｒｅｅｎ
ｂｕｒｇ ｅｔ ａｌ、 Ｓｕｒｇｅｒｙ、 ｖｏｌ、
８６（１９７９） 、 ｐｐ、 １３−１６）は生理
的酸素親和性を有するＰＬＰ−Ｈｂを代用血液として使
用することを試みた。しかし、分子内架橋なしにはＰＬ
Ｐ−Ｈｂは８１Ｈと同様に半分子に解離し、腎臓により
急速に放出されてしまう。また、Ｈｓｉａ及びその共同
研究者（ＭｃＧａｒｒｉｔｙ ｅｔ ａｌ、 Ｊｏｕｒ
ｎａｌｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、 ｖｏｌ
、 ４１９ （１９８７） ＊ Ｐｐ−３７−５０）は
Ｐｌ、Ｐ−Ｈｂはヘモグロビン１モルにつきＯ乃至６モ
ルのＰＬＰを含有する修飾ヘモグロビンの複雑な混合物
であり、これらのサブスピーシーズはそれぞれ異なった
酸素親和性を有することを示した。
ＤＰＧアナローグはＨｂを分子内架橋することがわかっ
た。この架橋剤は人間ヘモグロビンのＤＰＧ−結合部位
に特定的に結合するよ５に設計される。これらの架橋剤
にはβサブユニットに％定的であるもの（Ｂｅｎｅｓｃ
ｈ ｅｔ ａｌ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｂｉｏｐｈ）ｒ
ｓ。
た。この架橋剤は人間ヘモグロビンのＤＰＧ−結合部位
に特定的に結合するよ５に設計される。これらの架橋剤
にはβサブユニットに％定的であるもの（Ｂｅｎｅｓｃ
ｈ ｅｔ ａｌ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｂｉｏｐｈ）ｒ
ｓ。
Ｒｅｓ、 Ｃｏｍｍｕｎ、、 ｖｏｌ、 ６３ ＃ Ａ
４ （１９７５） ｅ ｐｌ）１１２３−１１２９
； Ｂｅｎｅｓｃｈ ｅｔ ａｌ、 ｉｎ Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ ｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、 ｖｏｌ、 ７６
、 Ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎｓ （１９８１）Ｐｇ）、
１４７−１５９ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒａｓｓ ）あ
るいはαすブユニットに特定的であるもの（Ｃｈａｔｔ
ｅｒｊｅｅ ｅｔａｌ、 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉ
ｏｌ、 Ｃｈｅｍ、、 Ｖｏｌ、 ２６１ｅ Ｊｕｌｙ
２５ 、１９８６ 、 ｆ）Ｐ、 ９９２９−９９３７
）が含まれる。
４ （１９７５） ｅ ｐｌ）１１２３−１１２９
； Ｂｅｎｅｓｃｈ ｅｔ ａｌ、 ｉｎ Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ ｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、 ｖｏｌ、 ７６
、 Ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎｓ （１９８１）Ｐｇ）、
１４７−１５９ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒａｓｓ ）あ
るいはαすブユニットに特定的であるもの（Ｃｈａｔｔ
ｅｒｊｅｅ ｅｔａｌ、 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉ
ｏｌ、 Ｃｈｅｍ、、 Ｖｏｌ、 ２６１ｅ Ｊｕｌｙ
２５ 、１９８６ 、 ｆ）Ｐ、 ９９２９−９９３７
）が含まれる。
これらの特定のリガンドによる架橋は一般に収率が低く
（＜７０％）、製品を更に精製する必要がある。活性化
したトリホスフェートヌクレオチドを用いてヘモグロビ
ンの架橋と同時にＤＰＧ結合部位を占有してＡＴＰ−Ｈ
ｂが得られた。これはＰＬＰ−Ｈｂよりも酸素親和性が
低くプラズマ保持時間が長いことがわかった。（Ｇｒｅ
ｅｎｂｕｒｇ ｅｔａｌ、 Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ
Ｃ１１ｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒ
ｅ−５ｅａｒｃｈ、ｖｏｌ、１２２ 、Ａｄｖａｎｃ
ｅｓ ｉｎ Ｂｌｏｏｄ ５ｕｂｓｔ口ｕｔｅＲｅｓ
ｅａｒｃｈ （１９８３） ｓ ＰＩ） ９−１７ 、
Ａｌａｎ Ｒ，Ｌｉ５ｓ。
（＜７０％）、製品を更に精製する必要がある。活性化
したトリホスフェートヌクレオチドを用いてヘモグロビ
ンの架橋と同時にＤＰＧ結合部位を占有してＡＴＰ−Ｈ
ｂが得られた。これはＰＬＰ−Ｈｂよりも酸素親和性が
低くプラズマ保持時間が長いことがわかった。（Ｇｒｅ
ｅｎｂｕｒｇ ｅｔａｌ、 Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ
Ｃ１１ｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒ
ｅ−５ｅａｒｃｈ、ｖｏｌ、１２２ 、Ａｄｖａｎｃ
ｅｓ ｉｎ Ｂｌｏｏｄ ５ｕｂｓｔ口ｕｔｅＲｅｓ
ｅａｒｃｈ （１９８３） ｓ ＰＩ） ９−１７ 、
Ａｌａｎ Ｒ，Ｌｉ５ｓ。
Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ； ＭｃＧａｒｒｉｔｙ ｅｔ ａ
ｌ、 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏ−ｍａｒｏｇｒ
ａｐｈｙ、 ｖｏｌ、 ４１５ 、 （１９８７） ｐ
ｐ、 １３６−１４２）。
ｌ、 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏ−ｍａｒｏｇｒ
ａｐｈｙ、 ｖｏｌ、 ４１５ 、 （１９８７） ｐ
ｐ、 １３６−１４２）。
８０−９０％の血液交換において、ＡＴＰ−Ｈｂは胸腔
及び腹腔から滲出するので高レベルの血液交換を行なう
のは危険であろう。
及び腹腔から滲出するので高レベルの血液交換を行なう
のは危険であろう。
非特定的架橋剤〔たとえばグルタルアルデヒド（ＧＡ）
）によるＰＬＰ−Ｈｂの分子内架橋（重合）がプラズマ
保持時間の延長のために用いられた。
）によるＰＬＰ−Ｈｂの分子内架橋（重合）がプラズマ
保持時間の延長のために用いられた。
（ｌ１ｏｎｈａｒｄ ｅｔ ａｌ、米国特許４，１３６
，０９３号、１９７９年１月２３日）。得られたポリマ
ーＰＬＰ−ｆ（ｂ（１４ｇＨｂ／ａｔ ）は生理的酸素
担持能力（２０ｃｃＯ，／ｄｔ以下）及び同膨張圧（１
ｓｏ−ｏｎｃｏｔｉｃ ｐｒｅｓｓｕｒｅ）を有してい
た。しかし、重合は不完全でありその成分は不均一な酸
素親和性を有する。
，０９３号、１９７９年１月２３日）。得られたポリマ
ーＰＬＰ−ｆ（ｂ（１４ｇＨｂ／ａｔ ）は生理的酸素
担持能力（２０ｃｃＯ，／ｄｔ以下）及び同膨張圧（１
ｓｏ−ｏｎｃｏｔｉｃ ｐｒｅｓｓｕｒｅ）を有してい
た。しかし、重合は不完全でありその成分は不均一な酸
素親和性を有する。
他のグループはＰＬＰ−Ｈｂをポリエチレングリ＊ −
／Ｉ／ （Ｉｗａｓａｋｉ ａｔ ａｌ、 Ａｒｔｉｆ
ｉｃｉａｌ Ｏｒｇａｎｓ。
／Ｉ／ （Ｉｗａｓａｋｉ ａｔ ａｌ、 Ａｒｔｉｆ
ｉｃｉａｌ Ｏｒｇａｎｓ。
ｖｏｌ、 １０ ｅ Ａ５、（１９８６） 、 ｒＪ９
．４１１−４１６ ）及びイタリン（Ｉｗａｓｋｉ ｅ
ｔ ａｌ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ。
．４１１−４１６ ）及びイタリン（Ｉｗａｓｋｉ ｅ
ｔ ａｌ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ。
Ｒｅｓ、 Ｃｏｍｍｕｎ、 ｖｏｌ、 １１３ ｅ ／
％２ （１９８３） 、 ｐｐ。
％２ （１９８３） 、 ｐｐ。
５１３−５１８ ）と複合せしめることＫより、及びＨ
ｂをデ中ストランと複合せしめることＫより（Ｔａｍ
ｅｔ ａｌ、 Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔ’ｌ 、 Ａｃａｄ
、 Ｓｃｉ、、 Ｕ、Ｓ、Ａ。
ｂをデ中ストランと複合せしめることＫより（Ｔａｍ
ｅｔ ａｌ、 Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔ’ｌ 、 Ａｃａｄ
、 Ｓｃｉ、、 Ｕ、Ｓ、Ａ。
ｖｏｌ、 ７３ （１９７６） ｐＰ、 ２１２８−２
１３１ ）プラズマ半減期を延長することを試みた。製
品の不均一性及び高い酸素親和性が矢張り欠点であった
。
１３１ ）プラズマ半減期を延長することを試みた。製
品の不均一性及び高い酸素親和性が矢張り欠点であった
。
種々の２価架橋剤を用（へてＨｂを重合し代用血液とし
てポリＨｂを得ることはｐｒｉｏｒ ａｒ’ｔ Ｋ記載
されている。この方法の欠点は重合が過度であること（
生成物の９０％がその寸法が１５０キロダルトンより大
きい）、酸素親和性が変り易いこと、反応機構が複雑で
あること及び用いる架橋剤の生物学的不和合性（たとえ
ばジビニルスルホン、潜在性発がん物質：米国時・許第
４，００１，３００号； ４，００１゜４０１号； ４
，０５３，５９０号）である。この方法の追求において
、同じ族の二価架橋剤を用いて分子内架橋したＨｂが得
られた。ジビニルスルホンは酸素親和性の変り易いかつ
組成の特定されない製品を生ずることが示された（米国
特許第４，０６１，７３６号）。
てポリＨｂを得ることはｐｒｉｏｒ ａｒ’ｔ Ｋ記載
されている。この方法の欠点は重合が過度であること（
生成物の９０％がその寸法が１５０キロダルトンより大
きい）、酸素親和性が変り易いこと、反応機構が複雑で
あること及び用いる架橋剤の生物学的不和合性（たとえ
ばジビニルスルホン、潜在性発がん物質：米国時・許第
４，００１，３００号； ４，００１゜４０１号； ４
，０５３，５９０号）である。この方法の追求において
、同じ族の二価架橋剤を用いて分子内架橋したＨｂが得
られた。ジビニルスルホンは酸素親和性の変り易いかつ
組成の特定されない製品を生ずることが示された（米国
特許第４，０６１，７３６号）。
本発明の目的は新規な代用血液及びその製法を提供する
ことである。
ことである。
本発明の更に他の目的は輸注における治療剤として有用
な安定化されかつ低温殺菌したヘモグロビンを提供する
ことであり、前記低温殺菌により伝播性感染物が実質的
にヘモグロビン中に存在しなくなる。
な安定化されかつ低温殺菌したヘモグロビンを提供する
ことであり、前記低温殺菌により伝播性感染物が実質的
にヘモグロビン中に存在しなくなる。
更に他の目的はヘモグロビンを何れかの分子構造（■又
は（Ｒｅ）において分子内架橋を起こし、この構造を架
橋生成物中に保持する（ＫＪち、構造の安定化された）
ような架橋剤及び方法を提供することである。このよう
な構造の安定化は一般の生物高分子に適用することがで
きる。
は（Ｒｅ）において分子内架橋を起こし、この構造を架
橋生成物中に保持する（ＫＪち、構造の安定化された）
ような架橋剤及び方法を提供することである。このよう
な構造の安定化は一般の生物高分子に適用することがで
きる。
本発明は四量体の形のヘモグロビンを安定化ｆる新規方
法に基くものであり、この方法により二量体へ解離しな
いように安定化されるのみならず、Ｈｂの何れかの自然
的構造、即ち、通常デオキシヘモグロビンと言われるタ
イト（１）又は通常オキシヘモグロビンと言われるリラ
ックス（６）の何れかの型に安定化される。Ｈｂ■を安
定化し架橋するの／ＤＰＧアナローグを用いる代りに１
本発明の製品はそれぞれのサブユニットのグロビンａｒ
ｌＪ］の共有化学結合を用いることＫより解離及び構造
状態の変化の両方に対して安定化されている。出発四量
体ヘモグロビンの構造型がＴあるいは凡の何れであって
も、本発明によるとこの構造型は安定化された製品中に
保持される。
法に基くものであり、この方法により二量体へ解離しな
いように安定化されるのみならず、Ｈｂの何れかの自然
的構造、即ち、通常デオキシヘモグロビンと言われるタ
イト（１）又は通常オキシヘモグロビンと言われるリラ
ックス（６）の何れかの型に安定化される。Ｈｂ■を安
定化し架橋するの／ＤＰＧアナローグを用いる代りに１
本発明の製品はそれぞれのサブユニットのグロビンａｒ
ｌＪ］の共有化学結合を用いることＫより解離及び構造
状態の変化の両方に対して安定化されている。出発四量
体ヘモグロビンの構造型がＴあるいは凡の何れであって
も、本発明によるとこの構造型は安定化された製品中に
保持される。
両構造型の間を移動するヘモグロビンのこの能力はヒル
係数（ｎ）で示される。係数が２以上の場合はサブユニ
ット間の酸素結合が構造の変化により協同的であること
を示し、係数が約１であることはＨｂがＴ又はＲ型構造
に固定されていることを示す。１−１．５のヒル係数は
完全な安定化及び酸素結合に協同性が無いことを示し、
これは本発明の独特の特徴である。
係数（ｎ）で示される。係数が２以上の場合はサブユニ
ット間の酸素結合が構造の変化により協同的であること
を示し、係数が約１であることはＨｂがＴ又はＲ型構造
に固定されていることを示す。１−１．５のヒル係数は
完全な安定化及び酸素結合に協同性が無いことを示し、
これは本発明の独特の特徴である。
本発明と従来技術との更に他の相違は従来技術ではヘモ
グロビンの安定化は特定部位のサブユニットのグロビン
鎮を結合してヘモグロビン西量体を構成することにより
達成している。この生成物は四ｉ 体ユニットが二量体
サブユニットに解離することに対してだけ安定化されて
おり、即ち、酸素の協同的結合が保持される（ヒル係数
ｎ３）。
グロビンの安定化は特定部位のサブユニットのグロビン
鎮を結合してヘモグロビン西量体を構成することにより
達成している。この生成物は四ｉ 体ユニットが二量体
サブユニットに解離することに対してだけ安定化されて
おり、即ち、酸素の協同的結合が保持される（ヒル係数
ｎ３）。
一方、本発明によると四量体ヘモグロビンは解離に対し
てのみならず、構造の変化に対しても安定化される、即
ち、協同的酸素結合が存在しない（ヒル係数ｎ１−１．
５）。
てのみならず、構造の変化に対しても安定化される、即
ち、協同的酸素結合が存在しない（ヒル係数ｎ１−１．
５）。
構造の安定化というこの特徴は本発明の製品に特有のも
のである。
のである。
本発明の構造的安定化四量体ヘモグロビンは多くの重要
な利点をもっている。たとえば、Ｔ−型構造に安定化さ
れ、かつこの構造は溶液状においても残るという事実そ
のものＫより製品は天然の赤血球と同様の＃素親和性を
有するものであることがわかる。従って、本発明の製品
は肺における酸素の吸収に関して赤血球と実質的に均等
である。
な利点をもっている。たとえば、Ｔ−型構造に安定化さ
れ、かつこの構造は溶液状においても残るという事実そ
のものＫより製品は天然の赤血球と同様の＃素親和性を
有するものであることがわかる。従って、本発明の製品
は肺における酸素の吸収に関して赤血球と実質的に均等
である。
他の重要な特徴は身体の組織に［素を運搬する能力であ
る。身体組織における酸素分圧下において、本発明のＴ
型構造に安定化した製品はアロステリック協同性の構造
的に安定化されていないヘモグロビン製品よりも実質的
に多量の酸素を組織に放出するであろう。この酸素放出
量が大きいということは救急医学において常Ｉ′ｃ遭遇
するように、たとえば組織を傷けられた外傷患者に輸血
する場合等において非常に重要となる。
る。身体組織における酸素分圧下において、本発明のＴ
型構造に安定化した製品はアロステリック協同性の構造
的に安定化されていないヘモグロビン製品よりも実質的
に多量の酸素を組織に放出するであろう。この酸素放出
量が大きいということは救急医学において常Ｉ′ｃ遭遇
するように、たとえば組織を傷けられた外傷患者に輸血
する場合等において非常に重要となる。
本発明と従来技術との非常に重要な相違は本発明の安定
化ヘモグロビン（Ｈｅｍｏｓａｆｅ Ｉ ）は高収率（
９５％以上）で容易に単一工程で製造され、しかも未安
定化のヘモグロビンが実質的に残らないということであ
る。このため、更に精製する必要がなく、従って残留未
反応物質を除去するための精製を行なわすとも溶液中に
低分子量二量体生成物がほとんど形成されない。従って
、構造の安定化された単量体Ｈｂ （Ｈｅｍｏ ８ａｆ
ｅ Ｉと称することがある）はストローマを含まないヘ
モグロビンの約３倍のプラズマ半減期を有し従って緊急
の場合の代用血液として非常Ｋａしているであろう。
化ヘモグロビン（Ｈｅｍｏｓａｆｅ Ｉ ）は高収率（
９５％以上）で容易に単一工程で製造され、しかも未安
定化のヘモグロビンが実質的に残らないということであ
る。このため、更に精製する必要がなく、従って残留未
反応物質を除去するための精製を行なわすとも溶液中に
低分子量二量体生成物がほとんど形成されない。従って
、構造の安定化された単量体Ｈｂ （Ｈｅｍｏ ８ａｆ
ｅ Ｉと称することがある）はストローマを含まないヘ
モグロビンの約３倍のプラズマ半減期を有し従って緊急
の場合の代用血液として非常Ｋａしているであろう。
更に、この安定化Ｈｂ■は他の新しいヘモグロビンに基
く製品の製造に非常に適している。Ｈｂ■は結合して重
合ヘモグロビン（ポリＨｂ■又はＨｅｍｏ ５ａｆｅＨ
）を生成することができこれは代用血液として有用であ
り、また分子量が大きくプラズマ半減期が長い故にそれ
自体で安定化四量体製品よりも好ましい。これは別のバ
イオポリマーと共有結合して代用血液として有用な複合
体（Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ Ｉ −複合体）を形成するこ
とができる。これらの転換のすべてにおいてヘモグロビ
ン西量体はその特定の構造（たとえば、Ｈｂ■）を保持
する。この製品は凍結乾燥して長期間保存できる。
く製品の製造に非常に適している。Ｈｂ■は結合して重
合ヘモグロビン（ポリＨｂ■又はＨｅｍｏ ５ａｆｅＨ
）を生成することができこれは代用血液として有用であ
り、また分子量が大きくプラズマ半減期が長い故にそれ
自体で安定化四量体製品よりも好ましい。これは別のバ
イオポリマーと共有結合して代用血液として有用な複合
体（Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ Ｉ −複合体）を形成するこ
とができる。これらの転換のすべてにおいてヘモグロビ
ン西量体はその特定の構造（たとえば、Ｈｂ■）を保持
する。この製品は凍結乾燥して長期間保存できる。
更に、実用上重要なことＫは、本発明の構造安定化した
ヘム含有四量体は第一鉄から第二鉄への鉄の酸化を防止
するために、たとえば、−酸化炭素又は酸化窒素の如き
、酸素置換剤又は亜ジチオン醪ナトリウムの如き醗素除
夫剤を存在せしめて処理し、次に汚染ウィルスを破壊す
るために低温殺菌することができる。本発明のＭ品はタ
ンパク質の変性又は製品の分解を起こすこと無く低温殺
菌に必要な加熱、即ち少くとも６０℃１０時間の加熱に
耐え得るに十分安定である。この方法は四量体、たとえ
ば■−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ Ｉ 、 ｙｔｌ リＶ−１
たとえば■−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ Ｉ及び複合体Ｃｏ−
Ｈｅｍｏ ５ａｆｅＩの低温ａ＜適用することができる
。次にこれらのＣｏ Ｈｅｍｏ ５ａｆｅはすべて構造
の機能的及び構造的完全さを失うことなく容易にオキシ
−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅに再転換することができ、このオ
キシ−）ｉ＝ｍｏ ５ａｆｅは代用血液として輸血に適
している。
ヘム含有四量体は第一鉄から第二鉄への鉄の酸化を防止
するために、たとえば、−酸化炭素又は酸化窒素の如き
、酸素置換剤又は亜ジチオン醪ナトリウムの如き醗素除
夫剤を存在せしめて処理し、次に汚染ウィルスを破壊す
るために低温殺菌することができる。本発明のＭ品はタ
ンパク質の変性又は製品の分解を起こすこと無く低温殺
菌に必要な加熱、即ち少くとも６０℃１０時間の加熱に
耐え得るに十分安定である。この方法は四量体、たとえ
ば■−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ Ｉ 、 ｙｔｌ リＶ−１
たとえば■−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ Ｉ及び複合体Ｃｏ−
Ｈｅｍｏ ５ａｆｅＩの低温ａ＜適用することができる
。次にこれらのＣｏ Ｈｅｍｏ ５ａｆｅはすべて構造
の機能的及び構造的完全さを失うことなく容易にオキシ
−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅに再転換することができ、このオ
キシ−）ｉ＝ｍｏ ５ａｆｅは代用血液として輸血に適
