JPS62169053A - 過酸化活性物質測定のための安定試験組成物及び試験具並びに該試験具の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［発明の技術分Ｙｆ］ 本発明は一般の水性流体中の過酸化的に活性な物質（過
酸化活性物質）を測定するための安定組成物及び特に尿
中の潜血を測定するための安定試験具に関する。

［実用性］ ヘモグロビン及びその誘導体は酵素であるペルオキシダ
ーゼと同様の挙動を示すので、「過酸化活性」物質の代
表例として挙げられる。そのような物質は、ペルオキシ
ドと、ベンジジン、０−トリジン、３．３’、５．５′
−テトラメチルベンジジン、２，７−ジアミツフルオレ
ンのような指示薬化合物又は同様の物質との酸化還元反
応を触媒し、それにより色変化を引き起こすことから、
偽ペルオキシダーゼつまり酵素様物質とも呼ばれている
。過酸化活性物質の試験は尿のような体液試料及び便中
のしばしば「潜」血と呼ばれる少贋の血液の検出に特に
有用である。尿及び便における血液の存在は癌をはじめ
とする種々の異ある。かかる状態を初期に診断すること
が重要であるため、潜血の試験手段は通常複数の試験パ
ッドで構成された試験具に含まれている。各パッドは異
なった分析対象物の検査に適した試薬を含有するため、
ここでは多種（数）試験具又は「マルチプル」　（“ｍ
ｕｌｔｉｐｌｅｓ　”　）と呼び、日常の身体検査にお
ける尿試料の選別に使用される。また一般に、大部分の
多種選別試験具にはペルオキシダーゼに基づくグルコー
ス測定が含まれる。

沃化カリウム指示薬系を用いるグルコース試験手段を、
基質としてヒドロペルオキシドを含有する潜血試験手段
とともにマルチプル上に置き、得られたマルチプルをび
んに入れ、保存及び／又は輸送する場合に問題が認めら
れた。これらの試験手段に一般に使用されるヒドロペル
オキシド、特にクメンヒドロペルオキシド、２．５−ジ
メチルヘキサン−２，５−ジヒドロペルオキシド及びｐ
−ｔ−ブチルクメンヒドロペルオキシドが保存及び取り
扱い中に揮発及び／又は分解したり、び１　１／’ｔｌ
’、　４．１　　”ｒ　　４Ｑ　　イ１．％　　Ｌ　目
ｕ　＋ヂ　Ｍ　＋１．−ｔ　　　　ｑ　９　［４手−山
の沃化カリウムと反応して「緑変」するか又は偽りの陽
性反応を引き起こすことは明らかである。

本発明はかかる問題を解決した。

［情報の開示］ 潜血試験手段は当業界で周知であり、一般にヘモグロビ
ンの基質としてのヒドロペルオキシド・色原体及び反応
の安定剤又は促進剤の使用に基づくものである。

米国特許第３，８５３，４７１号はヒドロペルオキシド
、色原体及び安定剤としてリン酸又はホスホン酸を含有
するキャリアで構成される試験片を開示している。ジイ
ソプロピルベンゼンジヒドロベルオキシドが有用な基質
として開示されている。

米国特許第３，９７５，１６１号は有機ヒドロペルオキ
シド又はその塩、酸性緩衝剤、色原体、湿潤剤、天然又
は合成の固体ポリマーフィルム形成物質及び新規な促進
剤を含有する組成物を含浸せしめた吸水性キャリアから
なる試験片を開示している。上記促進剤はインキノリン
又はその誘、ｌの１つである。ヒドロペルオキシドはク
メンヒドロペルオキシド、パラ−メタンヒドロペルオキ
シド、１，４−ジイソプロピルベンゼン−１゜４−ジヒ
ドロペルオキシド、２，５−ジメチルヘキサン−２，５
−ジヒドロペルオキシド又は１−ヒドロキシシクロヘキ
サン−１−ヒドロペルオキシドからなる群より選ばれる
ことが開示されている。

キノリンの酸性塩又は付加物及びその誘導体は過酸化活
性物質の検出のための試験組成物における相乗作用剤と
して米国特許第３．９８６，８３３号に開示されている
。

［発明の概要］ 本発明はモル比が約０．９ないし約３．０の１．４−ジ
イソプロピルベンゼンジヒドロペルオキシド及びベンジ
ジン指示薬からなることを更に含有する、試料中の過酸
化活性物質の測定のための安定試験組成物を提供するも
のである。

