JPS6184A - 新規なテトラゾリウム化合物 - Google Patents
新規なテトラゾリウム化合物Info
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- JPS6184A JPS6184A JP59118602A JP11860284A JPS6184A JP S6184 A JPS6184 A JP S6184A JP 59118602 A JP59118602 A JP 59118602A JP 11860284 A JP11860284 A JP 11860284A JP S6184 A JPS6184 A JP S6184A
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- formula
- fluid components
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- biological fluid
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- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、ヘテロ環とカルボキシル基とをもつ新規なテ
トラゾリウム塩に関する。
トラゾリウム塩に関する。
一般に、テトラゾリウム塩は容易に還元されて有色のホ
ルマザンを生成することは周知であり、この反応を利用
して還元性物質を定量する測定方法が種々知られている
。
ルマザンを生成することは周知であり、この反応を利用
して還元性物質を定量する測定方法が種々知られている
。
例えば、テトラゾリウム化合物は、還元型ニコチンアミ
ドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）］）、又は還元型
ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（Ｎ Ａ
Ｄ Ｐ Ｈ）の水素受容体として機能するトカ、スー
パーオキサイドイオンやアスコルビン酸によって還元さ
れ、夫々の結果として定量的に生成するホルマザンの量
に比例する発色の程度を、吸光４度測定法で測定するこ
とによって、ＮＡＤＨ，ＮＡＤＰＨ又はスーパーオキサ
イドイオン、アスコルビン酸などの還元性物質の量を測
定することができる。従って周知の通り、脱水素酵素の
活性度の測定、それによる基質の定量、更にスーパーオ
キサイドイオンを生成する酸化酵素の作用対象である基
質の定量、即ち生体々液成分とか食品中の添加物などの
定量に極めて有用でらる０ これらの原理を、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）の活性度の
測定の場合に例をとって示せば、であり、これらの反応
は定量的且つ特異的に進行するから、生成するホルマザ
ンの色濃度を定量することによって、ＬＤＨの活性度を
測定することができる。まだ脱水素酵素を使用した生体
々液成分の測定を、コレステロールの測定について示せ
ば、 であり、同様にコレステロールの量を測定することがで
きる。次にスーパーオキサイドイオンの測定に、ｌ：り
て、コレステロールを定量する場合につコレステロール
＋２０２ コレステノン＋２０．’＋２ Ｈ＋ テトラゾリウム塩 ホルマザン
であ法同様にしてコレステロールを定量することができ
る。この式に於てζＸはノーロゲンを示す。
ドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）］）、又は還元型
ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（Ｎ Ａ
Ｄ Ｐ Ｈ）の水素受容体として機能するトカ、スー
パーオキサイドイオンやアスコルビン酸によって還元さ
れ、夫々の結果として定量的に生成するホルマザンの量
に比例する発色の程度を、吸光４度測定法で測定するこ
とによって、ＮＡＤＨ，ＮＡＤＰＨ又はスーパーオキサ
イドイオン、アスコルビン酸などの還元性物質の量を測
定することができる。従って周知の通り、脱水素酵素の
活性度の測定、それによる基質の定量、更にスーパーオ
キサイドイオンを生成する酸化酵素の作用対象である基
質の定量、即ち生体々液成分とか食品中の添加物などの
定量に極めて有用でらる０ これらの原理を、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）の活性度の
測定の場合に例をとって示せば、であり、これらの反応
は定量的且つ特異的に進行するから、生成するホルマザ
ンの色濃度を定量することによって、ＬＤＨの活性度を
測定することができる。まだ脱水素酵素を使用した生体
々液成分の測定を、コレステロールの測定について示せ
ば、 であり、同様にコレステロールの量を測定することがで
きる。次にスーパーオキサイドイオンの測定に、ｌ：り
