JPS62187489A - リゾチ−ム由来のペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は鶏卵リゾチームに由来するペプチド、その製造
方法及びかかるペプチドを含有する薬剤に関する。

ニワトリ卵白より抽出されたリゾチームは、その正体及
び配列順序が正確に知られている１２９のアミノ酸残基
からなる小さな球状のタンパク質である。

リシン及びアルギニンの含有量が多いことから、リゾチ
ームは等電点が約１０．５乃至１１であり、多くの無機
及び有機酸、特に塩酸と水溶性の塩を生成する等の明ら
かな基本的特徴を有する。

リゾチーム分子はそれ自身折りたたまれており、４つの
ジスルフィド架橋によりかかるコンフォメーションが安
定化されている。リゾチームの安定性が中性から大巾に
かけはなれたＰＨ（特に酸性側）で比較的高温の溶液中
でも比較的高いのは、主としてかかる構造によるもので
ある。しかしながら１分子のｗｋ密なフンフォメーショ
ンは、リゾチームがその代表的な酵素作用を行うために
基体が接触しなければならない活性部位である側腔（５
ｉｄｅ　ｃａｖｉｔ７　）により阻害”Ｊ’Ｌ６．ｌＪ
ゾ＋−ムは、加水分解機構により、細菌細胞の膜の基本
的構成成分であるＮ−７セチルムラミン酸及びムコ多糖
のＮ−７セチルグルコサミンの間のβ−グルコシド結合
（１→４）を選択的に切断するため、その作用範囲が比
較的限られてはいるものの有効な溶菌作用がある０作用
の機構と部位を考慮すると、リゾチームの抗菌作用は、
その構造の集束性（三次元的に考えても）によることは
明らがであり、ある意味では１分子の状態の混乱は細菌
の膜のムコ多糖の基体の接近や直接の付着を防げるもの
ではない。

上記のムラミダーゼの第１の特徴とは別に、リゾチーム
は他の！ｉＷな薬物生物学的及び治療上の作用があり、
その生物学的多面性により、臨床の分野で非常に多く用
いられていることが知られている。実際リゾチームは、
きわだった抗菌作用を有しており、長い間庖疹性ビール
スの感染の治療に用いられている。また、Ｂ−リンパ球
、ヘルパー及びサプレッサーニー９フ２球及びマクロフ
ァージ等の様々な免疫システムの構成要素の相互作用を
通して転形剤（ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ　ａｇｅｎｔ）と
して免疫反応を防たげ、それらの連続的な平衡状態を条
件ずけることができる。更に、膜の改変の抑制、とりわ
け悪性形質転換に関する改変の抑制に既にはっきりとし
た役割をはたしている。更にリゾチームは、炎症部位に
於ける多形核白血球の増大を抑制することができ、かか
る症状に於けるモジュレータ−の役割を果たすものであ
る。リゾチームは、実験的〔マウスやラットにおける刺
激物で誘発された腹部の収縮を抑え、又は足の痛みの域
値（ｐａｉｎｆｕｌ　ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ　ｏｆ　ｐａ
ｗ）を上げる）及び臨床的に証明されている明らかな調
性作用があり、ガンの症状における苦痛の緩和に特に有
用である。リゾチーム鎖のフラグメントとして表わすこ
とのできる一連のペプチドが、リゾチームそれ自体が有
するよりも高い重要な生物学的、治療的特性を有するこ
とがわかった。

本発明に係るペプチドは、少くとも３以上の７Ａｓｐ−
Ｇ　ｌ　ｙ−９ｓ　ｒ−Ｔｈ　ｒ−Ａｓｐ−Ｔ２　ｒ−
ＣＯＯＨを有するペプチドであって、Ｙは存在しなくて
チームの３９乃至４５番目及び４６乃至５３番目の位置
の配列順序を示すことを特徴とするペプチドである０本
発明で特に重要なペプチドは、リゾチーム分子の３９乃
至５３番目の位置のＬ−アミノ酸からなる以下の構造： ＮＯ３−Ａｓｒ＋−Ｔｈｒ−Ｇｉｎ−＾１ａ−Ｔｈ　ｒ
−Ａｇ＋＞−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｔｈ　ｒ−Ａｓｐ−Ｇｌ
ｙ−５ｅｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｔ２ｒ−ＣＯＯＨ（１）
を有するペンタデカペプチドである。

本発明の生成物は、選択的フラグメンテーション又は、
簡単な合成経路により得ることできる。活性ペプチドを
得るためのフラグメンテーションは、リゾチームはペプ
シン又は、トリプシン及びキモトリプシンのような酵素
物質によって引起される加水分解にかけるか又は、双方
の酵素系を連続する加水分解にかけて行えば良い、いず
れの場合も胃液や腸液の作用による生体内の加水分解プ
ロセスに似るようにそれぞれ反応条件を制御して行なう
、かくして得られたペプチド混合物は、その生物学的観
点から、そのまま使用しても良く、又は、適当な精製及
び分別の後、又はそれら混合物から本発明のペプチドを
純粋な状態で単離することにより使用しても良い、精製
、分別をしたペプチド混合物及び単離したペプチドは、
予めペプシンによる加水分解をした後に得られた場合に
は、更にトリプシン及び／又はキモトリプシンにより加
水分解をした後分別しても良い０本発明のペプチドは逐
次合成による合成経路によっても有効に生成できる。

上記のペプチド混合物及びペプチド（Ｉ）を製造するフ
ラグメンテーションの詳細ヲ述べる。リゾチームを１例
えば、塩酸を添加することにより得られる明らかな酸性
側（ＰＨ１−２，５）で、結局、無機塩酸、例えば、塩
化ナトリウムが存在するが、ペプシン（リゾチームの重
量の２０％まで）にって処理する。加水分解は３５乃至
４５℃、通常は３７乃至４０℃で数時間行う、中性化後
、不溶物質を濾過し、溶液を蒸発により乾燥又は凍結乾
燥させて、全体としてペプチドの複雑な混合物の形態の
ペプチド氷解物を得る。かかる氷解物は、乾燥又は凍結
乾燥させる代りにア七トンで沈澱させ、エチルアルコー
ルで精製（任ｔ）　ｌ。

た後、沈澱を予めシリカゲルクロマトグラフィー（溶離
剤：水、その後１０乃至２０％までの酢酸水溶液）にか
け、しかる後、弱カチオン性樹脂、例えばアンバーライ
トＣＧ　−５０（Ａｍｂｅｒｌｆｔａ　ＣＧ−５０）（
溶離剤二本）のクロマトグラフィーにかけ、反応式１に
示すように種々の部分的に精製したペプチド混合物とと
もに目的とするペプチド（Ｉ）を得ることができる。存
在する少量の無機塩（例えばＮａＣＪ１）から分離する
には、セファデックスＧ　Ｉ　Ｏ（Ｓｅｐｒａｄｅｘ　
Ｇ　１０　）等の分子篩のクロマトグラフィーにより行
えば良い。

他の生物学的に重要なペプチドは、それぞれリゾチーム
の４５乃至５３番目及び３９乃至４５番目のＬ−アミノ
酸からなり、以下の構造を有する。

（ＩＩ） （ｍ） 化合物（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）は、上記のペプチド（Ｉ
）をトリプシン又はキモトリプシン−トリプシン（ペプ
チドＣＩ）の重量の５％まで）を使用し、アンモニア又
は適当な緩衝液を加えることにより、中性又は弱塩基性
側（ＰＨ７〜８．５）で加水分解することにより製造す
ることができる。

約３７℃で数時間加水分解を行い、溶液を冷却し、少量
になるまで濃縮し、クロマトグラフィーにかけて、２成
分、（■）及び（ｍ）に分離する０例えば、シリカゲル
カラムクロマトグラフィーＣｆｔ１ｆａ剤：エチルアル
コール／アンモニア）でペプチド（■）を得、しかる後
水洗してペプチド（ｍ）を単離する。

上記の化合物は、一般的なペプチドについての文献に報
告されている手順にいくつかの変化をさしはさんだ固相
に於ける逐次合成によっても得ることができる０例えば
、ペプチド（ｎ）を得るために、Ｌ−チロシン　（’ｒ
ｈ　ｒ）　（７）Ｎ　、　０−保：ａ誘導体の一つ、例
えばＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）　−
〇−ベンジルーＬ−チロシンを、好ましくはセシウムの
形で用い、スチレン−ジビニルベンゼンクロロメチレー
ト共重合体〔メリーフィールドのペプチド樹脂（Ｍｅｒ
ｒｉｆｉｅｌｄｓ’ｐｅｐｔｉｄｅ　ｒｅｓｊｎ　）　
：　１％架橋〕を、生成するペプチド、即ちＬ−チロシ
ンのカルボキシ−末端にくるようにエステル化する。生
成したＢＯＣ−〇−ベンジルーＬ−チロシン樹脂は、＋
８！別し、洗浄してチロシン誘導体によるエステル化度
を樹脂１ｇに対するミリモルとして決定する。Ｎ−保護
基（ＢＯＣ）はその後トリフルオロ酢酸（Ｔ　Ｆ　Ａ）
処理により除かれ１次いで塩基をトリエチルアミンによ
り遊離させ、目的とする配列順序を構成する第２のアミ
ノ酸、即ち、Ｌ−アスパラギン酸（’Ａｓｐ）の作用受
ける状態の０−ベンジル−Ｌ−チロシン樹脂からなる固
相を得る。

