JPS6290538A - 分析素子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、流体試料中の微量成分測定用分析素子に係り
、特に生物学的流体試料中の特定微量成分を分析するた
めの分析素子に間予る。

〔従来の技術〕

生物学的流体試料中に含まれる極微量含有される物質を
検出する方法として、各種分析法の開発がなされてきた
。その分析方法は、主として免疫反応をその原理とする
ものである。上記原理を用いる測定法として、種々のも
のが開発されてきたが、最も精度の高いものとして、免
疫測定法が知られている。

免疫測定法は、１９５８年、ベルソン（Ｂｅｒｓｏｎ）
とイアロウ（Ｙａｌｌｏｗ）が、放射性ヨードで標識し
た、ウシインシュリンと糖尿病患者血清中の抗インシュ
リン抗体を用いて、血清中のインシュリンを測定するこ
とに成功して以来、放射免疫測定法が広く用いられてい
る。

これ以後標識化合物として、放射性同位元素以外のもの
が種々開発がなされてきた。他の標識化合物としては例
えば、酵素、酵素基質、補酵素、酵素阻害物質、バクテ
リオファージ、循環反応体、金属及び有機金属の錯体、
有機補欠分子族、化学発光性反応体、及び蛍光性分子等
が挙げられる。

上記免疫測定法に関する技術上の重要な問題の１つとし
て、結合を起した物質（以下、Ｂと略記する）と起さな
かった物質（以下、７と略記する）の分離（以下Ｂ／Ｆ
分離と略記する）がある。　　　− 従来、免疫測定法における問題点を解決するために各種
の方法が開発されてきた（例えば、特開昭５３−３８６
１９号、同５５−７９０２４号、同５５−９０８５９号
、同５７−６７８６０号、同５７−２０ロ８６２号、同
５Ｂ−１８１６７号、同５９−７７５５６号及び同５９
−１７ｎ７６Ｂ号各公報参照〕。

しかし、これらの方法は、Ｂ／Ｆ分離が不完全である、
ノイズが多く信号の信頼度に問題がおる、測定可能な物
質が低分子物質に限られる等の欠点があった。

〔発明が解決しようとする問題点〕

一方、ウェット・ケミストリーにおいて、固定相を用い
た競合法による免疫測定法が開発されている（例えば特
開昭５８−２０９９９４号及び同５９−２０２ｎｂＡ号
各公報参照）。しかし、それらの測定法では、両固定相
を区別することなく全体の酵素活性を測定しているため
、バックグラウンドやノイズの問題から、感度、精度及
び再現性について満足な結果が得られない。

他方、ドライ・ケミストリーにおいて、第２抗体を用い
る免疫測定法が開発されている（特開昭５７−８２７６
６号及び同５７−８２７６７号各公報参照）。しかし、
これらは、操作が煩雑であること、再現性の良い展開を
行う技術が必要であること等、改良の余地がある。更に
１特開昭５９−５４１５５号公報記載の発明では、未結
合物収納シートを用いる方法が開示されている。しかし
、この方法でも、反応用シートと未結合物収納シートと
を密着させたままで測定を行おうとすると前述した問題
が生じ、また測定時に両シートを分離するのは煩雑であ
り、特に測定を自動化する際、障害となる。

本発明は、前述の従来技術の欠点を改良するためになさ
れたものであシ、その目的は、単一層の中でＢ／ＩＦ分
離を行うことにより、測定対象として広い範囲の分子量
（１００〜５０口万）の物質が適用可能であシ、簡便な
操作で感度、精度及び再現性に優れた、流体試料中の特
定成分を定量することができる分析素子を提供すること
にちる。

〔問題点分解法するための手段〕

本発明を概説すれば、本発明は分析素子に関する発明で
あって、流体試料中の特定成分Ａを、該特定成分Ａと特
異的に結合し得る物質Ｂと、該特定成分Ａ又はその類縁
体と標識とが結合した標識物Ｏとの競合反応によって測
定するための分析素子において、（ａ）該物質Ｂを固定
化した担体と、（１））該物質Ｂに結合していない該標
識物Ｃの標識部位に特異的に結合して、該標識に起因す
る信号を変調させる物質Ｄ（以下吸収物質りと略記する
）を固定化した担体とを含有する混合物を用いて形成し
た多孔質反応層を有することを特徴とする。

本発明に使用しうる流体試料としてはあらゆる形態の溶
液、コロイド溶液を挙げることができるが、好ましくは
生物由来の流体試料すなわち血液、血漿、血清、脳背髄
液、唾液、羊水、乳、尿、汗、肉汁等が挙げられ、特に
好ましいのは血液及び血清である。

本発明が測定しうる流体試料中の特定成分Ａとはその存
在又はその流体試料中での量が測定され、その成分に特
異的に結合する物質が得うる物質又は物質の群であり、
下記表１に挙げる物質又は物質の群を例に挙げることが
できる。

表　　１ （タン白質） アルブミン　　　　　　プレアルブミンα１−酸ブリコ
ブロチ　　α１−グリコプロティイン　　　　　　　　
ン α、−グリコプロティン　　α２−リボプロテインβ−
リボプロティン　　β−グリコプロティンＣ−反応性タ
ン白質　　フィブリン脱離生成物フィブリノーゲン　　
　免疫グロブリンＡ免疫グロブリンＤ　　　免疫グロブ
リンＥ免疫グロブリンＧ　　　免疫グロブリンＭハプト
グロビン　　　　ヘモグロビン セルロプラスミン　　　フリンエステラーゼへモペキシ
ン　　　　　１イコグロビンリユーマトイド因子　　チ
ロギシン結合グロブリン トランスフェリン　　　トランスコルチンプラスミノー
ゲン　　　特異的抗体 凝集因子　　　　　　　相補因子 （ペプチドホルモン） アドレノコルテコト　　メト−及びロイーエンロビン（
ＡＯＴＨ）　　　　　ケファリンチロキシン　　　　　
　トリイオドテロニン（り／白質ホルモン） コリオニツクゴナド　　フリオニツクテロトトロビン　
　　　　　　ロビン グルカゴン　　　　　　インシュリン 神経生長因子　　　　　バラテロイドホルモンプラセン
タルラクト　　ブロラクテン ゲンズ プロインシュリン　　　レッジシン （組織ホルモン） セクレチン　　　　　　ガストリン アンギオテンシン■　　人胎盤性ラクトゲン及び讐 （下垂体後葉からのペプチドホルモン）オキシトシン　
　　　　パップレッジ／放出因子（ＲＩＦ） ＯＲＩＦ、ＬＲＦ、ＴＲＦ、ンマトトロピンーＲＩＦ−
。

ＧＨＦ’、　Ｆ８Ｈ−Ｒ’Ｐ、　Ｒ工ＩＦ、　Ｍ工１（
ガン細胞マーカー） カルジノエンブリオ　　ガングリオサイズニック抗原 α−７エトプロテイ　　塩基性７エトプロテン　　　　
　　　　　　イン 膵ガン胎児抗原　　　　妊娠特異β、Ｎタン白ＴＰＡ　
　　　　　　　　フェリチン β２−ミクログロブリン　　骨髄腫タン白アストロプロ
テイン　　前立腺抗原 扁平上皮ガン関連抗原　　０Ａ１９−９（微生物表面マ
ーカー） バクテリア抗原　　　　菌類抗原 寄生虫抗原　　　　　　ウィルス抗原 （アルカロイド薬剤） ペンゾイルエクゴニン　　　コカイン コディン　　　　　　　　　デキストロメトロファンヘ
ロイン　　　　　　　リセルグ酸 モルヒネ　　　　　　　キニジン キニーネ 及びこれらの代謝産物 （アミノグルコシド薬剤） アミカシン　　　　　　ゲンタマイシンカナマイシン　
　　　　ネオマイシン トブラマイシン 及びこれらの代謝産物 （抗生薬剤） アクチノマイセチン　　カルマイシン クロラムフエニコール　　クロロマイセチンクロルテト
ラサイクリン　　エリトロマイシンオキシテトラサイク
リン　　ペニシリンポリミキシンＢ　　　　テラマイシ
ン テトラサイクリン　　　ストレプトマイシン及びこれら
の代謝産物 （バルビッール酸塩薬剤） ジフェニルヒダントイン　　エトスクシミトフエノバル
ビタール　　プリミトン セコバルビタール 及びこれらの代謝産物 （マリファナ誘導体） カナピノール　　　　　テトラヒドロカナピノール 及びこれらの代謝産物 （代謝産物） ガラクトース　　　　　フェニルピルビン酸ポルフィリ
ン　　　　　スペルミン （種々の薬剤） アミトリブチリン　　　コリン抑制薬剤抗ヒスタミン剤
　　　　アトロピン ブチロフェノン　　　　カフェイン カルバマゼピン　　　　クロロプロマシンエピネフリン
　　　　　グリセオフルビンイミブラミン　　　　　　
Ｌ−ドーパ リドカイン　　　　　　　メペリジン メプロパメート　　　　メタトン Ｎ−アセチルブロカ　　ナルセイン イナミド ノルトリブチリン　　　オキサゼバン パパベリン　　　　　　プロカイナミドプロパノロール
　　　　ブロスタグランジンテグレトール　　　　　テ
オフィリン セロトニン　　　　　　バルプロン酸 及びこれらの代謝産物 （ビタミン） ビオチン　　　　　　　葉酸 チアミン　　　　　　　　ビタミンＡ ビタミンＢ、　　　　　　　ビタミンＡビタミンＢ１．
　　　　　　　ビタミンＣビタミンＤ　　　　　　　ビ
タミンＥ ビタミンＫ （ステロイド） アドレノコルチコル　　アンドロゲンズステロイド パイル酸　　　　　　　ジゴキシン シコキシゲニン　　　　ジエチルスチルペストロール エストロゲン　　　　　ゲスドロケン （農　薬） ハロゲン化ビフェニル　　リン酸二ｘ　ｆ　、Ｑ／チオ
ホスフェート 及びこれらの代謝産物 本発明に使用しうる流体試料中の特定成分Ａと特異的に
結合する物質Ｂとしては、測定対象により抗体、抗原、
レクチン、プロティンＡ１特定酵素の阻害物質などが挙
げられるが、該特定成分と該結合物質の結合反応が抗原
−抗体反応である場合が特に好ましい。本発明で使用す
る抗体は、その由来を特に限定されるものではなく、哺
乳動物等に抗原を投与、免疫して得られる抗血清、腹水
液をそのままか、あるいは従来公知の方法である（右田
俊介編「免疫化学」中山書店第７４〜８８頁参照）、硫
酸ナトリウム沈殿法、硫酸アンモニウム沈殿法、セファ
デックスゲルによるゲルｆ過法、イオン交換セルロール
クロマトグラフィー法、電気泳動法等で精製して用いる
ことができる。

