DK173687B1 - Immunkemisk fremgangsmåde til bestemmelse af antistoffer, som er specifikke for et antigen, fra en af immunglobulin-klasserne A,M,D, eller E samt middel til udførelse af fremgangsmåden - Google Patents
Immunkemisk fremgangsmåde til bestemmelse af antistoffer, som er specifikke for et antigen, fra en af immunglobulin-klasserne A,M,D, eller E samt middel til udførelse af fremgangsmåden Download PDFInfo
- Publication number
- DK173687B1 DK173687B1 DK198802775A DK277588A DK173687B1 DK 173687 B1 DK173687 B1 DK 173687B1 DK 198802775 A DK198802775 A DK 198802775A DK 277588 A DK277588 A DK 277588A DK 173687 B1 DK173687 B1 DK 173687B1
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- antigen
- immunoglobulin
- antibodies
- solid phase
- antibody
- Prior art date
Links
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 78
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 78
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 78
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 title claims abstract description 43
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 title claims abstract description 43
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 51
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 title claims description 10
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 title claims description 6
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims abstract description 27
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 21
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 12
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 17
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 9
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 4
- 241000223997 Toxoplasma gondii Species 0.000 claims description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 claims description 2
- 206010037549 Purpura Diseases 0.000 claims description 2
- 241001672981 Purpura Species 0.000 claims description 2
- 241000589884 Treponema pallidum Species 0.000 claims description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 2
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 claims description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 claims 1
- 230000003519 ventilatory effect Effects 0.000 claims 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 abstract description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 22
- 241000223996 Toxoplasma Species 0.000 description 13
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 11
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 10
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 9
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 8
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 6
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 6
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 5
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 4
- 229940043517 specific immunoglobulins Drugs 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 3
- 230000000274 adsorptive effect Effects 0.000 description 3
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 3
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 3
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 2
- -1 as a rule Substances 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 2
- 238000003115 checkerboard titration Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 2
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 2
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 2
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 description 2
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M sodium periodate Chemical compound [Na+].[O-]I(=O)(=O)=O JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- APWRZPQBPCAXFP-UHFFFAOYSA-N 1-(1-oxo-2H-isoquinolin-5-yl)-5-(trifluoromethyl)-N-[2-(trifluoromethyl)pyridin-4-yl]pyrazole-4-carboxamide Chemical compound O=C1NC=CC2=C(C=CC=C12)N1N=CC(=C1C(F)(F)F)C(=O)NC1=CC(=NC=C1)C(F)(F)F APWRZPQBPCAXFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000283725 Bos Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 1
- 208000025747 Rheumatic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000002262 Schiff base Substances 0.000 description 1
- 150000004753 Schiff bases Chemical class 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 238000000760 immunoelectrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 238000010915 one-step procedure Methods 0.000 description 1
- 229940043515 other immunoglobulins in atc Drugs 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 1
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000000552 rheumatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 238000011896 sensitive detection Methods 0.000 description 1
- 230000001235 sensitizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000013026 undiluted sample Substances 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6854—Immunoglobulins
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
- G01N33/54386—Analytical elements
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/962—Prevention or removal of interfering materials or reactants or other treatment to enhance results, e.g. determining or preventing nonspecific binding
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/82—Hepatitis associated antigens and antibodies
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
i DK 173687 B1
Den foreliggende opfindelse angår en immunkemisk fremgangsmåde til påvisning og bestemmelse af antistoffer, som er specifikke for et bestemt antigen, fra én af immun-globulin-klasserne. Fremgangsmåden er egnet til stærkt sen-5 sitiv og specifik påvisning og bestemmelse af antistoffer fra en af immunglobulin-klasserne A, M, D eller E.
Immunglobuliner er antistoffer, som dannes af organismens immunsystem mod fremmede stoffer (antigener) (f.eks. proteiner fra sygdomsfremkaldere, bakte-10 rielle polysaccharider, serumproteiner, vævsproteiner eller andre immunglobuliner). Immunglobulinmolekylet består af ét eller flere sæt på 4 polvpeptidkæder, to tunge kæder med en molekylvægt på hver ca. 53.000 dalton og to lette kæder på hver ca. 22.000 dalton, som er forbundet 15 ved hjælp af disulfidbroer.
Immunglobuliner inddeles i reglen i klasserne G, A, M, D og E og betegnes tilsvarende IgG, IgA, IgM,
IgD og IgE. Disse 5 immunglobulinklasser er forskellige med hensyn til de antigene determinanter i den tunge 20 kæde, som betegnes som gamma-, alpha-, my-, delta- og epsilon-kæde; desuden findes der for IgG's, IgA's og IgM's vedkommende også immunglobulin-underklasser.
Immunglobuliner kan spaltes i fragmenter, som har beholdt de antigen-bindende egenskaber, eller i frag-25 menter uden antigen-bindende egenskab. Antigen-bindende fragmenter er f.eks. Fab-, Fab'- og F(ab')2~fragmenter. Fragmenter uden antigen-bindende egenskab er f.eks. Fc-og Fe'-fragmenter.
Koncentrationerne af immunglobuliner i det 30 normale menneskelige serum er (i mg/ml): IgG 8-16, IgA
1,4-4, IgM 0,5-2, IgD 0,0-0,4 og IgE 0,000017-0,00045.
I det humane serum er immunglobuliner i IgG--klassen kvantitativt stærkest repræsenteret. Immunglobuliner i IgM-klassen optræder meget tidligt efter en 35 infektion, og derfor har en bestemmelse heraf betydning 2 DK 173687 B1 for en tidlig erkendelse af en infektionssygdom eller for diagnosen af en akut infektion.