この第２の段階を進行させるため、前記のアミノ酸（Ｔ
ｙｒ）の様に、Ｌ−アスパラギン酸は。

官能基が反応に参画しないように保護した形態。

例えばＢＯＣ−Ｌ−アスパラギン酸４−ベンジルエステ
ルのような形態で使用する。２倍乃至４倍のモル量の過
剰の試薬をペプチド結合（Ｃｏ−ＮＨ）形成用の縮合剤
として、例えばＮ、Ｎ′−ジクロロへキシルカルボジイ
ミド（ＤＣＣＤ）　、を使用すると、前記のようにトル
フルオロ酢酸により保護基（ＢＯＣ）を除くことができ
る目的とするジペプチドを高収率で得ることができ、順
次縮合に適した（４−ベンジルエステル）Ａｓｐ−（０
−ベンジル）Ｔｙｒ−樹脂を得ることができる。

上記の通り、以下の充分に保護されたＬ−アミノ酸： ＢＯＣ−０−ベンジル−Ｌ−トレオニンＢＯＣ−０−ベ
ンジル−Ｌ−セリン ＢＯＣ−グリシン ＢＯＣ−アスパラギン酸４−ベンジルエステルＢＯＣ−
０−ベンジル−Ｌ−）レオニンＢＯＣ−Ｌ−アスパラギ
ンｐ−ニトロフェニルエステル の縮合段階と、次の縮合に必要であるアミン基を遊離す
るＮ−脱保護段階を交互に連続して行うことにより、エ
ステルの形態で固相の樹脂に結合した所望の配列順序の
ペプチドに到達することができる。

一般に、最後のアミノ酸である、ＢＯＣ−Ｌ−アスパラ
ギンｐ−ニトロフェニルニステルハ、縮合段階において
、ジクロロへキシルカルボジイミド（Ｄ　ＣＣＤ）の存
在を必要としない、と考えられている。これは、カルボ
キシル基が、既に、ｐ−ニトロフェノールとのエステル
化によす活性化されているためである。しかしながら、
収率の面からみれば、触媒、例えば、試薬を、相当する
反応性の高いトリアゾールに変換することのできる、１
，２．４−トリアゾールの存在下に行うことが好都合と
いえる。

所望のペプチドの配列順序を得た後は、トリフルオロ酢
酸の中で、相当量のアニソールの存在下、固体の支持体
から切断すること及び残りの官能基の脱保護が必要であ
り、この脱保護は、ペプチド−樹脂の懸濁液の中でガス
状の臭化水素酸の作用により行うものである。樹脂を濾
過したのち、ＴＦＡ中の溶液は、減圧下に濃縮し、残査
をアルカリ処理、例えば、トリエチルアミンによる処理
ののち、アミノ基を脱プロトン化するために精製し、目
的とするペプチド（■）を、無色で。

非常に水によく溶ける結晶状の固体として得た。

上記の樹脂からペプチドを切断する段階（及び、同時に
、官能基の脱保護の段階）は、オクタペプチド（ｎ）−
樹脂の形成のあとのみならず。

はんの少数のアミドが縮合したあとであっても行うこと
ができ、その結果２本発明の目的の範囲内に入る以下の
構造を有する重要なリゾチーム分子のフラクションとし
ても表わされる。より短かいペプチドも得ることができ
る、ということに注意することが重要である。

ペプチド（ＤＩ）の製造に関してｔ４、一般に、上記の
ペプチド（ｒ１）の手順に従うことが重要であるが、所
望の生成物に到達するためには、いくつかの重要な変更
を導入しなければならない、まず、ペプチド（Ｉ［［）
のカルボキシ末端の最初のアミノ酸であるアルギニン（
Ｎ−ＢＯＣ−Ｍｙ　−トシル−誘導体）のクロロメチル
樹脂への直接の結合は、既に述べた通り非常に安定であ
り、ＨＢｒ／ＴＦＡによる処理では切断し難いものであ
り、この点は、最初のＡｒｇ−樹脂エステルについても
最終生成物のペプチド（ＩＩＩｒ）−樹脂についても確
認されている。そこで１合成を、適当な、窓溝が保護さ
れているアミノ酸１例えば、セシウム塩の形態のＢＯＣ
−グリシンで、これは。

直接クロロメチル樹脂と直接エステル化されるものであ
るが、これにより合成を始め、合成の逐次サイクルに於
て、末端に切断することの容易なスベサーを形成する、
という第一の変更した方法が考え出されたのである。Ｔ
ＦＡによるＮ−脱保護の後、以下に示す充分に保護され
たアミノ酸二ＢＯＣ−Ｎｗ−トシル−Ｌ−フルギニンＢ
ＯＣ−Ｌ−アスパラギン−ｐ−ニトロフェニルエステル ＢＯＣ−０−ベンジル−Ｌ−トレオニンＢＯＣ−Ｌ−７
ラニン ＢＯＣ−Ｌ−グルタミンｐニトロフェニルエステル ＢＯＣ−０−ベンジル−Ｌ−）レオニンＢＯＣ−Ｌ−ア
スパラギン−ｐ−ニトロフェニルエステル の縮合を順番に行なうが、通常、縮合ごとに縮合したア
ミノ酸のα−７ミノ基を遊離させるのに適したＴＦＡに
よるＮ−ＢＯＣの脱保護を交互に行なう。

既に述べたように、どの縮合段階も、アミノ酸のカルボ
キシル基が遊離している場合（Ａｒｇ。

Ｔｈｒ、Ａｌａ）には、Ｎ、Ｎ′−ジクロロへキシルカ
ルボジイミド等の縮合剤の存在下に行なわなければなら
ないのに対し、ｐ−ニトロフェニルの形態のアミノ酸（
Ａｓｎ、Ｇｉｎ）を用いる堝て行なうことが望ましい。

一連の縮合段階の後、ＴＦＡ中のＨＢｒにより、ペプチ
ドを樹脂から分離すること及び官能基の部分的脱保護を
行うが、この後者の操作を液体アンモニア中のナトリウ
ムによりアルギニンのＮｗ−）シル基を切断することに
より行い、以下の構造： （Ｘ） を有する。（ｍ）−ｃｔｙペプチド化合物を得る。しか
る後、カルボキシル末端のアミノ酸を選択的に切断する
が１次のアミノ酸（Ａ　ｒ　ｓｒ）には、加水分解作用
をしないカルボキシペプチダーゼＡを用いて、酵素加水
分解をすることによりグリシンを分離することができる
０次いで、加水分解混合物を、シリカゲルクロマトグラ
フィーで精製し、充分に純粋な、目的とするペプチド（
ＩＩＩ）を得ることができる。

ペプチド（ｍ）の製造については、望ましい、Ｎ−ＢＯ
Ｃ−Ｎｗ　−）シル−アルギニン（セシウム塩）をクロ
ロメチル樹脂とエステル化する、第２の方法である直接
法がある。一連の交互のＮ−ＢＯＣの脱保護及び上記ア
ミノ酸の縮合の段階の後、最終的に生成したペプチドは
、容易に樹脂から切断することができ、かつ、液体のフ
ッ素化の作用により完全に脱保護することができ、ＨＦ
の減圧下での蒸発後、トリプルオロ酢酸により抽出し、
樹脂を濾過し、溶液を蒸発させて、ペプチド（ｍ）を単
離できることがわかった。

このフッ化水素酸を用いることは、いろいろな意味で有
利である。まず、既に述べた、ペプチドと樹脂と間の「
スペーサー」　（例えば、ａｔｙ）を使用する必要がな
いため、カルボキシペプチダーゼＡにより最終的にスペ
ーサーを分離する必要がない、更に、フッ化水素酸は、
自然にＮｗ−トシル基も切断し、同時にアルギニンの脱
保護をもすることになるので、次の余分を段階である液
体アンモニア中のナトリウムを使用する処理による脱保
護を省くことができる。また、他の保護されたアルギニ
ンの誘導体、例えば、ＢＯＣ−Ｎｗ−二トローＬ−フル
ギニンも、ＢＯＣ−Ｎｗ−トシル誘導体の代りとして使
用でき、同様に樹脂から分離する間の一段階でＮｗの脱
保護ができる。

ペプチド（■）の合成の終りのところで既に述べたよう
に、ペプチド（ｍ）の合成も１種々のアミノ酸を順番に
縮合する途中の段階で停止することができる。そのため
、スペーサーを使用する方法を進め、既に述べた適切な
操作の後、下記のオリゴペプチド： Ｎ）ｌ、、　−Ｔｌｌｒ−Ａ！ｆｉ−＾ｒｇ−Ｇｌｙ−
ＧＯＬＩＨ（Ｘｌｌ　）を得ることができ、これらより
、グリシンのカルボキシペプチダーゼＡを用いた加水分
解による切断の後、相当するペプチド（Ｘ　ＶＩ）〜（
ＸＸ）：を得ることができる。

これに対し、直接、アルギニンを樹脂に縮合させる方法
の場合には、直接、上記のペプチド（Ｘ　Ｖｔ）〜（Ｘ
　Ｘ）に至ることができる。

なお、上記のように数字はリゾチームの構造中のアミノ
酸の位置を示すものである。

更に、上記のペプチド（■）及び（ｆ［［）の合成のふ
たつの手順を一つの連続した形にまとめた合成方法も可
能である。まず、上記の通り、ペプチド（ＩＴ）の合成
を行うが、通常のペプチド（１１）のアミン−末端にあ
る最後の７ミノ！（リゾチーム分子の４６番目にある、
Ａｓｎの縮合の後、ペプチドの樹脂からの分離及び官能
基の脱保護を行う代りに、ふたつの別の手順を受けるこ
とができる。ペプチド（ｍ）のカルボキシ−末端にある
第１番目のアミノ酸（リゾチーム分子の４５番目にある
）Ａｒｇの縮合を直接行う、この場合、ペプチド（ｍ）
の合成で、既に述べた以上の試薬と同じ手順を順番に進
めることにより、リゾチームそれ自身を出発物質として
酵素作用により、既に得られているペプチド（１）の中
に含まれている以下のペプチド： を得゛ることができることは明らかである。

