JPS6211094A - 新規プラスミドおよびその用途 - Google Patents
新規プラスミドおよびその用途Info
- Publication number
- JPS6211094A JPS6211094A JP60146634A JP14663485A JPS6211094A JP S6211094 A JPS6211094 A JP S6211094A JP 60146634 A JP60146634 A JP 60146634A JP 14663485 A JP14663485 A JP 14663485A JP S6211094 A JPS6211094 A JP S6211094A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- ifn
- dna
- plasmid
- cells
- downstream
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
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- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産」しヒ例」団り年！一
本発明は新規発現型プラスミド、該プラスミドを含有す
る動物細胞およびその用途に関する。
る動物細胞およびその用途に関する。
豊見立１嵐
インターフェロン（Ｉ ＦＮ）は各種ウィルスの感染し
たあるいは二重鎖ＲＮＡ、多糖類などの種々の物質によ
り処理した動物細胞が産生ずる蛋白質で、同種の細胞に
作用してその細胞を抗ウイルス状態にする物質である。
たあるいは二重鎖ＲＮＡ、多糖類などの種々の物質によ
り処理した動物細胞が産生ずる蛋白質で、同種の細胞に
作用してその細胞を抗ウイルス状態にする物質である。
これは人間を含む哺乳動物のウィルス感染に対する主た
る防御機構の一つである。またＩＦＮは、その抗ウィル
ス活性の他に、免疫反応調節活性あるいは細胞分裂を含
む種々の細胞機能に対する活性を有することが知られ、
ウィルス性疾患あるいは悪性腫瘍に対する治療効果が認
められている。それ故、医薬品としての注目を集め、Ｉ
ＦＮを大規模に生産することに多大の研究ならびに開発
の努力がなされてきた。これらの努力の結果、現在では
遺伝子工学的手法を利用した大腸菌、および動物細胞を
用いてＩＦＮの大量生産が開始されている。しかし大腸
菌を利用したＩＦＮの生産は、動物細胞から技術的に困
難を伴うＩＦＮ遺伝子のクローニングが必要である。
る防御機構の一つである。またＩＦＮは、その抗ウィル
ス活性の他に、免疫反応調節活性あるいは細胞分裂を含
む種々の細胞機能に対する活性を有することが知られ、
ウィルス性疾患あるいは悪性腫瘍に対する治療効果が認
められている。それ故、医薬品としての注目を集め、Ｉ
ＦＮを大規模に生産することに多大の研究ならびに開発
の努力がなされてきた。これらの努力の結果、現在では
遺伝子工学的手法を利用した大腸菌、および動物細胞を
用いてＩＦＮの大量生産が開始されている。しかし大腸
菌を利用したＩＦＮの生産は、動物細胞から技術的に困
難を伴うＩＦＮ遺伝子のクローニングが必要である。
また、大腸菌の産生ずるＩＦＮには、天然型ＩＦＮと異
なり、糖鎖が認められない、従ってこの方法には多くの
限界が存在している。
なり、糖鎖が認められない、従ってこの方法には多くの
限界が存在している。
一方、動物細胞を利用したＩＦＮの産生はウィルス感染
による病的状態を利用するか、細胞にとって極めて毒性
の高いポリＩ・ポリＣなどの人工的二重鎖ＲＮＡのトラ
ンスフェクションを利用する方法が主流である。また、
一部では部分精製されたウィルス糖タンパク質などの刺
激が利用されているもののその効果はあまり著明ではな
いのが現状である。
による病的状態を利用するか、細胞にとって極めて毒性
の高いポリＩ・ポリＣなどの人工的二重鎖ＲＮＡのトラ
ンスフェクションを利用する方法が主流である。また、
一部では部分精製されたウィルス糖タンパク質などの刺
激が利用されているもののその効果はあまり著明ではな
いのが現状である。
日が しようとする口
上記したとおり、動物細胞を用いてＩＦＮを生産する場
合、ウィルス感染などのＩＦＮ誘導操作が不可欠である
が、その誘導過程、特に誘導物質の作用およびそれに対
する細胞側の反応の詳細については不明の点が多い、ま
たＩＦＮ誘導に関与する蛋白質あるいはそれをコードす
る遺伝子を同定し、その蛋白質を遺伝子組換え技術によ
って製造したとの報告はない。
合、ウィルス感染などのＩＦＮ誘導操作が不可欠である
が、その誘導過程、特に誘導物質の作用およびそれに対
する細胞側の反応の詳細については不明の点が多い、ま
たＩＦＮ誘導に関与する蛋白質あるいはそれをコードす
る遺伝子を同定し、その蛋白質を遺伝子組換え技術によ
って製造したとの報告はない。
ロ 占を するための
本発明者らは、センダイウィルスを材料に、ウィルス感
染によりＩＦＮが誘導されるときに働く特異的なウィル
ス遺伝子について研究を行った。すなわち、センダイウ
ィルス遺伝子にはウィルス構成蛋白をコードする遺伝子
、例えばヌクレオカプシド蛋白遺伝子と考えられるＯＰ