あるいは抗原で感作した哺乳動物等（例えばマウス）牌
臓細胞と骨髄腫細胞（ミエローマ）とから雑種細胞（ハ
イブリドーマ）を得てモノクローナル抗体をつくっても
良い。

また、これらの抗体は工ｇＧ１工ｇＭｓ工ｇＡｓ工ｇＤ
ｓ工ｇＥ各分画を用いることができ、あるいはこれらの
抗体を酵素処理してＦａｂ又はＦａｂ’といった活性抗
体フラグメントにして使用してもよい。

更にこれらの抗体は単一で使用しても、複数の抗体を組
合せ使用してもかまわない。

流体試料中の特定成分Ａと特異的に結合する物質Ｂとし
て抗体又は抗原を用いた場合、本発明分析素子の測定原
理は免疫測定法Ｋｌする。

本発明の分析素子は免疫測定法において特に好ましく使
用できるが、免疫測定法に限定されるものではなく、種
々の応用が可能であることは以上に述べてきた内容から
も明らかである。

本発明に適用しうる標識としては、例えば、酵素、酵素
基質、酵素及び酵素前駆体の活性を変化させる物質（酵
素阻害物質、補酵素、補欠分子族、酵素前駆体を活性化
する物質など）、酵素前駆体、アポ酵素、蛍光物質など
が挙げられ、その代表的な例としては下記表２に示した
物質を挙げることができる。更に好ましくは表２に開示
された酵素及び蛍光物質が用いられる。

（これらの標識に起因する信号については後述する。

表　　２ １、　酵素 １０　１．１．１．１、　アルコールデヒドロゲナーゼ
１．１．１．６、　　グリセロールデヒドロゲナーゼ］
１ｆｉＯ１，１，１，２７、ラクテートデヒドロゲナー
ゼ１．１．１．３７、　マレートデヒドロゲナーゼ１．
１．１．４９、　グルコース−６−ホスフェートデヒド
ロゲナーゼ １．１．３．４、　グルコースオキシダーゼ１．１．３
．９、　ガラクトースオキシダーゼ１．２．１．１２、
　グリセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲナ
ーゼ １．２．３．２、　キサンチンオキシダーゼ□　ルシフ
ェラーゼ １．４．３．２、　Ｌ−アミノ酸オキシダーゼ１．４．
３．５、Ｄ−アミノ酸オキシダーゼ１．６．４．５、　
　ジヒドロリボアミドレダクターゼ（ＮＡＤ”）（ジア
ホラーゼ） １．７．３．３、　尿酸オキシダーゼ １．１１．１．６、　　カタラーゼ １．１１．１．７、　　ペルオキシダーゼ２．７．１．
１、　　ヘキソキナーゼ ２．７．１．２、　　グルコキナーゼ ２．７．１．１５、　　リボキナーゼ １！ｉｏ　　２、ア、１．２Ｂ、トリオキナーゼ２．７
．１．４０、　　ピルベートキナーゼ２．７．５．１、
　　ホスホグルコムターゼ３．１．１．７、　　コリン
エステラーゼ３．１．１．８、フッイドコリンエステラ
ーゼ３．１．３．１、　　アルカリホスファターゼ３．
１．３．２、　酸ホスファターゼ ３．１．５．９、　　グルコース−６−ホスファターゼ
３．１．３．１１、　　フルクト−スジホスファターゼ
３．１．４．１、　　ホスホジェステラーゼ５．１％　
４．５、　　ホスホリパーゼＣ３，２％　１％　’、　
　α−アミラーゼ３．２１１．２、　　β−アミラーゼ ５．２．１．４、　　セルラーゼ ５．２．１．１７、　ムラミダーゼ ３．２．１．１８、　　ノイラミニダーゼ３．２．１．
２１、　β−グリコシダーゼ３．２．１．２３、　　β
−ガラクトシダーゼ３．２．１．３１、　β−グルクロ
ニダーゼ３．２．１．３５、　　ハイアルロニダーゼＫ
Ｏ３，２，２，５、ＤＰＮアーゼ ４．１．２．１３、　　アルドラーゼ ４．２．１．１、　　カルボニックアンヒドラーゼ５．
３．１．１、トリオースリン酸イソメラーゼ６．３．４
．１４、　　ビオチンカルボキシラーゼ６．４．１．１
、　　ピルビン酸カルボキシラーゼ６．４．１．２、　
　アセチル−０ｏＡカルボキシラーゼ６．４．１、　　
　　プロピオニル−０ｏＡカルボキシラーゼなど Ｚ基質 ｐ−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトシド０−ニトロ
フェニル−β−Ｄ−ガラク）シ）”４−メチルウンベリ
フェロン−β−Ｄ−ガラクトシドｐ−ニトロフェニルホ
スフェート コルチゾール−２１−ヘミスクシネート　ウンベリフェ
ロン　コンジュゲート ルミノール イソルミノール Ｎ−（ａ−アミノブチル）−Ｎ−エテル　インルミノー
ル　ヘミスクシンアミド Ｎ−（６−アミノヘキシル）−Ｎ−エテル　イソルミノ
ール Ｎ−（ａ−アミノブチル）−Ｎ−エチル　イソルミノー
ルルシゲニン アクリジニウム　フェール　カルボキシレートロフィン ピロガロール 没食子酸 シロキシン ビス（２ｅ’ｅ６−ドリクロロフエニル）オキサレート
及びその誘導体 ＆　酵素阻害物質 フィソスチグミン メチオニン　スルホキシミン ワイルドファイア（ｗｉｌｄｆｉｒｅ）毒素ブルーデキ
ストラン ０−ジアニシジン−セルロース ０−ジアニシジン−デキストラン ２−プロピニルアミン ２−クロロアリルアミン フェニルグリシン ｐ−ニトロフェニルグリシン アミノアセトニトリル ２−アミノ−５−ヒドロキシプロピル−１，３′−カル
ボキシ−５′−アミノ−１′−フロベニル−１エーテル
Ｌ−２−アミノ−４−メトキシ−トランス−３−ブチΔ
票エタノールアミン　０−サルフェート アルビシイン アザセリン ジアゾオキソノルロイシン ジアゾオキソノアノルバリン ｄ−７−アミンセファロスポリン酸 ミモシン ２−アミノ−４−ペンテン酸 ２−アミノ−４−クロロ−４−ペンテン酸３．３−ジク
ロロアラニン Ｓ、Ｓ、Ｓ−トリクロロアラニン Ｄ−シクロセリ／ ２−ヒドロキシル−３−ブチン酸 Ｎ、Ｎ−）　！Ｊメチルー２−プロピニルアミンβ−ア
ミノプロピオニトリル ２−ブロモエテルアミン ５−デシノイル−Ｎ−アセチルシステアミン２．３−デ
カジェノイル−Ｎ−アセチルシステアミンβ−クロロ−
Ｌ−アラニン Ｌ−セリン−０−サルフェート β−フルオロアラニン Ｌ−ビニルグリシン Ｄ−ビニルグリシン プロパルギルグリシン ガバクリン ５−ニトロ−Ｌ−ノルバリン Ｎ−ベンジル−Ｎ−メチル−２−プロピニルアミン３−
ジメチルアミノ−１−プロピン グリセロール ジインブロビルホスホロフルオライド フェニルメタンスルホニルフルオライトクラプラン酸 アロプリノール ４、　補酵素・補欠分子族 ＰＡＤ　（フラビン・アデニン・ジヌクレオチド）ＦＭ
Ｎ　（フラビン・モノヌクレオチド）ヘム Ｓ−アデノシルメチオニン ＴＨＦ　（テトラヒドロ葉酸） ＴＰＦ　　（チアミンニリン酸） Ｏｏム（補酸素Ａ） ＵＤＰ−Ｇ１０　　（ウリジンニリン酸グルコース）Ｐ
ＬＰ　（ピリドキサールリン酸） ムＴＰ　（アデノシン三リン酸） ビオチン Ｃａｌ　　にコテンアミドアデニンジヌクレオチド）ｏ
ｏＨにコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸）ア
デノシルコバラミン メチルコバラミ１ ０ｏＭ　（２，２’−ジテオジエタンスルホン酸）００
Ｑ　（ユビキノン） 翫　アポ酵素 アポグルタチオン還元酵素 アポチトクローム還元酵素 アポＮＡＤＩＨデヒドロゲナーゼ アポグルコース・オキシダーゼ アポリポアミド・デバイドロゲナーゼ アポピリドキシンｅホスフェート・オキシダーゼアポペ
ルオキシダーゼ アポチトクロームＣ アポキサンチンオキシダーゼ アポ醪母乳酸デヒドロゲナーゼ アポサルコシンオキシダーゼ アポｐ−ヒドロキシ安息香酸ヒドロキシラーゼアポアシ
ル−０ｏＡデヒドロゲナーゼ アポジヒドロリボ酸デヒドロゲナーゼ アポコハク酸デヒドロゲナーゼ アポホモシスティンメチルトランスフェラーゼアポグル
タミン酸ホルミルトランスフエラーゼアボトランスケト
ラーゼ アポコリンアセチルトランスフエラーゼアポグリコーゲ
ンシンターゼ アボアラニンアミノトランスフエラーゼアボヘキソキナ
ーゼ ＆　酵素前駆体な活性化させる物質 エンテロペプチダーゼ ストレプトキナーゼ プロティンキナーゼ 酵素前駆体の各柵プロテアーゼ ｌ　酵素前駆体 トリプシノーゲン キモトリプシノーゲン プロコリパーゼ プロホスホリパーゼ プロレニン プロカルボキンペプチダーゼＡ プロカルボキンペプチダーゼＢ キニノーゲン プロエラスターゼ アンギオテンシノーゲン プロインシュリン プロパラチロイドホルモン プログルカゴン プロコラーゲン（可溶性） 凝集因子ＸＩ、Ｘｎ、■ プロコラゲナーゼ プロココーナーゼ ブレカリクレイン ペプシノーゲン プラスミノーゲン フィブリノーゲン プロトロンビン プラスミノーゲンブロアクチベータ プロアクロジン ａ　蛍光物質 フルオレセイン　インチオシアナ−）　（ＦＩＴＯ）テ
トラメチルローダミン　インチオシアナ−）　（ＴＲＩ
ＴＯ）ローダミンＢ　インチオフアナ−）　（ＲＢ工Ｔ
Ｏ）リサミンローダミン−Ｂ２００スルホリル　クロラ
イド（ＲＢ２００ＥｉＯ） ウンベリフェロン ４−メチルウンベリフェロン　（４ＭＵ）フルオレセイ
ンチオフルバミル（ＩＦＴＯ）フルオレセインチオカル
バミル−ジフェニルグリシン（ＩＦＴＯ−ＤＰＧ） テトラメチルローダミン（ＴＭＲ） ５−’（（１，６−シクロロトリアジンー２−イル）−
アミノコフルオレセイン ジメチルアミノナフタレン−５−スルホニルクロライド
（ＤＮＥＩ−０／） フルオラム ２−メトキシ−２，４−ジフェニル−３（２Ｈ）−フラ
ノン（ＭＤＰＦ） ７−クロロ−４−二トロベンゾ−２−オキサ−１，３−
ジアゾール　（ＮＥＤ−Ｃ！／） １−アニリノ−８−ナフタレンスルホン酸（ＡＮＳ）Ｎ
−（３−ピレン）−マレイミド（ＮＰＭ）Ｎ−（７−シ
メチルアミノー４−メチル−２−オキシ−３−クロロメ
チル）−マレイミド（ＤＡＯＭ）Ｎ−（ｐ−２−ペンス
イミタソイルーフェニル）−マレイミド（Ｂ工ＰＭ） アントラセンイソチオシアナート フルオロアンチルマレイミド　（ＦＡＭ）希土類元素を
含む各種キレート 及びこれらの誘導体 特定成分又はその類縁体と標識とが結合した標識物０（
以下「標識物Ｃ」と略称する）とは、前述の特定成分Ａ
に特異的に結合し得る物質Ｂによって該特定成分と同様
若しくは準じて特異結合され得、かつ前述の標識をその
信号を発する能力を保持したｔま化学的手段等で直接又
は間接的に結合した物質の総称である。実際には該特定
成分若しくは該特定成分と共通の抗原決定基を有する物
質に、公知の方法で前述の標識を化学結合させることに
よシ得ることができ、更にくわしく言えば石川栄治、河
合忠、宮用潔編「酵素免疫測定法（第２版）」（医学書
院、１９７８年刊）や日本臨床病理学会綿「臨床病理」
臨時増刊特集第５３号「臨床検査のためのイムノアッセ
イ−技術と応用−」（臨床病理刊行会、１９８３年刊）
に記載された方法を参考にすることができる。これらの
方法のうちでもグルタルアルデヒド法、過ヨーソ酸法（
ナカネ法）、マレイミド法は特に好ましく用いることが
できる。− 本発明に使用する吸収物質Ｄ１すなわち、前述の標識物
Ｃの標識部位に特異的に結合して、該標識に起因する信
号を消滅するか減じる物質りは、使用する標ＲＫ対応し
て選ばれるべきものであり、下記のような物質を例に挙
げることができる。

