JPS6248388A - Ｌ−リンゴ酸の製造方法 - Google Patents
Ｌ−リンゴ酸の製造方法Info
- Publication number
- JPS6248388A JPS6248388A JP18751885A JP18751885A JPS6248388A JP S6248388 A JPS6248388 A JP S6248388A JP 18751885 A JP18751885 A JP 18751885A JP 18751885 A JP18751885 A JP 18751885A JP S6248388 A JPS6248388 A JP S6248388A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- acid
- malic acid
- production
- fumarase
- product
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、Ｌ −ＩＪンゴ酸の製法に関するものであり
、更に詳しくは、フマラーゼ活性を有する微生物に対し
、その活性を保持したまま、副反応であるコハク酸の生
成に関与する酵素活性を抑制することによシ、Ｌ−リン
ゴ酸を効率的に製造する方法に関する。
、更に詳しくは、フマラーゼ活性を有する微生物に対し
、その活性を保持したまま、副反応であるコハク酸の生
成に関与する酵素活性を抑制することによシ、Ｌ−リン
ゴ酸を効率的に製造する方法に関する。
（従来の技術及びその課題）
従来、フマラーゼによるフマール醒又はその塩からのＬ
−リンゴ酸の製造に関しては、フマラーゼ活性を有する
微生物菌体をそのまま、もしくは固定化等の処理を行っ
てから用いる方法が知られている。（特公昭３７−４５
１１号、特公昭４４−１１９１号公報等）本発明者らも
ブレビバクテリウム属細菌を用いた製法を確立している
。（特願昭６０−１０５６４９号明細書）しかしながら
、これらの方法は微生物菌体を用いるためにフマール酸
よシコハクばか副生ずることがしばしばみとめられ、こ
の副生されたコハク酸をＬ−リンゴ酸から効率よく分離
することは困難なことから、フマール酸からのコハク酸
の副生を抑制することが工業的製法として重要となる。
−リンゴ酸の製造に関しては、フマラーゼ活性を有する
微生物菌体をそのまま、もしくは固定化等の処理を行っ
てから用いる方法が知られている。（特公昭３７−４５
１１号、特公昭４４−１１９１号公報等）本発明者らも
ブレビバクテリウム属細菌を用いた製法を確立している
。（特願昭６０−１０５６４９号明細書）しかしながら
、これらの方法は微生物菌体を用いるためにフマール酸
よシコハクばか副生ずることがしばしばみとめられ、こ
の副生されたコハク酸をＬ−リンゴ酸から効率よく分離
することは困難なことから、フマール酸からのコハク酸
の副生を抑制することが工業的製法として重要となる。
コハク酸の副生を抑制する方法としては、固定化微生物
を有機溶媒に接触させる方法（特公昭５２−８３９６号
公報）、固定化微生物を胆汁酸に接触させる方法（特公
昭５２−３１９５２号公報）が知られている。
を有機溶媒に接触させる方法（特公昭５２−８３９６号
公報）、固定化微生物を胆汁酸に接触させる方法（特公
昭５２−３１９５２号公報）が知られている。
しかしながらこれらの方法は、有機溶媒を用いる場合に
は溶媒の性質上、安全等に格別の配慮が必要なことから
、特殊な装置類が必要となること・胆汁酸を用いる場合
には、胆１士哨が高価なこと、処理時間が長いこと等、
工業的には未だ間呟点を残しており、より簡便な処理法
が望まれていた。
は溶媒の性質上、安全等に格別の配慮が必要なことから
、特殊な装置類が必要となること・胆汁酸を用いる場合
には、胆１士哨が高価なこと、処理時間が長いこと等、
工業的には未だ間呟点を残しており、より簡便な処理法
が望まれていた。
ここＧておいて本発明者らは、微生物歯体をＬ＋ ＩＪ
ンゴ敏又はその塩の水溶液中にて加熱処理例えば約１０
分〜５時間、４０〜６０℃にて処理することにより、コ
・・り酸の副生を抑制しうるという工業的に優れた方法
を見出し本発明を完成した。
ンゴ敏又はその塩の水溶液中にて加熱処理例えば約１０
分〜５時間、４０〜６０℃にて処理することにより、コ