−１、ＲＮＡポリメラーゼ遺伝子と考えられるＯＰ−２
など、および非ウィルス構成蛋白Ｃをコードする遺伝子
としてＯＰ−２’ （ＯＰ−３とも称される）が存在す
ることを明らかにした。また本発明者らは、これらの遺
伝子のうちどの遺伝子がＩＦＮ誘導に関与しているかに
ついて詳細な研究を行い、はじめてその遺伝子をクロー
ニングしたが〔ヌクレイツク・アシズ・リサーチ（Ｎｕ
ｃｌｅｉｃ Ａｃ１ｄｓ Ｒｅｓ、’）、１１，７
３１７（１９８３））、さらに研究を進めこの遺伝子を
動物細胞に導入することにより、ウィルス感染によるＩ
ＦＮの誘導に匹敵する。あるいはそれ以上の誘導をもた
らす方法を開発し、本発明を完成した。
染によりＩＦＮが誘導されるときに働く特異的なウィル
ス遺伝子について研究を行った。すなわち、センダイウ
ィルス遺伝子にはウィルス構成蛋白をコードする遺伝子
、例えばヌクレオカプシド蛋白遺伝子と考えられるＯＰ
−１、ＲＮＡポリメラーゼ遺伝子と考えられるＯＰ−２
など、および非ウィルス構成蛋白Ｃをコードする遺伝子
としてＯＰ−２’ （ＯＰ−３とも称される）が存在す
ることを明らかにした。また本発明者らは、これらの遺
伝子のうちどの遺伝子がＩＦＮ誘導に関与しているかに
ついて詳細な研究を行い、はじめてその遺伝子をクロー
ニングしたが〔ヌクレイツク・アシズ・リサーチ（Ｎｕ
ｃｌｅｉｃ Ａｃ１ｄｓ Ｒｅｓ、’）、１１，７
３１７（１９８３））、さらに研究を進めこの遺伝子を
動物細胞に導入することにより、ウィルス感染によるＩ
ＦＮの誘導に匹敵する。あるいはそれ以上の誘導をもた
らす方法を開発し、本発明を完成した。
すなわち、本発明はプロモーターおよびその下流にポリ
ペプチドＯＰ−２″をコードするＤＮＡを有する発現型
プラスミド、該プラスミドを含有する動物細胞およびこ
のプラスミドを用いたＩＦＮの製造法を提供するもので
ある。
ペプチドＯＰ−２″をコードするＤＮＡを有する発現型
プラスミド、該プラスミドを含有する動物細胞およびこ
のプラスミドを用いたＩＦＮの製造法を提供するもので
ある。
ポリペプチドＯＰ−２’は第１図に示すアミノ酸配列を
有する。
有する。
上記ポリペプチドＯＰ−２’をコードするＤＮＡとして
１例えば本発明者らが明らかにした第２図で示される塩
基配列（１番目から２０３番目のコドン）からなる遺伝
子が挙げられる〔ヌクレイツク・アシズ・リサーチ（Ｎ
ｕｃｌａｉｃ Ａｃｔｄｓ Ｒａｓ、）＊上１，７
３１７（１９８３）］ 。
１例えば本発明者らが明らかにした第２図で示される塩
基配列（１番目から２０３番目のコドン）からなる遺伝
子が挙げられる〔ヌクレイツク・アシズ・リサーチ（Ｎ
ｕｃｌａｉｃ Ａｃｔｄｓ Ｒａｓ、）＊上１，７
３１７（１９８３）］ 。
また該ＤＮＡはその５′末端に翻訳開始コドンとしての
ＡＴＧを有し、また３′末端シニは翻訳終止コドンとし
てのＴＡＡ、ＴＧＡまたはＴＡＧを有していてもよく、
とりわけＴＡＡが好ましい。
ＡＴＧを有し、また３′末端シニは翻訳終止コドンとし
てのＴＡＡ、ＴＧＡまたはＴＡＧを有していてもよく、
とりわけＴＡＡが好ましい。
本発明で用いられるプロモーターとしては、遺伝子の発
現に用いる宿主に対応して適切なプロモーターであれば
いかなるものでもよい。
現に用いる宿主に対応して適切なプロモーターであれば
いかなるものでもよい。
たとえば動物細胞（例、サル細胞ＣＯ５−７、チャイニ
ーズハムスター細胞ＣＨＯなと）における発現に適した
ＳＶ４０由来のプロモーター、レトロウィルスのプロモ
ーターなどが挙げられ、とりわけＳＶ４０由来のプロモ
ーターが好ましい。
ーズハムスター細胞ＣＨＯなと）における発現に適した
ＳＶ４０由来のプロモーター、レトロウィルスのプロモ
ーターなどが挙げられ、とりわけＳＶ４０由来のプロモ
ーターが好ましい。
本発明のＩＦＮ誘導蛋白のポリペプチドをコードする遺
伝子を含有する発現型プラスミドは１例えば、 （イ）ＩＦＮ誘導蛋白質をコードするＲＮＡを分離し。
伝子を含有する発現型プラスミドは１例えば、 （イ）ＩＦＮ誘導蛋白質をコードするＲＮＡを分離し。
（ロ）該ＲＮＡから単鎖の相補ＤＮＡ （ｃＤＮＡ）を
１次いで二重鎖ＤＮＡを合成し、 （ハ）該相補ＤＮＡをプラスミドに組み込み、（ニ）得
られた組み換えプラスミドで宿主を形質転換し。
１次いで二重鎖ＤＮＡを合成し、 （ハ）該相補ＤＮＡをプラスミドに組み込み、（ニ）得
られた組み換えプラスミドで宿主を形質転換し。
（ホ）得られた形質転換体を培養後、形質転換体から目
的とするＤＮＡを含有するプラスミドを単離し、 （へ）そのプラスミドから目的とするクローン化ＤＮＡ
を切り出し、 （ト）該クローン化ＤＮＡをビークル中のプロモーター
の下流に連結する ことにより製造することができる。
的とするＤＮＡを含有するプラスミドを単離し、 （へ）そのプラスミドから目的とするクローン化ＤＮＡ
を切り出し、 （ト）該クローン化ＤＮＡをビークル中のプロモーター
の下流に連結する ことにより製造することができる。
ＩＦＮ誘導蛋白の情報をもつＲＮＡはＩＦＮ誘導能をも
つ種々のウィルスあるいはその感染細胞。
つ種々のウィルスあるいはその感染細胞。
例えばセンダイウィルス２株〔ウィロロジー（Ｖｉｒｏ