一方、グリシンを、まず縮合させ、しかる後、アルギニ
ン及び他の上記のアミノ酸を縮合させ。

最終的に以下のペプチドを得ることも可能であ（ＸＸＷ
） （ＸＸＷ） （ＸＸＩＸ） （ＸＸＸ） （ＸＸＸＩ） （ＸＸＸ■） （Ｘ　Ｘ　Ｘ　ｍ） （Ｘ　Ｘ　Ｘ　ｆｆ） 末端のアミノ酸に、リゾチームの蛋白鋼における位置の
番号をつけた。これらのペプチドは、明らかに１本発明
の目的及び内容の範囲に含まれるである。

当然、固相における合成ばかりでなく、遊離α−７ミノ
基、ベンジルエステルとして保護されたα−カルボキシ
ル基及び最終的に、適当に保護された側鎖の官能基（例
えば、ベンジルエーテルとして保護されたトレオニンの
水酸基又はチロシンのフェノール基、ベンジルエステル
として保護されたアスパラギン酸のβ−カルボキシル基
又はニトロ基により保護されたアルギニンのグアニジン
基）を有する所望のアミノ酸から始める均賀相における
伝統的な合成を行うことも可能である。

溶液（均質相）において、第１のアミノ酸を。

配列順序の第２番目のアミノ酸であって、保護されたア
ミノ酸（ＢＯＣ等）、及び最終的に保護された側鎖の官
能基を有し、α−カルボキシル基は縮合剤（例えば、Ｄ
ＣＣＤ）を使用することにょリ、ペプチド結合を形成す
るように、遊離しているか又活性のエステル（例えば、
ｐ−ニトロフェニルエステル又はＮ−ヒドロキシスクシ
ンイミドエステル）の形態である。

得られた、完全に保護されたジペプチドを、単離し、精
製し、ＴＦＡ／ＣＨＣ１２で、ＢＯＣの脱保護をし、ト
リエチルアミンで脱プロトン化をし、反応図のように第
３番目のアミノ酸、その他と合成の終りまで反応させる
。

単離及びＢＯＣの脱保護の後、ペプチドを炭素状のパラ
ジウム（Ｐ　ｄ）で触媒水素添加を行い。

側鎖の保護基及び第１のアミノ酸のα位のカルボキシル
基を保護しているベンジルエステルを切断する。

次いで、完全に保護されたペプチドを、溶液を凍結乾燥
することにより、単離し、触媒を濾過したのち、適当な
精製を行う。

リゾチームの酵素加水分解により得られたペプチド混合
物の生物学的活性については、多くの、純粋な状態で単
離されたペプチド及び／又は合成により得られたペプチ
ドと同様、リゾチームの全体構造における典型的な溶菌
作用は示さず、それらのペプチド混合物は、重要な薬理
学上及び治療上の特性を示すことがわかった。このため
１例えば、多くのペプチドのきわ立った鎮痛作用を衆知
のランドールーセリト（Ｒａｎｄａｌｌ！３ｅｌｉｔｔ
ｏ　）　（７）方法を使用して、それらのペプチドの実
験動物に及ぼす抗侵害効果（ａｎｔｉ−ｎｏｃｉｃｅｔ
ｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔ）を試験することによって証明す
ることができる。

５乃至１０匹のラットのグループにおいて、刺戟物、例
えば、ビール酵母を足の裏の綻膜に投与（ｌｏｎｇ／ラ
ット）することにより、足の痛覚過敏をひき起し、同時
に、上記生成物を異なる投与量で注射した。ひとつのグ
ループのラットは。

刺戟物のみで処理した。ときどき、とくに３時間後、水
腫のできた足の圧迫時の痛みのいき値、即ち、動物が急
に足を引いてしまう最少の圧力（ｇ）を測定した。

結果は、刺戟物のみを投与（薬剤を投与しない）した場
合と比べ、上昇した痛みのいき値（ｔｈ’ｒｅｓｈｏ　
Ｉｄ　）の平均値のパーセンテージで表わした。

一例として、単独のペプチド（Ｉ）、（■）及び（ｍ）
のほかに、「分画Ｐ、２」と名付けられたクロマトグラ
フィー原液であ・ペプチドの混合物（反応図１参照）に
関するデータも示した。

Ｌ−ユ 同様な結果が、いろいろな刺戟物１例えば、カラジーナ
ン、カオリン及びアラキドン酸等を用いた実験において
、上記のペプチドを全身的経路、例えば、筋肉内、静脈
内又は経口により投与した場合にも得ることができた。

炎症を起した足におけるような局部投与と異り、全身的
経路により役瓦ｌ−＋　ｆｌ！＾１士　１騎勤蜘に　１
士る力）に冬（の投与量、１０乃至２０　ｍ　ｇ　／　
ｋ　ｇを投与することができる。単一のペプチドについ
て言えば、リゾチームの酵素加水分解の生成物から単離
されたサンプル及び合成経路により得られた、それに相
当するペプチドの間には、完全な類似性があった。

更に他の例としては１本発明におけるペプチド混合物及
び単一ペプチドは、さまざまな場合に。

抗ビールス性の作用を示した。それらの単純ヘルペスビ
ールスは、単層細胞培地に感染し、プラークを形成する
能力に与える影響力を確認するため、さまざまな試験に
供した。このため、単純ヘルペス　タイプｌの菌株を、
適当な濃度で、Ｖｅｒｏ細胞（Ｆｌｏｗ）の単層に加え
た。１時間接触させた後、ビールスを除き、単層を洗い
。

次いで、新たな培地Ｔ１９９（Ｆｌｏｗ）で被い、最経
的に、適当量の試験用物質を加えた。

７２時間の培養の後、培地をニュートラルレッドに染色
し、目に見えるプラークを数えた０本テストにおいて、
ペプシンを用い、リゾチームを加水分解することにより
得られた分画Ｐ、２（反応図エ参照）は、５　ｍ　ｇ　
／　ｍ文の遣度で菌のプラーク形成能力の９５％を阻止
することがわかった。そのため、リゾチームそのもの（
同濃度で、７５％の阻止率）よりもはるかに高い抗ヘル
ペス作用を実証したのである。同様の結果が、トリプシ
ン及びキモトリプシンでリゾチームを加水分解した後に
、同様の方法により単離したペプチドの分画についても
得られた。更に、清くべき結果がペプチドＣＩ）又は（
ｍ）等のペプチドについて得られた。これらのペプチド
は、同様のビールスプラーク形成単位胞の減少を、はる
かに低い濃度（０，１〜１ｍｇ／ｍＪ１）においてもた
らした。

更に、これらのペプチドは、細胞のコロニー形成能力に
は影響せず、したがって、細胞障害作用がなかった。こ
のことは、それらのペプチドの抗ビールス作用を示す濃
度よりもはるかに高い場合にもそうであった。

他の本発明の化合物により見出された生物学上の効果は
、それらの化合物の典型作用（Ｍｏｄｕｌａｔ−ｉｎｇ
　ａｃｔ＋ａｎ）による免疫系の阻害能力である。ある
ペプチドは、事実、この抗原をマウスに投与したのち、
牛の抗アルブミン抗体（ｂｏｖｉｎｅ　ａｎｔｉ−ａｌ
ｂｕｗｅｎ　ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）の量を制御するこ
とができ、又は、小羊の赤血球を接種したマウスの評臓
の中の、羊の赤血球上のプラーク形成細胞の数を増すこ
とができる、ということがわかった、以下に製造例を示
すが、本発明を制限するものではない。

実゛施例１ リゾチームの酵素加水分解（ペプシン）：予め４０℃に
熱しておいた１１の蒸留水に、攪拌下８ｇのペプシン及
び５ｇの塩化ナトリウムを加えた。３７％の塩酸を加え
てｐＨを１．２にした。得られた溶液に５０ｇの塩化リ
ゾチームを溶解した。ＰＨを１．２とし、ゆっくりと攪
拌しながら恒温槽で４０℃に１時間保った。３０％の水
酸化ナトリウムでｐＨを７とし、生成した少量の沈殿物
を濾過して除き、溶液を減圧下で注意深く蒸発させるか
又は凍結乾燥により乾燥させた。

実施例２ リゾチームの酵素加水分解（トリプシンーキ士トリプシ
ン）： １１の蒸留水に５０ｇの塩化水素リゾチームを溶解させ
、希釈したアンモニアを加えｐＨを８とした後、５ｇの
トリプシン−キモトリプシン複合体を加え、ｐＨを再び
８にした。得られた溶液を３７℃に２時１１ｉ（類似の
結果が加熱を１２時間まで延長した場合にも得られた）
保ち１次いで減圧下で注意深く蒸発させるか又は凍結乾
燥により乾燥させた。

実施例３ ペプシンによる加水分解によるペプチドの分別及びペプ
チド（ｌの単＃（反応Ｓｒ）：Ａ）アセトンによる沈殿 実施例１の手順に従って最終的に得られた溶液（溶液ｐ
−ｔ、容積約１ｆＬ）を攪拌下に保ち、蒸発乾燥の前に
４Ｊｌのアセトンで直接処理をした。