て、コレステロールを定量する場合につコレステロール
＋２０２ コレステノン＋２０．’＋２ Ｈ＋ テトラゾリウム塩 ホルマザン
であ法同様にしてコレステロールを定量することができ
る。この式に於てζＸはノーロゲンを示す。
かかる方法の為に、従来提供されているテトラゾリウム
化合物としては、２−（４−ヨウ化フェニル）−３−（
４−ニトロフェニル）−５−フェニル−２Ｈ−テトラゾ
リウム塩（ＩＮＴ）、３−（４，５−ジメチルチアゾリ
ルへ２）−２，５−ジフェニル−２１４−テトラゾリウ
ム塩（ＭＴＴ）、２、 ２’、 ５．５’−テトラキス
（４−ニトロフェニル）−３，３’−（３，３’−ジメ
トキシ−４，４′−ジフェニレン）−２８，２’Ｈ−ジ
テトラゾリウム塩（ＮＯ２−ＴＢ）、２．２’−ｐ−ジ
フェニレン−３，’ ３’、 ５． ５’−テトラフ
ェニル−２８、２’１−１＝ジテラゾリウム塩（Ｎｅｏ
−ＴＢ）などがあり、これらが還元されて生成するホル
マザンの極大吸収波長及び分子吸光係数を示すと、夫々
、次のとおりである。
化合物としては、２−（４−ヨウ化フェニル）−３−（
４−ニトロフェニル）−５−フェニル−２Ｈ−テトラゾ
リウム塩（ＩＮＴ）、３−（４，５−ジメチルチアゾリ
ルへ２）−２，５−ジフェニル−２１４−テトラゾリウ
ム塩（ＭＴＴ）、２、 ２’、 ５．５’−テトラキス
（４−ニトロフェニル）−３，３’−（３，３’−ジメ
トキシ−４，４′−ジフェニレン）−２８，２’Ｈ−ジ
テトラゾリウム塩（ＮＯ２−ＴＢ）、２．２’−ｐ−ジ
フェニレン−３，’ ３’、 ５． ５’−テトラフ
ェニル−２８、２’１−１＝ジテラゾリウム塩（Ｎｅｏ
−ＴＢ）などがあり、これらが還元されて生成するホル
マザンの極大吸収波長及び分子吸光係数を示すと、夫々
、次のとおりである。
表 １
これらのホルマザンは、λｍａｘ＝４９０〜５６５ｎｎ
ｎに、ε−１，４Ｘ１０’〜３．６ Ｘ １ （１’の
吸収を示し、これを利用して生体試料中の体液成分を定
量することができる。
ｎに、ε−１，４Ｘ１０’〜３．６ Ｘ １ （１’の
吸収を示し、これを利用して生体試料中の体液成分を定
量することができる。
しかしながら、生体試料中には、５００ ｎｍ近辺に吸
収をもつビリルビンやヘモグロビンカ存在し、これらの
着色物質の存在が、上記ホルマザンの極大吸収波長近傍
の吸収スペクトルに少なからぬ影響を及ぼし、測定値に
誤差を与えている。このような着色物質の影響は、その
測定波長がλｍａｘ−６００ｎｍ以上であるときは、効
果的に回避される。
収をもつビリルビンやヘモグロビンカ存在し、これらの
着色物質の存在が、上記ホルマザンの極大吸収波長近傍
の吸収スペクトルに少なからぬ影響を及ぼし、測定値に
誤差を与えている。このような着色物質の影響は、その
測定波長がλｍａｘ−６００ｎｍ以上であるときは、効
果的に回避される。
そこで、これら着色物質の影響を回避する目的で、ホル
マザンのキレート化合物を測定に利用する試みがなされ
ている１゜ 一般に、ホルマザンは、Ｃｏ”＋やＮｉ”十などの金属
イオンとキレート化合物を生成し、その極大吸収波長は
、より長波長側ヘンメトする。例えば、前記ＭＴＴのＣ
ｏキレートは、λｍａｘ ＝ ６６０ ｎｍ（ε−２Ｘ
１０’）となることが知られている。
マザンのキレート化合物を測定に利用する試みがなされ
ている１゜ 一般に、ホルマザンは、Ｃｏ”＋やＮｉ”十などの金属
イオンとキレート化合物を生成し、その極大吸収波長は
、より長波長側ヘンメトする。例えば、前記ＭＴＴのＣ
ｏキレートは、λｍａｘ ＝ ６６０ ｎｍ（ε−２Ｘ
１０’）となることが知られている。
しかしながら、コバルトイオンはそれ自体酸化や還元を
受は易いので、臨床化学分析に於て、測定誤差の原因と
なり得る。
受は易いので、臨床化学分析に於て、測定誤差の原因と
なり得る。
一方、Ｎｉ２＋キン一ト化合物は、酵素分析に於て重要
な中性付近のｐＨに於て比較的安定性が期待されるもの
であり、且つ取扱いが容易なだめ、更にまた、二、ケル
イオンはコバルトイオンのように酸化や還元を受は易く
ないので、臨床化学分析に於ける測定に有用であると考
えられるが、一般にＮ１キレートは、ホルマザン化合物
とのキレート生成反応が遅いことで知られており（ＪＡ
ＰＡＮＡ’ＮＡＬＹＳＴ 、 Ｖｏｌ、１６ （１
９６７）、 ｒホルマザン化合物の合成と金属イオン
との反応Ｊ 、 １３６７頁）、この問題点を解決した
、Ｎ１′十とのキレートを容易に生成させるホルマザン
をもたらす、新規なテトラゾリウム塩の開発が要望され
ていた。
な中性付近のｐＨに於て比較的安定性が期待されるもの
であり、且つ取扱いが容易なだめ、更にまた、二、ケル
イオンはコバルトイオンのように酸化や還元を受は易く
ないので、臨床化学分析に於ける測定に有用であると考
えられるが、一般にＮ１キレートは、ホルマザン化合物
とのキレート生成反応が遅いことで知られており（ＪＡ
ＰＡＮＡ’ＮＡＬＹＳＴ 、 Ｖｏｌ、１６ （１
９６７）、 ｒホルマザン化合物の合成と金属イオン
