JPS61502374A - α−エルゴクリプチンの製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 α−エルゴクリブチンの製法 本発明は請求の範囲に記載した方法に関する。

α−エルゴクリブチン（Ｅｒｇｏｋｒｙｐｚｉｎ　）　＝　９　＋　１０ａ−ジ ヒドロ−１７−ヒドロキシ−２’−（１−メチルエチル）−５’α−（２−メ＋ ルプロぎル〕−エルゴタマン−３’　、　６’　、　１８−　ト！ｊオンは公知 のように薬理学的な作用を有する。しかしながら、従来公知の方法によれば、こ れは酵素法において他の麦角アルカロイド及びペプチドアルカロイドとの混合物 においてのみ得られる（西ドイツ国特許公開第３１０４１５１号公報）。

従って、その製造及び単離は非常に費用がかかる。

真菌株クラビセゾス・スペック（Ｃ１ａｖｉｃｅｐｓ　５ｐｅｃ、）がα−エル ゴク゛リプチンを高収率で、かつ痕跡量のアグロクラビン（Ａｇｒｏｃｌａｖｉ ｎ　）　を伴ない、かつ他の麦角アルカロイドを有さすに、培地中に産生ずると いうことが見い出された。この菌株タラビセブス・スペックは野生の泥土草（Ｓ ｃｈｌｉｃｋｇｒａｓ　）である種スパルチナ・アルテルニフロラ（５ｐａｒｚ ｉｎａ　ａｌｚｅｒｎｌｆｌｏｒａ　）の変角から単離された。これは７エリン グ（５ＣＨＥＲＩＮＧ　）内部名称ＭＢＣＥ５２２７を有し、　ドイツ微生物保 存機関にＤＳＭ　２８３６という番号で寄託されている。該菌株は炭素源として 蔗糖及び窒素源としてアスパラギンを含有する寒天培地に、密な菌糸体からなる 平たい帯黄色のコロニーを形成する。コロニー直径は７日培養期間の後２〜３ｃ ｒｒＬであり、２０日培養期間の後６〜８αである。

炭素源として蔗糖及び窒素源としてこはく酸アンモニウム又はクエン酸アンモニ ウムを含有する寒天−培地には該真菌はゆっくりと成長する、寒天表面かられず かに湾曲し℃隆起した帯黄褐色コロニーを形成する。

該コロニーは空中菌糸形成により粗く、隠匿性の表面を有する。コロニーの縁は すり切れている。該コロニーの直径は１４日後２〜６ｃ！ＩＬであり、３０日後 は６〜７ｃ１１Ｌである。糸状の菌糸体の他に、強く光を屈折する空胞が詰まっ た、短かく、円形〜不規則の形の、しばしば鎖状に並んだ細胞が現われる（菌核 細胞タイプ）。

菌糸直径は６〜４μｍである。空胞化細胞は直径６〜１０μｍで、長さ１０〜２ ５μｍである。

本発明による方法は、物質代謝合成に関する真菌培地の培養に通常適用される条 件下に実施される。こうして、先ず一般に行なわれる前実験において最も有利な 発酵条件、例えば有利な培地の選択、温度、通気、…値のような技術的条件及び 微生物の発芽及び成長のための最適時間の選択、を調べる。

炭素源としては、発酵培地のために、例えばグルコース又は蔗糖を使用する。窒 素源としては、特にアスパラギン、こはく酸アンモニウム又は硫酸アンモニウム を使用する。更に該培地は必要な成長物質（例えば酵母エキス）及び鉱物質（カ リウム−、マグネシウム−、カルシウム−１鉄−及び亜鉛−カチオン、並びに硫 酸−１燐酸−１硝酸−及び塩素−アニオン）を常用の濃度で含有する。

発酵は１−又は２工程で行なわれるが、この際予培地に使用した培地と主培地と が同一であっても、異なっていてもよい。予培地のためには炭素源として有利に グルコースを使用し、主培地には有利に蔗糖を使用する。予培地は炭素源を有利 に１０〜１００η／ｌ。

主培地は有利に１００〜３００１１９含有する。

発酵の開始のために、培地のβ値を有利に４〜６の範囲に調節する。培養温度は 約１０〜３５℃、有利に１２０〜６０°Ｃの範囲である。培養条件は強く有気性 である。最適な発酵時間は生産されたα−エルゴクリゾチンの分析により常法で 調べられる。