尿試料１００万部中の１部の潜血の存在に感受性を有す
る安定試験具は試験組成物を包含せしめたキャリアマト
リックスで形成され、試験組成物は更に増強剤及び約４
ないし約７．５の範囲のｐＨを与えうる緩衝剤を含む、
第二鉄キレートを含有せしめることにより、試験具にア
スコルビン酸塩削性が付与される。試験具はグルコース
酸化酵素、ペルオキシダーゼ及び沃化カリウム指示薬の
使用に基づき、緑変の問題の徴候なく、グルコースの測
定を行うこともできるマルチプルの製造に使用できる。

［発明の説明］ 本発明の安定組成物は試料中の過酸化活性物質の存在を
測定するために使用することができる。

過酸化活性物質を含有すると推定される水性流体試料又
は水性流体に溶解しうる試料であれば、どのようなもの
でも検査することができる。試験組成物は、尿のよ）な
体液又は便に関して特に有用である。最も有用な実施態
様の１つは尿における使用を意図する潜血用固体試験具
である。尿潜血試験手段は１つの試薬パッドとして多種
試験具上に存在せしめて特に有用である。また、そのよ
うな多種試験具は通常少なくともグルコース測定手段を
も含んでいる０種々のマルチプルがインヂアナ州エルク
ハートのマイルス・ラボラトリーズ社のエイムズ・ディ
ビジ目ン（Ａｍｅｓ　Ｄｉｗｊｓｉａｎ　ｏｆＭｉｌｅ
ｓ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、　Ｉｎｃ、、　Ｅｌｋ
ｈｅｒｔ、　ＩＮ）よりマルチステ４　ｙ　クス（ＭＵ
ＬＴＩＳＴＩＸ＠　）試薬片及びＮ−マルチスティック
（Ｎ−阿ＵＬＴＩＳＴＩＸ＠　）試験片の商標名で重板
されている。

（問題点） グルコース測定手段及び潜血試験手段の両者を含む前記
マルチスティックス及びＮ−マルチスティックスの組成
は、消費者の使用に先立つ輸送及び／又は保存中に、グ
ルコース用試薬パッドの「緑変」として知られる現象を
示すことが判明している。グルコース測定は、グルコー
スを含有する試料と接触せしめた後のグルコース酸化酵
素による過酸化水素の発生及びそれに続く、発生した過
酸化水素のペルオキシダーゼの存在下に視認可能な色を
発する沃化カリウム指示薬系による測定に基づくもので
ある。グルコース用パッドの「緑変」（オ消費者が使用
にあたって試薬片のびんを開ける前にもペルオキシダー
ゼ／沃化カリウム系との何らかの反応が起きたことを示
すものであった。この現象は保存及び輸送中のマルチプ
ル１、Ｚの潜血試験手段において有機ヒドロペルオキシ
ド基質の分解及び／又は揮発によって生じるものと思わ
れている。

そのようなマルチプル紮重板するためには、輸送及び流
通を見込んだ十分な貯蔵寿命及び顧客のために以当な有
効寿命が必要である。「緑変」が生じると陰性応答を示
すはずの試料において、ｆシリツタ−当り３０ミリグラ
ム（ＩＩ１ｇ／ｄｌｌ　）のグルコースの陽性応答を示
すものと解釈され得る。

従って、そのような使用前の「緑変、Ｉは許容されない
。

（解決方法） 臨床的に有用な潜血試験手段は尿１００万部中の１部の
ヘモグロビン（潜血）に対しても感受性を有するもので
なければならない。十分な感受性及び安定性をもたらし
、多種試験具上の他の試薬試験手段に影１を及ぼさない
唯一のヒドロペルオキシドが見出された。

１．４−ジイソプロピルベンゼンジヒドロペルオキシド
。

１．４−ジイソプロピルベンゼンジヒドロペルオキシド
（ＤＢＤＨと省略し、本文中では［ジヒドロペルオキシ
ド」と称するが、α、α′−ジヒドロペルオキシー１．
４−ジイソプロピルベンゼンと呼ぶこともできる）は１
次式： を有し、ＤＢＤＨは不揮発性、非昇華性化合物であるこ
とがわかった。他のヒドロペルオキシド類とは異なり、
種々の条件下で非爆発性であることが認められ、従って
大量に製造し保存することが可能であった。

