JPS62242857A - 固相免疫測定用成形品の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、免疫検査の一手法である固相免疫測定法に用
いられる、試料の容器もしくは担体に関するものである
。

〔従来技術〕

近年、医学の幅広い分野で免疫反応を利用した分析手法
が取シ入れられ、血中薬物の定量、癌性たん白質の検出
、組織適合性の決定などが行なわれ、非常に有用な臨床
データを与えている。まえ、現在著るしい展開を見せて
いるバイオテクノロジーの各分野でも、この免疫反応を
利用した分析手法が取シ入れられている。たとえば、遺
伝子変換によって生みだされる生理活性物質の検知や農
作物に感染したウィルスの同定など、この手法は欠くべ
からざるものとなっている。

免疫反応を利用した分析法としては種々の方法がある。

すなわち、免疫拡散法、免疫クロマトグラフィー、免疫
電気泳動法、補体結合反応、赤血球凝集反応、受身赤血
球凝集反応、けい光抗体法、ラジオイムノアッセイ、酵
素免疫測定法等である。

このなかでも、抗原もしくは抗体を固相上に固定して測
定を行う手法を固相免疫測定法と言い、たとえば固相ラ
ジオイムノアッセイや、固相酵素免疫測定法（Ｆｊｎｇ
ｙｍｅ　Ｌｉｎｋｅｄ　Ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ　
Ａｓ５ａｙ。

以下ＢＬＩＢ人という）がある。この同相免疫測定法は
、多くの免疫測定法の中でも最も感度高く定量できる手
法である。この測定法は、あらかじめ固相上に抗原もし
くは抗体を固定し、ラジオアイソトープ、けい光性物質
もしくは酵素等の標識物を結合させた抗体もしくは抗原
と、抗原−抗体反応を行わせる。反応物と未反応物の分
離は洗浄によって容易に行う事ができ、固相表面に抗原
−抗体反応によって固定された抗原もしくは抗体は、標
識物を測定する事により定量できる。

この測定法では、抗原もしくは抗体を固相へ多量に、且
つ安定性良く吸着固定する事が重要であるが、従来、固
相担体の表面に固定される抗原や抗体の量は少なく満足
のいくものではなかった。

そこで、同相表面に何らかの処理を加えることによって
、抗原や抗体が吸着、固定され易くするための研究が行
なわれ、例えば、７ｇリスチレン系イリマーの測定用担
体を発煙硫＃Ｒまたは無氷硫酸中で処理することによっ
てスルフォン酸基を導入し、抗原や抗体の固定量を増大
させた免疫測定用固相担体（特開昭５９−８４１６１号
公報）、基体表面をプラズマ処理することによって基体
の表面化学性を変性し、大分子の結合および／″！たは
配向を制御し、抗体等の結合量を増大させる方法（特開
昭５９−８０４４２号公報）等が開示されている０ しかしながら、これらの処理によってもなお固体表面に
おける抗原や抗体の吸着、固定量は十分なものとは言え
ず、また、処理方法や条件によりても効果が異なるため
、吸着、固定量をさらに向上させ、安定化させることが
求められている。

〔発明の目的〕

本発明は、従来の同相免疫測定法用成形品の持つ欠点、
すなわち抗原の吸着性が十分ではないという点を解決す
るため、単なる材質の検討や化学的表面処理の手法検討
にとどまらず、物理的、電気的な検討を鋭意進め九結果
、本発明を完成するに至っ九ものである。その目的とす
るところは、従来は吸着性が低く測定が行えなかった抗
原もしくは抗体（たん白質、糖たん白、Ｒプチド等）の
吸着固定性を増した免疫測定用成形品を提供するところ
にある。

〔発明の構成〕

即ち本発明は、プラスチック成形品表面に酸化処理を施
し、酸素原子／炭素原子の比率が０．０３〜０．２２の
範囲ＫＴｏるようＫＩＪ製したことを特徴とする固相免
疫測定用成形品である。

本発明の固相免疫測定用成形品を構成するプラスチック
としては、ゴリステレン、ばり塩化ビニル、ぼりエチレ
ン、ピリプロ♂レン、ダリメチルインテン、ナイロン−
６、ナイロン−６６、ＡＢ８樹脂、シリコンゴム等を使
用する仁とが出来るが、特に限定されるものではない。