・・り酸の副生を抑制しうるという工業的に優れた方法
を見出し本発明を完成した。
（発明の構成及びその効果）
即ち、本発明は、
フマラーゼ活性全方する菌体もしくはその固定化物の存
在下、フマール酸又はその塩よシＬ−リンゴ酸を製造す
る方法において、該菌体もしくはその固定化物を、Ｌ
−１，１ンゴ識もしくはその塩の水溶液中で加熱処理し
た後上記反応に用いることを特徴とするＬ −ＩＪンゴ
改の製造方法である。
在下、フマール酸又はその塩よシＬ−リンゴ酸を製造す
る方法において、該菌体もしくはその固定化物を、Ｌ
−１，１ンゴ識もしくはその塩の水溶液中で加熱処理し
た後上記反応に用いることを特徴とするＬ −ＩＪンゴ
改の製造方法である。
本発明において用いられるフマラーゼ活性を有する菌体
としては、例えば倣工研に寄託されているブレビバクテ
リウム・フラバムＭＪ２３３（ＦＥＲＭ３０６８ （特
公昭５７−２６７５５号公報参照））の菌体及びこの菌
よりα−アミノ−ｎ−酪酸耐性株として取得したＭＪ２
３３−ＡＢ−４１（ＦＥＲＭ３８１２ ’）（特公昭５
９−２８３９８号公報参照）の菌体等がある。
としては、例えば倣工研に寄託されているブレビバクテ
リウム・フラバムＭＪ２３３（ＦＥＲＭ３０６８ （特
公昭５７−２６７５５号公報参照））の菌体及びこの菌
よりα−アミノ−ｎ−酪酸耐性株として取得したＭＪ２
３３−ＡＢ−４１（ＦＥＲＭ３８１２ ’）（特公昭５
９−２８３９８号公報参照）の菌体等がある。
これらの菌体は遊離菌体のまま用いることができるが、
更には該菌体、或いはその含有する酵素（フマラーゼ）
を固定化したものを反応に供してもよい。この固定化物
の副反応抑制処理である加熱処理は固定化の前後いずれ
でもよい。
更には該菌体、或いはその含有する酵素（フマラーゼ）
を固定化したものを反応に供してもよい。この固定化物
の副反応抑制処理である加熱処理は固定化の前後いずれ
でもよい。
固定化としては、この種の菌体又に酵素の固定化に通常
用いられる方法が使用可能で、例えばポリアクリルアミ
ドゲル、カラギーナンゲル、膜状高分子等に固定化して
用いられる。
用いられる方法が使用可能で、例えばポリアクリルアミ
ドゲル、カラギーナンゲル、膜状高分子等に固定化して
用いられる。
コハク酸副生の抑制処理条件としては、加熱酸濃度が好
ましくは０．０１〜５Ｍ、より好ましくは０．０１〜０
．３ Ｍ 、反応時間は菌体濃度によっても異なるが通
常１０分〜５時間が用いられる。
ましくは０．０１〜５Ｍ、より好ましくは０．０１〜０
．３ Ｍ 、反応時間は菌体濃度によっても異なるが通
常１０分〜５時間が用いられる。
この際の温度は上記範囲よシ高温では目的反応のフマラ
ーゼ活性まで失活するので、また低温では副反応の抑制
効果が減するので不適当となる。またＬ −１，１ンゴ
酸濃度については上記より高温変では効果が飽和し不経
済であシ、低濃度では副反応のみを抑制する効果が出せ
なくなる。
ーゼ活性まで失活するので、また低温では副反応の抑制
効果が減するので不適当となる。またＬ −１，１ンゴ
酸濃度については上記より高温変では効果が飽和し不経
済であシ、低濃度では副反応のみを抑制する効果が出せ
なくなる。
上述の仔Ｃてして得た菌体又なその固定化物はコ・・タ
！−３．副生活性が著しく低下している為、該３体又は
固定化物を用またＬ−ＩＪンゴ酸の生産−で際しては、
コハク酸の１ｌｊｉｌ生を抑′５・ｊしうることか明ら
かとなった。ぞ瓦故、この処理：石体又は固定化物の存
在下にフマール殻又ニーｉぞのナトリウム、アンモニウ
ム等のフマール酸塩から効率的にＬ−リンゴばを生産す
ることができる。この酵素反応は約１５〜６０℃の温度
範囲で実施することが可能であるが、フマラーゼの安定
性を考しハして２０〜５５℃で実施するのが望ましい。
！−３．副生活性が著しく低下している為、該３体又は
固定化物を用またＬ−ＩＪンゴ酸の生産−で際しては、
コハク酸の１ｌｊｉｌ生を抑′５・ｊしうることか明ら
かとなった。ぞ瓦故、この処理：石体又は固定化物の存
在下にフマール殻又ニーｉぞのナトリウム、アンモニウ
ム等のフマール酸塩から効率的にＬ−リンゴばを生産す
ることができる。この酵素反応は約１５〜６０℃の温度
範囲で実施することが可能であるが、フマラーゼの安定
性を考しハして２０〜５５℃で実施するのが望ましい。