している。
また、この製品は重合あるいは複合を起こすか、起こす
ことなく酸化してシアン化物除去剤として有効でありそ
の予防に使用し得るメトヘモグロビン製品（ｍち、メト
−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ ）とすることができる。
ことなく酸化してシアン化物除去剤として有効でありそ
の予防に使用し得るメトヘモグロビン製品（ｍち、メト
−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ ）とすることができる。
即ち、本発明によると水性剤としたときに二量体への解
離及びＴ−型構造と几−型構造間の変化に対して安定化
した四量体ヘモグロビンユニットから本質的になるヘモ
グロビン製品が捉供されるのであり、前記四量体ユニッ
トはサブユニットのグロビン鮫間に共有化学結合をもっ
ており、安定化が行なわれるのである。
離及びＴ−型構造と几−型構造間の変化に対して安定化
した四量体ヘモグロビンユニットから本質的になるヘモ
グロビン製品が捉供されるのであり、前記四量体ユニッ
トはサブユニットのグロビン鮫間に共有化学結合をもっ
ており、安定化が行なわれるのである。
本発明の製品のＩＪＡ造において、デオキシ−Ｈｂ（Ｈ
ｂ■）の均一な組成を安定化し凍結中又は６０℃迄の温
度下で不安定化するのを防ぐための新規試剤、反応条件
及び方法が開発されたのであり、これにより最終製品の
低温殺蔚、凍結乾燥及び均一な生理的ｆｆｉ素親和性が
達成されたのである。
ｂ■）の均一な組成を安定化し凍結中又は６０℃迄の温
度下で不安定化するのを防ぐための新規試剤、反応条件
及び方法が開発されたのであり、これにより最終製品の
低温殺蔚、凍結乾燥及び均一な生理的ｆｆｉ素親和性が
達成されたのである。
構造特異性安定剤及び架ｍ斎 Ｃ８５Ｃ：本発明による
ｖＥｆｉ一体ヘモグロビン誘導体トの所望のＳ造及び分
子内安定化を達成する好ましい方法は構造特異性安定剤
及び架橋剤（ｃｓｓｃ ）と呼ばれるクラスの試剤１種
以上との反応によるもの費ある。最も普通なものはジア
ルデヒドとポリアルデヒドである。これらはグロビン鏡
上の第一アミノ基と反応してシック塩基結合を生成する
。このシック塩基結合はつづいて還元して第２アミン結
合とすることができる。四量体ヘモグロビンにおいては
α−鎖及びβ−鎖鏡上第１アミン基が適当に配置されて
おり、これらはジアルデヒド及びポリアルデヒドと優先
的にかつすべての意図及び目的にとっては選択的に反応
し、安定化のための所望の共有結合を生成する。
ｖＥｆｉ一体ヘモグロビン誘導体トの所望のＳ造及び分
子内安定化を達成する好ましい方法は構造特異性安定剤
及び架橋剤（ｃｓｓｃ ）と呼ばれるクラスの試剤１種
以上との反応によるもの費ある。最も普通なものはジア
ルデヒドとポリアルデヒドである。これらはグロビン鏡
上の第一アミノ基と反応してシック塩基結合を生成する
。このシック塩基結合はつづいて還元して第２アミン結
合とすることができる。四量体ヘモグロビンにおいては
α−鎖及びβ−鎖鏡上第１アミン基が適当に配置されて
おり、これらはジアルデヒド及びポリアルデヒドと優先
的にかつすべての意図及び目的にとっては選択的に反応
し、安定化のための所望の共有結合を生成する。
本発明においてｃｓｓｃとして使用するジアルデヒドの
一例は適切な条件下で用いる場合のグルタルアルデヒド
（０人）である。ヘモグロビンと０人との反応は以前に
報告されている。しかし、これらの方法は四量体ユニッ
トの構造の実質的に完全な安定化をもたらさず、また安
定化四量体から本質的に成る製品をもたらさない条件で
行なわれている。すでに使用されているように、グルタ
ルアルデヒドは非特異性試剤であり安定化のために四量
体のサブユニット間に分子内結合を形成するよりも速や
かに四量体間に共有的分子内結合な起ぷし重合ヘモグロ
ビンを形成する。その結果、広い分子量分布な育する安
定化四量体、未安定化１９鷺体及び安定化ポリマーとな
り、各成分は異なったｃｊ！素親和性を有する。
一例は適切な条件下で用いる場合のグルタルアルデヒド
（０人）である。ヘモグロビンと０人との反応は以前に
報告されている。しかし、これらの方法は四量体ユニッ
トの構造の実質的に完全な安定化をもたらさず、また安
定化四量体から本質的に成る製品をもたらさない条件で
行なわれている。すでに使用されているように、グルタ
ルアルデヒドは非特異性試剤であり安定化のために四量
体のサブユニット間に分子内結合を形成するよりも速や
かに四量体間に共有的分子内結合な起ぷし重合ヘモグロ
ビンを形成する。その結果、広い分子量分布な育する安
定化四量体、未安定化１９鷺体及び安定化ポリマーとな
り、各成分は異なったｃｊ！素親和性を有する。
本発明においては低濃度のへモグリビン（部ち、１−４
９／ｄ１）及ＴＪ＋ＧＡとヘモグロビンとの高いモル比
（即ち、約６＝１乃至約６１１）を用いてヘモグロビン
とＧＡとを反応せしめる。このような条件下では＆！！
！量体の形のＨｂモノマーは少（とも９５％、通常少く
とも９８′ｓが重合ヘモグロビン中で安定化される。か
くして、実質的に完全に構造の安定化した重合製品が得
られる。この安定化したポリマーの形の製品は次に低温
段１のために一酸化炭素と結合せしめることができる。
９／ｄ１）及ＴＪ＋ＧＡとヘモグロビンとの高いモル比
（即ち、約６＝１乃至約６１１）を用いてヘモグロビン
とＧＡとを反応せしめる。このような条件下では＆！！
！量体の形のＨｂモノマーは少（とも９５％、通常少く
とも９８′ｓが重合ヘモグロビン中で安定化される。か
くして、実質的に完全に構造の安定化した重合製品が得
られる。この安定化したポリマーの形の製品は次に低温
段１のために一酸化炭素と結合せしめることができる。
動物ヘモグロビンに基（代用血液を人間に用いる場合、
抗原性のためオリゴマー及びポリマーの生成を防止すべ
°きである。
抗原性のためオリゴマー及びポリマーの生成を防止すべ
°きである。
モノマー形のＨｂ （Ｈｂ■〕をＧＡで固定する過程で
重合化する傾向が大きい。従って本発明の好ましい態様
においてはヘモグロビン（Ｈｂ ）の安定化においては
異なったｃｓｓｃ試剤及び反応条件を使用する。これら
のＣ８８Ｃ化合物を使用することＫよりＨｂモノマーの
安定化、ポリ！−の生成を伴わすに最小の二量体の形成
（く５％）を達成することができ更にこれらのｃｓｓｃ
化合物は一般に所望ならば最小の重合を伴って、選択し
た構造の他の高分子を安定化するのに使用することがで
きる。このよ５なｃｓｓｃ化合物は特有の構造の高分子
を安定化することにより生物高分子の活性及び機能を保
持することができる。しかし、ｃｓｓｃ化合物を用いる
ことにより更に反応条件を慎重に調節して高分子をお互
いに結合せしめ（重合）、あるいは別の高分子、たとえ
ばイヌリンと複合せしめることができる。具体的には結
合試剤としてのこのよ５なｃｓｓｃ化合物とともにタイ
ト■構造のデオ中シヘモグロビン（Ｈｂ■）を用い、反
応条件 、を調節して、安定化Ｈｂ■と別の高分子との
結合及び所望ならば安定化Ｈｂｆｉ七ツマ−の重合を行
なうことができる。このようなｃｓｓｃ化合物はヘモグ
ロビン誘導体、たとえばＰＬＰ−Ｈｂを反応条件に応じ
て安定化及び重合し、更にこの誘導体を別の高分子に結
合するのに使用することもできる。
重合化する傾向が大きい。従って本発明の好ましい態様
においてはヘモグロビン（Ｈｂ ）の安定化においては
異なったｃｓｓｃ試剤及び反応条件を使用する。これら
のＣ８８Ｃ化合物を使用することＫよりＨｂモノマーの
安定化、ポリ！−の生成を伴わすに最小の二量体の形成
（く５％）を達成することができ更にこれらのｃｓｓｃ
化合物は一般に所望ならば最小の重合を伴って、選択し
た構造の他の高分子を安定化するのに使用することがで
きる。このよ５なｃｓｓｃ化合物は特有の構造の高分子
を安定化することにより生物高分子の活性及び機能を保
持することができる。しかし、ｃｓｓｃ化合物を用いる
ことにより更に反応条件を慎重に調節して高分子をお互
いに結合せしめ（重合）、あるいは別の高分子、たとえ
ばイヌリンと複合せしめることができる。具体的には結
合試剤としてのこのよ５なｃｓｓｃ化合物とともにタイ
ト■構造のデオ中シヘモグロビン（Ｈｂ■）を用い、反
応条件 、を調節して、安定化Ｈｂ■と別の高分子との
結合及び所望ならば安定化Ｈｂｆｉ七ツマ−の重合を行
なうことができる。このようなｃｓｓｃ化合物はヘモグ
ロビン誘導体、たとえばＰＬＰ−Ｈｂを反応条件に応じ
て安定化及び重合し、更にこの誘導体を別の高分子に結
合するのに使用することもできる。
本発明で用いるＣ８８Ｃ化合物は一般にジアルデヒド及
びポリアルデヒドである。その−具体例はＨＯＣ−Ｃ０
）１０式を有するグリオキサールである。
びポリアルデヒドである。その−具体例はＨＯＣ−Ｃ０
）１０式を有するグリオキサールである。
他の例はベンゼンジアルデヒド（オルト、メタ及びパラ
）である。ただし残りの芳香族基からの免疫原反応の危
険があるので芳香族架橋剤はあまり好ましくない。ｃｓ
ｓｃ化合物として最も好ましいものは単糖類及びオリゴ
糖類における酸化開票反応によって生成するアルデヒド
系生成物である。
）である。ただし残りの芳香族基からの免疫原反応の危
険があるので芳香族架橋剤はあまり好ましくない。ｃｓ
ｓｃ化合物として最も好ましいものは単糖類及びオリゴ
糖類における酸化開票反応によって生成するアルデヒド
系生成物である。
たとえば過沃素酸塩酸化を用いるこのような反応は知ら
れている。この反応によりオリゴ糖中の各糖モノマーに
つき２個のアルデヒド基を有する生成物が得られる。即
ち、たとえば６個のアルデヒド基が１つの２フイノース
（０−ラフィノース）又はマルトトリオース（０−マル
トトリオース）から生成する。同族列内において、グル
コースのような二価アルデヒドと同程度のサブユニット
安定化を達成するに必要なポリアルデヒド架橋剤のそル
当量数はｃｓｓｃの原子価に反比例する。ＧＡとは対照
的にＯ−ラフィノースは分子内架Ｗ特異性を有し、した
がってＨｂに対して高いモル比（２０：１）の０−ラフ
ィノースをポリマーを含まないＨｂ■のＣ１１整に用い
ることができる。この発見はＣ８５ＣがＨｂモノマーを
最少の分子内架橋をもって特定の構造に有効に安定化す
ることを示している。
れている。この反応によりオリゴ糖中の各糖モノマーに
つき２個のアルデヒド基を有する生成物が得られる。即
ち、たとえば６個のアルデヒド基が１つの２フイノース
（０−ラフィノース）又はマルトトリオース（０−マル
トトリオース）から生成する。同族列内において、グル
コースのような二価アルデヒドと同程度のサブユニット
安定化を達成するに必要なポリアルデヒド架橋剤のそル
当量数はｃｓｓｃの原子価に反比例する。ＧＡとは対照
的にＯ−ラフィノースは分子内架Ｗ特異性を有し、した
がってＨｂに対して高いモル比（２０：１）の０−ラフ
ィノースをポリマーを含まないＨｂ■のＣ１１整に用い
ることができる。この発見はＣ８５ＣがＨｂモノマーを
最少の分子内架橋をもって特定の構造に有効に安定化す
ることを示している。
これｋより重合反応を遅らせ反応の有効な制御が可能と
なり実質的にポリマーを含まぬ安定化Ｈｂ製品を容易に
製造することができる。
なり実質的にポリマーを含まぬ安定化Ｈｂ製品を容易に
製造することができる。
有用なｃｓｓｃ化合物の具体例としてはグルコース、イ
ヌリン、マルトース、マルトトリオース、マルトトリー
ス、マルトペントース、マルトヘキソース及びマルトヘ
プトースのような糖類の沃素醒塩酸化糖の同族列がある
。一般に糖類の開環酸化によってｌ！Ｉ導されたｃｓｓ
ｃ化合物は下記の式に対応する。
ヌリン、マルトース、マルトトリオース、マルトトリー
ス、マルトペントース、マルトヘキソース及びマルトヘ
プトースのような糖類の沃素醒塩酸化糖の同族列がある
。一般に糖類の開環酸化によってｌ！Ｉ導されたｃｓｓ
ｃ化合物は下記の式に対応する。
上記式中Ｒ、Ｒ，、ａ、 、 Ｒ，、Ｉｔ４及ヒＲ，ハ
ソｔＬぞれ水素、ヒドロキシル、メトキシ及びヒト四キ
シメチルから選ばれ、ｍは０又はｌであり、Ｑは３６以
下の糖成分を有するジ−又はオリゴ糖の酸化開環から得
られる化学基である。
ソｔＬぞれ水素、ヒドロキシル、メトキシ及びヒト四キ
シメチルから選ばれ、ｍは０又はｌであり、Ｑは３６以
下の糖成分を有するジ−又はオリゴ糖の酸化開環から得
られる化学基である。
出発化合物がラフィノース（三糖）の場合ｃｓｓｃ酸化
生成物は下記の式を有する。
生成物は下記の式を有する。
出発化合物がイヌリン（多糖類）の場合、Ｃ８５Ｃ酸化
生成物は下記の式を有する。
生成物は下記の式を有する。
このように本発明で使用する架橋剤は従来技術におい一
’（Ｈｂをその四量体の形に安定化及び架橋するのに従
来用いられているＤＰＧアナローグと全く相違する。こ
れらはホスフェートやカルボ中シレートのような負に帯
電した基をもたずＨｂのＤＰＧ部位と特異的に反応する
ことは知られていない。従って、これらは人間及び家畜
動物由来のＨｂの構造安定化を行ない構造中に各Ｈｂユ
二ットを保持せしめることができるのであり、このｗ１
！２中でＨｂユニットが架橋剤と出合い反応するのであ
る。
’（Ｈｂをその四量体の形に安定化及び架橋するのに従
来用いられているＤＰＧアナローグと全く相違する。こ
れらはホスフェートやカルボ中シレートのような負に帯
電した基をもたずＨｂのＤＰＧ部位と特異的に反応する
ことは知られていない。従って、これらは人間及び家畜
動物由来のＨｂの構造安定化を行ない構造中に各Ｈｂユ
二ットを保持せしめることができるのであり、このｗ１
！２中でＨｂユニットが架橋剤と出合い反応するのであ
る。
ヘモグロビンに対するアルデヒドの相対量は少くとも１
２：１、好ましくは少くとも６０：１のヘモグロビンに
対するアルデヒド基のモル比をもたらすように調整する
のが好ましい。即ち、ポリアルデヒドを用いる場合はジ
アルデヒドを用いる場合よりも同量のヘモグロビンに対
し小量のポリアルデヒドが必要である。モル比の計算は
ヘモグロビンが約５０の第１アミン基を有するものと仮
定して行なう。本発明におけるグロビン鎖結合反応は部
位特異的である必要がないので、安定化製品な高収率（
少くとも９５％）で得るために過剰モル比のアルデヒド
（たとえば、０−ラフィノースの場合５−３００モル比
を使用することができ、好ましくは２０：１である）を
使用することができる。部位ＩＲ異的反応を必要とする
従来技術では実質的に化学量論量の試剤を使用しなけれ
ばならず、その結果収率が低下する。反応は４℃−３７
℃、好ましくは周囲温度で水溶液中で行なうのが好まし
い。反応混合物のｐＨは適当な曖衝剤により６．７乃至
９．５、好ましくは＆ＯＫｇ節すべきである。
２：１、好ましくは少くとも６０：１のヘモグロビンに
対するアルデヒド基のモル比をもたらすように調整する
のが好ましい。即ち、ポリアルデヒドを用いる場合はジ
アルデヒドを用いる場合よりも同量のヘモグロビンに対
し小量のポリアルデヒドが必要である。モル比の計算は
ヘモグロビンが約５０の第１アミン基を有するものと仮
定して行なう。本発明におけるグロビン鎖結合反応は部
位特異的である必要がないので、安定化製品な高収率（
少くとも９５％）で得るために過剰モル比のアルデヒド
（たとえば、０−ラフィノースの場合５−３００モル比
を使用することができ、好ましくは２０：１である）を
使用することができる。部位ＩＲ異的反応を必要とする
従来技術では実質的に化学量論量の試剤を使用しなけれ
ばならず、その結果収率が低下する。反応は４℃−３７
℃、好ましくは周囲温度で水溶液中で行なうのが好まし
い。反応混合物のｐＨは適当な曖衝剤により６．７乃至
９．５、好ましくは＆ＯＫｇ節すべきである。
ポリＨｂのをＭ造するのに架橋剤としてＧＡを用いる場
合は、反応を適切に制御するため約５−７９７ｄｌより
低い溶液濃度のＨｂを用いるべきである。
合は、反応を適切に制御するため約５−７９７ｄｌより
低い溶液濃度のＨｂを用いるべきである。
しかしその他のＣ８５Ｃ物質の場合は反応を容易に制御
することができるので、広い範囲のＨｂ ｉ度、たとえ
ば１−２０９７ｄｌ 、好ましくは３−４７肩を用いる
ことができる。
することができるので、広い範囲のＨｂ ｉ度、たとえ
ば１−２０９７ｄｌ 、好ましくは３−４７肩を用いる
ことができる。
赤血球から得られるような基質（ｓｔｒｏｍａ ）を含
まないヘモグロビンは約３−４ ｇ／ｄ／のヘモクロビ
ン濃度を有する。このヘモグロビン溶液は稀釈や汐縮な
せずに用いるのが便利である。好ましいｆｉ度は選択し
たアルデヒドによって決まる。かくして、二価ＧＡＩＣ
対する新規ｃｓｓｃの利点はポリマーを含まぬ人間Ｈｂ
ｉｌ導体及びポリマーを含まぬ動物Ｈｂ Ｍ導体の製
造に等しく適用できるが、０−ラフィノースのような新
規ｃｓｓｃを用いてポできる。
まないヘモグロビンは約３−４ ｇ／ｄ／のヘモクロビ
ン濃度を有する。このヘモグロビン溶液は稀釈や汐縮な
せずに用いるのが便利である。好ましいｆｉ度は選択し
たアルデヒドによって決まる。かくして、二価ＧＡＩＣ
対する新規ｃｓｓｃの利点はポリマーを含まぬ人間Ｈｂ
ｉｌ導体及びポリマーを含まぬ動物Ｈｂ Ｍ導体の製
造に等しく適用できるが、０−ラフィノースのような新
規ｃｓｓｃを用いてポできる。
安定化ヘモグロビン：
本発明の構造安定化が架橋されたデオキシ−Ｈｂ（ＸＬ
−Ｈｂ■）の製造において適当な時ＭＫ還元剤又は急冷
剤を添加することにより二量体、二量体、四量体及び窩
ポリマーを生成する分子内架杖が始まる前にデオキシ−
Ｈｂの分子内架橋反応を終了せしめることができる。第
一アミン基とｃｓＳＣのアルデヒド基との反応によりシ
ック塩基結合が生成する。水素化ホウ素ナトリウム又は
水素化ホウ素カリウム等を添加するとシック塩基結合が
第二アミン結合に還元゛され、また過剰のアルデヒド基
が第一アルコールに還元され、かくして史に架橋が進む
のが止まる。ａ切な還元時間は反応混合物のサンプルを
高圧液体クロマトグラフィ゛（ＨＰＬＣ）分析すること
Ｋより得ることができる。
−Ｈｂ■）の製造において適当な時ＭＫ還元剤又は急冷
剤を添加することにより二量体、二量体、四量体及び窩
ポリマーを生成する分子内架杖が始まる前にデオキシ−
Ｈｂの分子内架橋反応を終了せしめることができる。第
一アミン基とｃｓＳＣのアルデヒド基との反応によりシ
ック塩基結合が生成する。水素化ホウ素ナトリウム又は
水素化ホウ素カリウム等を添加するとシック塩基結合が
第二アミン結合に還元゛され、また過剰のアルデヒド基
が第一アルコールに還元され、かくして史に架橋が進む
のが止まる。ａ切な還元時間は反応混合物のサンプルを
高圧液体クロマトグラフィ゛（ＨＰＬＣ）分析すること
Ｋより得ることができる。
構造安定化四量体Ｈｂｇ品は一準的方法により回収及び
精製することができる。即ち、製品な膜濾過；（より洗
浄及び濃縮し、血ｇ系中の半減期が比較的短かくてもよ
い緊急の場合の基準に基き代用血猷として用いるために
生理的塩類溶液として形成してもよい。あるいは、本発
明による他の製品を製造するための出発物質として用い
てもよい。
精製することができる。即ち、製品な膜濾過；（より洗
浄及び濃縮し、血ｇ系中の半減期が比較的短かくてもよ
い緊急の場合の基準に基き代用血猷として用いるために
生理的塩類溶液として形成してもよい。あるいは、本発
明による他の製品を製造するための出発物質として用い
てもよい。
重合安定化ヘモグロビン
上記の他の製品の一つは重合したＨｂ （Ｊ（ｅｍ。
５ａｆｅ ｎ ）であり、構造安定化され、解離に対し
ても安定化された四量体ヘモグロビン（Ｈｅｍｏ ５ａ
ｆｅ・１）が分子内結合し好ましくはヘモグロビン濃度
１４ ｇ鷹１ｃおいて等膨張圧を与える分子量を有する
重合Ｈｂが形成されている。重合は構造の安定化を与え
るのに用いるのと同じでもよく異なっていてもよいジア
ルデヒド又はポリアルデヒドを使用するととＫより適切
に達成される。従来技術、たとえばグルタルアルデヒド
を用いることにより製造されたポリ（Ｈｂ）Ｍ品はＨｅ
ｍｏ ５ａｆｅ ｌから１１ｉ造されたものではないか
ら本発明の製品の完全な構辺安定性をもっていなかった
。
ても安定化された四量体ヘモグロビン（Ｈｅｍｏ ５ａ
ｆｅ・１）が分子内結合し好ましくはヘモグロビン濃度
１４ ｇ鷹１ｃおいて等膨張圧を与える分子量を有する
重合Ｈｂが形成されている。重合は構造の安定化を与え
るのに用いるのと同じでもよく異なっていてもよいジア
ルデヒド又はポリアルデヒドを使用するととＫより適切
に達成される。従来技術、たとえばグルタルアルデヒド
を用いることにより製造されたポリ（Ｈｂ）Ｍ品はＨｅ
ｍｏ ５ａｆｅ ｌから１１ｉ造されたものではないか
ら本発明の製品の完全な構辺安定性をもっていなかった
。
本発明のポリマー製品は分子１１（ポリマー中の具ニッ
トの数）の異なるポリマーの混合物を含んでいてもよい
。しかし、すべてのポリマーはＴ−構造で安定化されて
いる。すべてのポリマーは同一あるいは実質的に同一の
酸素親和性を有するものである。従って本発明の重合化
製品は従来技術の均一な酸素親和性を有し、たやすく再
現し得る組成のものよりもすぐれている。