３．３’、５．５’−テトラメチルベンジジンを用いた
、尿中潜血測定用試験具の組成を最適化することにより
、目的とする応答を得るためにはジヒドロペルオキシド
とベンジジン指示薬の間に一定範囲のモル比を維持しな
ければならいことがわかった。一定範囲のモル比はベン
ジジン指示薬】モルにつきジヒドロペルオキシドが約０
．９ないし約３．０モル、好ましくはベンジジン指示薬
１モルにつきジヒドロペルオキシドが約１．６ないし３
．０モルであった。このモル比の範囲を下まわると必要
な感受性が得られず、このモル比を−１−まわると、驚
くべきことに試薬パッドはヘモグロビンに対し明確な反
応性を示さなかった。

スｋ」しＬ句 過酸化活性物質の測定のための安定試験組成物は、ベン
ジジン指示薬に対しジヒドロペルオキシドと同様の一定
範囲のモル比を必要とする。組成物は５０℃で４週間の
熱をかける条件に対し安定している、つまり活性を保持
する。

３．３’、５．５′−テトラメチルベンジジンは好まし
い指示薬であるが、他のベンジジン指示薬を使用するこ
ともできる。好適なベンジジン指示薬としては、テトラ
エチルベンジジン、０−トリジン、ベンジジン、０−ジ
アニシジン等が挙げられる。

試料１００万部中の１部の過酸化活性物質に対する感受
性は、組成物中に増強剤を包含せしめることにより得ら
れる。過酸化活性物質の測定のための当業界で公知の増
強剤を使用することができる。かかる増強剤としてはキ
ノリン類及びその誘導体並びにインキノリン類及びその
誘導体が挙げられる。増強剤は、好ましくは、インキノ
リン、４−ブロモイソキノリン、４−メチルキノリン、
６−メトキシキノリン、３−アミノキノリン又は５．６
−ペンゾキ７リンであってもよい。この群の中でもキノ
リン類、４−メチルキノリン及び６−メトキシキノリン
が好ましく、４−メチルキノリン［商標名　レビジン（
Ｌｅｐｉｄｉｎｅ＠　）としてウィスコンシン州ミルウ
ォーキーのアルドリッヒケミカル社（Ａｌｄｒｉｃｈ　
Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｇｏ、、　Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ。

ＷＩ）より市販］が最も好ましい。

試験試料の酸性度又は塩基性が高い場合、試験組成物は
緩衝化すべきである。緩衝剤は、ｐＨを約４．０ないし
約７．５の範囲とすることができるものから任意に選択
される。リン酸基、クエン酸塩等の緩衝剤又はそれらを
組合せたものを使用して適切なｐ）Ｉ範囲とする。

区翌１ 上記の試験組成物をキャリアマトリックスに包含せしめ
、乾燥するこにより便利な乾燥試薬試験のフォーマット
（ｆｏｒｍａｔ）が得られる。

試験具は人体からの試料の選別に特に好都合なフォーマ
ットである。人体からの試料１００万部につき少なくと
も１部のヘモグロビンの存在に感受性を有する安定試験
具はキャリアマトリックスに、ＤＢＤＨとベンジジン指
示薬とを、モル比が約０．９〜約３．０にて、更に、増
強剤及びｐＨを約４ないし７．５の範囲にしうる緩衝剤
を包含せしめることにより製造することができる。有用
なベンジジン指示薬、増強剤及び緩衝剤は先に述べた。

安定試験具は５０℃で４ｉ！！間保存した後に正確な試
験結果を提供する試験具の能力によってその範囲が限定
される０色応答が本来のカラーブロックの応答とは異な
らないと判定された場合は、目視的に読取った試験結果
は正しいと言える。このことは、「２分の１未満のカラ
ーブロックにおける色の減退」と呼ばれることがあり、
使用者に提供された適切なカラーチャート上の色ブロッ
クに言及するものである。着色の「２分の１のカラーブ
ロック」以内の色応答は分析対象物の正確な量として読
み取られる。ヘモグロビン（潜血）の臨床的選別に有用
な感受性は１００万につき１部であると決められている
０体液試料は通常望ましい範囲外のｐＨを有しているた
め、緩衝剤が試験組成物に添加される。

