JPS63284A - 細胞分離剤、その製造方法及びそれを使用した細胞分離器並びにそれを使用した免疫抑制性リンパ球、及び／又は免疫抑制因子産生細胞の除去方法 - Google Patents

細胞分離剤、その製造方法及びそれを使用した細胞分離器並びにそれを使用した免疫抑制性リンパ球、及び／又は免疫抑制因子産生細胞の除去方法

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JPS63284A JP62067035A JP6703587A JPS63284A JP S63284 A JPS63284 A JP S63284A JP 62067035 A JP62067035 A JP 62067035A JP 6703587 A JP6703587 A JP 6703587A JP S63284 A JPS63284 A JP S63284A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、動物細胞、特に付着性動物細胞群の浮遊液の
中から所定の細胞ポピユレーションを分離するための細
胞分離剤、その製造方法及びそれを使用した細胞分離器
並びにそれを使用した免疫抑制性リンパ球及び／又は免
疫抑制因子産生細胞の除去方法に関する。
（従来の技術） 悪性ｌ１ｆｆｉ瘍などで免疫機能が低下し生体防御に関
して不利な状態に陥った場合、免疫機能を回復させるこ
とが治療上重要な課題とされている。このように免疫機
能が低下するのは免疫抑制性リンパ球あるいは免疫抑制
因子産生細胞の増加によることが明らかにされ、これら
の抑制因子を除去することが免疫機能回復の鍵とされて
いる。
このような免疫機能に関与している細胞として、マクロ
ファージ、Ｔ細胞、８８ｍ胞その他の白血球があり、こ
のうち免疫抑制作用をもつ細胞はＴ細胞のサブセットの
一つであるサブレフサ−Ｔ細胞（以下ＴＳとする）であ
ることが知られている。
従って、この細胞を選択的に除去することが免疫機能上
重要な課題とされていることからも明らかなように、　
近年、医学分野においては、臨床検査、免疫診断及び免
疫治療等を目的として、細胞浮遊液から所定の細胞群を
分離する試みが盛んに行われている。例えば、上述した
免疫系細胞、特にリンパ球群とそのサブセットとを分離
するために、サブセット間の細胞比重、細胞径、表面陰
性荷電密度、免疫額的特異性、異物への粘着性、表面膜
の親水性と疎水性等の性状の差に基づいて、密度勾配遠
心分離法、沈降速度法、細胞電気泳動法、表面膜法、向
流分配法等の細胞分離法が試みられているものの、純度
、回収率、生物学的活性保持の３項目を充分に満たす方
法は未だ確立されていない。同様にまた、リンパ球の中
からＴＫｌ［ｌ胞、Ｂ細胞、Ｋ細胞、ＮＫＩ細胞等を分
離する場合、これらの細胞ポピユレーションを変化させ
ずに分離する方法は知られていない。
特開昭５７−２０４４５４号公報及び特開昭５６−１４
０８８６号公報には、有機高分子化合物を利用してＴＫ
ｌ［１胞を分離回収する方法が提案されている。即ち、
酸性官能基を有する粒状体や微細孔を有する疎水性且つ
水不溶性の粒状体、具体的には、エチレン、プロピレン
、塩化ビニル、酢酸ビニル、スチレン、ジビニルベンゼ
ン、アクリロニトリル、メタクリル酸メチルの重合体若
しく【よ共重合体又はナイロン、ポリカーボネート、ポ
リエステル等、疎水性重合体又は共重合体及びこれらに
スルホン基、カルボキシル基、ホスホン基若しくはフェ
ノール基を導入した有機高分子化合物を利用してＴ細胞
を分離するものである。
又、現在、国際的には架橋デキストラン・セルを用いる
セファデフクスＧＩＯ法が公認されてし）る。この方法
の原理は、十分に解明されているわけではないが、細胞
付着性の差異に依存し、マクロファージやサイズが太き
（付着性を有するアクセサリ−細胞が付着によって分離
され、Ｔ細胞やＢ細胞は通過するものと考えられている
。
他の具体例として、ナイロンウールを用いる分離カラム
が公認されている。この方法は、Ｔ細胞に富む分離細胞
群を得る手段として使用されている。
（発明が解決しようとする問題点） しかしながら、上記の如き従来の技術によっては、細胞
浮遊液から所定の細胞を、そのポピユレーションを変化
させずに分離することは困難であり、また、免疫抑制細
胞、即ち、免疫抑制性リンパ球及び／又は免疫抑制因子
産生細胞を高純度、高回収率にて分離除去することも困
難であった。
更に、前記した特開昭５７−２０４４５４号公報及び同
５６−１４０８８６号公報にて提案された細胞分離方法
は、粒状体の平均粒径が小さく、カラムが詰まり易いこ
との他、有機高分子化合物又は残留低分子化合物が細胞
活性に毒作用を与えるという問題点がある。
又、セファデックス０１０法では、非付着性の小型アク
セサリ−細胞は通過し、Ｔ細胞のサブボプユレーション
のあるものは付着してしまうので、Ｔ細胞ボブニレ−ジ
ョンを完全な形で得ることはできず、免疫診断上の問題
点となっている。
一方、ナイロンウールを使用する分離方法は、Ｔ細胞に
冨む分離細胞群を得る手段としては有用である他、比較
的純度の高いＴ細胞が得られる等の評価がなされ、従来
多く活用されているものの、免疫抑制因子、即ち、免疫
抑制性リンパ球及び／又は免疫抑制因子産生細胞を分離
除去する場合には、純度７５％、回収率２０〜３０％が
限界で、研究目的を別とすれば実用性がな（、分離の前
後で細胞浮遊液中のＴ１１１胞ボブニレ−ジョンが変化
するという難点を有している。
更に、この方法においてはナイロンウールの製造ロフト
の違い、ウールのほぐし方、カラムへの詰め方或いは洗
浄の仕方によって分離能や分離パターンが変動するとい
う点において、有機材料系分離剤に共通の欠点をも有し
ている。
このように、細胞の付着性を利用する細胞分離方法は、
現在実用化が開始されたばかりであり、一層、高能率、
高速度、高精度の細胞分離方法を実現するための分離方