トの数）の異なるポリマーの混合物を含んでいてもよい
。しかし、すべてのポリマーはＴ−構造で安定化されて
いる。すべてのポリマーは同一あるいは実質的に同一の
酸素親和性を有するものである。従って本発明の重合化
製品は従来技術の均一な酸素親和性を有し、たやすく再
現し得る組成のものよりもすぐれている。
これらポリマーを製造するための適当な反応条件は室温
（約３７℃を越えてはいけない）で水溶液である。ヘモ
グロビンに対するアルデヒドの比はＨｂ １モルにつき
アルデヒド基のモルに基き２乃至１００が適当である。
（約３７℃を越えてはいけない）で水溶液である。ヘモ
グロビンに対するアルデヒドの比はＨｂ １モルにつき
アルデヒド基のモルに基き２乃至１００が適当である。
反応溶液はｐＨ６，７乃至９．５、好ましくは＆０に緩
衝すべきである。ホウ水素化ナトリウム又はシアノホウ
水素化ナトリウムのような還元剤を添加して残りのアル
デヒド基を還元し、シック塩基を安定な共有炭素−窒素
結合に変換するととｋより反応を完了することができる
。
衝すべきである。ホウ水素化ナトリウム又はシアノホウ
水素化ナトリウムのような還元剤を添加して残りのアル
デヒド基を還元し、シック塩基を安定な共有炭素−窒素
結合に変換するととｋより反応を完了することができる
。
本発明の特に好ましいポリマー組成物は構成ポリマーの
２０−２５％が５以上の四量体へモグロビンモノマーユ
ニツ）ヲ有Ｌ、５０−６０％カ２−４のヘモグロビンモ
ノマーユ二ットヲ有シ、２〇−２５％カ単一ヘモグロビ
ンニニツ）（分子ｆｆ１６４キロダルトン）を有し、１
−２％が不完全に安定化したヘモグロビンである分子量
分布を有するものである。このような組成物は１４９７
ｄｉで同膨張性であり、血圧の問題を起こすことなく代
用血液として血液と等容量で用いることができる。
２０−２５％が５以上の四量体へモグロビンモノマーユ
ニツ）ヲ有Ｌ、５０−６０％カ２−４のヘモグロビンモ
ノマーユ二ットヲ有シ、２〇−２５％カ単一ヘモグロビ
ンニニツ）（分子ｆｆ１６４キロダルトン）を有し、１
−２％が不完全に安定化したヘモグロビンである分子量
分布を有するものである。このような組成物は１４９７
ｄｉで同膨張性であり、血圧の問題を起こすことなく代
用血液として血液と等容量で用いることができる。
安定化ヘモグロビン複合体
このような製品のもう一つは「複合Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ
１」であり、構造安定化及び解離安定化したヘモグロビ
ン（Ｈｅｍｏ ５ａｔｅ ｌ ）が共有結合により生物
高分子と複合し望ましくは高分子量の製品が形成された
ものである。へそグロビンと生物ポリマー（イヌリン、
デキストラン、ヒドロキシエチ／Ｉ／＃粉等）との複合
体は従来公知である。しかし、本発明においては従来技
術と同じ生物ポリマー及び同様なヘモグロビンへの結合
方法を用いることができるのであるが、ヘモグロビンは
複合ｇにおいて構造安定性、好ましくはＴ構造を保持し
ており、前述の如き利点を伴う・ 本発明において複合体を製造するためのポリマーとして
特に好ましいものはイヌリンである。これは約５ｏｏｏ
の分子量を有する多糖類であり診断試薬として用いられ
る。
１」であり、構造安定化及び解離安定化したヘモグロビ
ン（Ｈｅｍｏ ５ａｔｅ ｌ ）が共有結合により生物
高分子と複合し望ましくは高分子量の製品が形成された
ものである。へそグロビンと生物ポリマー（イヌリン、
デキストラン、ヒドロキシエチ／Ｉ／＃粉等）との複合
体は従来公知である。しかし、本発明においては従来技
術と同じ生物ポリマー及び同様なヘモグロビンへの結合
方法を用いることができるのであるが、ヘモグロビンは
複合ｇにおいて構造安定性、好ましくはＴ構造を保持し
ており、前述の如き利点を伴う・ 本発明において複合体を製造するためのポリマーとして
特に好ましいものはイヌリンである。これは約５ｏｏｏ
の分子量を有する多糖類であり診断試薬として用いられ
る。
低湿殺菌製品
従来の安定化、重合及び複合方法では高分子が加熱、乾
燥又は凍結されたときヘムの酸化又は高分子の変性が防
止されていない。本発明によればヘム含有高分子が前述
のように先づ安定化され、次に任意に重合又は複合され
たとき、たとえば酸素置換剤又は除失剤を用いることｋ
より、あるいは好ましくは、たとえば変性を起こすこと
なく低温殺菌及び凍結乾燥を行なうことができるカーボ
ンモノオキシ−ヘム訪導体を形成する方法により一酸化
炭素（ＣＯ）又は震化窒素と反応せしめて得られるよう
なヘム保護錯体を形成することによりヘム含有高分子の
熱酸化を防止することができる。
燥又は凍結されたときヘムの酸化又は高分子の変性が防
止されていない。本発明によればヘム含有高分子が前述
のように先づ安定化され、次に任意に重合又は複合され
たとき、たとえば酸素置換剤又は除失剤を用いることｋ
より、あるいは好ましくは、たとえば変性を起こすこと
なく低温殺菌及び凍結乾燥を行なうことができるカーボ
ンモノオキシ−ヘム訪導体を形成する方法により一酸化
炭素（ＣＯ）又は震化窒素と反応せしめて得られるよう
なヘム保護錯体を形成することによりヘム含有高分子の
熱酸化を防止することができる。
具体的にはＧＡ又はｃｓｓｃ物質を用いて誘導した新規
安定化ヘモグロビンＫＣＯを添加することによりここで
はＣＯ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅとも呼ぶ新規製品が得られ
る。この目的のためｋは、ヘモグロビン製品を単離せず
に反応混合物ｋＣＯを添加することができる。すでに安
定化したヘモグロビンにおいてはＣＯＫよるヘムの保護
と７０ステリツク構造変化の防止とが相まって熱及び凍
結乾燥条件下でのＣＯ−Ｈｅｍｏ ８ａｆｅの酸化及び
変性を防止する。Ｈｅｍｏ ５ａｔｅ ｌ 、 Ｈｅｍ
ｏｓａｆｅ ＩＩ及びＨｅｍｏ ｓ ａ ｆ ｅ ｌ−
イヌリン又はその他のヘモグロビンに基く代用血液にカ
ーボンモノオキシレージョン（ｃａｒｂｏｎｍｏｎｏｘ
ｙｌａｔｉｏｎ ）及び低温殺菌を適用することは従来
知られていない。
安定化ヘモグロビンＫＣＯを添加することによりここで
はＣＯ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅとも呼ぶ新規製品が得られ
る。この目的のためｋは、ヘモグロビン製品を単離せず
に反応混合物ｋＣＯを添加することができる。すでに安
定化したヘモグロビンにおいてはＣＯＫよるヘムの保護
と７０ステリツク構造変化の防止とが相まって熱及び凍
結乾燥条件下でのＣＯ−Ｈｅｍｏ ８ａｆｅの酸化及び
変性を防止する。Ｈｅｍｏ ５ａｔｅ ｌ 、 Ｈｅｍ
ｏｓａｆｅ ＩＩ及びＨｅｍｏ ｓ ａ ｆ ｅ ｌ−
イヌリン又はその他のヘモグロビンに基く代用血液にカ
ーボンモノオキシレージョン（ｃａｒｂｏｎｍｏｎｏｘ
ｙｌａｔｉｏｎ ）及び低温殺菌を適用することは従来
知られていない。
適当な保護剤を添加しないでヘモグロビン誘導体を低温
殺菌（たとえば６０℃における１０時間の湿熱）及び凍
結乾燥すると沈澱及び変性をもたらす。本発明の独特の
方法で安定化したヘモグロビンのへムをＣＯで保護する
ことＫよりＣＯ−Ｈｅｍｏ ８ａｆｅ製品の加熱及び凍
結乾燥を問題なく達成することができる。この低温殺菌
によりウィルスに感染していない可溶性非変性ＣＯ−Ｈ
ｅｍｏ Ｓａｆｅが得られる。また、前記凍結乾燥によ
り乾燥ＣＯ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ製品が得られる。液状
及び乾燥ＣＯ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ製品は両方とも通常
の温度において長期間の貯蔵が可能である（たとえば５
６℃で６０日間）。ＣＯ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅは安定で
あるが酸素を運搬しない。従って輸血に使用するｋは酸
素の存在下で光により処理することによりＣＯ−Ｈｅｍ
。
殺菌（たとえば６０℃における１０時間の湿熱）及び凍
結乾燥すると沈澱及び変性をもたらす。本発明の独特の
方法で安定化したヘモグロビンのへムをＣＯで保護する
ことＫよりＣＯ−Ｈｅｍｏ ８ａｆｅ製品の加熱及び凍
結乾燥を問題なく達成することができる。この低温殺菌
によりウィルスに感染していない可溶性非変性ＣＯ−Ｈ
ｅｍｏ Ｓａｆｅが得られる。また、前記凍結乾燥によ
り乾燥ＣＯ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ製品が得られる。液状
及び乾燥ＣＯ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ製品は両方とも通常
の温度において長期間の貯蔵が可能である（たとえば５
６℃で６０日間）。ＣＯ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅは安定で
あるが酸素を運搬しない。従って輸血に使用するｋは酸
素の存在下で光により処理することによりＣＯ−Ｈｅｍ
。
５ａｆｅ溶液をオキシ−Ｈｅｍｅ ５ａｆｅ溶液に転換
せしめる。かくして、本発明のもう一つの特徴は輸血前
Ｋ ＣＯ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅをオ午シー Ｈｅｍｏ
５ａｆｅ Ｋ光により変換せしめることである。
せしめる。かくして、本発明のもう一つの特徴は輸血前
Ｋ ＣＯ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅをオ午シー Ｈｅｍｏ
５ａｆｅ Ｋ光により変換せしめることである。
本発明の方法の初期段階で使用するＧＡｌ！１１度（Ｍ
Ｊち、５ ｍＭ ）は従来技１［ｃおいてＨＴＬＶ −
１／ＬＡＹ又はＨＩＶ−１として知られているウィルス
の９５％を失活せしめるのく必要であると報告されてい
る１ ｍＭよりも高ｍ度である。しかし、ウィルス感染
に対する安全性の保証は低温殺菌、即ち６０℃ＫＩＯ時
間加熱（これはアルブミンの如きプラズマ−誘導医薬品
に対して認められている標準処理である）することによ
り達成することができる。
Ｊち、５ ｍＭ ）は従来技１［ｃおいてＨＴＬＶ −
１／ＬＡＹ又はＨＩＶ−１として知られているウィルス
の９５％を失活せしめるのく必要であると報告されてい
る１ ｍＭよりも高ｍ度である。しかし、ウィルス感染
に対する安全性の保証は低温殺菌、即ち６０℃ＫＩＯ時
間加熱（これはアルブミンの如きプラズマ−誘導医薬品
に対して認められている標準処理である）することによ
り達成することができる。
もし、たとえば前述のようにして誘導した安定化オキシ
−Ｈｂ■を６０″ｃＫＩＯ時間さらしたら、褐色の沈澱
物（即ち、変性メ）−Ｈｂ■）が生成し、もはや使用で
きなくなる。しかし、安定化Ｈｂ■のそのカーボンモノ
オキシ誘導体への変換によりＣＯ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ
ｌ■が生成し、可視スペクトル、酸素親和性（Ｈち、
Ｐ、。）又はＨＰＬＣ分析で示される組成のような生理
化学的性質に実質的な変化をもたらすことなく溶液中２
５℃又は５６℃で６０日以内の保存及び低温殺菌が可能
となる。更に、ＣＯ−Ｈｅｍｏ ８ａｆｅ ｌ■は上で
低温殺菌について述べたような生理化学的性質の実質的
な変化をもたらすことなく凍結乾燥し２５℃又は５６℃
で６０日間の保存が可能である。
−Ｈｂ■を６０″ｃＫＩＯ時間さらしたら、褐色の沈澱
物（即ち、変性メ）−Ｈｂ■）が生成し、もはや使用で
きなくなる。しかし、安定化Ｈｂ■のそのカーボンモノ
オキシ誘導体への変換によりＣＯ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ
ｌ■が生成し、可視スペクトル、酸素親和性（Ｈち、
Ｐ、。）又はＨＰＬＣ分析で示される組成のような生理
化学的性質に実質的な変化をもたらすことなく溶液中２
５℃又は５６℃で６０日以内の保存及び低温殺菌が可能
となる。更に、ＣＯ−Ｈｅｍｏ ８ａｆｅ ｌ■は上で
低温殺菌について述べたような生理化学的性質の実質的
な変化をもたらすことなく凍結乾燥し２５℃又は５６℃
で６０日間の保存が可能である。
輸注可能な製品
純粋のＣＯ−Ｈｅｍｏｓａｆｅは酸素を結合又は運搬し
ないから、その調製、低温殺菌及び凍結乾燥操作を通じ
て安定であるＫもかかわらず酸素の運搬及び輸注には不
適である。無菌条件下でＣＯを除去することが代用血液
として使用するための必要条件である。従って、本発明
はＣＯ−Ｈｅｍｏ ８ａｆｅを容易に酸素化誘導体オキ
シ−ヘモグロビンに光変換できることを教えるものであ
る。このためＫは、酸素を溶液に供給し、次にこの溶液
を可視光線にさらされている透明な管の中に通せばよい
。
ないから、その調製、低温殺菌及び凍結乾燥操作を通じ
て安定であるＫもかかわらず酸素の運搬及び輸注には不
適である。無菌条件下でＣＯを除去することが代用血液
として使用するための必要条件である。従って、本発明
はＣＯ−Ｈｅｍｏ ８ａｆｅを容易に酸素化誘導体オキ
シ−ヘモグロビンに光変換できることを教えるものであ
る。このためＫは、酸素を溶液に供給し、次にこの溶液
を可視光線にさらされている透明な管の中に通せばよい
。
ＣＯ−Ｈｅｍｏｓａｆｅ及び、ｔ キ°シーＨｅｍｏ
５ａｆｅの光吸収スペクトルにより、これら２種の特性
決定及び定量を簡単に行なうことができる。現在入手可
能なポリＰＬＰ−Ｈｂ−のような代用血液に比へＨｅｍ
。
５ａｆｅの光吸収スペクトルにより、これら２種の特性
決定及び定量を簡単に行なうことができる。現在入手可
能なポリＰＬＰ−Ｈｂ−のような代用血液に比へＨｅｍ
。
５ａｆｅは生理学的及び均一な酸素親和性という利点を
有する。そのプレカーサーであるＣ： Ｏ−Ｈｅｍ。
有する。そのプレカーサーであるＣ： Ｏ−Ｈｅｍ。
５ａｆｅは低温殺菌、凍結乾燥、光転換及び６０℃以下
における保存の条件下において安定性を示す。
における保存の条件下において安定性を示す。
即ち、本発明はウィルス感染の無い効果の大なる代用血
液を製造する方法を教示するものである。
液を製造する方法を教示するものである。
また、本発明により、カーボンモノオキシレージ冒ンの
方法によって与えられた安定性は従来のすべてのＨｂに
基く代用血液に適用できることが発見された。たとえば
、本発明によればポリＰＬＰ−Ｈｂ（ポリＣＯ−Ｐ Ｌ
Ｐ−Ｈｂ ） 、Ａ Ｔ Ｐ−Ｈｂ（Ｃｏ−ＡＴＰ−
Ｈｂ）及びポリＡＴＰ−Ｈｂ（ポリＣＯ−Ａ Ｔ Ｐ−
Ｈｂ ）のカルボモノオキシ誘導体は等しく安定であり
、低温殺菌可能であり、そのオキシ誘導体に光変換可能
であることが明らかｋなった。即ち、本発明はヘモグロ
ビンに基く酸素運搬蘇生液から病原ウィルスを消去し、
かつその保存性を向上せしめるための一般的に必要な処
理として適用し得る方法を包含する。従って、デ中スト
ラン−Ｈｂ 、ヒドロキシエチル澱粉Ｈｂ、ポリエチレ
ングリコール−Ｈｂ及びジアスピリン架橋Ｈｂのような
すべての現存するヘモグロビンに基づく代用血液は本願
に記載と同じ方法によりウィルス感染の無い状態とする
ことができる。
方法によって与えられた安定性は従来のすべてのＨｂに
基く代用血液に適用できることが発見された。たとえば
、本発明によればポリＰＬＰ−Ｈｂ（ポリＣＯ−Ｐ Ｌ
Ｐ−Ｈｂ ） 、Ａ Ｔ Ｐ−Ｈｂ（Ｃｏ−ＡＴＰ−
Ｈｂ）及びポリＡＴＰ−Ｈｂ（ポリＣＯ−Ａ Ｔ Ｐ−
Ｈｂ ）のカルボモノオキシ誘導体は等しく安定であり
、低温殺菌可能であり、そのオキシ誘導体に光変換可能
であることが明らかｋなった。即ち、本発明はヘモグロ
ビンに基く酸素運搬蘇生液から病原ウィルスを消去し、
かつその保存性を向上せしめるための一般的に必要な処
理として適用し得る方法を包含する。従って、デ中スト
ラン−Ｈｂ 、ヒドロキシエチル澱粉Ｈｂ、ポリエチレ
ングリコール−Ｈｂ及びジアスピリン架橋Ｈｂのような
すべての現存するヘモグロビンに基づく代用血液は本願
に記載と同じ方法によりウィルス感染の無い状態とする
ことができる。
本発明のＨｅｍｏ ５ａｆｅの好ましい実用的方法を下
記ｋまとめる。
記ｋまとめる。
（ｉ） プールした全血をＮａＣ４等張液で稀釈し模
型濾過系に入れる。
型濾過系に入れる。
（均 接線方向流膜濾過により血液の細胞成分からプラ
ズマを分離するＯ Ｑｉり赤血球を等張生理的食塩水中で洗浄する。
ズマを分離するＯ Ｑｉり赤血球を等張生理的食塩水中で洗浄する。
（場 赤血球を低張リン酸緩衝液で溶解し、ＪｆｔＩＩ
！１片及びその他の特殊な物質を接線流濾過により可溶
性ヘモグロビンから分離する。
！１片及びその他の特殊な物質を接線流濾過により可溶
性ヘモグロビンから分離する。
（ｖ）真空又はガス交換器及び還元剤によりオキシ−Ｈ
ｂをデオキシ−Ｈｂに変換する。
ｂをデオキシ−Ｈｂに変換する。
（ｖＩ）構造特異性安定化架橋剤（ｃｓｓｃ ）を添加
することによりデオキシ−Ｈｂをモノマー又はポリマー
組成物あるいは複合体の所望の形に安定化させる。
することによりデオキシ−Ｈｂをモノマー又はポリマー
組成物あるいは複合体の所望の形に安定化させる。
（ｖｉｉ） デオキシ−Ｈｂを一散化炭素で物理的に
安定化しＣＯ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅを得る。
安定化しＣＯ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅを得る。
（ｖｉｉｉ） ＣＯ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅを洗浄及び濃
縮するか、あるいは適当な生理的食塩水を添加すること
により電解質バランスを再安定化する。
縮するか、あるいは適当な生理的食塩水を添加すること
により電解質バランスを再安定化する。
（ｉ４ ＣＯ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅの低温殺菌を行な
う。
う。
（Ｘｌ 低温殺菌したＣ Ｏ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅを
酸素の存在下オキシ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ Ｋ光変換す
る。
酸素の存在下オキシ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ Ｋ光変換す
る。
（２） オキシ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅを無菌濾過し輸血
用に容器に詰める。
用に容器に詰める。
本発明の教示のよ−うにしてオキシ−Ｈｅｍｏ ｓ ａ
ｆ ｅが得られると、これをｊＷ １９２μして及び
化学防御におけろ如くシアン化物中毒を予想して予防的
輸血剤として用いるためにメト−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ
［Ｉ！導体に変換することができる。即ち、本発明によ
れば、オキシ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅの調製後、公知の方
法を用いてこれを酸化してＨｅｍｏ ５ａｆｅとし、こ
れは瞬間的に効果を表わしかつ長期間有効なシアン化物
除去剤として輸注することができることが教示される。
ｆ ｅが得られると、これをｊＷ １９２μして及び
化学防御におけろ如くシアン化物中毒を予想して予防的
輸血剤として用いるためにメト−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ
［Ｉ！導体に変換することができる。即ち、本発明によ
れば、オキシ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅの調製後、公知の方
法を用いてこれを酸化してＨｅｍｏ ５ａｆｅとし、こ
れは瞬間的に効果を表わしかつ長期間有効なシアン化物
除去剤として輸注することができることが教示される。
メト−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅを静脈中に使用することＫよ
り経口的に亜硝Ｆ！塩をとりメト−Ｈｂを形成すること
を利用する場合の時間的遅延が回避される。亜ａｔｌ！
２ｍモ必ず存在するＲ、ＢＣオキシヘモグロビンからメ
ト−Ｈｂを補充するのであり、メト−）ｌａｍａＳａｆ
ｅを使用するととはより、存在する酸素の運搬能力の低
下が避けられる。従って、従来法よりもすぐれたシアン
化物中毒の治療法を提供するのである。
り経口的に亜硝Ｆ！塩をとりメト−Ｈｂを形成すること
を利用する場合の時間的遅延が回避される。亜ａｔｌ！
２ｍモ必ず存在するＲ、ＢＣオキシヘモグロビンからメ
ト−Ｈｂを補充するのであり、メト−）ｌａｍａＳａｆ
ｅを使用するととはより、存在する酸素の運搬能力の低
下が避けられる。従って、従来法よりもすぐれたシアン
化物中毒の治療法を提供するのである。
