JPS6324899A - ポリアミン測定試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、尿中に存在するポリアミン特にＮｌ−アセチ
ルスペルミジン、Ｎ１−アセチルスペルミンを、動物細
胞由来のポリアミン酸化酵素を使用して、特異的かつ簡
便に測定する試薬に関する。

（従来の技術） ポリアミンは前立腺、骨髄、胸腺、膵臓など核酸、蛋白
合成の盛んな組織中で含量が高く、細胞増殖期、にはそ
の生合成が活発になり、細胞増殖と密接な関係があり、
癌患者では尿、血液などの体液中や赤血球、組織中で異
常に高い値を示すことが報告されている。１９７１年に
ラッセル等により、癌患者゛の尿中ポリアミン濃”度が
正常人のそれに比べ高いことが報告されて以来、癌と体
液中のポリアミン濃度との関係が注目されて来□た。近
年では、高速液体クロマトグラフィーを用いたポリアミ
ン分析法が進歩したことにより、従来の総プトレッシン
、スペルミジン、スペルミンの測定だけではなく、アセ
チル抱合体ポリアミンの直接分析も可能となってきた。

尿中に存在するアセチル抱合体および遊離のポリアミン
の構造を第１表に示した。

第１表　尿中ポリアミン そして、高速液体クロマトグラフィーによる研究から、
尿中アセチルポリアミン量、特にＮｌ−アセチルスペル
ミジン量が癌との関係においてより重要な意味をもつこ
とが指摘されるようになって来た［例えば、キャンサー
、リサーチ（ＣＡＮＣＥＲＲＥＳ、）第４１巻、１５７
２−１５７３頁（１９８１）、アドバンス、イン、キャ
ンサー、リサーチ（ＡＤＶＡＮＣＥＳ　　ｉｎ　　ＣＡ
ＮＣＥＲＲＥＳＥＡＲＣ）Ｉ）第３８巻、２７−３８頁
（１９１３２）　］　、また、最近、尿中ポリアミン測
定における問題点として、尿の細菌汚染により、尿中ポ
リアミン、特にプトレッシン、カダベリンおよびスペル
ミジンの値が上昇することが報告されている。（１９８
６年第２回ポリアミン研究会）。

現在、臨床に用いられているポリアミンの測定法は、主
に高速液体クロマトグラフィーと酵素法である。ところ
が、前者は比較的信頼度の高い測定法ではあるが、１検
体当たりの測定所要時間が約１時間と長く、大量の検体
を処理するには不向きである。一方、後者は大量の検体
を処理するには向いているが、現在報告されている方法
（特開昭５８−１４６９７号、特開昭５８−１４１７９
８号および特開昭６０−１８８０９６号）は、全て、総
ポリアミン量を定量する方法であり、癌との関係におい
て重要な意味をもつアセチルポリアミン、特に誌アセチ
ルスペルミジンのみを選択的に測定するものではない、
更に詳述すれば、特開昭５８−１４１７９８号の方法は
、総ポリアミン（遊離型および捨金型プトレッシン、ス
ペルミジン、カダベリン）を測定するものであり、アセ
チルポリアミン、特にＮ１−アセチルスペルミジンのみ
を選択的に測定することはできない、特に、尿を試料と
。

する場合には、尿の細菌汚−染によって変動する遊離型
ポリアミンをも含めて測定してしまうこと、さらに、砲
台型ポリアミンは加水分解して遊離型にしなければ測定
できないという欠点がある。特開昭５８−１４２６９７
号の方法は、ポリアミン醸化酵素として、ペニシリウム
属ノ産生ずるポリアミンオキシダーゼＭを用いるもので
あるが、この酵素の基質特異性はアセチルスペルミジン
、アセチルスペルミンなどのアセチルポリアミンに対す
るよりもむしろスペルミジン、スペルミンなどの遊離型
のポリアミンに対する親和性の方がが高いので、アセチ
ルポリアミンのみを選択的に測定することは困難である
。特開昭６０−１８８０９６号の方法は、試料中の全ポ
リアミンをポリアミン酸化酵素で前処理する繁雑な工程
が必須であり、かつ、アセチルポリアミンのみでなく試
料中の全ポリアミンを測定するものであるため、尿の細
菌汚染の影響をうけてしまう欠点がある。