法及び分離剤の改良、或いは新分離剤の開発が強く要求
されている。
ポリアクリロニトリル、ポリメタクリル酸メチルやナイ
ロン、ポリカーボネート、ポリエステル系重合体等の疎
水性重合体やこれらの重合体にスルホン基、カルボキシ
ル基、ホスホン基或いはヒドロキシ基等を導入した高分
子等を利用する場合も同様である。更に、これら有機系
の分離材を使用する細胞分離方法は、粒状体の平均粒径
が小さいのでカラムが詰まりやすく、又高分子中の残留
低分子物質が細胞活性に毒作用を及ぼすことがあるとい
う問題点がある。
以上説明してように、免疫抑制細胞を高純度、高回収率
で分離除去して免疫機能の回復を達成するなどの実用化
を究極の目的として、この目的を達成し得る分離方法自
体の改良や分離剤の改良、特に新材料の開発が強く望ま
れていた。
（発明の目的） 従って本発明の第１の目的は、実用上のレベル（純度９
５％以上、回収率７０％以上）にて免疫抑制性リンパ球
及び／又は免疫抑制産生細胞を分離除去し得る細胞分離
能及び分離精度が高い細胞分離剤を提供することに有る
。
本発明の第２の目的は、再現性の高い細胞分離剤を提供
することにある。
本発明の第３の目的は、細胞分離操作を簡略化すること
のできる細胞分離剤を提供することにある。
本発明の第４の目的は、良好な細胞分離能を有し、分離
精度及び分離再現性に優れ、且つ、細胞分離１桑作を簡
略化することのできる細胞分離剤を製造する方法を提供
することに有る。
本発明の第５の目的は、簡単な操作性にもかかわらず、
再現性良く、良好な細胞分離能と高い分離精度を発揮す
ることのできる細胞分離器を提供することに有る。
更に、本発明の第６の目的は、実用上のレベル（純度９
５％以上、回収率７０％以上）にて免疫抑制性リンパ球
及び／又は免疫抑制因子産生細胞を分離除去し得る免疫
抑制性リンパ球及び／又は免疫抑制因子産生細胞の除去
方法を提供することにある。
（問題を解決するだめの手段） 本発明者等は、上記の諸口的を達成すべく種々の検討を
行った結果、ハイドロキシ・アパタイト繊維体が免疫抑
制性リンパ球や免疫抑制因子産生細胞等の免疫細胞群に
対して優れた吸着活性を有することを見出し、本発明に
到達した。
（発明の構成） 即ち本発明は、ハイドロキシ・アパタイト繊維体からな
る細胞分離剤及び、水溶性高分子化合物の水溶液にハイ
ドロキシ・アパタイトを均一に分散した溶液を紡糸液と
する、上記ハイドロキシ・アパタイト繊維体の製造方法
並びに、少なくとも該ハイドロキシ・アパタイト繊維体
を分離剤として使用する細胞分離器、並びに該細胞分離
器に免疫抑制性リンパ球及び／又は免疫抑制因子産生細
胞を含む細胞浮遊液を注入することにより、前記細胞分
離剤に免疫抑制性リンパ球及び／又は免疫抑制因子産生
細胞を吸着せしめて前記細胞浮遊液から免疫抑制性リン
パ球及び／又は免疫抑制因子産生細胞を分離除去する、
免疫抑制性リンパ球及び／又は免疫抑制因子産生細胞の
除去方法である。
本発明で用いるハイドロキシ・アパタイト繊維体は、平
均繊維径が１μｍ−１００μｍであることが好ましい。
平均繊維径が１μｍ未満では、対象ｍ抱の大きさとの関
係から細胞分ｇｌｔ操作時の流れが悪く、詰まりやすい
という問題が生じ、平均＆５ｉｗ、径が１００μｍを超
えると、吸着表面禎の低下に起因して分離能が低下する
ので好ましくない。
又、ハイドロキシ・アパタイトの中でも、特にハイドロ
キシ・カルシウム・アパタイトが好ましい。
ハイドロキシ・カルシウム・アパタイトのＣａ／Ｐの理
論値は約１．６６であるが、本発明においては、Ｃａと
Ｐの割合が１．４≦Ｃａ　／　Ｐ≦１゜８の範囲のもの
を使用することができる。Ｃａ／Ｐが上記範囲を外れる
と、吸着能が低下し、ひいては分離能が低下するので好
ましくない。
本発明のハイドロキシ・アパタイト繊維体は、所謂溶液
紡糸の技術を使用して実質的にアパタイトのみからなる
不織布の形態で製造することができる。
即ち、本発明においてはバインダーとして機能する高分
子溶液にハイドロキシ・アパタイトを均一に分散せしめ
て紡糸液とする。この場合に使用する高分子溶液として
は、溶液紡糸が可能な公知のものの中から任意に選択す
ることができるが、特に細胞分離に悪い影響を与えるこ
とを避けるという観点から、水溶性高分子を溶解した水
溶液を使用することが好ましい。
従って、本発明で使用するバインダーとしては、分子中
に−ＯＨ，−ＣＯＯＨ，−ＣＯＮＨ２基等を有する水に
可溶な線状高分子化合物が好ましい。
このような高分子化合物としては、例えばマルトトリオ
ースがα−１，６−グリコキシド結合により反１ｙ結合
した直鎖状グルカンであるプルラン、ポリビニルアルコ
ール、ポリアクリルアミド、ポリアクリル酸、ポリメタ
クリル酸、ポリイタコン酸、ポリエチレンオキシド、ポ
リビニルピロリドン、ポリビニルメチレンエーテル、ヒ
ドロキシプロピルセルロース、キサンタンガム、ガーガ
ム、コラーゲン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボ
キシメチルセルロース等を上げることができる。
これらの高分子化合物の分子量には特に制限はないが、
２万〜２００万のものが好ましく、特に５万〜１００万
のものが好ましい。
本発明においては、ポリビニルアルコール、カルボキシ
メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、コ
ラーゲン及びプルラン等が好ましく特にプルランの如き
多糖類が最適である。これらのバインダーは、２種以上
を混合して使用することもできる。
本発明で使用するハイドロキシ・アパタイトは公知の方
法で合成したもの又は天然のものを粒径５０人〜１．ｃ
ｒｍの微粒子状に粉砕して使用する。
この場合、アパタイトの形状は特に限定されないが、特
に棒状のものを使用した場合には、焼成後手１１１１布
の形状を取ることが容易であり好ましい。
この理由は必ずしも明らかではないが、棒状のアパタイ
トは紡糸工程で配列しやすいためと推定される。このよ
