JPS63112992A - Ｌ−スレオニンの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 技術分野 本発明は、Ｌ−スレオニンの製造法に関するものである
。

本発明によればＬ−もしくはＤＬ−ホモセリンから、史
にはＤ−もしくはＤＬ−ホモセリンから効率よくＬ−ス
レオニンを人造することができる。

Ｌ−スレオニンは、必須アミノ酸として人間および動物
の栄養上Ｎ要な役割をするアミノ酸であり、医療、食品
、飼料強化剤としてその需要が近年急激に増加しつつあ
る。

先行技術 Ｌ−スレオニンの工業的製造法としそは、他のアミノ酸
の場合と同様に立体異性体が存在する為、化学合成では
Ｌ体のみの製造は困難であり、主に発酵法により生産が
行われている。発酵法により製造する方法としてはアミ
ノ酸要求株を用いる方法（特公昭４６−３３１９号、同
４６−３４１９３号、同４６−３４１９４＋ｊ公報等）
、また前駆体づる酵法による製造法としては、ホモセリ
ンを前駆体とする製造法（特公昭３６−２８９６号、同
３８−６５９０号、同４３−８７１５号公報等）等が鰺
けられる。

また、発酵法よシも固定費等が安く、生産管理がより容
易な酵素法により製造法には、グリシンとアセトアルデ
ヒドを前駆体とする方法（特開昭５６−１２１４９１号
、同５８−１１６６８１号各公報等）などが提案されて
いるが、これらはアロ体のスレオニンの副生があり実用
的な方法とはなっていない。

この他にも酵素法による製造法には、各種の微生物菌体
を用いてＤＬ−ホモセリンを存在させた反応液にて、Ｌ
−スレオニ／を生成させることが報告されている（　Ａ
ｍ１ｎｏ　Ａｃ１ｄｓ、第１号、Ｐ７１〜７４（１９５
９））。しかしながら、こ扛ら公知の方法では、Ｌ−ス
レオニンの生成量は未だ十分ではない状況にあった。

一方、ＤＬ−ホモセリンを前、躯体とする実用上の研究
はそれ以後殆んど報告されていない。この理由としては
、ホモセリンはＤＬ体として化学合成で比較的安価に合
成されるものの、Ｌ−スレオニンの生成はＬ−ホモセリ
ンからのみでＤ−ホモセリンからは認められない（Ａｍ
１ｎｏ　Ａｃ１ｄｓ、　第１号、Ｐ７１〜７４（１９５
９））ことから製造費がきわめて割高となることが挙げ
られる。

発明の要旨 本発明者らは、上記課題を解決すべくＬ−又はＤＬ−ホ
モセリン、史にはＤ−又はＤＬ−ホモセリンを主原料と
し、酵素的製法によるＬ−スレオニンの製造法につき鋭
意検討を行い本発明を完成した。

即ち、本発明は、微生物一体の存在下、Ｌ−又はＤＬ−
ホモセリンを水溶液中で酵素反応させ、該溶液中にＬ−
スレオニンを生成せしめ、これからＬ−スレオニンを採
取する方法において、微生’４ｔＪ　ｖ体がビオチン要
求性のブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｒｅｒｉ
ｕｍ　）属に属するものであること分特徴とするＬ−ス
レオニンの製造法を提供するものである。

発明の効果 不発明の方法によれば、Ｌ−スレオニンが高収位で製造
でさる。又、エタノール及び／又はグリコースを含む完
全合成培地を酵素反応の水溶液として使用した場合には
、Ｌ−スレオニンがざらに高収於に製造でき、発酵法の
様な培地の滅菌等の煩雑な操作が必要でなく、生産管理
が極めて容易となる。

史に、Ｄ−又はＤＬ−ホモセリ／をラセミ化酵素の存在
下でラセミ化させて得られるＬ−又はＤＬ−ホモセリン
を、そのまま本発明の方法に用いた場合には、ビオチン
要求性のブレビバクテリウム属に属する微生物菌体と、
ラセミ化酸とが相互に全く悪影響を及ぼさないで、また
目的物であるＬ−スレオニンに対しても全く悪影響を与
えることなく、工業的に安価に入手可能々ＤＬ−ホモセ
リン又はＤ−ホモセリンから極めて旨い生産性で効率よ
くＬ−スレオニンが製造できる。