なお、酵素法によるポリアミンの測定は次のような原理
に基づくものである。即ち、試料中に存在するポリアミ
ンにポリアミン酸化酵素を反応させると過酸化水素が発
生する。この過酸化水素にペルオキシダーゼと発色基質
または蛍光基質とを反応させて、発生した過酸化水素量
を吸光度または蛍光強度に変換して測定して、試料中の
ポリアミン量を測定するものである。

（問題点を解決するための手段） 尿中のポリアミン、特にアセチルポリアミンを測定する
ことは、癌の診断や治療効果の判定の手段として意義の
大きいものである。しかし、現在用いられているポリア
ミンの測定方法あるいは測定試薬は、いずれも前記のよ
うに、アセチルポリアミンのみを選択的に測定できない
こと、尿の細菌汚染によって二次的に生ずる非アセチル
化型ポリアミンをも測定してしまうこと、試料の前処理
が必要であること、測定の所要時間が長く、大量の検体
を迅速に処理できないなどの欠点を有している。ポリア
ミンの測定を臨床上有意義なものとするためには、これ
らの欠点のないポリアミン測定試薬の開発が必要である
。

本発明者らは、前記のような要求を満たすポリアミン測
定試薬を開発すべく研究を重ねた結果、ポリアミン酸化
酵素を用いる酵素法によるポリアミンの測定において、
従来、ポリアミンの測定に使用されたことのない動物細
胞由来のポリアミン酸化酵素を使用することにより、前
記の欠点を全て克服できることを見出し、この知見に基
づいて本発明を完成した。

本発明は、ポリアミン酸化酵素を構成成分とする酵素法
によるポリアミン測定試薬において、そのポリアミン酸
化酵素が動物由来のポリアミン酸化酵素であることを特
徴とするポリアミン測定試薬である。更に本発明は、ポ
リアミン酸化酵素、ペルオキシダーゼおよび発色色素ま
たは蛍光色素との組合せからなるポリアミン測定試薬に
おいて、ポリアミン酸化酵素が７セチルポリアミンに反
応性の高い動物細胞由来のポリアミン酸化酵素であるこ
とを特徴とするポリ、アミン測定試薬である。

動物細胞由来のポリアミン酸化酵素（以下、本酵素とい
う）は、１９７７年にヘルテによりラット肝臓から発見
され［バイオケミストリー　（Ｂｌｏｃ）ＩＥＭ、）　
　第１６巻、９１−１００頁（１９７７）　］、現在で
は、動物細胞に普遍的に存在し動物細胞でのポリアミン
のインターコンバージョンに寄与していると考えられて
いる［例えば、バイオケミカ、バイオフィジカ、アクタ
（Ｂｉｏｃｈｉｍ、Ｂｉｏｐｈｉｓ、Ａｃｔａ）第　６
１５巻、４８Ｇ−４８８頁（１９８０）　］　。

本酵素はスペルミジン、スペルミン、Ｎ１−アセチルス
ペルミジンおよびＮ１−アセチルスペルミンを基質とす
ることが知られていたが、本発明者等は本酵素の性質を
詳細に研究した結果、本酵素の基質特異性は従来知られ
ていたものとは異なり、後記実施例１に示すような相対
活性を有することが明らかになった。即ち、本酵素は♂
−アセチルスペルミジンおよびＮ１−アセチルスペルミ
ンに極めて親和性が高いのに比べ、スペルミンおよびス
ペルミジンとはほとんど反応しない。

本酵素は例えば、次のような方法で取得することができ
る。即ち、ブタ、ウシ、ウマ、ウサギ、ネズミなどの哺
乳動物の組織をＴｒｉｓ−８０１緩衝液などの弱アルカ
リ性の適当な緩衝液中でホモジナイズして上清を得、こ
の上清を硫酸アンモニウムなどの中性塩により塩析して
粗製の本酵素を得る。得られた粗製品を適当な緩衝液。

例えばＴｒｉｓｌｌｌ衝液を用いて前液ＡＥ−セルロー
スによるクロマトグラフィーにかけ、得られた活性成分
について更に旧ｔｒｏｇｅｌによるゲルろ過を行い、精
製した本酵素を得る。

本酵素の起源となる動物は、ブタ、ウシ、ウマ、ヤギ、
ヒツジ、ウサギ、ラットなど、哺乳動物であればいずれ
の動物でもよい。

また、本酵素を取得する組織としては肝臓。

腎臓、膵臓、膵臓、腸などほとんどすべての組織が使用
できる。

本酵素の精製は従来、ヘルテの方法により研究室レベル
で小規模に行われていたにすぎず、実用化に供し得なか
ったが、上記の方法により本酵素を工業的に生産するこ
とが可能となった。