Immunglobulinerne i klassen IgA er det næst-5 stærkest repræsenterede iimnunglobulin og udgør det vig-tigste sekretoriske antistof.
Immunglobuliner i klasserne IgD og IgE kan findes i forhøjet koncentration ved bestemte patologiske processer; IgE har f.eks. mastcelle-sensibiliserende 10 egenskaber og spiller en patogenetisk betydelig rolle ved en række allergiske reaktioner. igD-antistoffer findes ved autoimmunsygdomme.
Bestemmelsen af antigenspecifikke immunglobu-liner, især af en bestemt klasse, har særlig betydning 15 for påvisningen af bestemte sygdomme,der fremkaldes af parasitter, bakterier eller vira, idet herved akutte infektioner kan skelnes fra helbredte infektioner, og det eventuelt vil være muligt at udtale sig om prognosen.
Der kendes mange immunologiske metoder til be-20 stemmelse af immunglobuliner. Metoder til fysisk ad-skilelse af immunglobuliner i klasser,f.eks. immundiffusion, immunelektrophorese eller massefyldegradient-cen-trifugering, er kostbare, unøjagtige og modtagelige for forstyrrelser.
25 Antigenspecifikke immunglobuliner kan bestemmes ved en såkaldt direkte fremgangsmåde med immunanalyse-me-toder; herved kobles en immunkomponent med bindende affinitet for den antistofklasse, der skal bestemmes, til en fast bærer, f.eks. antistoffer mod μ-kæden i humant IgM, 20 og den antigen-specifikke immunglobulin-del påvises enten ved markeret antigen eller som kombination af umar-keret antigen og antigenspecifikt markeret antistof. Mængdebestemmelsen sker af den til den faste fase bundne del af den markerede immunkomponent, som er direkte 35 3 DK 173687 B1 proportional med koncentrationen af det antistof, der skal påvises.
Til markering anvendes f.eks. fluorescerende og chromophore stoffer eller radioaktive isotoper, enzy-5 mer eller partikler, der er ladet med immunkomponenter, såsom erytrocytter, eller latexpartikler; til visualisering af den forløbende reaktion kan der også anvendes en biologisk funktion af det anvendte antigen, f.eks. hæmolyse
En ulempe ved de kendte fremgangsmåder beror på, 10 at den ikke-antigenspecifikke immunglobulindel af en antaget immunglobulinklasse går i konkurrence med den antigenspecifikke del om det pågældende fastfase-antistof (competition). Derved kan der afhængigt af denne mængderelation fremkomme forskellige resultater, selv når den 15 antigenspecifikke antistofdel er uforandret den samme (den ikke-antigenspecifikke immunglobulindel kan her variere med faktoren 5 eller mere).
Ved alle de indtil nu beskrevne og citerede såkaldte direkte og indirekte metoder er det vigtigt efter 20 pr./vens omsætning (inkubation) med immunkomponenten på den faste bærer og før omsætning med påvisnings-immunkomponenten at fjerne ubundet materiale ved vask. Disse fremgangsmåder betegnes derfor som "to-trins-metoder", jf. EP-A-0.008.473.
25 Derved kræver en prøve med en færdig bærer-bun det komponent mindst tre reaktionstrin (Pri5ve/anden im-munkomponent/påvisningsreaktion), som adskilles fra hinanden af mindst to vasketrin, idet hvert reaktionstrin i sig selv kræver en bestemt reaktionstid, så at summen 30 heraf giver den samlede prøvetid.
Det er således opfindelsens formål at afkorte og forenkle den direkte prøve og at udelukke konkurrencen mellem de ikke-antigenspecifikke og antigen-specifikke immunglobuliner, så at en pålidelig kvantitativ 35 bestemmelse af den antigenspecifikke antistofdel bliver mulig.
Det har nu overraskende vist sig, at dette er 4 DK 173687 B1 muligt, idet bærerbundet immunkomponent, analytholdig prøve og markeret påvisnings-immunkomponent bringes sammen, uden at der vaskes mellem tilsætningen af prøven og tilsætningen af den markerede påvisningsimmunkomponent.
5 Denne "éttrins-metode" er blevet mulig, efter at det er lykkedes at fjerne to muligheder for forstyrrelser :
For det første skal indflydelsen fra antigen--specifikke IgG-antistoffer fjernes, så at de ikke mere 10 eller kun uvæsentligt reagerer med antigenet, hvorved den egentlige påvisningsmetode ville blive forstyrret.
Denne forstyrrelse er principielt givet, fordi der ved bestemmelsen af antigen-specifikke antistoffer fra én af immunglobulinklasserne IgA, IgM, IgE eller IgD i patient-15 prøven i reglen samtidig er antigen-specifikke IgG-anti-stoffer til stede og almindeligvis i en højere koncentration .
For det andet skal aktiviteten fra rheumafaktorer (RF) forhindres, dvs. antistoffer mod IgG, som hører til 20 forskellige immunglobulin-klasser, da denne kan give et forvansket resultat. Denne forvanskning er mulig, fordi RF bindes til fastfase-antistofferne og bindes via det af RF på sin side bundne antigen-specifikke IgG-antigen, så at der dermed fås en forkert positiv påvisningsreaktion.
25 Begge forvanskningsmuligheder kan f.eks. udeluk kes ved tilsætning af anti-humant-IgG, v-kæde, ("RF-Adsor-bens11 fra Behringwerke AG) til prøven (f.eks. serum).