市販の使用可能な尿潜血試験具は３つの主な属性、つま
り安定性、感受性及びアスコルビン酸の影響に対する耐
性を有していなければならない。

安定性及び感受性の必要条件については既に定義した。

１　：　１．０００，０００の感受性は尿１デシリット
ル占たり０．１５ｍｇのヘモグロビンに相当する。アス
コルビン酸の影響は当業界公知である。アスコルビン酸
は指示薬の酸化を妨げ、見掛は上は陰性の結果をもたら
す。「アスコルビン酸塩耐性」はここでは、尿試料が試
料１デシリツトルにつき５０ミリグラム程度のアスコル
ビン酸を含有する場合に観察される指示薬の色に対する
無視し得る妨害を意味するものとして定義する。

アスコルビン酸又はアスコルビン酸塩は酸化還元指示薬
系に基づく診断試験に対する共通の妨害物であり、日常
ビタミンＣを摂取する人々の試験を行なう場合には特に
重大である。

試験組成物に第二鉄キレートを添加することにより、試
験具にアスコルビン酸塩による妨害に対する耐性を付与
することができる。使用可能な第二鉄キレートとしては
、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）エチレンジアミン三酢
酸（Ｆｅ−）（ＥＤＴＡ）、エチレンジアミンテトラ酢
酸（Ｆ　ｅ−ＥＤＴＡ）、シクロヘキシレンジアミン−
’；−ｋ　−、ＩＩＦ−Ｍ　（Ｔ；　ｐ　−ＣＴ）　Ｔ
　Ａ　）　　ニトリロ三酢酸（Ｆｅ−ＮＴＡ）　、イミ
ノジ酢酸（Ｆｅ−ＩＭＤＡ）、　エチレンジアミンジ酢
酸ジプロピオン酸（Ｆｅ−ＥＤＤＰα及びβ型）、ヒド
ロキシエチ）レイミノジ酢酸（Ｆｅ−ＨＩＭＤＡ）の第
二鉄キレートのようなポリカルボキシアルキルアミン第
二鉄キレート類及びその混合物が挙げられる。好ましく
はＦｅ−ＨＥＤＴＡ及びＦｅ−ＥＤＴＡであり、最も好
ましくはＦｅ−ＨＥＤＴＡである。ポリカルボキシアル
キルアミン第二鉄キレートは米国特許願第５７５，７２
５号にさらに詳細に記載されており、参考例としてここ
に取り上げる。

Ｆｅ−ＨＥＤＴＡを使用して所望のアスコルビン酸塩耐
性を得るためには、試験具がｐＨ６、５以上に、つまり
６．５ないし７．１に緩衝化されていることが好ましい
。広範囲に亘る実験により、最適ｐＨ範囲６．７ないし
７．１、最も好ましくは６．８０ないし６．８２の場合
に、　ｐＨ及び比重が極めて変動的である尿試料につい
て最も良い感受性と安定性とアスコルビン酸塩耐性との
７ヘランスが最も良くなることが判明した。試験を行な
った２５０を上まわる緩衝剤の組合せの中でも、モル比
が１ないし３のトリス−（ヒドロキシメチル）アミノメ
タン−マロン酸ト硼酸トリエタノールアミンの併用によ
り尿試験について最良の結果が得られることが判明した
。リン酸塩、クエン酸塩又はコハク酸塩等の他の緩衝剤
及び緩衝剤の組合せを使用することができる。しかしな
がら、その場合には、感受性、安定性又はアスコルビン
酸塩耐性が多少損なわれる。

濃縮剤、色安定剤、界面活性剤等のような他の成分を添
加することができる。ポリビニルピロリドンのようなポ
リマーを加えることにより安定性及び試験具上の発色の
均一性が上昇する。

