JPS615790A - 植物ウイルス阻害物質の製造法 - Google Patents
植物ウイルス阻害物質の製造法Info
- Publication number
- JPS615790A JPS615790A JP59125382A JP12538284A JPS615790A JP S615790 A JPS615790 A JP S615790A JP 59125382 A JP59125382 A JP 59125382A JP 12538284 A JP12538284 A JP 12538284A JP S615790 A JPS615790 A JP S615790A
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- JP
- Japan
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- plant
- plant virus
- genus
- callus
- cells
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明はオシｐイバナ属にｈする植物に含まれていて、
植物ウィルス阻害作用を有するタンパク質即ち植物ウィ
ルス阻害物質（以下、ウィルス・インヒビターという。
植物ウィルス阻害作用を有するタンパク質即ち植物ウィ
ルス阻害物質（以下、ウィルス・インヒビターという。
）の製造方法に関するものである。
（従来波？ｌＶ）及（発明が解決しようとする問題点）
本出願人は、先に、オシｐイバナ属に属する植物に含ま
れる新規塩基性タンパク質が顕著な抗ウィルス作用か云
すことを見い出し、特許出願を行ったところである（特
願昭５９− ｑ（、ｌ、３゜号）。しがし、このタンパ
ク質を得るには、オシロイバナ属に属する植物を裁培す
ることが必要であった。同植物の裁培には多大の日時と
労力を要し、タンパク質を大量に得ようとすれば、作付
面積も広大とならざるを得ない。
れる新規塩基性タンパク質が顕著な抗ウィルス作用か云
すことを見い出し、特許出願を行ったところである（特
願昭５９− ｑ（、ｌ、３゜号）。しがし、このタンパ
ク質を得るには、オシロイバナ属に属する植物を裁培す
ることが必要であった。同植物の裁培には多大の日時と
労力を要し、タンパク質を大量に得ようとすれば、作付
面積も広大とならざるを得ない。
一方、植物に含まれる有用成分を得るため、植物組織培
養法によることが知られているが、一般に、組織培養で
は目的とする母植物の有用成分が必ず生成されるという
ものではなく、むしろ生成されない場合が多い。例えば
、一般にタバコの組織培養ではニコチンは生成されない
ことが知られている（ Ｐｒｏｃ、ＩＶ ＩＦＦ：Ｆｅ
ｒｍｅｎｔ。
養法によることが知られているが、一般に、組織培養で
は目的とする母植物の有用成分が必ず生成されるという
ものではなく、むしろ生成されない場合が多い。例えば
、一般にタバコの組織培養ではニコチンは生成されない
ことが知られている（ Ｐｒｏｃ、ＩＶ ＩＦＦ：Ｆｅ
ｒｍｅｎｔ。
Ｔｅｃｈｎｏｌ、Ｔｏｄａ７６８１−６９５ 、１９７
２９照）。
２９照）。
本発明者らは、前述のオシロイバナ属に属する植物に含
まれるウィルス・インヒビターを短期間にかつ大量に得
る目的から植物組織培養法を検討した。まず、オシロイ
バナ屈植物からカルスを誘導し、培地に培養し、得られ
た培養細胞を分析した結果、例えば、オシロイバナ（Ｍ
ｉｒａｂ…ｓ ｊａｌａｐａ Ｌ、 ）のカルスの培養
物中に母植物の含゛有成分であるウィルス・インζビタ
ーが存在することを詔め、本発明を為すに至った。。
まれるウィルス・インヒビターを短期間にかつ大量に得
る目的から植物組織培養法を検討した。まず、オシロイ