上記の方法によって得た本酵素は比活性５００単位／ｍ
ｇと高純度であるが、本発明の試薬に使用するポリアミ
ン酸化酵素はモノアミンオキシダーゼ、ジアミンオキシ
ダーゼ等の過酸化水素を発生する物質が除去されていれ
ば必ずしも高純度である必要はなく、部分精製したもの
であってもよい。

ポリアミン測定試薬を構成する他の成分であるペルオキ
シダーゼおよび発色基質または蛍光基質としては、従来
から使用されていたものが同様に使用できる。即ち、ペ
ルオキシダーゼとしては、西洋わさびペルオキシダーゼ
がもっとも好ましいが、細菌由来のペルオキシダーゼ等
でも良い、ペルオキシダーゼの発色基質としてはテトラ
メチルベンジジン、５−７ミノサリチル酸、０−フェニ
ルシア・ミン、４−アミノアンチピリン−フェノールな
どが利用できる。ペルオキシダーゼの°蛍光基質として
は、３−　（ｐ　−ヒドロフェニル）プロピオン酸、ホ
モバニル酸、ｐ−チロゾール、ｐ−エチルフェノール、
３−　（ｐ−ヒドロフェニル）−１−プロパツール、ホ
ルデニンなどが利用できる。

本発明のポリアミン測定試薬を用いたポリアミンの測定
は例えば次のように行う、即ち、試料（例えば尿）０．
１〜２１を試験管に取り、これに動物細胞由来のポリア
ミン酸化酵素１０単位を含むＴｒｉｓ−ＭＣＩ緩衝液を
加えて３０分間反応させる０反応終了後、ペルオキシダ
ーゼ１０単位と適当量の発色基質または蛍光基質とを含
む緩衝液を加えて適当時間反応させ、反応後の吸光度ま
たは蛍光強度を測定する。この値を、同時に濃度既知の
標準溶液について同様に操作して得た値から作製した標
準曲線にあてはめて、試料中のポリアミン量を求める。

（効果） 本発明のポリアミン測定試薬は動物細胞由来めポリアミ
ン酸化酵素を利用しているため、Ｎ１−アセチルスペル
ミジン、アセチルスペルミンのみを選択的に測定できる
。従って、試料中に二次的に生じた微生物由来のポリア
ミンを測定しないので、もともとヒト尿中に存在するポ
リアミンのみを正確に測定できる。また、本発明の試薬
で使用する動物細胞由来のポリアミン酸化酵素は□アセ
チル抱合体を直接基質とするために、酸や酵素を用いた
加水分解等の繁雑な操作を省略することができる。さら
に、尿中のＮ１−アセチルスペルミジンは、癌との関係
において臨床的意義の大きいものであるので、このＮ１
−アセチルポリアミン値をより反映することのできる本
発明の試薬は臨床的価値が大きいものである。

本発明のポリアミン測定試薬は、尿中の７セチルポリア
ミン量を簡便に特異性よく測定できるため、ポリアミン
値が正常に比較して異常に高い値を示す患者を容易に発
見でき、癌の診断または治療効果の判定の補助手段に応
用できる。

実施例１．ブタ肝臓からのポリアミン酸化酵素の精製 ブタ肝１［５００ｇを細切し、　２１．ｃ７）　２ｈＭ
　　Ｔｒｉｓ−）ＩＣＩ緩衝液（ｐ）＋　１１．２）中
、４℃で、ホモジナイザーを用いて破砕した。このＱ′
ｐｊＪ液を遠心分離し、上清を得た。この上清を硫酸ア
ンモニウムによる塩析を行ない、３０〜５０％飽和硫安
分画を得た。この塩析物を　１０ｍＭ　　↑ｒｉｓ−Ｍ
ＣＩ緩衝液（ｐＨ７，１１１）　ニ透析し、次ニ、あラ
カじＪｌ＞　ｆＱｍＭＴｒｉｓ−Ｈｆｌｌ：ｌｉｄ衝液
樹液Ｈ７，６）で平衡化したＤＥＡＥＣｅｌｌｕｌｏｓ
ｅカラム（φ６　Ｘ　８０ｃｍ）によるクロマトグラフ
ィーを行なった。Ｏから０．５ＭＮａＣｌ直線勾配（全
量　４Ｌ）による溶出を行ない、各溶出分画のポリアミ
ン酸化酵素活性を後記参考例１の方法で測定して活性分
画を集め、この分画を３０１まで濃縮した。濃縮液を５
０ｍＭＮａＣＩを含む１ｈＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ　＠樹
液（ｐ）！　７．６）に透析し、あらかじめ５０ａ＋Ｍ
　ＮａＣｌを含む　１０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ（ｐＨ
７，６）　テ平衡化しておいた旧ｔｒｏｇｅｌ　ＡｃＡ
４４’（ＬＫＢ社）カラム（φ５　Ｘ　９０ｃｍ）を用
イテゲルろ過を行なった。各溶出分画の酵素活性を前記
と同様に測定して活性分画を集め、　１０ａｌまで濃縮
して、、１ｍＭジチオスレイトールおよび１０％グリ−
ｔ’　ｅ＋　−ルを含む２０ａ＋Ｍ　Ｔｒｉｓ−’ＨＣ
Ｉ緩衝液（ｐＨ７，６）　８Ｌに透析した。

