JPS63158520A - コンタクトレンズ洗浄溶液 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、コンタクトレンズを洗浄するのに有用な組成
物に関する。特に２本発明は、プロテアーゼ活性成分を
有する組成物を用いて、該レンズからタンパク物質を除
去する方法に関する。

（従来の技術） 親水性ポリマーを含むソフトコンタクトレンズの出現に
より、快適さや使用性が大いに増している。しかしなが
ら、これらの改良に伴って、レンズに吸収され、レンズ
を不透明にし、そして時々感染を引き起こすタンパク物
質に関連した問題点が生じている。ソフトコンタクトレ
ンズは、水中にて、およそ１５０重量％まで吸収性であ
るので。

この吸収された液体は、涙とともに涙のタンパク成分を
運ぶ。このタンパク成分は、相対的に短時間で、レンズ
を不透明にする。

この不透明性の問題点にかかわっている主原因は、実際
にはタンパクであることが知られているので、洗浄溶液
にプロテアーゼを使用する提案は。

当然であった。実際、米国特許第３，９１０，２９６号
は。

ソフトコンタクトレンズ洗浄のために、プロテアーゼ含
有溶液を使用することが開示され、かつ請求されている
。さらに、この開示によれば、おそらくプロテアーゼ中
に含有されているジスルフィド結合を還元することによ
り、プロテアーゼを“活性化°゛するために、スルフヒ
ドリル基含有化合物を用いることが提案されている。

かなりの数の開示では、プロテアーゼ含有洗浄剤の基本
的な考え方を改良する試みがなされている。この改良は
、この洗浄溶液に他の物質を添加する提案、または、洗
浄のなされる条件の調整のいずれか、またはその両方に
より２行われる。例えば、米国特許第４，０９６，８７
０号では、プロテアーゼ混合物とともに、カルボヒドラ
ーゼやリパーゼ（これは、消化助剤のパンクレアチン中
で見出される）を用いることが提案されている。洗浄組
成物にホウ酸および塩化ナトリウムを添加することもま
た。提案されている。米国特許第４．２８５，７３８号
では、プロテアーゼに加えて、尿素および／またはグア
ニジン塩の高張溶液を使用する提案がなされている。こ
の組成物もまた。スルフヒドリル化合物、またはジスル
フィド結合を開裂し得る他の還元剤を含有している。英
国特許第２．０１９．７２１号は、リン酸緩衝液中に脂
肪分解酵素を含有する洗浄組成物を示している。これら
の組成物はまた。

タンパク分解酵素を含有している。類似の組成物は、英
国特許第２．０２９．２２５号、欧州特許第５．１３１
号およびカナダ特許第１．１４６．８８１号に開示され
ている。プロテアーゼにノニオン性湿潤剤を加えた混合
物は、西独特許公開第２，８５４，２７８号（１，９８
０年３月７日公開）に提案されている。プロテアーゼを
含む洗浄剤を発泡させたタイプは、特開昭５７−０４８
７１２号（１９８２年３月２０日公開）により、提案さ
れている。そして、洗浄組成物と、パパインおよびラク
トースとの配合物は、英国特許出願第２，０８８，５８
１号（１９８２年９月６日公開）に開示されている。

°“活性剤゛°のない溶液（すなわち、これは、ジスル
フィド結合を開裂し得るスルフヒドリル化合物を含有し
ない）は、欧州特許公開第１４０，６６９号（１９８５
年８月５日公開）に開示されている。これらの組成物は
１種々のバクテリア（例えば、バシラス属、ストレプト
ミセス属、またはアスペルギルス属）からのプロテアー
ゼ抽出物を含有する。

それゆえ、これらの組成物は３種々のプロテアーゼだけ
でなく、ある場合には、アミラーゼおよびリパーゼを含
む。欧州特許公開第１４１　、６０７号（１９８５年５
月１５日公開）は、高温で洗浄を行って処理条件を変え
ることにより、基本的なタンパク分解工程を改良してい
る。特に、　ＰｃＴ公開８５１０３２４７に開示の熱安
定性の酵素混合物は、これら高温で行われる洗浄に適合
し得る。これらの組成物は、バシラス菌から抽出された
サーモリシン、カルトリシン（ｃａｌｄｏｌｙｓｉｎ）
およびエンドペプチダーゼのような酵素を含有する。特
開昭６０−１９６７２２号は。