本発明の方法によれば、菌体内に含まれるフマラーゼ活
性を損なうことなく、コハク酸の副生のみを除去した菌
体又はその固定化′＠を用いるので、この処理菌体をＬ
−１，１ンゴ酸の生産に使用すれば対フマール酸収率
が著しく向上する。
性を損なうことなく、コハク酸の副生のみを除去した菌
体又はその固定化′＠を用いるので、この処理菌体をＬ
−１，１ンゴ酸の生産に使用すれば対フマール酸収率
が著しく向上する。
従って本発明ＨＬ−ＩＪンゴ敵の工業的生産（／ζ大い
に貢献する。
に貢献する。
以下、本発明の実施例を示し、本発明を更に詳しく説明
するが１本発明はこれに限定されるものではなｈｏ ９考列ト ）１表、こ示した培地１００ｙｄを５００フｌ写の三；
７１フラヌ：７：で分注し、１２０℃、１５分、旬加圧
′、９．漬したものＣ・ζエタノール全２容量％汐ｎ後
、前記のブレビバクテリウム・フラバムＭＪ２３３−Ａ
Ｂ−４１（ＦＥＲＭ３８１２ ）を−白金耳量植菌し、
３０℃で２４時間振とう培養を行なった。
するが１本発明はこれに限定されるものではなｈｏ ９考列ト ）１表、こ示した培地１００ｙｄを５００フｌ写の三；
７１フラヌ：７：で分注し、１２０℃、１５分、旬加圧
′、９．漬したものＣ・ζエタノール全２容量％汐ｎ後
、前記のブレビバクテリウム・フラバムＭＪ２３３−Ａ
Ｂ−４１（ＦＥＲＭ３８１２ ）を−白金耳量植菌し、
３０℃で２４時間振とう培養を行なった。
この培養液２０ゴを２１容ジャーファーメンタ−中の第
２表に示した培地１１に接種し・３３℃、 ｐＨ７，６
、通気量１ｖｖｍノ条件ニテ培養シ、エタノール濃度が
１〜１．５容量係に保たれるようにエタノールを断続的
に添加し、３０時間培養を行なった。
２表に示した培地１１に接種し・３３℃、 ｐＨ７，６
、通気量１ｖｖｍノ条件ニテ培養シ、エタノール濃度が
１〜１．５容量係に保たれるようにエタノールを断続的
に添加し、３０時間培養を行なった。
培養終了後、培養液を遠心分離（６，０００ｒｐｍ。
１５分）して得た菌体を供試菌体とした。該菌体２．５
２を０．２ Ｍ 、 ｐＨ６，０のし一リンゴ酸水浴液
からなる副反応抑制液５０ゴに懸濁した後、均一に５分
割し、３５℃から５５℃まで、５℃間隔の何れかの温度
で別々に処理し、それぞれ遠心集菌した。それぞれの菌
体について、更に０、１ Ｍ ｐＨ７，８１Ｊン酸カリ
ウム緩衝液で２回洗浄した後、フマラーゼ活性及びコハ
ク酸生成活性を測定した。フマラーゼ活性の測定は、第
３表に示した反応液１００ｒｎ！、に上記の菌体を懸濁
第１表 尿素 ４．０２信酸アンモニ
ウム １４．ＣＩＫ Ｈ２Ｐ ０４
０．５ ｆ／に２ＨＰ ０４
０．５ ｆＭｇＳＯ＜・７Ｈ２００，５ｆ Ｆｅ ＳＯ４・７Ｈ２０６，ＯＱ Ｍｎ ３０４ ” ４〜６Ｈ２０６，Ｏ”？酵母エキス
１．０１カザミノ酸
１．０２ビオチン ２００μ？
チアミン塩酸塩 １００μＶ蒸留水
１０００ｄ ｐＨ７，６ 第２表 硫酸アンモニウム ２３．（ＩＫＨｚ Ｐ ０
４ ０．５９に２ ＨＰ ０４
０．５ ？ＭｇＳＯ４＠７Ｈｚ０
０．５９ＦｅＳＯ４・７Ｈ２０２０■ Ｍｎ５Ｏ＜ ・４〜６Ｈ２０２０ｍｔｉ罪母エキス
３２ カザミノ酸 ３２ ピオチン ２００μ？チアミン塩酸
塩 １００μ？蒸留水 １
０１００Ｏ第３表 １．０Ｍ フマール酸水浴液 ｐＨを７． ＯＶＣＮａＯＨで調整 させ、４５℃、２時間反応させた後、生成し一丁 リンゴ酸量を硫ハ飯性≠、２，７−ナフタレンジオール
と反応させて発色させる方法により定量した。コハク酸
はその生成量を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ
）にて測定した。なお、酵素活性は抑制処理をしない菌
体での活性を１００とする相対比活性をもって表示した
。その結果を第４衣に示す。
２を０．２ Ｍ 、 ｐＨ６，０のし一リンゴ酸水浴液
からなる副反応抑制液５０ゴに懸濁した後、均一に５分
割し、３５℃から５５℃まで、５℃間隔の何れかの温度
で別々に処理し、それぞれ遠心集菌した。それぞれの菌
体について、更に０、１ Ｍ ｐＨ７，８１Ｊン酸カリ
ウム緩衝液で２回洗浄した後、フマラーゼ活性及びコハ
ク酸生成活性を測定した。フマラーゼ活性の測定は、第
３表に示した反応液１００ｒｎ！、に上記の菌体を懸濁
第１表 尿素 ４．０２信酸アンモニ
ウム １４．ＣＩＫ Ｈ２Ｐ ０４
０．５ ｆ／に２ＨＰ ０４