ｌｏｇｙ）ｔ ｔＱｓ、３１８−３２４ （１９８１
））よりＲＮＡを調製し、これを鋳型として、逆転写酵
素を用い自体公知の方法でｃ Ｄ Ｎ Ａを合成し、プ
ラスミドに組み込む（Ｔ、Ｍａｎｉａｔｉｓ、Ｅ、Ｆ、
Ｆｒ１ｔｓｃｈ ａｎｄ Ｊ。
ｌｏｇｙ）ｔ ｔＱｓ、３１８−３２４ （１９８１
））よりＲＮＡを調製し、これを鋳型として、逆転写酵
素を用い自体公知の方法でｃ Ｄ Ｎ Ａを合成し、プ
ラスミドに組み込む（Ｔ、Ｍａｎｉａｔｉｓ、Ｅ、Ｆ、
Ｆｒ１ｔｓｃｈ ａｎｄ Ｊ。
Ｓａｍｂｒｏｏｋ、モレキュラー〇クローニング（Ｍｏ
ｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ）、Ｃ。
ｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ）、Ｃ。
ｌｄｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔ
ｏｒｙ、（１９８２））− このプラスミドは適当な宿主、例えば大腸菌、枯草菌あ
るいは酵母など、に導入することができる。このように
して得られた形質転換体の中から、自体公知の方法、例
えばコロニー・ハイブリダイゼーション法（ジーン（Ｇ
ｅｎａ）、上皇、６３−６７ （１９８０））およびＤ
ＮＡ塩基配列決定法を用い、求めるクローンを選出する
。
ｏｒｙ、（１９８２））− このプラスミドは適当な宿主、例えば大腸菌、枯草菌あ
るいは酵母など、に導入することができる。このように
して得られた形質転換体の中から、自体公知の方法、例
えばコロニー・ハイブリダイゼーション法（ジーン（Ｇ
ｅｎａ）、上皇、６３−６７ （１９８０））およびＤ
ＮＡ塩基配列決定法を用い、求めるクローンを選出する
。
上記クローン化されたＩＦＮ誘導蛋白のポリペプチドを
コードする遺伝子（ＤＮＡ）を有するプラスミドはその
まま、または所望により制限酵素で切り出すことができ
る。
コードする遺伝子（ＤＮＡ）を有するプラスミドはその
まま、または所望により制限酵素で切り出すことができ
る。
さらに上記遺伝子は、化学合成により製造することもで
きる。
きる。
またクローン化された遺伝子は前記した発現に適したビ
ークル中のプロモーターの下流に連結して本発明の発現
型プラスミドを得ることができる。
ークル中のプロモーターの下流に連結して本発明の発現
型プラスミドを得ることができる。
なお上記のＤＮＡは、たとえば大腸菌（２９４、ＤＨｌ
、ＨＢｌｏｌなど）を形質転換してその増殖、保存をな
すこともできる。
、ＨＢｌｏｌなど）を形質転換してその増殖、保存をな
すこともできる。
本発明の遺伝子組み換え技術によって得られたＩＦＮ誘
導蛋白として１例えば第１図における１番目から２０３
番目のアミノ酸配列で示されるポリペプチドを含有する
蛋白質を挙げることができる。該ポリペプチドはそのＮ
末端にＭ ｅ ｔを有していてもよい、該ポリペプチド
は糖鎖を有する糖蛋白質であることが望ましい。
導蛋白として１例えば第１図における１番目から２０３
番目のアミノ酸配列で示されるポリペプチドを含有する
蛋白質を挙げることができる。該ポリペプチドはそのＮ
末端にＭ ｅ ｔを有していてもよい、該ポリペプチド
は糖鎖を有する糖蛋白質であることが望ましい。
本発明のＩＦＮ誘導蛋白は、例えばＩＦＮ誘導蛋白のポ
リペプチドをコードする遺伝子を含有する組み換えＤＮ
Ａを有する微生物あるいは動物細胞を培養し、培養物中
にＩＦＮ誘導蛋白を生成。
リペプチドをコードする遺伝子を含有する組み換えＤＮ
Ａを有する微生物あるいは動物細胞を培養し、培養物中
にＩＦＮ誘導蛋白を生成。
蓄積せしめることにより製造することができる。
上記培養物からＩＦＮ誘導蛋白を分離精製するには１例
えば下記の方法により行うことができる。
えば下記の方法により行うことができる。
ＩＦＮ誘導蛋白を培養菌体あるいは細胞から抽出するに
際しては、培養後、公知の方法で菌体あるいは細胞を集
め、これを塩酸グアニジンなどの蛋白質変性剤を含む緩
衝液に懸濁し、超音波、リゾチームおよび（または）凍
結融解によって菌体あるいは細胞を破壊したのち、遠心
分離によりＩＦＮ誘導蛋白を得る方法などが適宜用い得
る。
際しては、培養後、公知の方法で菌体あるいは細胞を集
め、これを塩酸グアニジンなどの蛋白質変性剤を含む緩
衝液に懸濁し、超音波、リゾチームおよび（または）凍
結融解によって菌体あるいは細胞を破壊したのち、遠心
分離によりＩＦＮ誘導蛋白を得る方法などが適宜用い得
る。
上記上澄液からＩＦＮ誘導蛋白を精製するには、自体公
知の分離・精製法を適切に組み合わせて行うことができ
る。これらの公知の分離、精製法としては、塩析や溶媒
沈澱法などの溶解度を利用する方法、透析法、限外ろ過
法、ゲルろ過法、およびＳＯ３−ポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動法などの主として分子量の差を利用する方法
、イオン交換クロマトグラフィーなどの荷電の差を利用
する方法、アブィニティークロマトグラフイーなどの特
異的親和性を利用する方法、逆相高速液体クロマトグラ
フィーなどの疎水性の差を利用する方法、等電点電気泳
動法などの等電点の差を利用する方法などが挙げられる