Opfindelsen angår således en immunkemisk fremgangsmåde til bestemmelse af antistoffer, som er speci- ' 30 fikke for et antigen, fra én af immunglobulin-klasserne A, M, D eller E i en væske, idet en fast fase, hvortil antistofferne mod denne immunglobulin-klasse eller et fragment af et sådant antistof er bundet, bringes i kontakt med denne væske, hvorved immunglobulinet i denne 35 5 DK 173687 B1 klasse bindes til denne faste fase, og denne faste fase bringes i kontakt med antigenet, der bærer et markerings-middel eller med et markeret antistof eller et markeret fragment af et antistof mod antigenet, og at mængden af 5 dette antistof, som er specifikt for et antigen, fra én af immunglobulin-klasserne bestemmes ud fra mængden af det til den faste fase bundne markeringsmiddel, kendetegnet ved, at den fase samtidig er i kontakt med væsken, der indeholder de antistoffer, der skal bestemmes, og med det 10 enten markerede eller umarkerede antigen, idet der som stof, som forhindrer, at immunglobulin G bindes til den faste fase og eventuelt antigen bindes til immunglobulin G, tilsættes anti-humant-IgG, aggregeret humant eller animalsk IgG eller et gamma-Fc-fragment.
15 Disse stoffer kan også anvendes kombineret for at forstærke virkningen.
Et sådant stof, fortrinsvis anti-human-IgG, γ-kæ-de, (RF-Adsorbens fra Behringwerke AG) kan f.eks. sættes til prøvefortyndingspufferen, fortrinsvis i en mængde, 20 så at gennemsnitligt 15 mg/ml IgG i serummet (beregnet på den ufortyndede prøve) kompleksbindes.
Ved denne forholdsregel muliggøres en ét-trins-fremgangsmåde, ved hvilken prøven kan analyseres i en fortynding, der er 3-8 gange stærkere (f.eks. 1:700) 25 sammenlignet med den kendte to-trins-metode (prøvefortynding 1:100 til 1:200).
Samtidig udelukkes den nævnte konkurrence praktisk taget, hvorved det er muligt at mængdebestemme korrekt og reproducerbart og at opnå en højere påvis-30 ningsfølsomhed, (jf. tabel II).
En udførelsesform for fremgangsmåden ifølge opfindelsen, ved hvilken der anvendes markeret antigen, er foretrukket.
Der kan imidlertid også anvendes umarkeret 35 antigen og et mod dette antigen rettet markeret anti- 6 DK 173687 B1 stof eller 'et“markeret fragment af et sådant antistof.
Til markering anvendes f.eks. fluorescerende og chromophore stoffer eller radioaktive isotoper, enzymer eller partikler, der bærer immunkomponenter, så-5 som erythrocytter eller latexpartikler; til visualisering af den forløbende reaktion kan der også anvendes en biologisk funktion af det anvendte antigen, f.eks. hæmolysen.
Fortrinsvis anvendes et enzym.
Fortrinsvis bindes antistoffer mod immunglobu-10 lin-klassen M eller fragmenter af sådanne antistoffer, som har bibeholdt reaktiviteten med disse immunglobuli-ner, til den faste fase.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen anvendes fortrinsvis til bestemmelse af antistoffer, som er ret-15 tet mod hepatitis-B-core-protein, mod antigener af hepatitis A-, human immundefekt-(HIV)-, purpura- eller cy~ tomegalo-virus eller antigener af Treponema pallidum eller Toxoplasma gondii.
Opfindelsen angår endvidere et middel til ud-20 førelse af fremgangsmåden ifølge opfindelsen, som i det mindste består af en bærer, hvortil antistoffer, der er specifikke for en af de humane immunglobulin--klasser, er bundet, markeret antigen, som dette im-munglobulin er specifikt for, reagenser til påvisning 25 eller til bestemmelse af markeringen og som stof, der hindrer, at immunglobulin bindes til den faste fase og eventuelt antigen bindes til immunglobulin G, anti-humant-IgG, aggregeret humant eller animalsk IgG eller et gamma-Fc-fragment.
30 Fortrinsvis består et sådant middel i det mindste
af en bærer, hvortil antistoffer, der er specifikke for human IgM, er bundet, antigen, markerede antigen-specifikke antistoffer, reagenser til påvisning af markeringen og som stof, der hindrer, at immunglobulin bindes til den 35 faste fase og eventuelt antigen bindes til immunglobulin G, anti-humant-IgG, aggregeret humant eller animalsk IgG
7 DK 173687 B1 eller et gamma-Fc-fragment.
Foretrukket er også et sådant middel, som består af et eneste element, hvori alle de til fremgangsmåden nødvendige reagenser er indeholdt i tør form.
5 Som bæremateriale for den faste fase egner sig formstoffer, såsom polystyren, polyvinylchlorid, polyamid eller andre syntetiske polymerer, naturlige polymerer, såsom cellulose, samt derivatiserede naturlige polymerer såsom celluloseacetat eller nitrocellulose, samt glas, 10 især glasfibre.
"Bærerne kan foreligge i form af kugler, stave, små rør og mikroprøveplader. Fladeformede udformninger, såsom papirstrimler, små plader og membraner er ligeledes egnede. Bærerens overflade kan være såvel uigennem-15 trængelig som gennemtrængelig for vandige opløsninger.
Foretrukne bærere er mikroprøveplader.
En til fremgangsmåden ifølge opfindelsen egnet fast fase fremstilles ved, at en antistoftilberedning bindes irreversibelt til en bærer. Udtrykket "fast 20 fase" anvendes i den foreliggende beskrivelse både om. selve bæreren ‘ og om bæreren med dertil bundne immun-kemiske reaktanter.