このようにして精製したものを後記参考例２の方法によ
り酵素活性を定量し、ブタ肝臓５００ｇ　カラ５０００
単位のポリアミン酸化酵素を得た。

このようにして得たブタ肝臓由来のポリアミン酸化酵素
の性状は次の通りである。

ａ）基質特異性 蛍光法を用いて、　ｐＨ９，０，３０℃の条件下で０．
４＋ａＭ濃度の各基質に対する本酵素の活性を測定した
　ｓｌ−アセチルスペルミジンに対する活性を　１００
として各基質に対する相対活性を比較すると第２表の通
りである。

第２表　各基質の反応性 ｂ）至適ｐＨ 本酵素のスペルミンを基質とした時の至適ｐＨは、　９
．５−１０．５であった（第３図参照）。

Ｃ）阻害剤の影響 本酵素は１ｍＭ２価水銀イオンにより完全に阻害され、
　Ｑ　、　１ｍＭセミカルバジドにより７０％阻害され
た。１ｗＭＭ２価銅イオン、３価鉄イオン、アジ化ナト
リウムおよび０．１ａＭバーギリンによっては阻害され
なかった（　０．１ｍＭパーギリン、セミカルバジドに
より、モノアミン、ジアミン酸化酵素は、それぞれ３０
％以上阻害される。）。

ｄ）ベンズアルデヒドによる酵素活性の上昇１９７７年
ヘルテにより発見されたラット肝臓のポリアミン酸化酵
素は、スペルミンを基質とした時にベンズアルデヒドを
添加することにより酵素活性が著しく上昇することを報
告している０本酵素はｐ）Ｉ　９．０、反応温度３０℃
、０．８ｍＭスペルミンを基質として反応させ、これに
ベンズアルデヒドを添加子ると酵素活性の上昇を示した
（第４図参照）。

ｅ）Ｋｍ値 ０．１ｗＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ　ＩＩ衝樹液ｐＨ９，０
）　、反応温度３０℃の条件下の本酵素のＫｍ値は第３
表の通りである。なお、従来報告されている同様な条件
下でのＫｍ値を参考値として併記した。

第３表 上記に示した本酵素の諸性状は、スペルミジンに対する
基質特異性以外は従来報告されている動物細胞由来のポ
リアミン酸化酵素の性状［例えば、バイオケミストリー
ＣＢＩＯＣＨＥＭ、）第１６巻　９１−１００頁（１９
７７）　、　　インターナショナルΦジャーナルーバイ
オケミストリー（４Ｎ↑、」。

８１００ＨＥＭ、）第１３巻２Ｂ？−７９２頁（１９８
１）　］　とほぼ同じであった・ 実施例２　ポリアミン測定試薬の製造 実施例１により製造した動物細胞由来のポリアミン酸化
酵素２５０単位を、０．１％牛血清アルブミン（ＢＳＡ
）　、　２Ｍサッカロースおよび　０．５＋ａ）！ジチ
オスレイトールを含む１０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ、Ｉ
Ｉ　ｇ＃液（ｐＨ７，６）にて１０倍に希釈し、遮光し
たバイアル（φ２　Ｘ　５　ａｍ）に２１ずつ充填した
０次いで、これを凍結乾燥したのち、密栓し、動物細胞
由来のポリアミン酸化酵素からなるポリアミン測定試薬
を製造した。