との反応Ｊ 、 １３６７頁）、この問題点を解決した
、Ｎ１′十とのキレートを容易に生成させるホルマザン
をもたらす、新規なテトラゾリウム塩の開発が要望され
ていた。
本発明者らは、これらの欠点を解決すべく鋭意研究の結
果、その還元成績体であるホルマザンとＮｉ”“とのキ
レート生成反応が速やかで、且つ生成したキレートの極
大吸収波長が６００ ｎｍ以上である、新規なテトラゾ
リウム塩を見出し、本発明を完成するに到った。
果、その還元成績体であるホルマザンとＮｉ”“とのキ
レート生成反応が速やかで、且つ生成したキレートの極
大吸収波長が６００ ｎｍ以上である、新規なテトラゾ
リウム塩を見出し、本発明を完成するに到った。
即ち、本発明は、
一般式
（式中、Ｘは・・ロゲンを表わす。）で示される、・２
−（２−ベンゾチアゾリル）−３−（２−カルボキシフ
ェニル）−５−フェニル−２Ｈ−テトラゾリウム塩（以
下、ＢＴＣＰＴと略称する。）、及びこれを用いる生体
々液成分の定量方法の発明である。
−（２−ベンゾチアゾリル）−３−（２−カルボキシフ
ェニル）−５−フェニル−２Ｈ−テトラゾリウム塩（以
下、ＢＴＣＰＴと略称する。）、及びこれを用いる生体
々液成分の定量方法の発明である。
本発明化合物〔Ｉ〕に於けるハロゲンとしては、塩素、
臭素、ヨウ素等が挙げられる。
臭素、ヨウ素等が挙げられる。
ＢＴＣＰＴは、中性イ」近のｐ）］で、Ｎ Ａ Ｄ Ｉ
−］やＮＡＤＰＨ，スーパーオキサイドイオン、アスコ
ルビン酸などの還元性物質によって、要すればジアホラ
ーゼやフェナジンメトサルフェート（ＰＭＳ）などの電
子伝達体の存在下に、容易に還元される。
−］やＮＡＤＰＨ，スーパーオキサイドイオン、アスコ
ルビン酸などの還元性物質によって、要すればジアホラ
ーゼやフェナジンメトサルフェート（ＰＭＳ）などの電
子伝達体の存在下に、容易に還元される。
このような還元反応により生成した、ＢＴＣ１〕Ｔの還
元成績体であるホルマザン（以下、ＢＴＣＰＦと略称す
る。）は、中性付近の緩衝溶液中、速やかに、Ｎ１′１
と反応して、極太吸収波長６００ｎｎｎ以上に強い吸収
を有するキレート化合物を生成する。
元成績体であるホルマザン（以下、ＢＴＣＰＦと略称す
る。）は、中性付近の緩衝溶液中、速やかに、Ｎ１′１
と反応して、極太吸収波長６００ｎｎｎ以上に強い吸収
を有するキレート化合物を生成する。
次に、ＮＡＤＨの定量の場合を例にとって、本発明を更
に詳細に説明する。
に詳細に説明する。
実験例、 Ｎ ’Ａ Ｄ Ｈの定量
２−（２−ベンゾチアゾリル）−３−（２−カルボキシ
フェニル）−５−フェニル−２１−１−テトラゾリウム
クロリド〔ＢＴＣ１゛Ｔ−ＣＩ ′３全０、５ ｍｍ
ｏ ＋／ｚ、 ｌ−メトキンフェナジンメトザルフェ
ート（以下、１−メトキン−Ｐ Ｍ Ｓと略称する０）
を１２μ「１１ｏ ｌ／ｌ、 Ｎ Ａ ］） Ｈを５０
μｍＣ＋Ｉ／Ｌの濃度になるように溶解した５ ０ ｍ
Ｍ ） ’）ス塩酸緩衝液（ｐＨ”’ ｓ、！５ ）
を調製し、この溶液の１．Ｉ Ｖ吸収を測定する。結果
を表２に示す。
フェニル）−５−フェニル−２１−１−テトラゾリウム
クロリド〔ＢＴＣ１゛Ｔ−ＣＩ ′３全０、５ ｍｍ
ｏ ＋／ｚ、 ｌ−メトキンフェナジンメトザルフェ
ート（以下、１−メトキン−Ｐ Ｍ Ｓと略称する０）
を１２μ「１１ｏ ｌ／ｌ、 Ｎ Ａ ］） Ｈを５０
μｍＣ＋Ｉ／Ｌの濃度になるように溶解した５ ０ ｍ
Ｍ ） ’）ス塩酸緩衝液（ｐＨ”’ ｓ、！５ ）
を調製し、この溶液の１．Ｉ Ｖ吸収を測定する。結果
を表２に示す。
まだ、これに、トリトンＸ−１００ｆ：０．２飴の濃度
になるように添加した場合、及びトリトンＸ−１００を
０．２ ％及びＮ ｉ Ｃ１２を１ｍｍｏｌ／Ａの濃度
になるように添加した場合の極大吸収波長及び分子吸光
係数も併せて表２に示す。
になるように添加した場合、及びトリトンＸ−１００を
０．２ ％及びＮ ｉ Ｃ１２を１ｍｍｏｌ／Ａの濃度
になるように添加した場合の極大吸収波長及び分子吸光
係数も併せて表２に示す。
表 ２
Ｎ（Ｌ３のＮｉキレート生成反応は速や力１に進行し、
反応開始後５分間ではソ安定１〜だ呈色力；得られるが
、より完全に安定化した呈色をイ尋たい場合でも、反応
開始後、約１０分間置けば充分でおる。
反応開始後５分間ではソ安定１〜だ呈色力；得られるが
、より完全に安定化した呈色をイ尋たい場合でも、反応
開始後、約１０分間置けば充分でおる。
このように本発明の新規なテトラソ゛１ノウム塩（は、
その還元成績体であるホルマザンとＮｉとのキレート生
成反応が速やかで、且つ生成１−だキレートの極太吸収
波長が６００１ｍ以上と長波長唄１１にあり、まだ、そ
の分子吸光係数も１２１×１０“と体液成分の測定に充
分な強さを有しているので、レドックス反応を利用する
臨床化学分析に於て、有効に使用し得る。
その還元成績体であるホルマザンとＮｉとのキレート生
成反応が速やかで、且つ生成１−だキレートの極太吸収
波長が６００１ｍ以上と長波長唄１１にあり、まだ、そ
