JPS63245689A - ヒトアミロイド関連蛋白モノクロ−ナル抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、ヒトアミロイド関連蛋白モノクローナル抗体
および該抗体の利用に関する。さらに詳しくは、アミロ
イド−シス症患者の臓器組織から抽出されたアミロイド
蛋白で免疫された哺乳動物の脾細胞と骨髄腫細胞との細
胞融合によって得られるハイブリドーマの産生ずるモノ
クローナル抗体、および該抗体を用いた、続発性アミロ
イド−シスあるいはアルツハイマー型痴呆の診断方法に
関する。

（従来の技術） アミロイド−シスは特異な構造を有するアミロイド蛋白
が全身の諸臓器に沈着する代謝性疾患である。アミロイ
ド蛋白は組織学的にヘマトキシリン・エオシン染色でエ
オシン好性に均一に染色される硝子様構造をも′ち、コ
ンゴーレッドにて緑色偏光を示すという特徴をもつ（Ｇ
ｌｅｎｎｅｒ　Ｇ、Ｇ。

ａｔ　ａｌ　、　Ｊ、　Ｈｌｓｔｏｅｈｅｍ、　Ｃｙｔ
ｏｅｈｅｍ、　２２　＋　１１４１−１１５８．１９７
４）。電子顕微鏡的には幅５０−７０１の細線構造を有
し、Ｘ線回折にて交叉性のβ−ｐｌ＠ｎｔ＠ｄｓｈｅｅ
ｔ構造を示すことが明らかＫされている（　Ｅｏｍｅｓ
　、　Ｅ、Ｄ　、　Ｇｌｅｎｎｅｒ　、　Ｇ、Ｇ、　＊
　Ｊ、Ｈ１ｓｔｏｃｈ＊ｍＣｙｔｏｅｈｅｍ　、　１６
　、６７３−６７７　ｓ　１９６８及びＣｏｏｐ＠ｒ　
、Ｊ、）Ｌ　ｅＬａｂ、　Ｉｎｖｅｓｔ、　３１　、２
３２−２３８　、１９７４）　ｏこのような特徴をもつ
アミロイド蛋白も化学的に単一の物質ではなく現在まで
に種々のタイプに分類され、その性状も次第に明らかに
されつつあるが、アミロイドＡ（ＡＡ）蛋白が知られて
いる（　Ｂｅｎｄｉｔｔ　、Ｅ、Ｐ。

ｅｔ　ａｌ　、　ＦＥＢＳ　Ｌ＠ｔｔ、　１９　、１６
９〜１７３　、１９７１及びＧｌｅｎｎｅｒ　、　Ｇ、
Ｇ、、　Ｎ、Ｅｎｇｌ、　Ｊ、　Ｍ＠ｄ、　、　３０２
　、１２８３〜１２９２　、１９８０　）だけで、それ
らの蛋白化学的性質についてはほとんど知られてないと
言ってよい。さらに最近はアルツハイマー型痴呆を呈す
る患者脳の老人斑におけるアミロイド沈着が明らかにさ
れ、その成因、病態との関連で注目を集めている。しか
し、これらのアミロイド蛋白の異同、あるいはア・ミロ
イド関連蛋白の組織および血中における分子レベルでの
検索については研究の途についたばかシである。また、
天然に存在するアミロイド蛋白に対するモノクローナル
抗体についてもこれまでに知られていない。

（発明が解決しようとする問題点） 本発明はヒトアミロイド関連蛋白と特異的に結合するモ
ノクローナル抗体を取得し、該抗体をアミロイド−シス
特に続発性アミロイド−シス症の診断、さらにはアルツ
ハイマー型痴呆症の診断に用いることを目的とする。

（問題点を解決するための具体的手段）本発明の抗体は
、アミロイド−シス患者の剖検材料より抽出したヒトア
ミロイド蛋白で免疫された哺乳動物（好ましくはマウス
）から取シ出した抗体産生細胞と適当な動物（好ましく
はマウス）の腫瘍細胞、例えば骨髄腫細胞（ミエローマ
）とを融合させ、目的抗体を産生ずる融合細胞をクロー
ン化して得られるハイプリドーマを培養して製造される
。