五二ユヱ１ユユニｊ１ キャリアマトリックスは、試験組成物に対して実質的に
不活性で、多孔質であり及び／又は試験すべき水性試料
に対して吸収性である限り、試験組成物の成分を包含せ
しめることが可能ないかなる物質であってもよい、「キ
ャリアマトリックス」という表現は水又は他の生理的流
体と接触せしめた場合、不溶性であり、その構造的一体
性を維持する吸収性又は非吸収性マトリックスを意味す
る。使用可能な適切な吸収性マトリックスとしては、紙
、セルロース、木材、合成樹脂フリース、織布及び不織
布等が挙げられる。紙は好ましいキャリアマトリックス
である。非吸収性マトリックスとしては、グラスファイ
バー５ポリマーフイルム、予＠成形された又は微細孔質
の膜及びポリプロピレンのような有機プラスチック材料
等が挙げられる。

試薬の導入は浸漬、塗布又は吹付けのようなどのような
方法によっても行なうことができる。好ましい方法は紙
を試薬溶液に浸漬して含浸を行い、溶媒を乾燥により除
去することである。乾燥は包含せしめた試薬に有害な影
響を与えない方法であればいかなるものによっても行う
ことができるが、通常空気乾燥オーブンによって行なわ
れる。

製１己り法 前記の潜血試験手段はキャリアマトリックスに全試験成
分を含有する単一の溶液を含浸させ、上記マトリックス
を乾燥させることにより製造された。通常紙を試薬含有
溶液に浸漬することにより紙製キャリアへの試薬の含浸
を行った。現在でもその方法を使用して一般の過酸化活
性物質の測定のための試験具を製造することができる。

しかしながら、第二鉄キレートとしてＦｅ−ＨＥＤＴＡ
を含有する好ましい試験具は２段階の含浸工程により製
造される。

好ましい試験具の製造方法は次の工程を含む： ａ）試験具にアスコルビン酸塩耐性を付与することがで
きる第二鉄キレート及びｐＨを約６．５ないし約７．１
の範囲とすることができる緩衝剤を含有する第１の溶液
を製造し、 ｂ）有機溶媒；モル比約０．９ないし３．０の１．４−
ジイソプロピルベンゼンジヒドロペルオキシド及びベン
ジジン指示薬；並びに増強剤を含有する第２の溶液を製
造し、 Ｃ）キャリアマトリックスに第１又は第２の溶液を含浸
させ、 ｄ）溶液を含浸させたキャリアを乾燥し、ｅ）乾燥した
キャリアに、第１又は第２の溶液の、先に含浸させなか
った方を含浸させ、ｆ）２種類の溶液を含浸させたキャ
リアを乾燥する。

第１の溶液は５０％未満の有機溶媒を含有するのに対し
、第２の溶液は５０％を越える、好ましくは７０ないし
８０％の有機溶媒を含有する。どちらの含浸工程にも適
した有機溶媒としてはジメチルホルムアミド、エタノー
ル及びメトキシプロパノールが挙げられる。

ＤＢＤＨのベンジジンに対するモル比の好ましい範囲は
１．６ないし３．０である。ＤＢＤＨのベンジジンに対
するモル比は第２の含浸溶液を製造するために使用され
た化合物の量から計算された。乾燥された試験具におけ
るモル比は、紙を乾燥する間の少量（約１０％）のＤＢ
ＤＨの損失、すなわち分解のため多少低くてもよい。更
にボリビニルピロリドンのような成分を、最も都合のよ
いようにどちらかの溶液に包含せしめることができる。

得られた２度の含浸及び乾燥を行った紙を切断し、ポリ
スチレンのような硬質ポリマーの基材に貼付する。その
他の基材は周知である。得られた試験具は便宜−Ｊ−、
防水性の持ち手に貼付された小さい矩形の試薬パッドか
ら成る。多種試験具においては、グルコース、蛋白質、
ｐＨ１比重及び白血球のような種々の診断試験手段を含
む他の試薬パッドを更に設けることができる。特に本発
明の試薬パッドは、ペルオキシダーゼ／沃化カリウム指
示薬系を含むグルコース試薬パッドを備えた多種試験具
において使用することができる。

