JPH0324458A - 尿中赤血球の免疫学的測定法 - Google Patents
尿中赤血球の免疫学的測定法Info
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- JPH0324458A JPH0324458A JP15855889A JP15855889A JPH0324458A JP H0324458 A JPH0324458 A JP H0324458A JP 15855889 A JP15855889 A JP 15855889A JP 15855889 A JP15855889 A JP 15855889A JP H0324458 A JPH0324458 A JP H0324458A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は尿中の赤血球を検出する方法に関するものであ
る。
る。
〔従来の方法と解決しようとする課題〕尿路に結石を生
じたり炎症を起こした場合、例えば腎結石，急性腎炎，
腎結核，腎孟炎，膀胱炎，尿道炎及び腎腫瘍等の場合、
尿中赤血球が増７Ｊｌ］する。
じたり炎症を起こした場合、例えば腎結石，急性腎炎，
腎結核，腎孟炎，膀胱炎，尿道炎及び腎腫瘍等の場合、
尿中赤血球が増７Ｊｌ］する。
尿中赤血球の測定は一般に尿沈渣法，即ち尿を遠心分離
し上清を捨てた後、沈降或分を顕微鏡で調べ、赤血球数
を算出する方法が行われている。
し上清を捨てた後、沈降或分を顕微鏡で調べ、赤血球数
を算出する方法が行われている。
しかしながらこの測定方法は操作が煩稚で熟練を要する
ばかりでなく、測定変動が大きく例えば３〜８個／視野
といった形で一般に表現ざれる。
ばかりでなく、測定変動が大きく例えば３〜８個／視野
といった形で一般に表現ざれる。
またもう１つの測定方法として試験紙法，即ち赤血球の
｝容血により生ずるヘモグロビンのベルオキシダーゼ活
性を過酸化物，発色試薬を保持せしめた試験紙で検出す
る方法がある。この化学的方法は操作が簡単であるが、
半定量的な方法であるばかりでなく、尿中に含まれる他
の共存物質の影響，例えばアスコルビン酸等還元性物質
により偽陰性を呈する場合がある。
｝容血により生ずるヘモグロビンのベルオキシダーゼ活
性を過酸化物，発色試薬を保持せしめた試験紙で検出す
る方法がある。この化学的方法は操作が簡単であるが、
半定量的な方法であるばかりでなく、尿中に含まれる他
の共存物質の影響，例えばアスコルビン酸等還元性物質
により偽陰性を呈する場合がある。
本発明は上記問題を解決し尿中赤血球を免疫学的測定方
法によって特異的かつ定量的に測定するものである。即
ち尿中に含まれる赤血球を溶血させてヘモグロビンを遊
離させ、これを抗ヒトヘモグロビン抗体を用いて抗原抗
体反応により測定するものである。なお、ヘモグロビン
を免疫学的測定法によって測定すること自体は既に知ら
れているが、本発明は免疫学的手法を尿中に含まれる赤
血球の測定に応用し特異的かつ定量的に測定する方法を
提供するものである。
法によって特異的かつ定量的に測定するものである。即
ち尿中に含まれる赤血球を溶血させてヘモグロビンを遊
離させ、これを抗ヒトヘモグロビン抗体を用いて抗原抗
体反応により測定するものである。なお、ヘモグロビン
を免疫学的測定法によって測定すること自体は既に知ら
れているが、本発明は免疫学的手法を尿中に含まれる赤
血球の測定に応用し特異的かつ定量的に測定する方法を
提供するものである。
次に本発明に係わる方法を詳細に説明する。まず尿中に
含まれる赤血球を溶血させる。その手段としては採尿後
、所定時間を保ったり、音波処理，凍結融解，界面活性
剤添加等を行い検体とする。
含まれる赤血球を溶血させる。その手段としては採尿後
、所定時間を保ったり、音波処理，凍結融解，界面活性
剤添加等を行い検体とする。
この場合、溶血処理を行わないと測定値が尿中赤血球濃
度を適格に反映し難い。免疫学的測定に関してはヒトヘ