ａ）抗体産生細胞の調製 本発明のハイブリドーマを得るためには、まず上記のよ
うにして抽出されたヒトアミロイド蛋白で哺乳動物を免
疫感作する。哺乳動物としてはマウス、ラット、ウサギ
、モルモット等一般に用いられている動物が使用できる
。例えば、マウスに抗原として上記ヒトアミロイド蛋白
を腹腔または皮下等に接種することにより免疫する。接
種は一回当たシ抗原１０〜３０μｉＰ／マウスを同量の
アジュバントと混和懸濁液として、１〜２週間毎に数回
繰シ返す。最終免疫は抗原をそのまま５０〜１５０μ？
／マウス静脈内または腹腔内に注射して、３〜４日目に
ｎ臓を摘出し、抗体産生細胞として使用する。ヒトアミ
ロイド蛋白はアミロイド−シス患者の臓器組織好ましく
は腎組織より抽出したものを使用する。

ｂ）骨髄腫細胞の調製 使用する骨髄腫細胞（ミエローマ）に特別の制限はなく
、マウス、ラット、ウサギ、ヒト等の動物の細胞株が使
用できるが、通常マウスのミエローマ細胞が用いられる
。一般的にはヒポキサンチン・グアニン・ホスホリゴシ
ルトランスフェラーセ欠損（ＨＧＰＲＴ−）あるいはチ
ミジンキナーゼ欠損（ＴＫ−）等の適切な選択マーカー
をもったミエローマ等の腫瘍細胞株、例えばＰ３−Ｘ６
３−Ａｇ　８、Ｐ３−Ｘ６３−Ａｇ８−Ｕｌ、ＳＰ　２
０−Ａｇ　１４、Ｘ６３−Ａｇ８−６．５．３を用意す
る。この腫瘍細胞は８−アゾグアニン抵抗性の細胞株で
、）ＩＡＴ培地中では生育できない性質をもつ。

Ｃ）細胞融合 培地としてイーグル最小基本培地（ＭＥＭ　）　、ダル
ベツコの改良λ４ＥＭ、ロズクエル・ノ々−り・メモリ
アル・インスティテユー）　（ＲＰＭＩ）　１６４０な
どの通常使用されているものに１０　％　ＣＳ　（ｃａ
ｌｆ８＠ｒｕｍ　）または５　％　Ｆｅ２　（ｆｅｔａ
ｌ　ｃａｌｆ　ａ＠ｒｕｍ）＋５係Ｃ８，あるいは１０
チＦＣ８を加える。親細胞の通常の維持は上記のいずれ
の培地でもよいが、雑種細胞の作製には１０チＦＣ８が
望ましい。細胞融合は、親細胞であるミエローマ等の腫
瘍細胞と免疫感作された牌細胞（抗体産生細胞）とを１
：５〜１：１０の割合で混合して融合促進剤の存在下で
行われる。融合促進剤としては）ＩＶＪ　（Ｈｅｍｓ　
ｇｇ−１ｕｔｉｎａｔｌｎｇ　Ｖｉｒｕｓ　ｏｆ　Ｊａ
ｐａｎ　）　、ポリエチレングリコール（ＰＦ：Ｇ　）
等を使用する。特に、ＰＥＧ１５００の３０〜５０チ程
度が良い。

ｄ）ハイブリドーマのＩ（ＡＴ選択 融合後の細胞を２０チＦＣ８含有ＲＰＭ１１６４０培地
などで適当に希釈し、マイクロカルチャープレート（通
常９６ウエルタイグ）　Ｋ　ｉｏ　　〜１０　／１００
μｌ／ウェル程度に植えつける。各ウェルにＨＡＴ選択
培地を加え、通常１〜２日毎に培地の交換を行い培養す
る。ミエローマ細胞として８−アゾグアニン抵抗性味を
用いれば、未融合のミエローマ細胞およびミエローマ細
胞同志間の融合細胞は■仏Ｔ培地中では約１０日で死滅
し、また牌細胞（ｍｐｌｅｎｏｃｙｔｅ　）は正常細胞
であるから寿命があシ、１ｎ　ｖｌｔｒｏでは２週間以
上は生育できない。従って、培養１０〜１４日位から生
育してくるものは全て牌細胞とミエローマ細胞とのノ・
イブリドーマと考えられる。