。
知の分離・精製法を適切に組み合わせて行うことができ
る。これらの公知の分離、精製法としては、塩析や溶媒
沈澱法などの溶解度を利用する方法、透析法、限外ろ過
法、ゲルろ過法、およびＳＯ３−ポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動法などの主として分子量の差を利用する方法
、イオン交換クロマトグラフィーなどの荷電の差を利用
する方法、アブィニティークロマトグラフイーなどの特
異的親和性を利用する方法、逆相高速液体クロマトグラ
フィーなどの疎水性の差を利用する方法、等電点電気泳
動法などの等電点の差を利用する方法などが挙げられる
。
上流に適切なプロモータをもつＩＦＮ誘導蛋白をコード
する遺伝子を含有する上記発現型プラスミドを、動物細
胞に導入すると、該ＩＦＮ誘導蛋白が細胞内で生成し、
次いでＩＦＮ合成が誘導される。すなわち上記発現型プ
ラスミドを有する動物細胞を培養し、培養物中にＩＦＮ
を生成、蓄積せしめる事によりＩＦＮを製造する事がで
きる。
する遺伝子を含有する上記発現型プラスミドを、動物細
胞に導入すると、該ＩＦＮ誘導蛋白が細胞内で生成し、
次いでＩＦＮ合成が誘導される。すなわち上記発現型プ
ラスミドを有する動物細胞を培養し、培養物中にＩＦＮ
を生成、蓄積せしめる事によりＩＦＮを製造する事がで
きる。
さらにＩＦＮは、上記ＩＦＮ誘導蛋白を自体公知の方法
、例えばゴースト赤血球を用いる方法、により動物細胞
に直接導入することにより製造することもできる。
、例えばゴースト赤血球を用いる方法、により動物細胞
に直接導入することにより製造することもできる。
上記した組み換えＤＮＡ、あるいはＩＦＮ誘導蛋白を導
入する動物細胞には、適当な動物細胞、好ましくはＣＯ
５−７，マウスＬ細胞、ヒトＦＬ。
入する動物細胞には、適当な動物細胞、好ましくはＣＯ
５−７，マウスＬ細胞、ヒトＦＬ。
細胞などの曙乳動゛物の細胞株あるいは初代培養細胞を
用いることができる。
用いることができる。
動物細胞の培養は、自体公知の動物細胞用培地、例えば
５〜２０％の胎児牛血清を含むＤＭＥＭ培地中、３０〜
４０℃で１５〜６０時間行う。
５〜２０％の胎児牛血清を含むＤＭＥＭ培地中、３０〜
４０℃で１５〜６０時間行う。
かくして生成するＩＦＮの活性は、公知のし細胞−ｖＳ
ｖによる細胞変性効果阻止法などにより測定することが
できる。
ｖによる細胞変性効果阻止法などにより測定することが
できる。
上記培養物からのＩＦＮの分離精製は、自体公知の方法
により行うことができる。また、ここに得られるＩＦＮ
は、公知の天然型ＩＦＮと実質的に同様の活性１例えば
抗ウィルス活性あるいは免疫学的活性など、を有する。
により行うことができる。また、ここに得られるＩＦＮ
は、公知の天然型ＩＦＮと実質的に同様の活性１例えば
抗ウィルス活性あるいは免疫学的活性など、を有する。
本発明のＤＮＡで遺伝子感染または形質転換した動物細
胞では、上記ＩＦＮ誘導蛋白が合成されるので、本来既
知のＩＦＮ誘導物質ではわずかのＩＦＮＬ、か合成され
ない、あるいは全く合成されない各種動物細胞において
も相当量のＩＦＮを産生せしめることができ、ＩＦＮ製
造を有利に導くことができる。
胞では、上記ＩＦＮ誘導蛋白が合成されるので、本来既
知のＩＦＮ誘導物質ではわずかのＩＦＮＬ、か合成され
ない、あるいは全く合成されない各種動物細胞において
も相当量のＩＦＮを産生せしめることができ、ＩＦＮ製
造を有利に導くことができる。
さらにＩＦＮ誘導蛋白は動物細胞内で、ＩＦＮ遺伝子に
対すると同様の作用を構造上類似の他の遺伝子に及ぼし
、それらの遺伝子産物の産生を誘導する。それ故これら
の細胞が産生ずる各種有用物質を大量に取得することが
できる。
対すると同様の作用を構造上類似の他の遺伝子に及ぼし
、それらの遺伝子産物の産生を誘導する。それ故これら
の細胞が産生ずる各種有用物質を大量に取得することが
できる。
本発明明細書および図面において、塩基やアミノ酸など
を略号で表示する場合、ＴＵＰＡＣ−ＩＵＢ Ｃｏｍ
ｍ１ｓｓｉｏｎ ｏｎ Ｂｉｏｃｈ −ａｍ
ｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ による略号
あるいは当該分野における慣用略号に基づくものであり
、その例を下記する。また、アミノ酸に関し光学異性体
がありうる場合は、特に明示しなければＬ一体を示すも
のとする。
を略号で表示する場合、ＴＵＰＡＣ−ＩＵＢ Ｃｏｍ
ｍ１ｓｓｉｏｎ ｏｎ Ｂｉｏｃｈ −ａｍ
ｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ による略号
あるいは当該分野における慣用略号に基づくものであり
、その例を下記する。また、アミノ酸に関し光学異性体
がありうる場合は、特に明示しなければＬ一体を示すも
のとする。
ＤＮＡ ：デオキシリボ核酸
ｃＤＮＡ：相補的デオキシリボ核酸
Ａ ：アデニン
Ｔ ：チミン
Ｇ ニゲアニン
Ｃ：シトシン
ＲＮＡ ：リボ核酸
ｄＡＴＰ：デオキシアデノシン三リン酸ｄＴＴＰ：デオ
キシチミジン三リン酸 ｄＧＴＰ：デオキシグアノシン三リン酸ｄＣＴＰ：デオ