うな棒状のアパタイトは、例えばカルシウムイオンを含
むアルカリ性溶液（ｐＨニア〜１１）に燐酸水溶液を徐
々に滴下することにより合成することができる。
本発明においては、上記バインダーの水溶液にハイドロ
キシ・アパタイトを分散させた分散液を原料とするが、
この原料液の組成は、水が１０重重量〜９０重沿％、好
ましくは５０重量％〜７゜重量％、更に好ましくは６０
重量％〜６５重量％、ハイドロキシ・アパタイトが５重
量％〜７０重ｉ１％、好ましくは１５Ｍ量％〜３ｏ重量
％、更に好ましくは１５重量％〜２ｏ重量％であり、バ
インダーが５重量％〜４０重量％、好ましくは１５重量
％〜３０重量％、更に好ましくは２０重量％〜２５重量
％である。
上記原料液を調製する場合には、必要に応じて可塑剤又
は柔軟剤として、水の他にグリセリン、ソルビトール、
マルチトール、エチレングリコール、ポリプロピレング
リコール等の多価アルコールを添加することができる。
又、水溶液中の分散質の分散を良好なものとするために
、有機カルボン酸を添加することもできる。
本発明においては、約り０℃〜約７０℃の温度範囲で上
記の原料液を調製することが好ましい。
本発明の繊維体を製造する方法の１例として、次にその
概要を述べる。
まず第１に、ハイドロキシ・アパタイトをバインダーで
ある水溶性若しくは水分散性高分子化合物の水溶液に分
散せしめた原料液に、更に必要に応じて可塑剤及び又は
柔軟剤を添加して調整した水溶液若しくは水可塑溶融液
を、細孔を有する複数個の溶融体紡糸ノズルを中方向に
直線的に配列したダイスより押し出すと同時に、該ノズ
ル廻りより流出速度約５ｍ／秒〜約１０００ｍ／秒、温
度約２０℃〜約６０℃の気体、例えば空気を噴出させる
ことにより、延伸された極細繊維からなる繊維流を形成
せしめる。この場合の繊維の径は、上記噴出する気体の
流出速度により、例えば約１μｍ〜約１００μｍの範囲
に入るように、任意に調節することができる。
次に、上記の繊維流を、ダイス下に設けられた加熱装置
、例えば遠赤外線ヒーター、赤外線ヒーター又はマイク
ロ波加熱器等により加熱し、繊維中の水分を含水率１０
重量％以下、好ましくは約７重量％以下に蒸発除去して
固化する。水分の除去が不十分であると極細繊維体を得
ることができない、この場合、繊維流に対する加熱温度
は、原料液の押し出し量、噴出気体の温度及び風量のバ
ランス等により選択されるが、通常は約り０℃〜約１５
０℃の範囲である。加熱温度を必要以上に高くした場合
には、加熱工程においてバインダーの分解が発生する場
合があるために好ましくない。
上記のようにして、延伸され且つ水分が除去された極細
繊維流を、移動する捕集装置、例えばネット型の回転ド
ラム、移動ベルト等の上に交絡するように落下させるこ
とにより線状の繊維体を得ることができる。この場合、
繊維流を、回転する２個のネット型捕集ドラムの接点に
吹き付は落下させた場合には、交絡した繊維が不織布の
厚さ方向（即ち３次元的に）に配列した嵩高の綿状体が
得られる。又、繊維流を上記捕集ドラムの接点以外の箇
所又は平板状の捕集ベルト等に吹き付は落下させた場合
には、繊維が平面に平行（即ち２次元的に）に配列した
綿状体が得られる。又、不織布の目付重量は、上記繊維
流の捕集装置の移動速度を変えることにより、例えば５
ｇ／ｒｒｆ〜５００ｇ／％の範囲となるように、任意に
調節することができる。
本発明においては、上記の未焼成の繊維体をバインダー
の高分子化合物を熔解除去した後そのまま細胞分離剤と
して使用することができるが、これを更に焼成して用い
ることもできる。焼成温度は、細胞分離剤として使用す
る条件によって、−概に決めることはできないが、通常
、焼成は約り００℃〜約１３５０℃の温度、特に約り０
０℃〜約１２００℃で行うことが好ましい。焼成温度が
１２００℃以下ではハイドロキシ・アパタイトの水酸基
の消失は極めて少量であり、焼成時間に多少依存すると
は言え、水酸基の消失は殆ど無視することができる程度
である。従って必要な場合には、焼成温度を約り１００
℃〜約１２５０℃に設定することにより、繊維体の中の
ハイドロキシ・アパタイトの含有量を調節することがで
きる。例えば、ハイドロキシ・カルシウム・アパタイト
の一部は焼成によりＣａ３　（ＰＯ４）２に変化するの
で、これにより細胞に対する付着能のみならず、得られ
たアパタイト繊維体の強度等の物性をも調整することが
できる。
本発明のハイドロキシ・アパタイトには上記の如（Ｃａ
３　（ＰＯ４）２が含有される場合も包含される。
次に、本発明のハイドロキシ・アパタイト繊維体の製造
方法を第２図に従って説明する。
第２図は、本発明の繊維体の製造装置を例示した側面略
図である。この装置は、原料タンク（２）、モーター（
３）、ギヤポンプ（４）、紡糸ノズル（５）、ブロアー
（６）、エアノズル（７）、遠赤外線ヒーター（９）、
ネット型捕集ドラム（１１）、巻き取り装置（１３）、
リフター（１４）及び管路（１５）から構成されている
。
原料タンク（２）には、原料供給管（１）を通してアパ
タイト粒状物を含有する水性懸濁液と特定の水溶性バイ
ンダーとの混合溶液である粘性液体が供給される。この
粘性液体は管路（１５）を介して、モーター（３）より
駆動するギアポンプ（４）により紡糸ノズル（５）から
押し出されると同時に、紡糸ノズル廻りに設置されたエ
アノズル（７）からブロアー（６）で空気を高速度で吐
出させ、下向きに吹き付けられて延伸され繊維流（８）
を形成させる。繊維流（８）はネット型捕集ドラム（１
１）に落下捕集される間に遠赤外線ヒーター（９）から
なる加熱装置で加熱されて繊維中の水が蒸発除去される
。水分の除去された繊維流（１０）は２（［！ｉｌのネ
ット型捕集ドラム（１１）の接点に交絡して落下し綿状
の繊維体を形成する。
以上の如（して得られたハイドロキシ・アパタイト繊維
体が免疫抑制性リンパ球や免疫抑制因子産生細胞等の免
疫細胞群に対して示す吸着性は、この物質が本来を椎動