１、　標識が「酵素」である場合 Ｏ標識に起因する信号 該酵素活性による基質の減少・生成物の増加、エネルギ
ーの放射及びそれらに起因する変化、 ０好ましい吸収物質り 該酵素に対する阻害剤（表２に挙げた阻害物質から該酵
素に対応するものを選んで使用できる。） 該酵素に対する抗体で、酵素に結合してその活性に影響
を与えるもの Ｚ　標識が「酵素基質」である場合 ０標識に起因する信号 該基質が分析素子中に添加された酵素と反一応すること
によシ生ずる生成物の増加、エネルギーの放射及びそれ
らに起因する変化、 ０好ましい吸収物質り 該基質に対する抗体で、基質に結合することによシ該酵
素反応を阻害するもの。

該基質を不可逆的阻害剤として取り込む酵素 該基質を基質とする酵素で、その反応により本来検出し
ようとしている信号を発しないもの。

五　標識が「補酵素」又は［補欠分子族］である場合 Ｏ標識に起因する信号 分析素子中に添加された該標識を必要とする酵素の反応
による基質の減少・生成物の増加、及びそれらに起因す
る変化 ０好ましい吸収物質り 該標識に対する抗体で、該標識に結合してその活性に影
響を与えるもの、 該標識を吸収又は消費するが、その活性によシ本来検出
しようとしている信号を発しないもの。

４、標識が「アポ酵素」である場合 ０標識に起因する信号 該標識はそのままでは信号を発しない。

後述の吸収物質と結合して酵素活性を発現し、その活性
による基質の減少・生成物の増加及びそれらに起因する
変化を測定できる。

０好ましい吸収物質り 該標識の酵素活性を発現させる補欠分子族。（表２に例
示した補欠分子族から該標識に対応するものを選んで使
用できる）翫　標識が［酵素前駆体を活性化させる物質
］である場合 ０標識に起因する信号 該標識が、分析素子中に添加された酵素前駆体を活性化
し、その活性による基質の減少・生成物の増加、及びそ
れらに起因する変化、 ０好ましい吸収物質り 該物質に対する抗体で、該物質に結合してその活性に影
響を与えるもの。

該物質が酵素である場合、その阻害剤 ＆　標識が「酵素前駆体」である場合 ０標識に起因する信号 該標識はそのままでは信号を発しない。

後述の吸収物質にいったん結合後分子の一部が切断され
酵素活性を発現し、その活性による基質の減少・生成物
の増加及びそれらに起因する変化を測定できる。

０好ましい吸収物質り 該標識の酵素活性を発現させる物質 ７、　標識が「蛍光物質」である場合 ０標識に起因する信号 該蛍光物質に励起光をあてた際に発する蛍光、 ０好ましい吸収物質り 該標識に対する抗体及びその紡導体で、該標識の蛍光波
長・強度を変化させるもの。

上記の各種吸収物質の具体例はいずれも当業者によく知
られており、あらためて開示するまでもないが本発明の
理解を助けるために、代表的な例を以下に示す。

本発明に使用しうる酵素と阻害剤の組合せとしては、ビ
オチン酵素（ビルビン酸カルボキシラーゼ、アセチル０
ｎ−Ａカルボキシラーゼ、プロピオニル−ＣｏＡカルボ
キシラーゼ、メチルマロニル−ＣｏＡカルボキシラーゼ
など）とアビジン、ペルオキシダーゼと０−シアニジン
−デキストラン、乳酸オキシダーゼと２−ヒドロキンル
ー３−ブテン酸、モノアミンオキシダーゼとＮ、Ｎ　−
トリメチル−２−プロピニルアミン又はβ−アミノプロ
ピオニトリルなどが挙げられ、更にジャーナル　オブ　
ジ　アメリカン　ケミカルソサイアテイ−（Ｊ、　Ａｍ
、　Ｃｈｅｍ、　５ｏｃ）第８ａ巻、第４５６頁（１９
５８年）；同第８２巻、第５９６頁（１９６０年）；ア
カウンツ　オプ　ケミカル　リサーチ（Ａａｃ、　Ｃｈ
ｅｍ、　Ｒｅ５）　　第９巻、５１３貞（１９７６年）
；サイエンス（ｓａｌｅｎｃｅ）第１８５巻５２０頁（
１９７１１年）；化学工業１９８５第２１頁（１９８５
年）などに記載された、若しくは引用された酵素・阻害
剤の組合せも好ましく用いることができる。

