JPS62123359A - 固相免疫測定用成形品及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、免疫検査の一手法である固相免疫測定法に用
いられる、試料の容器もしくは担体に関するものである
。

〔従来技術〕

近年、医学の幅広い分野で免疫反応を利用した分析手法
が取シ入れられ、血中薬物の定量、癌性たん白質の検出
、組織適合性の決定などが行なわれ、非常に有用な臨床
データを与えている。また、現在著しい展開を見せてい
るバイオテクノロジーの各分野でも、この免疫反応を利
用した分析手法が取り入れられている。たとえば、遺伝
子変換によって生みだされる生理活性物質の検知や農作
物に感染したウィルスの同定など、この手法は欠くべか
らざるものとなっている。

免疫反応を利用した分析法としては種々の方法がある。

すなわち、免疫拡散法、免疫クロマトグラフィー、免疫
電気泳動法、補体結合反応、赤血球凝集反応、受身赤血
球凝集反応、けい光抗体法、ラジオイムノアッセイ、酵
素免疫測定法等である。

このなかでも、抗原もしくは抗体を固相上に固定して測
定を行う手法を固相免疫測定法と言い、たとえば固相ラ
ジオイムノアッセイや、固相酵素免疫測定法（Ｅｎｚ）
ｒｍｅ　Ｌｉｎｋｅｄ　Ｉｒｒｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ
　Ａｓ５ａｙ、以下ＥＬＩＳＡという）がある。この固
相免疫測定法は、多くの免疫測定法の中でも最も感度高
く定量できる手法である。この測定法は、あらかじめ固
相上に抗原もしくは抗体を固定し、ラジオアイソトープ
、けい光性物質もしくは酵素等の標識物を結合させた抗
体もしくは抗原と、抗原−抗体反応を行わせる。反応物
と未反応物の分離は洗浄によって容易に行う事ができ、
固相表面に抗原−抗体反応によって固定された抗原もし
くは抗体は、標識物を測定する事によシ定量できる。

この測定法では、抗原もしくは抗体を固相へ多量に、且
つ安定性良く吸着固定する事が重要であるが、従来、固
相担体の表面に固定される抗原や抗体の量は少なく満足
のいくものではなかった。

そこで、固相表面に何らかの処理を加えることによって
、抗原や抗体が吸着固定され易くするための研究が行な
われ、例えば、ヒリスチレン系ゴリマーの測定用担体全
発煙硫酸または無水硫酸中で処理することによってスル
フォン酸基を導入し、抗原や抗体の固定量を増大させた
免疫測定用固相担体（特開昭５９−８４１６１号公報）
、基体表面をプラズマ処理することによって基体の表面
化学性を変性し、大分子の結合および／または配向を制
御し、抗体等の結合器を増大させる方法（特開昭５９−
８０４４２号公報）等が開示されている。

しかしながら、これらの処理によってもなお固体表面に
おける抗原や抗体の吸着固定量は十分なものとは言えず
、さらに向上させることが求められている。

〔発明の目的〕

本発明は、従来の固相免疫測定法用成形品の持つ欠点、
すなわち抗原の吸着性が十分ではないという点を解決す
るため、単なる材質の検討や化学的表面処理の手法検討
にとどまらず、物理的、電気的な検討を鋭意進めた結果
、本発明を完成するに至ったものである。その目的とす
るところは、従来は吸着性が低く測定が行えなかった抗
原もしくは抗体（たん白質、糖たん白、Ｒゾチド＃）の
吸着固定性を増した免疫測定用成形品を提供するところ
にある。

〔発明の構成〕

即ち本発明は、プラスチック成形品の表面をプラズマ処
理した後、さらに過酸化物の溶液で処理し、表面に安定
なば化状態を形成させることによって抗原もしくは抗体
の吸着固定性を増大させたことを特徴とする、固相免疫
測定用成形品及びその展進方法である。

本発明の固相免疫測定用成形品を構成するプラスチック
としては、ポリスチレン、ピリ塩化ビニル、プリカーボ
ネート、ピリエチレン、ぼりプロピレン、ピリメチル（
ンテン、ナイロン−６、ナイロン−６６、メタアクリル
樹脂、ＡＢＳｍ脂、シリコンゴム等を使用することが出
来るが、プラズマ処理によって表面を活性化できるもの
であれば特に限定されるものではない。成形品の形状は
、免疫測定の方法によって自ずと決まって来るもので特
に限定されるものではなく、試験管、ビーズ、マイクロ
プレート、キーペット、ディスクなどがその好例である
。これらの成形品で特に透明性を必要とされる場合は、
材質としてピリスチレン、ピリ塩化ビニル、ピリカーボ
ネート、ピリメチルペンテン、メタアクリル樹脂等を用
いるのが好適である。