プロテアーゼを含む種々の加水分解酵素と１両性界面活
性剤との混合物を開示している。

はとんどの応用例と同様に１種々の可能な洗浄溶液を利
用するのが望ましい。それら洗浄溶液のいくつかは、特
定のレンズ組成物に対し、他のものよりも良好である。

本発明は、この群の他の構成要素を与える。この群では
、この組成物の基本的なプロテアーゼ含量のタンパク分
解活性は、標的タンパクをさらなる分解にかけ得る酵素
（リゾチーム）を添加することにより、改良され得る。

（発明の要旨） 本発明は、涙の主要タンパク成分を溶かす洗浄組成物、
リゾチーム、特に、プロテアーゼによる攻撃を受ける洗
浄組成物を提供する。この組成物中にエンドペプチダー
ゼ（これは、リシン残基のカルボキシル末端を特異的に
分解する）を含有させることにより、リゾチームの感受
性のペプチド結合を、それに伴うプロテアーゼにさらす
ことが。

プロテアーゼそれ自体の付随した相互活性なしで。

達成される。この組成物の付加的な成分には、緩衝剤、
安定剤、洗浄剤およびジスルフィド開裂試薬が包含され
得る。

従って、ある局面では９本発明は、リゾチームのペプチ
ド結合を開裂する際に効果的なタンパク分解酵素を、リ
シン残基のカルボキシル末端におけるペプチド結合に特
異的なエンドプロテイナーゼと組み合わせて含有するコ
ンタクトレンズ洗浄組成物に関する。他の局面では１本
発明は１本発明組成物を用いてコンタクトレンズを洗浄
する方法、およびこれらの組成物の調製方法に関する。

本発明のコンタクトレンズの洗浄方法は、コンタクトレ
ンズを有効量のプロテアーゼおよび有効量のプロテア−
ゼｌｙｓ−Ｃで処理する工程を包含する。

本発明のソフトコンタクトレンズ洗浄用組成物は、プロ
テアーゼおよびエンドプロテイナーゼｌｙｓ−Ｃを含有
する。

（発明の詳細） 八一定１ ここで用いられるように　１＋　１ｙＳ−ｃ　＋１は、
リシン残基のカルボキシル側のペプチド結合を加水分解
するエンドプロテアーゼを示す、同様に、“ａｒｇ−Ｃ
”と名付けられるエンドプロテア−ゼは、アルギニン残
基のカルボキシル側のペプチド結合を加水分解する。エ
ンドプロテイナーゼ“ｌｙｓ−Ｃ”は。

ライソバフタ−エンチモゲネス（ｄ ｅｎｚ　ｍｏ　ｅｎｅｓ　）　　（Ｊｅｋｅｌ、　ｐＪ
、ｌら、　Ａｎａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍ（１９８３）韮：
　３４７−３５４）　、アクロモバクタ−リテイクス（
匙加１懸畑旦匡り刀」江ｕｓ　）　（Ｍ４９７−１）　
（Ｍａｓａｋｉ、　Ｔ、、　　ら、　Ａ　ｒｉｃ　Ｂｉ
ｏｌ　Ｃｈｅｗ　（１９７８）　　４２　：１４４３−
１４４５　）　、およびミクソバクターＡＬ−１株（Ｍ
ｙｘｏｂａｃｔｅｒ、　５ｔｒａｉｎ　ＡＬ−１）　（
Ｗｉｎｇａｒｄ、　Ｍ、、ら、Ｌハ旦（１９７２）　１
１２　：　９４０−９４９　）から得られ得る。