の分子吸光係数も１２１×１０“と体液成分の測定に充
分な強さを有しているので、レドックス反応を利用する
臨床化学分析に於て、有効に使用し得る。
本発明の新規なテトラゾリウム塩をレドックス反応を利
用した生体体液成分の定量に使用する場合の方法及び操
作に関しては還元成績体であるホルマザンをＮ１キレー
トとする以外は、既存のテトラゾリウム塩を用いた自体
公知の定量方法及び測定操作に従って行なえばよい。
用した生体体液成分の定量に使用する場合の方法及び操
作に関しては還元成績体であるホルマザンをＮ１キレー
トとする以外は、既存のテトラゾリウム塩を用いた自体
公知の定量方法及び測定操作に従って行なえばよい。
本発明の新規テトラゾリウム塩の合成は、通常、以下の
反応式に従って行なわれる。
反応式に従って行なわれる。
［１１
即ち、一般に、ペテロ環状アミンはジアゾ化が困難テ、
且つジアゾニウム塩は不安定であるから、ペテロ項状ヒ
ドラゾンからの合成が好ましく、この方法に従って行な
った場合、２−ヒドラジノベンゾチアゾールからの通算
収率２０〜３０係で、目的のテトラゾリウム塩〔１〕が
得られる。各工程の合成法は、自体公知のそのような合
成方法に従うことで足りる。
且つジアゾニウム塩は不安定であるから、ペテロ項状ヒ
ドラゾンからの合成が好ましく、この方法に従って行な
った場合、２−ヒドラジノベンゾチアゾールからの通算
収率２０〜３０係で、目的のテトラゾリウム塩〔１〕が
得られる。各工程の合成法は、自体公知のそのような合
成方法に従うことで足りる。
本発明は、従来、ホルマザンとのキレート生成反応が遅
いとされていた、ｌ’ｌ＋・十とのキレート生成反応が
速やかで、且つ、酵素分析に於て重要な中性付近に於て
も充分安定なキレート化合物を与え、生体試料中の体液
成分の測定の際、測定妨害物質となるヒリルビンやヘモ
グロビンの影響を回避することができる６ ００ ｎｍ
以上の波長に於て、それら体液成分の測定に充分な強さ
の極大吸収を与えるホルマザンを生成する新規なテトラ
ゾリウム塩を提供するものであり、斯業に貢献するとこ
ろ極めて火なるものがある。
いとされていた、ｌ’ｌ＋・十とのキレート生成反応が
速やかで、且つ、酵素分析に於て重要な中性付近に於て
も充分安定なキレート化合物を与え、生体試料中の体液
成分の測定の際、測定妨害物質となるヒリルビンやヘモ
グロビンの影響を回避することができる６ ００ ｎｍ
以上の波長に於て、それら体液成分の測定に充分な強さ
の極大吸収を与えるホルマザンを生成する新規なテトラ
ゾリウム塩を提供するものであり、斯業に貢献するとこ
ろ極めて火なるものがある。
以下に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、
本発明はこれらに限定されるものでない。
本発明はこれらに限定されるものでない。
実施例１．２−（２−ベンゾデアゾリル）−３−（２−
カルボキシフェニル）−５−フェニル−２■１−テトラ
ゾリウム クロリド［Ｂ Ｔ ＣＰ Ｔ −Ｃ＋〕の合
成 （１） ベンズアルデヒド−２−ベンゾチアゾリルヒ
ドラゾンの合成 ２−ヒドラジノベンゾチアゾール ８．３ ｙ（０、０
５ ｍｏｌ ）、ベンズアルデヒド ５．３ ＋７ （
０，０５ｍｏ＋ ）、メタノール １００ｒｎｌを混
合し、２時間還流反応させる。２０℃に冷却後、戸数し
て、淡黄色結晶 １２．５ｉｉ’を得る。収率９８７係
。
カルボキシフェニル）−５−フェニル−２■１−テトラ
ゾリウム クロリド［Ｂ Ｔ ＣＰ Ｔ −Ｃ＋〕の合
成 （１） ベンズアルデヒド−２−ベンゾチアゾリルヒ
ドラゾンの合成 ２−ヒドラジノベンゾチアゾール ８．３ ｙ（０、０
５ ｍｏｌ ）、ベンズアルデヒド ５．３ ＋７ （
０，０５ｍｏ＋ ）、メタノール １００ｒｎｌを混
合し、２時間還流反応させる。２０℃に冷却後、戸数し
て、淡黄色結晶 １２．５ｉｉ’を得る。収率９８７係
。
ｍｐ ２２１−２２３℃（ｌｉ＋、 ２２１−２２
２℃）。
２℃）。
ＩＲ（ＫＢｒ） ： １＝６２３ ｃｍ ’（−Ｎ＝
Ｃ１４）０（２）１−（２−ベンゾチアゾリル）−３−
フエ＝ルー５−Ｃ２−カルホキジフェニル）ホルマザン
［：ＢＴＣＰＦ：］の合成 アントラニル酸 ６．２ ｆ （０，０４５ｍｏｌ）
、塩酸 １３．７ ？ （０，１３５ｍｏｌ ）を蒸留
水８０ｒｎｌに溶解し、氷冷下、ＮａＮＯ２３，１ｆｔ
（０，０４５ｍｏｌ ）と蒸留水２０−の溶液を、３
〜１０℃で、約５分間かけて滴下し、後、１０℃で２０
分間反応させ、ジアゾニウム塩の溶液を得る。
Ｃ１４）０（２）１−（２−ベンゾチアゾリル）−３−
フエ＝ルー５−Ｃ２−カルホキジフェニル）ホルマザン
［：ＢＴＣＰＦ：］の合成 アントラニル酸 ６．２ ｆ （０，０４５ｍｏｌ）
、塩酸 １３．７ ？ （０，１３５ｍｏｌ ）を蒸留
水８０ｒｎｌに溶解し、氷冷下、ＮａＮＯ２３，１ｆｔ
（０，０４５ｍｏｌ ）と蒸留水２０−の溶液を、３
〜１０℃で、約５分間かけて滴下し、後、１０℃で２０