プラズマを発生させるための気体としては、レアーガス
（ヘリウム、ネオン、アルゴン、クリプトン、キセノン
等の稀ガス）、窒素、ｒＲ素、−酸化炭素、二酸化炭素
等を使用することが出来るが、これらの内の２ｆｆ１以
上からなる混合気体であってもよい。プラズマの発生条
件としては、上記の気体の存在下で真空圧を０．００１
〜３Ｔｏｒｒとし、１〜２００メガヘルツの高周波電流
を印加し、その出力はプラズマ発生装置の大小によシ異
なるが１０〜Ｌ０００Ｗとするのが適切である。処理時
間は２〜６゛０分、好ましくは５〜４０分とするのが好
適である。処理時間が短かく２分未満の場合は表面処理
の効果が不十分であり、長い場合は成形品の温度が高く
なり、プラスチックの種類によつては形状等が変化して
しまう恐れがあり、６０分を越５えるのは好ましくない
。

次いで過酸化物の溶液に浸漬して表面処理を行うが、こ
れはプラズマ処理によって化学構造が変化し、活性化状
態になっているプラスチック成形品の表面を、過酸化物
により安定な酸化状態にすることを目的としたものであ
る。過酸化物としては例えば、過酸化水素、過酸化ナト
リウム、過酸化水素ナトリウム、過安息香酸、過酢酸、
過酸化ジエチル、過酸化ベンゾイル等を使用することが
できる。その溶媒としては、水が最も取シ扱い易くまた
安価でもあり適切であるが、過安息香酸、過酸化ベンゾ
イル等のように水に溶は難い場合は、プラスチックを溶
解させないものであればアルコール、ケトン等の有機溶
媒を使用してもよい。

〔発明の効果〕

分析結果を与えるもので、医療診断分野、バイオテクノ
ロジーの研究分野等で極めて有用なものである。その製
造法においてもプラズマ処理に簡便な方法で後処理を行
なうだけでよく、且つ成形品の形状を問わずいかなる形
状へも応用が可能であるという長所がある。

以下実施例、比較例によシ本発明を説明する。

〔実施例〕

９６ウエルマルチプレート（住友ベークライト■製）に
低温プラズマ処理装置を用いて、アルゴンプラズマ（圧
力０．２Ｔｏｒｒ＋　高周波１３．５６　ＭＨｚ　。

出カフ００Ｗ）で１０分間処理する。次に、過酸化水素
の５チ水溶液中に４０℃、６０分間浸漬し、純水で洗浄
した後、５０℃で３時間真空乾燥を行なった。

このプレートの各ウェルに、塩基性蛋白質アビジン（シ
グマ社製）をリン酸塩緩衝液を用いて１．１０及び１ｏ
ｏｐｆ／ｍｆｌの濃度１ｃ！ＪＪＪＩ！　した試料を１
００μｔ／ウェル加えて、４℃で１８８時間静置て吸着
固相化した。次に、ツイーン２０（花王アトラス社製）
０．０５％含有生理食塩水（以下、洗浄液という）で３
回洗浄して未成着分を除去した後、牛アルブミン（和光
紬薬■）３％溶液を１５０μｔ／ウェル加えて室温で２
時間静置した。洗浄液で３回洗浄した後、ビオチン標識
アルカリフォスファターゼ（ベクター社製）の５単位／
ｍｌ溶液を１００μｔ／ウェル加えて室温で２時間静置
し、ウェルの内壁に吸着固相化したアビジンと反応させ
た。

洗浄液で３回洗浄した後、基質液（フェニルリン酸２−
ナトリウム３．８ｍＭ、　４−アミノアンチピリン５．
４ｍＭ、塩化マグネシウム５０ｎＭを含む０．０５Ｍ炭
酸塩緩衝液）を１００μｔ／ウェル加え、３７℃で６０
分間加温して酵素反応を行って発色させた後、フェリシ
アン化カリウム（３６ｍＭ）　１００μｔ／ウエルを加
えて反応を停止した。波長４９２ｎｍで発色液の吸光度
を測定し、その結果を第１表に示した。

〔比較例〕

実施例と同じ９６ウエルマルチプレートを使用して、全
く処理を施こさないものを比較例１とし、また、実施例
と同一の条件で、過酸化水素処理のみを行なったものを
比較例２、アルゴンプラズマ処理のみを行なったものを
比較例３とした。夫々について、実施例と同様に処理し
て蛋白質の吸着性を評価した。吸光度の測定結果は第１
表に示し九通シであった。

第　　　１　　　表 第１表から明らかなように、本発明の方法で処理を行な
ったマイクロプレートは、比較例に比べて吸光度が大き
く、塩基性蛋白質アジピンの吸着、固定性が増大してい
ることが分かる。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）プラスチック成形品の表面をプラズマ処理した後
   、さらに過酸化物で処理し、抗原もしくは抗体の吸着固
   定性を増大させたことを特徴とする固相免疫測定用成形
   品。
2. （２）プラスチック成形品の表面を、レアーガス、窒素
   、酸素、一酸化炭素及び二酸化炭素よりなるガス群から
   選ばれた１種または２種以上の混合物のプラズマで処理
   した後、さらに過酸化物の溶液で処理し、表面に安定な
   酸化状態を形成させることを特徴とする固相免疫測定用
   成形品の製造方法。