本発明の主要部分をなす多孔質反応層は前記（ａ）及び
（１））で表される担体を含有する混合物を用いて形成
（例えば塗布及び／又は製膜することＫよる）したもの
であシ、担体としては例えば粒子、繊維が挙げられる。

ここで用いられる粒子は粒径１〜１０００μｍが好まし
く材質としては、デキストラン、アガロース、ポリアミ
ド、ポリスチレン、ポリカーボネート、あるいは特開昭
５５−９０８５９号公報に開示された材質などの有機ポ
リマー粒子、あるいはガラス、二酸化ケイ素、ケイ砂な
どの無機粒子を好ましく用いることができるが、特開昭
５７−１０１７６０号及び同５７−１０１７６１号各公
報に開示された自己結合性粒子を用いることが特に好ま
しい。代表的な材質としては次の表３のようなものが例
示できる。

表　　３ 例示化合物 （１）ポリ（スチレン−コーグリシジルメタクリレ−ト
　）　　（９０／１０）　　。

（２）　　ポリ（スチレンーコーメテルアクリレートー
コーグリシジルメタクリレート）［８０／１５１５］。

（３）　　ポリ（ステレンーコーｎ−ブチルメタクリレ
ート−コーグリシジルメタクリレート）（７５／１５／
ｌｏ）。

（４）ホｌＪ（スチレンーコービニルベンジルクロライ
ドーコーグリシジルメタクリレート）（８０／１０／１
０）。

（５）ポリ（ステレンーコージビニルベンゼンーコーグ
リシジルアクリレート’）　（９０／２／８）。

（６）　　ポリ（ｐ−ビニルトルエン−コーグリシジル
メタクリレート）（９０／１０）。

（７）　　ポリ（メタクリレート−コーグリシジルメタ
クリレ−）　（８０／２０）。

（８ン　　ポリ（ステレンーコーＮ、Ｎ−ジメチルアミ
ンエチルメタクリレ−）　）［９５１５）。

（９）ポリ（ステンンーコーアジリジルエチルメタクリ
レート）　（９５１５）。

αＱ　ポリ（スチレンーコーメチルアクリシートーコー
アクロレイン’）　［９０１５１５）。

α力　ポリ（スチレンーコーアクリルアミド）（９５１
５）。

α望　ポリ（スチレンーコービニルチオール）（９ｓ／
ｓ　）”。

υ　ポリ（スデレンーコーメテロール化アクリルアミド
）　（９５１５）。

α憧　ポリ〔スチレン−ツーｔ−ブチルアクリレート−
グリシジルメタクリレート）（９５１５１５〕。

α→　ポリ（ステレンーコービニルイソシアネート　）
（９５１５）　。

０４　　ポリ（メチルアクリレートーコースチレンーコ
ーＮ−メチロールアクリルアミド）（５０７３５／１５
）。

０７）　　ポリ（スチレンーコーグリシジルメタクリレ
ートーコーＮ、Ｎ−ジメチルアミノエチルメタクリレー
ト）　（９０１５１５）。

０→　ポリ（スチレンーコーメタクリルｆｉｌ　−＝ｒ
　−アクリルアミド’）　（９５／２／３）。

（至）　ポリ（スチレンーコーＮ−メチロールアクリル
アミドーコーアクリル酸メトキシエチル）（９５１５１
５”ｌ。

（１）ホＩＪ　（ｐ　−ヒニルトルエンーコーＮ−メチ
ロールアクリルアミドーコーアクリル酸）〔９０／８／
２　）。

Ｑυ　ポリ（メチルメタクリレートーコーグリシジルメ
タクリレートーコーｔ−ブチルアクリレ−）　　）　　
（８０／１０／１０）　　。

（２）　ポリ（ステレンーコーｐ−ビニルベンジルクロ
ライドーコーアクリル酸−コーアクリル酸ウレイドエチ
ル）　（７５／１０１５／１０）。

（至）ポリ（スチレンーコーメタクロレインーコーα−
ヒドロキシエチルメタクリレート）（９ｏ１５１５　）
。

（ハ）　ポリ（ステレンーコーアクロレインーコーアセ
トアセトキシエチルメタクリレート）（８５１５／１０
　）。

（ハ）ポリ（スチレンーコーＮ、Ｎ−ジメテルアミンエ
チルアクリシートーコービニルスルホニルエチルメタク
リレー）　）　（９０１５１５）。

（ハ）ポリ（ｐ−ビニルトルエンーコーアミノスチレン
ーコービニルスルホニルエチルメタクリ　　し　−　　
）　　　）　　　（ａｓ／　　１　ｏ／ｓ）　　。

（財）ポリ（スチレンーコーＮ、Ｎ−ジメチルアミノエ
テルメタクリレート）　（９０／１０）。

（ハ）ポリ（スチレンーコーアクリル酸）（９７／３〕
。

（イ）ポリ（スチレンーコーアクリルアミド）（９７１
５）。

（１）ポリ（ｐ−ビニルトルエン−ニーｔ−ブチルアク
リレート）　（９５１５）。

０］）　　ポリ（メチルアクリレートーコーメタクリル
アミド）（９５１５）。

Ｇ１　　ポリ（スチレン−ツーＮ−メチロールアクリル
アミド）（９５１５）。

０埠　　ポリ（ｐ−ビニルベンジルクロ５イド−ツーＮ
−メチロールアクリルアミド）　Ｃ９６／４〕。

（ロ）ポリ（スチレンーコーイタコン酸）（９Ｂ／２）
。

（ト）　ポリ（ステレンーコーｔ−７’チル７り！ＪＬ
’−）　　）　　（９２／８）　　。

（ト）　ポリ（メテルアクリシートーコースチレンーコ
ーアクロレイン）　［０／６５１５）。

０′Ｉ）　　ポリ（メチルメタクリレートーコーステレ
ンーコ−２−ヒドロキシエチルメタクリレート　）　　
（２５／７０１５：Ｉ　。

□□□ホｌＪ（スチレンーコービニルスルホニルエチル
アクリレート）　（８０／２０）。

（ト）　ポリ（ステレ／−コーＮ、Ｎ−ジメチルアミノ
エチルアクリレ−）　）　（９０／１０）。

６１　　ボ！Ｊ（スチレンーメチルアクリレートーコー
アセトアセトキシエチルアクリレート）（９０１５１５
）。

６℃　ポリ（スチレン＝コーメタクリル酸）〔９５１５
〕。

各例示化合物の後の括弧内は重合反応に用いた単量体の
重量％を示す。

あるいは、これらの粒子数種を混合して用いることもで
きる。

また、本発明の多孔質反応層に用いる繊維としては、バ
ルブ、綿、麻、絹、羊毛、セルロースエステル、ビスコ
ースレーヨン、銅アンモニアレーヨン、ポリアミド（６
−ｆイロン、６．６−ナイロン、６．１０−ナイロンな
ど）、ポリエステル（ポリエチレンテレフタレートなど
）、ポリオレフィン（ポリプロピレン、ビニロンなト）
、ガラス繊維、石綿などの植物性・動物性・鉱物性・合
成・半合成・再生繊維を用いることができ、あるいはこ
れらを混合して用いても良い。

該特定成分と特異的に結合する物質の固定化は、種々の
公知の方法により、該物質を前述の粒子又は繊維の表面
に物理的に吸着させるか、化学反応により、直接あるい
は間接的に結合させることにより達成される。この際該
物質の該特定成分に対する特異的結合性が失われないよ
うに留意する必要があシ、例えば石川栄治、河合　忠、
宮井　潔編「酵素免疫測定法（第２版）」（医学書院、
１９７８年刊）や千畑一部土佐哲也、松尾雄志著［実験
と応用　アフイニテイクロマトグラフイー」（講談社、
１９７６年刊）に記載されている方法を、好ましい方法
の例として挙げることができる。

また、該特定成分Ａと特異的に結合する物質Ｂを固定化
した後に必要に応じて免疫反応における非特異的反応を
排除する目的で、測定すべき免疫反応に関与しないタン
白質を担持することが可能である。これらの代表的な例
としては哺乳動物の正常血清タン白質、アルブミン、ゼ
ラチン及びその分解物郷が挙げられる。

以上述べてきた方法で前記ｔａ＋及び（ｔｅｌを作成す
る。この際（ＩＬ）と由）は必らずしも同じ材質である
必要はなく、異なる材質の粒子、異なる材質の繊維、あ
るいは粒子と繊維を組合せて使用しても良い。ただし、
−）と０））を均一に混合するためＫは、平均粒径が著
しく異なる粒子を組合せるのは好ましくない。

粒子又は繊維（ａｌ、（ｂｌの混合比は各々に固定化１
　された各特異的結合物質の量と結合定数だ応じて定め
られ、必要に応じては更に１特異的結合物質を固定化し
ていない粒子又は繊維を調整のために加えても良い。

これらの混合物を塗布及び／又は製膜することにより、
流体試料と自由に接触し得る相互連絡空隙孔を有する多
孔性構造が存在する多孔質反応層を形成する。自己結合
性を有しない粒子は適当な接着剤を用いて粒子同志が点
接着する形で製膜することができ、例えば特開昭５５−
９０８５９号公報の方法を適用することができる。自己
結合性を有する有機ポリマー粒子は特開昭５７−１０１
７６０号又は同５７−１０１７６１芳容公報に記載の方
法によシ同様に製膜できる。