エンドプロテイナーゼ“ａｒｇ−Ｃ″は、マウス下あご
線から抽出される（Ｓｃｈｅｎｋｅｉｎ、　ｒ、ｌら、
　５ｃｉｅｎｃｅ（１９６８）１５９　：　６４０−６
４３　；　５ｃｈｅｎｋｅｉｎ、　　１．、ら、崩財ｙ
肋１」動刃■Ｌ（１９７７）１蔓：　６４−７０）。

“プロテアーゼ”は、一般に、ここで用いられるように
、パパインのような一般的な目的のプロテアーゼを示す
。このプロテアーゼは、パンクレアチン、トリプシン、
キモトリプシン、ペプシン。

ストレプトキナーゼ、ストレプトドルナーゼ、フィシン
、カルボキシペプチダーゼ、アミノペプチダーゼ、キモ
パパイン、ブロメリンおよびサブチリシン中に含有され
る。サブチリシン（これは。

Ｂ、　５ｕｂｔｉｌｉｓにより生産されるプロテアーゼ
の一般的なカテゴリーである）は、特に好ましい。この
特定の型が特徴づけられ、そしてＤＮＡをコードする型
は、クローン化され発現されている（Ｈｅｌｌｓ。

Ｊ、　Ａ、、ら、　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅ
ｓ　（１９８３）　　１１　：　７９１１−７９２４）
　、特に好ましい型のサブチリシンは、化学的な抗酸化
性があるように遺伝的に操作されており、これは、　Ｅ
ｓｔｅｌｌ＋　Ｄ、Ａ−＋　　ら、　Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃ
ｈｅｍ　　（１９８５）　　２皿：　６５１８−６５２
１により報告されている。

残基２２２にて、メチオニンの代わりにシスティンを含
有するサブチリシンの変異型は、特異的な活性を増加さ
せている。しかし、これらは抗酸化性がなかった。他の
置換では、活性はわずかに減少したが、安定性は大きく
増大した。

旦−二瓜方附述 本発明は、コンタクトレンズの洗浄に適する組成物中に
おいて、　ｌｙｓ−Ｃエンドプロテアーゼおよび適当な
一般的プロチアーゼの組み合わせを供給することに関す
る。明らかに、これら２成分が供給される正確な方法は
、かなり変えられる。洗浄がなされ得る最も好都合な方
法は１両成分を含む単一溶液を媒介してなされ得る。す
なわち、この方法では、エンドプロテイナーゼｌｙｓ−
Ｃとの処理およびプロテアーゼとの処理が同時に行われ
る。

しかしながら、エンドプロテア−ゼｌｙｓ−Ｃの機能は
、おそらく、プロテアーゼの攻撃に対し、基質リゾチー
ムをさらす（“ｏｐｅｎ　ｕｐ”）ことにあるので、レ
ンズをエンドプロテイナーゼで前処理し１次いで一般的
なプロテアーゼで完全に加水分解するのが望ましい。

一般に、このエンドプロテイナーゼｌｙｓ−Ｃは。

この洗浄組成物において、約０．１〜２０μｇ／Ｉｄの
濃度で供給される。この一般的プロテアーゼの濃度は、
同範囲にある。処理時間は、約２時間から約１５時間ま
で変えられ得る。しかし、標準的で好都合な洗浄時間は
一昼夜である。その結果、装着者は、睡眠中にレンズを
浸しておくことができる。

種々のプロトコルが適当である。しかし、特に好ましい
プロトコルは９画成分を含む単一溶液を用いて、室温に
て、１５分間から２時間または一昼夜行われるか、また
はエンドプロテイナーゼｌｙｓ−Ｃ溶液の存在下にて１
５分間から２時間予備浸漬され。

次いで、一般用のプロテイナーゼを含有する溶液で一昼
夜処理される。

より好ましい一般用プロチアーゼには、パパインおよび
サブチリシン、特に、上記のようにサブチリシンが包含
される。サブチリシンの濃度も約０．１〜２０μｇ／ｍ
１の範囲とされる。より好ましいエンドプロテイナーゼ
ｌｙｓ−Ｃ酵素は、ライソバフタ−エンチムゲネス（Ｌ
　５ｏｂａｃｔｅｒ　ｅｎｚ　ｍｏ　ｅｎｅｓ）に由来
の酵素である。単一のプロテアーゼが用いられ得る。ま
たは、この組成物は、混合物を含有していてもよい。