バナ屈植物からカルスを誘導し、培地に培養し、得られ
た培養細胞を分析した結果、例えば、オシロイバナ（Ｍ
ｉｒａｂ…ｓ ｊａｌａｐａ Ｌ、 ）のカルスの培養
物中に母植物の含゛有成分であるウィルス・インζビタ
ーが存在することを詔め、本発明を為すに至った。。
本発明の目的は、オシロイバナ属植物中に含有されるウ
ィルス☆インヒビター成分を通常の栽培方法によって得
られた植物がら抽出採取するのではなく、該植物からｍ
￥ｉされるカルスを培養増殖し、該培養物から抽出採取
する製造方法を提供することである。′− （問題点を解決するための手段） 本発明は高等植物オシロイバナ属に踊する植物の種子、
葉、茎、根、子葉、花、果実、腫瘍組織、その他からの
組織片を培養し、脱分化した無定形の細胞群即ちカルス
を誘導し、培養細胞にウィルス・インヒビターを生成蓄
積せしめ、該ウィルス・インヒビターを分離取得する製
造法である。
ィルス☆インヒビター成分を通常の栽培方法によって得
られた植物がら抽出採取するのではなく、該植物からｍ
￥ｉされるカルスを培養増殖し、該培養物から抽出採取
する製造方法を提供することである。′− （問題点を解決するための手段） 本発明は高等植物オシロイバナ属に踊する植物の種子、
葉、茎、根、子葉、花、果実、腫瘍組織、その他からの
組織片を培養し、脱分化した無定形の細胞群即ちカルス
を誘導し、培養細胞にウィルス・インヒビターを生成蓄
積せしめ、該ウィルス・インヒビターを分離取得する製
造法である。
本発明を更に具体的に説明する。まず、高等植物オシロ
イバナ属の植物から、カルスを誘導する方法について説
明する。ウィルス・インヒビターを含有するオシロイバ
ナ属の植物、例えば、オシロイバナ（Ｍｉｒａｂ…ｓ
ｊａｌａｐａＬ、 ）の種子、葉、茎、根、子葉、花、
果実、腫瘍組織、その他を、イオン交換水で十分洗浄し
、適当な大きさの組織片に切断し、殺菌剤、例えば、次
亜塩素酸ソーダやエタノールなどで殺菌したのち、滅菌
水でよく洗う。このように殺菌されたｔｆ１織片を、寒
天培地上ＫＯ置する。暗所もしくは照明下に２３−３２
℃の温度条件下で、培養することにより１−３週間後に
カルスが誘導される。
イバナ属の植物から、カルスを誘導する方法について説
明する。ウィルス・インヒビターを含有するオシロイバ
ナ属の植物、例えば、オシロイバナ（Ｍｉｒａｂ…ｓ
ｊａｌａｐａＬ、 ）の種子、葉、茎、根、子葉、花、
果実、腫瘍組織、その他を、イオン交換水で十分洗浄し
、適当な大きさの組織片に切断し、殺菌剤、例えば、次
亜塩素酸ソーダやエタノールなどで殺菌したのち、滅菌
水でよく洗う。このように殺菌されたｔｆ１織片を、寒
天培地上ＫＯ置する。暗所もしくは照明下に２３−３２
℃の温度条件下で、培養することにより１−３週間後に
カルスが誘導される。
このようにして８導されたカルスは、寒天培地、液体培
地の如何をとわす、良好な細胞増殖を示す。
地の如何をとわす、良好な細胞増殖を示す。
培養に用いる培地は、各種ビタミン、無機塩類、糖から
なる既知の植物、ｉ！Ｉ ＩＪｊ ＃ｊａに使用されて
いるものでよい。例えば、ムラシゲｅスクーグ（Ｍａｒ
ａｓｈｉｇｅ −Ｓｋｏｏｇ ）培地、ホワイト（Ｔｈ
１ｔｅ ）培地、コー ） Ｌ／ −（Ｃｂｕｔｈｒｅ
ｔ ）培地、ツレ、ヶ（Ｔｕｌｅｃｋｅ ）培地、リン
スマイヤー・スクーグ（Ｌｉｎ５ｍｍ１ｅｒ −８ｋｏ
ｏｇ ）培地、ヒ、ルデプラント（Ｈｉｌｄｅｂｒａｎ
ｄｔ ）培地及びこれらの修正培地などがあげられる。
なる既知の植物、ｉ！Ｉ ＩＪｊ ＃ｊａに使用されて
いるものでよい。例えば、ムラシゲｅスクーグ（Ｍａｒ
ａｓｈｉｇｅ −Ｓｋｏｏｇ ）培地、ホワイト（Ｔｈ
１ｔｅ ）培地、コー ） Ｌ／ −（Ｃｂｕｔｈｒｅ