ｅ）ハイプリドーマのスクリーニング スクリーニングは、主にハイブリドーマの増殖したウェ
ルの培養上清を用いたＥＬＩＳＡ　（Ｅｎｚｙｍｅｌｌ
ｎｋｅｄ−１ｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ　ａｓｓａｙ　
）法あるいは間接免疫ベルオ牛シダーゼ法など公知の方
法を用いて目的の抗体を分泌しているハイプリドーマの
クローンをひろいあげることにより行うことができる。

りクローニング 各ウェル中には、異なる抗体を産生じている２種以上の
ハイブリドーマが生育している可能性があるが、限界希
釈法々とによυクローニングを行い、最終的に目的のモ
ノクローナル抗体を産生じている単一性のハイプリドー
マを得ることができる。

ｇ）モノクローナル抗体の取得 上記で得られたハイプリドーマを培養容器中（Ｉｎ　ｖ
ｉｔｒｏ　）または動物体内（ｉｎ　ｖｉｖｏ　）で培
養する。ｉｎ　ｖｌｔｒｏで培養する場合、培地は先に
述べた通常培地にＣ８またはＦｅ２を添加したものでよ
く、この培地で３〜５日培養の後、培地上清より目的の
抗体を得ることが出来る。ｉｎ　ｖｉｖｏによる培養で
はミエローマ細胞と同系の動物にプリスタン（２，６，
１０，１４−テトラメチルペンタデカン）などの鉱物油
を腹腔内に投与した後、少なくとも１週間以上経過して
から、ハイプリドーマを腹腔内に接種し、７〜１４日後
に貯留してくる腹水を採取し、これより目的の抗体を得
ることができる。

このようにして得られるモノクローナル・抗体は、セト
アミロイド関連蛋白の測定や検出、さらにはアミロイド
蛋白が組織に沈着するような疾患例えばアミロイド−シ
ス（特に続発性アミロイド−シス）やアルツハイマー型
痴呆症の診断に利用することができる。

以下、実施例で本発明をさらに詳しく説明する。

＆）抗原の調製 臨床診断が慢性腎不全を呈する慢性関節リウマチおよび
それに続発した全身性アミロイド−シスを併発している
患者の剖検腎をアミロイド蛋白の抽出原の材料とし、Ｐ
ｒａｓ　、　ｅｔ　ｍｌ　（Ｊ、　Ｃｌ１ｎ。

Ｉｎｖａｓｔ　４７　、９２４−９３３　、１９６８　
）の蒸留水抽出法に基づいて抽出を行なりた。

すなわち、腎組織（湿重量２０ｉＰ）を冷生理食塩水４
００Ｍにてホモジナイズし遠心により沈渣を得、これを
同量の冷生理的食塩水にて洗浄、遠心操作を上清の蛋白
濃度（ＯＤ　２８０　ｎｍ　）が０．０７５以下になる
まで繰シ返した。次に、得られた沈渣を蒸留水２００−
にて同じくホそジナイズ、遠心を４回縁シ返しそれぞれ
の上清をプール後、凍結乾燥し２００キの粗アミロイド
蛋白を得た。

ｂ）動物の免疫 前記粗アミロイド蛋白１■をＦｒｅｕｎｄｋ　ｃｏｍｐ
ｌｅｔｅ（ＦＺＣＡ　）　ａｄｊｕｖａｎｔに懸濁し、
７退会Ｂａ１ｂ／ｃ　マウス（日本タレア）の皮下に投
与した。追加免疫は２週間後に初回免疫と同量の粗アミ
ロイドをＦＩＣＡに懸濁してマウスの皮下に投与した。