発明の詳細な説明 本発明に使用されるビオチン要求性のブレビバクテリウ
ム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ　）属に属する微生
物菌体としては、以下の碌なものがあり、Ｌ−スレオニ
ン生産菌が含まれる。

エタノール資化性のもの、例えばブレビバクテリウム・
フラバム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　ｆｌａｖ
ｕｍ）ＭＪ　−２３３（微工研菌寄　第３０６８号）、
ブレビバクテリウム・フラバム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍｆｌａｖｕｍＪ　ＭＪ−２３３−ＡＢ−４１（
微工研閉寄　１３８１２号）、ブレビバクテリウム・フ
ラバム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　ｆｌａｖｕ
ｍ　）　Ｍ　Ｊ　−２３３−ＡＢＴ−１１（微工研菌′
６　第８４２３号）及びブレビバクテリウム・フラバム
（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｆｌａｖｕｍ　）　
　ＭＪ　−２３３−ＡＢＬ）　−２１（微工研菌寄　第
８０５５号）等がある。これらの他にもブレビバクテリ
ウム・アンモニアゲネス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕ
ｍ　　ａｍｍｏｎｉａｇｅｎｅｓ　）　Ａ　Ｔ　ＣＣ６
８７１、同１３７４５、同１３７４６、ブレビバクテリ
ウム・デバリカタム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍｄ
ｉｖａｒｉｃａｔｕｍ）ＡＴＣＣ１４０２０等が例示で
きる。

これらの微生物１体の中でもエタノール費化性のものが
好ましく、特にブレビバクテリウム・フラバム　ＭＪ−
２３３、ブレビバクテリウム＋１７ラパム　ＭＪ　　２
３３　　ＡＢ−４１％　ブレビバクテリウム・フラバム
　ＭＪ　　２３３　　ＡＢＴ−１１ｓブレビバクテリウ
ム・７ラバム　ＭＪ−２３３−ＡＢＤ−２１が好ましい
。

なお、上記の（倣工研菌Ｗ　第３８１２号）は（微工研
菌寄　第３０６８匂〕を親株としてＤＬ−ａ−アミノ酪
酸耐性を積極的に付与されたエタノール資化性微生物で
ある（ｔ＋！ｆ公昭５９−２８３９８号公報３〜４欄参
照〕。（微工研菌寄　第８４２３号）は、（微工研菌寄
　第３０６８号）を親株としたＬ−α−アミノ酪酸トラ
ンスアミナーゼ高活性変異株である（特願昭６０−１９
０６０９号明＃＋ｌｌＩ誓３〜５頁参照）。また、（倣
工研園寄第８０５５号）は（微工研菌寄　第３０６８匂
、特公昭５７−２６７５５号公報参照）を親株としたＤ
−、−アミノ酪酸デアミナーゼ高活性変異株である（特
開昭６１−１７６６０７号公報参照〕。

本発明における上記「微生物菌体」には、その固定化物
を含むものとする。ここで１−固定化」は、該微生物菌
体を公知の尚定化法、例えばアクリルアミド、アルギン
酸塩、カラギーナン等による包括法、ＤＥＡＥ−セファ
デックス、ＤＥＡＥ−セルロース等によるイオン結付法
などから適宜選択して行える。

本発明の方法は、水溶液中で行われる。この水溶液とし
ては、水あるいはリン酸又はトリス塩酸等の緩衝液が用
いられるが、更に好ましくは炭素源としてエタノール及
び／又はグルコースを含む完全合成培地が用いられる。

この完全合成培地は、窒素源、無機塩等を生成分として
含有する公知のものが用いられる。ここで窒素源として
は、アンモニア、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム
、硝酸アンモニウム、尿素等が例示でき、無機塩として
は、リン酸−水素カリウム、リン酸二水素カリウム、硫
酸マグネシウム、硫酸鉄、硫酸マンガン等が例示できる
。

上記完全合成培地に添加されるエタノール及び／又はグ
ルコースの濃度は、エタノールでは１〜２０容ｉ−係　
グルコースでは０．５〜２０ｆｉ量係であシ、エタノー
ルとグルコース併用の揚台は前記範囲内でそれぞれ用い
られる。