ｔ ）培地、ツレ、ヶ（Ｔｕｌｅｃｋｅ ）培地、リン
スマイヤー・スクーグ（Ｌｉｎ５ｍｍ１ｅｒ −８ｋｏ
ｏｇ ）培地、ヒ、ルデプラント（Ｈｉｌｄｅｂｒａｎ
ｄｔ ）培地及びこれらの修正培地などがあげられる。
また、糖としては、シークロースのほかにグルコース、
フラクトース、マルトース、＃Ｊ蜜、澱粉などを単独も
しくは混合して使い得る。さらに、ココナ°ンミルク、
酵母工苓ス、麦芽エキス、カザミノ酸、ぺ１トン、肉エ
キスなどの添加は、細胞増殖に有効である。また、植物
成長調節物質として、オーキシン類、例えば、β−イン
ドール酢酸、α−ナフトキシ酢酸、２ 、４−ジクロロ
フェノキシ酢酸を０．０１−２０ ｐｐｍ、サイトカイ
ニン類、例えば、カイネチン、ゼアチン、６−ベンジル
アデニンを０．００１−１Ｏｐｐ、を単独もしくは和合
せて添加使用することにより、カルスを効果的に誘導す
ることができる。また、０．１−１０１−１Ｏｐｐ ２
、４−ジクロロフェノキシ酢酸と３０ ｇ ／ １の
シュクロースを含むムフシゲ・スクーグ培地において、
最も良好な細胞増殖が紹められた。培地のｐＨは４．０
−７．０、培養温度は２５−３２℃が好適で、培養日数
７−１４日で約ｔ５ｇ／ｌの乾物重に達する。
フラクトース、マルトース、＃Ｊ蜜、澱粉などを単独も
しくは混合して使い得る。さらに、ココナ°ンミルク、
酵母工苓ス、麦芽エキス、カザミノ酸、ぺ１トン、肉エ
キスなどの添加は、細胞増殖に有効である。また、植物
成長調節物質として、オーキシン類、例えば、β−イン
ドール酢酸、α−ナフトキシ酢酸、２ 、４−ジクロロ
フェノキシ酢酸を０．０１−２０ ｐｐｍ、サイトカイ
ニン類、例えば、カイネチン、ゼアチン、６−ベンジル
アデニンを０．００１−１Ｏｐｐ、を単独もしくは和合
せて添加使用することにより、カルスを効果的に誘導す
ることができる。また、０．１−１０１−１Ｏｐｐ ２
、４−ジクロロフェノキシ酢酸と３０ ｇ ／ １の
シュクロースを含むムフシゲ・スクーグ培地において、
最も良好な細胞増殖が紹められた。培地のｐＨは４．０
−７．０、培養温度は２５−３２℃が好適で、培養日数
７−１４日で約ｔ５ｇ／ｌの乾物重に達する。
次に、このようにして培養した細胞からウィルス・イン
ヒビターを抽出・採取する方法について述べる。培養細
胞［２−メルカプトエタノールをｏ、ｉ％含む０．ＯＩ
Ｍリン酸瀾オ請液（ｐＪ（６，０−７，４）を加えてミ
キサーまたはホモジナイシなどにより磨砕する。得られ
た磨砕物を遠心分離し、上清部分と沈殿部分に分ける。
ヒビターを抽出・採取する方法について述べる。培養細
胞［２−メルカプトエタノールをｏ、ｉ％含む０．ＯＩ
Ｍリン酸瀾オ請液（ｐＪ（６，０−７，４）を加えてミ
キサーまたはホモジナイシなどにより磨砕する。得られ
た磨砕物を遠心分離し、上清部分と沈殿部分に分ける。
その上清部分を抽出に用いたものと同一の緩衝液で平衡
化した陽イオン交換体、例えば、カルボキシメチル七フ
ァロース力ラム通塔し、活性成分を吸着させる。吸着し
た活性成分はＯ−０，５Ｍの直線的濃度勾配をつけた食
塩を含む０．ＯＩＭ！Ｊン酸緩衝液（ｐＨ６，０）で溶
出する。該活性画分を分取し、０．０１Ｍリン酸緩衝液
（ｐＨ７，０）に透析した後、同緩雨液で平衡化した陰
イオン交換体、例えば、ジエチルアミノエチルセファロ
ースカラムに通塔して、カラムから流出する画分を集め
る。この画分な再度上記のカルボキシメチル七ファロー
ス力ラムクロマトグラフイーを行うことにより抗ウィル
ス活性を示す単一のピークを示す物質が得られる。これ
を集めて脱イオン水に透析後、凍結乾燥し、精製物を得
る。
化した陽イオン交換体、例えば、カルボキシメチル七フ
ァロース力ラム通塔し、活性成分を吸着させる。吸着し
た活性成分はＯ−０，５Ｍの直線的濃度勾配をつけた食