En irreversibel binding i opfindelsens forstand foreligger f.eks. véd 25 (1) en adsorptiv binding, som ikke kan adskilles ved de ved fremgangsmåden anvendte midler, såsom markerede immunreagenser, fortyndings- eller pufferopløsninger, (2) en via et immunkemisk (høj-affine antistoffer) eller ikke-immunkemisk bindende afstandsstykke formidlet 30 bioaffin binding, idet afstandsstykket kan bestå, af biotin og avidin eller af andre pardannelser af receptorer og ligander, (3) en covalent direkte binding eller (4) en covalent, ved et kemisk bifunktionelt af-35 standsstykke formidlet binding.
8 DK 173687 B1
Den covalente binding er foretrukket, når det drejer sig om anvendelse af vandgennemtrængelige bærere, eller den adsorptive binding, når det drejer sig om anvendelse af vandgennemtrængelige samt vanduigennemtræn-5 gelige bærere.
Foretrukket er især den direkte adsorptive binding af antistoftilberedninger på en bærer af polystyren behandlet med gammastråler.
Til antistofmarkeringen kan der anvendes mono-10 klonale eller polyklonale antistoffer samt antigen-bindende fragmenter deraf, der udvindes ved fremgangsmåder, der er kendt.
Som antigener til fremstilling af markerede antigener kan anvendes klassisk rensede proteiner, syn-15 tetiske peptider eller genteknisk fremstillede proteiner, hvis fremstilling er kendt teknik.
Markeringen sker ved hjælp af kendte fremgangsmåder til anvendelse af de nævnte markører.
Når det drejer sig om markering af antistof-20 fer med peroxidase som enzym,kan man anvende periodat--teknikken (J. Histochem. Cytochem 22, 1084-1090 [1974]) eller en fremgangsmåde ifølge J. Immunoassay £u 209- 327 (1983), ved hvilken partnerne bindes med et hetero-bifunktionelt reagens.
25 Anvendelsesmulighederne for den beskrevne op findelse af en éttrins-immuntest er principielt identiske med de anvendelsesmuligheder, der foreligger for de tidligere beskrevne direkte og indirekte flertrins-prø-ver. Den foreliggende nye fremgangsmåde adskiller sig 30 fra disse i tre henseender: Ved simultaninkubationen af analyt-holdig prøve og markerede immunreagenser bortfalder et inkubationstrin og et vasketrin, hvilket medfører en betydelig forenkling ved gennemførelse af prøven.
35 Af det anførte eksempel fremgår det, at ét- trins-fremgangsmåden tillader en betydelig afkortning af prøvens samlede varighed, hvilket ved siden af den 9 DK 173687 B1 væsentlige fordel, der består i, at prøven er nem at håndtere, også har stor betydning inden for klinisk medicin for en hurtig påvisning af akutte infektioner.
For det tredje er det ved denne éttrins-frera-5 gangsmåde muligt at undersøge prøven i stærk prøvefortynding, hvilket fører til eliminering af en eventuel konkurrence og dermed tillader en pålidelig, reproducerbar bestemmelse med samtidig større påvisningsfølsomhed af antigen-specifikke immunglobuliner.
10 Det følgende eksempel beskriver en udførelsesform for opfindelsen.
Eksempel
Bestemmelse af toxoplasma-specifikt Immunglobulin M
15 i humant serum (A) En tilberedning af polyklonalt anti-human-IgM-gede-anti-human-IgM fremstilles som beskrevet i Methods of Enzymatic Analysis, 3. udg. 1986, bind X, Antigens and Antibodies 1, chefudgiver: Hans Ulrich Bergmeyer, 292- 20 308.
(B) Fremstilling af toxoplasma-antigen.
Toxoplasma gondii-parasitter formeres i bughulen hos mus i 3 dage. Efter at musene er aflivet, udvindes parasitterne ved skylning af bughulen med phosphat- 25 pufret kogsaltopløsning, pH 7,2, og vaskes ved gentagen centrifuge-sedimentering og resuspenderes. En således fremstillet suspension behandles under afkøling med ultralyd og fracentrifugeres, og overfasen anvendes som antigen til enzymmarkeringen.
30 (C) Antigenets enzymmarkering.
a) 20 mg peroxidase (POD) optages i 0,5 ml phosphatpufret kogsaltopløsning (PBS), pH 7,0, og aktiveres ved tilsætning af 0,6 ml natriumperiodat. Efter 30 minutters forløb ved stuetemperatur fjernes periodat- 35 overskuddet ved chromatografi (G25 Sephadex), og det brungrønne eluat (aktiveret POD) opfanges.
b) Peroxidasens kobling til antigenet.
10 DK 173687 B1
Til to vægtdele aktiveret peroxidase sættes 1 vægtdel toxoplasma-antigen med kogsalt-carbonatpuffer, pH
9,5, og der blandes. Efter inkubation i 2 timer ved stuetemperatur reduceres de dannede Schiff-baser ved tilsætning 5 af 1 mg natriumborhydrid pr. mg POD. Det farvede konjugat stabiliseres ved tilsætning af 1 mg/ml phenol og 2% ok-seserumalbumin. Den optimale brugsfortynding ved prøven fås ved skakbrættitrering, idet toxoplasma-IgM-positive og -negative sera bedømmes som beskrevet i afsnit E ved 10 éttrins-prøven med forskellige koncentrationer af antigen-peroxidase-konjugatet. Som optimal koncentration vælges den, ved hvilken signalforskellen mellem positiv og negativ prøve er størst.