オキシ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅの輸注は血液をドーピング
する技術の代りに用いることができる。従来技術は赤血
球を人に投与してその酸素運搬能力を高めることかでき
ることを教示しているけれども、赤血球のもたらす粘度
のためにその能力の向上は１０−１５％が限度である。
する技術の代りに用いることができる。従来技術は赤血
球を人に投与してその酸素運搬能力を高めることかでき
ることを教示しているけれども、赤血球のもたらす粘度
のためにその能力の向上は１０−１５％が限度である。
しかし、公知のプラズマフェレシス技術と組合せてオキ
シ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅを用いることによりプラズマを
オキシ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅで置換することができ、理
論的に＠索運搬能を５０％増大せしめることができ、し
かもこの場合血液のへマドクリットあるいは流動特性の
変化をもたらさない。
シ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅを用いることによりプラズマを
オキシ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅで置換することができ、理
論的に＠索運搬能を５０％増大せしめることができ、し
かもこの場合血液のへマドクリットあるいは流動特性の
変化をもたらさない。
本発明又はその範囲は製品の構造又はその製造方法の機
構の特定の理論に限定されるものではないが、製品の構
造安定性及び解離安定性はＣ８８Ｃによる四量体ヘモグ
ロビンにおけるサブユニット内共有結合から得られるも
のであろうと考えられる。この結合は二量体への解離を
防止するのに充分安定であり、構造的変化を防止するに
充分竪いものである。ａＲについて説明がどうであれＩ
（ｅｍ。
構の特定の理論に限定されるものではないが、製品の構
造安定性及び解離安定性はＣ８８Ｃによる四量体ヘモグ
ロビンにおけるサブユニット内共有結合から得られるも
のであろうと考えられる。この結合は二量体への解離を
防止するのに充分安定であり、構造的変化を防止するに
充分竪いものである。ａＲについて説明がどうであれＩ
（ｅｍ。
５ａｆｅのその構造安定性は独特のものである。
また、本発明の範囲はヘモグ四ビンの処理及びヘモグロ
ビン製品に限定されるものではない。溶液中であれある
いは生物学的膜の中であれｃｓｓｃ物質によるこのよう
なタンパク質の処理により、タンパク質とｃｓｓｃとが
存在する構造が安定化されるであろう。理論的には前記
処理により安定化構造と関連のある生物学的活性も安定
化され分子が低温殺菌に対して安定化される。即ち、そ
の多くが特定の構造においてのみ有用である生物学的に
活性なペプチドを包含する生物高分子に広く大川するこ
とができる。
ビン製品に限定されるものではない。溶液中であれある
いは生物学的膜の中であれｃｓｓｃ物質によるこのよう
なタンパク質の処理により、タンパク質とｃｓｓｃとが
存在する構造が安定化されるであろう。理論的には前記
処理により安定化構造と関連のある生物学的活性も安定
化され分子が低温殺菌に対して安定化される。即ち、そ
の多くが特定の構造においてのみ有用である生物学的に
活性なペプチドを包含する生物高分子に広く大川するこ
とができる。
本発明を更に実施例によって説明する。
実施例１
人間及び動物のストローマ不含ヘモグロビンノ調製。
カナダ赤十字から入手した古い血液又は容器入り赤血球
から人間ストローマ不含ヘモグロビンを調製した。先づ
、七〇全血を３０分間３ｓＯＯＯｒｐｍで遠心分離にか
けた。次にピペットからの吸引によりプラズマ及び淡黄
色の被膜を分離し廃棄した。
から人間ストローマ不含ヘモグロビンを調製した。先づ
、七〇全血を３０分間３ｓＯＯＯｒｐｍで遠心分離にか
けた。次にピペットからの吸引によりプラズマ及び淡黄
色の被膜を分離し廃棄した。
沈降した赤血球をその３倍の容積の氷冷した通常の食塩
水中に懸濁せしめることＫより３回洗浄した。各々の洗
浄後に赤血球を遠心分離により再沈降せしめ上澄液を分
離して廃棄した。
水中に懸濁せしめることＫより３回洗浄した。各々の洗
浄後に赤血球を遠心分離により再沈降せしめ上澄液を分
離して廃棄した。
次に洗浄した赤血球を４容の５ ｍＭ リンＷ！埴緩衝
液（ｐＨ７，６）で溶解して完全な細胞壁を破壊してヘ
モグロビンを遊離せしめた。ストローマ及び膜フラグメ
ントを除去するためにフルオロカーボンポリマーフィル
ター（ＨＶＬＰ 、多孔９０．５ｐｍ ）を有するＰｅ
１ｌｉｃｏｎ Ｃａ５ｓｅｔｔｅ Ｓｙｓｔｅｍ （ミ
リボア社）で濾過し、次にポリスルホンフィルター（１
００，０００分子量カットオフ）で濾過した。濾液中の
ヘモグロビンを先づ１４−２０９／ｄｔＫ濃縮し、次Ｋ
ＩＯ容過剰ｆ）ＰＢ８１１１’／ＩＲＨＣｐＨ７，４＞
”Ｑ洗浄し、５．０平方フイートのメンブレンカセット
（ＰＴシリーズ、３０，０００分子量カットオフ）を備
えたＰｅ１ｌｌｃｏｎ Ｃａ５ｓｅｔｔｅ ８ｙｓｔｅ
ｍで洗浄し、０．２２ μｍミリポアフィルタ−で濾過
することにより滅菌し、使用する迄４℃で貯蔵した。
液（ｐＨ７，６）で溶解して完全な細胞壁を破壊してヘ
モグロビンを遊離せしめた。ストローマ及び膜フラグメ
ントを除去するためにフルオロカーボンポリマーフィル
ター（ＨＶＬＰ 、多孔９０．５ｐｍ ）を有するＰｅ
１ｌｉｃｏｎ Ｃａ５ｓｅｔｔｅ Ｓｙｓｔｅｍ （ミ
リボア社）で濾過し、次にポリスルホンフィルター（１
００，０００分子量カットオフ）で濾過した。濾液中の
ヘモグロビンを先づ１４−２０９／ｄｔＫ濃縮し、次Ｋ
ＩＯ容過剰ｆ）ＰＢ８１１１’／ＩＲＨＣｐＨ７，４＞
”Ｑ洗浄し、５．０平方フイートのメンブレンカセット
（ＰＴシリーズ、３０，０００分子量カットオフ）を備
えたＰｅ１ｌｌｃｏｎ Ｃａ５ｓｅｔｔｅ ８ｙｓｔｅ
ｍで洗浄し、０．２２ μｍミリポアフィルタ−で濾過
することにより滅菌し、使用する迄４℃で貯蔵した。
動物ヘモグロビンの調製についてはＰＢ８緩衝・ 液（
ｐＨ７，４）の代りＩＩＣ２０ｍＭ ｙｈつ酸塩緩衝液
（ｐＨ９，５）を用いヘモグロビンの可溶性を高めたラ
ットヘモグロビンである以外は人間ヘモグロビンの調製
と同様に行なった。
ｐＨ７，４）の代りＩＩＣ２０ｍＭ ｙｈつ酸塩緩衝液
（ｐＨ９，５）を用いヘモグロビンの可溶性を高めたラ
ットヘモグロビンである以外は人間ヘモグロビンの調製
と同様に行なった。
実施例２
ヘモグロビン用のｃｓｓｃとしての過沃素酸塩酸化ラフ
ィノース及びその他の糖類の調製。
ィノース及びその他の糖類の調製。
それぞれ２００■のグルツース、スクロース、ラフィノ
ース、マルトース、マルトトリオース、マルトヘンドー
ス、マルトヘキソース、マルトヘプトース及びその他の
糖を６−の蒸留Ｈ，ＯＩＩＣＭかしたものを室温におい
て糖に対して一定のモル比の固体の過沃素酸ナトリウム
で処理した。（糖に対する過沃素酸ナトリウムのモル比
はピラノシドについて１２、フラノサイドについて１．
１である）。
ース、マルトース、マルトトリオース、マルトヘンドー
ス、マルトヘキソース、マルトヘプトース及びその他の
糖を６−の蒸留Ｈ，ＯＩＩＣＭかしたものを室温におい
て糖に対して一定のモル比の固体の過沃素酸ナトリウム
で処理した。（糖に対する過沃素酸ナトリウムのモル比
はピラノシドについて１２、フラノサイドについて１．
１である）。
１時間後、反応混合物を氷水浴中で冷却し、激しく撹拌
しつつ沈澱沃素が再溶解する迄亜硫酸水素ナトリウムを
加えて無色の溶液を得た。次に６ＮＮａＯＨを添加して
溶液のｐＨを急速に＆Ｏ±０．１に調製した。得られた
酸化糖溶液を更に稀釈して最終濃度２０雫匂としＢポア
０．４５μｍ型ＧＳ膜フィルターで濾過し使用する迄４
℃で保存した。
しつつ沈澱沃素が再溶解する迄亜硫酸水素ナトリウムを
加えて無色の溶液を得た。次に６ＮＮａＯＨを添加して
溶液のｐＨを急速に＆Ｏ±０．１に調製した。得られた
酸化糖溶液を更に稀釈して最終濃度２０雫匂としＢポア
０．４５μｍ型ＧＳ膜フィルターで濾過し使用する迄４
℃で保存した。
実施例３
開環２フイノース（０−ラフィノース）Ｋよって構造的
に安定化しかつ架橋した人間Ｈｅｍｏ ５ａｆｅｌ■の
調製。
に安定化しかつ架橋した人間Ｈｅｍｏ ５ａｆｅｌ■の
調製。
分子内架橋デオキシヘモグロビン（ＸＬ−Ｈｂ■）の；
ｌｌ製：電磁撹拌下にあるｐＨ８゜０の０．１Ｍリン酸
塩緩衝液中のストローマ不含オキシヘモグロビン（Ｈｂ
四）１％ｗ／ｖ溶液３５０１Ｒ１を室温で約４時間真空
中でデオキシへモグロピソ（Ｈｈ（１））ｋ転換した。
ｌｌ製：電磁撹拌下にあるｐＨ８゜０の０．１Ｍリン酸
塩緩衝液中のストローマ不含オキシヘモグロビン（Ｈｂ
四）１％ｗ／ｖ溶液３５０１Ｒ１を室温で約４時間真空
中でデオキシへモグロピソ（Ｈｈ（１））ｋ転換した。
脱ガスした緩衝７１１Ｅ Ｏ，３−中に溶解した０、１
ミリモルの亜ジチオン酸ナトリウムを前記ヘモグロビン
溶液に添加し５時間反応を行なった。架橋剤としての０
−ラフィノース１．０８ミリモルをｐＨ＆０の予め脱ガ
スしたａ衝液２０ｄを溶解したものを激しく撹拌しつつ
真空中で添加し溶液を室温で４時間撹拌した。反応混合
物を氷水浴中で冷却し脱ガスしたｌ ｍＭ ＮａＯＨ中
の１５．Ｏミリモルのホウ水素化ナトリウムを不活性ガ
スの正圧下添加した。
ミリモルの亜ジチオン酸ナトリウムを前記ヘモグロビン
溶液に添加し５時間反応を行なった。架橋剤としての０
−ラフィノース１．０８ミリモルをｐＨ＆０の予め脱ガ
スしたａ衝液２０ｄを溶解したものを激しく撹拌しつつ
真空中で添加し溶液を室温で４時間撹拌した。反応混合
物を氷水浴中で冷却し脱ガスしたｌ ｍＭ ＮａＯＨ中
の１５．Ｏミリモルのホウ水素化ナトリウムを不活性ガ
スの正圧下添加した。
反応を４５分間行なった。
第１図は５μ９７１００ ｄの製品（実線）及び対照の
人間８ＦＨ（ダッシュｍ＞から得られたＨＰＬＣプロフ
ィルである。Ｂ−グロビン半分子（ピークａ）及び（α
β）！安定化人間ｉｉｂ■（ピークｂ）ｋついての分子
量検量線は印をつけた通りである。
人間８ＦＨ（ダッシュｍ＞から得られたＨＰＬＣプロフ
ィルである。Ｂ−グロビン半分子（ピークａ）及び（α
β）！安定化人間ｉｉｂ■（ピークｂ）ｋついての分子
量検量線は印をつけた通りである。
使用した緩衝剤は５９ｍＭすｙ ｒ！Ｒ＃Ｘ及び１５０
ｍＭＮａＣ１、ｐＨ７，０であった。クロマトグラムは
ＧＰ。
ｍＭＮａＣ１、ｐＨ７，０であった。クロマトグラムは
ＧＰ。
２５０グラジェントプログラマ−１Ｐ５００ポンプ、モ
デル４８２チヤートレコーダー及び４０５ ｎｍフィル
ター付きシングルパスＵＶモニターをｆｆ！７えたＰｈ
ａｒｍａｃｉａ ＦＰＬＣ糸上で得た。
デル４８２チヤートレコーダー及び４０５ ｎｍフィル
ター付きシングルパスＵＶモニターをｆｆ！７えたＰｈ
ａｒｍａｃｉａ ＦＰＬＣ糸上で得た。
プロフィルは９５％より多量のヘモグロビンが安定化及
び架橋を受け５％以下のＸＬ−Ｈｂ■が半分子に解離し
たことを示している。これと同一の実験条件下でヘモグ
ロビンは完全に半分子に解離する。
び架橋を受け５％以下のＸＬ−Ｈｂ■が半分子に解離し
たことを示している。これと同一の実験条件下でヘモグ
ロビンは完全に半分子に解離する。
ＸＬ−Ｈｂ■の一醒化炭２ 、Ｔｈ ２４体（Ｃ０ＸＬ
−Ｈｂ■）のＮＩＳ及び低温殺凹ニホウ水素化ナトリウ
ムによる還元ｇ、ｃｏを直接ＸＬ−Ｈｂ■反応混合物中
に泡立てた。腹濾ｉＫよる洗浄及び濃縮後、１００％Ｃ
ＯＴ Ｃ０ＸＬ Ｈｂ（Ｔ）をＩＯＲ間６０ｃＫ加熱す
ることにより大気圧下で低温殺菌し、ＣＯ−Ｈｅｍｏ
５ａｆｅＩを得た。周囲温度とおける長期保存のために
は、このＣＯ−１１ｅｍｏ ５ａｆｅ Ｉを凍結乾燥し
て乾燥粉末とし、必要なときにｔＬＨＥ液で再生するこ
とができる。
−Ｈｂ■）のＮＩＳ及び低温殺凹ニホウ水素化ナトリウ
ムによる還元ｇ、ｃｏを直接ＸＬ−Ｈｂ■反応混合物中
に泡立てた。腹濾ｉＫよる洗浄及び濃縮後、１００％Ｃ
ＯＴ Ｃ０ＸＬ Ｈｂ（Ｔ）をＩＯＲ間６０ｃＫ加熱す
ることにより大気圧下で低温殺菌し、ＣＯ−Ｈｅｍｏ
５ａｆｅＩを得た。周囲温度とおける長期保存のために
は、このＣＯ−１１ｅｍｏ ５ａｆｅ Ｉを凍結乾燥し
て乾燥粉末とし、必要なときにｔＬＨＥ液で再生するこ
とができる。
ＣＯ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ ｌ ＠のオキシ−Ｈｅｍｏ
５ａｆｅ ｌ■への光転換：回転蒸発器上に取り付け
た５００ｓｌ丸底フラスコ中に１５ｒＪのＣＯ−Ｈｅｍ
ｏ ５ａｆｅ ｌ （１’）を移しＣＧ Ｅ Ｂｒｏｏ
ｄｅｒランプ（Ｃ２５０ＳＩＬ ４０／１、内側艶消し
軟質ガラス）の下で０℃の氷水浴中で連続的に回転せし
めた。未結合ＣＯを除去するためこのフラスコを７スピ
レーター又は真空ポンプで排気した。２分後、空気又は
１００％酸素を導入した。このサンプルの組成を５７７
乃至５６０１＋１１について分光光度分析して吸光度比
１．８となる迄６１ノ記のサイクルを繰り返した。その
結果、ＣＯの除去は完金となったとみなした。（Ｅｎｚ
ｙｍｏｌｏｇｙ ｖｏｌ。
５ａｆｅ ｌ■への光転換：回転蒸発器上に取り付け
た５００ｓｌ丸底フラスコ中に１５ｒＪのＣＯ−Ｈｅｍ
ｏ ５ａｆｅ ｌ （１’）を移しＣＧ Ｅ Ｂｒｏｏ
ｄｅｒランプ（Ｃ２５０ＳＩＬ ４０／１、内側艶消し
軟質ガラス）の下で０℃の氷水浴中で連続的に回転せし
めた。未結合ＣＯを除去するためこのフラスコを７スピ
レーター又は真空ポンプで排気した。２分後、空気又は
１００％酸素を導入した。このサンプルの組成を５７７
乃至５６０１＋１１について分光光度分析して吸光度比
１．８となる迄６１ノ記のサイクルを繰り返した。その
結果、ＣＯの除去は完金となったとみなした。（Ｅｎｚ
ｙｍｏｌｏｇｙ ｖｏｌ。
７６ ｈ ｆ！ｅｍｏｇｌｏｂｉｎ、 ｐｐ、 ６０
、１６４ ｋ：記載の方法）。
、１６４ ｋ：記載の方法）。
７Ｕらねた最終生成物は第１図に示す不変のゲル浸透ク
ロマトグラフィー組成を有する。
ロマトグラフィー組成を有する。
第３図は本実施例及び他の実施例の製品（リンガ−緩衝
液中、ｐＨ７，４，２２℃）の相対吸収スペクトルを示
す。＊ａはＸＬ−Ｈｂ■、即ちカーボンモノオ午シレー
ジョン前のものであり、点線はオキシ−Ｈｅｍｏ ５ａ
ｆｅ ＠ｊ％製品のものである。第３！！ｌのこれらの
曲線は最終製品が実質的に不変の物理−化学的性質を有
していることを示している。
液中、ｐＨ７，４，２２℃）の相対吸収スペクトルを示
す。＊ａはＸＬ−Ｈｂ■、即ちカーボンモノオ午シレー
ジョン前のものであり、点線はオキシ−Ｈｅｍｏ ５ａ
ｆｅ ＠ｊ％製品のものである。第３！！ｌのこれらの
曲線は最終製品が実質的に不変の物理−化学的性質を有
していることを示している。
第２図は本実施例において０−ラフィノースによって架
橋安定化したＨｅｒｎｏ ５ａｆｅ （１）の酸素解離
曲線（ダッシュ線）及びオキシ−ヘモグロビン又はＨｂ
四の酸素解離曲線（実線）である。これらはヘモグロビ
ン濃度＆ ５９／ｄｉでｐＨ７，４のリンガ−リン酸塩
緩衝液中３７℃で測定したものである。
橋安定化したＨｅｒｎｏ ５ａｆｅ （１）の酸素解離
曲線（ダッシュ線）及びオキシ−ヘモグロビン又はＨｂ
四の酸素解離曲線（実線）である。これらはヘモグロビ
ン濃度＆ ５９／ｄｉでｐＨ７，４のリンガ−リン酸塩
緩衝液中３７℃で測定したものである。
これらはこれらの製品の典型的な曲線である。５０％飽
和（ｐＨ，）Ｋおける酸素の分圧を曲線から直接読みと
る。
和（ｐＨ，）Ｋおける酸素の分圧を曲線から直接読みと
る。
第２図によると本実施例のＨｅｍｏ ５ａｆｅ （１）
製品はＰＢ８緩衝ｌ （ｐＨ７，４）中３７℃で２７鱈
ＨｇのＰ、。（ｆ、ｌは５０％のヘモグロビンが酸素ヘ
モグロビンの状態にあるｌ！２素の分圧のことである）
を有する双曲線形酸素解離曲線を示す。これはヒル係数
的１−１．５を有する。
製品はＰＢ８緩衝ｌ （ｐＨ７，４）中３７℃で２７鱈
ＨｇのＰ、。（ｆ、ｌは５０％のヘモグロビンが酸素ヘ
モグロビンの状態にあるｌ！２素の分圧のことである）
を有する双曲線形酸素解離曲線を示す。これはヒル係数
的１−１．５を有する。
第４図はヘモグロビンに基づく代用血液の典型的なプラ
ズマ半減期を示す。ダッシュ線は本実施例の最終オギシ
ーＨｅｍｏ ５ａｆｅ １■の半減期である。
ズマ半減期を示す。ダッシュ線は本実施例の最終オギシ
ーＨｅｍｏ ５ａｆｅ １■の半減期である。
測定は３０％血液過剰モデＡ／ （ｈｙｐｅｒｖｏｌｅ
ｍｉｃ ｍｏｄｅｌ）のラットで行なった。製品は約４
−５時間の半減期を有し、−万一・モグロビンの半減期
（点Ｍ）は約１−１．５時間であった。
ｍｉｃ ｍｏｄｅｌ）のラットで行なった。製品は約４
−５時間の半減期を有し、−万一・モグロビンの半減期
（点Ｍ）は約１−１．５時間であった。
実施例４
開環ラフィノース（０−２フイノース）で構造安定化し
架橋した人間Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ Ｉ 四の調製。
架橋した人間Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ Ｉ 四の調製。
反応なオキシ状態で亜ジチオン酸ナトリウムの不存在下
で行なった以外は実施例３のＨｅｍｏ ５ａｆｅｌ■と
同様な方法を用いた。
で行なった以外は実施例３のＨｅｍｏ ５ａｆｅｌ■と
同様な方法を用いた。
最終製品はｐ）Ｚ ７．４のＰＢＳ緩衝液中、３７℃で
測定してＰ、。２−３■Ｈｇを有する双曲線形の酸素解
熱曲線を示しく第２図、実線）、そのゲル浸透クロマト
グラフィ組成及び可視スペクトルはＨｅｍｏ ５ａｆｅ
ｌ■のものと区別できないものである。
測定してＰ、。２−３■Ｈｇを有する双曲線形の酸素解
熱曲線を示しく第２図、実線）、そのゲル浸透クロマト
グラフィ組成及び可視スペクトルはＨｅｍｏ ５ａｆｅ
ｌ■のものと区別できないものである。
実施例５
グリオキサールによって構造安定化され架橋された人間
Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ ｌ■の調製：グリオキサールによ
り分子内架橋したストローマ不含デオキシヘモグロビン
の調製：電磁撹拌下、０．１Ｍ重炭酸ナトリウム中の人
間ストローマ不含ヘモグロビン２．９９．４％Ｗ／Ｖを
真空中で約２時間デオキシヘモグロビンに転換した。架
橋剤としてのグリオキサール１５８ミリモル（７，５−
の脱ガス０．１ Ｍ重炭酸ナトリウム中）を加え、溶液
を室温で２時間撹拌した。反応混合物を氷水浴中で冷却
し、脱ガス１ ｍＭ ＮａＯＨ３−中の６ミリモルのホ
ウ水素化ナトリウムを不活性ガスの正圧下添加した。反
応を４５分間行なった。ＨＰＬＣゲル浸透プロフィルは
第１図のものと同様であり、このことはヘモグロビンの
９０％以上が分子内安定化されていることを示す。
Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ ｌ■の調製：グリオキサールによ
り分子内架橋したストローマ不含デオキシヘモグロビン
の調製：電磁撹拌下、０．１Ｍ重炭酸ナトリウム中の人
間ストローマ不含ヘモグロビン２．９９．４％Ｗ／Ｖを
真空中で約２時間デオキシヘモグロビンに転換した。架
橋剤としてのグリオキサール１５８ミリモル（７，５−
の脱ガス０．１ Ｍ重炭酸ナトリウム中）を加え、溶液
を室温で２時間撹拌した。反応混合物を氷水浴中で冷却
し、脱ガス１ ｍＭ ＮａＯＨ３−中の６ミリモルのホ
ウ水素化ナトリウムを不活性ガスの正圧下添加した。反
応を４５分間行なった。ＨＰＬＣゲル浸透プロフィルは
第１図のものと同様であり、このことはヘモグロビンの
９０％以上が分子内安定化されていることを示す。
グリオ−？ｆ−ル安定化ＣＯ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ ｌ
（１”ｊ （Ｄ調製、その低温殺菌、凍結乾燥及びオ
キシ−Ｈｅｍ。
（１”ｊ （Ｄ調製、その低温殺菌、凍結乾燥及びオ
キシ−Ｈｅｍ。
５ａｆｅ Ｉ（１）への光による逆転換の方法はいずれ
も実施例３に記載のものと同様である。最終製品は３０
％過剰血液置換したラットにおいて測定した約１５時間
の半減期を有していた。
も実施例３に記載のものと同様である。最終製品は３０
％過剰血液置換したラットにおいて測定した約１５時間
の半減期を有していた。
実施例６
開票ラフィノース（０−ラフィノース）＆Ｃよって構造
安定化、架橋したクシＨｅｍｏ ８ａｆｅ ｌ■の調製
： ＰＨ＆ Ｏの０．１Ｍリン酸塩緩衝液中のウシストロー
マ不含オキシヘモグロビン（１％Ｗ／Ｖ）溶ａ９０ｍｇ
を電磁撹拌下真空中で室温で約２時間デオキシヘモグロ
ビンに転換した。０．３ ｄの脱ガスした緩衝液中に溶
解した亜ジチオン酸ナトリウム４００μモルを上記ヘモ
グロビン溶液に添加し５分間反応を行なった。ｐＨａ
Ｏの予め脱ガスした緩衝液ａｄ中の架橋剤Ｏ−ラフィノ
ース２７６μモルを真空下添加し、この溶液を３時間室