さらに、この組成物は、リゾチームの全体的な分解を助
ける付加的成分を含んでいてもよい。これら成分のうち
、ジスルフィド開裂試薬は、特に有用である。このジス
ルフィド開裂試薬には１例えば、２−メルカプトエタノ
ール、システィンハイドロクロライド、ジチオスレイト
ール、ジチオエリスリトール、硫酸水素ナトリウム、メ
タ硫酸水素ナトリウム、チオ尿素などがある。これらは
。

一般に、約０．０１〜５重量％、好ましくは０．０５〜
１重量％の範囲で用いられるのがより好ましい。リゾチ
ームは４つのジスルフィド結合を含むので。

ジスルフィド結合を破壊する試薬を用いた前処理ちまた
好ましい。しかし、プロテイナーゼでの付随した前処理
もまた実行可能である。さらに、洗浄剤は、酵素含有溶
液でレンズを湿潤させるのを促進するために９組成物中
に含有され得る。適当な洗浄剤には、ドデシル硫酸ナト
リウム、モノラウリン酸ナトリウム、アルコール性エト
キシド（例えば、ポリエトキシエタノール）のようなノ
ニオン性界面活性剤、アニオン性界面活性剤（例えば、
エーテルスルホン酸塩、線状のアルキルベンゼンスルホ
ン酸塩、ラウリル硫酸ナトリウム）などが含まれる。

適当な緩衝剤および安定剤もまた。用いられ得。

これには、クエン酸ナトリウムまたはクエン酸カリウム
、クエン酸、ホウ酸、　ＥＤＴへのナトリウム塩。

種々の混合リン酸緩衝液およびＮａＨＣＯｓが包含され
る。一般的に、緩衝剤および安定剤は、約０．００１〜
約２．５重量％、好ましくは約０．０１〜１重四％の量
で使用され得る。本発明で使用され得る種々の化合物の
量についての上記記述は、溶液中の成分の割合（ｗｔ／
ｖｏｌ　）で述べられていることが、理解されるべきで
ある。この処方は、また、１種またはそれ以上の通常の
固形調剤型の形態をとり得る。

この調剤型には２例えば、一定量の適当な溶媒（例えば
水）中での使用に適したタブレット型がある。この固形
の調剤型のパーセント組成は、これを特定容量の水に溶
解させたとき、この溶液が本明細書中に示される範囲内
のパーセント組成となるようにされる。固形の調剤型が
用いられるなら。

この処方には、従来の潤滑剤、結合剤および賦形剤が含
まれてもよい。この賦形剤には、グリセロール、ソルビ
トール、ホウ酸、プロピレングリコール、ポリエチレン
グリコール、デキストラン。

メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース。

カルボキシメチルセルロースの水溶性塩、または天然に
産する親水性物質（例えば、ゼラチン、アルギン酸塩、
トラガカント、ペクチン、アラビアゴムおよび可溶性デ
ンプン）が包含される。

本発明方法に有用である典型的な組成物およびプロトコ
ルは、以下である： １、この組成物は、５μｇ／ｍｌのサブチリシンおよび
５μｇ／ｍｌのエンドプロテイナーゼｌｙｓ−Ｃを含有
する。レンズが取りはずされ、この組成物の溶液に２２
°Ｃで１２時間接触して置かれる。レンズは。

この洗浄溶液から取り出され、そして淡水で洗浄される
。

２、溶液Ａは、エンドプロテイナーゼｌｙｓ−Ｃを１０
μｇ／ｍｌ含有する。溶液Ｂは５μｇ／ｄのサブチリシ
ンを含有する。レンズは、２５°Ｃで３０分間溶溶液に
浸され、取り出され、そして２５°ＣでＩＯ時間溶溶液
に浸される。

３、この洗浄溶液は、　１０μｇ／ｒｒｄｌのプロテア
ーゼペプシンおよび１０μｇ／１ｒｄｌのエンドプロテ
イナーゼｌｙｓ−Ｃを含有する。レンズは、この溶液に
２０°Ｃで５時間浸される。