(D) Pålægning på polystyren-mikrotiterplader af 15 et lag anti-human-IgM
Bestrålede polystyren-mikrotiterplader (ifølge EP-patentskrift nr. 0.061.167) inkuberes pr. fordybning med 100 gliter af en opløsning af anti-human-IgM i phosphatpufret kogsaltopløsning, pH 7,5, i flere timer ved 20 stuetemp. Antistofopløsningens optimale koncentration fås i forvejen ved hjælp af seriefortynding og afprøvning af denne prøvelagpålægning. Derpå suges pladerne tomme, vaskes med phosphatpufret kogsaltopløsning, tørres ved hjælp af silicagel og pakkes luft- og vanddamptæt.
25 (E) Bestemmelse af toxoplasma-IgM-antistoffer ved éttrinsfremgangsmåden ifølge opfindelsen a) En serumprøve samt en toxoplasma-IgM-po-sitiv og toxoplasma-IgM-negativ kontrolprøve fortyndes hver 1:350 med 0,3 mol/liter trispufferopløsning, pH 7,5, 20 indeholdende 5 ml /100 ml toxoplasma-antistoffrit oksese-rum, 0,1 ml/100 ml "Tween 20,fiy (polyoxyethylensorbitan-monolaurat) og antistof mod humant IgG (γ-kæde) i en koncentration, så at der bindes 15 mg/ml IgG, beregnet på den 11 DK 173687 B1 ufortyndede prøve; b) 50 μliter af hver fyldes i hver fordybning ' i de med lag forsynede mikrotiterplader, hvori der i forvejen pr. fordybning findes 50 pliter peroxidase-mar- 5 keret toxoplasma-antigen med en i forvejen ved hjælp af skakbrættitrering bestemt optimal koncentration, i samme puffer, c) prøvepladen afdækkes og inkuberes i 2 timer ved 37°C, 10 d) derpå suges indholdet fra og vaskes 3 gange med PBS indeholdende 0,1 ml/100 ml "Tween 20"®,
e) nu tilsættes pr. fordybning 100 μliter chro-mogen (o-phenylendiamin-HCl) i citrat-phosphatpuffer, pH
5,5, og inkuberes ved stuetemperatur i 30 minutter; f) derefter tilsættes der pr. fordybning 100 μΙ^βΓ 1 N svovlsyre for at afbryde den enzymatiske substratreaktion, og opløsningerne måles i et photometer ved 492 nm.
g) Eksempler på opnåede resultater 20
Tabel I
Milliekstinktion (mE 492 nm)
Stærkt positiv kontrol 1080 25 Svagt positiv kontrol 314
Negativ kontrol 58
Positiv prøve 1302
Negativ prøve 104 30 En prøve bedømmes som positiv, når den ligger over en værdi, der fås ud fra negativ-kontrollens ekstinktion plus 100 mE (i eksemplet 158 mE).
(F) Bestemmelse af IgM-antistoffer ved den kendte totrinsmetode 35 Der anvendes det samme peroxidase-markerede toxoplasma-antigen, hvis fremstilling er beskrevet i ek- DK 173687 B1 12 eksemplets afsnit Cb, og de samme mikroprøveplader, hvis fremstilling er beskrevet i afsnit D.
a) De i tabel II anførte serumprver fortyndes hver 1:200 med 0,3 mol/liter trispufferopløsning, pH 7,5, 5 indeholdende 5 ml/100 ml toxoplasma-antistoffrit okseserum og 0,1 ml/100 ml "Tween 20"® (polyoxyethylensorbitanmonc-laurat); b) 50 μϋίθΓ af hver sættes til hver fordybning 1 den med lag forsynede mikrotiterplade; 10 c) prøvepladen afdækkes og inkuberes i en time ved 3 7 0 C; d) indholdet suges fra og vaskes 3 gange med PBS indeholdende 0,1 ml/100 ml "Tween 20'^; e) derpå sættes der til hver fordybning 50 15 pliter peroxidase-markeret toxoplasma-antigen; f) prøvepladen ‘afdækkes igen og inkuberes i 2 timer ved 37°C: g) derpå suges indholdet fra og vaskes 3 gange med PBS indeholdende 0,1 ml/100 ml "Tween 20'®; 20 h) nu sættes der til hver fordybning 100 Mliter chromogen (o-phenylendiamin-HCl) i citrat-phosphatpuffer, pH 5,5, og der inkuberes ved stuetemperatur i 30 minutter; i) derpå tilsættes der pr. fordybning 100 μΐί-ter IN svovlsyre for at afbryde den enzymatiske substrat-25 reaktion, og opløsningerne måles i et photometer ved 492 nm.
De i tabel II anførte serumprøver behandles også ved den i afsnittene Ea)-Ef) beskrevne éttrins-fremgangsmåde.
Resultaterne af de to fremgangsmåder er anført i tabel II.
30 35 DK 173687 B1 13
Tabel II
Milliekstinktion (mE.00 492 nm
Ettrinsmetode Totrinsmetode
Prøvevar. 2,0 h Prøvevar. 3,5 h 5 Pos. kontroller 1.400 (1.600) 2.300
Neg, kontroller_88 ( 141)_136_
Patientsera 1 204 (145) 155 2 498 (127) 133 3 495 (102) 159 10 4 499 (110) 123 5 466 (113) 118 6 466 (158) 202 7* 1480 (428) 621 15 ( ) De ved éttrinsmetoden opnåede ekstinktions
værdier uden tillæg af RF-absorbans * Indeholder 30 g/liter IgG
Det fremgår af de målte værdier for ekstinktio-20 nen, som er et mål for indholdet af toxoplasma IgM-anti-stoffer i seraene, at éttrinsmetoden giver positive resultater for patientseraene 1-6 (mE^g2 nm større end 88 + 100), som efter totrinsmetoden giver negative resultater (mE.QO mindre end 136 + 100).