キシシチジン三リン酸 ＡＴＰ ：アデノシン三リン酸 ＥＤＴＡ：エチレンジアミン四酢酸 ＳＤＳ ニドデシル硫酸ナトリウム Ｇｌｙ ニゲリシン Ａｌａ：アラニン Ｖａｌ ：バリン Ｌｅｕ ：ロイシン １１ｅ ：イソロイシン Ｓｅｒ ：セリン Ｔｈｒ ：スレオニン Ｃｙｓ ニジスティン Ｍａｔ ：メチオニン Ｇｌｕ ：グルタミン酸 Ａｓｐ ：アスパラギン酸 Ｌｙｓ ：リジン Ａｒｇ ：アルギニン Ｈｉｓ ：ヒスチジン Ｐｈｅ ：フェニールアラニン Ｔｙｒ ：チロシン Ｔｒｐ ニトリブトファン Ｐｒｏ ニブロリン Ａｓｎ：アスパラギン Ｇｌｎ ：グルタミン 詐１一 本発明のＩＦＮ誘導蛋白をコードする遺伝子を含有する
発現型プラスミドは、これを各種動物細胞に導入するこ
とにより該細胞にＩＦＮを産生させることができるため
、ＩＦＮを大量に取得することができる。ここに製造さ
れるＩＦＮは、抗ウィルス剤、抗腫瘍剤として用いるこ
とができる。
キシチミジン三リン酸 ｄＧＴＰ：デオキシグアノシン三リン酸ｄＣＴＰ：デオ
キシシチジン三リン酸 ＡＴＰ ：アデノシン三リン酸 ＥＤＴＡ：エチレンジアミン四酢酸 ＳＤＳ ニドデシル硫酸ナトリウム Ｇｌｙ ニゲリシン Ａｌａ：アラニン Ｖａｌ ：バリン Ｌｅｕ ：ロイシン １１ｅ ：イソロイシン Ｓｅｒ ：セリン Ｔｈｒ ：スレオニン Ｃｙｓ ニジスティン Ｍａｔ ：メチオニン Ｇｌｕ ：グルタミン酸 Ａｓｐ ：アスパラギン酸 Ｌｙｓ ：リジン Ａｒｇ ：アルギニン Ｈｉｓ ：ヒスチジン Ｐｈｅ ：フェニールアラニン Ｔｙｒ ：チロシン Ｔｒｐ ニトリブトファン Ｐｒｏ ニブロリン Ａｓｎ：アスパラギン Ｇｌｎ ：グルタミン 詐１一 本発明のＩＦＮ誘導蛋白をコードする遺伝子を含有する
発現型プラスミドは、これを各種動物細胞に導入するこ
とにより該細胞にＩＦＮを産生させることができるため
、ＩＦＮを大量に取得することができる。ここに製造さ
れるＩＦＮは、抗ウィルス剤、抗腫瘍剤として用いるこ
とができる。
失鳳班
以下の実施例により本発明をより具体的に説明するが、
本発明はこれらに限定されるものではない。
本発明はこれらに限定されるものではない。
なお実施例１に開示した形質転換体ニジエリシア コリ
（Ｅｓｃ’ｈａｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＨＢ １０
１／ｐＳＶ２−Ｃは昭和６０年６月２７日より通商産業
省工業技術院微生物工業技術研究所（ＦＲＩ）に受託番
号、微工研菌寄第８３２３号として受託されている。
（Ｅｓｃ’ｈａｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＨＢ １０
１／ｐＳＶ２−Ｃは昭和６０年６月２７日より通商産業
省工業技術院微生物工業技術研究所（ＦＲＩ）に受託番
号、微工研菌寄第８３２３号として受託されている。
実施例１．ＯＰ−２’遺伝子発現型プラスミドの製造
（１）プラスミドｐＳＶ２−ＰＣの構築（第３図）セン
ダイウィルス２株のゲノムＲＮＡの３′端からＩ ００
３番目より４０８１番目に至るヌクレオチドに相当する
ｃＤＮＡを含む公知のプラスミドＨ−３３（ヌクレイツ
ク・アシズ・リサーチ（Ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄｓ
Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）、±１，７３１７−７３３０
（１９８３））のＤＮＡを、制限酵素Ｈｉｎｄｍで切断
した後。
ダイウィルス２株のゲノムＲＮＡの３′端からＩ ００
３番目より４０８１番目に至るヌクレオチドに相当する
ｃＤＮＡを含む公知のプラスミドＨ−３３（ヌクレイツ
ク・アシズ・リサーチ（Ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄｓ
Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）、±１，７３１７−７３３０
（１９８３））のＤＮＡを、制限酵素Ｈｉｎｄｍで切断
した後。
アガロース電気泳動によりセンダイウィルスのＣＤＮＡ
（３０７９塩基対）をベクターｐＢＲ３２２ＤＮＡと分
離した。このｃＤＮＡをさらに制限酵素Ｅ ｃ ｏ Ｒ
Ｉで切断し、大小のＤＮＡ断片を分離した後、大断片は
制限酵素Ｎ ｃ ｏ Ｉで、小断片はＨｈ ａ Ｉで切
断し、再びアガロース電気泳動を行い各々の大きい方の
ＤＮＡ断片を分離した。この両ＤＮＡを２０．、、ｌの
ライゲーション緩衝液（６６ｍＭ Ｔｒ ｉ ５−ＨＣ
Ｉ ｐＨ７，６，６゜６ｍＭ ＭｇＣｌ２．１０ｍＭ
ＤＴＴ、６６ｆｉ、ＭＡＴＰ）に溶解し、５ユニツト
のＴ４ＤＮＡリガーゼを加え、１４℃、１７時間反応さ
せてＥｃｏ ＲＩ端で再結合させた後、同様の反応で両
端に５′末端をリン酸化した合成オリゴヌクレオチドリ
ンカー（ＨｉｎｄｌＩＩリンカ−３５’ＰＣＡＡＧＣＴ
ＴＧを結合させた。この結果センダイウィルスゲノムＲ
ＮＡの３′端から１６１０番目より３６６３番目に至る
ヌクレオチドに相当するｃＤＮＡ断片を得た。
（３０７９塩基対）をベクターｐＢＲ３２２ＤＮＡと分
離した。このｃＤＮＡをさらに制限酵素Ｅ ｃ ｏ Ｒ