また、成形品の形状は、免疫測定の方法によって自ずと
決まって来るもので特に限定されるものではなく、試験
管、ビーズ、マイクロプレート、キュベツト、ディスク
などがその好例である。これらの成形品で特に透明性を
必要とされる場合は、材質としてｄ　ＩＪスチレン、ダ
リ塩化ビニル、ぼりメチルぜンテン等を用いるのが好適
である。

このようなプラスチック成形品表面の酸素原子／炭素原
子の比率が０．０３〜０．２２の範囲になるように調輿
する手法としては、酸、アルカリ、過酸化物等の薬品に
よる化学的処理、コロナ放電処理、低温プラズマ処理、
電子線やガンマ−線等の照射などがあるが、特に限定さ
れるものではない。

蛋白質のガラス、プラスチック等への吸着現象について
は、蛋白質の分離・精製に用いるクロマトグラフィーの
分野で種々の検討が行なわれているが、その吸着に寄与
する力は、疎水結合、イオン結合および水素結合が主要
な作用力であると考えられている。従来の固相免疫測定
用成形品は、主に疎水結合性や化学的に固定する共有結
合性を利用して蛋白質を吸着させるものであった。しか
し、吸着させる蛋白質は、アミン基、カルボキシル基、
水酸基、カルボニル基などを分子内に数多く有する高分
子であ）、疎水結合力のみの場合よシもイオン結合や水
素結合の作用力をも加える方が、吸着固定能が増す事は
明らかである。

本発明は、プラスチック成形品表面に酸化処理を施し、
疎水結合性に加えてイオン結合力、水素結合力を本吸着
に寄与させようとするもので、特に、酸化処理の方法に
応じて処理条件を選択し、成形品表面のＸ線光電子スＲ
クトルから求めた酸素原子／炭素原子の比率が０．０３
〜０．２２、好ましくは０．０７〜０．１９の範囲にな
るように削化度合を調節することによって、蛋白質の吸
着固定能を著るしく増大させるものである。酸素原子／
炭素原子の比率が０．０３未満では、イオン結合力や水
素結合力が吸着に十分寄与せず、また、０．２２以上、
即ち過度に酸化処理を行なった場合には、酸化度合が強
くなシすぎるために蛋白質の疎水結合性が抑制され、特
殊な蛋白質、たとえば塩基性の蛋白質の吸着性は大きく
なるが、一般的には吸着性は低下する。

免疫測定の対象となる蛋白質の種類は多様であり、従っ
て、免疫測定用成形品表面の酸化状態もこれに対応して
各種のものを用意するのが望ましいが、本発明によれば
、酸化処理の方法と処理条件を組合せて、酸素原子／炭
素原子の比率を調節することによシ、使用目的に応じた
一定の蛋白質吸着性を有する免疫測定用成形品を調製す
ることができる。

尚、酸、アルカリ等の薬品による化学的処理は、プラス
チックの材質によシ試薬の選択が必要であり、また、処
理後は反応液を十分洗浄しおく事が必要である。この処
理法は、物理的処理であるドライ法に比して、表面原子
の醸化の他に表面をミクロなレベルで粗面化する効果も
あり、吸着性をより増大させる特徴を有する。一方、物
理的処理であるコロナ放電、低温プラズマ処理、電子線
照射、ガンマ線照射などは、表面の原子のみの酸化が可
能で、均一な表面状態を形成する事ができる。

〔発明の効果〕

本発明によシ得られた同相免疫測定用成形品は、抗原も
しくは抗体の吸着固定性にすぐれ、良好な免疫学的分析
結果を与えるもので、医療診断分野、バイオテクノロジ
ーの研究分野等で極めて有用なものである。また、成形
品の形状を問わずいかなる形状へも応用が可能である。