モグロビンを放剣性同位元素，酵素，蛍光物質或いは化
学発光物質で標識する。ここて放剣性同位元素標識抗原
を用いた場合を例にとると、この標識抗原と検体及び抗
ヒトヘモグロビン抗体とを混合し競合的抗原抗体反応を
行わせる。
度を適格に反映し難い。免疫学的測定に関してはヒトヘ
モグロビンを放剣性同位元素，酵素，蛍光物質或いは化
学発光物質で標識する。ここて放剣性同位元素標識抗原
を用いた場合を例にとると、この標識抗原と検体及び抗
ヒトヘモグロビン抗体とを混合し競合的抗原抗体反応を
行わせる。
次にこの反応液に第二抗体を加えて抗原抗体反応物を沈
澱化せしめた後遠心分離を行い、未反応物を含む上清を
吸引除去した後、放躬能を測定し、別途同様操作により
作或の標準曲線より検体中ヘモグロビン濃度を算出する
。
澱化せしめた後遠心分離を行い、未反応物を含む上清を
吸引除去した後、放躬能を測定し、別途同様操作により
作或の標準曲線より検体中ヘモグロビン濃度を算出する
。
免疫学的測定法については上記競合的抗原抗体反応によ
る競合法のほか、サンドイッチ法を採用することもでき
る。例えばヘモグロビンーαサブユニットに対するモノ
クローナル抗体を放射性同位元素で標識して標識抗体と
し、一方ヘモグロビンーβサブユニットに対するモノク
ローナル抗体をプラスチックビーズ等の表面に固着せし
め固相化抗体とする。標識抗体，検体，固相化抗体を反
応させて抗原抗体複合物を生成せしめ、液相部を除去，
抗原抗体複合物を洗浄した後、放躬能を測定しヘモグロ
ビン｝農度を韓出する。
る競合法のほか、サンドイッチ法を採用することもでき
る。例えばヘモグロビンーαサブユニットに対するモノ
クローナル抗体を放射性同位元素で標識して標識抗体と
し、一方ヘモグロビンーβサブユニットに対するモノク
ローナル抗体をプラスチックビーズ等の表面に固着せし
め固相化抗体とする。標識抗体，検体，固相化抗体を反
応させて抗原抗体複合物を生成せしめ、液相部を除去，
抗原抗体複合物を洗浄した後、放躬能を測定しヘモグロ
ビン｝農度を韓出する。
次に本発明を実施例，比較例によって詳細に説明する。
比較例（化学的方法による測定例〉
健常人の尿に血液を添７ＪＯしヘモグロビン濃度がＯ〜
２０００ｕｇ／ｃＵの範囲内にある種々の濃度の液を調
製した。この調製液５０μ夏に、０． １ｍＯｌ／ｕク
エン酸ソーダ緩衝液１０００μＭ ， ２Ｃ］／．＋１
ドデシル硫酸ソーダ１００μｆＪ ， ｈ＋／．Ｑオル
ソトリジン２５０μＤ及び０． ０３ｍｏ ｌ ／ （
Ｊクメンヒドロキシパーオキサイド１００μＤをそれぞ
れ加え、室温にて３０分間放置後、波長６２０ｎｍで吸
光度を測定、ヘモグロビン濃度と吸光度との関係を第３
図に示した。また測定は、生理食塩水に血液を添加して
調製した液についても同様に実施し、その結果を第３図
に併記した。第３図より生理食塩水に血液を添加し調製
した液と、尿に血液を添加し調製した液とでは吸光度に
大きな差があり、化学反応に基づく本測定系では、尿中
共存物質によって影響をうけることが認められた。
２０００ｕｇ／ｃＵの範囲内にある種々の濃度の液を調
製した。この調製液５０μ夏に、０． １ｍＯｌ／ｕク
エン酸ソーダ緩衝液１０００μＭ ， ２Ｃ］／．＋１
ドデシル硫酸ソーダ１００μｆＪ ， ｈ＋／．Ｑオル
ソトリジン２５０μＤ及び０． ０３ｍｏ ｌ ／ （
Ｊクメンヒドロキシパーオキサイド１００μＤをそれぞ
れ加え、室温にて３０分間放置後、波長６２０ｎｍで吸
光度を測定、ヘモグロビン濃度と吸光度との関係を第３
図に示した。また測定は、生理食塩水に血液を添加して
調製した液についても同様に実施し、その結果を第３図
に併記した。第３図より生理食塩水に血液を添加し調製
した液と、尿に血液を添加し調製した液とでは吸光度に
大きな差があり、化学反応に基づく本測定系では、尿中
共存物質によって影響をうけることが認められた。
実施例１（競合法〉
比較例と同様に尿に血液を添加し種々の濃度のヘモグロ
ビン｝夜を調製し、室温にて３時間放置した。この調製