繊維又は繊維及び粒子の混合物については特開昭５７−
１２５８４７号、同５７−１９７４６６号公報に記載さ
れた繊維分散液を塗布することＫよシ多孔質反応層を形
成できる。また特願昭５９−２８５７１号明細書で行わ
れている方法のようにゼラチンやポリビニルピロリドン
のような水溶性パイ、ンダーを使用した繊維分散液を塗
布することも可能である。

本発明の分析素子の形態は分析を行ないうるものであれ
ばよく、特に制限されるものではないが、製造上及び操
作、測定上、フィルム状、ちるいはシート状であること
が好ましい。

本発明の分析素子の理解を助けるために、−例を挙げて
原理を説明する。

第１図は本発明による分析素子の最も単純な態様の断面
図の一例である。この場合は多孔質反応層１のみで分析
素子が構成されている。

第２図は第１図の拡大図である。第２図において符号２
は前記（ａｌの粒子、３は前記＋１））の粒子そして４
は調整のため添加された粒子である。

第２図は粒子２．３及び４が均一に混合され点接着する
ことにより多孔質反ろ層が構成されていることを示して
いる。

第３図は標識物Ｃの模式図であり、符号８は流体試料中
の特定成分又はその類縁体、９は標識、１０は標識物Ｃ
を意味する。

第４図は本発明を説明する模式図であシ、符号５は流体
試料中の特定成分に特異的に結合する物質Ｂ、６は吸収
物質り、７は流体試料中の特定成分Ａを意味する。

第１図〜第４図によシ本発明の詳細な説明する。

まず流体試料の一定量とはかりとシ、前述の標識物の一
定量と混合し、第１図の分析素子に滴下する。

流体試料中の特定成分Ａ及び添加されたｍ織物Ｏは、第
２図の粒子２の表面に固定化された［流体試料中の特定
成分に特異的に結合する物質」Ｄと競合的に反応する。

更に標識物０は粒子３の表面に固定化された吸収物質り
とも反応する。（第４図） 一定の反応時間の後の標識物Ｃは イ、流体試料中の特定成分ＡＫ特異的に結合する物質Ｂ
を固定化した粒子に該物質を介して吸着される 口、吸収物質りを固定化した粒子に該物質を介して吸着
される ハ、流体試料中に残存する の３通シの状態にある。このうちへの割合はなるべく少
なくなるように反応条件と多孔質反応層の構成を設定す
るのが好ましい。流体試料中の特定成分Ａと標識物Ｃの
競合反応の結果に、イの割合は支配され、該特定成分Ａ
の濃度が高いほどイの割合は低くなり、口の割合が高く
なる。口の状態の標識物はその標識部位と吸収物質りと
の結合によシ該標識に起因する信号が変調されるので、
流体試料中の特定成分Ａの濃度と、標識物全体の信号強
度の間には関数関係が成立する。そこであらかじめ特定
成分ムの濃度がわかっている流体試料（標準試料）を数
種類用いて検量線を作成しておけば、未知の流体試料中
の特定成分の濃度を知ることができるようになる。

信号の測定方法は標識の種類によシ異なる。

例えば標識が蛍光物質であれば、分析素子に励起光を当
て、蛍光強度を測定すれば良い。標識が酵素であれば適
当な基質、必要ならば酵素や発色系を含む溶液を添加し
一定時間インキユベートシた後に、該発色系に適合した
波長の光の反射濃度（基質の種類によっては蛍光強度、
発光強度）を測定することＫよシ信号強度を測定できる
。このような目的で用いられる基質・発色系は標識酵素
の種類に従って公知の方法から適当なものを選択できる
。

一例を挙げれば、標識がペルオキシダーゼである場合は
、過酸化水素をα００１〜１Ｑ、０％含む緩衝液（ｐＨ
４，０〜９．０　）　Ｉｃ表４に例示した化合物のうち
の１種若しくは数種を選んで溶解したものを用いること
ができる。

表　　４ （１）Ｏ−シアニジン （２）０−トリジン又はその酸塩 （３）　　ｏ−フェニレンジアミン又はその酸塩（４）
　　グアヤク （５）　　アドレナリン （６）　　フェノールフタレイン （７）　　フェロシアン化物 （８）４−アミノアンチピリン、及びその誘導体又はそ
れらの酸塩と、フェノール又はナフトール又はそれらの
誘導体との組合わせ （９）アニリン及びその誘導体 α１０−トルイジン、ｐ−トルイジン等のモノアミン類 α］）０−フェニレンジアミン、Ｎ、Ｎ’−ジメチル−
ｐ−フェニレンジアミン、Ｎ、Ｎ’−ジエチルフェニレ
ンジアミン、ベンジジン、ジアニシジン等のジアミン類 αつ　フェノール、チモール、０−１ｍ−１及びｐ−ク
レゾール、α−ナフトール、β−ナフトール等のフェノ
ール類 （６）　カテコール、グアヤコール、オルシノール、ピ
ロガロール、ｐ、ｐ−ジヒドロキシジフェニル、フロロ
グルシノールのようなポリフェノール類 α→　サリチル酸、ピロカテキン酸、没食子酸のような
芳香族の酸 （ト）　ロイコマラカイトグリーン、ロイコフェノール
フタレインのようなロイコ染料 α→　２．／１−ジクロロフェノールインドフェノール
のような着色染料 αη　エピネフリン、フラボン類、チロシン、ジヒドロ
キシフェニルアラニン、トリプトファンのような種々の
生化学物質 α→　２，２′−アジノジ（３−エチル−６−スルホベ
ンゾテアゾリン）又はその塩、及び３．３’−ジアミノ
ベンジジンのような特殊染料 （至）その他、グアヤゴム、グアヤコン酸、ヨウ化カリ
ウム、ヨウ化ナトリウム及び他の水溶性ヨウ化物、並び
にビリルビンのような物質標識が酵素基質、補酵素、ア
ポ酵素、酵素前駆体を活性化させる物質、酵素前駆体の
場合も同様であり、要は信号測定に必要とされる物質の
溶液を添加、インキュベートし、反射濃度、蛍光強度、
発光強度などを測定すれば良い。

本発明で用いられる前記（ａ）と（１））で示される担
体の粒子又は繊維はミクロ的に見るとわずかな接着部分
を除いて、その表面は離れた状態で反応層を構成してお
り、このことが流体試料を収容する空間を確保すると同
時に、（（転）の粒子又は繊維の表面に固定化された物
質Ｂに吸着された標識物Ｏの標識部位が伽）の粒子又は
繊維の表面に固定化された物質の影響を受けてその信号
が変調されることを防止しているのである。この結果、
本発明の特徴である単一層内のＢ／Ｆ分離が可能となっ
た。

更に、本発明の別な効果として、ｋ）、＋１））の粒子
又は繊維及び、必要に応じて調整のために添加する粒子
又Ｖｉ繊維を混合する際、その比率は自由に設定できる
ので、（ａ）及び（１＋）に固定化した物質の量や標識
物Ｏへの結合能力が製造ロフトととに多少変動しても、
その混合比を調整することによシ常に一定の性能を持つ
分析素子を供給することが可能である。従来の粒子又は
繊維集合体による多孔層を利用した分析素子及びその類
似品は粒子又は繊維の集合体を単に流体試料を収納する
容器として扱っており、このような集合体を構成する粒
子、繊維に異なる機能を持たせたもの分混合し製膜する
ことで、単一層内でのＢ／Ｆ分離を行う試みは全く新し
い試みであり、実際に上述した効果が得られたことけ発
明者にとっても全く予想がつかない驚くべき結果であっ
た。

本発明の分析素子は前述の多孔質反応層が最低必要構成
要素であるが、発明の効果をより一層発揮するために種
々の補助層を設けることができる。第５図〜第１０図に
本発明の分析素子の１実施の態様を示す断面概略図を示
す。

第５図に示した本発明の分析素子は光透過性支持体１１
の上に多孔質反応層１が積層されており、支持体の存在
により素子の取扱い性が向上している。このような目的
で使用し得る支持体は、例えば酢酸セルロース、ポリエ
チレンテレフタレート、ポリカーボネート及びポリビニ
ル化合物（例えばボリスチレ／）のような高分子化合物
、あるいはガラスのような透明無機化合物が挙げられる
。該多孔性反応層はこのような支持体の上で直接塗布及
び／又は製膜するか、あるいはいったん多孔質反応層を
別に形成した後に前述の支持体に貼りつけても良い。第
５図に示した態様の場合、流体試料は反応層側から滴下
する必要があるが、信号の測定は両側から行なうことが
可能である。

第６図に示した本発明の別の態様では、光反射性支持体
１２の上に反応層が設けられている。

この態様では、試料滴下、信号測定とも多孔性反応層側
から行ない、信号を反射濃度で測定する際に光反射性支
持体がそれを容易にしている。

（信号を蛍光強度で測定する際は黒色の吸光性支持体を
同じように用いることで同様な効果を得ることができる
）。

このような目的で使用し得る支持体の材質としては前述
の支持体の材質に加えてセラミックス、金属、あるいは
樹脂被覆等で防水処理を施した紙等が挙げられ、これら
の材質に必要ならばＴｉｅ、、ＢａＥｉ０４　、マイカ
などの白色顔料等を塗布するか含有させることにより目
的を果すことができる。