4y z nm 25 Udeladelsen af RF-absorbans ved éttrinsmeto den giver ved mange sera forkerte negative værdier, f. eks. for seraene 1-6, eller lavere værdier, f.eks. for serum 7, som det fremgår af værdierne i parentes.
Påvisningen af toxoplasma IgM-antistoffer ef-30 ter éttrinsmetoden er således mere følsom, og påvisningen af de nævnte og andre antistoffer sker hurtigere og enklere, således som en sammenligning af forbrugt arbejde for begge metoder viser, således som det fremgår af afsnittene E og F.
35
Claims (10)
1. Immunkemisk fremgangsmåde til bestemmelse af antistoffer, som er specifikke for et antigen, fra én af immunglobulin-klasserne A, M, D eller E i en væske, idet 5 en fast fase, hvortil antistoffer mod denne immungiobulin-klasse eller et fragment af et sådant antistof er bundet, bringes i kontakt med denne væske, hvorved immunglobulinet af denne klasse bindes til denne faste fase, og denne faste fase bringes i kontakt med antigenet, der bærer et 10 markeringsmiddel eller med et markeret antistof eller et markeret fragment af et antistof mod antigenet, og at mængden af dette antistof, som er specifikt for et antigen, fra én af immunglobulin-klasserne bestemmes ud fra mæng-denaf det til den faste fase bundne markeringsmiddel, 15 kendetegnet ved, at den fase samtidig er i kontakt med væsken, der indeholder de antistoffer, der skal bestemmes, og med det enten markerede eller umarkerede antigen, idet der som stof, som forhindrer, at immunglobu-lin G bindes til den faste fase og eventuelt antigen bindes 20 til immunglobulin G, tilsættes anti-humant-IgG, aggregre-ret humant eller animalsk IgG eller et gamma-Fc-fragment.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at der anvendes markeret antigen.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendete g -25 net ved, at der anvendes umarkeret antigen og et mod dette antigen rettet markeret antistof eller et markeret fragment af et sådant antistof.
4. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det ene eller begge antistoffer er mono- 30 klonale antistoffer eller et fragment af monoklonale antistoffer.
5. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at de antistoffer, der skal bestemmes, er af immunglobulin-klassen M, som er rettet mod heptatitis-B- 3. core-protein, mod antigener af hepatitis A-, human immun -defekt- (HIV), purpura- eller cytomegali-virus eller pro- 15 DK 173687 B1 teiner af Treponema pallidum eller Toxoplasma gondii.
6. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at markeringsmidlet er et enzym.
7. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendeteg-5 net ved, at markeringsmidlet er erythrocytter.
8. Middel til udførelse af fremgangsmåden ifølge eksempel 1, kendetegnet ved, at det i det mindste består af en bærer, hvortil for humant IgM specifikke antistoffer er bundet, samt markeret antigen, for hvilket 10 dette IgM er specifikt, reagenser til påvisning eller til bestemmelse af markeringen og som stof, der hindrer, at im-munglobulin bindes til den faste fase og eventuelt antigen bindes til immunglobulin G, anti-humant-IgG, aggregeret humant eller animalsk IgG eller et gamma-Fc-fragment.
9. Middel til udførelse af fremgangsmåden ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det i det mindste består af en bærer, hvortil for humant IgM specifikke antistoffer er bundet, samt antigen, markeret antigenspecifikt antistof og reagenser til påvisning af markerin-20 gen og som stof, der hindrer, at immunglobulin bindes til den faste fase og eventuelt antigen bindes til immunglobulin G, anti-humant-IgG, aggregeret humant eller animalsk IgG eller et gamma-Fc-fragment.
10. Middel til udførelse af fremgangsmåden ifølge 25 krav 1, kendetegnet ved, at det består af et enkelt element, hvori alle de til fremgangsmåden nødvendige reagenser er indeholdt i tør form.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3717401 | 1987-05-23 | ||
| DE19873717401 DE3717401A1 (de) | 1987-05-23 | 1987-05-23 | Einschritt-immuntest zur bestimmung von antigen-spezifischen antikoerpern aus einer der immunglobulin-klassen a, m, d oder e und dazu geeignetes mittel |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK277588D0 DK277588D0 (da) | 1988-05-20 |
| DK277588A DK277588A (da) | 1988-11-24 |
| DK173687B1 true DK173687B1 (da) | 2001-06-25 |
Family
ID=6328247
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK198802775A DK173687B1 (da) | 1987-05-23 | 1988-05-20 | Immunkemisk fremgangsmåde til bestemmelse af antistoffer, som er specifikke for et antigen, fra en af immunglobulin-klasserne A,M,D, eller E samt middel til udførelse af fremgangsmåden |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6632682B1 (da) |
| EP (1) | EP0292810B1 (da) |
| JP (1) | JP2636331B2 (da) |
| AT (1) | ATE93060T1 (da) |
| AU (1) | AU619183B2 (da) |
| CA (1) | CA1336063C (da) |
| DE (2) | DE3717401A1 (da) |