温で撹拌した。反応混合物を氷水浴中で冷却し１ ｍＭ
Ｎａ０Ｈ（脱ガス）２−中のホウ水素化ナトリウム１
５ミリモルを不活性ガス正圧で添加した。還元を４５分
間行なった。ＨＰＬＣゲル浸透クロマトグラフプロフィ
ルは９０％よりも多いウシヘモグロビンが分子内安定化
されたことを示す。架橋ウシヘモグロビンのクロマトグ
ラムは第１図に示したものと同様であった〇 〇−ラフィノース安定化つシＣＯ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ
１■の調製、低温殺菌、凍結乾燥及びオキシ−Ｈｐｍｏ
５ａｆｅ ｌ■への光転換は実施例３と同様にして行
なった。
安定化、架橋したクシＨｅｍｏ ８ａｆｅ ｌ■の調製
： ＰＨ＆ Ｏの０．１Ｍリン酸塩緩衝液中のウシストロー
マ不含オキシヘモグロビン（１％Ｗ／Ｖ）溶ａ９０ｍｇ
を電磁撹拌下真空中で室温で約２時間デオキシヘモグロ
ビンに転換した。０．３ ｄの脱ガスした緩衝液中に溶
解した亜ジチオン酸ナトリウム４００μモルを上記ヘモ
グロビン溶液に添加し５分間反応を行なった。ｐＨａ
Ｏの予め脱ガスした緩衝液ａｄ中の架橋剤Ｏ−ラフィノ
ース２７６μモルを真空下添加し、この溶液を３時間室
温で撹拌した。反応混合物を氷水浴中で冷却し１ ｍＭ
Ｎａ０Ｈ（脱ガス）２−中のホウ水素化ナトリウム１
５ミリモルを不活性ガス正圧で添加した。還元を４５分
間行なった。ＨＰＬＣゲル浸透クロマトグラフプロフィ
ルは９０％よりも多いウシヘモグロビンが分子内安定化
されたことを示す。架橋ウシヘモグロビンのクロマトグ
ラムは第１図に示したものと同様であった〇 〇−ラフィノース安定化つシＣＯ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ
１■の調製、低温殺菌、凍結乾燥及びオキシ−Ｈｐｍｏ
５ａｆｅ ｌ■への光転換は実施例３と同様にして行
なった。
このようＫして得られた最終製品は不変のゲル浸透クロ
マトグラフィ組成及び物理−化学的性質を有する。この
製品はｐ）１７．２のＰＢＳＩＩ＠液中で３７℃で測定
してＰｕ３４ ｓｏｓ＋Ｈｇを有する双曲線形酸素解離
曲線、ヒル係数的１．５及びラツＨＣついて３０％過剰
血液の輸血において測定したプラズマ半減期約４時間を
有していた。
マトグラフィ組成及び物理−化学的性質を有する。この
製品はｐ）１７．２のＰＢＳＩＩ＠液中で３７℃で測定
してＰｕ３４ ｓｏｓ＋Ｈｇを有する双曲線形酸素解離
曲線、ヒル係数的１．５及びラツＨＣついて３０％過剰
血液の輸血において測定したプラズマ半減期約４時間を
有していた。
実施例７
開環ラフィノース（０−ラフィノース）によって構造安
定化され架橋された羊のＨｅｍｏ ５ａｆｅ ｌ■の調
製。
定化され架橋された羊のＨｅｍｏ ５ａｆｅ ｌ■の調
製。
分子内架橋した羊のデオキシヘモグロビンの調製ｓｐＨ
＆０のα１Ｍリン酸塩緩衝液中の羊のストローマ不含オ
キシへ七グ藁ビン（１％Ｗ／Ｖ ）の溶液１００−を電
磁撹拌下、真空中にて室温で約２時間デオｄＰ９へ毎グ
ロビンに転換した。Ｚｏｏ Ｅｌ。
＆０のα１Ｍリン酸塩緩衝液中の羊のストローマ不含オ
キシへ七グ藁ビン（１％Ｗ／Ｖ ）の溶液１００−を電
磁撹拌下、真空中にて室温で約２時間デオｄＰ９へ毎グ
ロビンに転換した。Ｚｏｏ Ｅｌ。
脱ガスした緩衝液中の５０μモルの亜ジチオン酸ナトリ
ウムを前記ヘモグロビン溶液に添加した。
ウムを前記ヘモグロビン溶液に添加した。
５分後、ｐＨ９，Ｑの予め脱ガスした緩衝液ＬＬ５ ｄ
中の架橋剤０−ラフィノース６１６μモルを真空中で撹
拌しつつ添加した。４℃で１６時間架橋を行なった。反
応混合物を氷水浴中で冷却し、脱ガスしたｌ ｍＭ Ｎ
ａ０）Ｉ Ｌ ５−中のホウ水素化ナトリウム４４ミリ
モルを正の不活性ガス圧下で添加した。
中の架橋剤０−ラフィノース６１６μモルを真空中で撹
拌しつつ添加した。４℃で１６時間架橋を行なった。反
応混合物を氷水浴中で冷却し、脱ガスしたｌ ｍＭ Ｎ
ａ０）Ｉ Ｌ ５−中のホウ水素化ナトリウム４４ミリ
モルを正の不活性ガス圧下で添加した。
還元を４５分間続けた。ＨＰＬＣゲル浸透クロマトグラ
フプロフィルは羊のヘモグロビン半分子の９゛５襲より
多量が分子内安定化されており、第１図に示すものと同
様であることを示した。
フプロフィルは羊のヘモグロビン半分子の９゛５襲より
多量が分子内安定化されており、第１図に示すものと同
様であることを示した。
Ｏ−ラフィノース安定化羊ＣＯ−Ｈｅｍｏ ８ａｆｅ
ｌ■の調製、その低温殺菌、凍結乾燥及びオキシ−Ｈｅ
ｍｏ ８ａｆｅ ｌ■への光による逆転換は実施例３と
同様にして行なった。
ｌ■の調製、その低温殺菌、凍結乾燥及びオキシ−Ｈｅ
ｍｏ ８ａｆｅ ｌ■への光による逆転換は実施例３と
同様にして行なった。
このようにして得られた最終製品は不変ゲル浸透クロマ
ドグ２フイ組成及び物理−化学的性質を有していた。こ
の製品はｐＨ７，４のＰＢＳ緩衝液中３７℃で測定して
Ｐ、。３９ ｗＨｇを有していた。
ドグ２フイ組成及び物理−化学的性質を有していた。こ
の製品はｐＨ７，４のＰＢＳ緩衝液中３７℃で測定して
Ｐ、。３９ ｗＨｇを有していた。
゛実施例８
開環ラフィノース（Ｏ−ラフィノース）によって構造安
定化し架橋したラットのＨｅｍｏ ８ａｆｅ ｌ■の調
製。
定化し架橋したラットのＨｅｍｏ ８ａｆｅ ｌ■の調
製。
分子内架橋したラットのデオキシヘモグロビンの調製：
ｐＨ９，５の２０ ｍＭホウ酸塩緩衝液中にラットの
ストローマ不含オキシヘモグロビン（２％ｗ／ｖ ）を
溶解した溶液１８−を電磁撹拌下、真空中、室温で約１
時間デオキシヘモグロビンに転換した。０．１−の脱ガ
ス緩衝液中に溶解した５０μモルの亜ジチオン酸ナトリ
ウムを上記ヘモグロビン溶液に添加し５分間反応せしめ
た。ｐＨ＆ ０の予め脱ガスした緩衝液３−＆ｃ溶解し
た架橋剤〇−ラフィノース１１Ｇμモルを撹拌子真空中
で添加した。４℃で１６時間架橋を行なった。反応混合
物を氷水浴中で冷却しｌ ｍＭ ＮａＯＨ１−中に溶か
した１．２ミリモルのホウ水素化ナトリウムを正の不活
性ガス圧下添加した。還元を４５分間続けた。ＨＰＬＣ
ゲル浸透クロマトグラフプロフィルはラットのヘモグロ
ビン牛分子の９０％よりも多量が第１図に示したものと
同様に分子内安定化されたことを示している。
ｐＨ９，５の２０ ｍＭホウ酸塩緩衝液中にラットの
ストローマ不含オキシヘモグロビン（２％ｗ／ｖ ）を
溶解した溶液１８−を電磁撹拌下、真空中、室温で約１
時間デオキシヘモグロビンに転換した。０．１−の脱ガ
ス緩衝液中に溶解した５０μモルの亜ジチオン酸ナトリ
ウムを上記ヘモグロビン溶液に添加し５分間反応せしめ
た。ｐＨ＆ ０の予め脱ガスした緩衝液３−＆ｃ溶解し
た架橋剤〇−ラフィノース１１Ｇμモルを撹拌子真空中
で添加した。４℃で１６時間架橋を行なった。反応混合
物を氷水浴中で冷却しｌ ｍＭ ＮａＯＨ１−中に溶か
した１．２ミリモルのホウ水素化ナトリウムを正の不活
性ガス圧下添加した。還元を４５分間続けた。ＨＰＬＣ
ゲル浸透クロマトグラフプロフィルはラットのヘモグロ
ビン牛分子の９０％よりも多量が第１図に示したものと
同様に分子内安定化されたことを示している。
０−ラフィノース安定化ラットＣＯ−Ｈｅｍｏ ５ａｆ
ｅＩ■の調製、その低温殺菌、凍結乾燥及びオ午シーＨ
ｅｍｏ ５ａｆｅ ｌ■への光による逆転換は実施例３
と同様にして行なった。
ｅＩ■の調製、その低温殺菌、凍結乾燥及びオ午シーＨ
ｅｍｏ ５ａｆｅ ｌ■への光による逆転換は実施例３
と同様にして行なった。
得られた最終製品は不変ゲル浸透クロマトグラフィ組成
及び物理的−化学的性質を有していた。
及び物理的−化学的性質を有していた。
この製品はｐＨ７，４のＰＢ８緩衝液中３７℃で測定し
たＰ、２４ ｍＨｇ及びヒル係数的１．０を有する。
たＰ、２４ ｍＨｇ及びヒル係数的１．０を有する。
実施例９
開環ラフィノース（０−ラフィノース）によって構造安
定化し、重合した人間Ｍｅｍｏ ５ａｆｅ ｆｆの調製
。
定化し、重合した人間Ｍｅｍｏ ５ａｆｅ ｆｆの調製
。
分子内安定化及び分子内架橋した人間デオキシヘモグロ
ビンの調製ｓｐＨ＆Ｑの０．１Ｍリン酸塩緩衝液中に溶
解した人間オキシヘモグロビン（４％ｗ／ｖ ）の溶液
７７−を電磁撹拌下、真空中、室温で約４時間デオキシ
ヘモグロビンに転換した。
ビンの調製ｓｐＨ＆Ｑの０．１Ｍリン酸塩緩衝液中に溶
解した人間オキシヘモグロビン（４％ｗ／ｖ ）の溶液
７７−を電磁撹拌下、真空中、室温で約４時間デオキシ
ヘモグロビンに転換した。
α３ｄの脱ガス緩衝液中に溶解した０、２０ミリモルの
亜ジチオン酸ナトリウムを上記ヘモグロビン溶液に添加
し５分間反応せしめた。２０−の予め脱ガスした緩衝液
２〇−中の架橋剤０−ラフィノース０．９５ ｔリモル
を真空下添加し、反応を６時間続けた。反応混合物を氷
水浴中で冷却し１、脱ガスした１ ｍＭ ＮａＯＨ４−
中のホウ水素化ナトリウム９．５ミリモルを正の不活性
ガス圧下添加した。還元を４５分間続けた。第５図にお
いてＨＰＬＣゲル浸透り党マドグラ７プロフイルは９８
％よりも多いヘモグロビンが安定化及び架橋され、２０
−２５％が安定化されたモノマーであり、５５−５％が
二量体、三量体及び四量体の組合せであり、２〇−２５
％が五責体以上のポリマーであることを示している。
亜ジチオン酸ナトリウムを上記ヘモグロビン溶液に添加
し５分間反応せしめた。２０−の予め脱ガスした緩衝液
２〇−中の架橋剤０−ラフィノース０．９５ ｔリモル
を真空下添加し、反応を６時間続けた。反応混合物を氷
水浴中で冷却し１、脱ガスした１ ｍＭ ＮａＯＨ４−
中のホウ水素化ナトリウム９．５ミリモルを正の不活性
ガス圧下添加した。還元を４５分間続けた。第５図にお
いてＨＰＬＣゲル浸透り党マドグラ７プロフイルは９８
％よりも多いヘモグロビンが安定化及び架橋され、２０
−２５％が安定化されたモノマーであり、５５−５％が
二量体、三量体及び四量体の組合せであり、２〇−２５
％が五責体以上のポリマーであることを示している。
このクロマトグラフィはフィルは緩衝液として５０ ｍ
Ｍ ホスｙ ５−−）及び１５０ ｍＭ ＮａＣ１（ｐ
Ｈ７）及び第１図で用いた装叡を用いて得られたもので
ある。ポリＨｂ （Ｔ）は流速０．４ ｍ／分で８ｕｐ
ｅｒｏｓａ−１２ブと填ＨＲ１０／３０カラム上で！／
Ｙ−（ピークａ）、二量体、三量体及び四量体（ピーク
ｂ）及び五景体以上のポリマー（ピークＣ）に解離した
。重合化した製品のこのよ５な組成はＩ４υ嘗の濃度で
同に張性であることがわかった。
Ｍ ホスｙ ５−−）及び１５０ ｍＭ ＮａＣ１（ｐ
Ｈ７）及び第１図で用いた装叡を用いて得られたもので
ある。ポリＨｂ （Ｔ）は流速０．４ ｍ／分で８ｕｐ
ｅｒｏｓａ−１２ブと填ＨＲ１０／３０カラム上で！／
Ｙ−（ピークａ）、二量体、三量体及び四量体（ピーク
ｂ）及び五景体以上のポリマー（ピークＣ）に解離した
。重合化した製品のこのよ５な組成はＩ４υ嘗の濃度で
同に張性であることがわかった。
０−−）ｙ４ノース安定化ＣＯ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ
Ｈ（Ｑの調製、その低温殺菌、凍結乾燥及びオキシ−Ｈ
ｅｍｏ ８ａｆｅ ｌ■への光による逆転換は実施例３
と同様にして行なった。
Ｈ（Ｑの調製、その低温殺菌、凍結乾燥及びオキシ−Ｈ
ｅｍｏ ８ａｆｅ ｌ■への光による逆転換は実施例３
と同様にして行なった。
このようにして得られた最終製品は低温段ａの前後にお
いて不変のゲル浸透クロマトグラフィー組成及び物理−
化学的性質を有し、ｐＨ７，・２のＰ′−ＢＳ紛街液中
３７℃で測定して３２■Ｈｇの均一なＰｓｌ、及びヒル
係数１．６の双曲線形＃！素解離曲線を有する。Ｈｅｍ
ｏ ８ａｆｅ ＩＩ■の単離精製フラクシ目ン、即ちモ
ノマー、二量体、三量体、四量体、五量体以上（第５図
参照）は区別できないＰｌ、ヒル係数及び３０％過剰血
液置換をしたラットについて測定して７−８時間の半減
期を有していた。
いて不変のゲル浸透クロマトグラフィー組成及び物理−
化学的性質を有し、ｐＨ７，・２のＰ′−ＢＳ紛街液中
３７℃で測定して３２■Ｈｇの均一なＰｓｌ、及びヒル
係数１．６の双曲線形＃！素解離曲線を有する。Ｈｅｍ
ｏ ８ａｆｅ ＩＩ■の単離精製フラクシ目ン、即ちモ
ノマー、二量体、三量体、四量体、五量体以上（第５図
参照）は区別できないＰｌ、ヒル係数及び３０％過剰血
液置換をしたラットについて測定して７−８時間の半減
期を有していた。
実施例１０
開環スクロース（０−スクロース）Ｋよって構造安定化
し重合した人間Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ Ｈの調製。
し重合した人間Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ Ｈの調製。
０−スクロースによる分子内安定化及び分子内架橋した
入間デオキシヘモグロビンの調製：ｐＨ＆０の０．１Ｍ
リン酸塩緩衝液中にストローマ不苫八間オキシヘモグロ
ビン（１３％Ｗ／Ｖ ）を溶解シた溶液ｌＯ−を電磁撹
拌下、真空中、約２時間デオキシヘモグロビンに転換し
た。脱ガスした緩衝液０．２ｓｄＫ溶解した亜ジチオン
酸ナトリウム４０μモルを上記ヘモグロビン溶液に添加
した。５分後、予め脱ガスした緩衝液３−中の架橋剤Ｏ
−スクロース２００μモルを真空下添加し反応を６時間
行なった。反応混合物を氷水浴中で冷却し、脱ガスした
１ ｍＭ ＮａＯＨ１−中のホウ水素化ナトリウム２０
ミリモルを正の不活性ガス圧下添加した。
入間デオキシヘモグロビンの調製：ｐＨ＆０の０．１Ｍ
リン酸塩緩衝液中にストローマ不苫八間オキシヘモグロ
ビン（１３％Ｗ／Ｖ ）を溶解シた溶液ｌＯ−を電磁撹
拌下、真空中、約２時間デオキシヘモグロビンに転換し
た。脱ガスした緩衝液０．２ｓｄＫ溶解した亜ジチオン
酸ナトリウム４０μモルを上記ヘモグロビン溶液に添加
した。５分後、予め脱ガスした緩衝液３−中の架橋剤Ｏ
−スクロース２００μモルを真空下添加し反応を６時間
行なった。反応混合物を氷水浴中で冷却し、脱ガスした
１ ｍＭ ＮａＯＨ１−中のホウ水素化ナトリウム２０
ミリモルを正の不活性ガス圧下添加した。
４５分分間光を行なった。ＨＰＬＣゲル浸透クロマトグ
ラフプロフィルは９８％よりも多いヘモグロビンが安定
化及び架橋し、製品の組成は実施例９（第５図）のもの
と同様であることを示している。
ラフプロフィルは９８％よりも多いヘモグロビンが安定
化及び架橋し、製品の組成は実施例９（第５図）のもの
と同様であることを示している。
０− スフミーｘ安定化ＣＯ−Ｈｅｍｏ ８ａｆｅ ｌ
（Ｔ）の調製、その低温殺菌、凍結乾燥及びオキシ−
Ｈｅｍ。
（Ｔ）の調製、その低温殺菌、凍結乾燥及びオキシ−
Ｈｅｍ。
５ａｆｅ ｌ■への光による逆転換は￥施例３と同様に
して行なった。
して行なった。
このよ５Ｋして得られた最終製品は低温殺菌の前後不変
のゲル浸透クロマトグラフィー組成及び物理−化学的性
質を有していた。この製品はＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７，２
）中、３７℃で測定して２４ｗｍＨｇのＰ、。、ヒル係
数１．３及び３０嘱過剰血液置換で測定してラット中で
半減期約７−８時間を有していた。
のゲル浸透クロマトグラフィー組成及び物理−化学的性
質を有していた。この製品はＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７，２
）中、３７℃で測定して２４ｗｍＨｇのＰ、。、ヒル係
数１．３及び３０嘱過剰血液置換で測定してラット中で
半減期約７−８時間を有していた。
実施例１１
グルタルアルデヒドによって安定化及び重合した人間Ｈ
ｅｍｏ ５ａｆｅ ｌ ＩＴ）の調製。
ｅｍｏ ５ａｆｅ ｌ ＩＴ）の調製。
グルタルアルデヒドによる分子内安定化及び分子内重合
した人間デオキシヘモグロビンの調製：ｐＨａ Ｏの０
．１Ｍリン酸塩緩衝液中にストローマ不含人間オキシヘ
モグロビン（４％ ｗ／ｖ ）を溶解した溶液７８−を
電磁撹拌下、真空中、室温で約４時間デオキシヘモグロ
ビンに転換した。脱カスしたＨ衝ｇ、Ｏ１３ｍｌ中に溶
解した亜ジチオン酸ナトリウム０．１ミリ七ルを上記ヘ
モグロビン溶液に添加し５分間反応を行なった。予め脱
ガスした緩衝液２．５−中の架橋剤グルタルアルデヒド
４８０μモルを真空上添加し、６時間反応を行なった。
した人間デオキシヘモグロビンの調製：ｐＨａ Ｏの０
．１Ｍリン酸塩緩衝液中にストローマ不含人間オキシヘ
モグロビン（４％ ｗ／ｖ ）を溶解した溶液７８−を
電磁撹拌下、真空中、室温で約４時間デオキシヘモグロ
ビンに転換した。脱カスしたＨ衝ｇ、Ｏ１３ｍｌ中に溶
解した亜ジチオン酸ナトリウム０．１ミリ七ルを上記ヘ
モグロビン溶液に添加し５分間反応を行なった。予め脱
ガスした緩衝液２．５−中の架橋剤グルタルアルデヒド
４８０μモルを真空上添加し、６時間反応を行なった。
反応混合物を氷水浴中で冷却し、脱ガスしたｌ ｒｒＭ
ＮａＯＨ４−中のホウ水素化ナトリウム４ミリモルを
正の不活性ガス圧下添加した。４５分分間光を行なった
。ＨＰＬＣゲル浸透クロマトグラフプロフィルは９８％
よりも多量の人間ヘモグロビンが安定化及び架橋され製
品の組成は実施例９のものと同様であることを示してい
た。
ＮａＯＨ４−中のホウ水素化ナトリウム４ミリモルを
正の不活性ガス圧下添加した。４５分分間光を行なった
。ＨＰＬＣゲル浸透クロマトグラフプロフィルは９８％
よりも多量の人間ヘモグロビンが安定化及び架橋され製
品の組成は実施例９のものと同様であることを示してい
た。
グＡ／ タル７ ）Ｌｐデヒド安定化ＣＯ−Ｈｅｍｏ
５ａｆｅ １■のＭｌ製、その低温殺菌、凍結乾燥及び
オキシ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ ｌ■への光による逆転換
は実施例３と同様にして行なった。
５ａｆｅ １■のＭｌ製、その低温殺菌、凍結乾燥及び
オキシ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ ｌ■への光による逆転換
は実施例３と同様にして行なった。
このよ５Ｋして得られた最終製品は不変のゲル浸透クロ
マトグラフィー組成及び物理的性質を有していた。この
製品はｐＨ７，４のＰＢＸ４１＠液中３７℃で測定して
〜３０■ＨｇのＰ、、ヒル係数１．５及びラット中で３
０外過剰血液置換で測定した半減期７−８時間を有して
いた。
マトグラフィー組成及び物理的性質を有していた。この
製品はｐＨ７，４のＰＢＸ４１＠液中３７℃で測定して
〜３０■ＨｇのＰ、、ヒル係数１．５及びラット中で３
０外過剰血液置換で測定した半減期７−８時間を有して
いた。
実施例１２
開環ラフィノース（Ｏ−ラフィノース）Ｋより構造安定
化及び重合したウシのＨｅｍｏ ８ａｆｅ ｌ■の調製
。
化及び重合したウシのＨｅｍｏ ８ａｆｅ ｌ■の調製
。
０−ラフィノースによる分子内安定化及び分子内架橋し
たクシのデオキシヘモグロビンの調製：ｐＨ８，０の０
．１Ｍリン酸塩緩衝液中にウシのストローマ不含才命シ
ヘモグロビン（６％Ｗ／Ｖ ）を溶解した溶液４０−を
電磁撹拌下、真空中室温で約４時間デオキシヘモグロビ
ンに転換した。脱ガスした緩衝液０．２ ｄ中に溶解し
た亜ジチオン酸ナトリウム８０μモルを上記ヘモグロビ
ン溶液に添加し５分間反応を行なった。予め脱ガスした
緩衝液１〇−中の架橋剤Ｏ−２フイノース５５０μモル
を真空上添加し反応を６時間行なった。反応混合物を氷
水浴中で冷却し、脱ガスした１ ｍＭ ＮａＯＨ４，０
−中のホウ水素化ナトリウム３．５ミリモルを正の不活
性ガス圧下添加した。還元を４５分間行なった。ＨＰＬ
Ｃゲル浸透クロマトグラフプロフィルは９５％よりも多
量のウシヘモグロビン牛分子が安定化かつ架橋され、製
品の組成は実施例９と同様であることを示していた。
たクシのデオキシヘモグロビンの調製：ｐＨ８，０の０
．１Ｍリン酸塩緩衝液中にウシのストローマ不含才命シ
ヘモグロビン（６％Ｗ／Ｖ ）を溶解した溶液４０−を
電磁撹拌下、真空中室温で約４時間デオキシヘモグロビ
ンに転換した。脱ガスした緩衝液０．２ ｄ中に溶解し
た亜ジチオン酸ナトリウム８０μモルを上記ヘモグロビ
ン溶液に添加し５分間反応を行なった。予め脱ガスした
緩衝液１〇−中の架橋剤Ｏ−２フイノース５５０μモル
を真空上添加し反応を６時間行なった。反応混合物を氷
水浴中で冷却し、脱ガスした１ ｍＭ ＮａＯＨ４，０
−中のホウ水素化ナトリウム３．５ミリモルを正の不活
性ガス圧下添加した。還元を４５分間行なった。ＨＰＬ
Ｃゲル浸透クロマトグラフプロフィルは９５％よりも多
量のウシヘモグロビン牛分子が安定化かつ架橋され、製
品の組成は実施例９と同様であることを示していた。
０−ラフィノース安定化ウシＣＯ−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ
１■の調製、低温殺菌、凍結乾燥及びオ中シーＨｅｍｏ
５ａｆｅ Ｉ■への光による逆転換は実施例３と同様
にして行なった。
１■の調製、低温殺菌、凍結乾燥及びオ中シーＨｅｍｏ
５ａｆｅ Ｉ■への光による逆転換は実施例３と同様