実施例３　ポリアミン測定試薬の製造 ａ）ポリアミン酸化酵素 実施例１により製造した動物細胞由来のポリアミン酸化
酵素２５０単位を、０．１％ＢＳＡ　、　２Ｍサッカロ
ースおよび０．５＋Ｍジチオスレイトールを含む１０ｍ
Ｍ　Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ緩衝液（ｐ）＋　７．１１）にて
１０倍に希釈し、遮光したバイアル（φ２　Ｘ　５　ａ
ｍ）に２１ずつ充填した０次いで、これを凍結乾燥した
のち、密栓し、動物細胞由来のポリアミン酸化酵素を製
造した。

ｂ）ペルオキシダーゼ 西洋わさびペルオキシダーゼ５００単位を、０．１％Ｂ
ＳＡを含む７８ｍＭりん厳緩衝生理食塩水（ｐＨ８，４
）　１０ｍ１に溶解し、遮光したバイアル（φ２　Ｘ　
５　ｃｍ＋）に２１ずつ充填した０次いで。

これを凍結乾燥したのち、密栓し、ペルオキシダーゼを
製造した。

Ｃ）発色基質 ０．７５ｍＭテトラメチルベンジジンおよび１５％メタ
ノールを含む？、ｈＭクエン酸溶液１００１を遮光容器
に充填し、発色基質を製造した。

以上ａ）、　ｂ）およびＣ）を組合せてポリアミン測定
試薬を製造した。

実施例４　ポリアミン酸化酵素を用いた比色法によるポ
リアミン測定 Ｎ１−アセチルスペルミジン（ＳＩＧＭＡ社）を７８ｄ
りん酸緩衝生理食塩水（ｐＨｓ、ａ）で、各々５０゜２
５．１２．５．８．２５　ｐ−Ｍに希釈し、標準溶液を
調製した。

ガラス試験管（φ　１．２Ｘ　ｌＯｃｍ）に前記の各濃
度の標準溶液をｌｌ１ｌ入れ、実施例１で精製したポリ
アミン醸化酵素１０単位を含む０．３＋Ｍ　　Ｔｒｉｓ
−ＭＣＩ緩衝液（ｐＨ９，５）　　１ｍｌを加えて攪拌
し、３０°Ｃで３０分間反応させた０反応終了後、ｌＯ
単位ペルオキシダーゼ、３＋ｍＭテトラメチルベンジジ
ンおよび３０％メタノールを含む０．２Ｍクエン酸溶液
１ｍｌを加えて攪拌し、５分後に分光光度計により　８
５５ｎｍの吸光度を測定した。得られた標準曲線を第１
図に示した。

実施例５　ポリアミン酸化酵素を用いた蛍光法によるポ
リアミンの測定 ｓ！−アセチルスペルミジン（ＳＩＧ＞ＩＡ社）を７θ
ｍＷりん酸緩衝生理食塩水（ｐＨ８，４）で、各々５０
．２５、１２．５．８．２５ｇＭ　ニ希釈シ、標準溶液
を調製した。

ガラス試験管（φ　１．２Ｘ　１０ｃｍ）に調製した各
濃度の標準溶液を９．１ｍｌ入れ、実施例１で精製した
ポリアミン酸化酵素ｌＯ単位、ペルオキシダーゼ（東洋
紡■製）ｌθ単位および０．５ｍＭ（ｐ−ハイドロキシ
フェニル）プロピオン酸を含む０．２Ｍ　Ｔｒｉｓ−Ｈ
ＣＩ緩衝液（ｐＨ９，５）を加え攪拌し、３０℃で３０
分間反応させた０次に、■ジチオスレイトール溶液３Ｇ
４＋を加え反応を停止した。この溶液を蛍光光度計を用
いて、励起波長３２０ｎｍ　、蛍光波長４９４ｎｍで蛍
光強度″　　を測定した。得られた標準曲線を第２図に
示した。

実施例６　患者法の測定 胃癌患者１０例、大腸癌患者４例、血液癌患者４例、肺
癌患者２例、および健常人２０例の各派についてＮ１−
アセチルスペルミジンおよびアセチルスペルミンの総量
を測定した。測定は、標準溶液又は被検尿１１を使用し
、実施例２と同様に行なった。°測定値は、２４時間尿
換算した♂−アセチルスペルミジン値で表わ′し、第４
表および第５図に示した。