第７図の態様も同様な目的によるもので、光透過性支持
体１１の上に多孔質反応層１、光反射層１３が順に積層
されている。この態様では試料は光反射層側から滴下さ
れ、信号測定は光透過性支持体側から行われる。光反射
層は公知の分析素子及びその類似品に用いられていたも
のをいずれも使用できるが、好ましくは多孔質反応層に
用いられるのと同様な粒子及び繊維に前述の白色顔料等
を含有させたものを塗布又は製膜するか貼りつけること
ができる。更ＫｔＦｆ″ｉしくは内部に白色顔料を含有
する粒子の表面に多孔質反応層に用いる時と同様に流体
試料中の特定成分に特異的に結合する物質Ｂや吸収物質
りを不動化し、下層の多孔質反応層と同様の機能？持た
せた光反射層を設けることができる。

このような特殊な光反射層を用いると、光反射層内〈多
くの未反応標識物が残ることを防止できる。

第８図の態様では多孔質反応層１の上に標識物含有層１
４が設けられている。標識物含有層は多孔性媒体に面積
濃度が一定となるように標識物を含有させた層であり、
流体試料の一定量を滴下すると一定量の標識物が溶出さ
れ、多孔質反応層に試料と共に拡散するものである。素
材としては多孔質反応層と同様のものを塗布、製膜、貼
付しても良く、あるいは吸水性の洋紙、和紙、Ｐ紙、プ
ラッシュポリマー、あるいはガラス繊維・鉱物性繊維（
石綿など）、植物性繊維（木綿、麻、バルブなど）、動
物性繊維（羊毛、絹など）、合成繊維（各種ナイロン、
ビニロン、ポリエチレンテレフタレート、ポリプロヒレ
ンナト）、再生繊維（レーヨン、セルロースＩステルな
ど）などを単独あるいは混合して製造した織物、不織布
、合成紙などで作成した標識物含有層を貼付ても良い。

また必要にらじてこの標識物含有層に前述の光反射層の
効果を合せ持たせることができる。第８図の態様の場合
標識が蛍光物質であれば、流体試料のみを滴下し、イン
キュベートすれば直ちに測定が可能である。標識が他の
物質の時は、流体試料を滴下後一定時間インキュベート
した後、必要な基質、発色試薬等を含む溶液を滴下する
ことにより測定できる。

第９図も標識物含有層を有する別な態様である。この場
合は下から順に光透過性支持体１１、標識物含有層１４
、タイミング層１５、多孔質反応層１が積層されている
。

タイミング層は写真化学の分野で広く知られている技術
であり、例えば硬膜度を適当に調節したゼラチン層など
が用いられる。本態様においては流体試料滴下後、試料
中の特定成分が多孔質反応層中の対応する粒子の表面に
ある程度吸着された後に標識物が多孔質反応層に放出さ
れる。このような方法はディど一ドアディジョンとして
広く知られ、微量の成分を検出する際に有効である。

本態様のように標識物含有層が最上層以外の部分にある
場合、標識物含有層に用いる素材としては前述のものの
他にゼラチン、ゼラチン誘導体、多糖類（アガロースな
ど）、カルポギシメチルセルロース、ヒドロキシエチル
セルロースなどの親水性高分子物質、あるいはビニルピ
ロリドン、アクリル酸誘導体、メタクリル酸誘導体、ビ
ニルアルコール、スルホニルスチレンなどｔモノマーと
したホモポリマーあるいはコポリマーといった連続バイ
ンダーを塗布して用いる方法がある。更に別な態様とし
てはこうした親水性高分子物質やポリマーの膜厚及び組
成を調節することにより標識物含有層からの標識物溶出
速度を制御し、タイミング層の機能をも兼ねさせること
が可能である。

第１０図に示した態様は標識が蛍光物質以外の際（信号
測定にあたり何らかの形で酵素反応を利用する標識の場
合）特例有用なものである。

試薬層１６は標識物含有層１４と同様の素材で、標識信
号測定の際に必要な物質を面積濃度一定に含有させたも
のである。この試薬層と標識物含有層を設けることによ
り、蛍光物質以外の標識を用いる場合でも、流体試料の
みを滴下しインキュベートするだけで測定が可能となる
。

この場合、多孔質反応層における反応が充分に進行した
後に試薬層の内容物が溶出されるのが好ましく、そのた
めには前述のタイミング層を試薬層の上に設けるか、あ
るいは試薬層の組成を調整してタイミング層の効果を持
たせることが必要である。また、同様の理由から試薬層
は分析素子の最下層（支持体がある場合はその上）Ｋ設
けることが好ましい。

なお、酵素反応系にペルオキシダーゼを用いる場合は、
基質として過酸化水素と適当な還元物質が必要である。

このうち前者は揮発性であり、そのまま素子の中に含有
させるのは困難であるので、クメン・Ｈ，Ｏ，などの形
で含有させるか、流体試料が滴下された時点で過酸化水
素を発生させるのが好ましい。後者は、例えばグルコー
スオキシダーゼ、尿酸オキシダーゼ、アミンオキシダー
ゼに代表される酸化酵素（反応生放物として過酸化水素
を生じるタイプのもの）と、その酵素の基質を乾燥状態
で試薬層に含有させるか、あるいは該酸化酵素及び基質
のうち片方を試薬層に片方をそれと異なる層に含有させ
るととくよシ達成できる。

第１１図及び第１２図は、本発明の好ましい態様の１例
について断面図、斜視図を示したものである。分析素子
の取扱いが容易になるよう、全体がプラスチック製のマ
クント１７で覆われており、マウント上部試料注入孔、
下部に信号△ 測定孔が開いている。

本発明の分析素子は更ＫＸ流体試料を素子に適用した際
にその展開を補助する展開層、流体試料が血液（全血）
の際に必要となることがある血球分離層、必要に応じて
設ける接着層、保護層といった補助層を設けることがで
きる。これらの補助層及び前述の発色試薬層、標識物含
有層、タイミング層は独立して設けても良く、あるいは
複数の機能を併わせもった層として設けても良い。これ
らの層はその機能に応じて設けられるべき位置が容易に
決定できる。

〔実施例〕

以下、本発明を実施例によって更に具体的に説明するが
、本発明はこれら実施例に限定されない。

実施例１ （１）ウサギ抗Ｆ工Ｔｏ抗体の作製 牛血清アルブミン（ＢＡＡ）　５０　ｍ９を５ｄのα１
モル炭酸ナトリウム溶１（ｐＨ？ｏ）に溶解し、２１１
９のフルオレセインイソチオシアナート（米国リサーチ
オルガニツクス社製）を５００ξｔのジメチルホルムア
ミドに溶解して加え、遮光室温下３時間かくはんし、セ
ファデックスＧ−２５カラム（ファルマシア社製）で精
製、凍結乾燥した。

これを７０インドの完全アジュバント（初回のみ）及び
不完全アジュバントと混合し、ウサギに免疫した。

得られた抗血清よシ硫酸アンモニウム法でグロブリン分
画を分離し、アフィニティークロマトグラフィーでＢＥ
ＩＡに吸着する抗体を除いた後に透析、凍結乾燥した。

（２）多孔質反応層の作製 （至）　ヤギ抗ヒトエｇＧ　（米国カッベル社製）を０
．０５ＭｐＨ９，６炭酸・重炭酸緩衝液に１０μｆ／−
の濃度で溶解し、平均粒径２１μ慣のポリ（スチレンー
コーｎ−プチルメｐｙｖｖ−トーコーグリジルアクリレ
ート）（７５／１５△ ／１０〕の高分子重合体粒子単位を加えて４℃で一晩放
置した。粒子を生理食塩水で洗浄後ＢＳＡを２００μｍ
／−含む同様の緩衝液に入れて５日間４℃で放置し、生
理食塩水で洗浄した。

げ）　抗とトエｇＧの代シに（１）で作成した抗ＦＩＴ
Ｃ抗体を用いて、（７）と同様の操作を行った。

（支）　（７）に準じた方法でＢＢＡのみを物理吸着さ
せた粒子を作成した。

以上（７）〜（ヴで作成した粒子ｉ４　：　１　：　５
の割合で均一に混合シ２．５重量％のトライトンｘ−ｔ
ｏｏ（ノニオン界面活性剤、ロームエンドハース社製）
と共に乾燥膜厚約３５０ｐ。

になるようにポリエチレンテレフタレート支持体上に塗
布し、４２℃、３０分間乾燥を行い、成膜後、支持体か
らはぐ離した。

（３）標識物含有層の作成 下引済ポリエチレンテレフタレートフィルム上に次の組
成の試薬層と塗布乾燥により作成した。

（４）分析素子の作成 （３）で作製した標識物含有層の上に（２）で作成した
多孔質反応層を接着し、２×２ｃｒｎの太きさく切断し
分析素子とした。

（５）　　ヒト１ｇＧの測定 ヒト１ｇＧ　（米国カッベル社製’）を６ＡＯμ２／−
から０μ？／−の各種濃度で含有するＣＬＯＩＭリン酸
ナトリウム緩Ｉ１５級（ｐｉ（７，７＋　）を作成する
。

各濃度のヒト１ｇｏｇ１ｏμｌを（４）で作成した分析
素子各１枚の上に滴下し、３７℃で２０分保温した後に
試料滴下側から蛍光測定（励起波長ｄ９０ｎｍ、蛍光波
長５２０ｎｍ）１．たところ表５のような結果を得た。