にして行なった。
最終製品は低温殺菌の前後で不変のゲル浸透クロマトグ
ラフ組成及び物理的性質を有していた。
ラフ組成及び物理的性質を有していた。
この製品はＰＨ７，４のＰＢＳ緩衝液中３７℃で測定し
たＰ、 ２８■Ｈｇ ｓヒル係数約１．５及び３０％過
剰血液置換でラット中で測定した半減期７−８時間を有
゛していた。
たＰ、 ２８■Ｈｇ ｓヒル係数約１．５及び３０％過
剰血液置換でラット中で測定した半減期７−８時間を有
゛していた。
実施例１３
開環ラフィノース（０−２フイノース）Ｋよって構造安
定化及び重合したラットのＨｅｍｏｓａｆｅ ＩＩ■の
調製。
定化及び重合したラットのＨｅｍｏｓａｆｅ ＩＩ■の
調製。
分子内安定化及び分子内架橋したラットのデオキシヘモ
グロビンの調製ｊ ｐＨ９，５の２９ｍＭホウ酸塩緩衝
液中にラットのストローマ不含オキシヘモグロビン（９
，４％Ｗ／Ｖ ）を溶解した溶液６ｍを電磁撹拌下、真
空中室温で約２時間デオキシヘモグロビンに転換した。
グロビンの調製ｊ ｐＨ９，５の２９ｍＭホウ酸塩緩衝
液中にラットのストローマ不含オキシヘモグロビン（９
，４％Ｗ／Ｖ ）を溶解した溶液６ｍを電磁撹拌下、真
空中室温で約２時間デオキシヘモグロビンに転換した。
１００μｊの脱ガス緩衝液中に溶解した亜ジチオン酸ナ
トリウム２０μモルをヘモグロビン溶液に添加し、５分
間反応を行なった。予め脱ガスした緩衝液２−中の架橋
剤０−ラフィノース８７μモルを真空下で添加し４℃で
１６時間、次に室温で５時間反応を行なった。反応混合
物を氷水浴中で冷却し、脱ガス１ ｍＭ ＮａＯＨ１，
０−中のホウ水素化ナトリウム１．２ミリモルを正の不
活性ガス圧の下で添加した。還元を４５分間行なった。
トリウム２０μモルをヘモグロビン溶液に添加し、５分
間反応を行なった。予め脱ガスした緩衝液２−中の架橋
剤０−ラフィノース８７μモルを真空下で添加し４℃で
１６時間、次に室温で５時間反応を行なった。反応混合
物を氷水浴中で冷却し、脱ガス１ ｍＭ ＮａＯＨ１，
０−中のホウ水素化ナトリウム１．２ミリモルを正の不
活性ガス圧の下で添加した。還元を４５分間行なった。
ＨＰＬＣゲル浸透クロマトグラフプロフィルは９８％よ
りも多くのラットヘモグロビン半分子が安定化及び架橋
され製品の組成は実施例９のものと同様であることを示
している。
りも多くのラットヘモグロビン半分子が安定化及び架橋
され製品の組成は実施例９のものと同様であることを示
している。
０−ラフィノース安定化ラットＣＯ−Ｈｅｍｏ ５ａｆ
ｅｒ１■の調製、低温殺菌、凍結乾燥及びオキシ−Ｈｅ
ｍｏ ５ａｆｅ １■への光転換は実施例３と同様にし
て行なった。
ｅｒ１■の調製、低温殺菌、凍結乾燥及びオキシ−Ｈｅ
ｍｏ ５ａｆｅ １■への光転換は実施例３と同様にし
て行なった。
！＆終製品は低温殺菌の前後で不変のゲル浸透クロマト
グラフ組成及び物理的−化学的性質をもっていた。
グラフ組成及び物理的−化学的性質をもっていた。
実施例１４
開環ラフィノースにより構造安定化した人間１１ｅｍｏ
５ａｆｅ Ｉ■−イヌリン複合体の調製。
５ａｆｅ Ｉ■−イヌリン複合体の調製。
分子内架橋した人間Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ ｌ■の調製：
実施例３と同じ方法による。
実施例３と同じ方法による。
過沃素酸塩酸化イヌリン（０−イヌリン）の調製：開環
イヌリンの調製は実施例２と同様にして行なった。
イヌリンの調製は実施例２と同様にして行なった。
Ｍｅｍｏ ５ａｆｅ ｌ■−イヌリン複合体の調製＝０
．１Ｍ ＮａＨＣＯ，中に人間のオキ−／ −Ｈｅｍｏ
５ａｆｅ ｌ （Ｐ） （４％ｗ／ｖ ）を溶解した
溶液３５ｍを電磁撹拌下、真空中室温で約２時間デオキ
シＨｅｍｏ ５ａｆｅ Ｉ（１）Ｋ転換した。脱ガスし
た緩衝液５０μ！中に溶解した亜ジチオン酸ナトリウム
４０モルを添加した。５分後、予め脱ガスした０、 １
Ｍ ＮａＨＣＯ，Ｉｌｌ ５−中の等モルのＯ−イヌ
リンを撹拌下真空中で添加し、反応を室温で５時間行な
った。反応混合物を氷水浴中で冷却し、脱ガスした１
ｍＭ ＮａＯＨ１，５−中のホウ水素化ナトリウム２０
之リモルを正の不活性ガス圧下で添加した。還元を４５
分間行なった。
．１Ｍ ＮａＨＣＯ，中に人間のオキ−／ −Ｈｅｍｏ
５ａｆｅ ｌ （Ｐ） （４％ｗ／ｖ ）を溶解した
溶液３５ｍを電磁撹拌下、真空中室温で約２時間デオキ
シＨｅｍｏ ５ａｆｅ Ｉ（１）Ｋ転換した。脱ガスし
た緩衝液５０μ！中に溶解した亜ジチオン酸ナトリウム
４０モルを添加した。５分後、予め脱ガスした０、 １
Ｍ ＮａＨＣＯ，Ｉｌｌ ５−中の等モルのＯ−イヌ
リンを撹拌下真空中で添加し、反応を室温で５時間行な
った。反応混合物を氷水浴中で冷却し、脱ガスした１
ｍＭ ＮａＯＨ１，５−中のホウ水素化ナトリウム２０
之リモルを正の不活性ガス圧下で添加した。還元を４５
分間行なった。
ＨＰＬＣゲル浸透クロマドグ２フプロフィル及びＨｅｍ
ｏ ５ａｆｅ Ｉ■−イヌリン複合体の組成は第５図の
ものと同様であった。ラフィノース安定化人間ＣＯ−Ｈ
ｅｍｏ ５ａｆｅ ｌ■−４Ｊ １７−Ｗ！合体ｆ）ｆ
ｌｌｌｊＪ、その低温殺菌、凍結乾燥及び人間オキシ−
Ｈｅｍ。
ｏ ５ａｆｅ Ｉ■−イヌリン複合体の組成は第５図の
ものと同様であった。ラフィノース安定化人間ＣＯ−Ｈ
ｅｍｏ ５ａｆｅ ｌ■−４Ｊ １７−Ｗ！合体ｆ）ｆ
ｌｌｌｊＪ、その低温殺菌、凍結乾燥及び人間オキシ−
Ｈｅｍ。
５ａｆｅ ｌ■への光転換は実施例３と同様にして行な
った。
った。
このようにして得られた最終製品は不変のゲル浸透クロ
マトグラブ組成及び物理的−化学的性質をもっていた。
マトグラブ組成及び物理的−化学的性質をもっていた。
この製品はｐＨ７，２のＰＲ８ｍ＠液中３７℃において
２７ ｍＨｇのＰ、。、ヒル係数的１．２及び３０％過
剰血液置換のラット中で測定して半減期７−８時間を有
していた。
２７ ｍＨｇのＰ、。、ヒル係数的１．２及び３０％過
剰血液置換のラット中で測定して半減期７−８時間を有
していた。
実施例１５
０−ラフィノース構造安定化人間メト−Ｈｅｍ。
５ａｆｅ ｌ■及び四の調製。
前述のようとして（実施例３）、ＣＯ−Ｈｅｍ。
８ａｆｅ ｌ■及び四をそれぞれのオキシ−Ｈｅｒｎｏ
５ａｆｅに光転換した後、これらオキシ−Ｈｅｍｏ
５ａｆｅを３７℃に放置しメ） −Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ
への転換を行なった。
５ａｆｅに光転換した後、これらオキシ−Ｈｅｍｏ
５ａｆｅを３７℃に放置しメ） −Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ
への転換を行なった。
第３園にダツシエ謎で示したように吸収スペクトルによ
って決定したメト−ヘモグロビンレベルが９０％より大
きくなったとき転換は完了したものとする。そのＣＮ除
去剤としての効力は第３図のダッシュ一点線で示す如き
対応するシアツメ） −ヘモグロビン光学吸収スペクト
ルを得る能力によって確認した。
って決定したメト−ヘモグロビンレベルが９０％より大
きくなったとき転換は完了したものとする。そのＣＮ除
去剤としての効力は第３図のダッシュ一点線で示す如き
対応するシアツメ） −ヘモグロビン光学吸収スペクト
ルを得る能力によって確認した。
実施例１６
０−ラフィノースにより構造安定化し重合したメト−Ｈ
ｅｍｏ ５ａｆｅ Ｉ■及び四のｉｎｉ。
ｅｍｏ ５ａｆｅ Ｉ■及び四のｉｎｉ。
０−ラフィノースによって構造安定化し重合した人間Ｈ
ｅｍｏ ５ａｆｅ Ｈ■及び（６）を実施例１ｃ従って
調製した。実施例１５番で従いこれらをそれぞれのメト
−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ Ｋ転換した。
ｅｍｏ ５ａｆｅ Ｈ■及び（６）を実施例１ｃ従って
調製した。実施例１５番で従いこれらをそれぞれのメト
−Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ Ｋ転換した。
実施例１７
０−ラフィノースにより構造安定化した人間メ） −Ｈ
ｅｍｏ ５ａｆｅ ｌ■−イヌリン複合体の：Ａ製。
ｅｍｏ ５ａｆｅ ｌ■−イヌリン複合体の：Ａ製。
０−ラフィノースにより［ｉ安定化した人間Ｈｅｍｏ
５ａｆｅ ｌ■−イヌリン複合体を実施例１４に従って
：Ｊ３製し、実施例１５に従ってメ） −Ｈｅｍ。
５ａｆｅ ｌ■−イヌリン複合体を実施例１４に従って
：Ｊ３製し、実施例１５に従ってメ） −Ｈｅｍ。
５ａｆｅに転換した。
実施例１８
ラフィノースにより構造安定化し重合した人間Ｈｅｍｏ
５ａｆｅｌ［のウィルス失活化。
５ａｆｅｌ［のウィルス失活化。
実施例９に従って人間Ｈｅｍｏ ５ａｆｅ ｌを調製し
、！（ｅｍｏ ５ａｆｅ ｌ ｚ １０’ Ｉｆ Ｉ
Ｖ ｚ ＝ ７トでスパイクしたＨｅｍｏ ５ａｆｅ
７１及び１０４Ｈ工ｖユニツトのみからなるサンプルを
５１製した。対照実験において、溶液中１ｃ Ｈｅ＋ｎ
ｏ 、５ａｆｅ ！Ｉが存在してもＩＩＩＶ−Ｉｆ）ｌ
［ａ染性に影環ニジないことが示された。これらのサン
プルを５６℃で１週間湿熱処理した。この処理の終了時
にサンプルのＨＩＶ７１Ｂ染性な抗原分析によって調べ
た。これらのサンプルのいずれにおいてもＨＩ Ｖの感
性は見られなかった。
、！（ｅｍｏ ５ａｆｅ ｌ ｚ １０’ Ｉｆ Ｉ
Ｖ ｚ ＝ ７トでスパイクしたＨｅｍｏ ５ａｆｅ
７１及び１０４Ｈ工ｖユニツトのみからなるサンプルを
５１製した。対照実験において、溶液中１ｃ Ｈｅ＋ｎ
ｏ 、５ａｆｅ ！Ｉが存在してもＩＩＩＶ−Ｉｆ）ｌ
［ａ染性に影環ニジないことが示された。これらのサン
プルを５６℃で１週間湿熱処理した。この処理の終了時
にサンプルのＨＩＶ７１Ｂ染性な抗原分析によって調べ
た。これらのサンプルのいずれにおいてもＨＩ Ｖの感
性は見られなかった。
第１因は実施例３に従って調製した安定化人間デオキシ
ヘモグロビンの分析用ゲル浸透高圧液体クロマトグラフ
ィ（ＨＰＬＣ）のプロフィルであり、８ＦＨと比較して
示している。第２図は実施例３及び４のＨｅｍｏ ５ａ
ｆｅ （１）製品の酸素解離曲線である。 第３図は実施例３及び１５の製品の吸収スペクトルを示
す。第４図は実施例３、実施例９及び８ＦＨの製品の半
減期調査をグラフで示したものである。第５図は実施例
９の方法による製品の分析用ゲル浸透高圧液体クロマト
グラフィ（）ＩＰＬＣ）のプロフィルである。 代理人 三 宅 正 夫 他１名 手 続 補 正 書（自発） 昭和６３年６月ｑ日
ヘモグロビンの分析用ゲル浸透高圧液体クロマトグラフ
ィ（ＨＰＬＣ）のプロフィルであり、８ＦＨと比較して
示している。第２図は実施例３及び４のＨｅｍｏ ５ａ
ｆｅ （１）製品の酸素解離曲線である。 第３図は実施例３及び１５の製品の吸収スペクトルを示
す。第４図は実施例３、実施例９及び８ＦＨの製品の半
減期調査をグラフで示したものである。第５図は実施例
９の方法による製品の分析用ゲル浸透高圧液体クロマト
グラフィ（）ＩＰＬＣ）のプロフィルである。 代理人 三 宅 正 夫 他１名 手 続 補 正 書（自発） 昭和６３年６月ｑ日
Claims (28)
- （１）二量体への解離が起らぬように安定化され、かつ
水性剤とした時にＴ型構造とＲ型構造との間の変化が起
らぬように安定化された四量体ヘモグロビンユニットか
ら本質的になり、前記四量体ユニットはサブユニットの
グロビン鎖間に共有化学結合を有しこれにより安定化が
行なわれるものであるヘモグロビン製品。 - （２）Ｔ型構造に安定化されている特許請求の範囲第（
１）項の安定化ヘモグロビン製品。 - （３）ヘモグロビンがそのグロビン鎖間の第二アミノ結
合によって安定化されている特許請求の範囲第（２）項
の安定化ヘモグロビン製品。 - （４）結合がジ−又はポリアルデヒドとグロビン鎖との
反応によってシック塩基結合が形成され、続いて第二ア
ミノ結合に還元されることにより生成したものである特
許請求の範囲第（３）項の安定化ヘモグロビン製品。 - （５）アルデヒド反応体がグルタルアルデヒドである特
許請求の範囲第（４）項の安定化ヘモグロビン製品。 - （６）アルデヒド反応体がグリオキサールである請求の
範囲第（４）項の安定化ヘモグロビン製品。 - （７）アルデヒドが糖化合物の開環酸化生成物である特
許請求の範囲第（４）項の安定化ヘモグロビン製品。 - （８）糖化合物が一分子につき１−７個の糖残基を有す
る特許請求の範囲第（７）項の安定化ヘモグロビン製品
。 - （９）糖化合物がラフィノースである特許請求の範囲第
（８）項の安定化ヘモグロビン製品。 - （１０）ヘモグロビンが人間由来のものである特許請求
の範囲第（１）項の安定化ヘモグロビン製品。 - （１１）ヘモグロビンが動物由来のものである請求の範
囲第（１）項の安定化ヘモグロビン製品。 - （１２）ヘモグロビンの水溶液と、ヘモグロビンの少く
とも２つのそれぞれの基又はグロビン鎖と室温で反応し
得る少くとも別々の官能基を有し、ヘモグロビンのＤＰ
Ｇ部位と反応し得る負に帯電したイオン性基を含まない
二価又は多価試剤とを反応せしめること；ヘモグロビン
との反応が実質的に完了後前記試剤の残留官能基を失活
せしめること；及び生成した構造安定化及び解離安定化
したヘモグロビンを回収することから成る特許請求の範
囲第（１）項の安定化ヘモグロビン製品の製造方法。 - （１３）試剤がアミノ基又はグロビン鎖と反応し得る官
能基を有する請求の範囲第（２）項の方法。 - （１４）試剤がジアルデヒド又はポリアルデヒドであり
、残留基が還元によって失活される特許請求の範囲第（
１３）項の方法。 - （１５）ヘモグロビン反応体と安定化ヘモグロビン製品
がＴ−型構造を有する特許請求の範囲第（１３）項の方
法。 - （１６）複数の特許請求の範囲第（１）項の安定化した
四量体ヘモグロビンユニットから成り、これらはともに
共有結合して各ヘモグロビンユニットが構造安定性及び
解離安定性を有するポリマーヘモグロビン製品が形成さ
れている安定化ヘモグロビン製品。 - （１７）各ヘモグロビンユニットがＴ型構造に安定化さ
れている特許請求の範囲第（１６）項の安定化ポリマー
ヘモグロビン製品。 - （１８）ヘモグロビンユニット間の共有結合がジアルデ
ヒド又はポリアルデヒドと安定化ヘモグロビンとの反応
及びその後の還元によって生成した第二アミン結合より
成る特許請求の範囲第（１７）項の安定化ポリマーヘモ
グロビン製品。 - （１９）成分の２０−２５％が５個以上のヘモグロビン
ユニットより成るヘモグロビンポリマーであり、５０−
６０％が２−４個のヘモグロビンユニットより成るヘモ
グロビンオリゴマーであり、２０−２５％がモノマーヘ
モグロビンであり、１−２０−がヘモグロビンサブユニ
ットの二量体である特許請求の範囲第（１７）項の安定
化ポリマーヘモグロビン製品。 - （２０）一酸化炭素と錯体を形成しており、この錯体の
水溶液は８０℃以下で１０時間おかれても実質的に変性
及び分解を起こさないものである特許請求の範囲第（１
）項の安定化ヘモグロビン製品。 - （２１）ヘモグロビンユニットがＴ型構造に安定化され
ている安定化ＣＯ−ヘモグロビン錯体。 - （２２）凍結乾燥形の特許請求の範囲第（２１）項の安
定化ＣＯ−ヘモグロビン錯体。 - （２３）ＣＯ：ヘモグロビンのモル比が約４：１である
特許請求の範囲第（２１）項の安定化ＣＯ−ヘモグロビ
ン錯体。 - （２４）特許請求の範囲（２１）項の一酸化炭素−安定
化ヘモグロビン錯体の溶液をウィルス汚染菌を有効に失
活するのに十分な時間適当な低温殺菌温度に加熱するこ
とにより殺菌し、次にこの錯体を酸素と反応せしめてオ
キシ−又はデオキシ−ヘモグロビン錯体又はその混合物
に変換することより成る代用血液として用いるのに適し
、伝播性ウィルス感染のないヘモグロビン製品の製造方
法。 - （２５）構造変化及び解離に対して安定化した特許請求
の範囲第（１）項のオキシ−又はデオキシ−ヘモグロビ
ン又はその混合物を含有する低温殺菌したウィルス不活
化代用血液。 - （２６）適当な条件下で特許請求の範囲第（２５）項の
殺菌したオキシヘモグロビンを酸化することから成るシ
アナイド除去用代用血液として適したメトヘモグロビン
錯体。 - （２７）水溶液中で複数の異った構造で存在することが
できる高分子より成り、前記高分子の少くとも９５％は
一つの特定の構造に安定化されており、この安定化は前
記高分子とジアルデヒド又はポリアルデヒドとの非座位
特異的反応及びその後の還元による共有第二アミノ結合
の生成により行なわれたものである生物蛋白質物質。 - （２８）ヘモグロビンより成る代用血液と一酸化炭素と
を反応せしめてヘムの第一鉄−第二鉄酸化を防止し、こ
の一酸化炭素と結合した代用血液をウィルム感染菌を失
活するに十分な時間、適当な殺菌温度に保持し、次にこ
の錯体を酸素と反応せしめてオキシ−又はデオキシ−ヘ
モグロビン製品又はその混合物に変換せしめることから
成るヘモグロビンを主成分とする代用血液を殺菌してウ
ィルス感染の無い製品を得る方法。
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|---|---|---|---|
| GB878710598A GB8710598D0 (en) | 1987-05-05 | 1987-05-05 | Hemoglobin based blood substitute |
| GB8710598 | 1987-05-05 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63297330A true JPS63297330A (ja) | 1988-12-05 |
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Family
ID=10616838
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63109257A Granted JPS63297330A (ja) | 1987-05-05 | 1988-05-06 | 安定化されたヘモグロビン製品およびその水溶液の製造方法 |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4857636A (ja) |
| EP (1) | EP0290252B1 (ja) |
| JP (1) | JPS63297330A (ja) |
| KR (1) | KR910009343B1 (ja) |
| CN (1) | CN1032471C (ja) |
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| CA (1) | CA1306583C (ja) |
| DE (1) | DE3877811T2 (ja) |
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| ES (1) | ES2053729T3 (ja) |
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| IL (1) | IL86258A (ja) |
| NZ (1) | NZ224479A (ja) |
| ZA (1) | ZA883171B (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003018976A (ja) * | 2001-07-10 | 2003-01-21 | Katsuhiro Yamamoto | 食肉・食肉加工品退色防止方法 |
| JP2005528942A (ja) * | 2002-05-13 | 2005-09-29 | サフェティン リミティド． | 血液と血液成分の長期に渡る貯蔵方法。 |
Families Citing this family (92)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5464814A (en) * | 1986-06-20 | 1995-11-07 | Northfield Laboratories, Inc. | Acellular red blood cell substitute |
| US5753616A (en) * | 1986-11-10 | 1998-05-19 | Biopure Corporation | Method for producing a stable polymerized hemoglobin blood-substitute |
| US5854209A (en) * | 1995-03-23 | 1998-12-29 | Biopure Corporation | Method for oxygenating tissue having reduced red blood cell flow |
| US5955581A (en) * | 1986-11-10 | 1999-09-21 | Biopure Corporation | Method for producing a stable polymerized hemoglobin blood-substitute |