塩を含む０．ＯＩＭ！Ｊン酸緩衝液（ｐＨ６，０）で溶
出する。該活性画分を分取し、０．０１Ｍリン酸緩衝液
（ｐＨ７，０）に透析した後、同緩雨液で平衡化した陰
イオン交換体、例えば、ジエチルアミノエチルセファロ
ースカラムに通塔して、カラムから流出する画分を集め
る。この画分な再度上記のカルボキシメチル七ファロー
ス力ラムクロマトグラフイーを行うことにより抗ウィル
ス活性を示す単一のピークを示す物質が得られる。これ
を集めて脱イオン水に透析後、凍結乾燥し、精製物を得
る。
このよう圧して得られたウィルスインヒビターの物理化
学的性質は以下のとうりである。即ち、次のａ−ｅの物
性により特定される塩基性の蛋白質であることが確認さ
れた。
学的性質は以下のとうりである。即ち、次のａ−ｅの物
性により特定される塩基性の蛋白質であることが確認さ
れた。
ａ、紫外部吸収スペクトルが波長２８０ ｎｍにピーク
を有する。
を有する。
ｂ、ニンヒドリン反応は陽性で、フェノール硫酸法は陰
性である。
性である。
ｅ −’に ｉ！点ｐＩ＝９−１０゜
ｄ０分子量は８Ｄ８−ポリアクリルアミドゲル電気泳動
法による測定値で２．４２ｘｌＯ’である。
法による測定値で２．４２ｘｌＯ’である。
ｅ、超遠心分析法による沈降係数はＳ、。、、＝２．５
である。
である。
このことから、本発明のオシロイバナ属ニ属する植物の
カルス培養法によって得られたウィルス・インヒビター
は、母植勅に含まれるウィルス・インヒビターと同一物
質であることが確認された。
カルス培養法によって得られたウィルス・インヒビター
は、母植勅に含まれるウィルス・インヒビターと同一物
質であることが確認された。
（本発明の効果〕
ウィルス・インヒビターを気１候、風土など自然条件に
左右されることなく、柄物組録培養法により短期間にか
つ大系に製造できる。
左右されることなく、柄物組録培養法により短期間にか
つ大系に製造できる。
、（実施例１）
オシロイバナ（Ｍｉｒａｂｉｌｉｓ ｊａｌａｐａ Ｌ
、 ）の葉をイオン交換水で十分洗浄し、約１−四方の
大きさに切断し、９５％ エタノールで３０秒、１０％
次亜塩素酸ソーダでＩＯ分間殺閉じた後、城菌水でよく
洗浄した。この組織片を、ムラシゲ・スクーグ無機塩培
地に、２．４−ジクロロフェノキシ酢酸を０．５ ｍ
ｇ ／ １、サイアミン塩酸塩を１ｍｇ／ １、シュク
ロースを２０ ｇ／ｌ、ココナツツミルクを２００ｍ１
／１．寒天末を８ｇ／ｌ加え、ｐＨを６．０にｖＭ整し
た寒天培地上に置く。これを暗所下、２８℃の温度条件
下で培養し、３週囲後向ルスが誘導された。このように
して誘導したカイ３く： ルスな上記の寒天培地で２伏縫体培養した後、上記寒天
培地から寒天を除いた液体培地で３伏線代培養した。さ
らに、上記のムラシゲ・スクーグ無機塩培地に２．４−
ジクロロフェノキシ酢１セをｏ、 ｓ ｍｇ／ｌ 、サ
イアミン塩酸場を１ｍｇ／ｌ。
、 ）の葉をイオン交換水で十分洗浄し、約１−四方の
大きさに切断し、９５％ エタノールで３０秒、１０％
次亜塩素酸ソーダでＩＯ分間殺閉じた後、城菌水でよく
洗浄した。この組織片を、ムラシゲ・スクーグ無機塩培
地に、２．４−ジクロロフェノキシ酢酸を０．５ ｍ
ｇ ／ １、サイアミン塩酸塩を１ｍｇ／ １、シュク
ロースを２０ ｇ／ｌ、ココナツツミルクを２００ｍ１
／１．寒天末を８ｇ／ｌ加え、ｐＨを６．０にｖＭ整し
た寒天培地上に置く。これを暗所下、２８℃の温度条件
下で培養し、３週囲後向ルスが誘導された。このように
して誘導したカイ３く： ルスな上記の寒天培地で２伏縫体培養した後、上記寒天
培地から寒天を除いた液体培地で３伏線代培養した。さ
らに、上記のムラシゲ・スクーグ無機塩培地に２．４−
ジクロロフェノキシ酢１セをｏ、 ｓ ｍｇ／ｌ 、サ