表　　５ 実施例２ （１）試薬層の作成 下引済ポリエチレンテレフタレートのフィルム上に、下
記のような組成の発色試薬層を塗布、乾燥により作成し
た。

（２）標識物含有層の作成 （１）で作成した試薬層の上に次の標識物含有層を塗布
、乾燥により作成した。

（３）　　セルロース繊維への反応性基の導入粉末ｆ紙
Ｄ（東洋ｒ紙社製）　５５　Ｆ　ヲ１０００−の２．５
Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ１２，１）に浸漬し、５
〜１０℃においてスターラーでかくはんしながら５００
　ｍｌのブロモシアン溶１ｆｆｌ（ｎ、　ｏ　５ｙ／ｍ
ｔ　）を徐々に加えた、２０分間反応させた後に濾過し
、氷冷した蒸留水、［ｌＬ１Ｍ炭酸水素すｌ−ＩＪウム
で順に洗浄した。

（４）　　多孔質反応層の作成 （２）　ヤギ抗ヒトエｇＧ　（米国カッベル社製）■ｇ
Ｇ留分１．０■（抗体タン出量換算）を４０−の０．１
Ｍ　ＮａＨＯＯ，−〇、　５　Ｍ　Ｎａｐ！／溶液に溶
解し、（３）で作成した活性化ｆ紙の一部を入れ、室温
で３時間振とうした。濾過後、ＩＭ）リス−塩酸緩衝液
（ｐＨａＯ）と室温で２時間振とうする。水、０．５Ｍ
酢酸緩衝ｔｉ　（ｐＨ４，０）　　、　　（Ｌ　　５　
　Ｍ　　ＮａＨＯＯ，、５０ｍＭ　　リ　ン酸緩衝化生
理食塩水（ｐＥＩ　７．２　）で順次洗浄する。これを
２％Ｂ３Ａ含有５０ｍＭ）リス・塩酸緩衝液（ｐＨａＯ
）に１晩浸漬し、蒸留水で洗浄し、ＢＯＡとショ糖の水
溶液を少量含有させてから凍結乾燥した。

（イ）（３）で作成した活性化Ｐ紙の一部と０−ジアニ
シジンをｐＨ９、暗所室温で１晩反応させた。濾過後Ｉ
Ｍ　　１−アミノ−２−ブロノくノールで処理し、水洗
後（７）と同様ＢＯＡ処理し、乾燥した。

（Ｉ７１　　グルコースオキシダーゼと（３）で作成し
た活性化１紙の一部を用いて（７）と同様の操作を行っ
た。

以上、３種類の処理済繊維を用いて次のような組成の繊
維分散液を調整し、（２）で作成し物 た標識含有層の上に塗布乾燥した。

△ 乾燥後、２×２ｃｒｎの大きさに切断し分析素子とした
。

（５）　　ヒト１ｇＧの測定 ヒトＴｇＧ　（米国カッベル社製）を６４０μｔ／−か
らθμ２／−の各種濃度で含有するαＱＩＭリン酸ナト
ジナトリウム緩衝Ｈ７，６）を作成する。

各濃度のヒトＴｇＧ９１０μｌを（４）で作成した分析
素子各１枚の上に滴下し、３７℃で２０分保温した後に
支持体側から４９２ｎｍの反射濃度を測定した。その結
果を表６に示す。

表　　６ 〔発明の効果〕 以上説明したように、本発明の分析素子によれば、単一
層内でＢ／Ｆ分離を行い、簡便な操作により感度、精度
及び再現性良く、流体試料中の広い範囲の分子量の特定
成分を定量分析することができるという顕著な効果を奏
することができる。