位■児 試験組成物は直接水性試験試料により又は試料と接触せ
しめる前に水を加えることにより溶液を形成して使用す
ることができる。試験具は体液試料を接触させ、試験具
を取り出し、発生した色を目視又はＩｊｊ、械により測
定することによって有利に使用される。通常目視読み取
り試験は、使用者に提供されている専用のカラーチャー
トと比較することにより半定量的濃度範囲を与える機械
による結果の方がややより定量的であり、インヂアナ州
、エルクバー］・のマイルスラボラトリーズ社エイムズ
φディビジョンより入手可能なりリニテックＣＣ：ＬＩ
ＮＩＴＥＫ＠　）　１０反射光度計のような装置を用い
ることにより得られる。尿試料中への浸漬による潜血試
験の結果は、通常、目視又は機械により読み取りにおい
ては、約１分未満で得られる。

マルチプルの機械的読み取りの方が長い読み取り時間を
要する他の試薬試験が含まれているため長い時間を要す
る。

［略語］ 次の略語を便宜」二使用する。実施例で使用する化学薬
品の正式名は表記の通りである。

Ｍ　　　　　　　モル ｍＭ　　　　　　　　ミリモル ｍｇ　　　　　　　　　ミリグラム ｄＬ　　　　　　　　　デシリンドル ＤＢＤ）（ｌ　、４−ジイソプロピル °Ｃ！５氏温度 ｓｓｎ　　　　　　標準液表示単位 ＳＧ　　　　　　　比重 タソスルホン酎 ＴＥＢ　　　　　　硼酸トリエタノールアミン 一マレイン酸 マロン酸 次の実施例で行なった実験について説明する。

実施例は発明を説明するだめのものであって、それらは
発明の範囲を限定するものと解釈すべきではない。その
範囲は特許請求の範囲によってのみ限定される。当業者
は組成物の成分及び反応パラメーターを望ましいと思わ
れる様に変化させたり、代用物を用いたり、変更させる
ことができる。

［実施例コ 実施例１：好ましい実施態様 尿試料１００万部に対し１部の潜血の存在に感受性を有
する安定なアスコルビン酸塩耐性試験手段を下記の通り
２段階の含浸工程により製造した。

第１の含浸液は下記の化合物の水性混合物を含有してい
た。

トリス−マロン酸塩　　　　　　０，１Ｍ硼酸トリエタ
ノールアミン　　　０．３Ｍドデシルスルホン酸ナトリ
ウム　０．３重量％Ｆｅ−ＨＥＤＴＡ　　　　　　　　
５ｍｍ上記の水性混合物のｐＨを６．８０から６．８２
の間に調整した後ジメチルホルムアミド（最終溶液はジ
メチルホルムアミドを４５％含有）で希釈した。ホアッ
トマン昧ｈａｔｍａｎ＠　）　３　ＭＭ紙を上記水溶液
に浸漬し８５℃で５分間乾燥した。

次に、乾燥した紙を： ３．３’、５．５’− テトラメチルベンジジン　　　２５−３５ｍＭ４−メチ
ルキノリン　　　　　０．６容量％ＰＶＰ　　Ｋ２Ｏ４
重量％ ＤＢＤＨ４５−６０ｍＭ ジメチルホルムアミド　　　　８０容量％エチルオレン
ジ　　　　　　　２５　ｍｇ／ｄＬ橙色Ｇ染料　　　　
　　　　　２５　ｍｇ／ｄＬを含有する第２含浸液に浸
漬した。試験によってこの配合物が重版に適する尿潜血
試験手段としてすべての要求条件に合うことが示された
。

実施例２・不適切なヒドロペルオキシド下記の表１は実
施例１の配合物中のＤＢＤＨの代わりに使用し、不適切
であることが判明した多数の他のヒドロペルオキシドを
示す。

−表−ニー ナフタレン ２．６−ジー（α−ヒドロベル　　非反応性オキシイン
プロピル）ナフタレ ン ホン酸ヒドロペルオキシド 実施例３：不適切な緩衝剤 緩衝剤系はｐＨ及び比重に影響を与える尿に対する耐性
に加えその他の必要な特性を有する重版に適する尿潜血
用乾燥試薬試験具を提供するためには重要であることが
わかっている。実施例１の配合物を緩衝剤を変化させて
使用し、尿潜血用単−パッド試験具を用いて試験を行な
った。次表の一部に紙製キャリアに含浸させたＤＢＤＨ
／Ｆｅ−ＨＥＤＴＡ試験配合物と共に用いた緩衝剤の組
合わせリストを挙げる。