さらに２回目の免疫注射の２週間後に２ｑを蒸留水に溶
解して腹腔内に投与して最終免疫とした。

Ｃ）細胞融合 最終免疫の３日後にマクスより牌臓を摘出して細断した
のち、ステンレスメツシュで濾過することによって得た
脾細胞をマウスミエローマ細胞（Ｘ６３−Ａｇ　８−６
．５．３）と混合し、５０チポリエチレングリコー、Ｔ
Ｉ／　１５４０　（ＢＤＨ社製）を用いて細胞融合を行
った。１０チＦＣ８−ＲＰＭＩ培地にミエローマ細胞と
して１×１０細胞／ゴ前後になるように懸濁し、９６ク
エルマイクロカルチヤープレートに１００μｌ／ワエル
づつ分注した。

１日後、ＨＡＴ培地を各ウェルに１００μｌづつ添加し
、以後３日ごとに半分量を）ＥＡＴ培地で交換したとこ
ろ、５日日位からいくつかのフェルにハイプリドーマの
生育が認められ、２週間後にはほぼ全ウェルでハイブリ
ドーマが増殖した。

ニング 前記粗アミロイド蛋白の抽出を行った剖検腎を１０％ホ
ルマリンにて固定し、パラフィン包埋後４−５μｍに薄
切し、ヘマトキシリン・エオシン染色、オヨヒコンゴー
レッド染色を行いアミロイド蛋白の沈着部位を確認した
後、同切片に対して培養上清を用いて間接ペルオキシダ
ーゼ法（遠藤、今井、孔幅医学雑誌、５４　、３９３−
４１０　、１９８５　）を行った。

す表わち、脱・母ラフイン後の各１組織切片について０
、６％Ｈ２Ｏ２メタノールで内因性ペルオキシダーゼ活
性を除去し、次に切片への二次抗体の非特異的吸着を阻
止するため正常クサギ血清を反応させ、その後−次抗体
としてモノクローナル抗体を反応させた。次に、二次抗
体としてペルオキシダーゼ１ｅ、ａクサギ抗マクス免疫
クロプリン（ＤＡＫＯ。

Ｄｅｎｍａｒｋ　）を反応させ、発色は３−３’−ｄｉ
ａｍｌｎｏ−ｂｅｎｚｌｄｊｎｅ　（東京化成）を用い
、被染色は１チメチルグリーンにより行りた。

これにより、１０種のバイブＩＪ　ｐ−マ培養上清がア
ミロイド沈着部位に対して強く反応した。さらに限界希
釈法によりクローニングを行い、１個のクローンを得た
。

前記ハイグリドーマを細胞培養フラスコ（Ｃｏｒｎｉｎ
ｇ　２５１１０　、　Ｕ８Ａ　）を用いて大量に培養あ
るいはＢＡＬＢ／ｅマウス（日本タレア）腹腔内にて増
殖させた。培養上清および腹水は５０チ硫安塩析を２回
縁シ返しＰＢＳに透析して精製した。またウサギ抗マワ
スＩｇＧ１　、　ＩｇＧ２ａ　、　ＩｇＧ２ｂ　、　Ｉ
ｇＧ３　。

ＩｇＭ　（Ｍｌ　ｌｅｓ　、　ＵＳＡ　）によＦ）　０
ｕｃｈｔｅｒｌｏｎｙ法を用いて免疫グロブリンサブク
ラスを決定したところ、本モノクローナル抗体の免疫グ
ロブリンサブクラスはＩｇＧ１であった。

本モノクローナル抗体をＡＭ３４と称した。

尚、ＡＭ３４を産生するハイブリドーマは、ＨＹ−ＡＭ
　３４と命名し、微工研に寄託をしようとしたが、受託
拒否にあっている。

モノクローナル抗体ＡＭ３４の特異性を組織切片上で確
認するために、モノクローナル抗体を切片上に反応させ
る前にこれを粗アミロイド蛋白と混じ、３７℃、３０分
間反応させ、遠心後、その上清を一次抗体として用い、
モノクローナル抗体が粗アミロイド蛋白により吸収され
るかを間接免疫ペルオキシダーゼ染色により観察した。