分間反応させ、ジアゾニウム塩の溶液を得る。
次に、先の反応で得られたベンズアルデヒド−２−ベン
ゾチアゾリルヒドラゾン ７．６５’ （０，０３ｍｏ
ｌ ）をテトラヒドロフラン ３００ｍ１Ｋ溶解しこ
れに ９ ｓ ％ Ｎａ０１−］水溶液 ６． Ｏｒ
（０，１４３ｍｏｌ ）を添加した混合液に、先のジア
ゾニウム塩の溶液を 水冷下、３〜５℃で約１時間かけ
て滴下し、同温度で３時間反応後、反応液を蒸留水１’
２００’ｄ中に注ぎ、析出した副生成物を戸去し、Ｐ液
を酢酸 １５−で中和して、分離した黒色油分を分ける
。これをジオキサン １００彪に溶解し、蒸留水 ４０
０ゴを加え、析出晶を戸数、乾燥して、紫色晶 １０７
グを得る。この全量をエタノール ５００ｍ１と蒸留水
５００＋／の混合液に加え、１時間還流することによ
り洗浄し、そのま−ｉｏ℃以下に冷却し、戸数、乾燥し
て、紫色晶 ５．９ ｉｉ’を得る。収率４８７係。
ゾチアゾリルヒドラゾン ７．６５’ （０，０３ｍｏ
ｌ ）をテトラヒドロフラン ３００ｍ１Ｋ溶解しこ
れに ９ ｓ ％ Ｎａ０１−］水溶液 ６． Ｏｒ
（０，１４３ｍｏｌ ）を添加した混合液に、先のジア
ゾニウム塩の溶液を 水冷下、３〜５℃で約１時間かけ
て滴下し、同温度で３時間反応後、反応液を蒸留水１’
２００’ｄ中に注ぎ、析出した副生成物を戸去し、Ｐ液
を酢酸 １５−で中和して、分離した黒色油分を分ける
。これをジオキサン １００彪に溶解し、蒸留水 ４０
０ゴを加え、析出晶を戸数、乾燥して、紫色晶 １０７
グを得る。この全量をエタノール ５００ｍ１と蒸留水
５００＋／の混合液に加え、１時間還流することによ
り洗浄し、そのま−ｉｏ℃以下に冷却し、戸数、乾燥し
て、紫色晶 ５．９ ｉｉ’を得る。収率４８７係。
ｍｐ １９１〜１９２℃（分解）。
Ｉ ＋１（ＫＢｒ ）： １６６４ｃｍ’（〉ｃｍｏ）
。
。
（３）２−（２−ベンゾチアゾリル）−３−（２−カル
ホキジフェニル）−５−フェニル−２Ｈ−テトラゾリウ
ム クロリド［ＢＴＣＰＴ−Ｃ１〕の合成 先の反応で得られだＢＴＣＰＦ ］、５ｆ（３，７ｍ
ｍｏｌ ）をクロロホルム １５０７に溶解し、氷冷下
、５℃以下で、酢酸１ｒｎｌを注入し、これに１−旧＋
ＯＣｌ １．２ ｆｔ （１１ｍｍｏｌ ）を、
３〜５℃で注入し、同温度で２時間反応させる。析出し
た結晶をＦ取、洗浄、乾燥して、黄色晶 ０．８Ｌｉを
得る。っ収率４９６係。
ホキジフェニル）−５−フェニル−２Ｈ−テトラゾリウ
ム クロリド［ＢＴＣＰＴ−Ｃ１〕の合成 先の反応で得られだＢＴＣＰＦ ］、５ｆ（３，７ｍ
ｍｏｌ ）をクロロホルム １５０７に溶解し、氷冷下
、５℃以下で、酢酸１ｒｎｌを注入し、これに１−旧＋
ＯＣｌ １．２ ｆｔ （１１ｍｍｏｌ ）を、
３〜５℃で注入し、同温度で２時間反応させる。析出し
た結晶をＦ取、洗浄、乾燥して、黄色晶 ０．８Ｌｉを
得る。っ収率４９６係。
ｍｐ １４ｏ〜１４１℃（分解）。
１１２（ＫＢｒ ）：１７００ｃｍ （Ｃ
＝０） 。
＝０） 。
計算値（２）：Ｃ５７，８７’；Ｉ−１３，２４：Ｎ１
６．０７ 実測値（イ）： Ｃ５７，６３； Ｉ−］ ３．２７
； Ｎ実施例２ ＮＡＤｌｌの定量 ＢＴＣＰＴ−ＣＩをＱ、 ５ ｍｍｏ ｌ ／ Ａ ’
、 １−メトキン−１３Ｍ Ｅ＋を１２μｍｏｌ ／
ｔ、 ｌ・リドンＸ −１００を０．２ ％の濃度
になるように、これらを５０ ｍＭトリス塩酸緩衝液（
１）Ｉ−］ ＝ ８．５ ）に溶解し、発色試液とする
。
６．０７ 実測値（イ）： Ｃ５７，６３； Ｉ−］ ３．２７
； Ｎ実施例２ ＮＡＤｌｌの定量 ＢＴＣＰＴ−ＣＩをＱ、 ５ ｍｍｏ ｌ ／ Ａ ’
、 １−メトキン−１３Ｍ Ｅ＋を１２μｍｏｌ ／
ｔ、 ｌ・リドンＸ −１００を０．２ ％の濃度
になるように、これらを５０ ｍＭトリス塩酸緩衝液（
１）Ｉ−］ ＝ ８．５ ）に溶解し、発色試液とする
。
Ｎ Ａ Ｄ Ｉ］を各々２０，４０，６０，８０，１．
００７１ｍｏｌ／ｌの濃度になるように、５０ｍＭトリ
ス塩酸緩衝液（ｐｌ−１＝８．５）に溶解し、標準液と
する。〕標準液 １．５ｍｌをとり、発色試液 １５ゴ
を加えて、３７℃恒温槽中１０分間加温後、試薬盲検を
対照として波長５１５ｎｍに於ける吸光度を測定する。
００７１ｍｏｌ／ｌの濃度になるように、５０ｍＭトリ
ス塩酸緩衝液（ｐｌ−１＝８．５）に溶解し、標準液と
する。〕標準液 １．５ｍｌをとり、発色試液 １５ゴ
を加えて、３７℃恒温槽中１０分間加温後、試薬盲検を
対照として波長５１５ｎｍに於ける吸光度を測定する。
この際の測定液中のＮ Ａ Ｄ Ｉ＋の濃度は、各々１
０，２０，３０，４０．５０μｍＯ量／ｌである。
０，２０，３０，４０．５０μｍＯ量／ｌである。
各ＮＡＤＨ濃度（μｍＯ１／ｌ）に対してプロ、トした
吸光度（ＯＤ）を結ぶ検量線は、第１図に示されるよう
に、原点を通る直線となり、検量線は良好な定量性を示
している。
吸光度（ＯＤ）を結ぶ検量線は、第１図に示されるよう
に、原点を通る直線となり、検量線は良好な定量性を示