Ｉで切断し、大小のＤＮＡ断片を分離した後、大断片は
制限酵素Ｎ ｃ ｏ Ｉで、小断片はＨｈ ａ Ｉで切
断し、再びアガロース電気泳動を行い各々の大きい方の
ＤＮＡ断片を分離した。この両ＤＮＡを２０．、、ｌの
ライゲーション緩衝液（６６ｍＭ Ｔｒ ｉ ５−ＨＣ
Ｉ ｐＨ７，６，６゜６ｍＭ ＭｇＣｌ２．１０ｍＭ
ＤＴＴ、６６ｆｉ、ＭＡＴＰ）に溶解し、５ユニツト
のＴ４ＤＮＡリガーゼを加え、１４℃、１７時間反応さ
せてＥｃｏ ＲＩ端で再結合させた後、同様の反応で両
端に５′末端をリン酸化した合成オリゴヌクレオチドリ
ンカー（ＨｉｎｄｌＩＩリンカ−３５’ＰＣＡＡＧＣＴ
ＴＧを結合させた。この結果センダイウィルスゲノムＲ
ＮＡの３′端から１６１０番目より３６６３番目に至る
ヌクレオチドに相当するｃＤＮＡ断片を得た。
一方、プラスミドｐｓＶ２ｇｐｔ（プロシージング・オ
ブ・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイエンス（Ｐｒ
ｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ）、７８．
２０７２−２０７６ （１９８１）〕を制限酵素Ｈｊｎ
ｄｆｆｌおよびＢｇｌＩＩで二重切断し、ｇｐｔ部分を
除いた後、該プラスミミドＤＮＡのＢ ｇ’ｌ ｍ端に
ＨｉｎｄＩ［Ｉリンカ−を結合させた。
ブ・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイエンス（Ｐｒ
ｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ）、７８．
２０７２−２０７６ （１９８１）〕を制限酵素Ｈｊｎ
ｄｆｆｌおよびＢｇｌＩＩで二重切断し、ｇｐｔ部分を
除いた後、該プラスミミドＤＮＡのＢ ｇ’ｌ ｍ端に
ＨｉｎｄＩ［Ｉリンカ−を結合させた。
次いで上記のセンダイウィルスｃＤＮＡ断片とプラスミ
ドＤＮＡｔ＆Ｈｉ ｎｄｍ端で結合させ、プラスミドｐ
−８Ｖ２−ＰＣを構築した。また対照実験用としてＰＳ
Ｖ２−ｇｐｔのｇｐｔ遺伝子部分（Ｈｔｎｄｍ−Ｂｇｌ
ＩＩ断片）を除いた後、Ｂｇｌｒ１部位にＨｉｎｄｍリ
ンカ−を結合させ、生じた２コのＨｉｎｄＩＩＩ部位で
再結合したプラスミドｐＳＶ２−０を作成した。プラス
ミド製造の過程を第３１！ｌに示した。
ドＤＮＡｔ＆Ｈｉ ｎｄｍ端で結合させ、プラスミドｐ
−８Ｖ２−ＰＣを構築した。また対照実験用としてＰＳ
Ｖ２−ｇｐｔのｇｐｔ遺伝子部分（Ｈｔｎｄｍ−Ｂｇｌ
ＩＩ断片）を除いた後、Ｂｇｌｒ１部位にＨｉｎｄｍリ
ンカ−を結合させ、生じた２コのＨｉｎｄＩＩＩ部位で
再結合したプラスミドｐＳＶ２−０を作成した。プラス
ミド製造の過程を第３１！ｌに示した。
（２）プラスミドｐＳＶ２−Ｃ（１）構築（第４図）プ
ラスミドｐＳＶ２−ＰＣを制限酵素ＰｖｕＩ。
ラスミドｐＳＶ２−ＰＣを制限酵素ＰｖｕＩ。
５ａｌＩで二重切断し、センダイウィルスｃＤＮＡのＰ
ｖｕＩ−ＳａｌＩ断片を単離した後、これを更にＳ ａ
ｕ ３ Ａ Ｉで切断しＳ ａ ｕ ３ Ａ Ｉ −
Ｓ ａＩＩ断片を分離した。このＤＮＡ断片をプラスミ
ドＰＳＶ２−ＰＣのＰｖｕＩ−ＰｖｕＩ断片および５ａ
ｌＩ−ＰｖｕＩ断片に結合してプラスミドｐＳＶ２−Ｃ
を作成した。ここに製造されたｐＳＶ２−Ｃはセンダイ
ウィルスのゲノムＲＮＡの３′末端より１６１０番目−
３６６３番目のヌクレオチドに相当するｃＤＮＡのうち
１７６１番目−１８４５番目のヌクレオチドが欠除した
ｃＤＮＡを含む・ＰＳＶ２−Ｃの構築の過程を第４図に
示した。
ｖｕＩ−ＳａｌＩ断片を単離した後、これを更にＳ ａ
ｕ ３ Ａ Ｉで切断しＳ ａ ｕ ３ Ａ Ｉ −
Ｓ ａＩＩ断片を分離した。このＤＮＡ断片をプラスミ
ドＰＳＶ２−ＰＣのＰｖｕＩ−ＰｖｕＩ断片および５ａ
ｌＩ−ＰｖｕＩ断片に結合してプラスミドｐＳＶ２−Ｃ
を作成した。ここに製造されたｐＳＶ２−Ｃはセンダイ
ウィルスのゲノムＲＮＡの３′末端より１６１０番目−
３６６３番目のヌクレオチドに相当するｃＤＮＡのうち
１７６１番目−１８４５番目のヌクレオチドが欠除した
ｃＤＮＡを含む・ＰＳＶ２−Ｃの構築の過程を第４図に
示した。
本プラスミドでニジエリシアコリ ＨＢＩＯＩを形質転
換し、ニジエリシアコリ ＨＢＩＯＩ／ｐｓＶ２−Ｃを
得た。
換し、ニジエリシアコリ ＨＢＩＯＩ／ｐｓＶ２−Ｃを
得た。
（３）プラスミドＰＳＶ２−ＰＣ（Ｒ１）およびｐｓＶ
２−ＰＣ（０） の構築（第５図）ｐ Ｓ Ｖ ２−
Ｐ ＣをＰｖｕＩＩおよび５ａｌＩで二重切断し、約５
７００塩基対のヌクレオチドを含むＡ断片と８０６塩基
対のヌクレオチドを含むＢ断片とし各々のＤＮＡを分離
した。Ｂ断片ＤＮＡはさらにＤｄａＩで切断し、Ｐｖｕ
ＩＩ−Ｄｄ ａ Ｉ断片（２８５塩基対、Ｃ断片）、Ｄ
ｄｅＩ−５ａｌＩ断片（３０７塩基対、Ｄ断片）を分離
した。
２−ＰＣ（０） の構築（第５図）ｐ Ｓ Ｖ ２−
Ｐ ＣをＰｖｕＩＩおよび５ａｌＩで二重切断し、約５
７００塩基対のヌクレオチドを含むＡ断片と８０６塩基
対のヌクレオチドを含むＢ断片とし各々のＤＮＡを分離
した。Ｂ断片ＤＮＡはさらにＤｄａＩで切断し、Ｐｖｕ
ＩＩ−Ｄｄ ａ Ｉ断片（２８５塩基対、Ｃ断片）、Ｄ
ｄｅＩ−５ａｌＩ断片（３０７塩基対、Ｄ断片）を分離