０．５ ｆＭｇＳＯ＜・７Ｈ２００，５ｆ Ｆｅ ＳＯ４・７Ｈ２０６，ＯＱ Ｍｎ ３０４ ” ４〜６Ｈ２０６，Ｏ”？酵母エキス
１．０１カザミノ酸
１．０２ビオチン ２００μ？
チアミン塩酸塩 １００μＶ蒸留水
１０００ｄ ｐＨ７，６ 第２表 硫酸アンモニウム ２３．（ＩＫＨｚ Ｐ ０
４ ０．５９に２ ＨＰ ０４
０．５ ？ＭｇＳＯ４＠７Ｈｚ０
０．５９ＦｅＳＯ４・７Ｈ２０２０■ Ｍｎ５Ｏ＜ ・４〜６Ｈ２０２０ｍｔｉ罪母エキス
３２ カザミノ酸 ３２ ピオチン ２００μ？チアミン塩酸
塩 １００μ？蒸留水 １
０１００Ｏ第３表 １．０Ｍ フマール酸水浴液 ｐＨを７． ＯＶＣＮａＯＨで調整 させ、４５℃、２時間反応させた後、生成し一丁 リンゴ酸量を硫ハ飯性≠、２，７−ナフタレンジオール
と反応させて発色させる方法により定量した。コハク酸
はその生成量を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ
）にて測定した。なお、酵素活性は抑制処理をしない菌
体での活性を１００とする相対比活性をもって表示した
。その結果を第４衣に示す。
第４表
参考例２
参考列１と同様の培養を行ない菌体を得た。
該集菌体２．ｓｔｋそれぞれ０．１ Ｍ 、 ０．２
Ｍ 。
Ｍ 。
０．４Ｍ 、 ０．６Ｍ 、 ＩＭ濃度よりなるｐＨ６
，０Ｌ −リンゴ酸水溶液からなる抑制処理用液５０ｄ
に懸濁した後、４５℃、２時間の処理をし遠心集菌した
。更に０．１ Ｍ ｐｆ（７，８リンばカリウム緩衝歇
で２回洗浄したそれぞれの菌体についてフマラーゼ活性
及びコハク酸生成活性を測定した。
，０Ｌ −リンゴ酸水溶液からなる抑制処理用液５０ｄ
に懸濁した後、４５℃、２時間の処理をし遠心集菌した
。更に０．１ Ｍ ｐｆ（７，８リンばカリウム緩衝歇
で２回洗浄したそれぞれの菌体についてフマラーゼ活性
及びコハク酸生成活性を測定した。
その結果を第５表に示す。
第５表
実施例１（Ｌ−リンゴ酸の製造）
参考例１と同様の培養を行ない菌体を得た。゛該集菌体
２，５２を参考例１と同様の抑・制ｅ、５〇−に懸濁し
、４５℃にて２時間振盪してコハク酸副生の抑制処理を
行なった。
２，５２を参考例１と同様の抑・制ｅ、５〇−に懸濁し
、４５℃にて２時間振盪してコハク酸副生の抑制処理を
行なった。
この後、遠心分ｉｖＫよシ集菌し、該集菌体？第３表に
示した反応液（フマール酸水浴液）にて２度洗浄後、２
００ゴ容三角フラスコ中の、上記反応液１００ゴに添加
し、４５℃にて２時間振とうしながら反応を行った。
示した反応液（フマール酸水浴液）にて２度洗浄後、２
００ゴ容三角フラスコ中の、上記反応液１００ゴに添加
し、４５℃にて２時間振とうしながら反応を行った。
反応終了後、遠心分耶によシ菌体を除いた反応残液中の
Ｌ−リンゴ酸濃度を測定した。リンゴ酸量は参考例１に
も示した比色定量法によった。また、コハク酸はＨＰＬ
Ｃによった。
Ｌ−リンゴ酸濃度を測定した。リンゴ酸量は参考例１に
も示した比色定量法によった。また、コハク酸はＨＰＬ
Ｃによった。
結果を第６表に、コハク酸副生の抑制処理を行なわない
菌体による反応結果と共に示す。
菌体による反応結果と共に示す。
第６表
Claims (1)
- （１）フマラーゼを含有する菌体もしくはその固定化物
の存在下、フマール酸又はその塩よりＬ−リンゴ酸を製
造する方法において、該菌体もしくはその固定化物を、
Ｌ−リンゴ酸もしくはその塩の水溶液中で加熱処理した
後、上記反応に用いることを特徴とするＬ−リンゴ酸の
製造方法。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18751885A JPS6248388A (ja) | 1985-08-28 | 1985-08-28 | Ｌ−リンゴ酸の製造方法 |
| GB08612030A GB2175304B (en) | 1985-05-17 | 1986-05-16 | Method of preparing l-malic acid |