Ｌ−又はＤＬ−ホモセリンの反応時の濃度は、一般には
０．１〜２０　％　（ｗｔ　／ｖｏｌ　）の濃度範囲で
使用するのが適当である。又、該菌体の使用量も特に制
限されるものではないが、一般に１〜５０％　（ｗｔ　
／　ｖｏｌ　）の濃度で使用することが出来る。

酵素反応は、約２０〜約５０℃、好ましくは約３０〜約
４０℃の温度で、通常約ｌθ〜約７２時間行われる。

本発明の方法においては、工業的に安価に供給可能なり
Ｌ−ホモセリン又は、酵素反応で未反応物トして残るＤ
−ホモセリン又はＤ−ホモセリンが高含量であるＤＬ−
ホモセリンを、Ｌ−スレオニンを基質とせずＤ−ホモセ
リンをラセミ化ｆる能力を有する微生物、その処理物又
はそれらの固定化物の存在下にラセミ化したものを使用
するのが有利であり、好ましいものである。

こＯＬ−スＬ’オニンを基質とせずＤ−ホモセリンをラ
セミ化する能力を有する微生物としては、例えば７ユー
ドモナスΦプチダ（ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓＰｕｔｉｄ
ａ　）　　ＩＦｏ　１２９９６等がある。

上記Ｄ−ホモセリンをラセミ化する能力を有する微生物
等は、本発明における酵素反応系に初めから添加されて
いてもよいが、酵素反応の途中に添加することも、又該
酵素反応系とは別の反応系でラセミ化反応をさせるのに
用いることもできる。

この様なり一ホモセリンをラセミ化する能力を有する微
生物、その処理物又はそれらの固定化物の使用量は、０
．１〜５０重址チ、好ましくは１〜３０重ｔ％程度であ
る。

上記のような反応方法によって得られる反応液中に生成
したし一スレオニンの分離・梢辺は、イオン交換樹脂処
理法あるいは、沈澱法等によシ容易に行うことができる
。

本発明に用いられる２種の微生物、即ち、ホモセリンか
らＬ−スレオニンを生成する能力を有する微生物、およ
びＬ−スレオニンを基質とせすＤ−ホモセリンのみをラ
セミ化する能力を有する微生物の調製法を以下に述べる
。

炭素源としてはＶすえばグルコース、エタノール、メタ
ノール、’ｘ−ｒｓ蜜等が、窒素源としてはアンモニア
、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニ
ウム、尿素等がそれぞれ単独もしくは混合して用いるこ
とが出来る。

無慎塩としては、リン酸−水素カリウム、リン酸二水素
カリウム、硫酸マグネシウム等が用いられる。この他に
ペプトン、肉エキス、酵母エキス、コーンステイープリ
カー、カザミノ酸、ビオチン等の各種ビタミン等の栄養
素を培地に添加して用いることが出来る。

培養は通気攪拌、振とう等の好気的条件下で行ない、培
養温度は２０〜４０℃、好ましくは２５〜３５℃で行な
う。培養途中のｐＨは５〜１０、好ましくｔｉ７〜８付
近にて行ない、培養中のｐＨの調整には酸、アルカリを
添加して行なうことができる。

培養開始時のエタノール濃度は、好ましくは１〜５容量
係、更に好ましくは２〜３容量係である。

培養期間は２〜９日間、最適期間は４〜７日間である。

この様にして得られた培養物から菌体を集めて、水又は
適当な緩衝液で洗浄し、その洗浄菌体を本発明の酵素反
応に使用する。

実験例 以下の実施？ｌＪにおいて、Ｌ−スレオニンのＷｌｉは
、ペーパークロマトグラフのｉｔｔ値、電気泳動法の易
動度、微生物定量法による生物活性値により確認した。

定量はロイコノストック・メセンテロイデス（Ｌｅｕｃ
ｏｎｏｓｔｏｃ　ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ　）　Ａ
ＴＣＣ８０４２を用いるマイクロバイオアッセイ法と重
速液体クロマトグラフィー（島津ＬＣ−５Ａ）とを併用
して行った。また、下記の実施例において憾と表したの
は重量係を意味する。