物の青成分と同一物質である事実に由来するものと考え
られる。この物質は、バイオアクチブ・マテリアルであ
り、生きた細胞に対するその特異的吸着性、接着性及び
その制御可能性においてこの右に出湯る材料はなく、付
着性細胞分離剤として最適である。
本発明においては、ハイドロキシ・アパタイト繊維体の
表面に、例えば生体由来のヒアルロン酸、コンドロイチ
ン硫酸、キチン誘導体、フィブロネクチン、オステオネ
クチン等の多糖体やムコ多糖体、及び／又はその誘導体
を部分吸着させ、基質表面の物理化学的性質あるいは免
疫学的性質を改質して、対象細胞群のそれぞれに対する
吸着活性を巧妙に変化させることもできる。これによっ
て、カラムの分離特性を効果的に変化させ、シャープな
溶出パターンを与える分離特性や、分離スペクトラムの
制御を行うことが可能となる。更に、細胞のサブポピユ
レーションの各々に対する吸着効果が改善されて、特定
のサブポピユレーションを選択分離することも可能とな
る。実際の使用に際してば、細胞浮遊液の流出入口を有
するカラムに、細胞分離剤として、少なくともハイドロ
キシ・アパタイトの繊維体及び／又は顆粒を使用するこ
とにより、容易に高性能の細胞分離器を作製することが
できる。更に、大量の細胞を処理するカラムに対しては
、多段のカスケード構造の利用や、吸着特性の不均一分
布構造の利用、あるいはＵ字管方式の利用により、細胞
浮遊液の通過スピードの自在な制御も可能となる。微細
な分離パターンを得るために、無重力下の対流フリー、
純拡散のみのカラム通過を行うこともできる。
繊維状アパタイトと顆粒状アパタイトを夫々充裟して、
２段充瞑方式とすることもでき、更にこの場合、繊維状
アパタイトからなる充填層及び顆粒状アパタイトからな
る充填層のいずれの層を上段又は下段とするかについて
も、任意に選定することができるが、特に繊維状アパタ
イトを上段に配することが好ましい。
ハイドロキシ・アパタイトの顆粒体は、平均粒径約１μ
ｍ〜約２，０００μｍのものであり、好ましくは約５０
μｍ〜約２，０００μｍ以下である。
この顆粒体は焼成されたものであり、その焼成温度は約
り００℃〜約１．３５０℃とすることが好ましい。又、
焼成体のＣａとＰの配合比は、１゜４≦Ｃａ　／　Ｐ≦
１，８とすることが好ましいが、この粒状体の製造法は
特に限定されるものではない。
本発明によれば、少なくとも上記ハイドロキシ・アパタ
イト繊維体からなる細胞分離剤を充虜した細胞分離器は
免疫抑制性リンパ球や免疫抑制因子産生細胞等の特定細
胞を高純度・高回収率で除去することができるので、免
疫抑制性リンパ球及び／又は免疫抑制因子産生細胞を除
去するのに、本発明は））めて有用である。
（発明の効果） 本発明によれば、細胞を免疫的に刺激することなく、免
疫抑制性リンパ球及び／又は免疫抑制因子産生細胞を純
度９５％以上、回収率７０％以上にて分離除去すること
ができるなど、従来法に比べて極めて安定且つ高い分離
能を持って細胞を分離することができる。又、分離操作
は太き（簡略化され、分離の所要時間は従来法の数分の
−あるいは十数骨の−に短縮される。すなわち、分離剤
の保水率が極めて小さいのでワンステップ法が利用でき
、直接細胞浮遊液を流し込むことができる上、目的によ
っては洗浄も不要である。滅菌されたカラム（小規模の
目的には注射器でよい）と滅菌された分離剤（１００℃
〜５００℃の任意の温度で加熱滅菌筒）を用いることに
より、分離剤のカラムへの装着を掻めて容易且つ短時間
で使用可能にセントすることができるので、準備操作の
面でも極めて経済的である。特に本発明で使用する繊維
状アパタイトは、マイクロファージ混入率が小さいので
、純度の高い７４ｍ胞のみを回収することができる。又
モノサイトの混入を最小限に押さえることができるので
陽性率が高い。使い捨てカラムに分離剤等を詰めて完全
滅菌条件下で市場に提供することも極めて容易である。
更に本発明に係る細胞分離剤及び細胞分離器は上述した
性質を有するため、免疫抑制性リンパ球及び／又は免疫
抑制因子産生細胞の有効な除去方法を提供するものであ
る。
（実施例） 以下、本発明をリンパ細胞の分離に適用した実施例を挙
げるが、本発明は他の付着性細胞にも通用可能である。
なお、以下の実施例は、いずれも第１図に示すような細
胞分離器を用いて実施したものである。
この細胞分離器は、細胞浮遊液の入口２ｏ及び出口２５
を有するカラム２１内にフィルター２４（プラスチック
、ガラス、セラミックス等の通気性多孔体や繊維が用い
られる）が配置され、それにハイドロキシ・カルシウム
・アパタイト焼結体からなる分離剤２が充填されてでき
ている。
実施例１゜ 内容積１０ｍＪのカラムにガラスウールｏ、０２ｇをＱ
、３ｒｎｆｆになるように詰め、これに１゜０００℃で
焼成した平均繊維径１０〜１５μｍのハイドロキシ・カ
ルシウム・アパタ・イト繊維焼結体（Ｃａ／Ｐ＝　１．
６６）　０．７　ｇヲ１．５ｍＡになるようにタップし
ながら充填し、細胞分離器とした。
細胞分離器の洗浄は、初め生理食塩水を流し、次に３７
℃に保温した培地（ＲＰＭＩ−１６４０）を流し、最後
に３７℃に保温したウシ胎児血清を１０％含む培地（Ｒ
ＰＭＩ−１６４０）を流すことによって行った。
次に予め比重遠心法により正常人末梢血から分離した単
核細胞をウシ胎児血清を１０％含む培地（ＲＰＭＩ−１
６４０）に浮遊させ、その０．４ｍｌをカラムにのせ、
浸透させて３７゛ｃで１時間インキュベートした。その
後、培地（Ｒ１）ＭＩ−１６４０）で細胞を流出させた
。
カラム通過前後の細胞数をヘモサイトメーターを用いて
数え、細胞の回収率を関べた所７５％の回収率を得た。
本発明で使用したハイドロキシ・カルシウム・アパタイ
ト繊維焼結体のかわりにナイロンウールを使用した従来
の細胞分離器の場合の細胞回収率的３０％と比較すると
、本発明の場合が極めて良好であることは明らかである
。
実施例２゜ 内容積５ｍｌのカラムにガラスウール０，０２ｇを０．