している。
実施例３ 、 Ｎ Ａ Ｄ Ｈの定量
ＢＴＣＰＴ−ＣＩを０．５ ｍｍｏｌ ／ ｔ、 １
−メトキシ−Ｔ’ＭＳを１２μｍｏｌ ／ｌ、 トリ
トンＸ−１００を０２係、ＮｉＣｌ２を１． ｍｍｏ
ｌ ／ ｔの濃度になるように、これらを５０ ｍＭ
）リス塩酸緩衝４１２（ｐ）Ｉ＝８．５）に溶解し、発
色試液とする。
−メトキシ−Ｔ’ＭＳを１２μｍｏｌ ／ｌ、 トリ
トンＸ−１００を０２係、ＮｉＣｌ２を１． ｍｍｏ
ｌ ／ ｔの濃度になるように、これらを５０ ｍＭ
）リス塩酸緩衝４１２（ｐ）Ｉ＝８．５）に溶解し、発
色試液とする。
Ｎ Ａ Ｄ １１を各々２０，４０，６０，８０，１０
０μｍｏｌ／ｌの濃度になるように、５０ｍＭトリス塩
酸緩衝液（ｐｌ４−８．５ ）に溶解し、標準液とす標
準液 １．５ｒｎｌをとり、発色試液 １．５−を加え
て、３７℃恒温槽中１０分間加昌後、試薬盲検を対照と
して波長６０５ ｎｍに於ける吸光度を測定する。この
際の測定″液中のＮＡＤＨの濃度は、各々１０，２０．
’３０，４．０．５０μｍｏ１／ｌである。
０μｍｏｌ／ｌの濃度になるように、５０ｍＭトリス塩
酸緩衝液（ｐｌ４−８．５ ）に溶解し、標準液とす標
準液 １．５ｒｎｌをとり、発色試液 １．５−を加え
て、３７℃恒温槽中１０分間加昌後、試薬盲検を対照と
して波長６０５ ｎｍに於ける吸光度を測定する。この
際の測定″液中のＮＡＤＨの濃度は、各々１０，２０．
’３０，４．０．５０μｍｏ１／ｌである。
各Ｎ Ａ Ｄ Ｈ濃度（μｍｏ ＋ ／ ｔ）に対して
プロットした吸光度（ＯＤ）を結ぶ検量線は、第２図に
示されるように、原点を通る直線となり、検量線は良好
な定量性を示している。
プロットした吸光度（ＯＤ）を結ぶ検量線は、第２図に
示されるように、原点を通る直線となり、検量線は良好
な定量性を示している。
第１図及び第２図は、各々、実施例２．及び実施例３．
に於て得られた検量線を表わし、横軸の各ＮＡＤＨ濃度
（μｍｏ１／ｌ）について得られた吸光度を縦軸に沿っ
てプロットした点を結んだものである。 特許出願人 和光純薬工業株式会社 第１図 ＮＡＤＨ濃度 （４ｍｏｌ／Ａ ） 第２図 ０１０２０３０４０５Ｏ ＮＡＤＨ濃度Ｃｌｉｍｏ ｌ／ｌ−） 手続補正書 昭和６θ年 ２月２９８ １ 事件の表示 溜部ら９年峙洸骸乃＋＋ｇｔｏｚ号 ２ 発明の名称 弁斤刀しなテ１−ラソ゛リウ瓜Δ、ヒλト咋勿３ 補正
をする者 事件どの関係 特許出願人 連絡先 置 ０３−２７０−８５７１ ５、補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄。 ６、補正の内容 （１） 明細書５頁９行目から同頁１１行目にかけて
記載のｒ ２− （４−ヨウ化フェニル） ７３−（４
−ニトロフェニル）−５−フェニル−２Ｈ−テトラゾリ
ウム塩（Ｉ ＮＴ）Ｊをｒ３−（ｐ−ヨウ化フェニル）
−２−（’ｐ−ニトロフェニル）−５−フェニル−２Ｈ
テトラゾリウム塩（ＩＮＴ）Ｊと補正する。 （２）明細書５頁１４行目から同頁１７行目にかけて記
載の「２，２°、５，５°−テトラキス（４−ニトロフ
ェニル）−３，３°−（３，３°−ジメトキシ−４，４
゛−ジフェニレン）−２Ｈ，２’Ｈ−ジテトラゾリウム
塩（ＮＯ２−ＴＢ） Ｊをｒ″３．３’−（３，３’−
ジメトキシ−４，４−ビフェニレン）−ビス［，２−（
ｐ−ニトロフェニル）−５−フェニル−２Ｈテトラゾリ
ウム塩］ （ＮＯ２−ＴＢ）Ｊと補正する。 （３）明細書５頁１７行目から同頁１９行目にかけて記
載のｒ２，２’−ｐ−ジフェニレン−３，３’ 、５．
５’−テトラフェニル−２Ｈ２２°Ｈ−ジテトラゾリウ
ム塩（Ｎｅｏ−ＴＢ）Ｊ をｒ３，３’−（４，４°−
ビフェニレン）−ビス（２，５−ジフェニル−２Ｈテト
ラゾリウム塩）（Ｎｅｏ−ＴＢ） Ｊと補正する。 （４） 明細書１５頁２０行目に記載の「９５％Ｎａ
ＯＨ水溶液」をｒＮａＯＨ（含量８５％）」と補正する
。 以 上
に於て得られた検量線を表わし、横軸の各ＮＡＤＨ濃度
（μｍｏ１／ｌ）について得られた吸光度を縦軸に沿っ
てプロットした点を結んだものである。 特許出願人 和光純薬工業株式会社 第１図 ＮＡＤＨ濃度 （４ｍｏｌ／Ａ ） 第２図 ０１０２０３０４０５Ｏ ＮＡＤＨ濃度Ｃｌｉｍｏ ｌ／ｌ−） 手続補正書 昭和６θ年 ２月２９８ １ 事件の表示 溜部ら９年峙洸骸乃＋＋ｇｔｏｚ号 ２ 発明の名称 弁斤刀しなテ１−ラソ゛リウ瓜Δ、ヒλト咋勿３ 補正
をする者 事件どの関係 特許出願人 連絡先 置 ０３−２７０−８５７１ ５、補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄。 ６、補正の内容 （１） 明細書５頁９行目から同頁１１行目にかけて
記載のｒ ２− （４−ヨウ化フェニル） ７３−（４
−ニトロフェニル）−５−フェニル−２Ｈ−テトラゾリ
ウム塩（Ｉ ＮＴ）Ｊをｒ３−（ｐ−ヨウ化フェニル）
−２−（’ｐ−ニトロフェニル）−５−フェニル−２Ｈ