失ｔ・１例１ 培地（尿素０．４係、硫酸アンモニウム１．４係、ＫＨ
２ＰＯ４０，５％、Ｋ２ＨＰＯ４０，０５係、ＭｇＳＯ
４・７Ｈ２００，０５％、ＣｄＣｌ２−２　Ｈ，０２ｐ
ｐｍ　、　Ｆｅ５Ｑ、　−７Ｈ２Ｏ２Ｉ）　ｐｍＸＭｎ
Ｓ０４・４〜６　Ｈ２Ｏ２ｐｐｍＸＺＩＩＳＯ。

・７　Ｈ２Ｏ２ｐｐｍ、　Ｎａ（Ｊ　２１）　ｐｍ）　
　ビオチン２００μｇ／ｚｓチアミン・Ｈ（Ｊ１００μ
ｇ／１１　カザミノ酸０．１％、酵母エキス０．１％）
１００−を５００　ｒＪ容三角フラスコに分圧、滅菌（
滅菌後ｐＨ７，０）した後ブレビバクテリウム・フラバ
ム（Ｉｌｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　ｆｌａｖｕｍ
　）　ＭＪ　−２３３（倣工研凸を　第３０６８号）を
植菌し、無菌的にエタノールを２−加え、３０℃にて２
日間振盪培養を行った。

次に、本培養培地（硫酸アンモニウム２．３％、ＫＨ，
ＰＯ４０，０５係、Ｋ、ＨＰｏ、　０．０５％、Ｍｇ５
ｕ４・７　Ｈ２Ｏ０，０５％、Ｆｅ５０．−７Ｈ２０２
０１）　ｐＩｎ。

Ｍｎ５ｏｌ　＠　ｎ　Ｈ２Ｏ２０ｐ　ｐ　ｍ、　　ビオ
チン２００μｇ／ｌ、チアミン・Ｈ（Ｊ１００μｇ／ｉ
、カザミノ酸０．３係、酵母エキス０．３係）の１００
０＋ｊを２！容通気纜拌槽に仕込み、滅菌（１２０℃、
２０分間）後、エタノールの２０−と前記前培養物の２
０ｄｆｔ添力ｌして、回転数１１０００ｒｐ、通気ｉ１
ＶＶｍ、温度３３℃ｐＨ７，６にて４８時間培養を行っ
た。

尚、エタノールは、培養中培地の濃度が２容量係を越え
ないように、約１〜２時間ごと断続的に添刀口した。

培養終了後、培養物３００ゴから遠心分離）でて集菌後
、脱塩蒸留水にて２度洗浄した菌体を反応液　（（Ｎｌ
−１４Ｊ２ＳＯ，、２≦−／　ｌ　：　１（上−１，！
ＰＯ４、０−５？／１　：　ＫＨ２ＰＯ４，，０，５ｔ
／ｌ　：　Ｍｇ５Ｏ＜・７Ｈ２Ｑ、０．５？／ｌ　：　
Ｆｅ５０．−７　Ｈ２Ｏ，２０ｐ　ｐ　ｍ　：　Ｍｎ５
ｕ、　＊’　”’−６Ｈ２Ｏ％　　２０　ｐｐｍ：　Ｔ
ｈｉａｍｉｎｅ　−１（（Ｊ　　１００Ｐ１、ＤＬ−ホ
そセリン２　ｆ／ｌ　（１）Ｈ？、６　）　）の１００
０−に懸濁後、該懸濁液を２ｊ容通気攪拌槽に仕込み、
エタノール２０−を添加して、回転数３０Ｏｒｐｍ、通
気ｆｔｏ、Ｉ　Ｖ　Ｙｎｌ、８度３７℃、ｐ）１７．０
にて１０時間反応を行った。

反応終了後、遠心分離（４０００ｒｐｍ、１５分間、４
℃）にて除菌した上清液中のＬ−スレオニンを定量した
。また、反応終了後の培％１５００−を、強酸性陽イオ
ン交換樹脂（Ｈ型）のカラムに通してＬ−スレオニンを
吸着させ、水洗後、０．５　Ｎアンモニア水で溶出させ
たのち、Ｌ−スレオニン画分を濃縮し、冷エタノールで
Ｌ−スレオニンの結晶を析出させた。結果を後に掲げる
第１表に示した。