イアミン塩酸場を１ｍｇ／ｌ。
シュクロースを３ｏｇ／ｘ加え、ｐＨを６．０に調整し
た液体培地で継代＠養を行ったつ約８カ月の継代培養に
よりて、カルスの性質は安置化したものとなった。これ
を上記の液体培地ｌｔをいれた３を容のヘソ付三角フラ
スコで１２日間、暗黒下２８℃、１１０ｒｐｍの回転振
とう培養を行い、１０紛の新鮮ｍ胞を収穫した。
た液体培地で継代＠養を行ったつ約８カ月の継代培養に
よりて、カルスの性質は安置化したものとなった。これ
を上記の液体培地ｌｔをいれた３を容のヘソ付三角フラ
スコで１２日間、暗黒下２８℃、１１０ｒｐｍの回転振
とう培養を行い、１０紛の新鮮ｍ胞を収穫した。
これに、２−メルカプトエタノールを０．１％含む０．
０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，２）５０ｔを加え、ホモ
ジナイザーで、磨砕したつ得られた磨砕液を５０００
ｘｇで１５分間、遠心分離し、上清部分と沈殿部分に分
けた。沈殿部分には上記抽出媒をさらに２５を加えてよ
く攪拌し、５０００ ｘｇで１５分間遠心分離した。両
遠心分離で得られた上清な合わせ、０． ＯＩ Ｍリン
酸緩衝液（ｐＨ６，０）で平衡化したカルボキシメチル
セファロースＣＬ−６８（７フルマシア社商品名〕カラ
ムに通塔して活性成分を＠着させた。吸着した活性成分
はＯ−Ｏ，Ｓλ（の直線的濃度勾配をつけた食塩を含む
０、ＯＩＭリンＱ綬飾液ｐｌＴ ６． Ｏで溶出した結
果ｐ、１５−０．１８Ｍ食塩濱出画分に活性がａ４めら
れた。該活性画分を分取し、０．０１Ｍリン酸緩衝液（
ｐＨ７，０）に透析後、同鞍衝液で平衡化したジエチル
アミノセファロース（ファルマシア社商品名）カラムに
通塔してカラムから流出する画分を集め、それをｐＨ６
，０に調整後、再度上記カルボキシメチルセファロース
カラムクロマトグラフィーを行つた。本カラムクロマト
グラフィーによって、抗ウィルス活性を示す単一のピー
クが得られたので、これを集めて脱イオン水に透析後、
凍結乾燥し、精製物とした。本精製物はオシロイバナの
培弄細胞乾物童Ｉ Ｋｆ当たり１２５ｍｇの割合で得ら
れた。
０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，２）５０ｔを加え、ホモ
ジナイザーで、磨砕したつ得られた磨砕液を５０００
ｘｇで１５分間、遠心分離し、上清部分と沈殿部分に分
けた。沈殿部分には上記抽出媒をさらに２５を加えてよ
く攪拌し、５０００ ｘｇで１５分間遠心分離した。両
遠心分離で得られた上清な合わせ、０． ＯＩ Ｍリン
酸緩衝液（ｐＨ６，０）で平衡化したカルボキシメチル
セファロースＣＬ−６８（７フルマシア社商品名〕カラ
ムに通塔して活性成分を＠着させた。吸着した活性成分
はＯ−Ｏ，Ｓλ（の直線的濃度勾配をつけた食塩を含む
０、ＯＩＭリンＱ綬飾液ｐｌＴ ６． Ｏで溶出した結
果ｐ、１５−０．１８Ｍ食塩濱出画分に活性がａ４めら
れた。該活性画分を分取し、０．０１Ｍリン酸緩衝液（
ｐＨ７，０）に透析後、同鞍衝液で平衡化したジエチル
アミノセファロース（ファルマシア社商品名）カラムに
通塔してカラムから流出する画分を集め、それをｐＨ６
，０に調整後、再度上記カルボキシメチルセファロース
カラムクロマトグラフィーを行つた。本カラムクロマト
グラフィーによって、抗ウィルス活性を示す単一のピー
クが得られたので、これを集めて脱イオン水に透析後、
凍結乾燥し、精製物とした。本精製物はオシロイバナの
培弄細胞乾物童Ｉ Ｋｆ当たり１２５ｍｇの割合で得ら
れた。
（実施例２）
ナガバナオシロイバナ（ｍムｒａｂｉロｓ ｌｏｎｇｌ
ｆｌｏｒａ Ｌ、）から、実施例１と同様の方法で、８
．２Ｋｆの新鮮細胞を得た。、該綱鞄より実施例１の単