| US06/864,212 US4912043A (en) | 1985-05-17 | 1986-05-19 | Method of preparing L-malic acid |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18751885A JPS6248388A (ja) | 1985-08-28 | 1985-08-28 | Ｌ−リンゴ酸の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6248388A true JPS6248388A (ja) | 1987-03-03 |
| JPH0582194B2 JPH0582194B2 (ja) | 1993-11-17 |
Family
ID=16207477
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18751885A Granted JPS6248388A (ja) | 1985-05-17 | 1985-08-28 | Ｌ−リンゴ酸の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6248388A (ja) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61260889A (ja) * | 1985-05-14 | 1986-11-19 | Takara Shuzo Co Ltd | リンゴ酸カルシウムの製造方法 |
-
1985
- 1985-08-28 JP JP18751885A patent/JPS6248388A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61260889A (ja) * | 1985-05-14 | 1986-11-19 | Takara Shuzo Co Ltd | リンゴ酸カルシウムの製造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0582194B2 (ja) | 1993-11-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPS6221519B2 (ja) | ||
| JPS5886093A (ja) | アミドの生物学的製造法 | |
| JP2676568B2 (ja) | Ｒ（−）−マンデル酸およびその誘導体の製造法 | |
| JP3218133B2 (ja) | フェニル基を有する光学活性α−ヒドロキシカルボン酸の製造法 | |
| JP3409353B2 (ja) | アミド化合物の製造方法および使用される微生物 | |
| JPH0316118B2 (ja) | ||
| JPS6291189A (ja) | アミドの微生物学的製造法 | |
| JPS6248388A (ja) | Ｌ−リンゴ酸の製造方法 | |
| JP2011501969A5 (ja) | ||
| JP3081649B2 (ja) | Ｓ−（＋）−マンデルアミドおよびその誘導体の製造法 | |
| JPH06141888A (ja) | Ｄ−マンデル酸の製法 | |
| JP3006615B2 (ja) | Ｄ―β―ヒドロキシアミノ酸の製造法 | |
| JPS58201992A (ja) | 微生物によるβ−置換プロピオン酸またはそのアミドの製造法 | |
| JP2005176639A (ja) | ニコチン酸類の製造方法 | |
| JPH04218385A (ja) | Ｒ（−）−マンデル酸の製造法 | |
| JPS592693A (ja) | アミドの生物学的製造法 | |
| JPS60126092A (ja) | Ｌ−アスパラギン酸の製造法 | |
| JP2924679B2 (ja) | Ｄ−リジンの製法 | |
| JPH03280892A (ja) | 微生物によるニコチン酸の製造法 | |
| JPS58116690A (ja) | Ｄ−β−ヒドロキシアミノ酸の製造法 | |
| JPH05244968A (ja) | α−ヒドロキシイソブチルアミドの製造法 | |
| JPH0455669B2 (ja) | ||
| WO2011068206A1 (ja) | 光学活性アミノ酸または光学活性アミノ酸アミドの製造法 | |
| JPS6349090A (ja) | ｌ−リンゴ酸カルシウムの製造法 | |
| JPS58129975A (ja) | 菌体内セリン分解酵素活性の抑制方法 |