テトラゾリウム塩（ＩＮＴ）Ｊと補正する。 （２）明細書５頁１４行目から同頁１７行目にかけて記
載の「２，２°、５，５°−テトラキス（４−ニトロフ
ェニル）−３，３°−（３，３°−ジメトキシ−４，４
゛−ジフェニレン）−２Ｈ，２’Ｈ−ジテトラゾリウム
塩（ＮＯ２−ＴＢ） Ｊをｒ″３．３’−（３，３’−
ジメトキシ−４，４−ビフェニレン）−ビス［，２−（
ｐ−ニトロフェニル）−５−フェニル−２Ｈテトラゾリ
ウム塩］ （ＮＯ２−ＴＢ）Ｊと補正する。 （３）明細書５頁１７行目から同頁１９行目にかけて記
載のｒ２，２’−ｐ−ジフェニレン−３，３’ 、５．
５’−テトラフェニル−２Ｈ２２°Ｈ−ジテトラゾリウ
ム塩（Ｎｅｏ−ＴＢ）Ｊ をｒ３，３’−（４，４°−
ビフェニレン）−ビス（２，５−ジフェニル−２Ｈテト
ラゾリウム塩）（Ｎｅｏ−ＴＢ） Ｊと補正する。 （４） 明細書１５頁２０行目に記載の「９５％Ｎａ
ＯＨ水溶液」をｒＮａＯＨ（含量８５％）」と補正する
。 以 上
Claims (5)
- （１）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼〔 I 〕 （式中、Ｘはハロゲンを表わす。）で示される、２−（
２−ベンゾチアゾリル）−３−（２−カルボキシフェニ
ル）−５−フェニル−２Ｈ−テトラゾリウム塩。 - （２）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼〔 I 〕 （式中、Ｘはハロゲンを表わす。）で示されるテトラゾ
リウム化合物を、酵素反応系に共存させて、還元体であ
るホルマザンを得、その呈色を測定することを特徴とす
る生体体液成分の定量方法。 - （３）酵素反応系が還元性物質を生成する系である特許
請求の範囲第２項記載の生体体液成分の定量方法。 - （４）還元性物質が還元型ニコチンアミドアデニンジヌ
クレオチド（ＮＡＤＨ）又は還元型ニコチンアミドアデ
ニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）である、特許
請求の範囲第３項記載の生体体液成分の定量方法。 - （５）還元性物質がスーパーオキサイドイオンである、
特許請求の範囲第３項記載の生体体液成分の定量方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59118602A JPS6184A (ja) | 1984-06-09 | 1984-06-09 | 新規なテトラゾリウム化合物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59118602A JPS6184A (ja) | 1984-06-09 | 1984-06-09 | 新規なテトラゾリウム化合物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6184A true JPS6184A (ja) | 1986-01-06 |
| JPH0455192B2 JPH0455192B2 (ja) | 1992-09-02 |
Family
ID=14740629
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59118602A Granted JPS6184A (ja) | 1984-06-09 | 1984-06-09 | 新規なテトラゾリウム化合物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6184A (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0379048A2 (en) * | 1989-01-17 | 1990-07-25 | Abbott Laboratories | Beta-lactamase assays employing chromogenic precipitating substrates |
| WO2003104815A1 (ja) * | 2002-06-07 | 2003-12-18 | アークレイ株式会社 | ホルマザンを用いた酸化還元反応による測定方法 |
| WO2003107011A1 (ja) * | 2002-06-14 | 2003-12-24 | アークレイ株式会社 | スルホン酸化合物およびニトロ化合物を用いた測定方法 |
| JP2008070346A (ja) * | 2006-09-15 | 2008-03-27 | Shino Test Corp | 生体試料中の測定対象物質の測定方法及び測定試薬、ヘモグロビンの影響回避方法、並びにヘモグロビンの影響回避剤 |
| US8021855B2 (en) | 2002-07-17 | 2011-09-20 | Arkray Inc. | Method of decomposing protein with sulfonic acid compound |