第４表　癌患者尿の測定 ポリアミン酸化酵素の精製のときの各溶出分画の酵素活
性の測定は、次の参考側記載の方法により行った。

参考例１　ポリアミン酸化酵素活性の測定法（ａ）蛍光
基質によるポリアミン酸化酵素活性測定法 ０．５ｍＭ（Ｐ−ハイドロキシフェニル）フロピオン酸
（Ａｌｄｒ　ｉｃｈ社）、２単位ベルオキシターゼ（東
洋紡社）　、　　０．４ｍＭ　　Ｎ’−アセチルスペル
ミジン（ＳＩＧＭＡ社）、１ｍＭ　　アジ化ナトリウム
とから成る　０．１１４　Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ　（ｐＨ９
，０）緩衝液２．９５１ｍ１を、ガラス試験管（φ１．
２Ｘ　１０ｃｍ）に入れ、検体５０ル１を加え攪拌後３
０℃で１時間反応させた０反応終了後試験管を氷冷し、
反応を停止した後に、その溶液をセルに移し蛍光光度計
により励起波長３２０ｎｍ、蛍光波長４０４ｎｍで蛍光
強度を測定した。

参考例２　ポリアミン酸化酵素の定量方法（ａ）過酸化
水素標準溶液の調製 ３５％過酸化水素水（和光紬薬）を０．５Ｎ過マンガン
酸溶液により滴定した。この過酷化水素をホールピペッ
トおよびメスフラスコを用い蒸留水により希釈し２００
　ｆｉＬＭ過斂化水素溶液を調製した。この溶液を蒸留
水により倍々に希釈し、１００、５０．２５．１２．５
９ＬＨ過酸化水素溶液を調製した。

（ｂ）ポリアミン酸化酵素の定量 ０．５ｍＭ（ｐ−ハイドロキシフェニル）プロピオン酸
、２単位ベルオキシターゼ、０．４ｍＭ　　Ｎ’−アセ
チルスペルミジンからなる０、ＩＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ
（ｐＨ９，０）緩衝液を、ガラス試験管（φ　１．２Ｘ
１０ｃｍ）に２．９５ｍ１入れ、３０℃恒温槽で５分間
放置し、その後参考例２の（ａ）に示した過酸化水素標
準溶液または検体をそれぞれ５０ＪＬｌずつ加えて攪拌
し、３０℃恒温槽で３０分間反応させた０反応終了後、
１Ｍジチオスレイトール溶液３０ＪＬ１を加えて攪拌し
、蛍光光度計により、励起波長３２０ｎｍ、蛍光波長４
０４ｍｍで蛍光強度を測定した。

このようにして得た過酸化水素標準曲線から、３０分間
に酵素が生成した過酸化水素量を測定した。酵素単位は
、３０℃ｐｉ（９，０の条件で１分間にＮ１−アセチル
スペルミジンｌ　ｎ５ａｌ酸化するのを触媒するのに必
要な酵素量と定義した。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例４．第２図は実施例５、第３図は実施例
１の（Ｃ）、第４図は実施例１の（ｄ）および第５図は
実施例６の測定結果を示すグラフである。 特許出願人　　持田製薬株式会社 ２１図 Ｎ１−ゴｔ＋ルスヤルミジン：＊、１１＜μＭ）牙２図 ！九強塵 ０　　６．２５　　　＋２５　　　　　　２５．０　　
　　　　　　　　　　５０．ＯＮ’−７ｔ＋ルスベルミ
ジ〉（μＭ） 牙５図 人　　　　　　　ｔ ！九３＊！　（’／、　） ｉ’ＬｋＡＭ化７１（を量（ｎｍｏｌ）ａ油

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. （１）動物細胞から得られたポリアミン酸化酵素からな
   ることを特徴とする尿中ポリアミン量を酵素法により測
   定するためのポリアミン測定試薬。
2. （２）動物細胞が、哺乳動物由来である特許請求の範囲
   第１項記載の測定試薬。
3. （３）動物細胞が、肝臓または腎臓由来である特許請求
   の範囲第１項記載の測定試薬。
4. （４）ポリアミン酸化酵素、ペルオキシダーゼおよび発
   色色素または蛍光色素との組合せを含む尿中ポリアミン
   を酵素法により測定する試薬において、ポリアミン酸化
   酵素が動物細胞由来のポリアミン酸化酵素であることを
   特徴とするポリアミン測定試薬。
5. （５）動物細胞が、哺乳動物由来である特許請求の範囲
   第４項記載の測定試薬。
6. （６）動物細胞が、肝臓または腎臓由来である特特許請
   求の範囲第４項記載の測定試薬。