発酵が終った後、生じたα−エルゴクリゾチンを公知法で、例えば発酵配合物を 水と温和しない有機溶剤、例えば酢酸エチル、メチルインブチルケトン、ジクロ ルメタン、クロロホルム又はテトラクロルエタンで抽出し、該抽出物を濃縮し、 得られた粗生成物をクロマトグラフィー及び／又は結晶化して精製することによ り単離する。

次に、実施例につぎ本発明による方法を詳細に説明する。

クラビセブス・スペック、ＤＳＭ２８３６Ｔｈ次の成分を含有する培地上に培養 する。

Ｎ、ＰＣ１００ｇ／ｌ　）、／ｒ−ｙｌｌｌ（１０ｇ／ｌ）、酵母エキス（０， １，ｌｉ’／７り、燐酸二水素カリウム（５０（１１１ｎ９／Ｊ　）、硫酸マグ ネシウム・七水和物＜３００ｍ９／ｌ）、硫酸７ンモ＝ウム（６，！９／ｌ　） 、硝酸カルシウム・四水和物（１Ｎ）、硫酸鉄・七水和物（７ｍ９／ｌ）、５Ｍ 酸亜鉛・七水和物（６＋ｎ９／ｌ、寒天（１６９／ｌ　）。培地をｐＨ５，１に 調節する。該培養培地を５〜２０日間３０°Ｃで培養器中に保持する。

約１ｃＩＩＬ２の大きさの菌糸体を無菌条件下にウルトラテユラツクス（Ｕｌｚ ｒａ、ｔ、ｕｒｒａｘ　）を用いて生理食塩浴液５ｍｅ中で破砕し、これを用い て、５００１＋１／三角コルベン中のグルコース（Ｉ　ＣＪＯｊｊ／ｌ　）、ク エン酸（７，５＆／ｌ）、燐酸二水素カリウム（０，５９９／ｉ、硫酸マグネシ ウム・七水和物（３０［］り／　ｌ　）、硫酸アンモニウム＜６ｇ／ｌ）、５１ を酸鉄（■）・七水和物（７〜／ｌ）、硫酸亜鉛・七水和物（７■／ｌ）、硝酸 カルシウム・四水和物（１ｇ／ｌ　）、酵母エキス（０，１ｇ／ｌ）を含有する 、ｐ）１５．１に調節された予培地５Ｑｍｌに接種し、振盪器上で４日間の間２ ４℃及び２２０ｒ、ｐ、ｍ、で培養する。

このようにして得られた予培地５ｍ／！を５ＱＱａ＋ｇ三角コルベン中の、蔗１ ！！（２００ｇ＃）、クエン酸（１０ｊｊ／ｌ　）、酵母エキス（０，１１／ｌ 　）、燐酸二水素カリウム（５００Ｉｎｇ／ｌ）、硫酸マグネシウム・七水和物 （３００〜／ｌ）、硫酸アンモニウム（６ｇ／ｌ）、硝酸カルシウム・四水和物 （１ｇ／ｌ　Ｌ硫酸鉄・七水和物（７〜／ｌ）及び硫酸亜鉛・七水和物＜６ｍ９ ／ｌ）を含有する、ｐｉ−１５，１に調節した培地５Ｑｒｒｔ中に導入し、９日 間２４℃で振盪機上２４　Ｏｒ、ｐ、ｍ、で振盪する。

次いで、培地ｔ−濾別し、α−エルゴクリゾチンの含量を高圧液体りｏマドグラ フィー（Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ　Ｚ、Ａｎａｌ。

Ｃｈｅｍ、第３０３巻、１９８０年、２０８頁）より調べる。培地濾液の濃度は ５２５ｍ９／ｌである。

国際調査報告 −一一一一一〜−一一−ＩＩ＆ＰＣ丁／ＤＥｆｌＳ１００１９３

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 微生物クラビセプス・パスパリ、ＤＳＭ２８３６を培養し、かつ生じたα−エル ゴクリプチンを発酵の終了後単離することを特徴とするα−エルゴクリプチンの 製法。