表　２ 緩衝剤系 絨ｊ−肌−系　　　　　　　　周一」 ビス−トリス、ｐＫ６．５　　　尿のｐＨ又はＳＧｐ便
’ｊｌ・、：ｔＳ：ｔ：な（，５ＨＥＰＥＳ、ｐＫ　　
７．６　　　　試験片は反応性を有さすマレイン酸…と
ＴＥＢ　　　　　　紙に汚、・ｊυ各生モル比が１対３
のトリス−マロン酸塩、ｔｉｎｓトリエタノールアミン
の緩衝剤系により、広範囲なｐＨと多様に変動する比重
を有し、その多様性が試験の感受性に影響を与える臨床
上の尿の母集団で最良の結果が得られることが判明した
。

実施例４：安定性 実施例１の好ましい試験具用配合物を以下の実験に使用
し、試験具の無類な熱安定特性を証明した。下記に示し
た安定性のデータ（表ＩＩ）はインヂアナ州、エルクハ
ートのマイルス争うボラトリーズ社のエイムズ・ディビ
ジョンより市販されている潜血試験手段である、ヘマス
チックス（ＨＩＪＡＳＴ　ＩＸ）試薬試験片と本発明の
試験具とを比較するものである。５０℃の熱を４週間か
けた後の本試験具の読み取り値は期待値に非常に近いの
に対し、ヘマストックスの高い血液濃度読み取り値は一
貫して低かった。

一人一」− 血液濃度　　　１旦」−工ＡＵ目旬　　　　期待イ直Ｏ
ｔＧ　　　　　　　１０　　　　　　　　　１００．０
１８　　　　　　１０　　　　　　１８　　　　　　　
　２００．０４５　　　　　　１８　　　　　　２８　
　　　　　　　　３００．１３５　　　　　　２９　　
　　　　３８　　　　　　　　４０ＳＳＤ単位は種々の
色ブロツクレベルに使用される一連の任意単位であり、
陰性をｌＯとして読み１漸進レベルは１０単位ずつ増加
する。

実施例５：緑変 目視により読み取りが行なわれる試験結果の定量化にお
ける問題点の１つは色覚の個人差である。この差は、色
をＬ’、ａ”、ｂ“の三次元目盛でＪｌｌｌ　７ｆ　ｔ
　６ニユーヨーク州ニユーハークのコルモーゲン社（Ｋ
ｏｌｌｍｏｒｇｅｎ　Ｃａｒｐ、、　Ｎｅｗｂｕｒｇｈ
、　Ｎ、Ｙ、）から入手可能であるマクベス（ＭａｃＢ
ｅｔｈ）　１５００比色計の使用により排除される。Ｌ
’、ａ“、ｂ１値は色の明瞭な表示を可能にする。色が
類似している場合はＬ＊、ａ＊、ｂ＊の値はそれぞれ等
しくなり、これらの値の１つ以上が異なる場合は、色が
異なることを示す。

マイルスラボラトリー社インヂアナ州、エルクハートの
エイムズ・ディビジョンよりＮ−マルｆスｆｙ　クスＳ
Ｇ　（Ｎ　　ＭＵＬＴＩ　５ＴＩＸＳＧ）として市販さ
れている多種試験具とでの潜血試験は、対照試料との反
応後、試験片に６０℃の熱をかけながら、３日及び７目
の間隔をおいてマクベスによる読み取り試験を行なった
。得られたＬ　＊　、　ａ　ｔ　、　ｂＺ値のグラフは
一段階高い色ブロックへの移行を明らかに示した。熱応
力を加えた後、陰性試料に浸漬した後の試験片の色は陰
性試料よりも３０ＩＩｇ／ｄＬのヘモグロビン試ネ′１
の期特色に近かった。同様に３０　ｍｇ／　ｄＬ試料の
色も１００ｍｇ／　ｄＬ試料から期待される色への明ら
かなる移行を示した。

先に使用したものと同様のグルコース試験手段（グルコ
ースオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ及び沃化カリウム
）と本発明の潜血試験手段を含むマルチパッド試験片を
用いて行なった同様のグラフは、６０℃の熱を７日間か
けた後室温で試験したところＬ”、ａ”、ｂ”軸上での
実質的移行は示されなかった。苛酷な熱をかけたにもか
かわらず、陰性試料及び３０ＩＩＩｇ／ｄＬ試料につい
ては、「緑変」は認められなかった。