８ｍｊ！になるように詰め、これに１，１００℃で焼成
した平均繊維径５〜１０μｍのハイドロキシ・カルシウ
ム・アパタイト繊維焼結体（Ｃａ／Ｐ＝１．６６）０．
２ｇを０．１ｍｌになるようにタップしながら充填し、
細胞分離器として実施例１と同様の試験を行い、８２％
という高い細胞回収率を得た。
実施例３゜ 内容積５　ｍ　ｌのカラムにガラスウール０．０２ｇを
Ｑ、１３ｍ１になるように詰め、これに１０００℃で焼
成した平均繊維径５〜１０μｍのハイドロキシ・カルシ
ウム・アパタイトｆＪＪｉ維焼結体（Ｃａ／Ｐ＝１．６
６）０．１５ｇを０．５ｍｌ！になるようにタップしな
がら充填し、細胞分離器として実施例１と同様の試験を
行った。細胞回収率は７４％であった。
実施例４゜ 内容Ｑ　５　ｍ　ｌＯカラムにガラスウール０．０２ｇ
をＯ，ａｍｌになるように詰め、これに７００℃で焼成
した平均粒径４００〜５００μｍのハイドロキシ・カル
シウム・アパタイト顆粒焼結体（Ｃａ／Ｐ＝１．６７）
０．３５ｇを０．４ｍｌになるようにタップしながら充
填し、更にその上部に、１．０００℃で焼成した平均繊
維径５〜１０μｍのハイドロキシ・カルシウム・アバタ
イ繊維焼結体（Ｃａ／Ｐ＝１．６６）０．１５ｇを０゜
４ｍｌになるようにタップしながら充填し、細胞分離器
として（第１図）、実施例１と同様の試験を行い８０％
の細胞回収率を得た。
実施例５゜ 内容積５ｍｌのカラムにガラスウール０．０２ｇを０．
８ｍ７！になるように詰め、これに７００℃で焼成した
平均粒ａ４ｏ　ｏ〜５００μｍのハイドロキシ・カルシ
ウム・アパタイト顆粒焼結体（Ｃａ／Ｐ＝１．６７＞０
．３５ｇを０．４ｍｌ！になるようにタップしながら充
填し、更にその上部に１．０００℃で焼成した平均繊維
径５〜１０μｍのハイドロキシ・カルシウム・アバタイ
繊維焼結体（Ｃａ／Ｐ＝１．６６）０．１　ｇを０．４
ｍｉになるようにタップしながら充填した他は実施例４
と同様にして、細胞分離器とし、実施例１と同様の試験
を行った。細胞回収率は８４％であった。
実施例６゜ 実施例１〜５の細胞分離器を用いて、Ｔ細胞、ＢＩＩ［
Ｉ胞及びモノサイトの陽性率（％）を測定した結果、各
々の場合について表１の結果を得た。
測定は、カラム通過後の細胞を螢光標識抗体Ｌｅｕｌ、
Ｌｅｕ１２．ＬｅｕＭ３でラベルし、活性細胞螢光検知
器（ＦｌｏｕｒｅｓｃｅｎｃｅＡｃＣｉｖａｔｅｄ　　
Ｃｅ１ｌ　　５ｏｒｔｅｒ）を用いて行った。
比較例１゜ 内容積５ｍｌのカラムにガラスウール０．０２ｇを０．
８ｍ１ｌになるように詰め、これに７００℃で焼成した
平均粒径４００〜５００μｍのハイドロキシ・カルシウ
ム・アパタイト顆粒焼結体（Ｃａ／Ｐ＝　１．６７）　
０．８　ｇを０．８ｍＪになるようにタップしながら充
填し、細胞分離器として実施例６と同様に試験を行った
。結果は表１に示した通りである。
比較例２゜ 比較例１のハイドロキシ・カルシウム・アパタイト顆粒
焼結体の替わりにナイロンウールを使用した結果は表１
に示す通りである。
表１の結果からアパタイト繊維体を使用した場合には、
モノサイトを極めて低く押さえられることが実証された
。
実施例７〜９ 内゛容積１ｍｊ２のツヘルクリン庄射笥をカラムに用い
、細孔部と接続されたカラム底部に、フィルターとして
ガラスウール（１０〜２０μｍ）０゜０２ｇを０．０２
ｍｊ２になるように詰め、次いで７００℃で焼成したア
パタイト顆粒体（４００〜６００μｍ）０．４ｇをＱ、
４ｍｊｌ！になるように充填し、その上部に１，１００
℃で焼成したアパタイト繊維体（５〜２０μｍ）０．２
ｇを０．　４ｍｌになるように充填し、細胞分離器を形
成した。
細胞分離器を使用する前に予め実施例の場合と同様の洗
浄を行った。
次に、正常人末梢血からＦｉｃｌｌ−１ｓｏｐａｑｕｅ
比重遠心法によりリンパ球を分離し、分離した細胞２×
１０７個をウシ胎児血清を１０％含む培地（ＲＰＭｌ−
１６４０）０．２ｍｌに浮遊させて、細胞浮遊液を調製
した。
調整細胞浮遊液を前記カラムに重層し、浸透させた後培
地（ＲＰＭＴ−１６４０）５ｍｊ２を流し、細胞を流出
させた。流出してきた細胞を用い、螢光標識抗体法で解
析した。使用した螢光標識抗体は、Ｌ、ｅｕ２及びＬｅ
ｕ１５　（藤沢薬品）で、ｔｗｏ　　ｃｏｌｏｒ染色を
行った。
表２に細胞分離器通過前と通過後におけの免疫抑制細胞
の含有百分率を示す。
実施例１０−１２゜ 実施例７で使用した正常人末梢血から分離したリンパ球
の代わりに、聴神経Ｒ＠蕩患者、上顎癌患者、結腸癌患
者の各々の末梢血から分離したリンパ球を使用した他は
実施例７と同様にして、表２に示す結果を得た。
実施例１３゜ 実施例ＩＯで使用したリンパ球の代わりに、正常人の末
梢血（ヘパリン入り）を生理食塩水で２倍に希釈し、そ
の５ｍｌ！を上記洗浄後の細胞分離器に注入し、流出し
てきた１３）ｆ［塩化アンモニウム溶液で赤血球を溶血
して、リンパ球を分離した他は実施例７と同様にして表
２に示す結果を得た。
表２ 表２の結果から明らかなように、本発明に係る細胞分離
器は免疫抑制性リンパ球、免疫抑制因子産生２■胞の除
去性能に優れていることが実証された。又、本発明の細
胞分離器の細胞回収率も７０％程度と良好であった。
実施例１４ ８週令のラット１０匹にう・ノドの癌であるＷａｌ　ｋ
’ｅ　ｒ　２５６細胞を各ｌＸ１０７個移入した。
移入３日後に右大腿部静脈から血液を取り出し、実施例
１と同様の細胞分離器に通し、左大腿部静脈に戻す循環
を１時間！Ｉｆ、、’ｔした。この時ヘパリンを使用し
、血液が途中でかたまらないように注意した。循環４日
目にヒツジ赤血球（Ｓ　ＲＢ　Ｃ）を使用し足随拭験を
行い、循環したラットと１Ｍ環していないラットの免疫
機能と遅延型過敏症を門べた。この後、ラットがいつま
で生き続けるか調べた。
表３ 表３から明らかなように、循環を行うことにより免疫機
能抑制因子を除去し免疫機能を正常にするばかりでなく
、生存日数も１．５倍延長できたことから、本発明にか
かる細胞分離剤及びそれを使用した細胞分離器の効果が