【図面の簡単な説明】

第１図及び第５図〜第１０図は本発明の分析素子の１実
施の態様を示す断面概略図、第２図は第１図の拡大図、
第３図は標識物の模式図、第４図は本発明を説明する模
式図、第１１図は本発明の好ましい態様の１例の断面図
そして第１２図は第１１図の斜視図である。 １：多孔質反応層　２：担体（ａ１３：担体Φ）４：粒
子　５：物質Ｂ　６：吸収物質 ７：特定成分Ａ　８：標識　１０：標識物Ｃ１１：光透
過性支持体　１２：光反射性支持体１３：光反射層　１
４：標識物Ｏ含有層１５：タイミング層　１６：試薬層
　１７：マウント第２図 第３図 第　ｔＩ　　図 第５図　　第６図　　第７図 第８図　　第９図　　第ｎ図 第１／図　　　　第″図 手続補正書（自発） 昭和６１年５月２日 特許庁長官　　宇　賀　道　部　殿 １、事件の表示　　昭和６０年特許願第２２９７９９号
２発明の名称　　分析素子 五補正をする者 事件との関係　　特許出願人 住　所　　　東京都新宿区西新宿１丁目２６番２号名　
称　　（１２７）小西六写真工業株式会社代表者　井　
手　恵　生 ５、補正命令の日付　　　自発補正 ＆補正の対象 （１）　　明細書の発明の詳細な説明の欄　７・：ｗ、
　；゛ ｌ補正の内容 明細書の発明の詳細な説明の欄を下記のとおり補正する
。 （１）　　明細書第２０頁下から２行の「アロプリノー
ル」の次に改行して、以下の記載を加入する。 「ブチルチン ヨード酢酸 ヨードアセトアミド ペスタチン ピリドキサールリン酸 ヒドラジンとその誘導体 ニトロフランとその誘導体 ニトロベンゼンとその誘導体 プリン誘導体 キレート化剤 重金属イオン 水銀化合物　　　　　　　等」 （２）同第２６頁１行の「特定・・・した」を下記のと
お、り補正する。 「特定成分Ａ又はその類縁体（以下、「物質Ｅ」と総称
する）と標識とが結合した」（３）同第２６頁下から４
行の「・・・できる。」の次に以下の記載を加入する。 ［以下に具体例を挙げて説明するが、これは本発明を限
定するものではない。 （１）該物質Ｅ及び該酵素を、下記のような架橋剤と反
応させる方法 ■　　　　　２．　４．　　６　　−　　　ト　　リ　
　り　　ロ　　ロ　　−　　１．　　３．　　５　　−
　　　）　　　リ　　アジン ■　４．４′−ジフルオロ−ｓ、ｙ−ジニトロジフェニ
ルスルホン ■　トルエン−２，４−ジインシアネート■　Ｎ、Ｎ’
−ジシクロへキシルカルボジイミド ■　１−（３−ジメチルアミノプロピル）−５−エチル
カルボジイミド ■　ビスジアゾ−〇−ジアニシジン ■　グルタルアルデヒド　　　　　など（２）該物質Ｅ
と該酵素のうち少なくともどちらかが糖鎖を有している
時、該糖鎖を過ヨウ素酸で処理し、生じたアルデヒド基
を結合すべき相手物質のアミノ基と反応させる方法。（
必要に応じて、過ヨウ素酸処理の際の不要な結合の形成
を阻止するために１−フルオロ−ｚ、ａ−ジニトロベン
ゼン等で該物質Ｅ若しくは該酵素を前処理しておくか過
ヨウ素酸処理反応のｐＨを４〜５に制御する、あるいは
該物質Ｅと該酵素間で形成されたシップ塩基による結合
を水素化ホウ素ナトリウムやエタノールアミン等で処理
し安定化する、といった処置をとってもよい） （３）該物質Ｅ及び該酵素がチオール基を有しているか
、あるいは還元等によりチオール基を生ずる、あるいは
適当な化合物で処理することによりチオール基を導入で
きる場合、マレイミド試薬として知られている種々の架
橋剤と該チオール基と反応させる方法。 〔ここでチオール基を導入する化合物としては次のよう
な例が挙げられる ■　無水Ｓ−アセチルメルカプトスクシン酸 ■　メチル−５−メルカプトプロピオンイミデート ■　メチル−４−メルカプトブチルイミデート ■　２−イミノチオラン ■　ｓ　−（２’−ジチオピリジル）プロピオン酸Ｎ−
ヒドロキシスクシンイミド０エステル ■　メチルｓ　−（４１−ジチオジピリジン）プロピオ
ンイミデート　　など また、前述のマレイミド試薬としては次のような例が挙
げられる。 ■　Ｎ、Ｎ／　−０−フエニレンジマレイミ）”■　Ｎ
、Ｎ’−Ｔ）−フェニレンジマレイミド９■　Ｎ、Ｎ’
−ｍ−フェニレンジマレイミド。 ■　Ｎ、Ｎ’−オキシジメチレンシマレイミド９■　Ｎ
−スクシンイミジル−Ｎ−マレイミドアセテート ■　Ｎ−スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミド）ブ
チレート ■　Ｎ−スクシンイミジル−５−（Ｎ−マレイミド）ヘ
プタノエート ■　Ｎ−スクシンイミジル−６−（Ｎ−マレイミド）ヘ
キサノエート ■　Ｎ−スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチ
ル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート ［相］　Ｎ−スクシンイミジル−ｍ−（Ｎ−マレイミド
）ベンゾエート ＯＮ−スクシンイミジル−ｐ−（Ｎ−マレイミドフェニ
ル）−４−ブチレート ＯＮ−スルホスクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミド
メチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート ＯＮ−スルホスクシンイミジル−ｍ−（Ｎ−マレイミド
）ベンゾエート ＯＮ−スルホスクシンイミジル−ｐ−（Ｎ−マレイミド
フェニル）−４−７’チレート ＠Ｎ−スクシンイミジルー４−（Ｎ−マレイミドメチル
）ベンゼン−１−カルボヤシレート　　　　　　　　　
　など〕（４）該物質Ｅ又は該酵素にピリジル・ジスル
フィド基を導入し、結合すべき相手化合物に導入した、
あるいは元々存在するチオール基と反応させる方法。 〔ピリジル・ジスルフィド基の導入は３−（２′−ジチ
オピリジル）プロピオン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミ
ドエステルやメチル−ｓ　−（４’−ジチオピリジル）
プロピオンイミデートなどで処理すれば良い。またチオ
ール基の導入は（！１）項で述べた方法などが利用でき
る〕 （５）該物質Ｅ及び該酵素がチオール基を有しているか
、あるいは還元等によりチオール基を生ずる、ちるいは
適当な化合物で処理することによりチオール基を導入で
きる場合、その片方の物質のチオール基をピリジル・ジ
スルフィド基に変換し、結合すべき相手物質のチオール
基と反応させる方法。 〔チオール基のピリジル−ジスルフィド基への変換は、
４，４′−ジチオジピリジンなどにより行うことができ
る〕 （６）該物質Ｅ及び該酵素に、存在する又は導入した、
アミノ基又はチオール基と、ｐ−ベンゾキノリンを反応
させる方法。 （７）　　モノヨード酢酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミ
ドエステルを、該物質Ｅ及び該酵素に、存在する又は導
入した、チオール基に反応させる方法。 （８）該物質Ｅに対する抗体、該酵素に対する抗体、及
び前２者の抗体に共通に特異結合する抗体を反応させる
方法。 （９）該物質Ｅ・該酵素の片方をアビジンと残りをビオ
チンと結合しておき、両者をビオチン・アビジン結合に
より結合させる方法。」（４）同第５２頁下から９〜４
行の「が好ま−ローが、特」を以下の記載に補正する。 「、特に１０〜３５０μｍが好ましく、材質としては、
例えばケイ藻土、二酸化チタン、硫酸バリウム、酸化亜
鉛、酸化鉛、微結晶セルロース、ケイ砂、ガラス、シリ
カゲル、架橋デキストラン、架橋ポリアクリルアミド、
アガロース、架橋アガロース、キチン、キトサン、各種
合成樹脂（ポリスチレンなど）などを好ましく用いるこ
とができるが、特」 （５）同第３４頁下から７行の「９５」を「９０」と補
正する。 （６）同第３５頁８行の「９５」を「９０」と補正する
。 （７）同第５８頁６行の「しては−一−ルロー」を下記
のとおり補正する。 「しては、４０〜４００メツシユの繊維が好ましく、パ
ルプ（粉末ν紙など）、綿、麻、絹、羊毛、キチン、キ
トサン、セルロー」（８）同第３９頁７行の「−ｍ−で
きる。」の次に改行して、以下の記載を加入する。 「また、多孔質反応層への該物質Ｂ及びＤの固定化は、
特異結合部位が保持されており、かつ流体試料中に遊離
、溶解した状態でなければよく、流体試料中に不溶の状
態で分散されていてもよい。また、カラー写真で用いら
れるカプラーの分散に用いられる方法〔例えば日本写真
学会編「写真工学の基礎、銀塩編」（コロナ社１９７８
年刊）〕、脂質二分子膜中に含有さ、せる方法等も使用
できる。 これらの固定化操作は、前述の粒状体あるいは繊維にあ
らかじめ行っておいた後、多孔質反応層を形成しても良
く、あるいは多孔質反応層を形成した後に該固定化操作
を行うことも可能である。 前者の場合、該物質Ｂを固定化した粒状体又は繊維及び
該物質りを固定化した粒状体又は繊維の他に前述の特異
的反応に関与しないタン白質のみを固定化した粒状体又
は繊維を調節のために加えることも可能である。」（９
）　　同第３９頁１１行の「免疫」を「特異的」と補正
する。 （１０同第５３頁下から７行の「−ｍ−である。」の次
に改行して以下の記載を加入する。 「発色試薬層は、酵素活性測定の際に必要な基質、発色
試薬を含有させた少なくとも一層の親水性コロイドから
なる。 本発明による分析素子において、Ｔｉ質や発色試薬は、
親水性コロイドから成るバインダー中に溶解、ちるいは
分散して塗布液とすることができる。特に疎水性化合物
の分散には、写真業界で多用されているオイルプロテク
ト分散法、直接分散法等種々の公知の分散法を水性コロ
イドは、ゼラチン、フタル化ゼラチン等のゼラチン誘導
体、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポ
リビニルイミダゾール、ポリアクリルアミド、ポリアク
リル酸す）　１７ウム等の合成高分子物質、とドロキシ
エチルセルロース、カルボ中シメチルセＡ１０−スｆ　
）　ＩＪウム塩等のセルロース誘導体等の多糖類等が挙
げられる。そして好ましくけゼラチン、フタル化ゼラチ
ン等のゼラチン誘導体が挙げられる。 更に、本発明に係る発色試薬Ｉ婿のバインダーは、その
膜物性、例えば膨潤度や熱による溶解性の改良のために
、一部を他の水分散性高分子重合体、すなわち高分子ラ
テックスと置換することができる。好ましい高分子ラテ
ックスの例としては、例えば特願昭５６−１９３１号、
同５６−１７７５９６芳容明細書に記載のものが有用で
ある。これらの高分子ラテックスは、親水性コロイドバ
インダーの最大７０％を置換することが可能であるが、
好ましくは約５５％以下の置換でよい。 発色試薬層には、他の添加剤、例えば緩衝剤、保恒剤、
硬膜剤、界面活性剤、媒染剤等を、目的に応じて添加す
ることができる。 また、その膜厚ば、約５〜約５０μｍ１好ましくは約５
〜３０μｍである。 緩衝剤は、特踵的結合反応、酵素反応、発色反応等に適
したｐＨとするために使用される。 使用可能な緩衝剤の例としては、日本化学余線、「化学
便覧椛礎編」〔丸善■１９６６年刊〕第１３１２〜１３
２０頁、Ｎ、　Ｅ、グツド（Ｎ、　Ｋ、　Ｇｏｏｄ　）
　　ほか、バイオケミストリー（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔ
ｒｙ　）　　第５巻第４６７頁（１９６６）、金材、斉
藤、化学の領域第５０巻（２）第７９頁（１９７６）、
Ｗ、Ｊ、ファーグソン（Ｗ、Ｊ。 Ｆａｒｇｕｓｏｎ　）　　ほか、アナリチカル　バイオ
ケミ　　ス　　ト　　リ　　−　　（Ａｎａｌ、Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ、　　　　）　　第　　１　０　４　巻　５０
０頁（１９８０）等の文献に記載されているものを挙げ
ることができる。具体的な例としては、ホウ酸塩、リン
酸塩、炭酸塩、トリス（ｔｒｉｓ　）、バルビタール、
グリシン、グツド緩衝剤等が挙げられる。これらの緩衝
剤は、もよい。 保恒剤は、基質、発色試薬の保存安定化のために含有さ
れ、酸化防止剤などがある。 また本試薬層に限らず、すべての層において固定化され
た物質！３＋Ｄ、及び標識物Ｃの活性保持のために、固
定化酵素、アフイニテイクロマトグラフイーの吸着体、
固定化抗体及びタンパク質や酵素等の保存に用いられる
保恒剤を含有させることができる。その物質としては、
日本生化学余線「生化学実験講座１、タンパク質の化学
１」（東京化学同人■１９７６・年刊）第６６〜６７頁
前述の「実験と応用アフイニテイクロマトグラフイー」
第１０３〜１０４頁、特開昭６０−１４９９２７号公報
等に記載されているものが挙げられる。 具体的な例としては、ゼラチン、ゼラチン分解物、アル
ブミン、ＢＳＡ、シクロデキストリン類、非還元糖類（
スクロース、トレハロース）、ポリエチレングリコール
、アミノ酸、各種イオン、アジ化ンーダ等が挙げられる
。これらの保恒剤は、固定化された物質Ｂ。 Ｄ及び標識物Ｃの近傍に存在させることが好ましい。 硬膜剤としては、写真業界で多用されている物質を用い
ることができ、Ｔ、　Ｈ，ジエイムス（Ｔ、Ｈ，Ｊａｍ
ｅ８）編「ザ・セオリーーオブ嗜ザフォトグラフィック
書プロセスＪ（ＴｈｅＴｈｅｏｒｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｐ
ｈｏｔｏｇｒａｐｈｉｃ　Ｐｒｏｃｅｓｓ　）　　（第
４版）第７７〜８７頁に記載されているものを挙げるこ
とができる。具体的な例としては、アルデヒド類、活性
オレフィン類、活性エステル類等が挙げられる。 界面活性剤としては、前述のものが挙げられる。その他
の層中に含有させる試薬としては、溶解助剤、ブロッカ
−試薬などがある。 これらの添加剤は、必要に応じて適当量添加する。 媒染剤は、酵素活性測定のだめの検出物質を、発色試薬
層に集中的に集めたり、検出物質が色素の場合、吸光度
係数を高めたり、波長をシフトさせる物質であり、検出
物質と強い相互作用を示す。 カチオン性ポリマー、アニオン性ポリマー及びこれらの
ポリマーのラテックスが用すられる。」

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １、流体試料中の特定成分Ａを、該特定成分Ａと特異的
   に結合し得る物質Ｂと、該特定成分Ａ又はその類縁体と
   標識とが結合した標識物Ｃとの競合反応によつて測定す
   るための分析素子において、（ａ）該物質Ｂを固定化し
   た担体と、（ｂ）該物質Ｂに結合していない該標識物Ｃ
   の標識部位に特異的に結合して、該標識に起因する信号
   を変調させる物質Ｄを固定化した担体とを含有する混合
   物を用いて形成した多孔質反応層を有することを特徴と
   する分析素子。