放置して生成した非常に濃厚な油状相を沈降させ、明澄
なアセトン水溶液は減圧下で濃縮し乾燥させ、ペプチド
の混合物であって実施例１の加水分解段階で使用したほ
とんど全部の塩化ナトリウムを含むものである分画３を
調製した。

濃厚な油状相を５００ｍＡのエチルアルコールで割り、
長時間の攪拌ののち結晶性の固体を濾取し、減圧下に４
０℃で乾燥して３０ｇのペプチド混合物（分画２）を得
た。

Ｂ）シリカゲルクロマトグラフィー 得られた分画２を１００ｍ文の蒸留水に溶解し、４５０
ｇのシリカゲル６０（７０〜２３０メツシユ）のカラム
クロマトグラフィーに、蒸留水を第１の溶離剤として、
かけた、溶出液の紫外線（入ｗ２８１ｎｍ）に於ける吸
収の制御及びシリカゲル６０Ｆ２５４の薄層クロマトグ
ラフィー（溶離剤：ｎ−ブタノール：水：酢酸＝１００
：３０：１０．検知剤（ｄｅｔ　ｅｃｔ　ｏ　ｒ）：＝
ｙヒドリン）により第１の分画を単離しくＴＬＣ。

Ｒｆ＝０）、減圧下で蒸発させて乾燥し、約７ｇの分画
Ｐ、２／１を得た。水：酢酸＝９８　：　２の混合物を
使用するカラムクロマトグラフィーによる溶離を続け、
濃縮乾燥して７．５ｇのペプチド分画Ｐ　、２／２を得
た。一方、水；酢酸＝９０：ｌＯの混合物で溶離して、
８ｇのペプチド混合物として分画Ｐ、２／３を回収した
。この後者の分画は先ず水により抽出して精製しく溶液
を濃縮して分画Ｐ、２／３Ａを回収）１次いで塩酸で抽
出、精製（分画Ｐ　、２７３Ｂ）するのが好ましい。

Ｃ）７ンバーライトＣＧ−５０（Ａｍｂｅｒ−１ｉ　ｔ
　ｅ　　ＣＧ−５０）　ツクｏマ）グラフィー水を使用
したシリカゲルクロマトグラフィーによる溶離によって
得た上記の分画Ｐ、２／１をさらに酸の状態の４５０ｇ
のアンバーライトＣＧ−５０を使用したイオン交換樹脂
のクロマトグラフィーで精製した。蒸留水で溶離し、紫
外線（入＝２８１ｎｍ）に於て吸収がピークである溶出
液（複数）を混ぜ、シリカゲル６０Ｆ２５４の薄層クロ
マトグラフィー（溶離剤：ｎ−ブタノール：水：酢酸＝
１００：３０：１０．検知剤：ニンヒドリン）により先
ず分画Ｐ、２／１．１　（Ｒｆ＝０）を単離し、これを
蒸発により乾燥し、１．８ｇの化合物（Ｉ）（リゾチー
ムの３９乃至５３番目のペプチドを得、次いで他のペプ
チドとの混合物からなる分画Ｐ、２／１．２を得た。

分析：全加水分解後の分画Ｐ、２／１．１（ペプチド（
１）〕のアミノ酸 ミリモル　Ａｌａ　　　Ａｒｇ　　Ａｓｐ　　Ｇｌｕ　
　Ｇｌｙ　　Ｓｅｒ　　Ｔｈｒ　　丁ｙｒ　　（ＮＨ３
）計算値　１　１　５　１　１　１　４　１　　（４）
実測値　１．００１．０！　４．９２１．０２１．０３
０．９７０．９９１．０１　（３，９５）実施例４ ペプチド（ｌの酵素加水分解（トリプシン）及びペプチ
ド（■）及び（ＩＩＩ）の単Ｉａ：実施例３の手順によ
り単離されたペプチド（Ｉ）２ｇを４００ｍｊＬの蒸留
水に溶解し、アンモニアで溶液のＰＨを８とした。４０
ｍｇのトリプシンを加え、３７℃で２．５時間加熱した
。減圧下に注意深く濃縮して容積を約１０ｗ文とした。

シリカゲル６０Ｆ２５４　（溶離剤：エタノール＝２０
％アンモニア＝７０　：　３０、検知剤：ニンヒドリン
）により、ペプチド（Ｉ）（Ｒｆ＝０．０７）は認めら
れず、ペプチド（ＩＩ）（Ｒｆ＝０．３）及びペプチド
（ｍ）（Ｒｆ＝０．５）の特徴を示す新しい２つの点が
形成されていることが確認された。これら二つの生成物
は１例えばシリカゲル６０　（７０−２３０メツシユ）
のカラムクロマトグラフィーにより精製し１次で上記の
様に特に、ＴＬＣの制御により紫外線吸収（入＝２８１
ｎｍ）を決定し溶離剤を溶出させることが好ましい。

しかる後、濃縮した加水分解溶滴を２００ｇのシリカゲ
ルを含むカラムクロマトグラフィーにか（ｔ、先ｆエタ
ノール：２８％アンモニア＝９５：５の混合物で溶離し
、少量の不純物を除き、次いでエタノール＝２８％アン
モニア≠８：２の混合物で溶離し、溶出液を減圧下に濃
縮して６４０ｍｇのペプチド（■）を得た。しかる後、
エタノール：２８％アンモニア＝７＝３の混合物で溶離
した溶出液を廃で１次いで蒸留水により溶離してこの溶
出液のみを蒸発して乾燥し、４６０ｍｇのペプチド（［
ｎ）を得た。

トリプシンがフルギニンのカルボキシル基と隣接するア
ミノ酸（アスパラギン）のアミンとの間のペプチド結合
を切断し、ペプチド（■）（リゾチームの４６乃至５３
番目のアミノ酸からなるペプチド）及びペプチド（■）
（リゾチームの３９乃至４５番目のアミノ酸からなるペ
プチド）を生成させるという仮説はそれらの溶出液を更
に検討することにより確認された。ペプチド（ｎ）は２
８１ｎｍに於ける紫外線吸収を増大させ、ツクウリ試薬
によるＴＬＣにより（チロシンの存在が）検知され、一
方、サカグチ試薬により（アルギニンが存在しないこと
が）確認された。ペプチド（ｍ）は紫外線吸収及びＴＬ
Ｃに於て反対の挙動を示し、アルギニンは含有していた
がチロシンは存在しなかった。これらのデータはアミノ
酸の分析により確認された。

全加水分解後のアミノ酸の分析 ミリモル　　　　　　Ａｌａ　　　Ａｒｇ　　Ａｓｐ　
　Ｇｌｕ　　Ｇｌｙ　　Ｓｅｒ　　Ｔｈｒ　　Ｔｙｒ　
　（ＮＨ３）ＣＨ）：Ｅｘｐｅｃ、：　　　　　、３１
　１　２　１　　（１）Ｆｏｕｎｄ　：　　　　　　　
２．９８　　　０．９９　１．０２２．０１　１．００
　　（０，９８）（ｍ）：　ＥＸ斧Ｃ，：　　１　　１
　２　１　　　　　　２　　　　　（３）Ｆｏｕｎｄ　
：　　１．０Ｇ　　１．０２　　＋、９８　　Ｑ、９９
　　　　　　２．０１　　　　（２，９８）実施例５ ペプチド（ペプチド（■）：固相）の逐次合成： Ａ）チロシンによるクロロメチル樹脂のエステル化及び
ＢＯＣの脱保護 ５ｇのスチレン−ジビニルベンゼンクロロメチル共重合
体（メリーフィールドによるペプチド合成用樹脂）を７
４２ｍｇ　（２ｍｍｏ　１）のＢＯＣ−０−ベンジ７Ｌ
／−Ｉ、−チロシンで４０ｍｊＬの酢酸エチルの中で４
５時間煮沸させた０、２８ｍＭ　（２ｍｍｏ　１）のト
リエチルアミンの存在下にエステル化した。該樹脂を濾
取し、酢酸、エタノール及び水で十分に洗浄し、２５℃
で減圧乾燥した。０．２０１ｍｍｏｌ　　Ｔｙｒ／ｇ樹
脂（７）エステル化度を有する５、３７５ｇのＢＯＣ−
０−ベンジル−Ｌ−チロシン−樹脂を得たが、これは、
反応及び洗浄溶剤中の遊離チロシン銹導体（非エステル
化）の２７６ｎｍに於ける分光光度法による差により決
定された。

注：セシウム塩の状態のＢＯＣ−０−ベンジル−Ｌ−チ
ロシンを使用してジメチルホルムアミド中で５０℃で２
４時間反応させた（トリエチルアミンは存在せず）、エ
ステル化度が約０．３ｍｍｏｌ　　Ｔｒｙ／ｇ樹脂のも
のを得た。

上記の様に単離された樹脂は、ＢＯＣの脱保護のため、
しかる後トリフルオロ酢酸：塩化メチレン＝ｌ：１の混
合物７０ｍＪｌで３０分間処理した０次で、濾過し、７
０ｍ１の１０％トリエチルアミンのクロロホルム溶液で
１０分間処理してアミン基を遊離させた。濾過及び樹脂
のクロロホルム及び塩化メチレンによる処理の後、目的
とするＯ−ベンジル−Ｌ−チロシン−樹脂を得た。