液５０ｕ．１１をプラスチックチューブにいれ、これに
ＥＩで標識したヘモグロビン液５０μＤ，ラビット抗ヒ
トヘモグロビン抗体５０μＢ，ラビットＩ（１（３５０
μ．Ｑ及び０．０１ｍＯｌ／．Ｑリン酸ソーダ緩衝液１
００μ夏を各々加えた後、室温にて５時間インキユベー
トした。次にヤギ抗ラ−ビッ１〜ＩｇＧ５０μ夏を加え
一晩放置後遠心分離し、上清をアスピレートで取り除い
た後、沈澱部放躬能をガンマーカウンターで測定した。
ビン｝夜を調製し、室温にて３時間放置した。この調製
液５０ｕ．１１をプラスチックチューブにいれ、これに
ＥＩで標識したヘモグロビン液５０μＤ，ラビット抗ヒ
トヘモグロビン抗体５０μＢ，ラビットＩ（１（３５０
μ．Ｑ及び０．０１ｍＯｌ／．Ｑリン酸ソーダ緩衝液１
００μ夏を各々加えた後、室温にて５時間インキユベー
トした。次にヤギ抗ラ−ビッ１〜ＩｇＧ５０μ夏を加え
一晩放置後遠心分離し、上清をアスピレートで取り除い
た後、沈澱部放躬能をガンマーカウンターで測定した。
ここで１チューブ当りに用いた１２５Ｉのカウントを下
，抗原抗体結合物（｝尤澱）のカウントをＢとし、Ｂ／
Ｔ （％）の｛直を縦軸に、ヘモグロビン濃度を横軸に
とった図を第］図に示した。また同様の操作を生理食塩
水に血液を添加し調製した液についても実施した。なお
この場合には、液調製後２４時間室温放置した後、測定
操作は上記と同様であり、結果を第１図に併記した。
，抗原抗体結合物（｝尤澱）のカウントをＢとし、Ｂ／
Ｔ （％）の｛直を縦軸に、ヘモグロビン濃度を横軸に
とった図を第］図に示した。また同様の操作を生理食塩
水に血液を添加し調製した液についても実施した。なお
この場合には、液調製後２４時間室温放置した後、測定
操作は上記と同様であり、結果を第１図に併記した。
第１図より、尿に血液を添加し調製した液と生理食塩水
に血液を添加し調製した液との間にはＢ／Ｔに差は認め
られず、尿中共存物質の影響を受けることなく特異的に
ヘモグロビン濃度を測定し得ることが判った， 実施例２（サンドイッチ法） 実施例１と同様に、尿に血液を添加し種々の濃度のヘモ
グロビン液を調製し、室温にて３時間放置した。調製液
５０μ１をプラスチックチューブに入れ、これに１２５
■で標識したモノクローナル抗ヒトヘモグロビンαサブ
ユニット抗体５０μ１，０．０１ｍＯｌ／．Ｑリン酸ソ
ーダ緩衝液１００μ１を力日えた後、室温にて５時間イ
ンキユベートした。次にモノクローナル抗ヒトヘモグロ
ビンβサブユニット抗体を固着せしめたプラスチックビ
ーズ（径６ｍｍ ）を入れ、一晩インキユベートした。
に血液を添加し調製した液との間にはＢ／Ｔに差は認め
られず、尿中共存物質の影響を受けることなく特異的に
ヘモグロビン濃度を測定し得ることが判った， 実施例２（サンドイッチ法） 実施例１と同様に、尿に血液を添加し種々の濃度のヘモ
グロビン液を調製し、室温にて３時間放置した。調製液
５０μ１をプラスチックチューブに入れ、これに１２５
■で標識したモノクローナル抗ヒトヘモグロビンαサブ
ユニット抗体５０μ１，０．０１ｍＯｌ／．Ｑリン酸ソ
ーダ緩衝液１００μ１を力日えた後、室温にて５時間イ
ンキユベートした。次にモノクローナル抗ヒトヘモグロ
ビンβサブユニット抗体を固着せしめたプラスチックビ
ーズ（径６ｍｍ ）を入れ、一晩インキユベートした。
次に液相部をアスピレートによって吸引除去した後、リ
ン酸ソーダ緩衝液で３回洗浄しガンマーカウンターで放
射能を測定した。ヘモグロビン濃度とＢ／Ｔの関係図を
第２図に示した。
ン酸ソーダ緩衝液で３回洗浄しガンマーカウンターで放
射能を測定した。ヘモグロビン濃度とＢ／Ｔの関係図を
第２図に示した。
本発明方法は、従来の尿沈渣顕微鏡法の煩雄性及び定量
性の問題，あるいは尿潜血試験紙法の定量性及び特異性
の問題を解消でき、尿中に含まれる赤血球を定量的かつ
特異的に測定し得る。したがって、従来は比較的定性的
に取り扱われてぎた尿中赤血球の変動を定量的に取り扱