した。
また別にＢ断片をＤｄａＩで部分切断し３３６塩基対の
ヌクレオチドより成るＤｄｅＩ−３ａｌＩ断片（Ｅ断片
）を°作成した０次いでＡおよびＣ断片をそのＰｖｕＩ
Ｉ部位で結合させＡＣ断片を分層した後、これにさらに
Ｄ断片またはＥ断片を結合させた。得られたＡＣＥ断片
を含むプラスミドＰＳＶ２−ＰＣ（Ｒ１）は、ＳＶ４０
のプロモータ一部分にセンダイウィルスの第２遺伝子の
Ｒ１が結合した形になっている。一方、ＡＣＤを含むプ
ラスミドｐＳＶ２−ＰＣ（０）はＳＶ４０のプロモータ
一部分にＲ１が欠除したセンダイウィルス第２遺伝子が
結合した構造になっている。これらのプラスミドの構築
の過程を第５図に示した。
ヌクレオチドより成るＤｄｅＩ−３ａｌＩ断片（Ｅ断片
）を°作成した０次いでＡおよびＣ断片をそのＰｖｕＩ
Ｉ部位で結合させＡＣ断片を分層した後、これにさらに
Ｄ断片またはＥ断片を結合させた。得られたＡＣＥ断片
を含むプラスミドＰＳＶ２−ＰＣ（Ｒ１）は、ＳＶ４０
のプロモータ一部分にセンダイウィルスの第２遺伝子の
Ｒ１が結合した形になっている。一方、ＡＣＤを含むプ
ラスミドｐＳＶ２−ＰＣ（０）はＳＶ４０のプロモータ
一部分にＲ１が欠除したセンダイウィルス第２遺伝子が
結合した構造になっている。これらのプラスミドの構築
の過程を第５図に示した。
実施例２．ＩＦＮ誘導蛋白のポリペプチドをコードする
遺伝子の動物細胞における発現 およびそれによるＩＦＮの製造 マウスＬ細胞、マウス胎児初代培養細胞あるいはサルＣ
Ｏ５−１細胞を１０％仔牛血清を含むイーグルＭＥＭ培
地で単層培養（ファルコン径２４ｍｍプラスチックディ
ツシュ）した後、同培地で培地交換した。交換の４時間
後に公知の方法（Ｇｒａｈａｍら、ウィロロジ−（Ｖｉ
ｒｏｌｏｇＹ）＊盈ユ、４５６−４６７ （１９７３
））に従い、後出の第１表に示す種々のプラスミドＤＮ
Ａ Ｉ Ｐｇを含むカルシウムホスフェートゲルを調製
し細胞に添加した。さらにその４時間後グリセロール処
理して培養を続けた後、２０−２４時間後に培地中のＩ
ＦＮ量を測定した。またヒト白血球の場合には１０’
ｉｌｌ胞／ｍｌの白血球にＤＥＡＥ−デキストラン法〔
プロシージング・オブパナショナル・アカデミ−・オブ
・サイエンス（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ １．Ａｃａｄ、Ｓｃ
ｉ、ＵＳＡ）、ユ１，７５７５−７５７８ （１９８
１））により３７℃で３０分ＤＮＡをトランスフェクト
して細胞を洗い。
遺伝子の動物細胞における発現 およびそれによるＩＦＮの製造 マウスＬ細胞、マウス胎児初代培養細胞あるいはサルＣ
Ｏ５−１細胞を１０％仔牛血清を含むイーグルＭＥＭ培
地で単層培養（ファルコン径２４ｍｍプラスチックディ
ツシュ）した後、同培地で培地交換した。交換の４時間
後に公知の方法（Ｇｒａｈａｍら、ウィロロジ−（Ｖｉ
ｒｏｌｏｇＹ）＊盈ユ、４５６−４６７ （１９７３
））に従い、後出の第１表に示す種々のプラスミドＤＮ
Ａ Ｉ Ｐｇを含むカルシウムホスフェートゲルを調製
し細胞に添加した。さらにその４時間後グリセロール処
理して培養を続けた後、２０−２４時間後に培地中のＩ
ＦＮ量を測定した。またヒト白血球の場合には１０’
ｉｌｌ胞／ｍｌの白血球にＤＥＡＥ−デキストラン法〔
プロシージング・オブパナショナル・アカデミ−・オブ
・サイエンス（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ １．Ａｃａｄ、Ｓｃ
ｉ、ＵＳＡ）、ユ１，７５７５−７５７８ （１９８
１））により３７℃で３０分ＤＮＡをトランスフェクト
して細胞を洗い。
次いで２４時間培養した後培地中のＩＦＮ活性を測定し
た。ＤＥＡＥ−デキストランはＺｏｏ、ｘｇ／ｍｌの濃
度で使用した。
た。ＤＥＡＥ−デキストランはＺｏｏ、ｘｇ／ｍｌの濃
度で使用した。
ＩＦＮの活性はＬ細胞−ｖＳｖによる細胞変性効果阻止
法により測定し、米国ＮＩＨより供与されたマウスＩＦ
Ｎ国際標準品（Ｇ−００２−９−０４−５１１）を規準
にしてその活性を算出した。
法により測定し、米国ＮＩＨより供与されたマウスＩＦ
Ｎ国際標準品（Ｇ−００２−９−０４−５１１）を規準
にしてその活性を算出した。
なおＣ０８−１細胞の場合には、ＦＬｉ５胞を用いた実
験室単位で表゛わした。
験室単位で表゛わした。
第１表に示したように、ＯＰ−２およびｏＰ−２′の２
つのオーブン・リーディングフレームをもつＰＳＶ２−
ＰＣは少量のＩＦＮ誘導しか起こさなかったが、ＯＰ−
２′のみが発現するように構築されたｐＳＶ２−Ｃは大
量のＩＦＮ誘導を引き起こすことが判明した。
つのオーブン・リーディングフレームをもつＰＳＶ２−
ＰＣは少量のＩＦＮ誘導しか起こさなかったが、ＯＰ−
２′のみが発現するように構築されたｐＳＶ２−Ｃは大
量のＩＦＮ誘導を引き起こすことが判明した。
一方、対照実験として鮭精子ＤＮＡあるいはプラスミド
ｐＳＶ２−０を用いた場合には、ＩＦＮ産生は全く認め
られなかった。
ｐＳＶ２−０を用いた場合には、ＩＦＮ産生は全く認め
られなかった。
第１表 プラスミドＤＮＡのトランスフェクションによ
るＩＦＮ産生 ＊＊ 実験室単位／ｍ１ ＊＊＊２．−ｇ／１０ 細胞 実施例３ プラスミドｐｓＶ２−Ｃのトランスフェクシ