Ｂ）アスパラギン酸との縮合及びＢＯＣの脱保護 該樹脂を１３０ｍｊＬの塩化メチレンに懸濁し。

１０５０ｍｇ　（３，２４ｍｍｏ　１）、即ちモル当量
の４−ベンジルエステルＢＯＣ−Ｌ−アスパラギン酸で
処理をした。１０分間の攪拌後、縮合剤として６７０ｍ
ｇ　（３，２４ｍｍｏ　１）（ＩＮＮ。

Ｎ′−ジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣＤ）を
３０ｍ１に溶解したものを加え、２０℃で約１２０時間
反応させた。

樹脂を濾取し、塩化メチレン及びメタノールで洗浄し、
ニンヒドリンで縮合が完結したことを確認した（無呈色
）０次いでトリフルオロ酢酸との反応によりＢＯＣの脱
保護をし、実施例５Ａ）の手順に従いトリエチルアミン
で処理をし、（４−ベンジルエステル）Ａｓｐ−（０−
ベンジル）Ｔｙｒ−樹脂を１次の縮合に適した状態で得
た。

Ｃ）〜Ｇ）逐次縮合及びＢＯＣの脱保護実施例５Ｂ）と
同様の手順で種々のＤＣＣＤ存在下での縮合とＢＯＣの
脱保護を、以下の保護されたアミノ酸の化学量の三倍蚤
を以下の順に使用して、交互に行なった。

Ｃ）ＢＯＣ−０−ベンジル−Ｌ−）レオニンＤ）ＢＯＣ
−０−ベンジル−Ｌ−セリンＥ）ＢＯＣ−グリシン Ｆ）４−ベンジルエステルＢＯＣ−Ｌ−アスパラギン酸 Ｇ）ＢＯＣ−０−＜ｙジに−Ｌ−トＬｚオニ７：Ｈ）ア
スパラギンとの縮合及び樹脂からの全脱保護による切断 反応相Ｇ）によって生成し、ＢＯＣの脱保護された樹脂
（５，０ｇ）を１２０ｍＪｌのジメチルホルムアミドに
懸濁し、１５３０ｍｇ　（４，３２ｍｎｏ　１）、即ち
４倍１７）％ル当量のＢＯＣ−Ｌ−アスパラギンｐ−ニ
トロフェニルエステルで処理した。攪拌下に縮合反応を
室温で１８時間続けた後、樹脂を濾取し、ジメチルホル
ムアミド及び塩化メチレンで洗浄し、減圧乾燥した。

注二手順の変形として、ＢＯＣ−Ｌ−アスパラギンのｐ
−ニトロフェニルエステルを触媒１例えば１，２．４−
）リアゾールで活性化すると良い。

上記の様にして得られたペプチド−樹脂を。

４ｍＪｌのアニソールを含むトリフルオロ酢酸８０ｍｕ
のに懸濁し、連続的に該懸濁液を通してガス状の臭化水
素酸を流すことにより、強固な保護をペプチドから切断
し、全官能基を脱保護した。

１５℃で８０分間ゆっくりと発泡させた後、樹脂を濾過
し、トリフルオロ酢酸で洗浄して濾液（溶液中に切断さ
れ、脱保護されたペプチドが含まれている）を再び集め
、濃厚な油状残査が得られるまで減圧乾燥した。続いて
、エタノールエチルエステル中のトリエチルアミンで１
時間処理することにより、白い結晶状の沈殿が直ちに生
成し、これを濾取し、減圧乾燥して実施例４で単離した
生成物と同じペプチド（■）６１２ｍｇ（全収量：最初
に縮合したアミノ酸に基き計算して６５％）が得られた
。

実施例６ ペプチド（ＩＴ）〜（ＩＫ）の合成： 種々の調整は第１のアミノ酸でクロロメチル樹脂をエス
テル化により開始され、続いて、実施例５Ａの手順に従
ってＢＯＣの脱保護を行い、ｏ−ベンジル−Ｌ−チロシ
ン−樹脂を得た。実施例５Ｂ〜５Ｇに記載されている１
以上の保護されたアミノ酸を所望の順序で縮合ため、最
後に縮合されたアミノ酸のＢＯＣの脱保護という中間手
続がいる。

所望の最後のアミノ酸の縮合の後、樹脂からペプチド（
ｆｆ）〜（ＩＸ）を切断して実施例５Ｈの最終段階とし
て記載されている様に全脱保護をすることにより合成を
完結させた。

実施例７ 固相に於けるペプチド（ｍ）の逐次合成（スペーサーを
用いる方法）： Ａ）クロロメチル樹脂のグリシン（スペーサー）による
エステル化及びＢＯＣの脱保護９．０ｇのスチレン−ジ
ビニルベンゼンクロロメチル共重合体（メリーフィール
ドのペプチド合成用樹脂の、７５ｍＪＬのジメチルホル
ムアミドへの懸濁を、攪拌下５０℃で２４時間加熱して
行なうことにより２５００ｍｇ　（８，１４ｍｍｏ１）
のＢＯＣ−グリシンのセシウム塩でエステル化した。樹
脂を濾取し、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ＤＭＦ
　：水＝９：ｌの混合物及びエタノールで洗浄し、減圧
乾燥し、９．８３０ｇのＢＯＣ−グリシン−樹脂を得た
。

樹脂のアリコー）　（２５０ｍｇ）を２．５ｇのピリジ
ンを用い１００℃で１時間処理し、２５ｍ文の５０％酢
酸により希釈し、残留塩素をフォルハルトによる滴定を
することにより。

０．７８５ｍｍｏｌ　　Ｇｌｙ／ｇ樹脂に相当する該樹
脂のエステル化度を、クロロメチル樹脂の塩素の量の相
異により求めた。

ＢＯＣ−グリシン−樹脂は、次いで、１５０ｍ　ｌ　（
７）　Ｔ　Ｆ　Ａ　：　ＣＨＣｌ　２−１　：　１の混
合物で処理し、懸濁液を室温で３０分間攪拌してＢＯＣ
の脱保護をした。濾過及び塩化メチレンによる洗浄後、
該樹脂を１５０ｍＪＬの１０％トリエチルアミンのクロ
ロホルム溶液で処理し、室温で１０分間攪拌して塩の状
態のアミン基を遊離させ１次いで、濾過し、ＣＨＣｌ　
及びＣＨ２Ｏ見、で洗浄し、減圧乾燥してＧＩＦ−樹脂
の定量的収率を得た。

Ｂ）アルギニンの縮合及びＢＯＣの脱保護Ｇｌｙ−樹脂
を２００ｍ文の塩化メチレンに懸濁し、グリシンの３倍
量の第２のアミノ酸（所望の配列順序では第１のアミノ
酸）で処理するため６０ｍＪＬのＤＭＦ：ＣＨＣＪＩ２
＝１：ｌの混合物に９　、８５　ｇ　（２３ｍｍｏ　１
）　（７）ＢＯＣ−Ｎｗ−トシル−Ｌ−アルギニンが溶
解した溶液を加えた。１０分間の攪拌ののち、３０ｍ文
の塩化メチレンに溶解した４、７６ｇ（２３ｍｍｏ１）
を加え、攪拌下室温で２０時間放置した。樹脂を次いで
濾過し、ＣＨＣ１２及びエタノールで洗浄した後、減圧
乾燥して１２．３ｇのＢＯＣ−Ｎｗ−）シルーＬ−アル
ギニンーグリシンー樹脂を得、ニンヒドリンにより遊ｆ
ａアミン基が存在しないことを確認した。

単離した樹脂を１２０ｍＪｌの ＴＦＡ：ＣＨＣ見、、−１：１の混合物に懸濁し、室温
で３０分間攪拌することにより、ＢＯＣの脱保護を行っ
た。樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｏ文。

で洗浄した後、通常通り１０％トリエチルアミンのＣＨ
Ｃｌ。（１００ｍ文）溶液での処理を。

１０分間攪拌下で行い、目的とするＮｗ−トシル−Ｌ−
アルギニン−樹脂を得た。

Ｃ）７スパラギンの縮合及びＢＯＣの脱保護前記の様に
して得た樹脂を１００ｍＪＬのジメチルホルムアミドに
懸濁し、１０．９ｇ（３０，８ｍｍｏ１）即ち４倍モル
当量のＢＯＣ−Ｌ−アスパラギンｐ−ニトロフェニルエ
ステルが４０ｍ　Ｊｌ’　（Ｆ）　Ｄ　Ｍ　Ｆに溶解し
たもの及び２．１３ｓｒ（３０，８ｍｍｏ１）の１．２
．４−トリアゾールが３０ｍＪｌのＤＭＦに溶解したも
のを加えた。

反応混合物を室温で１２０時間攪拌した後、樹脂を濾過
し、ＤＭＦ　、ＣＨ２Ｃｌ２及びエタノールで洗浄し、
減圧乾燥してＢＯＣ−Ａｓｎ（Ｎｗ−トシル）Ａｒｇ−
Ｇｌｙ−樹脂を得た。ニンヒドリンより、生成物は遊離
アミンが無いことが確認された０次いでＢＯＣの脱保護
を１２０ｍＪｌのＴＦＡ：ＣＨ２Ｃｌ２−１　：　ｌの
混合物中で室温で３０分間攪拌することにより行なった
。濾過及びＣＨ２Ｃｌ２による洗浄後、樹脂をｌｏｏｍ
ｌの１０％トリエチルアミンのクロロホルム溶液に１０
分間の攪拌下懸濁し、濾過し、ＣＨＣ見、及びＣＨＣ１
，で洗浄し、減圧乾燥してほぼ定１的な収率でＡｓｎ−
（Ｎｗ−トリル）Ａｒｇ−Ｇ１７−樹脂を得た。