謁　１表 尚、反応液にビオチンを２００μｆ　／　ｌの濃度で添
加して反応に用い７’Ｃ以外は、上記と同様に実験を行
ったところ、Ｌ−スレオニンの生成量は、１　ｓ　ｏ　
ｑ／　ｌであった。

実施例２ 実施例１と同様の条件にてブレビバクテリウム・７２パ
ム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　ｆｌａｖｕｍ　
）　Ｍ　Ｊ　−２３３−ＡＢ−４１（微工研菌寄　第３
８１２号）を培養し、また実施例１と同様の条件にて反
応させた後上清液中のＬ−スレオニンを定着した。また
、実施例１と同様にしてＬ−スレオニンの結晶を析出さ
せた。結果は第２表に示した。

第２六 実施例３ 実施例１と同様の条件にてブレビバクテリウム・フラバ
ム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　ｆｌａｖｕｍ　
）　Ｍ　Ｊ　−２３３−ＡＢＴ−１１（微工研菌寄　第
８４２３号）を培養し、また実施例１と同様の条件にて
反応させた後上清液中のＬ−スレオニ／を定量した。

また、実施例１と同様にしてＬ−スレオニンの結晶を析
出させた。結果は第３表に示した。

第３表 実施例４ 実施ｉ＋１１と同様の条件にてブレビバクテリウム・フ
ラバム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　ｆｌａｖｕ
ｍ　）　Ｍ　Ｊ　−２３３−ＡＢＤ−２１（微工研Ｍを
　第８０５５号〕を培養し、また実施例１と同様の条件
にて反応させた後上清液中のＬ−スレオニンを定すした
。

また、実施例１と同様にしてＬ−スレオニンの結晶を析
出させた。結果は第４表に示した。

第４表 実施例５ 実施例１で反応時に添加するエタノールをグルコースに
変えた以外は実施例１と同様の操作を実施した。尚、グ
ルコース濃度は、２］ｉｔ％とした。

反応終了後の上清液中のＬ−スレオニン生成量および精
製量を第５表に示した。

第５表 尚、反応液にビオチンを２００μｆ／ｌの磯度で添加し
て反応に用い九以外は、上記と同様に実験を行ったとこ
ろ、Ｌ−スレオニンの生成量は１８５１１１ｆ／ｌであ
った。

参考例１　　（Ｄ−ホモセリンラセミ化酵素の胴震）下
記培地組成Ａの培地１００ｇｄ！−を５０〇−容三角フ
ラスコに分注して１２０℃、１５分間減菌処理したもの
に、シュードモナス、プチダ　ＩＦＯ１２９９６を一白
金耳墓接種し、３０℃にて２４時時間上う培養（前培養
とする）後、上記と同じ培地組成Ａの培地１１を５１容
三角フラスコに分注し、１２０℃で１５分間故滅菌理し
たものに上記前培養物の２０−を接種したものを更に３
０℃にて２４時時間上り培養した。

培養終了液ＩＩｔを遠心分離し菌体を集め、これを純水
に懸濁せしめて２０−とし、これに４．２２のアクリル
アミド、０．２８ｔのＮ、Ｎ’−メチレン−ビス−アク
リルアミド、４俤β−（ジメチルアミノクープロピオニ
トリル３−および２係過塩素酸カリウム２−を加えて、
室温にて１５分間静置して反応させて菌体を保有するｊ
＆曾物を得た。欠いでこの査付物である反応生成物を粉
砕し、純水で洗浄することによシ固定化菌体３０Ｆを得
、これをＤ−ホモセリンラセミ化酵素源とした。なお、
菌体の固定化操作はすべて無菌操作で実施した。