証明された。
尚、このような免疫抑制リンパ球を特異的に吸着する性
質を有する本発明の細胞分離器に血液を流し循環させる
方法により、免疫機能の回復が可能となり、又、血液循
環を行いながら制癌剤を投与することにより制癌効果も
期待することができるという２次的効果もある。
【図面の簡単な説明】
第１図は本発明の細胞分離器の１例である０図中、符号
２１はカラム、２２はハイドロキシ・アパタイト繊維、
２３はハイドロキシ・アパタイト顆粒、２４はガラスフ
ィルターである。 第２図は、本発明のハイドロキシ・アパタイト繊維体を
製造するための装置の１例を示す側面略図である。図に
おいて、符号ｌは原料供給管、２は原料タンク、３はモ
ーター、４はギアーポンプ、５は紡糸ノズル、６はブロ
アー、７はエアノズル、８は脱水前の繊維流、９は遠赤
外線ヒーター、１０は説水後の繊維流、１１はネット型
捕集ドラム、１２は繊維体、１３は巻き取り装置、１４
はリフター、１５は管路である。 第１図

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １）ハイドロキシ・アパタイト繊維体からなることを特
    徴とする細胞分離剤。 ２）ハイドロキシ・アパタイト繊維体がハイドロキシ・
    カルシウム・アパタイト繊維体である特許請求の範囲第
    １項に記載の細胞分離剤。 ３）ハイドロキシ・カルシウム・アパタイト繊維体が平
    均繊維径１μｍ〜１００μｍである特許請求の範囲第２
    項に記載の細胞分離剤。 ４）ハイドロキシ・カルシウム・アパタイトに含有され
    るカルシウムとリンの比がＣａ／Ｐ＝１．４〜１．８で
    ある特許請求の範囲第２項に記載の細胞分離剤。 ５）水溶性高分子化合物の水溶液にハイドロキシ・アパ
    タイトを均一に分散せしめ、得られた分散液を細孔を有
    する紡糸ノズルを配列したダイスより押し出すと同時に
    、該ノズル廻りより圧縮気体を噴出せしめることにより
    、延伸された繊維からなる繊維流を形成せしめ、次いで
    該繊維流を１００℃以上に加熱して繊維中の水分を除去
    し、捕集装置の上に交絡するように落下せしめることを
    特徴とするハイドロキシ・アパタイト繊維体及び水溶性
    高分子化合物とからなる細胞分離剤の製造方法。 ６）水溶性高分子化合物の水溶液にハイドロキシ・アパ
    タイトを均一に分散せしめ、得られた分散液を細孔を有
    する紡糸ノズルを配列したダイスより押し出すと同時に
    、該ノズル廻りより圧縮気体を噴出せしめることにより
    、延伸された繊維からなる繊維流を形成せしめ、次いで
    該繊維流を１００℃以上に加熱して繊維中の水分を除去
    し、捕集装置の上に交絡するように落下せしめ、次いで
    ２００℃〜１，３５０℃で焼成することを特徴とするハ
    イドロキシ・アパタイト繊維体からなる細胞分離剤の製
    造方法。 ７）焼成温度が４００℃〜１，２００℃である特許請求
    の範囲第６項に記載のハイドロキシ・アパタイト繊維体
    からなる細胞分離剤の製造方法。 ８）細胞浮遊液の流出入口を有するカラムに、分離剤と
    して、少なくとも、ハイドロキシ・アパタイト繊維体を
    充填したことを特徴とする細胞分離器。 ９）ハイドロキシ・アパタイト繊維体がハイドロキシ・
    カルシウム・アパタイト繊維体である特許請求の範囲第
    ８項に記載の細胞分離器。 １０）ハイドロキシ・カルシウム・アパタイト繊維体の
    平均繊維径が１μｍ〜１００μｍである特許請求の範囲
    第９項に記載の細胞分離器。 １１）分離剤として、ハイドロキシ・アパタイト繊維体
    の他にハイドロキシ・アパタイトの顆粒を併用する特許
    請求の範囲第８項乃至第１０項の何れかに記載の細胞分
    離器。 １２）分離剤として、ハイドロキシ・アパタイト繊維体
    の下部にハイドロキシ・アパタイトの顆粒を充填した特
    許請求の範囲第１１項に記載の細胞分離器。 １３）ハイドロキシ・アパタイトの顆粒が平均粒径１μ
    ｍ〜２，０００μｍである特許請求の範囲第１１項又は
    第１２項に記載の細胞分離器。 １４）ハイドロキシ・アパタイトの顆粒が平均粒径５０
    μｍ〜２，０００μｍである特許請求の範囲第１３項に
    記載の細胞分離器。 １５）細胞浮遊液の流出入口を有するカラムに、細胞分
    離剤として、少なくとも、ハイドロキシ・アパタイト繊
    維体を充填した細胞分離器に、免疫抑制性リンパ球及び
    ／又は免疫抑制因子産生細胞を含む細胞浮遊液を注入す
    ることにより、前記細胞分離剤に免疫抑制性リンパ球及
    び免疫抑制因子産生細胞を吸着せしめ、前記細胞浮遊液
    から免疫抑制性リンパ球及び／又は免疫抑制因子産生細
    胞を分離除去することを特徴とする、免疫抑制性リンパ
    球及び／又は免疫抑制因子産生細胞の除去方法。 １６）ハイドロキシ・アパタイト繊維体がハイドロキシ
    ・カルシウム・アパタイト繊維体である特許請求の範囲
    第１５項に記載の免疫抑制性リンパ球及び／又は免疫抑
    制因子産生細胞の除去方法。 １７）ハイドロキシ・カルシウム・アパタイト繊維体の
    平均繊維径が１μｍ〜１００μｍである特許請求の範囲
    第１６項に記載の免疫抑制性リンパ球及び／又は免疫抑
    制因子産生細胞の除去方法。 １８）分離剤として、ハイドロキシ・アパタイト繊維体
    の他にハイドロキシ・アパタイトの顆粒を併用する特許
    請求の範囲第１５項乃至第１７項の何れかに記載の免疫
    抑制性リンパ球及び／又は免疫抑制因子産生細胞の除去
    方法。 １９）分離剤として、ハイドロキシ・アパタイト繊維体
    の下部にハイドロキシ・アパタイトの顆粒を充填した特
    許請求の範囲第１８項に記載の免疫抑制性リンパ球及び