Ｄ）〜Ｅ）トレオニンの縮合及びアラニンとの縮合及に
それに関するＢＯＣの脱保護 上記の単離した樹脂をＢＯＣ−０−ベンジル−Ｌ−）レ
オニンと縮合させ、ＢＯＣの脱保護した後、再びＢＯＣ
−Ｌ−アラニンと縮合させ、ＢＯＣの脱保護した。双方
の段階とも実施例７Ｂに報告されている様に行った。

Ｆ）グルタミンの縮合及びＢＯＣの脱保護ＢＯＣ−Ｌ−
グルタミンｐ−二トロフニトロフェニルエステル階に使
用し、縮合及び脱保護は。

実施例７Ｃに報告されている様に行った。

Ｇ）トレオニンの縮合及びＢＯＣの脱保護ＢＯＣ−０−
ベンジル−Ｌ−）レオニンヲ使用して縮合段階を行った
。縮合及び脱保護は、実施例７Ｂに報告されている様に
行った。

Ｈ）アスパラギンの縮合及び部分的に脱保護されている
樹脂の切断 実施例７Ｇの手順の最終段階に於いて、単離された樹脂
を更にＢＯＣ−Ｌ−アスパラギンｐ　−二トロフェニル
エステルと縮合させる。ｌｌｉｉ合段階に関しては、実
施例７Ｃの手順と同じであり。

ＢＯＣ−Ａｓｎ　−（０−ベンジル）Ｔｈｒ−Ｇｌｎ−
Ａｌａ−（０−ベンジル）Ｔｈｒ−Ａｓｎ（Ｎｗ−トシ
ル）Ａｒｇ−Ｇｌｙ−樹脂を得た。得られた樹脂を１通
常のＢＯＣの脱保護を行わずに、４ｍｊＬのアニソール
を含むトリフルオロ酢酸１５０ｍ見に懸濁させ、臭化水
素酸をゆっくりと吹き込んだ０反応は、始めはやや発熱
性であったが、約６０分間で終った。

次いで、樹脂を濾取し、ＴＦＡで洗浄し、濾液は減圧下
４０℃以下の温度で蒸発させ、殆んど乾燥するまで濃縮
した。油状の残査を、過剰のエタノール−エチルエステ
ル中のトリエチルアミンで処理し、速かに結晶状の沈殿
物を得、これを濾取し、乾燥させて４．４６ｇのペプチ
ドＮＨ２−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−
Ａｓｎ−（Ｎｗ−トシル）Ａｒｇ−ｃｘｙ−ＣＯＯＨを
得た。

１）Ｎｗ−トシルの脱保護 上記の単離されたペプチドを、約４５０ｍＪｌの液体ア
ンモニアに、−３３℃で溶解し、明澄な黄色い溶液を得
た。濃紺に呈色するように、４．２ｇの金属ナトリウム
を少量づつ加え、少なくとも６０分間これを続けたのち
、過剰のナトリウムアミドを９．６ｇの塩化アンモニウ
ムを少しづつ加えて破壊した結果、溶液の色が消えた。

そして、アンモニアを蒸発させるため放置した。残査を
、９０ｍ文の水に溶解し、少量の不溶物質を濾別し、ｆ
ｉ塩酸でｐＨを７に調節した。得られた溶液を、２００
ｇ（７）セファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）Ｇ−１０
を含むカラムクロマトグラフィーにかけ、水で溶出し、
塩素イオンを含まない、即ち、無機基を含まない分画を
回収して、遊離剤として、エタノール：２８％アンモニ
ア！７：３の混合物を使用し、溶出液をシリカゲル薄層
クロマトグラフィーにかけた。得られた分画を減圧下で
濃縮し、３．３ｇのペプチド（ＩＩＩ）−グリシン（構
造Ｘ）を得た。

（Ｘ）の全加水分解後のアミノ酸の分析ミリ％ルＡｌａ
　　　Ａｒｇ　　Ａｓｐ　　Ｇｌｕ　　Ｇｌｙ　　Ｔｈ
ｒ　　（ＮＨ３）計算値　１　１　２　１　１　２　　
（３）Ｌ）グリシンの切断 ３ｍｊＬ　（７５ｍＪＬ）のカルボキシペプチダーゼＡ
の懸濁液（牛の膵臓からとったもの、ベーリンガー　マ
ンハイム−〇ｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｎａｎｎｈｅｉ層）
を３０ｍ１に希釈し、２０００ｒｐｍの速度で５分間遠
心分離を行った。澄んだ溶液を捨て、残査を６ｍＪｌの
１モルの炭酸アンモニウムに溶解した。

ＰＨは、７．８であった。蒸留水を加え、３０ｍｆＬと
した。この溶液を、３００ｍＪＬの水に３．３ｇのペプ
チド（ｍ）−グリシンが溶解した溶液で希釈したアンモ
ニアでｐＨを８．５としたものに加えた。得られた溶液
を、３７℃に保ち、同時に撹拌下、ＰＨを８．５で２．
５時間保ったのち、希塩酸でｐＨを６とし、減圧にし、
温度を下げて濃縮し、容積を３０ｍＪｌまでとした０次
いで溶液を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで、
溶剤として、エタノール：２８％アンモニア！９５：５
，９０：１０及び８０　：　２０の混合物を、この順に
使用し、溶出し、酵素加水分解の間に遊離したグリシン
を取り除いた。つづいて、水で溶離し、溶出液を減圧濃
縮して容積を小さくし、つづいて、２００ｍＪＬのエタ
ノールで処理をし、沈殿物を得、これを濾取した。生成
物を更に１２０ｍｊｌの水の中で蒸留し、少量の不溶物
を濾別したのち、溶液をセファデックスＧ−１０で濾過
した。

薄層クロマトグラフィーで処理され、塩素イオンがない
ことが確かめられた最初の分画を減圧下で濃縮し、２０
０ｍＪｌのエタノールで再び処理し、白い結晶性の沈殿
を得、濾過し、乾燥して、実施例４で単離した生成物と
同じペプチド（ｍ）２．５ｇを得た。

実施例８ 固相に於けるペプチド（ＩＩＩ）の逐次合ｒ＆（直接法
）： Ａ）アルギニンによるクロロメチル樹脂のエステル化及
びＢＯＣの脱保護 メリーフィールド（Ｎｅｒｒｉｆｆｅｌｄ）のペプチド
合成用樹脂４．０ｇを、４０ｍＪｌのジメチルホルムア
ミドに懸濁し、２０００ｍｇ　（３，５７ミリモル）の
ＢＯＣ−Ｎｗ−トシル−Ｌ−アルギニンセシウム塩での
処理を、攪拌下５０℃で２４時間保持して行った０次い
で、樹脂を濾過し、１）ＭＦ。

ＤＭＦ：Ｈ２０＝９：ｌの混合物及びエタノールで洗浄
し、減圧乾燥して所望のＢＯＣ−Ｎｗ−）シルーＡｒｇ
−樹脂で、エステル化度が０．７５ミリモルＡｒｇ／ｇ
樹脂であるものを得た。

得られた樹脂を、室温で３０分間攪拌下で５０ｍ　ｆＬ
（７）　Ｔ　Ｆ　Ａ　：　ＣＨ２Ｃｌ　−１：　１の混
合物に懸濁させる処理によってＢＯＣの脱保護を行った
。

次いで、樹脂を濾取し、ＣＨ２ＣＪ１２で洗浄し。

５０℃見の１０％トリエチルアミンのＣＨＣｌ３溶液で
処理し、１０分間攪拌したのち濾過し、ＣＨＣ見　及び
ＣＩ（Ｃ１２で洗浄し、減圧乾燥してＮｗ−）シルーＬ
−Ａｒｇ樹脂を得た。

Ｂ−Ｆ）上記で得られた樹脂とアスパラギン、及びトレ
オニンとの縮合及び、それぞれに該当するＢＯＣの脱ｉ
ｌｌを実施例７Ｃ乃至７Ｇのそれぞれの場合と同じに行
なった。

Ｇ）アスパラギンの縮合及び樹脂からの全脱保護による
切断 上記の実施例８Ｆで得られたＢＯＣの脱保護された樹脂
を、ＢＯＣ−Ｌ−アスパラギンｐ−ニトロフェニルエス
テルで処理し、実施例７Ｈの手順に従って縮合段階を行
った。無水フッ化水素醜及び１ｍｊＬの７ニソールを用
いて１８乃至２０℃で、ｌ＃間無処理ることにより、樹
脂からの切断を行った０反応混合物からフッ化水素酸を
蒸留したのち、ＴＦＡで抽出することにより、ペプチド
を樹脂から分離し、濾過し、ＴＦＡで洗浄し、集めた濾
液を減圧下で濃縮した。残査を過剰のエタノール−エチ
ルエーテル中のトリエチルアミンで処理し、結晶性の固
体を得、濾過し、乾燥させた。得られた生成物は、全部
脱保護されており、実施例４及び実施例７で得られたペ
プチド１）と同じものであった。

注：類似の結果が、実施例８Ａに於けるエステル化の初
期段階で、代りにＢＯＣ−Ｎｗ−ニトロ−Ｌ−アルギニ
ンを使用した場合にも得られた。かかる代替は１種々の
縮合段階に影響せず。