| WO2018051822A1 (ja) * | 2016-09-14 | 2018-03-22 | テルモ株式会社 | ２－置換ベンゾチアゾリル－３－置換フェニル－５－置換スルホ化フェニル－２ｈ－テトラゾリウム塩、ならびに当該塩を含む生体成分濃度測定用試薬および当該塩を用いる生体成分濃度の測定方法 |
-
1984
- 1984-06-09 JP JP59118602A patent/JPS6184A/ja active Granted
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0379048A2 (en) * | 1989-01-17 | 1990-07-25 | Abbott Laboratories | Beta-lactamase assays employing chromogenic precipitating substrates |
| WO2003104815A1 (ja) * | 2002-06-07 | 2003-12-18 | アークレイ株式会社 | ホルマザンを用いた酸化還元反応による測定方法 |
| CN100335903C (zh) * | 2002-06-07 | 2007-09-05 | 爱科来株式会社 | 利用使用甲化合物的氧化还原反应的测定方法 |
| US7381539B2 (en) | 2002-06-07 | 2008-06-03 | Arkray, Inc. | Method of assay by oxidation-reduction reaction with formazan |
| WO2003107011A1 (ja) * | 2002-06-14 | 2003-12-24 | アークレイ株式会社 | スルホン酸化合物およびニトロ化合物を用いた測定方法 |
| US7354732B2 (en) | 2002-06-14 | 2008-04-08 | Arkray, Inc. | Method of assay with sulfonic acid compound and nitro compound |
| US8021855B2 (en) | 2002-07-17 | 2011-09-20 | Arkray Inc. | Method of decomposing protein with sulfonic acid compound |
| JP2008070346A (ja) * | 2006-09-15 | 2008-03-27 | Shino Test Corp | 生体試料中の測定対象物質の測定方法及び測定試薬、ヘモグロビンの影響回避方法、並びにヘモグロビンの影響回避剤 |
| WO2018051822A1 (ja) * | 2016-09-14 | 2018-03-22 | テルモ株式会社 | ２－置換ベンゾチアゾリル－３－置換フェニル－５－置換スルホ化フェニル－２ｈ－テトラゾリウム塩、ならびに当該塩を含む生体成分濃度測定用試薬および当該塩を用いる生体成分濃度の測定方法 |
| JPWO2018051822A1 (ja) * | 2016-09-14 | 2019-07-25 | テルモ株式会社 | ２−置換ベンゾチアゾリル−３−置換フェニル−５−置換スルホ化フェニル−２ｈ−テトラゾリウム塩、ならびに当該塩を含む生体成分濃度測定用試薬および当該塩を用いる生体成分濃度の測定方法 |
| US10851094B2 (en) | 2016-09-14 | 2020-12-01 | Terumo Kabushiki Kaisha | 2-substituted benzothiazolyl-3-substituted phenyl-5-substituted sulfonated phenyl-2H-tetrazolium salt, reagent for biological component concentration measurement containing said salt, and biological component concentration measurement method using said salt |
| US11739083B2 (en) | 2016-09-14 | 2023-08-29 | Terumo Kabushiki Kaisha | Disposable sensor chip with reagent including 2-substituted benzothiazolyl-3-substituted phenyl-5-substituted sulfonated phenyl-2H-tetrazolium salt |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0455192B2 (ja) | 1992-09-02 |
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