| DK (1) | DK173687B1 (da) |
| ES (1) | ES2059434T3 (da) |
| FI (1) | FI89984C (da) |
| NO (1) | NO172264C (da) |
Families Citing this family (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3837616A1 (de) * | 1988-11-05 | 1990-05-10 | Behringwerke Ag | Einschritt-immuntest zur bestimmung von antigen-spezifischen antikoerpern aller immunglobulin-klassen und dazu geeignetes mittel |
| FR2640143B1 (fr) * | 1988-12-13 | 1991-03-15 | Maes Ludo | Anticorps polymerises, diriges contre des immunoglobulines - leur utilisation dans des tests de diagnostic |
| JPH0325366A (ja) * | 1989-06-22 | 1991-02-04 | Dai Ichi Pure Chem Co Ltd | 特異抗体の測定法 |
| WO1991008485A1 (en) * | 1989-12-01 | 1991-06-13 | Pb Diagnostic Systems, Inc. | Immunoassay for antibodies to infectious disease agents |
| DE4040306A1 (de) * | 1990-12-17 | 1992-06-25 | Behringwerke Ag | Verfahren zur bestimmung von antikoerpern gegen lipocortine |
| WO1992018865A1 (en) * | 1991-04-11 | 1992-10-29 | Cedars-Sinai Medical Center | Immunoassay for the detection of hiv specific igm |
| DE4439452A1 (de) * | 1994-11-04 | 1996-05-09 | Boehringer Mannheim Gmbh | Antikörperklassenspezifisches Entstörungsreagenz |
| DE19649389A1 (de) * | 1996-11-29 | 1998-06-04 | Boehringer Mannheim Gmbh | Antigenspezifischer IgM-Nachweis |
| DE69931632T2 (de) * | 1998-03-30 | 2006-12-07 | Orasure Technologies, Inc. | Sammelapparat für einschrittigen test von mundflüssigkeiten |
| US6303081B1 (en) * | 1998-03-30 | 2001-10-16 | Orasure Technologies, Inc. | Device for collection and assay of oral fluids |
| US8062908B2 (en) * | 1999-03-29 | 2011-11-22 | Orasure Technologies, Inc. | Device for collection and assay of oral fluids |
| HU228049B1 (en) * | 1998-06-24 | 2012-09-28 | Alk Abello As | Method of detecting an antibody in a liquid sample |
| US8323903B2 (en) | 2001-10-12 | 2012-12-04 | Life Technologies Corporation | Antibody complexes and methods for immunolabeling |
| US20050069962A1 (en) | 2001-10-12 | 2005-03-31 | Archer Robert M | Antibody complexes and methods for immunolabeling |
| EP2184608B1 (en) * | 2007-08-23 | 2016-10-05 | LSI Medience Corporation | Non-specific reaction inhibitor |
| KR101343035B1 (ko) * | 2008-12-22 | 2013-12-18 | 삼성전자 주식회사 | 제1수용체, 차단물질 및 제2수용체가 고정화된 고체 기판을포함하는 표적물질을 분석하기 위한 물품 및 그 용도 |
| WO2011074965A1 (en) * | 2009-12-17 | 2011-06-23 | Stichting Sanquin Bloedvoorziening | Methods and means for counteracting an activity of an fc domain |
| US10260111B1 (en) | 2014-01-20 | 2019-04-16 | Brett Eric Etchebarne | Method of detecting sepsis-related microorganisms and detecting antibiotic-resistant sepsis-related microorganisms in a fluid sample |
| WO2020061135A1 (en) * | 2018-09-18 | 2020-03-26 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Methods and reagents for zika virus immunoassays |
| FR3110245A1 (fr) * | 2019-05-16 | 2021-11-19 | Universite Jean Monnet Saint Etienne | Procede de detection de pneumocoques |
| CN111077323A (zh) * | 2020-01-12 | 2020-04-28 | 天津市宝坻区人民医院 | 消除胰岛素自身抗体干扰的胰岛素测定试剂盒 |
Family Cites Families (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4130634A (en) * | 1974-03-15 | 1978-12-19 | University Of Illinois Foundation | Method for detecting and quantifying antigens |
| DE2643208C2 (de) * | 1976-09-25 | 1985-09-05 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Immunologisches Bestimmungsverfahren |
| US4273756A (en) * | 1978-07-28 | 1981-06-16 | Abbott Laboratories | Immunoassay for class specific antibodies |
| US4292403A (en) * | 1978-08-24 | 1981-09-29 | Akzona Incorporated | Detection and/or determination of IgM, IgA, IgD and IgE immunoglobulins |
| EP0008473B1 (en) * | 1978-08-24 | 1983-06-01 | Akzo N.V. | Method for the detection and/or determination of an antigen specific immunoglobulin, immuno-reagents to be used in said method and test kit for said determination |
| DE2930706A1 (de) * | 1979-07-28 | 1981-02-05 | Medac Klinische Spezialpraep | Verfahren zum nachweis von erregerspezifischen antikoerpern |
| US4486530A (en) * | 1980-08-04 | 1984-12-04 | Hybritech Incorporated | Immunometric assays using monoclonal antibodies |
| DE3111474A1 (de) | 1981-03-24 | 1982-10-07 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | "mittel zur immunologischen diagnose sowie verfahren zu seiner herstellung" |
| DE3266967D1 (en) * | 1982-01-05 | 1985-11-21 | Int Inst Cellular Molecul Path | Method of immunoassay |
| US4434227A (en) * | 1982-02-08 | 1984-02-28 | Abbott Laboratories | Immunoassay for class specific immunoglobulin antibodies |
| DE3206729A1 (de) * | 1982-02-25 | 1983-09-01 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Immunologisches agglutinationsverfahren |
| US4477576A (en) * | 1982-07-26 | 1984-10-16 | Mex Research Associates | Antigen assay method and kit |
| FR2534030A1 (fr) * | 1982-10-01 | 1984-04-06 | Pasteur Institut | Procede de detection et de dosage d'une substance biologique par erythroadsorption |