組織切片はハイブリドーマのクローニング（実施例１−
ｄ）の項で述べた剖犠腎切片を使用した。その結果、吸
収試験においてモノクローナル抗体ＡＭ　３４のアミロ
イド沈着部位に対応する反応は完全に消失した。

クサギ抗ヒトアミロイドＡ　（ＡＡ）ポリクローナル抗
体により、ＡＭ３４の反応が阻止されるか否かを試験す
る目的で前記剖検切片上で間接免疫Ｒルオキシダーゼ法
により検討した。間接免疫４ルオキシダーゼ法において
、モノクローナル抗体を反応させる前に、ウサギ抗ヒト
アミロイドＡ（ＡＡ）抗血清（Ｋｙｏｗａ　Ｍ＠ｄｅｘ
　）をリン酸緩衝液で各段階に希釈した後、３７℃、３
０分間反応させ、前記間接免疫ペルオキシダーゼ法を行
なったところ、モノクローナル抗体ＡＭ３４の反応性は
前処置に使用された一すクローナル抗体の濃度に依存し
てやや低下する傾向を示し、阻止効果は部分的に認めら
れたものの、Ｉリフローナル抗体の濃度を増してもモノ
クローナル抗体ＭＡ３４の反応性が完全に消失すること
はなかった。

１９６７−１９８６年までに行われた剖検、手術および
生検材料、計２５症例、３６組組織片について前記免疫
ペルオキシダーゼ法により、モノクローナル抗体ＡＭ３
４の反応性を調べた。内訳は厚発性あるいは多発性骨髄
腫に伴うアミロイド−シス１２症例、２１組組織片、続
発性アミロイド−シス６症例、８組織切片、家族性ポリ
ニー−ロバチーに伴うアミロイド−シス２症例、老人斑
を有するアルツハイマー型痴呆２症例、膵限局性アミロ
イド１症例、内分泌腫瘍に合併するアミロイド１症例、
皮膚アミロイド１症例である。各組織はすべて１０％ホ
ルマリンに固定し、パラフィン包埋後、薄切してヘマト
キシリン・エオシン染色、コンゴーレッド染色を行いコ
ンゴーレッド染色標本にてアミロイド蛋白沈着部位に一
致して偏光顕微鏡下で緑色偏光が認められたものである
。

上記各種アミロイド−シス症例に対してモノクローナル
抗体ＡＭ３４の反応性を検討した結果、本抗体は特に続
発性アミロイド−シス症例のアミロイド沈着部位に対し
て陽性反応を示した。さらに篤くべきことに、２例に過
ぎないがアルツハイマー型痴呆症例の脳組織（海鳥）に
おける老人斑と思われる部位に陽性所見が認められた。

検索し得た限シにおいては続発性アミロイド−シス以外
の症例におけるアミロイド沈着には反応を示さないか、
あるいはごく弱い染色性を示したのみであったＯ 以上の結果は、モノクローナル抗体ＡＭ３４に対応する
抗原エピトープが続発性アミロイド−シスのアミロイド
沈着部位に多量に存在していることを示唆しておシ、成
績には示していないが、免疫原の腎組織を用いて行った
免疫電子顕微鏡的検索においても、本抗体がアミロイド
繊維に一致して反応していることが確かめられている。

また、上記の結果は、本抗体が、アルツハイマー型痴呆
の診断にも使用しうる可能性をも示唆している。

モノクローナル抗体ＡＭ３４の対応抗原の分子量検索の
目的で粗アミロイド蛋白を抗原として５ＤＳ−ＰＡＧＥ
　（Ｓｏｄｉｕｍ　ｄｏｄｅｃｙｌｓｕｌｆａｔｅ　ｐ
ｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅグル電気泳動）およびウェ
スタンブロット法ヲ行った・ Ｉｍａｌ　、　ｅｔａｌ　（Ｃａｎｃｓｒ、Ｒｅｓ、４
１　＋　１０２８−１０３３゜１９８１　）の方法に準
じ１５チｒルを用いて実施した。