４、この洗浄溶液は、５μｇ／ｒｔｄｌのサブチリシン
。

５μｇ／１ｔｄｌのエンドプロテイナーゼｌｙｓ−Ｃ，
および１０ｍＭの２−メルカプトエタノールを含有する
。このレンズは、溶液中に３０°Ｃで５時間浸される。

５、この洗浄溶液は、７μｇ／ｍｌｌサブチリシン。

３μｇ／ｍｌエンドプロテイナーゼ、　１０ｍＭの２−
メルカプトエタノールおよび２％ドデシル硫酸ナトリウ
ム（ＳＯＳ）を含有する。レンズは、この溶液に２０°
Ｃで３時間浸される。

６、この洗浄溶液は、４μｇ／ｍのサブチリシン。

２μｇ／ｍｌのトリプシン、１０μｇ／１ｔｄｌのエン
ドプロテイナーゼｌｙｓ−Ｃおよび２％ＳＤＳを含有す
る。レンズは、この溶液中に２０°Ｃで７時間浸される
。

７、溶液Ａは、２％ＳＯＳ中に４μｇ／Ｉｎ１サブチリ
シンおよび２μｇ／ＩＲ１トリプシンを含有する。溶液
Ｂは、　１０μｇ／ｙｄｌのエンドブロテイナーゼｌｙ
ｓ−Ｃに１０μｇ／ｍｌの２−メルカプトエタノールを
含有する。

レンズは、溶液Ｂに３０’Ｃで２０分間浸され１次いで
。

溶液Ａに２５°Ｃで６時間浸される。

先の例のいずれにおいても、レンズは、装着者の目に戻
される前に、生理食塩水で完全に洗浄される。

上記プロトコルによる処理に適するコンタクトレンズは
、典型的には、″ソフト”コンタクトレンズとして分類
されている。これらレンズの製造に用いられる組成物は
、典型的には、ヒドロゲル構造を有する親水性架橋ポリ
マーであるか、またはシリコーンポリマーから製造され
る。このようなソフトコンタクトレンズの典型的な組成
は、米国特許第３，５０３，３９３号および米国特許第
２．９７６．５７６号に開示されている。一般的に言え
ば、これらの方法をハードコンタクトレンズ（これらは
一般にメチルアクリレートポリマーまたはメチルメタク
リレートポリマーから作られる）に適用することは可能
である。しかし、そうすることで、特に有利な点はない
。これらハードコンタクトレンズは。

タンパクをあまり多（吸収しないからである。

旦＝！施■ 次の実施例は本発明を限定することを意図するものでは
なく、エンドプロテイナーゼｌｙｓ−Ｃ処理と一般のプ
ロテイナーゼとを組み合わせることの効果を示すことを
意図するものである。

基質溶液は、　０．０２５Ｍ　）リスー肛１（ｐＨ８）
中に。

１　ｍｌにつきヒトミルクリゾチーム１　ｍｇを含有す
る。

基質溶液０．５ｒｎ１をプロテイナーゼとともに（そし
てエンドプロテイナーゼとともに、そしてエンドブロテ
イナーゼを用いずに）３７°Ｃで（総容量を０．５ｄと
して）インキュベートした。２０％ＴＣＡ　０．５ｍ１
ｌを加えることにより反応を停止させ２反応部合物を遠
心分離して析出したタンパクを除去した。次にその上清
の２８０ｎｒａにおける吸光度を測定することにより、
加水分解の程度を決定する。その吸光度は、加水分解さ
れたリゾチームの量に直接関係する。盲検は、ブロテイ
ナーゼ／エンドプロテイナーゼを加える以前にＴＣＡ溶
液を加えることにより、調製された。

ある反応混合物はさらに２−メルカプトエタノールを含
み、あるサンプルはエンドプロテイナーゼでブレインキ
ュベートされ、あるいは、他のサンプルにおいてはプロ
テアーゼと処理する以前にエンドプロテイナーゼが加え
られた。インキュベーションの時間を変えて２回の実験
が行われた。