    ／又は免疫抑制因子産生細胞の除去方法。 ２０）ハイドロキシ・アパタイトの顆粒が平均粒径１μ
    ｍ〜２，０００μｍである特許請求の範囲第１８項又は
    第１９項に記載の免疫抑制性リンパ球及び／又は免疫抑
    制因子産生細胞の除去方法。 ２１）ハイドロキシ・アパタイトの顆粒が平均径５０μ
    ｍ〜２，０００μｍである特許請求の範囲第２０項に記
    載の免疫抑制性リンパ球及び／又は免疫抑制因子産生細
    胞の除去方法。 ２２）細胞浮遊液の流出入口を有するカラムに、細胞分
    離剤としてハイドロキシ・アパタイトの顆粒を充填した
    細胞分離器に、免疫抑制性リンパ球及び／又は免疫抑制
    因子産生細胞を含む細胞浮遊液を注入することにより、
    前記細胞分離剤に免疫抑制性リンパ球及び免疫抑制因子
    産生細胞を吸着せしめ、前記細胞浮遊液から免疫抑制性
    リンパ球及び／又は免疫抑制因子産生細胞を分離除去す
    ることを特徴とする、免疫抑制性リンパ球及び／又は免
    疫抑制因子産生細胞の除去方法。 ２３）ハイドロキシ・アパタイトの顆粒が平均粒径１μ
    ｍ〜２，０００μｍである特許請求の範囲第２２項に記
    載の免疫抑制性リンパ球及び／又は免疫抑制因子産生細
    胞の除去方法。 ２４）ハイドロキシ・アパタイトの顆粒が平均径５０μ
    ｍ〜２，０００μｍである特許請求の範囲第２３項に記
    載の免疫抑制性リンパ球及び／又は免疫抑制因子産生細
    胞の除去方法。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5085781A (en) * 1989-02-28 1992-02-04 Asahi Kogaku Kogyo Kabushiki Kaisha Separating agent, separator and method of separating cell or virus
DE202018006859U1 (de) 2017-02-10 2024-01-22 Mitsubishi Chemical Corporation Leitfähige Zusammensetzung und Leiter

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0376331A3 (en) * 1988-12-29 1991-03-13 Asahi Kogaku Kogyo Kabushiki Kaisha Slow release drug delivery granules and process for production thereof
JPH0832551B2 (ja) * 1989-06-24 1996-03-29 旭光学工業株式会社 多孔質リン酸カルシウム系化合物粒子及びその製造方法
JPH0749086B2 (ja) * 1991-01-30 1995-05-31 ベステクス株式会社 フィルタ材の製造方法
JPH0751209B2 (ja) * 1991-06-06 1995-06-05 ベステクス株式会社 フィルタ材の製造方法
JPH0749087B2 (ja) * 1991-11-05 1995-05-31 純明 鶴 フィルタ材及びその製造方法
US5232828A (en) * 1992-03-09 1993-08-03 Becton, Dickinson And Company Coating agents for cell recovery
JPH06106012A (ja) * 1992-03-16 1994-04-19 Sumiaki Tsuru フィルタ材及びその製造方法
JP3300583B2 (ja) * 1995-11-10 2002-07-08 幹男 中山 抗原又は抗体の検出シート、検出キット及び検出方法
CA2278208C (en) * 1997-01-24 2011-09-20 Asahi Medical Co., Ltd. Cell separation method
US6979307B2 (en) * 1997-06-24 2005-12-27 Cascade Medical Enterprises Llc Systems and methods for preparing autologous fibrin glue
US20080199513A1 (en) * 1997-06-24 2008-08-21 Cascade Medical Enterprises, Llc Systems and methods for preparing autologous fibrin glue
US7745106B2 (en) * 1997-06-24 2010-06-29 Cascade Medical Enterprises, Llc Methods and devices for separating liquid components
US6187192B1 (en) * 1999-08-25 2001-02-13 Watervisions International, Inc. Microbiological water filter
AU2001253721B2 (en) * 2000-04-21 2006-01-19 Watervisions International, Inc. Formation of composite materials with expandable matter
GB0011964D0 (en) * 2000-05-18 2000-07-05 Suyal N Thick glass films with controlled refractive indices and their applications
US20050098495A1 (en) * 2001-03-02 2005-05-12 Hughes Kenneth D. Purification materials and method of filtering using the same