粗アミロイド蛋白を蒸留水に溶解し３ｗＩＩ／ｍ／とじ
、また、尿素処理蛋白〔粗アミロイド蛋白を８Ｍ尿素を
含む溶液（１％ｓｏｄｉｕｍ　ｄｏｄｅｅｙｌｓｕｌｆ
ａｔｓ　。

１　％　２−ｍｅｒｃａｐｔｏｅｔｈａｎｅｏｌ　Ｏ，
ＯＩＭ　Ｈ３ＰＯ４Ｊ　ＩＭ　）リス塩酸塩、ｐＨ６，
５）で処理したもの〕、およびアルカリ処理蛋白（０，
Ｉ　Ｎ　ＮａＯＨによ９２時間室温で処理した後、０．
　Ｉ　Ｎ　ＨＣｌにて中和したもの）もそれぞれ３ｗｇ
／ａｔに調製した。各試料の５０μｌをＳＤＳ　−ＰＡ
ＧＥにて展開後、渡辺らの方法（右田俊介編集；免疫実
験操作法１１　、３４８５−３４８９　。

１９８２　）　ＩｔＣ準シてｒ／Ｉ／よジニトロセルロ
ース膜（ｐｏｒｅ　５ｌｚｅ　０．４５μｍ　、　５ｃ
ｈｌｅｌｃｈｅｒ　ａｎｄ　５ｃｈｕｌｌ。

Ｇｅｒｍａｎｙ　）転写し酵素抗体法を用いて抗原を検
出した。

その結果、本抗体は未処理の粗アミロイド蛋白および尿
素処理の同蛋白に対し、４５におよび４２にダルトンの
付値で反応を示し、かつ還元、非還元下でも分子量に差
異は認めなかった。さらにＡＡ蛋白に相当する小分子（
８に、９にダルトン）部分には尿素処理、あるいはアル
カリ処理抗原に対しても反応性を認めなかった。これに
対してごく最近、合成ＡＡ−１！デチドに対して作製さ
れたモノクローナル抗体ＫＭ２６８を用いて同様の検討
を行りた場合には各試料について９にダルトンに相当す
る位置に反応が認められたが、モノクローナル抗体ＡＭ
３４の反応する４５におよび４２にダルトンの位置には
全く反応しなかった。また、ポリクローナル抗ＡＡ蛋白
抗体を用いた場合にも、同部位への反応は認められなか
った。

以上の検索には対照抗体としてヒト肝癌細胞ＨｕＨ７に
対して本発明者らによって作製されたモノクローナル抗
体Ｈ２Ｈ５（ＩｇＧ１）　、実施例２−伽）で述べた一
すクローナル抗ＡＡ蛋白抗体ならびに合成ＡＡ蛋白に対
して作製されたモノクローナル抗体ＫＭ２６８（山口大
学医学部病理学第一講座、内野文称教授より供与された
）を使用した。

（発明の効果） 従来よりアミロイド−シスの病型診断には、各アミロイ
ド蛋白に対する抗血清を用いた免疫組織学的方法が応用
されてきたが、本発明のモノクローナル抗体は均一な試
薬であるという点でアミロイド物質の同定とアミロイド
ーシス、特に続発性アミロイド−シス、さらにはアルツ
ハイマー型痴呆症の診断に有用であるといえよう。さら
に本抗体の特徴として、免疫組織学的検討に際してホル
マリン固定およびパラフィン包理標本を使用し得る利点
が挙げられる。

また、本発明のモノクローナル抗体により認識される抗
原分子は、これまでの抗体では検出されなかった４２Ｋ
または４５にダルトンの分子量をもつ新しいアミロイド
関連蛋白と考えられ、今後、新たな症例の診断にも用い
られうる可能性も残されていると言えよう。