表１の結果については、プロテアーゼとのインキュベー
トの時間は１５分間が採用され；表２の結果については
、インキュベートの時間は３０分間が採用された。

表１ （以下余白） 表２ （Ｓ−１６６はサブチリシンの変異酵素をいい、１６６
位がグリシンの代わりにセリンである。）表１の結果は
次の事柄を示す。この事柄とは。

つまり、サブチリシン単独での加水分解に比べて。

エンドプロテイナーゼｌｙｓ−Ｃを添加したときには４
．６倍の増加が得られ、そして、トリプシンとともにイ
ンキュベートしたときにはわずかな増加が得られること
である。プロテアーゼＳ−１６６、トリプシンまたはエ
ンドプロテイナーゼｌｙｓ−Ｃとともにプレインキュベ
ーシゴンを行うと、すべての場合についてリゾチームの
加水分解が強化される。

しかし、エンドプロテイナーゼｌｙｓ−Ｃを用いたとき
には、劇的な８倍の増加が認められた。

表２の結果は、類似して９次の事柄を示す。この事柄と
は、つまり、エンドプロテイナーゼｌｙｓ−Ｃがサブチ
リシン溶液に加えられたときには、加水分解が強化（約
８倍）されることを示す。他方。

エンドブロテイナーゼａｒｇ−Ｃとサブチリシンとを組
み合わせても、比較的効果はない。しかし、これらの２
つのエンドプロティナーゼが０．４％の２−メルカプト
エタノールの存在下で使用されたときには、エンドプロ
ティナーゼａｒｇ−Ｃの添加は加水分解を強化するのに
有効である。しかし、エンドブロテイナーゼｌｙｓ−Ｃ
による増強効果はどは劇的ではない。エンドプロテイナ
ーゼｌｙｓ−ＣとＳ−１６６との組み合わせもまたリゾ
チーム加水分解を増強させる。

（発明の要約） 一般用プロチアーゼをエンドプロテイナーゼｌｙｓ−Ｃ
と組み合わせてソフトコンタクトレンズを処理すること
を包含するコンタクトレンズ洗浄用組成物および方法は
、涙の主要タンパク成分であるリゾチームを溶解し加水
分解するのに効果的である。

以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、コンタクトレンズを有効量のプロテアーゼおよび有
   効量のプロテイナーゼｌｙｓ−Ｃで処理する工程を包含
   する、コンタクトレンズの洗浄方法。 ２、前記プロテアーゼがサブチリシンである特許請求の
   範囲第１項に記載の方法。 ３、前記エンドプロテイナーゼｌｙｓ−Ｃがライソバク
   ターエンチモゲネス（￥Ｌｙｓｏｂａｃｔｅｒ￥　￥ｅ
   ｎｚｙｍｏｇｅｎｅｓ￥）から誘導される特許請求の範
   囲第１項に記載の方法。 ４、前記サブチリシンが抗酸化性である特許請求の範囲
   第３項に記載の方法。 ５、前記エンドプロテイナーゼｌｙｓ−Ｃとの処理およ
   び前記プロテアーゼとの処理が同時に行われる特許請求
   の範囲第４項に記載の方法。 ６、前記レンズがエンドプロテイナーゼｌｙｓ−Ｃによ
   り前処理され、引き続いてプロテアーゼで処理される特
   許請求の範囲第１項に記載の方法。 ７、前記レンズをさらにジスルフィド開裂試薬で処理す
   ることを包含する特許請求の範囲第１項に記載の方法。 ８、プロテアーゼおよびエンドプロテイナーゼｌｙｓ−
   Ｃを含有するソフトコンタクトレンズ洗浄用組成物。 ９、前記プロテアーゼがサブチリシンである特許請求の
   範囲第８項に記載の組成物。 １０、前記エンドプロテイナーゼｌｙｓ−Ｃの濃度が０
   ．１〜２０μｇ／ｍｌであり、そして、サブチリシンの
   濃度が０．１〜２０μｇ／ｍｌである特許請求の範囲第
   ９項に記載の組成物。