US20040159605A1 (en) * 2002-02-01 2004-08-19 Hughes Kenneth D. Compositions of insoluble magnesium containing minerals for use in fluid filtration
US7201841B2 (en) 2003-02-05 2007-04-10 Water Visions International, Inc. Composite materials for fluid treatment
US8636919B1 (en) 2004-03-26 2014-01-28 Kenneth D. Hughes Reactive solutions
US7383946B2 (en) 2004-03-26 2008-06-10 Hughes Kenneth D Materials for storing and releasing reactive gases
WO2006102488A1 (en) * 2005-03-22 2006-09-28 Cascade Medical Enterprises, Llc Systems and methods of producing membranes

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5731621A (en) * 1980-06-19 1982-02-20 Max Planck Gesellschaft Separation of blood constituents
JPS60198458A (ja) * 1984-03-22 1985-10-07 Koken:Kk クロマトグラフイ用カラム
JPS61235752A (ja) * 1985-04-11 1986-10-21 Asahi Optical Co Ltd 細胞分離材、分離器および分離方法

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AT316729B (de) * 1971-04-06 1974-07-25 Kraus Werner Gerät zur Unterstützung der Bildung von Knochensubstanz
US4157299A (en) * 1976-01-22 1979-06-05 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Two-phase filter and thin layer chromatography process
US4257771A (en) * 1979-04-30 1981-03-24 Hugh Yee Process for measuring lecithin concentration in biological fluids
JPS56140886A (en) * 1980-04-02 1981-11-04 Asahi Chem Ind Co Ltd Agent for separating t-cell, separator and separating method therefor
GB2083825A (en) * 1980-09-11 1982-03-31 Atomic Energy Authority Uk Biologically-active composites
JPS57204454A (en) * 1981-06-11 1982-12-15 Asahi Chem Ind Co Ltd Separating material, separator and separating method of t cell
US4659617A (en) * 1984-09-11 1987-04-21 Toa Nenryo Kogyo Kabushiki Kaisha Fibrous apatite and method for producing the same

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5731621A (en) * 1980-06-19 1982-02-20 Max Planck Gesellschaft Separation of blood constituents
JPS60198458A (ja) * 1984-03-22 1985-10-07 Koken:Kk クロマトグラフイ用カラム
JPS61235752A (ja) * 1985-04-11 1986-10-21 Asahi Optical Co Ltd 細胞分離材、分離器および分離方法

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5085781A (en) * 1989-02-28 1992-02-04 Asahi Kogaku Kogyo Kabushiki Kaisha Separating agent, separator and method of separating cell or virus
USRE35267E (en) * 1989-02-28 1996-06-11 Asahi Kogaku Kogyo Kabushiki Kaisha Separating agent, separator and method of separating cell or virus
DE202018006859U1 (de) 2017-02-10 2024-01-22 Mitsubishi Chemical Corporation Leitfähige Zusammensetzung und Leiter

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