| AU622610B2 (en) * | 1986-11-10 | 1992-04-16 | Biopure Corporation | Extra pure semi-synthetic blood substitute |
| GB8710598D0 (en) * | 1987-05-05 | 1987-06-10 | Star Medical Diagnostics Ltd | Hemoglobin based blood substitute |
| US5189146A (en) * | 1987-05-05 | 1993-02-23 | Her Majesty The Queen In Right Of Canada, As Represented By The Minister Of National Defence | Pasteurizable, freeze-driable hemoglobin-based blood substitute |
| US5844090A (en) * | 1994-05-09 | 1998-12-01 | Somatogen, Inc. | Modified hemoglobin-like compounds |
| US5545727A (en) * | 1989-05-10 | 1996-08-13 | Somatogen, Inc. | DNA encoding fused di-alpha globins and production of pseudotetrameric hemoglobin |
| US5234903A (en) * | 1989-11-22 | 1993-08-10 | Enzon, Inc. | Chemically modified hemoglobin as an effective, stable non-immunogenic red blood cell substitute |
| US5386014A (en) * | 1989-11-22 | 1995-01-31 | Enzon, Inc. | Chemically modified hemoglobin as an effective, stable, non-immunogenic red blood cell substitute |
| ES2086532T3 (es) * | 1989-12-29 | 1996-07-01 | Univ Texas Tech | Polihemoglobina esterilizada por derivados de la purina y glutation. |
| WO1992013875A1 (en) * | 1991-02-12 | 1992-08-20 | Texas Tech University | Improved blood substitute |
| US5439882A (en) * | 1989-12-29 | 1995-08-08 | Texas Tech University Health Sciences Center | Blood substitute |
| WO1991013891A1 (en) * | 1990-03-14 | 1991-09-19 | The University Of Toronto Innovations Foundation | Acyl phosphate esters and modification of proteins therewith |
| US5248766A (en) * | 1990-08-17 | 1993-09-28 | Baxter International Inc. | Oxirane-modified hemoglobin based composition |
| WO1992008478A1 (en) * | 1990-11-20 | 1992-05-29 | Enzon, Inc. | Method of enhancing long-term storage stability of hemoglobin products |
| HUT64571A (en) * | 1990-11-29 | 1994-01-28 | Upjohn Co | A method for producing hemoglobin preparatives containing imido ester cross bind |
| US5250665A (en) * | 1991-05-31 | 1993-10-05 | The University Of Toronto Innovations Foundation | Specifically β-β cross-linked hemoglobins and method of preparation |
| US5591457A (en) * | 1992-02-07 | 1997-01-07 | Vasogen Inc | Method of inhibiting the aggregation of blood platelets and stimulating the immune systems of a human |
| US6669965B2 (en) | 1992-02-07 | 2003-12-30 | Vasogen Ireland Limited | Method of treating atherosclerosis |
| GB9617611D0 (en) * | 1996-08-22 | 1996-10-02 | Vasogen Inc | Treatment of autoimmune disease |
| US5980954A (en) | 1992-02-07 | 1999-11-09 | Vasogen Ireland Limited | Treatment of autoimmune diseases |
| US5646252A (en) * | 1992-02-10 | 1997-07-08 | Staat Der Nederlanden, De Minister Van Defensie, Voor Deze: Het Hoofd Van De Afdeling Militair Geneeskundig Beleid | Hemoglobin composition and preparation thereof |
| US5399671A (en) * | 1992-11-18 | 1995-03-21 | Kluger; Ronald | Specifically crosslinked hemoglobin with free functionality |
| NZ262349A (en) * | 1993-03-16 | 1996-05-28 | Hemosol Inc | Chemically modifying haemoglobin by crosslinking with a polyaldehyde produced by ring opening oxidation of a saccharide; for use in a blood substitute |
| WO1994022482A1 (en) * | 1993-03-26 | 1994-10-13 | Biorelease Technologies, Inc. | Compositions including heme-containing proteins and methods relating thereto |
| US5578564A (en) * | 1993-07-23 | 1996-11-26 | Somatogen, Inc. | Nickel-free hemoglobin and methods for producing such hemoglobin |
| US5840851A (en) * | 1993-07-23 | 1998-11-24 | Plomer; J. Jeffrey | Purification of hemoglobin |
| TW381022B (en) * | 1993-08-16 | 2000-02-01 | Hsia Jen Chang | Compositions and methods utilizing nitroxides to avoid oxygen toxicity, particularly in stabilized, polymerized, conjugated, or encapsulated hemoglobin used as a red cell substitute |
| US5741893A (en) * | 1993-08-16 | 1998-04-21 | Hsia; Jen-Chang | Compositions and methods utilizing nitroxides in combination with biocompatible macromolecules |
| US5824781A (en) * | 1993-08-16 | 1998-10-20 | Hsia; Jen-Chang | Compositions and methods utilizing nitroxides in combination with biocompatible macromolecules |
| US5817632A (en) * | 1993-08-16 | 1998-10-06 | Hsia; Jen-Chang | Compositions and methods utilizing nitroxides in combination with biocompatible macromolecules |
| US5840701A (en) * | 1993-08-16 | 1998-11-24 | Hsia; Jen-Chang | Compositions and methods utilizing nitroxides in combination with biocompatible macromolecules |
| US5804561A (en) * | 1993-08-16 | 1998-09-08 | Hsia; Jen-Chang | Compositions and methods utilizing nitroxides in combination with biocompatible macromolecules |
| US5807831A (en) * | 1993-08-16 | 1998-09-15 | Hsia; Jen-Chang | Compositions and methods utilizing nitroxides in combination with biocompatible macromolecules |
| US5767089A (en) * | 1993-08-16 | 1998-06-16 | Hsia; Jen-Chang | Compositions and methods utilizing nitroxides in combination with biocompatible macromolecules |
| US5725839A (en) * | 1993-08-16 | 1998-03-10 | Hsia; Jen-Chang | Compositions and methods utilizing nitroxides in combination with biocompatible macromolecules for ERI or MRI |
| US5631219A (en) * | 1994-03-08 | 1997-05-20 | Somatogen, Inc. | Method of stimulating hematopoiesis with hemoglobin |
| US6242417B1 (en) | 1994-03-08 | 2001-06-05 | Somatogen, Inc. | Stabilized compositions containing hemoglobin |
| CA2135739C (en) * | 1994-11-14 | 1997-10-21 | Felice D'agnillo | Hemoglobin-enzyme complexes |
| US6271351B1 (en) | 1995-03-23 | 2001-08-07 | Biopure Corporation | Method for preserving a hemoglobin blood substitute |
| US5691452A (en) * | 1995-03-23 | 1997-11-25 | Biopure Corporation | Method for preserving a hemoglobin blood substitute |
| US5895810A (en) * | 1995-03-23 | 1999-04-20 | Biopure Corporation | Stable polymerized hemoglobin and use thereof |
| US6610832B1 (en) | 1995-03-23 | 2003-08-26 | Biopure Corporation | Preserving a hemoglobin blood substitute with a transparent overwrap |
| US6288027B1 (en) | 1995-03-23 | 2001-09-11 | Biopure Corporation | Preserving a hemoglobin blood substitute with a transparent overwrap |
| US5691453A (en) * | 1995-06-07 | 1997-11-25 | Biopure Corporation | Separation of polymerized hemoglobin from unpolymerized hemoglobin on hydroxyapatite using HPLC |
| US5952470A (en) * | 1995-06-07 | 1999-09-14 | Biopure Corporation | Method for separating unmodified hemoglobin from cross-linked hemoglobin |
| US5865784A (en) | 1995-06-07 | 1999-02-02 | Alliance Pharmaceutical Corp. | Method of hemodilution facilitated by monitoring oxygenation status |
| WO1997010268A1 (en) * | 1995-09-11 | 1997-03-20 | Staat Der Nederlanden, De Minister Van Defensie, Voor Deze: Het Hoofd Van De Afdeling Militair Geneeskundig Beleid | Spray-drying haemoglobin |
| US5741894A (en) * | 1995-09-22 | 1998-04-21 | Baxter International, Inc. | Preparation of pharmaceutical grade hemoglobins by heat treatment in partially oxygenated form |
| WO1997033914A1 (en) * | 1996-03-15 | 1997-09-18 | Staat Der Nederlanden, De Minister Van Defensie | Methods for producing hemoglobin preparations and preparations obtainable thereby |
| US5917020A (en) * | 1997-01-15 | 1999-06-29 | Kluger; Ronald H. | Bis-tetrameric hemoglobin and reagents for its production |
| US6358678B1 (en) | 1998-02-11 | 2002-03-19 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Applications of reversible crosslinking and co-treatment in stabilization and viral inactivations of erythrocytes |
| US6436705B1 (en) | 1997-02-18 | 2002-08-20 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Shape stabilized erythrocytes |
| US6054427A (en) * | 1997-02-28 | 2000-04-25 | The Regents Of The University Of California | Methods and compositions for optimization of oxygen transport by cell-free systems |
| US5814601A (en) * | 1997-02-28 | 1998-09-29 | The Regents Of The University Of California | Methods and compositions for optimization of oxygen transport by cell-free systems |
| CA2233725A1 (en) * | 1998-03-31 | 1999-09-30 | Hemosol Inc. | Hemoglobin-hydroxyethyl starch complexes |
| DE10031744A1 (de) * | 2000-06-29 | 2002-01-17 | Sanguibio Tech Ag | Mit Blutplasma verträgliche, vernetzte und mit Polyalkylenoxiden konjugierte Säugetierhämoglobine als künstliche medizinische Sauerstoffträger, ihre Herstellung und ihre Verwendung |
| DE10031742A1 (de) * | 2000-06-29 | 2002-01-17 | Sanguibio Tech Ag | Verfahren zur Herstellung künstlicher Sauerstoffträger aus kovalent vernetzten Hämoglobinen mit verbesserten funktionellen Eigenschaften durch Vernetzung in Anwesenheit chemisch nicht reagierender Effektoren der Sauerstoffaffinität der Hämoglobine |
| DE10031740A1 (de) * | 2000-06-29 | 2002-02-14 | Sanguibio Tech Ag | Künstliche Sauerstoffträger aus vernetztem modifizierten Human- oder Schweinehämoglobin mit verbesserten Eigenschaften, Verfahren zu ihrer technisch einfachen Herstellung aus gereinigtem Material in hohen Ausbeuten, sowie deren Verwendung |
| DE10031741A1 (de) * | 2000-06-29 | 2002-01-17 | Sanguibio Tech Ag | Einen Sauerstoffträger, ausgewählt aus Hämoglobin oder Hämoglobin- und Myoglobin-enthaltende Zubereitung als Externum zur natürlichen Regeneration der Haut bei Sauerstoff-Mangel |