| US4663277A (en) * | 1983-05-20 | 1987-05-05 | Profile Diagnostic Sciences Inc. | Virus detection method and materials |
| JPS60256057A (ja) * | 1984-06-01 | 1985-12-17 | Dai Ichi Pure Chem Co Ltd | 免疫学的測定法 |
| JPS61942A (ja) * | 1984-06-14 | 1986-01-06 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 光情報記録媒体 |
| DE3662730D1 (en) * | 1985-01-24 | 1989-05-11 | Inst Int Pathologie Cellulaire | Immunoassay method for antibodies of different classes in a liquid sample |
| BE901567A (fr) * | 1985-01-24 | 1985-05-17 | Inst Internat De Pathologie Ce | Procede de dosage immunologique d'anticorps de diverses classes dans un echantillon liquide. |
| IL80129A0 (en) * | 1986-09-23 | 1986-12-31 | Savyon Diagnostics Ltd | Method for the determination of igm and iga immunoglobulins and reagents therefor |
| US4962023A (en) * | 1987-06-22 | 1990-10-09 | Louisiana State University, Agricultural And Mechanical College | Single incubation immuno sorbent assay method using particle labels to detect test antigen specific antibodies in presence of other antibodies |
-
1987
- 1987-05-23 DE DE19873717401 patent/DE3717401A1/de not_active Withdrawn
-
1988
- 1988-05-13 EP EP88107704A patent/EP0292810B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-05-13 AT AT88107704T patent/ATE93060T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-05-13 DE DE8888107704T patent/DE3883073D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1988-05-13 ES ES88107704T patent/ES2059434T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1988-05-19 FI FI882356A patent/FI89984C/fi not_active IP Right Cessation
- 1988-05-20 CA CA000567380A patent/CA1336063C/en not_active Expired - Fee Related
- 1988-05-20 JP JP63122214A patent/JP2636331B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1988-05-20 DK DK198802775A patent/DK173687B1/da not_active IP Right Cessation
- 1988-05-20 NO NO882204A patent/NO172264C/no unknown
- 1988-05-20 AU AU16485/88A patent/AU619183B2/en not_active Ceased
-
1995
- 1995-05-22 US US08/445,584 patent/US6632682B1/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU619183B2 (en) | 1992-01-23 |
| JP2636331B2 (ja) | 1997-07-30 |
| DE3883073D1 (de) | 1993-09-16 |
| NO882204D0 (no) | 1988-05-20 |
| FI882356A0 (fi) | 1988-05-19 |
| FI882356A (fi) | 1988-11-24 |
| FI89984B (fi) | 1993-08-31 |
| EP0292810A2 (de) | 1988-11-30 |
| US6632682B1 (en) | 2003-10-14 |
| NO172264C (no) | 1993-06-23 |
| ATE93060T1 (de) | 1993-08-15 |
| DK277588D0 (da) | 1988-05-20 |
| ES2059434T3 (es) | 1994-11-16 |
| CA1336063C (en) | 1995-06-27 |
| NO172264B (no) | 1993-03-15 |
| EP0292810B1 (de) | 1993-08-11 |
| FI89984C (fi) | 1993-12-10 |
| AU1648588A (en) | 1989-11-23 |
| DK277588A (da) | 1988-11-24 |
| DE3717401A1 (de) | 1988-12-08 |
| JPH01118769A (ja) | 1989-05-11 |
| NO882204L (no) | 1988-11-24 |
| EP0292810A3 (en) | 1989-10-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK173687B1 (da) | Immunkemisk fremgangsmåde til bestemmelse af antistoffer, som er specifikke for et antigen, fra en af immunglobulin-klasserne A,M,D, eller E samt middel til udførelse af fremgangsmåden | |
| US4294817A (en) | Method of fluoro immunoassay | |
| CA1098032A (en) | Solid phase assay of non-human antibody | |
| CA1268419A (en) | Immunoassay for htlv-iii antigens | |
| JP3202772B2 (ja) | ヘリコバクターピロリ検出用の抗原調製物 | |
| US4292403A (en) | Detection and/or determination of IgM, IgA, IgD and IgE immunoglobulins | |
| NL1003570C2 (nl) | Methode voor antigeen- en antistofbepaling in de bloedgroepserologie. | |
| US6489129B1 (en) | Antigen-specific IgM detection | |
| JP2599058B2 (ja) | クラス特異的な免疫グロブリン抗体の免疫分析法 | |
| EP0355099B1 (en) | Immunoglobulin assay method | |
| JPS6367661B2 (da) | ||
| CA1140464A (en) | Viral antibody assay using diluted whole human blood | |
| JPS63128260A (ja) | 抗ｈｉｖの測定法、そのための手段およびその使用 | |
| US4753893A (en) | Method and article for detection of immune complexes | |
| CA1340405C (en) | Method for detecting antibodies to human immunodeficiency virus | |
| CN113156143A (zh) | 血型不规则抗体特异性鉴定方法及其试剂 | |
| EP0038150A1 (en) | Sero-diagnostic method for syphilis and other diseases | |
| US4877726A (en) | Method for the detection of acute-phase toxoplasma infection | |
| CA2005204C (en) | Solid phase immunoassay with lyophilised conjugate | |
| CA1172561A (en) | Igm detection method | |
| AU645970B2 (en) | A method for the determination of antibodies against organisms causing infectious diseases in body fluids, agents for this purpose and the use thereof in this method | |
| CA2060216A1 (en) | Assay for lyme disease | |
| JPH02171655A (ja) | 全イムノグロブリンクラスの抗原特異的抗体を測定するための１段階イムノアツセイ | |
| WO1995006255A1 (en) | Hydrazine derivatized cells | |
| JPH05346428A (ja) | 顆粒球の迅速なカウントのためのキット及び前記キットを使用する方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |
Country of ref document: DK |