以下、実施例によシ本発明を説明する。

実施例１ ぜリスチレン製の９６ウエルマルチプレート（住友ベー
クライト■製）を用意し、何らの処理も施さないもの、
ガンマ線を３．０．６．０、＆Ｏおよび１５．０　Ｍｒ
ａｄ照射したもの、低温プラズマ処理（空気圧Ｑ、　２
Ｔｏｒｒ、周波数１３．５６　ＭＨｚ　、出力５０Ｗ）
を５および１０分間行なったもの、および７分間低温プ
ラズマ処理した後、さらに５チ過酸化水素溶液中に４０
℃、６０分間浸漬処理したものを調整し、それぞれ試料
（１）〜試料（８）とした。また、比較試料としてＦｌ
ｏｗ社製の組織培養用プレートを用いた。

これらの各試料について、アルパックファイ社製のＸ線
光電子分析装置によシ測定したＸ線光電子スイクトルか
ら、試料表面の酸素原子／炭素原子の比率を求めた。

一方、抗体（蛋白質）に対する吸着性評価は以下のとお
シ行なった。まず、プレートの各ウェルに、アルカリフ
ォスファターゼ標識イムノグロブリンＧ（抗体）　　（
Ｍｉｌｅｓ社＃りを１０００倍および１００００倍にそ
れぞれ希釈したリン酸塩緩衝液を１００μｔ／ウエルづ
つ加え、３７℃で６０分間吸着させた後、ツイーン２０
（東京化成社製）０．０５チ含有生理食塩水（以下、洗
浄液と言う）で３回洗浄して、プレートへの未吸着分を
除去した。次に、基質液（フェニルリン酸２−ナトリウ
ム３．８ｍＭ、　４−アミノアンチピリン５．４ｍＭ、
および塩化マグネシウム５０ｎＭを含む０．０５　Ｍ炭
醗塩緩衡液）を１００μｔ／ウェル加え、３７℃で６０
分酵素反応を行った。フェリシアン化カリウムの３６ｍ
Ｍ溶液１００μｔ／ウエルを加えて反応を停止した後、
波長４９２ｎｍの光で反応液の吸光度を測定した。

測定結果は第１表に示した通シで、酸素原子／炭素原子
の比率を適度に調節して酸化処理することＫよシ、吸光
度、即ち抗体に対する吸着性が増大するが、酸素原子／
炭素原子の比率が０．１５の近辺でピークを示し、それ
以上に酸化が進むと再び吸着性が低くなることが分かる
。

第　　　１　　　表 実施例２ 住友ベークライト■製５　ｒｒｄＬ　ｙｆリプロピレン
チューブに、アルゴンガス中で２０秒間低温プラズマ処
理を行った（圧力０．２　Ｔｏｒｒ、周波数１３．５６
　Ｍ）Ｉｇ　。

出力５０Ｗ）。表面の醗素原子／炭素原子比の測定は、
実施例１と同様にして行った。

ヒト・アルプミ／を生理食塩水によシ夫々１．１０．１
００μｆ／ｍ１の濃度に調製した溶液を、チューブに５
００μを加え３７℃、６０分間吸着させた。洗浄液で３
回洗い、ブロッキング操作として１チゼラチン溶液を６
００μを加え３７℃で６０分反応した。洗浄液で３回洗
浄した後、抗ヒト・アルブミン抗体（Ｒルオキシダーゼ
標識、力Ｒル社製）を５００μを加えて、抗原であるヒ
ト・アルブミンと反応させた。未反応分を洗浄除去した
後、基質液（２，２’−アジノジ（３−エチルペンズチ
アソリン）−６’−スルホン醗２アンモニウム塩２．５
ｍ１ｌＪ、過酷化水素水５　ｍＭ　）を５００μを加え
て３７℃で２０分反応させた。０．０５％Ｑ化す）　Ｉ
Ｊウム１００μｔによシ反応を停止した後、７０−セル
型分光光度計で４０５μｍの波長で吸光度を測定した。

測定結果はｔａ２表に示した通シで、プラズマ処理によ
シ吸光度、即ち吸着性が増大していることが分る。

第　　　２　　　表

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. プラスチック成形品表面に酸化処理を施し、酸素原子／
   炭素原子の比率が０．０３〜０．２２の範囲にあるよう
   に調製したことを特徴とする固相免疫測定用成形品。