特許出願人　　サントリー株式会社 代理人　弁理士　　　竹　　１）　逸　　部手続補正書
（自発） 昭和６２２年　６月１３日 特許庁長官　黒　１）　明　雄　殿 １、事件の表示　　　　　　　　　　　　　　　て酔昭
和６２年特許願第７８３５６号 ２、発明の名称 ヒトアミロイド関連蛋白モノクローナル抗体３、補正を
する者 事件との関係　　特許出願人 大阪市北区堂島浜２丁目１番４０号 （１９０）サントリー株式会社 代表者　佐治敬三 ４、代理人 東京都港区元赤坂１丁目２番３号 サントリー株式会社特許情報部 ６、補正の内容 （１）明細書第７頁第３行の「最小」を、「最少」に訂
正する。

（２）　　明細書第１Ｏ頁第１行の「セトアミロイド」
を「ヒトアミロイド」に訂正する。

（３）明細書第１０頁第１３行のｒ　ＩｎｖｅｓｔＪの
後に、「、」を挿入する。

（４）明細書第１１頁第５行のｒＢａｌｂ／ｃｌをｒ　
ＢＡＬＢ／ｃ」に訂正する。

（５）明細書第１２頁第１３行の「ペルオキシダーゼ」
を「ペルオキシダーゼ」に訂正する。

（６）　　明細書第１２頁第２０行の「ペルオキシダー
ゼ」を「ペルオキシダーゼ」に訂正する。

（７）　　明細書第１３頁第１行の「クロプリン」を「
グロブリン」に訂正する。

（８）　　明細書第１３頁第１０行の「ハイグリドーマ
」を「ハイプリドーマ」に訂正する。

（９）明細書第１４頁第１２行の「ペルオキシダーゼ」
を「ペルオキシダーゼ」に訂正する。

ｆｉ鳴　明細書第１５頁第１３行のｒＭＡ３４ＪをｒＡ
Ｍ３４」に訂正する。

αυ　明細書第１８頁第５行のｒ　ｅｔｈａｎｅｏｌＪ
をｒｅｔｈａｎｏｌ　Ｊに訂正する。

（２）明細書第２０頁第７行の「包理」を「包埋」に訂
正する。

以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）ヒトアミロイド関連蛋白を特異的に認識するモノク
   ローナル抗体。 ２）上記蛋白が、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウェスタンブ
   ロット法で約４２Ｋダルトンまたは４５Ｋダルトンの分
   子量である特許請求の範囲第１項記載のモノクローナル
   抗体。 ３）サブクラスが、ＩｇＧ１である特許請求の範囲第１
   項乃至第２項記載のモノクローナル抗体。 ４）続発性アミロイド−シス症のアミロイド沈着部位お
   よびアルツハイマー型痴呆症の脳の老人班におけるアミ
   ロイド沈着部位を認識する特許請求の範囲第１項乃至第
   ３項記載のモノクローナル抗体。 ５）アミロイド−シス症患者の臓器組織より抽出された
   アミロイド蛋白で感作した哺乳動物の脾細胞と骨髄腫細
   胞とのハイブリドーマの培養によって得られる特許請求
   の範囲第１項乃至第４項記載のモノクローナル抗体。 ６）臓器組織が、腎組織である特許請求の範囲第５項記
   載のモノクローナル抗体。 ７）哺乳動物が、マウスである特許請求の範囲第５項記
   載のモノクローナル抗体。 ８）ＡＭ３４の名称で表わされる特許請求の範囲第１項
   乃至第５項記載のモノクローナル抗体。 ９）ヒトアミロイド関連蛋白を特異的に認識するモノク
   ローナル抗体を用いて、続発性アミロイド−シスまたは
   アルツハイマー型痴呆を診断する方法。 １０）上記モノクローナル抗体が、ＡＭ３４の名称で表
   わされるモノクローナル抗体である特許請求の範囲第９
   項記載の方法。