ョンにより産生されるＩＦＮの性質マウス胎児細胞ある
いはＬ［胞にｐＳＶ２−Ｃをトランスフェクトし、２４
時間後の培地を試料として用い、以下の処理を行った。
るＩＦＮ産生 ＊＊ 実験室単位／ｍ１ ＊＊＊２．−ｇ／１０ 細胞 実施例３ プラスミドｐｓＶ２−Ｃのトランスフェクシ
ョンにより産生されるＩＦＮの性質マウス胎児細胞ある
いはＬ［胞にｐＳＶ２−Ｃをトランスフェクトし、２４
時間後の培地を試料として用い、以下の処理を行った。
１）酸処理
５００、、、 ｌの試料（マウス胎児細胞培養上清）に
２５ 、、、 ｌのＩＮＭＣＩを加えｐＨ２とし、５℃
で５日間保存し°た後ｌＮＮａ０．Ｈで中和し。
２５ 、、、 ｌのＩＮＭＣＩを加えｐＨ２とし、５℃
で５日間保存し°た後ｌＮＮａ０．Ｈで中和し。
ＩＦＮの残存活性を測定した。結果を第２表に示した。
第２表 ＩＦＮ活性に及ぼす酸処理の影響２）トリプシ
ン消化 ５０、−１の試料（Ｌ細胞、０．５％仔牛血清を含むＭ
ＥＭ培地）に５０．＆Ａｇのトリプシンを加え３７℃、
１時間インキュベートした後残存活性を測定した。結果
を第３表に示した。
ン消化 ５０、−１の試料（Ｌ細胞、０．５％仔牛血清を含むＭ
ＥＭ培地）に５０．＆Ａｇのトリプシンを加え３７℃、
１時間インキュベートした後残存活性を測定した。結果
を第３表に示した。
第３表 ＩＦＮ活性に及ぼすトリプシン消化の影響
３）抗マウスＩＦＮ抗体による中和
１０１Ｕ／ｍｌのＩＦＮ活性をＩＩＵ／ｍ１（５０％Ｃ
ＰＥ）に下げるのに必要なＮＩＨ標準標準線胞ＩＦＮＡ
、βの抗体量を求め第４表に抗体希釈度で表示した。
ＰＥ）に下げるのに必要なＮＩＨ標準標準線胞ＩＦＮＡ
、βの抗体量を求め第４表に抗体希釈度で表示した。
第４表
第１図はポリペプチドＯＰ−２″のアミノ酸配列を示し
、第２図は実施例１で得たＩＦＮ誘導蛋白質をコードす
る遺伝子（センダイウィルスのＯＰ−２′遺伝子）の−
次構造（塩基配列）を示す。 第３図、第４図及び第５図は実施例１に記載した発現型
プラスミドｐＳＶ２−ＰＣ，ｐＳＶ２−Ｃ，ｐｓＶ２−
ＰＣ（Ｒ１）およびＰＳＶ２−ＰＣ（０）の製造過程を
示す構築図であり、第６図、第７図および第８図はこれ
らのプラスミドの構造（Ｒ１およびＲ２はセンダイウィ
ルスゲノムに存在するユニークな塩基配列を表わす）を
示す。
、第２図は実施例１で得たＩＦＮ誘導蛋白質をコードす
る遺伝子（センダイウィルスのＯＰ−２′遺伝子）の−
次構造（塩基配列）を示す。 第３図、第４図及び第５図は実施例１に記載した発現型
プラスミドｐＳＶ２−ＰＣ，ｐＳＶ２−Ｃ，ｐｓＶ２−
ＰＣ（Ｒ１）およびＰＳＶ２−ＰＣ（０）の製造過程を
示す構築図であり、第６図、第７図および第８図はこれ
らのプラスミドの構造（Ｒ１およびＲ２はセンダイウィ
ルスゲノムに存在するユニークな塩基配列を表わす）を
示す。
Claims (4)
- （１）プロモーターおよびその下流にポリペプチドＯＰ
−２′をコードするＤＮＡを有する発現型プラスミド。 - （２）ポリペプチドＯＰ−２′をコードするＤＮＡが、
式 【遺伝子配列があります】 で表わされる塩基配列である特許請求の範囲第１項記載
のプラスミド。 - （３）プロモーターおよびその下流にポリペプチドＯＰ
−２′をコードするＤＮＡを有する発現型プラスミドを
含有する動物細胞。 - （４）プロモーターおよびその下流にポリペプチドＯＰ
−２′をコードするＤＮＡを有する発現型プラスミドを
含有する動物細胞を培養し、該細胞におけるインターフ
ェロン（ＩＦＮ）合成を誘発し、培養物中にＩＦＮを生
成、蓄積せしめ、これを採用することを特徴とするＩＦ
Ｎの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60146634A JPS6211094A (ja) | 1985-07-05 | 1985-07-05 | 新規プラスミドおよびその用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60146634A JPS6211094A (ja) | 1985-07-05 | 1985-07-05 | 新規プラスミドおよびその用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6211094A true JPS6211094A (ja) | 1987-01-20 |
Family
ID=15412165
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60146634A Pending JPS6211094A (ja) | 1985-07-05 | 1985-07-05 | 新規プラスミドおよびその用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6211094A (ja) |
-
1985
- 1985-07-05 JP JP60146634A patent/JPS6211094A/ja active Pending
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