うことによって病態把握への有用性が期待される。
性の問題，あるいは尿潜血試験紙法の定量性及び特異性
の問題を解消でき、尿中に含まれる赤血球を定量的かつ
特異的に測定し得る。したがって、従来は比較的定性的
に取り扱われてぎた尿中赤血球の変動を定量的に取り扱
うことによって病態把握への有用性が期待される。
第１図及び第２図はそれぞれ本発明実施例１及び２にお
ける尿中又は生理食塩水中のヘモグロビン濃度と放射能
による測定値との関係を示すグラフであり、第３図は比
較例における尿中及び生理食塩水中のヘモグロビン濃度
と吸光度との関係を示すグラフである。
ける尿中又は生理食塩水中のヘモグロビン濃度と放射能
による測定値との関係を示すグラフであり、第３図は比
較例における尿中及び生理食塩水中のヘモグロビン濃度
と吸光度との関係を示すグラフである。
Claims (1)
- 尿中に含まれる赤血球を溶血させてヘモグロビンを遊離
させ、これに放射性同位元素、酵素、蛍光物質、化学発
光物質のいずれかを標識したヒトヘモグロビンを加え、
さらに抗ヒトヘモグロビン抗体を加えて競合的抗原抗体
反応を行わせるか、又は上記遊離させたヘモグロビンに
上記標識物質のいずれかを標識したモノクローナル抗ヒ
トヘモグロビン抗体と、さらに抗原決定基の異なる他の
１つのモノクローナル抗ヒトヘモグロビン抗体を固着せ
しめた固相とを加えてサンドイッチ式抗原抗体反応を行
わせ、次に抗原抗体反応生成物と未反応物とを分離し、
抗原抗体反応生成物の標識物質を検知することによつて
尿中に含まれる赤血球を測定することを特徴とする尿中
赤血球の免疫学的測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15855889A JPH0324458A (ja) | 1989-06-21 | 1989-06-21 | 尿中赤血球の免疫学的測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15855889A JPH0324458A (ja) | 1989-06-21 | 1989-06-21 | 尿中赤血球の免疫学的測定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0324458A true JPH0324458A (ja) | 1991-02-01 |
Family
ID=15674329
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15855889A Pending JPH0324458A (ja) | 1989-06-21 | 1989-06-21 | 尿中赤血球の免疫学的測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0324458A (ja) |
Cited By (4)
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| AT515236A1 (de) * | 2013-12-23 | 2015-07-15 | Fronius Int Gmbh | Schweißdrahtförderrolle und Vorschubvorrichtung zum Fördern eines Schweißdrahts |
| WO2024053586A1 (ja) * | 2022-09-05 | 2024-03-14 | 栄研化学株式会社 | 遊離ヘモグロビン測定試薬、遊離ヘモグロビン測定方法および抗ヘモグロビン抗体 |
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-
1989
- 1989-06-21 JP JP15855889A patent/JPH0324458A/ja active Pending
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