樹脂からの切断の最終段階や、実施例８Ｇ中に報告され
ている全脱保護にも影響しない。

実施例９ ペプチド（ＸＩ）〜（ＸＶ） クロロメチル樹脂をＢＯＣ−グリシンでエステル化し、
実施例７Ａに示すように、ＢＯＣの脱保護を行った。

実施例７Ｂ〜７Ｇに報告されているように。

１以上の保護されたアミノ酸を、所望の生成物に従い、
順番に縮合（及び、それぞれに続＜　ＢＯＣの脱係ｗ１
）を続けた。

最後の所望のアミノ酸の縮合後、ペプチドを樹脂より切
断し、同時に、実施例７Ｈに示されるように１部分的に
脱保護をしたのち、実施例７Ｉに示されるように、アル
ギニンラジカルのＮｗ−トシルの脱保護を行い、目的と
するペプチド（ＸＩ）〜（Ｘ　Ｖ）を得た。

実施例１０ ペプチド（ＸＶｔ）〜（ＸＸ）の合成 実施例７Ｌに示される手順に従い、相当するペプチド（
ＸＩ）〜（ＸＶ）をカルボキシペプチダーゼＡの作用に
よるグリシンの酵素的な切断にかけることにより製造を
行った。

または、実施例８に示すように、クロロメチル樹脂をア
ルギニン（実施例８Ａ）でエステル化し、所望のアミノ
酸の順番に縮合させ、次いで。

ペプチドを樹脂から切断し、同時に、ＨＦ−ＴＦＡ（実
施例８Ｇ）を全脱保護を行い、目的とするペプチド（Ｘ
　ｍ）〜（Ｘ　Ｘ）を得た。

実施例１１ ペプチド（ＸＸＩ）〜（Ｘ　Ｘ　ｍ）及びペプチド（Ｉ
）の合成： 合成の方法は、上記で報告した手順から明らかなもので
ある。実施例５Ａ〜５Ｇに示されるように、固相におけ
るペプチド（■）の逐次合成から始める。

実施例５Ｈに従い、アスパラギン（リゾチームアミノ酸
の４６番目の位置）を縮合させたのち。

樹脂からの切断を進めるかわりに、更にアルギニン（リ
ゾチームアミノ酸の４５番目の位Ｗ）及びペプチド（ｍ
）の配列順序を構成する他のアミノ酸を実施例７Ｂ〜７
Ｈの順序に従い縮合させた。

製造は、ペプチドをレジンから切断し、同時に、２段階
で（実施例７Ｈ及び７Ｉ）又は１段階で（実施例８Ｇ）
、脱保護を行うことにより、終了した。

実施例１２ ペプチド（ＸＸＷ）　〜（ｘｘＸｒＶ）（７）合成実施
例５Ａ〜５Ｇに示すように、固相でペプチド（■）の逐
次合成を行った。

既に示されているように、ＢＯＣ−グリシン及びＤＣＣ
Ｄを使用してグリシンの縮合を行い、アスパラギン及び
他のアミノ酸の縮合を実施例１１に示すように、必要な
だけ続け、最終的に所望のペプチド（ＸＸＷ）〜（Ｘ　
Ｘ　Ｘ　ｆｆ）を、得た。

実施例１３ ペプチド（Ｖ）の均質相での合成： ２０ｍ１のジクロロメタンに溶解した２、０ｇ（５，５
３ミリモル）のＯ−ベンジル−チロシンベンジルエステ
ルに、１．７９ｇ　（５，５３ミリモル）の４−ベンジ
ルエステル　ＢＯＣ−Ｌ−アスパラギン酸が、２０＋ｎ
ＪｌのＣＨＣ１２に溶解したもの及び１．２５ｇ（６，
０８ミリモル）のＤＣＣＤを加え、攪拌下に４℃で１８
時間放置した。

生成したジシクロヘキシル尿素を濾別し、濾液を減圧下
で蒸発させ、エタノール−水から結晶化し、３．２４ｇ
　（４，８７ミリモル、収率＝８８パーセント）の保護
されたジペプチド（ＩＶａ）であるＢＯＣ−（４−ベン
ジルエステル）　Ａ　ｓ　ｐ　−（０−ベンジル）Ｔｙ
ｒベンジルエステル（ＴＬＣ，Ｒｆ＝０．９５．ＣＨＣ
ｕ　　　：ＣＨ３０Ｈ−９５’：５）を得た。３．２４
ｇのジペプチド（ＩＶａ）を、３０ｍ１（１）ＣＨＣ１
：ＴＦＡ−１：ｌの混合物で処理し、３０分間室温で攪
拌した。溶剤を減圧下で蒸発させ、３．２１ｇ（４，７
２ミリモル、収率；９７％）のジペプチドＴＦＡ＠ＮＨ
２−（４−ベンジルエステル）Ａｓｐ−（０−ベンジル
）Ｔｙｒベンジルエステル（ｘｖｂ）を得た。

２５ｍＪｌのＤＭＦに溶解した３−２１ｇのジペプチド
（ＩＶｂ）、０．７ｍ１（５ミリモル）のトリエチルア
ミン、２０ｍｊＬのＤＭＦに溶解した１、４６ｇ（４，
７２ミリモル）のＢＯＣ−０−ベンジル−Ｌ−トレオニ
ン及び１．０７ｇ（５，１９ミリモル）のＤＣＣＤを混
合し、Ｗｌ拌下、４℃で１８時間保った。濾過ののち、
濾液の７に発及び結晶化による精製によって、３．３２
ｇ（３，８７ミリモル）のＢＯＣ−（０−ベンジル）Ｔ
ｈｒ−（４−ベンジルエステル）Ａｓｐ−（０−ベンジ
ル）Ｔｙｒベンジルエステルである保護されたトリペプ
チド（Ｖ　ａ）を得た（収率：８２％）、ＣＩ（Ｃ１２
によるＢＯＣの脱保護により、３．２３ｇ　（３，７１
ミリモル）のＴＦＡ−ＮＨ−２（０−ベンジル）Ｔｈｒ
　−（４−ベンジルエステル）Ａｓｐ−、（０−ベンジ
ル）Ｔｙｒベンジルエステル（Ｗｂ）（収率＝９６％）
を得た。

側鎖の脱係；ｌ：３．２３ｇ（７）（Ｗｂ）ｔ”、８０
％の酢酸水溶液に溶解し、１０％の炭素状のパラジウム
（Ｐｂ）により室温で６０分間、触媒水素添加を行った
。触媒を濾過したのち、濾液を凍結乾燥し、中和し、結
晶化して、１．１９ｇ（３，０ミリモル）のＮＨ−Ｔｈ
ｒ−Ａｓｐ　−Ｔｙｒ−ＣＯＯＨであるトリペプチド（
Ｖ）を得た（収率＝８１％）。

薄層クロマトグラフィーにおいて、ただひとつのニンヒ
ドリン及びパクリ試薬に対して陽性のスポットが１１１
１察された（Ｒｆ＝０．６３　、エタノール：２８％ア
ンモニア＝７ｏ　：　３０）。

実施例１４ ペプチド（ＸＩＫ）の均質相に於ける合成２．６ｇ（６
，＋６ミリモル）のＮｗ−ニトロ−Ｌ−フルゲニンベン
ジルエステル及び２５ｍ１のＤＭＦに溶解した２、７４
ｇ（７，７５ｍｍｏ　１）のＢＯＣ−Ｌ−アスパラギン
ｐ−二トロフェニルエステルを、４℃でｔａ時間攪拌下
に保った。

溶剤を減圧下で蒸発し、Ｂ　ＯＣ−Ａ　ｓ　ｎ　−（Ｎ
Ｗ−二トロ）Ａｒｇベンジルエステルであるジペプチド
（ＸｖＩａ）をシリカゲルクロマトグラフィー及び結晶
化（無水）（ａｂｓ、、エタノール）によって精製し、
２．４ｇ（４，７２ミリモル、収率＝７３％）を得た。

薄層クロマトグラフィー（ＣＨＣ文　：ＣＨ３０Ｈ−９
：１）では明らかに、ただひとつのスボツ）（Ｒｆ−０
、２７）が認められた。

２　、４ｇの（ＸＷａ）を、２０ｍＭのＣＨＣ見　：　
ＴＦＡ悶ｌ：１の混合物により１時間、室温で、攪拌下
でＢＯＣの脱保護処理にかけた。溶液を減圧下で蒸発さ
せ、２．４３Ｋ（４，６４ミリモル、収率雪９８．６％
）のＴＦＡ　　ＩＩ　ＮＨ２−Ａｓｎ　　−（Ｎｗ　　
−ニ　ト　仁１　）Ａｒｇベンジルエステルジペプチド
（ｘｖｒｂ）を得た。

３０＋ｎＪｌのＤＭＦに溶解した２、４３ｇのジペプチ
ド（Ｘ■ｂ）１．：、０．７ｇ（５ミリモル）ノトリメ
チルアミン及び２０ｍＪＬのＤＭＦに溶解した２、２６
ｇ（５，５７ミリモル）のＢＯＣ−Ｏ−ベンジル−Ｌ−
）レオニンＮ−ヒドロキシサクシンイミドエステルを加
え、攪拌下に４℃で１８時間放置した。溶剤の蒸発及び
エタノールからの結晶化ののち、２．６５ｇ　（３，７
２ミリモル、収率＝８０％）のＢＯＣ−（０−ベンジル
）Ｔｈｒ−Ａｓｎ−（Ｎｗ−二）口）Ａｒｇベンジルエ
ステルである保護されたトリペプチド（Ｘ　１１１　ａ
　）を単離した。