培地組成Ａ 肉エキス　　　　　１壬 ペプトン　　　　　１％ ＮａＣ／　　　　　　０．５％ ｐＨ７、２ 実施例６ 尿素０．４係、硫酸アンモニウム１．４％、ＫＨ２ＰＯ
４０，０５係、Ｋ２ＨＰＯ，ｏ、ｏ　５％、ＭｇＳＯ４
・７Ｈ２００，０５％、ＣａＣＪ　−２Ｆ１２０２１）
Ｉ）ｍ％　Ｆ’ｅＳ０４−７　ｆ（２０２１）ｐｍ、　
Ｍｎ５Ｏ，−４〜６　Ｈ２Ｏ２ｐｐｍＸＺｎ５ＩＪ、　
−７Ｈ，０２ｐｐｍ、Ｎａ（Ｊ　２　ｐｐｒｌ　　ピオ
チン２００μ２／１１チアミン・ＨＣＪ１００μ２／！
、カザミノ酸０．１係、酵母エキス０．１　ｑｂからな
る培地５０ｓｄ’ｔ−５００−容三角フラスコに分注し
、滅菌（滅菌後ｐＨ７，０）　した後、ブレビバクテリ
ウム・フラバムＭＪ−２３３（微工研＃ｉ寄第３０６８
号〕を植菌し、無菌的にエタノールを１．５−加え、３
０℃にて３日間振とり培養を行なった。培養終了後、４
０００ｒｐｍ、１５分間の遠心分離によシ菌体を回収し
、ホモセリンからのＬ−スレオニン生成の酵素源とした
。

反応液（ＤＬ−ホモセリン１”’？、ピリドキサールリ
ン酸５μｙリン酸緩衝液１００μｍｏｌｅｓ、エタノー
ル１０■、ｐＨ７，０を反応液１−中に含有）１００−
にこの菌体５２および参考例１で調整した固定化菌体２
０Ｆを加え、３７℃にて１６時間反応を行なったところ
し一スレオニンの総生成量は６０岬であった。

反応液から菌体その他不純物を除いたろ液を、強酸性陽
イオン又換樹脂（Ｈ型）のカラムに通して、Ｌ−スレオ
ニンを吸漸させ、水洗後、０．５Ｎアンモニア水で溶出
したのち、Ｌ−スレオニン画分を凝縮し、冷エタノール
でＬ−スレオニ／の結晶を析出させて３６■の粗結晶を
得た。なお、参考例１でｖｆ４表した固定化菌体を添加
しない場合には、Ｌ−スレオニンの総生成童は２８■で
あった。

実施例７ 実施例１の酵素反応に使用した反応液のＤＬ−ホモセリ
ンｆ、Ｄ−ホモセリン２　？／ｌに変えて使用し、この
反応系にさらに参考例１で調製した固定化菌体１０９を
添加した以外は、実施例１と同様に酵素反応を行った。

反応終了後、実施例１と同様に除菌して上清液中のＬ−
スレオニンを定量したところ、４２Ｉり／ｌであった。

尚、Ｄ−ホモセリンをラセミ化する能力を有する参考例
１で調製した固定化菌体を添加しないこと以外は、上記
と同様の酵素反応を行った場合には、上清液中のし一ス
レオニンは１η／ｌ以下であった。

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. （１）微生物菌体の存在下、Ｌ−又はＤＬ−ホモセリン
   を水溶液中で酵素反応させ、該溶液中にＬ−スレオニン
   を生成せしめ、これからＬ−スレオニンを採取する方法
   において、微生物菌体がビオチン要求性のブレビバクテ
   リウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属するも
   のであることを特徴とするＬ−スレオニンの製造法。
2. （２）水溶液が炭素源としてエタノール及び／又はグル
   コースを含む完全合成培地である特許請求の範囲第１項
   記載の製造法。
3. （３）ビオチン要求性のブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖ
   ｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する微生物菌体がエタノ
   ール資化性のものである特許請求の範囲第１項又は第２
   項記載の製造法。
4. （４）ビオチン要求性のブレビバクテリウム・フラバム
   （Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｆｌａｖｕｍ）ＭＪ
   −２３３、ブレビバクテリウム・フラバムＭＪ−２３３
   −ＡＢ−４１、ブレビバクテリウム・フラバムＭＪ−２
   ３３−ＡＢＴ−１１、ブレビバクテリウム、フラバムＭ
   Ｊ−２３３−ＡＢＤ−２１から選ばれるものである特許
   請求の範囲第１項又は第２項記載の製造法。
5. （５）Ｌ−又はＤＬ−ホモセリンがＤ−ホモセリンをラ
   セミ化する酵素の存在下にＤ−又はＤＬ−ホモセリンを
   ラセミ化したものである特許請求の範囲第１〜４項のい
   ずれかに記載の製造法。