発明の精神からはなれない範囲で好ましい実施態様の修
正及び変更を行なうことができる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、モル比約０．９ないし約３．０の１，４−ジイソプ
   ロピルベンゼンジヒドロペルオキシドとベンジジン指示
   薬とからなることを特徴とする、試料中の過酸化活性物
   質の測定のための安定試験組成物。 ２、更に増強剤を含有する特許請求の範囲第１項記載の
   安定試験組成物。 ３、増強剤が４−メチルキノリン及び６−メトキシキノ
   リンから選ばれる特許請求の範囲第２項記載の安定試験
   組成物。 ４、更にｐＨを約４ないし７．５の範囲にしうる緩衝剤
   を含有する特許請求の範囲第２項記載の安定試験組成物
   。 ５、ベンジジン指示薬が３，３′，５，５′−テトラメ
   チルベンジジンである特許請求の範囲第４項記載の安定
   試験組成物。 ６、人体からの試料１００万部において少なくとも１部
   のヘモグロビンの存在に感受性を有する、安定試験具で
   あって、 ａ）キャリアマトリックス、及び ｂ）それに包含せしめられる、モル比が約 ０．９ないし約３．０の１，４−ジイソプロピルベンゼ
   ンジヒドロペルオキシドとベンジジン指示薬、増強剤及
   びｐＨを約４ないし約７．５の範囲にしうる緩衝剤から
   なる試験組成物 からなることを特徴とする安定試験具。 ７、試験組成物にアスコルビン酸塩耐性を付与すること
   ができる第二鉄キレートを更に含有する特許請求の範囲
   第６項記載の安定試験具。 ８、第二鉄キレートがＮ−（２−ヒドロキシエチル）エ
   チレンジアミン三酢酸の第二鉄キレートであり、緩衝剤
   がｐＨを約６．５ないし約７．１にすることが可能な特
   許請求の範囲第７項記載の安定試験具。 ９、緩衝剤が、トリス（ヒドロキシメチル）アミノエタ
   ン−マロン酸と硼酸トリエタノールアミンとのモル比約
   １：３の組合わせである特許請求の範囲第８項記載の安
   定試験具。 １０、更にポリビニルピロリドンを含有する特許請求の
   範囲第９項記載の安定試験具。 １１、体液試料１００万部につき少なくとも１部のヘモ
   グロビンの存在に感受性を有する、アスコルビン酸塩耐
   性の安定試験具の製造方法であって、 ａ）試験具にアスコルビン酸塩耐性を付与することがで
   きる第二鉄キレートとｐＨを約６．５ないし約７．１の
   範囲にしうる緩衝剤とを含有する第１の溶液を製造し、 ｂ）有機溶媒；モル比が約１．６ないし３．０の１，４
   −ジイソプロピルベンゼンジヒドロペルオキシド及びベ
   ンジジン指示薬；並びに増強剤から成る第２の溶液を製
   造し、 ｃ）キャリアマトリックスに第１又は第２の溶液を含浸
   させ、 ｄ）溶液を含浸したキャリアを乾燥し、 ｅ）乾燥したキャリアに、第１又は第２溶液の先に含浸
   させなかった方を含浸させ、 ｆ）２種類の溶液を含浸させたキャリアを乾燥する、 工程からなることを特徴とする方法。 １２、第二鉄キレートがＮ−（２−ヒドロキシエチル）
   エチレンジアミン三酢酸の第二鉄キレートである特許請
   求の範囲第１１項記載の方法。 １３、緩衝剤が、モル比が約１ないし３のトリス（ヒド
   ロキシメチル）アミノメタン−マロン酸とホウ酸トリエ
   タノールアミンとの組合わせである特許請求の範囲第１
   ２項記載の方法。 １４、増強剤が４−メチルキノリン及び６−メトキシキ
   ノリンから選ばれる特許請求の範囲第１１項記載の方法
   。 １５、有機溶媒がエタノール、メトキシプロパノール及
   びジメチルホルムアミドから選ばれる特許請求の範囲第
   １１項記載の方法。