| CA2319966A1 (en) * | 2000-09-19 | 2002-03-19 | Dextro-Sang Corporation | Improved dextran-hemoglobin conjugate as potential blood substitute |
| US6747132B2 (en) | 2000-11-29 | 2004-06-08 | Apex Biosciences, Inc. | Methods for the synthesis of a modified hemoglobin solution |
| US6518010B2 (en) | 2001-02-28 | 2003-02-11 | Biopure Corporation | Use of defibrinated blood for manufacture of a hemoglobin-based oxygen carrier |
| US6808503B2 (en) * | 2001-03-06 | 2004-10-26 | Baxter International Inc. | Automated system and method for pre-surgical blood donation and fluid replacement |
| US6884228B2 (en) * | 2001-03-06 | 2005-04-26 | Baxter International Inc. | Automated system adaptable for use with different fluid circuits |
| AU2002254646B2 (en) * | 2001-04-18 | 2008-05-15 | Northfield Laboratories, Inc. | Flexible container system for storage of stabilized hemoglobin solutions |
| US20050164915A1 (en) * | 2002-04-01 | 2005-07-28 | Sangart, Inc. | Compositions for oxygen transport comprising a high oxygen affinity modified hemoglobin |
| US20030153491A1 (en) | 2002-01-11 | 2003-08-14 | Winslow Robert M. | Methods and compositions for oxygen transport comprising a high oxygen affinity modified hemoglobin |
| WO2003059286A2 (en) * | 2002-01-11 | 2003-07-24 | Sangart, Inc. | Methods and compositions for oxygen transport comprising modified hemoglobin in plasma |
| EP1894573A3 (en) | 2002-01-11 | 2013-06-12 | Sangart, Inc. | Methods and compositions for oxygen transport comprising a high oxygen affinity |
| EP1472280A4 (en) * | 2002-01-11 | 2005-09-21 | Sangart Inc | OXYGEN TRANSPORT METHODS AND COMPOSITIONS COMPRISING AN OXYGEN TRANSPORTER AND A CRYSTALLOID IN HYPERTONIC SOLUTION |
| US7001715B2 (en) * | 2002-02-28 | 2006-02-21 | Biopure Corporation | Purification of red blood cells by separation and diafiltration |
| JP3912206B2 (ja) * | 2002-07-05 | 2007-05-09 | 株式会社日立製作所 | 筒内直接燃料噴射装置用燃料ポンプ |
| US20040072729A1 (en) * | 2002-10-10 | 2004-04-15 | Sunbio Inc. | High oxygen affinity PEG-hemoglobin as treatment for brain stroke |
| JP2006516994A (ja) * | 2003-01-29 | 2006-07-13 | ノースフィールド ラボラトリーズ、インコーポレイテッド | テトラマーの量を低下させた重合ヘモグロビン溶液及び調製するための方法 |
| KR20070069154A (ko) * | 2004-08-31 | 2007-07-02 | 생가트, 인코포레이티드 | 산소 운반 조성물을 사용하여 혈역학적 안정성을향상시키는 방법 |
| US20090004159A1 (en) * | 2006-01-24 | 2009-01-01 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinoi | Polymerized Hemoglobin Media and Its Use in Isolation and Transplantation of Islet Cells |
| US20070196810A1 (en) * | 2006-01-24 | 2007-08-23 | Northfield Laboratories Inc. | Polymerized Hemoglobin Media and its Use in Isolation and Transplantation of Islet Cells |
| US7759306B2 (en) * | 2006-05-16 | 2010-07-20 | Simoni Jan S | Methods of treating acute blood loss |
| US10172950B2 (en) | 2009-06-09 | 2019-01-08 | Prolong Pharmaceuticals, LLC | Hemoglobin compositions |
| US10172949B2 (en) | 2009-06-09 | 2019-01-08 | Prolong Pharmaceuticals, LLC | Hemoglobin compositions |
| BRPI1010775A2 (pt) | 2009-06-09 | 2016-03-22 | Prolong Pharmaceuticals Llc | composição, método para preparar uma composição, e, uso de uma composição. |
| US8273857B2 (en) * | 2009-09-22 | 2012-09-25 | Jen-Chang Hsia | Compositions and methods of use of neurovascular protective multifunctional polynitroxylated pegylated carboxy hemoglobins for transfusion and critical care medicine |
| US20110319858A1 (en) * | 2010-06-23 | 2011-12-29 | Bing Lou Wong | Method for the preparation of a heat stable oxygen carrier-containing pharmaceutical compositions and the use thereof |
| ES2432075T3 (es) * | 2011-07-23 | 2013-11-29 | Sastomed Gmbh | Espray para heridas |
| US20150094267A1 (en) | 2012-04-03 | 2015-04-02 | Kim D. Vandegriff | Succinimide-activated nitroxyl compounds and methods for the use thereof for nitroxylation of proteins |
| US10821158B2 (en) | 2013-03-15 | 2020-11-03 | William Schindler | Polyalkylene oxide valerate hemoglobin conjugates |
| EP2991627B1 (en) | 2013-05-03 | 2018-09-05 | Washington University | Blood substitute composition and method of use |
| CN103387613B (zh) * | 2013-08-02 | 2016-12-28 | 西北大学 | 一种血红蛋白及血红蛋白氧载体病毒灭活的方法 |
| EP4041193A1 (en) * | 2019-10-11 | 2022-08-17 | Medical Technology Associates II, Inc. | Stabilized hemoglobin compositions and pharmaceutical formulations thereof |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5163920A (ja) * | 1974-10-21 | 1976-06-02 | Biotest Serum Institut Gmbh | |
| JPS5829715A (ja) * | 1981-08-04 | 1983-02-22 | ビオテスト アクチエンゲゼルシャフト | 肝炎の恐れのない無菌、無発熱素、無基質のヘモグロビン溶液の製造方法 |
| JPS60258126A (ja) * | 1984-06-02 | 1985-12-20 | Teruo Tomota | 重合化ヘモグロビンの製造方法 |
Family Cites Families (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4049673A (en) * | 1971-06-08 | 1977-09-20 | Israel Herbert Scheinberg | Preparation of ferrous hemoglobin and enzymatic digestion products thereof active for absorption of carbon monoxide |
| US3925344A (en) * | 1973-04-11 | 1975-12-09 | Community Blood Council | Plasma protein substitute |
| US4001401A (en) * | 1975-02-02 | 1977-01-04 | Alza Corporation | Blood substitute and blood plasma expander comprising polyhemoglobin |
| US4001200A (en) * | 1975-02-27 | 1977-01-04 | Alza Corporation | Novel polymerized, cross-linked, stromal-free hemoglobin |
| US4061736A (en) * | 1975-02-02 | 1977-12-06 | Alza Corporation | Pharmaceutically acceptable intramolecularly cross-linked, stromal-free hemoglobin |
| US4053590A (en) * | 1975-02-27 | 1977-10-11 | Alza Corporation | Compositions of matter comprising macromolecular hemoglobin |
| US4136093A (en) * | 1976-04-23 | 1979-01-23 | Biotest-Serum-Institut Gmbh | Hemoglobin preparation with increased oxygen release |
| FR2387658A1 (fr) * | 1977-03-25 | 1978-11-17 | Ciba Geigy Ag | Procede pour combattre les microorganismes |
| US4623717A (en) * | 1980-03-05 | 1986-11-18 | Miles Laboratories, Inc. | Pasteurized therapeutically active protein compositions |
| US4473496A (en) * | 1981-09-14 | 1984-09-25 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Intramolecularly crosslinked hemoglobin |
| SE451542B (sv) * | 1982-08-23 | 1987-10-19 | Rationell Golftrening Hb | Utslagsanordning for golftrening |
| AU2965284A (en) * | 1983-05-04 | 1984-11-19 | Tye, R.W. | Modified crosslinked stroma-free tetrameric hemoglobin |
| US4529719A (en) * | 1983-05-04 | 1985-07-16 | Tye Ross W | Modified crosslinked stroma-free tetrameric hemoglobin |
| US4764369A (en) * | 1983-07-14 | 1988-08-16 | New York Blood Center Inc. | Undenatured virus-free biologically active protein derivatives |
| DE3330770A1 (de) * | 1983-08-26 | 1985-03-14 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Verfahren zur pasteurisierung von humanplasma |
| US4600531A (en) * | 1984-06-27 | 1986-07-15 | University Of Iowa Research Foundation | Production of alpha-alpha cross-linked hemoglobins in high yield |
| NL8403425A (nl) * | 1984-11-09 | 1986-06-02 | Stichting Gastransport | Stromavrije hemoglobine-oplossing, werkwijze voor de bereiding daarvan en toepassing daarvan. |
| US4584130A (en) * | 1985-03-29 | 1986-04-22 | University Of Maryland | Intramolecularly cross-linked hemoglobin and method of preparation |
| US4863964A (en) * | 1985-07-02 | 1989-09-05 | Biomedical Frontiers, Inc. | Method for the stabilization of deferoxamine to chelate free ions in physiological fluid |
| AU622610B2 (en) * | 1986-11-10 | 1992-04-16 | Biopure Corporation | Extra pure semi-synthetic blood substitute |
| GB8710598D0 (en) * | 1987-05-05 | 1987-06-10 | Star Medical Diagnostics Ltd | Hemoglobin based blood substitute |
| US5069936A (en) * | 1987-06-25 | 1991-12-03 | Yen Richard C K | Manufacturing protein microspheres |
-
1987
- 1987-05-05 GB GB878710598A patent/GB8710598D0/en active Pending
-
1988
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- 1988-05-05 AU AU15635/88A patent/AU610883B2/en not_active Expired
- 1988-05-05 DE DE8888304059T patent/DE3877811T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-05-05 EP EP88304059A patent/EP0290252B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-05-05 ES ES88304059T patent/ES2053729T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1988-05-05 AT AT88304059T patent/ATE84970T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-05-06 JP JP63109257A patent/JPS63297330A/ja active Granted
-
1992
- 1992-07-27 US US07/918,610 patent/US5364932A/en not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5163920A (ja) * | 1974-10-21 | 1976-06-02 | Biotest Serum Institut Gmbh | |
| JPS5829715A (ja) * | 1981-08-04 | 1983-02-22 | ビオテスト アクチエンゲゼルシャフト | 肝炎の恐れのない無菌、無発熱素、無基質のヘモグロビン溶液の製造方法 |
| JPS60258126A (ja) * | 1984-06-02 | 1985-12-20 | Teruo Tomota | 重合化ヘモグロビンの製造方法 |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003018976A (ja) * | 2001-07-10 | 2003-01-21 | Katsuhiro Yamamoto | 食肉・食肉加工品退色防止方法 |
| JP2005528942A (ja) * | 2002-05-13 | 2005-09-29 | サフェティン リミティド． | 血液と血液成分の長期に渡る貯蔵方法。 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
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| CN1032471C (zh) | 1996-08-07 |
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| CA1306583C (en) | 1992-08-18 |
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| DE3877811D1 (ja) | 1993-03-11 |
| NZ224479A (en) | 1991-04-26 |
| DE3877811T2 (de) | 1993-05-27 |
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