薄層クロマトグラフィー（ＣＨＣ１３：ＣＭ　　ＯＨ：
ＣＨ３ＣＯ０Ｉ（＝９０：８：２）では、ひとつのスポ
ット（Ｒｆ、０．３７）が認められた。

ＣＨＣＪＩ２による（　Ｘ　Ｎａ　）の脱係、！ｔ：Ｔ
Ｆ’Ａにより、２．７ｇ　（３，７１ミリモル）のＴＦ
Ａ　＠ＮＨ２−（０−ベンジＪｌｚ）Ｔｈｒ−Ａｓｎ−
（Ｎｗ−ニトロ）Ａｒｇベンジルエステル（ｘ′ｑｒｉ
ｂ）（収率＝１００％）を得た。

３０ｍＪＬのＤＭＦに溶解した２、７０ｇの（Ｘ［ｂ）
、０５６ｍ１　（４、Ｏミリモル）のトリエチルアミン
及び１．２７ｇ（４，４５ミリモル）のＢＯＣ−Ｌ−ア
ラミンＮ−ヒドロキシーサクシンイミドエステルの混合
物を、攪拌下、４℃で１８時間放置した。

無水エタノールからの結晶化ののちに、２．８４ｇ（３
，６ｔｌミリモル、収率冨９７．４％）のＢＯＣ−Ａ　
ｌ　ａ　−（０−ベンジル）Ｔｈｒ−Ａｓｎ−（Ｎｗ−
ニトロ）Ａｒｇベンジルエステルである保護されたテト
ラペプチド（ＸＷａ）を得た。薄層クロマトグラフィー
（ＣＨＣｆＬ３　：ＣＭ３０Ｈ＝９　：　１）では、Ｒ
ｆ−０，３７であった。脱保護ののち、２．８５ｇ　（
３，５７ミリモル）のＴ　Ｆ　Ａ　１１Ｎ　Ｈ２−Ａ　
ｌ　ａ　−（０−ベンジル）　Ｔｈ　ｒ−Ａ　ｓ　ｎ　
−（Ｎｗ−二）口）Ａｒｇベンジルエステルである（ｘ
ｗｂ）が得られた（収率＝９８．９％）。

３０　ｍ　ｌ　（７）　Ｄ　Ｍ　Ｆに溶解した、２．８
５ｇｆ）（Ｘ［ｂ）を０．５６ｍ１　（４，０ｍｍｏ　
ｆ）のトリエチルアミン及び２０ＩＩＩｌｆＬのＤＭＦ
に溶解した１、５７ｇの（４，２８ｍｍｏ１）のＢＯＣ
−Ｌ−グルタミンｐニトロフェニルエステルで処理し、
攪拌下４℃で３６時間放置した。結晶化ののち、２．９
９ｇ　（３，２７ｍｍｏ　ｌ、収率＝９１．７％）の保
護されたペンタペプチド（ＸＩＸａ）を単離した。薄層
りａマドグチフィー（ＣＨＣＩ　　：ＣＨ３０Ｈ＝＋９
：１）ではＲｆ＝０．１７であった。ＢＯＣの脱保護の
のち、３゜０３ｇ（３，２７ミリモル）のＴＦＡ−ＮＨ
２−Ｇｌｎ−Ａｌａ−（０−ベンジル）Ｔｈｒ−Ａｓｎ
−（ＮＷ−ニトロ）Ａｒｇベンジルエステル（ＸｒＫｂ
〕を得た（収率＝１００％）。

側Ｈノｌｌ１ｉ！保護：　３．０３ｇ（１）（ＸＩＸｂ
）　を、１００ｍ１の８０％酢酸水溶液に溶解し、炭素
状の１０％パラジウムにより触媒水素添加を室温で４８
時間で行った。触媒を濾過により除去し。

濾液を凍結乾燥した。トリメチルアミンによる中和及び
結晶化による精製ののち、１．５０ｇのＮＨ２−Ｇｌｎ
−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ　−Ａｒｇ−ＣＯＯＨである
ペンタペプチド（ＸＤＣ）を単離した（収率＝７８％）
、薄層クロマトグラフィーでは、ニンヒドリン及びサカ
グチ試薬に対し陽性のスポットが、ただひとつのみ認め
られた（Ｒｆ＝Ｏ，１９、メタノール：２８％アンモニ
ア＝９　：　１）　。

【図面の簡単な説明】

第１図は１本発明の化合物を得るための反応経路を示す
ブロック図である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）少なくとも３以上のアミノ酸からなり、以下の構造
   の配列順序： 【アミノ酸配列があります】 を有するペプチドであって、Ｙは存在しなくても、グリ
   シン残基であってもよく、アミノ酸【アミノ酸配列があ
   ります】及び【アミノ酸配列があります】はニワトリ卵
   白リゾチームの３９乃至４５番目及び４６乃至５３番目
   の位置の配列順序を示すことを特徴とするペプチド ２）他のペプチドとの混合物として存在する特許請求の
   範囲第１項記載のペプチド ３）■をカルボキシ−末端アミノ酸として有する特許請
   求の範囲第１項記載のペプチド ４）ＹがＧｌｙであり、かつカルボキシ−末端アミノ酸
   である特許請求の範囲第１項記載のペプチド ５）■をカルボキシ−末端アミノ酸として有する特許請
   求の範囲第１項記載のペプチド ６）【アミノ酸配列があります】に於て、Ｙが存在しな
   い構造を有する特許請求の範囲第１項記載のペプチド ７）【アミノ酸配列があります】の構造を有する特許求
   の範囲第１項記載のペプチド ８）【アミノ酸配列があります】の構造を有する特許請
   求の範囲第１項記載のペプチド ９）【アミノ酸配列があります】の構造を有する特許請
   求の範囲第１項記載のペプチド １０）グリシン以外のアミノ酸が左旋体である特許請求
   の範囲第１項記載のペプチド １１）リゾチームがペプシン及び／又はトリプシン及び
   ／又はキモトリプシンにより酵素的に加水分解されるこ
   とを特徴とする少くとも３以上のアミノ酸からなり、以
   下の構造の配列順序：【アミノ酸配列があります】を有
   するペプチドであって、Ｙは存在せず、アミノ酸【アミ
   ノ酸配列があります】及び【アミノ酸配列があります】
   はニワトリ卵白リゾチームの３９乃至４５番目及び４６
   乃至５３番目の位置の配列順序を示すペプチドの製造方
   法。 １２）水解物を有機溶剤による処理及びシリカゲルクロ
   マトグラフィー及びイオン交換樹脂により分別すること
   を特徴とする特許請求の範囲第１１項記載のペプチドの
   製造方法。 １３）固相に於ける逐次合成による少くとも３以上のア
   ミノ酸からなり、以下の構造の配列順序： 【アミノ酸配列があります】 を有するペプチドであって、Ｙは存在しなくても、グリ
   シン残基であってもよく、アミノ酸【アミノ酸配列があ
   ります】及び【アミノ酸配列があります】はニワトリ卵
   白リゾチームの３９乃至４５番目及び４６乃至５３番目
   の位置の配列順序を示すペプチドの製造方法であって、
   カルボキシ−末端アミノ酸をスチレン−ジビニルベンゼ
   ンクロロメチレート共重合体でエステル化し、順次アミ
   ノ酸をアミンの窒素側に目的とする配列順序で縮合し、
   該樹脂からペプチドを分離することを特徴とするペプチ
   ドの製造方法 １４）カルボキシ−末端アミノ酸がセシウム塩の形態で
   あり、他の官能基が保護されている特許請求の範囲第１
   ３項記載の製造方法 １５）アミノ基側に縮合するアミノ酸が縮合剤の効果に
   より又は予めｐ−ニトロフェノールによりエステル化す
   ることによりカルボニシル基の活性化を受けており、他
   の官能基が保護されている特許請求の範囲第１３項記載
   の製造方法 １６）ハロゲン化水素の作用により目的とするペプチド
   を樹脂から分離する特許請求の範囲第１３項記載の製造
   方法 １７）目的とするペプチドを構成するアミノ酸をトリフ
   ルオロ酢酸の作用により脱保護する特許請求の範囲第１
   ４項又は１５項記載の製造方法 １８）均質相に於ける逐次合成による、少くとも３以上
   のアミノ酸からなり、以下の構造の配列順序： 【アミノ酸配列があります】 を有するペプチドであって、Ｙは存在しなくても、グリ
   シン残基であってもよく、アミノ酸【アミノ酸配列があ
   ります】及び【アミノ酸配列があります】はニワトリ卵
   白リゾチームの３９乃至４５番目及び４６乃至５３番目
   の位置の配列順序を示すペプチドの製造方法であって、
   カルボキシ−末端アミノ酸をベンジルエステルとして保
   護し、順次アミノ酸をアミンの窒素側に目的とする配列
   順序で縮合し、触媒水素添加によりベンジルエステルを
   切断することを特徴とするペプチドの製造方法 １９）少くとも３以上のアミノ酸からなり、以下の構造
   の配列順序： 【アミノ酸配列があります】 を有するペプチドであって、Ｙは存在しなくても、グリ
   シン残基であってもよく、アミノ酸【アミノ酸配列があ
   ります】及び【アミノ酸配列があります】はニワトリ卵
   白リゾチームの３９乃至４５番目及び４６乃至５３番目
   の位置の配列順序を示すペプチドの少くとも１つを有効
   量含有する人間及び家畜の病気の治療に有効な鎮痛性、
   抗ウィルス性及び免疫モジュレーション作用のある薬剤