離精製法によって、ウィルス命インヒビターを７５ｍｇ
単諷した。
ｆｌｏｒａ Ｌ、）から、実施例１と同様の方法で、８
．２Ｋｆの新鮮細胞を得た。、該綱鞄より実施例１の単
離精製法によって、ウィルス命インヒビターを７５ｍｇ
単諷した。
第１図は本願新蜆タンパク質の屋外部吸収スペクトル（
７！μ度： １．５５ｍｇ／ｍ１−ｏ、ｏ ＩＭリン酸
砂衝液ｐｉ（６，０）である。
７！μ度： １．５５ｍｇ／ｍ１−ｏ、ｏ ＩＭリン酸
砂衝液ｐｉ（６，０）である。
Claims (1)
- オシロイバナ属に属する植物から誘導されるカルスを培
養し、その培養細胞から抽出分離することを特徴とする
植物ウイルス阻害物質の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59125382A JPS615790A (ja) | 1984-06-20 | 1984-06-20 | 植物ウイルス阻害物質の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59125382A JPS615790A (ja) | 1984-06-20 | 1984-06-20 | 植物ウイルス阻害物質の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS615790A true JPS615790A (ja) | 1986-01-11 |
| JPS6227797B2 JPS6227797B2 (ja) | 1987-06-16 |
Family
ID=14908749
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59125382A Granted JPS615790A (ja) | 1984-06-20 | 1984-06-20 | 植物ウイルス阻害物質の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS615790A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63123386A (ja) * | 1986-11-14 | 1988-05-27 | Japan Tobacco Inc | 植物ウイルス阻害物質の製造方法 |
| CN110396495A (zh) * | 2019-08-14 | 2019-11-01 | 北京林业大学 | 喜马拉雅紫茉莉愈伤组织、增殖方法与悬浮细胞繁殖方法 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111990258B (zh) * | 2019-12-27 | 2022-03-01 | 西南大学 | 喜马拉雅紫茉莉种苗规模化繁育方法 |
-
1984
- 1984-06-20 JP JP59125382A patent/JPS615790A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63123386A (ja) * | 1986-11-14 | 1988-05-27 | Japan Tobacco Inc | 植物ウイルス阻害物質の製造方法 |
| CN110396495A (zh) * | 2019-08-14 | 2019-11-01 | 北京林业大学 | 喜马拉雅紫茉莉愈伤组织、增殖方法与悬浮细胞繁殖方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6227797B2 (ja) | 1987-06-16 |
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